JP6326326B2 - Wound healing agent - Google Patents

Description

本発明は、創傷治癒剤に関する。   The present invention relates to a wound healing agent.

熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創、褥瘡性皮膚潰瘍及び糖尿病性皮膚潰瘍等の創傷を治癒するためには、創傷部を適度な湿潤環境に保ち、細胞増殖を促す環境を作り出す必要がある（非特許文献１）。そのために患部に適応される創傷被覆材として、従来、ガーゼ及び脱脂綿等が用いられている。これらは、滲出液の吸収が早い反面、細菌に感染しやすく、創面が乾燥してしまうと取り外す際に痛みや出血等を伴うという問題がある。また、創面を乾燥させないために、創傷被覆材と軟膏等を併用することも行われているが、滲出液の吸収が不充分となり、創面が過度に湿った状態になってしまう問題がある。
このように、滲出液のコントロールが創傷治癒にとって非常に重要な因子である。また、滲出液に含まれる種々の成長・増殖因子（ｂＦＧＦ及びＴＧＦ−β等）を創部に留まらせ、治癒を早めることができるため、滲出液を創傷部に留まらせ、かつ適度な湿潤環境を作り出すような創傷治癒剤が求められている。 To heal wounds such as burns, skin wounds, skin exfoliation wounds and traumatic skin defect wounds, decubitus skin ulcers and diabetic skin ulcers, an environment that keeps the wound in a moderately moist environment and promotes cell proliferation Must be created (Non-patent Document 1). Therefore, conventionally, gauze, absorbent cotton, etc. are used as a wound dressing adapted to the affected area. Although these exudates are absorbed quickly, they tend to be infected with bacteria, and when the wound surface is dried, there is a problem that it is accompanied by pain, bleeding, and the like. Moreover, in order not to dry the wound surface, a wound dressing and an ointment are also used in combination, but there is a problem that the wound surface becomes excessively moistened due to insufficient absorption of exudate.
Thus, exudate control is a very important factor for wound healing. In addition, since various growth / growth factors (bFGF, TGF-β, etc.) contained in the exudate can remain in the wound and accelerate healing, the exudate can remain in the wound and an appropriate moist environment There is a need for wound healing agents that can be created.

そこで、創傷面の滲出液を吸収してゲル化するポリビニルアルコール重合体からなる創傷治癒剤が知られている。（例えば特許文献１）しかしながら、創傷面をゲル化したポリビニルアルコール重合体が覆うことで湿潤環境は維持できるが、肉芽形成や上皮化形成に必要な線維芽細胞等との細胞親和性に乏しく、期待できる効果は得られていない。また、ポリビニルアルコール重合体の生体内での分解性はコラーゲン等の天然物と比較して低く、物理的に除去する必要が生じる場合がある。   Therefore, a wound healing agent made of a polyvinyl alcohol polymer that gels by absorbing exudate on the wound surface is known. However, the wet environment can be maintained by covering the wound surface with a gelled polyvinyl alcohol polymer, but the cell affinity with fibroblasts necessary for granulation or epithelialization is poor, The expected effect has not been obtained. In addition, the degradability of polyvinyl alcohol polymer in vivo is lower than that of natural products such as collagen, which may require physical removal.

古田勝経著、「褥瘡外用療法のヒミツ−事例で学ぶ極意−」、南山堂、２００６年、ｐ２５Katsune Furuta, “Secrets for External Use of Pressure Sores: The Secrets to Learn from Case Studies”, Nanzando, 2006, p25

特開２０００−２６２６０７号公報JP 2000-262607 A

本発明は、滲出液を吸収し、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせることができ、細胞親和性が高く、生分解性に優れた創傷治癒剤を提供することを目的とする。   An object of the present invention is to provide a wound healing agent that can absorb exudate and allow the absorbed exudate to stay in a wound part appropriately, has high cell affinity, and is excellent in biodegradability.

本発明は、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）を含む創傷治癒剤であって、円二色性スペクトル法により求められる前記タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合が６０〜８５％であり、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全ての前記アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数と全ての前記アミノ酸配列（Ｘ’）のアミノ酸数の合計数の割合が５０〜７０％であり、創傷治癒剤のかさ密度が１〜３０ｍｇ／ｃｍ³であり、創傷治癒剤中の水分含有率が０〜２０重量％である創傷治癒剤；ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）であって、円二色性スペクトル法により求められる前記タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合が６０〜８５％であり、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合が５０〜７０％であるタンパク質（Ａ）を含有する水溶液を凍結乾燥する工程を有する創傷治癒剤の製造方法である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：前記アミノ酸配列（Ｘ）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）もしくはアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列（Ｘ）中の２個のアミノ酸がリシン（Ｋ）及び／又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列。 The present invention is a wound healing agent comprising a GAGAGS sequence (1) and a protein (A) having the following amino acid sequence (X) and / or the following amino acid sequence (X ′), which is determined by a circular dichroism spectrum method. The total ratio of β-turn structure and random coil structure in the protein (A) is 60 to 85%, and the number of amino acids in all the amino acid sequences (X) with respect to the total number of amino acids in the protein (A) The ratio of the total number of amino acids of all the amino acid sequences (X ′) is 50 to 70%, the bulk density of the wound healing agent is 1 to 30 mg / cm ³ , and the moisture content in the wound healing agent is A wound healing agent of 0 to 20% by weight; a GAGAGS sequence (1) and a protein (A) having the following amino acid sequence (X) and / or the following amino acid sequence (X ′), wherein the circular dichroism The total ratio of β-turn structure and random coil structure in the protein (A) determined by the spectrum method is 60 to 85%, and in all amino acid sequences (X) with respect to the total number of amino acids of the protein (A) A method for producing a wound healing agent comprising a step of freeze-drying an aqueous solution containing a protein (A) in which the ratio of the total number of amino acids and the total number of amino acids in all amino acid sequences (X ′) is 50 to 70% is there.
Amino acid sequence (X): At least one amino acid sequence selected from the group consisting of VPGVG sequence (2), GVGVP sequence (3) and GAHGGPGPK sequence (4).
Amino acid sequence (X ′): an amino acid sequence in which one amino acid in the amino acid sequence (X) is substituted with lysine (K) or arginine (R), or two amino acids in the amino acid sequence (X) are lysine Amino acid sequence substituted with (K) and / or arginine (R).

本発明の創傷治癒剤は、滲出液を吸収し、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせることができ、細胞親和性が高く、生分解性に優れている。   The wound healing agent of the present invention absorbs exudate, can appropriately retain the absorbed exudate in the wound part, has high cell affinity, and is excellent in biodegradability.

本発明の創傷治癒剤は、 ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）を含む多孔質形態を有する創傷治癒剤であって、円二色性スペクトル法により求められる前記タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合が６０〜８５％であり、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全ての前記アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数と全ての前記アミノ酸配列（Ｘ’）のアミノ酸数の合計数の割合が５０〜７０％であり、創傷治癒剤のかさ密度が１〜３０ｍｇ／ｃｍ³であり、創傷治癒剤中の水分含有率が０〜２０重量％であり、タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ） ₄ 配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ） ₄ ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ） ₃ 配列（６）を有するタンパク質（Ａ１１−１−１）である。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：前記アミノ酸配列（Ｘ）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）もしくはアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列（Ｘ）中の２個のアミノ酸がリシン（Ｋ）及び／又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列。 The wound healing agent of the present invention is a wound healing agent having a porous form comprising a GAGAGS sequence (1) and a protein (A) having the following amino acid sequence (X) and / or the following amino acid sequence (X ′), The total ratio of β-turn structure and random coil structure in the protein (A) determined by the circular dichroism spectrum method is 60 to 85%, and all the amino acids with respect to the total number of amino acids in the protein (A) The ratio of the total number of amino acids in the sequence (X) and all the amino acid sequences (X ′) is 50 to 70%, and the bulk density of the wound healing agent is 1 to 30 mg / cm ³ , moisture content in the wound-healing agent 0 to 20 wt%, protein (a) is a (GAGAGS) ₄ sequence (5) and (GVGVP) ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ sequence (6) Proteins that (A11-1-1) Ru Der.
Amino acid sequence (X): At least one amino acid sequence selected from the group consisting of VPGVG sequence (2), GVGVP sequence (3) and GAHGGPGPK sequence (4).
Amino acid sequence (X ′): an amino acid sequence in which one amino acid in the amino acid sequence (X) is substituted with lysine (K) or arginine (R), or two amino acids in the amino acid sequence (X) are lysine Amino acid sequence substituted with (K) and / or arginine (R).

本発明において、タンパク質（Ａ）は、天然物からの抽出、有機合成法（酵素法、固相合成法及び液相合成法等）及び遺伝子組み換え法等によって得られる。有機合成法に関しては、「生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ（１９８１年７月１日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」又は「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）（昭和６２年５月２０日、日本生化学会編、株式会社東京化学同人発行）」に記載されている方法等が適用できる。遺伝子組み換え法に関しては、特許第３３３８４４１号公報に記載されている方法等が適用できる。天然物からの抽出、有機合成法及び遺伝子組み換え法はともに、タンパク質（Ａ）を得られるが、アミノ酸配列を簡便に変更でき、安価に大量生産できるという観点等から、遺伝子組み換え法が好ましい。   In the present invention, the protein (A) is obtained by extraction from natural products, organic synthesis methods (enzyme method, solid phase synthesis method, liquid phase synthesis method, etc.), gene recombination methods, and the like. For organic synthesis methods, see "Biochemistry Experiment Course 1, Protein Chemistry IV (July 1, 1981, edited by the Japanese Biochemical Society, published by Tokyo Chemical Co., Ltd.)" or "Second Biochemistry Experiment Course 2, Protein Chemistry" (Lower) (May 20, 1987, edited by the Japanese Biochemical Society, published by Tokyo Chemical Co., Ltd.), etc. Regarding the gene recombination method, the method described in Japanese Patent No. 3338441 can be applied. Extraction from natural products, organic synthesis methods, and gene recombination methods can both yield protein (A), but gene recombination methods are preferred from the standpoint that amino acid sequences can be easily changed and mass production can be performed at low cost.

本発明において、タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造の合計の割合及びタンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数と全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計の割合が上記範囲であることで、滲出液を吸収してゲル化し、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせ、適度な湿潤環境を保つことができる。   In the present invention, the total ratio of β-turn structure and random coil structure in protein (A) and the number of amino acids in all amino acid sequences (X) relative to the total number of amino acids in protein (A) and all amino acid sequences (X ′ When the ratio of the total number of amino acids in the above range is in the above range, the exudate can be absorbed and gelled, the absorbed exudate can be appropriately retained in the wound part, and an appropriate moist environment can be maintained.

本発明におけるタンパク質（Ａ）は、円二色性スペクトル法により求められるタンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合が６０〜８５％であるタンパク質である。タンパク質の配列が同じでも、タンパク質の作製方法、タンパク質の精製方法、タンパク質を溶解させる溶媒のｐＨ及び溶媒の極性等により、タンパク質中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合は異なる。
タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、通常６０〜８５％であり、好ましくは６５〜８０％、さらに好ましくは７０〜７５％である。
上記割合は、タンパク質（Ａ）をリフォールディングすることによって増加させることができる。また、変性剤や熱等で変性させることによって低下させることができる。
タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合は、下記測定法によって求める。 The protein (A) in the present invention is a protein having a total ratio of β-turn structure and random coil structure in the protein (A) determined by the circular dichroism spectrum method of 60 to 85%. Even if the protein sequences are the same, the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure in the protein differs depending on the protein production method, the protein purification method, the pH of the solvent in which the protein is dissolved, the polarity of the solvent, and the like.
The total ratio of the β-turn structure and the random coil structure in the protein (A) is usually 60 to 85%, preferably 65 to 80%, more preferably from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. 70-75%.
The ratio can be increased by refolding the protein (A). It can also be lowered by denaturation with a denaturing agent or heat.
The total ratio of the β-turn structure and the random coil structure in the protein (A) is determined by the following measurement method.

＜タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合の測定方法＞
タンパク質を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、タンパク質の水溶液を作製する。作製したタンパク質の水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光株式会社製、「Ｊ−８２０」）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型：日本分光株式会社製）にてβターン構造の割合とランダムコイル構造の割合とを算出し、これらの合計をβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合とする。 <Measuring method of total ratio of β-turn structure and random coil structure in protein (A)>
Protein is dissolved in deionized water (4 ° C.) to a concentration of 0.3 mg / ml to prepare an aqueous protein solution. The aqueous solution of the prepared protein was measured with a circular dichroism spectrum measuring instrument (manufactured by JASCO Corporation, “J-820”) (measurement temperature: 4 ° C.), and secondary structure analysis program (JWSSE type: JASCO Corporation) The ratio of the β-turn structure and the ratio of the random coil structure are calculated by the company), and the sum of these is the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure.

本発明においてタンパク質（Ａ）は、下記アミノ酸配列（Ｘ）を少なくとも１個及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を少なくとも１個有するものである。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：アミノ酸配列（Ｘ）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）もしくはアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列又はアミノ酸配列（Ｘ）中の２個のアミノ酸がリシン（Ｋ）もしくはアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列。
なお、タンパク質（Ａ）は、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）をそれぞれ複数個有していてもよく、複数個ある場合のアミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）はそれぞれ同一でも異なっていてもよく、アミノ酸配列（Ｘ）とアミノ酸配列（Ｘ’）とを共に有していてもよい。 In the present invention, the protein (A) has at least one amino acid sequence (X) below and / or at least one amino acid sequence (X ′) below.
Amino acid sequence (X): At least one amino acid sequence selected from the group consisting of VPGVG sequence (2), GVGVP sequence (3) and GAHGGPGPK sequence (4).
Amino acid sequence (X ′): An amino acid sequence in which one amino acid in amino acid sequence (X) is substituted with lysine (K) or arginine (R), or two amino acids in amino acid sequence (X) are lysine (K ) Or an amino acid sequence substituted with arginine (R).
The protein (A) may have a plurality of amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′). When there are a plurality of amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′), They may be the same or different, and may have both the amino acid sequence (X) and the amino acid sequence (X ′).

アミノ酸配列（Ｘ）としては、細胞親和性及び創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、ＶＰＧＶＧ配列（２）及び／又はＧＶＧＶＰ配列（３）が好ましい。   As the amino acid sequence (X), the VPGVG sequence (2) and / or the GVGVP sequence (3) are preferable from the viewpoint of maintaining cytophilicity and an appropriate moist environment for the wound surface.

アミノ酸配列（Ｘ’）として、具体的には、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）、ＧＫＧＲＰ配列（９）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）等が挙げられる。
アミノ酸配列（Ｘ’）は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、ＧＫＧＶＰ配列（７）、ＧＫＧＫＰ配列（８）及びＧＲＧＲＰ配列（１０）からなる群より選ばれる少なくとも１種の配列が好ましく、さらに好ましくはＧＫＧＶＰ配列（７）及び／又はＧＫＧＫＰ配列（８）である。 Specific examples of the amino acid sequence (X ′) include GKGVP sequence (7), GKGKP sequence (8), GKGRP sequence (9), and GRGRP sequence (10).
The amino acid sequence (X ′) is preferably at least one sequence selected from the group consisting of a GKGVP sequence (7), a GKGKP sequence (8) and a GRGRP sequence (10) from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. More preferably, it is a GKGVP sequence (7) and / or a GKGKP sequence (8).

タンパク質（Ａ）は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：ポリペプチド鎖（Ｙ）中のの全アミノ酸数の０．１〜２０％のアミノ酸がリシン（Ｋ）及び／又はアルギニン（Ｒ）で置換されたポリペプチド鎖。 From the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface, the protein (A) is a polypeptide chain (Y) in which 2 to 200 amino acid sequences (X) are continuous and / or the following polypeptide chain (Y ′). It is preferable to have.
Polypeptide chain (Y ′): A polypeptide chain in which 0.1 to 20% of amino acids in the polypeptide chain (Y) are substituted with lysine (K) and / or arginine (R).

ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、具体的には、（ＶＰＧＶＧ）_b配列、（ＧＶＧＶＰ）_c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）_d配列である。なお、ｂ〜ｄは、それぞれ、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数であり、２〜２００の整数である。
タンパク質（Ａ）１分子中に、ポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、ポリペプチド鎖（Ｙ）は同一でも異なっていても良く、（ＶＰＧＶＧ）_b配列、（ＧＶＧＶＰ）_c配列及び（ＧＡＨＧＰＡＧＰＫ）_d配列からなる群から選ばれる１種を有してもよく、２種以上を有してもいい。
また、タンパク質（Ａ）中にポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有する場合は、アミノ酸配列（Ｘ）の連続する個数は、ポリペプチド鎖（Ｙ）ごとに同一でも異なっていてもよい。すなわち、アミノ配列（Ｘ）の連続する個数ｂ〜ｄが同じポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよく、ｂ〜ｄが異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を複数有してもよい。
ポリペプチド鎖（Ｙ）としては、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、（ＶＰＧＶＧ）_b配列及び／又は（ＧＶＧＶＰ）_c配列が好ましい。 Specifically, the polypeptide chain (Y) includes a (VPGVG) _b sequence, a (GVGVP) _c sequence, and a (GAHGGPGPK) _d sequence. Note that b to d are the numbers of consecutive amino acid sequences (X), respectively, and are integers of 2 to 200.
When there are a plurality of polypeptide chains (Y) in one molecule of protein (A), the polypeptide chains (Y) may be the same or different, and (VPGVG) _b sequence, (GVGVP) _c sequence and (GAHGGPGPK ) You may have 1 type chosen from the group which consists of _d arrangement _| sequences, and may have 2 or more types.
When the protein (A) has a plurality of polypeptide chains (Y), the number of consecutive amino acid sequences (X) may be the same or different for each polypeptide chain (Y). That is, the consecutive numbers b to d of the amino sequence (X) may have a plurality of polypeptide chains (Y), or a plurality of polypeptide chains (Y) having different b to d.
The polypeptide chain (Y) is preferably a (VPGVG) _b sequence and / or a (GVGVP) _c sequence from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface.

ポリペプチド鎖（Ｙ）は、アミノ酸配列（Ｘ）が２〜２００個連続した（上記ｂ〜ｄが２〜２００）ポリペプチド鎖であるが、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、アミノ酸配列（Ｘ）が連続する個数は２〜１００個（上記ｂ〜ｄが２〜１００）が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個（上記ｂ〜ｄが２〜５０）、特に好ましくは２〜４０個（ｂ〜ｄが２〜４０個）である。   The polypeptide chain (Y) is a polypeptide chain in which 2 to 200 amino acid sequences (X) are continuous (b to d are 2 to 200). From the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface, The number of consecutive arrays (X) is preferably 2 to 100 (b to d is 2 to 100), more preferably 2 to 50 (b to d is 2 to 50), and particularly preferably 2 to 40. (B to d are 2 to 40).

また、ポリペプチド鎖（Ｙ’）は、ポリペプチド鎖（Ｙ）中の全アミノ酸数の０．１〜２０％のアミノ酸がリシン（Ｋ）又はアルギニン（Ｒ）で置換されたポリペプチド鎖であり、具体的には、アミノ酸配列（Ｘ）が連続したポリペプチド鎖（Ｙ）において、アミノ酸配列（Ｘ）の一部又は全部がアミノ酸配列（Ｘ’）に置き換わったポリペプチド鎖が含まれる。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）中の全アミノ酸数に対するリシン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸数の合計数の割合は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、０．５〜１０％が好ましく、さらに好ましくは１〜５％である。 The polypeptide chain (Y ′) is a polypeptide chain in which 0.1 to 20% of the total number of amino acids in the polypeptide chain (Y) is substituted with lysine (K) or arginine (R). Specifically, the polypeptide chain (Y) in which the amino acid sequence (X) is continuous includes a polypeptide chain in which part or all of the amino acid sequence (X) is replaced with the amino acid sequence (X ′).
In the polypeptide chain (Y ′), the ratio of the total number of amino acids substituted with lysine (K) and arginine (R) with respect to the total number of amino acids in the polypeptide chain (Y) indicates that the wound surface has an appropriate moist environment. From the viewpoint of keeping the content, it is preferably 0.5 to 10%, more preferably 1 to 5%.

ポリペプチド鎖（Ｙ’）であるかどうかは、タンパク質（Ａ）の配列中の全てのリシン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）を、他のアミノ酸［グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）又はヒスチジン（Ｈ）］に置きかえたときに、ポリペプチド鎖（Ｙ）となるかによって判断する。   Whether it is a polypeptide chain (Y ′) is determined by replacing all lysine (K) and arginine (R) in the sequence of protein (A) with other amino acids [glycine (G), alanine (A), valine ( V), proline (P) or histidine (H)] to determine whether the polypeptide chain (Y) is obtained.

タンパク質（Ａ）中のポリペプチド鎖（Ｙ）とポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜８０個であり、特に好ましくは１〜６０個である。   The total number of polypeptide chains (Y) and polypeptide chains (Y ′) in the protein (A) is preferably 1 to 100, more preferably 1 to 100 from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. 80, particularly preferably 1 to 60.

タンパク質（Ａ）中に、アミノ酸配列（Ｘ）の種類及び／又は連続する個数が異なるポリペプチド鎖（Ｙ）を有している場合は、それぞれを１個として数え、ポリペプチド鎖（Ｙ）の個数はその合計である。ポリペプチド鎖（Ｙ’）についても同様である。   When the protein (A) has a polypeptide chain (Y) having a different type and / or consecutive number of amino acid sequences (X), each is counted as one and the polypeptide chain (Y) The number is the sum. The same applies to the polypeptide chain (Y ′).

本発明におけるタンパク質（Ａ）は、タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合が５０〜７０％であるものであるが、細胞親和性の観点から、５２．５〜６７．５％が好ましく、さらに好ましくは５５〜６５％である。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸配列の合計数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求めることができる。 In the protein (A) in the present invention, the ratio of the total number of amino acids in all amino acid sequences (X) and the total number of amino acids in all amino acid sequences (X ′) to the total number of amino acids in the protein (A) is 50. Although it is -70%, 52.5-67.5% is preferable from a viewpoint of cell affinity, More preferably, it is 55-65%.
The ratio of the total number of amino acid sequences in all amino acid sequences (X) and all amino acid sequences (X ′) to the total number of amino acids in protein (A) can be determined by a protein sequencer. Specifically, it can be determined by the following measurement method.

＜タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合の測定法＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法から２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）中の全てのアミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数及び全てのアミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数の合計数の割合（％）＝［｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝＋｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝×｛アミノ酸（Ｘ’）中のアミノ酸数｝］／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸の数｝×１００ <Measurement method of the ratio of the total number of amino acids in all amino acid sequences (X) and the total number of amino acids in all amino acid sequences (X ′) to the total number of amino acids in protein (A)>
The protein (A) is decomposed to about 30 residues or less using two or more cleavage methods that can be cleaved at specific amino acid residues. Then, after separating by high performance liquid chromatography (HPLC), the amino acid sequence is read with a protein sequencer. Peptide mapping is performed from the obtained amino acid sequence to determine the entire sequence of protein (A). Thereafter, the ratio of the total number of amino acids in all amino acid sequences (X) and the total number of amino acids in all amino acid sequences (X ′) to the total number of amino acids in protein (A) is calculated by the measurement formula described below. To do.
Ratio (%) of the number of amino acids in all amino acid sequences (X) in protein (A) and the total number of amino acids in all amino acid sequences (X ′) = [{number of amino acid sequences (X)} × {Number of amino acids in amino acid sequence (X)} + {number of amino acid sequences (X ′)} × {number of amino acids in amino acid (X ′)}] / {number of all amino acids in protein (A)} × 100

なお、タンパク質（Ａ）が、複数種類のアミノ酸配列（Ｘ）を有している場合には、以下のようにして上記式中の「｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝」を求める。
まず、各種類のアミノ酸配列（Ｘ）について、「｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝」を求める。その全種類についての合計値を、上記式中の「｛アミノ酸配列（Ｘ）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数｝」とする。
タンパク質（Ａ）が、複数種類のアミノ酸配列（Ｘ）に対応する複数種類のアミノ酸配列（Ｘ’）を有する場合も同様にして、上記式中の「｛アミノ酸配列（Ｘ’）の数｝×｛アミノ酸配列（Ｘ’）中のアミノ酸数｝」を求める。 When the protein (A) has a plurality of types of amino acid sequences (X), “{number of amino acid sequences (X)} × {amino acid sequence (X ) The number of amino acids in}.
First, “{number of amino acid sequences (X)} × {number of amino acids in amino acid sequence (X)}” is determined for each type of amino acid sequence (X). The total value for all the types is defined as “{number of amino acid sequences (X)} × {number of amino acids in amino acid sequence (X)}” in the above formula.
Similarly, when the protein (A) has a plurality of types of amino acid sequences (X ′) corresponding to a plurality of types of amino acid sequences (X), “{number of amino acid sequences (X ′)} × {The number of amino acids in the amino acid sequence (X ′)} ”.

タンパク質（Ａ）において、タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合［｛タンパク質（Ａ）中のＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００］は、細胞親和性の観点から、５〜５０％が好ましく、さらに好ましくは１０〜４７．５％であり、特に好ましくは２０〜４５％である。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合は、プロテインシークエンサーによって求めることができる。具体的には、下記の測定法により求める。 In protein (A), the ratio of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids in protein (A) [{number of GAGAGS sequences (1) in protein (A) × 6} / {protein The total number of amino acids in (A)} × 100] is preferably 5 to 50%, more preferably 10 to 47.5%, and particularly preferably 20 to 45% from the viewpoint of cell affinity.
The ratio of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids in protein (A) can be determined by a protein sequencer. Specifically, it is determined by the following measurement method.

＜タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合＞
特定のアミノ酸残基で切断出来る切断方法の２種類以上を用いて、タンパク質（Ａ）を３０残基以下程度まで分解する。その後、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にて分離した後、プロテインシークエンサーにてアミノ酸配列を読み取る。得られたアミノ酸配列からペプチドマッピングして、タンパク質（Ａ）の全配列を決定する。その後、以下記載の測定式にてタンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合を算出する。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合（％）＝［｛ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数×６｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸の数｝×１００ <Ratio of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids in protein (A)>
The protein (A) is decomposed to about 30 residues or less using two or more cleavage methods capable of cleaving at specific amino acid residues. Then, after separating by high performance liquid chromatography (HPLC), the amino acid sequence is read with a protein sequencer. Peptide mapping is performed from the obtained amino acid sequence to determine the entire sequence of protein (A). Thereafter, the ratio of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids in protein (A) is calculated by the measurement formula described below.
Ratio (%) of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids in protein (A) = [{number of GAGAGS sequences (1) × 6} / {of all amino acids in protein (A) Number} × 100

タンパク質（Ａ）はＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するが、タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合を適度にする観点、細胞親和性の観点及び創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有することが好ましい。
ポリペプチド鎖（Ｓ）において、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が連続する個数は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、２〜１００個が好ましく、さらに好ましくは２〜５０個であり、特に好ましくは２〜１０個である。 The protein (A) has a GAGAGS sequence (1), but the viewpoint of making the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure in the protein (A) appropriate, the viewpoint of cytocompatibility, and appropriate moistening of the wound surface From the viewpoint of maintaining the environment, it is preferable that the GAGAGS sequence (1) has 2 to 200 continuous polypeptide chains (S).
In the polypeptide chain (S), the number of continuous GAGAGS sequences (1) is preferably 2 to 100, more preferably 2 to 50, particularly preferably from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. Is 2-10.

タンパク質（Ａ）が、アミノ酸配列（Ｘ）、アミノ酸配列（Ｘ’）、ポリペプチド鎖（Ｙ）、ポリペプチド鎖（Ｙ’）、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）及びポリペプチド鎖（Ｓ）からなる群より選ばれる少なくとも１種の配列を合計２個以上有する場合は、これらの間に、介在アミノ酸配列（Ｚ）を有していてもいい。介在アミノ酸配列（Ｚ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）ではないペプチド配列である。介在アミノ酸配列（Ｚ）を構成するアミノ酸の数は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、１〜３０個が好ましく、さらに好ましくは１〜１５個、特に好ましくは１〜１０個である。介在アミノ酸配列（Ｚ）として、具体的には、ＶＡＡＧＹ配列（１１）、ＧＡＡＧＹ配列（１２）及びＬＧＰ配列等が挙げられる。
タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全ての介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸数の割合［Σ｛（介在アミノ酸配列（Ｚ）中のアミノ酸の数）×（介在アミノ酸配列（Ｚ）の数）｝／｛タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数｝×１００］は、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。 The protein (A) is composed of an amino acid sequence (X), an amino acid sequence (X ′), a polypeptide chain (Y), a polypeptide chain (Y ′), a GAGAGS sequence (1), and a polypeptide chain (S). In the case of having at least two selected sequences in total, an intervening amino acid sequence (Z) may be interposed between them. The intervening amino acid sequence (Z) is a peptide sequence in which one or more amino acids are linked, and is not a GAGAGS sequence (1), an amino acid sequence (X), or an amino acid sequence (X ′). The number of amino acids constituting the intervening amino acid sequence (Z) is preferably 1-30, more preferably 1-15, particularly preferably 1-10, from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. . Specific examples of the intervening amino acid sequence (Z) include a VAAGY sequence (11), a GAAGY sequence (12), and an LGP sequence.
Ratio of the number of amino acids in all intervening amino acid sequences (Z) to the total number of amino acids in protein (A) [Σ {(number of amino acids in intervening amino acid sequence (Z)) × (number of intervening amino acid sequences (Z)] )} / {Total number of amino acids in protein (A)} × 100] is preferably 0 to 25%, more preferably 0 to 22.5% from the viewpoint of maintaining an appropriate moist environment on the wound surface. Especially preferably, it is 0 to 15%.

タンパク質（Ａ）は、生体内での分解性の観点から、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）、アミノ酸配列（Ｘ’）及び介在アミノ酸配列（Ｚ）以外にも、両末端に末端アミノ酸配列（Ｔ）を有していてもよい。タンパク質（Ａ）の両末端の構造が、ポリペプチド鎖（Ｙ）に末端アミノ酸配列（Ｔ）が結合した構造であることが好ましい。末端アミノ酸配列（Ｔ）は、アミノ酸が１個又は２個以上結合したペプチド配列であって、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）ではないペプチド配列である。末端アミノ酸配列（Ｔ）を構成するアミノ酸の数は、生体内での分解性の観点から、１〜１００個が好ましく、さらに好ましくは１〜５０個、特に好ましくは１〜４０個である。末端アミノ酸配列（Ｔ）として、具体的には、ＭＤＰＶＶＬＱＲＲＤＷＥＮＰＧＶＴＱＬＮＲＬＡＡＨＰＰＦＡＳＤＰＭ配列（１３）等が挙げられる。   From the viewpoint of degradability in vivo, protein (A) has terminal amino acids at both ends in addition to GAGAGS sequence (1), amino acid sequence (X), amino acid sequence (X ′) and intervening amino acid sequence (Z). It may have the sequence (T). The structure at both ends of the protein (A) is preferably a structure in which the terminal amino acid sequence (T) is bound to the polypeptide chain (Y). The terminal amino acid sequence (T) is a peptide sequence in which one or more amino acids are bonded, and is not a GAGAGS sequence (1), an amino acid sequence (X), or an amino acid sequence (X ′). The number of amino acids constituting the terminal amino acid sequence (T) is preferably 1 to 100, more preferably 1 to 50, and particularly preferably 1 to 40 from the viewpoint of degradability in vivo. Specific examples of the terminal amino acid sequence (T) include MDPVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPPSDPM sequence (13) and the like.

タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する末端アミノ酸配列（Ｔ）のアミノ酸数の割合は、生体内での分解性の観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。   The ratio of the number of amino acids in the terminal amino acid sequence (T) to the total number of amino acids in the protein (A) is preferably 0 to 25%, more preferably 0 to 22.5% from the viewpoint of degradability in vivo. Yes, and particularly preferably 0 to 15%.

タンパク質（Ａ）は、生物工学的手法により細菌を用いて製造することがある。このような場合、発現させたタンパク質（Ａ）の精製又は検出を容易にするために、タンパク質（Ａ）は末端アミノ酸配列（Ｔ）の他に、Ｎ又はＣ末端に特殊なアミノ酸配列を有するタンパク質又はペプチド（以下これらを「精製タグ」と称する）を有してもいい。精製タグとしては、アフィニティー精製用のタグが利用される。そのような精製タグとしては、ポリヒスチジンからなる６×Ｈｉｓタグ、Ｖ５タグ、Ｘｐｒｅｓｓタグ、ＡＵ１タグ、Ｔ７タグ、ＶＳＶ−Ｇタグ、ＤＤＤＤＫタグ、Ｓタグ、ＣｒｕｚＴａｇ０９ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ２２ＴＭ、ＣｒｕｚＴａｇ４１ＴＭ、Ｇｌｕ−Ｇｌｕタグ、Ｈａ．１１タグ及びＫＴ３タグ等がある。
以下に、各精製タグ（ｉ）とそのタグを認識結合するリガンド（ｉｉ）との組み合わせの一例を示す。
（ｉ−１）グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＴＳ） （ｉｉ−１）グルタチオン
（ｉ−２）マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ） （ｉｉ−２）アミロース
（ｉ−３）ＨＱタグ （ｉｉ−３）ニッケル
（ｉ−４）Ｍｙｃタグ （ｉｉ−４）抗Ｍｙｃ抗体
（ｉ−５）ＨＡタグ （ｉｉ−５）抗ＨＡ抗体
（ｉ−６）ＦＬＡＧタグ （ｉｉ−６）抗ＦＬＡＧ抗体
（ｉ−７）６×Ｈｉｓタグ （ｉｉ−７）ニッケル又はコバルト
前記精製タグ配列の導入方法としては、発現用ベクターにおけるタンパク質（Ａ）をコードする核酸の５’又は３’末端に精製タグをコードする核酸を挿入する方法や市販の精製タグ導入用ベクターを使用する方法等が挙げられる。 The protein (A) may be produced using bacteria by a biotechnological technique. In such a case, in order to facilitate purification or detection of the expressed protein (A), the protein (A) has a special amino acid sequence at the N- or C-terminal in addition to the terminal amino acid sequence (T). Alternatively, it may have a peptide (hereinafter referred to as “purification tag”). As the purification tag, an affinity purification tag is used. Such purification tags include polyhistidine 6 × His tag, V5 tag, Xpress tag, AU1 tag, T7 tag, VSV-G tag, DDDDK tag, S tag, CruzTag09TM, CruzTag22TM, CruzTag41TM, Glu-Glu tag Ha. There are 11 tags and KT3 tags.
An example of a combination of each purification tag (i) and a ligand (ii) that recognizes and binds the tag is shown below.
(I-1) glutathione-S-transferase (GTS) (ii-1) glutathione (i-2) maltose binding protein (MBP) (ii-2) amylose (i-3) HQ tag (ii-3) nickel ( i-4) Myc tag (ii-4) Anti-Myc antibody (i-5) HA tag (ii-5) Anti-HA antibody (i-6) FLAG tag (ii-6) Anti-FLAG antibody (i-7) 6 XHis tag (ii-7) Nickel or cobalt As a method for introducing the purified tag sequence, the nucleic acid encoding the purified tag is inserted into the 5 'or 3' end of the nucleic acid encoding the protein (A) in the expression vector. And a method using a commercially available vector for introducing a purification tag.

タンパク質（Ａ）において、タンパク質（Ａ）中の全アミノ酸数に対する全ての介在アミノ酸配列（Ｚ）、全ての末端アミノ酸配列（Ｔ）及び精製タグのアミノ酸数の合計数の割合は、生体内での分解性の観点から、０〜２５％が好ましく、さらに好ましくは０〜２２．５％であり、特に好ましくは０〜１５％である。   In protein (A), the ratio of the total number of amino acids in all intervening amino acid sequences (Z), all terminal amino acid sequences (T) and purification tags to the total number of amino acids in protein (A) is expressed in vivo. From the viewpoint of degradability, 0 to 25% is preferable, more preferably 0 to 22.5%, and particularly preferably 0 to 15%.

タンパク質（Ａ）において、ポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又はポリペプチド鎖（Ｙ’）並びにＧＡＧＡＧＳ配列（１）及び／又はポリペプチド鎖（Ｓ）を含む場合、創傷面を適度な湿潤環境を保つ観点から、ポリペプチド鎖（Ｙ）又はポリペプチド鎖（Ｙ’）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）又はポリペプチド鎖（Ｓ）とが交互に化学結合していることが好ましい。   In the protein (A), when the polypeptide chain (Y) and / or the polypeptide chain (Y ′) and the GAGAGS sequence (1) and / or the polypeptide chain (S) are contained, the wound surface is kept in a proper moist environment. From the viewpoint, it is preferable that the polypeptide chain (Y) or polypeptide chain (Y ′) and the GAGAGS sequence (1) or polypeptide chain (S) are alternately chemically bonded.

ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の数と、アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の数との比［ＧＡＧＡＧＳ配列（１）：｛アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）｝］は、タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合を適度にする観点から、１：２〜１：６が好ましく、さらに好ましくは１：２〜１：５である。   The ratio of the number of GAGAGS sequences (1) to the number of amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′) [GAGAGS sequences (1): {amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′)}] From the viewpoint of optimizing the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure in the protein (A), 1: 2 to 1: 6 is preferable, and 1: 2 to 1: 5 is more preferable.

タンパク質（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量は、生体内での分解性の観点から、１５〜２００ｋＤａが好ましく、さらに好ましくは３０〜１５０ｋＤａであり、特に好ましくは７０〜１２０ｋＤａである。   The molecular mass of protein (A) by SDS-PAGE (SDS polyacrylamide gel electrophoresis) is preferably 15 to 200 kDa, more preferably 30 to 150 kDa, and particularly preferably from the viewpoint of degradability in vivo. 70-120 kDa.

好ましいタンパク質（Ａ）の一部を以下に例示する。
（Ａ１）アミノ酸配列（Ｘ）がＧＶＧＶＰ配列（３）であるタンパク質
（Ａ１１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）中のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換されたポリペプチド鎖（Ｙ’１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
（Ａ１１−１）ＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続した（ＧＶＧＶＰ）₈配列（１７）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換された（ＧＶＧＶＰ）₄ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₃配列（６）（Ｙ’１１）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１−１−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）₄配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）₄ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₃配列（６）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）₄配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）₄ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₃配列（６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）₂配列（１４）が化学結合した分子質量が約８０ｋＤａの配列（２３）のタンパク質（ＳＥＬＰ８Ｋ）
（ｉｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）₂配列（１４）及び（ＧＶＧＶＰ）₄ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₃配列（６）をそれぞれ１７個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約８２ｋＤａの配列（１５）のタンパク質（ＳＥＬＰ０Ｋ） A part of preferable protein (A) is illustrated below.
(A1) Protein (A11) in which amino acid sequence (X) is GVGVP sequence (3) (A11) Amino acid in polypeptide chain (Y1) having 2 to 200 consecutive GVGVP sequences (3) was substituted with lysine (K) Protein (A11-1) GVGVP sequence (3) having 8 polypeptide chains (Y'1) and polypeptide chain (S1) having 2 to 200 consecutive GAGAGS sequences (1) (GVGVP) ₈ (GVGVP) ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ sequence (6) (Y'11) and GAGAGS sequence (1) in which one amino acid of the polypeptide chain (Y11) of sequence (17) is replaced with lysine (K) There protein having 2 to 200 contiguous polypeptide chain (S1) (A11-1-1) GAGAGS sequence (1) are consecutive four (GAGAGS) ₄ sequence (5) ( VGVP) The ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ sequence (6) and protein specifically with, include the following proteins.
(I) There are 12 (GAGAGS) ₄ sequences (5) and 13 (GVGVP) ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ sequences (6), and these are formed by alternately chemically bonding (GAGAGS) ₂ Protein (SELP8K) of sequence (23) having a molecular mass of about 80 kDa and having a chemical bond with sequence (14)
(Ii) (GAGAGS) ₂ sequence (14) and (GVGVP) ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ sequences (6) each having 17 molecules, and having a structure in which these are alternately chemically bonded, the molecular mass is about 82 kDa Protein of sequence (15) (SELP0K)

（Ａ１１−２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が１２個連続したポリペプチド鎖の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）で置換された（ＧＶＧＶＰ）₆ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₅配列（２６）（Ｙ’１２）と、ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）を有するタンパク質
（Ａ１１−２−１）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）₄配列（５）と（ＧＶＧＶＰ）₆ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₅配列（２６）とを有するタンパク質
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）₄配列（５）を１２個及び（ＧＶＧＶＰ）₆ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₅配列（２６）を１３個有し、これらが交互に化学結合してなるものに、（ＧＡＧＡＧＳ）₂配列（１４）が化学結合した分子質量が約１０５ｋＤａの配列（２４）のタンパク質 (A11-2) GVGVP sequence (3) in which 12 amino acids in a continuous polypeptide chain were substituted with lysine (K) (GVGVP) ₆ GKGVP (GVGVP) ₅ sequence (26) (Y′12) A protein having a polypeptide chain (S1) having 2 to 200 GAGAGS sequences (1) (A11-2-1) and ₄ consecutive GAGAGS sequences (1) (GAGAGS) ₄ sequence (5) and ( GVGVP) ₆ GKGVP (GVGVP) ₅ sequence (26) and protein (i) (GAGAGS) ₄ sequences (5) and 12 (GVGVP) ₆ GKGVP (GVGVP) ₅ sequences (26) A protein of the sequence (24) having a molecular mass of about 105 kDa in which the (GAGAGS) ₂ sequence (14) is chemically bonded, in which these are chemically bonded alternately

（Ａ１２）ＧＶＧＶＰ配列（３）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ１）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ１）とを有するタンパク質
具体的には、下記タンパク質が含まれる。
（ｉ）（ＧＡＧＡＧＳ）₈配列（１６）及び（ＧＶＧＶＰ）₄₀配列（２７）をそれぞれ５個有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有する分子質量が約１１０ｋＤａの配列（１８）のタンパク質（ＳＥＬＰ６．１） (A12) A protein having a polypeptide chain (Y1) in which 2 to 200 GVGVP sequences (3) are continuous and a polypeptide chain (S1) in which 2 to 200 GAGAGS sequences (1) are continuous. Contains protein.
(I) (GAGAGS) ₈ sequences (16) and (GVGVP) ₄₀ sequences (27) each having 5 structures, and a structure in which these are alternately chemically bonded, the molecular mass of the sequence (18) having a molecular mass of about 110 kDa Protein (SELP6.1)

（Ａ２）アミノ酸配列（Ｘ）がＶＰＧＶＧ配列（２）であるタンパク質
（Ａ２１）ＶＰＧＶＧ配列（２）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ２）とＧＡＧＡＧＳ配列（１）を有するタンパク質
（ｉ）ＧＡＧＡＧＳ配列（１）、（ＶＰＧＶＧ）₄配列（２０）及び（ＶＰＧＶＧ）₈配列（２１）をそれぞれ４０個有し、これらが配列（２０）、配列（１）、配列（２１）の順に結合したブロックが４０個化学結合してなる構造を有する分子質量約２００ｋＤａの配列（２２）のタンパク質（ＥＬＰ１．１） (A2) Protein (A21) in which amino acid sequence (X) is VPGVG sequence (2) (A21) Protein chain (Y2) having 2 to 200 VPGVG sequences (2) and GAGAGS sequence (1) (i) There are 40 GAGAGS sequences (1), (VPGVG) ₄ sequences (20), and (VPGVG) ₈ sequences (21), which are linked in the order of sequence (20), sequence (1), and sequence (21). Protein (ELP1.1) of sequence (22) with a molecular mass of about 200 kDa having a structure in which 40 blocks are chemically bonded

本発明の創傷治癒剤は、上記のようなアミノ酸配列からなるタンパク質（Ａ）を含むものであることから、ポリビニルアルコール等に比べて生分解性に優れている。   Since the wound healing agent of this invention contains the protein (A) which consists of the above amino acid sequences, it is excellent in biodegradability compared with polyvinyl alcohol etc.

本発明の創傷治癒剤は、タンパク質（Ａ）以外に無機塩及び／又はリン酸（塩）を含んでもいい。   The wound healing agent of the present invention may contain an inorganic salt and / or phosphoric acid (salt) in addition to the protein (A).

無機塩としては、具体的には、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム、硫酸マグネシウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、炭酸水素カルシウム及び炭酸水素マグネシウム等が挙げられる。なお、本明細書においてリン酸（塩）は無機塩に含まない。
創傷治癒剤中の無機塩の含有量は、細胞親和性の観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０〜３重量％が好ましく、さらに好ましくは０〜１重量％、特に好ましくは０〜０．５重量％である。 Specific examples of inorganic salts include sodium chloride, potassium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, sodium sulfate, potassium sulfate, calcium sulfate, magnesium sulfate, sodium bicarbonate, potassium bicarbonate, calcium bicarbonate, and magnesium bicarbonate. Is mentioned. In the present specification, phosphoric acid (salt) is not included in the inorganic salt.
The content of the inorganic salt in the wound healing agent is preferably 0 to 3% by weight, more preferably 0 to 1% by weight, particularly preferably 0 to 0%, based on the weight of the wound healing agent, from the viewpoint of cell affinity. .5% by weight.

リン酸（塩）は、リン酸及び／又はリン酸塩を意味する。
リン酸塩としては、リン酸のアルカリ金属塩及びアルカリ土類金属塩が挙げられ、具体的には、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩及びマグネシウム塩等が挙げられる。
創傷治癒剤中のリン酸（塩）の含有量は、細胞親和性の観点から、創傷治癒剤の重量を基準として０〜２重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００１〜０．５重量％、特に好ましくは０．００１〜０．０５重量％である。 Phosphoric acid (salt) means phosphoric acid and / or phosphate.
Examples of the phosphate include alkali metal salts and alkaline earth metal salts of phosphoric acid, and specific examples include sodium salts, potassium salts, calcium salts, and magnesium salts.
The content of phosphoric acid (salt) in the wound healing agent is preferably 0 to 2% by weight, more preferably 0.001 to 0.5% by weight, based on the weight of the wound healing agent, from the viewpoint of cell affinity. Particularly preferred is 0.001 to 0.05% by weight.

本発明の創傷治癒剤は、糖及び／又は抗菌剤を含んでいてもよい。
糖としては、公知の糖を用いることができ、例えば、単糖（トリオース、テトロース、ペプトース、ヘキソース及びヘプトース等）、オリゴ糖及び多糖（デンプン、グリコーゲン、セルロース、キチン、キトサン、アガロース、カラギーナン、ヘパリン、ヒアルロン酸、ペクチン、キシログルカン及びキサンタンガム等）等が挙げられる。
抗菌剤としては、公知の抗菌剤を用いることができ、例えば、銀イオン、アンホテリシンＢ、ゲンタマイシン、ペニシリン及びストレプトマイシン等が挙げられる。 The wound healing agent of the present invention may contain a sugar and / or an antibacterial agent.
As the sugar, known sugars can be used. For example, monosaccharides (triose, tetrose, peptose, hexose, heptose, etc.), oligosaccharides and polysaccharides (starch, glycogen, cellulose, chitin, chitosan, agarose, carrageenan, heparin) , Hyaluronic acid, pectin, xyloglucan, xanthan gum and the like.
As the antibacterial agent, known antibacterial agents can be used, and examples thereof include silver ion, amphotericin B, gentamicin, penicillin, and streptomycin.

創傷治癒剤中の糖の含有量は、創傷治癒剤の重量を基準として、創傷治癒の観点から、０．１〜１０重量％が好ましく、さらに好ましくは０．５〜５重量％である。
抗菌剤の含有量は、創傷治癒剤の重量を基準として、創傷治癒の観点から、０．００１〜１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．００５〜０．１重量％である。 The content of sugar in the wound healing agent is preferably 0.1 to 10% by weight, more preferably 0.5 to 5% by weight, from the viewpoint of wound healing, based on the weight of the wound healing agent.
The content of the antibacterial agent is preferably 0.001 to 1% by weight, more preferably 0.005 to 0.1% by weight, from the viewpoint of wound healing, based on the weight of the wound healing agent.

本発明の創傷治癒剤は、多孔質形態を有する。
本発明の創傷治癒剤のかさ密度は、通常１〜３０ｍｇ／ｃｍ³であり、創傷治癒剤のかさ密度を本範囲にすることで、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせることができる。滲出液吸収の観点から、好ましくは５〜３０ｍｇ／ｃｍ³である。
尚、本発明の創傷治癒剤のかさ密度は、後述の方法により測定することができる。 The wound healing agent of the present invention has a porous form.
The bulk density of the wound healing agent of the present invention is usually 1 to 30 mg / cm ³ , and by making the bulk density of the wound healing agent within this range, the absorbed exudate can be appropriately retained in the wound part. . From the viewpoint of exudate absorption, it is preferably 5 to 30 mg / cm ³ .
The bulk density of the wound healing agent of the present invention can be measured by the method described later.

本発明の創傷治癒剤は、創傷治癒剤中の水分含有率が０〜２０重量％であり、滲出液吸収の観点から、０．５〜１０重量％が好ましい。
創傷治癒剤中の水分含有率は、下記測定方法によって求めることができる。
＜創傷治癒剤中の水分含有率の測定方法＞
創傷治癒剤０．１ｇの水分含有率を微量水分測定装置（平沼産業社製、「ＡＱ−２２００」）にて測定する。 In the wound healing agent of the present invention, the moisture content in the wound healing agent is 0 to 20% by weight, and from the viewpoint of exudate absorption, 0.5 to 10% by weight is preferable.
The water content in the wound healing agent can be determined by the following measurement method.
<Measurement method of water content in wound healing agent>
The moisture content of 0.1 g of the wound healing agent is measured with a trace moisture measuring device (Hiranuma Sangyo Co., Ltd. “AQ-2200”).

本発明の創傷治癒剤の製造方法は、上記タンパク質（Ａ）を含有するタンパク質水溶液を凍結乾燥する工程を有する創傷治癒剤の製造方法である。
本発明の創傷治癒剤のかさ密度は、タンパク質水溶液中のタンパク質（Ａ）の含有量を調整することで所望の値にすることができる。
タンパク質水溶液中のタンパク質（Ａ）の含有量は、細胞親和性の観点から、タンパク質水溶液の重量を基準として、０．１〜３重量％が好ましく、さらに好ましくは０．５〜３重量％である。 The manufacturing method of the wound healing agent of this invention is a manufacturing method of the wound healing agent which has the process of freeze-drying the protein aqueous solution containing the said protein (A).
The bulk density of the wound healing agent of the present invention can be adjusted to a desired value by adjusting the content of the protein (A) in the protein aqueous solution.
The content of the protein (A) in the protein aqueous solution is preferably 0.1 to 3% by weight, more preferably 0.5 to 3% by weight, based on the weight of the protein aqueous solution, from the viewpoint of cell affinity. .

タンパク質水溶液中には、糖及び／又は抗菌剤を含んでもよい。
タンパク質水溶液中の糖の含有量は、滲出液吸収の観点から、タンパク質水溶液の重量を基準として、０．０１〜５重量％が好ましく、さらに好ましくは０．１〜１重量％である。
タンパク質水溶液中の抗菌剤の含有量は、創傷治癒の観点から、タンパク質水溶液の重量を基準として、０．００００１〜１重量％が好ましく、さらに好ましくは０．０００１〜０．１重量％である。 The aqueous protein solution may contain a sugar and / or an antibacterial agent.
The sugar content in the aqueous protein solution is preferably 0.01 to 5% by weight, more preferably 0.1 to 1% by weight, based on the weight of the aqueous protein solution, from the viewpoint of absorption of exudate.
The content of the antibacterial agent in the protein aqueous solution is preferably 0.00001 to 1% by weight, more preferably 0.0001 to 0.1% by weight, based on the weight of the protein aqueous solution, from the viewpoint of wound healing.

本発明における凍結乾燥としては、公知の凍結乾燥方法を用いることができる。
凍結乾燥には、一次乾燥と二次乾燥がある。一次乾燥とは、試料表面から氷を昇華させるものである。二次乾燥とは、分子間に結合している水を除くものである。
凍結乾燥において、一次乾燥の温度は、タンパク質の立体構造維持の観点から、０℃以下が好ましく、さらに好ましくは−１０℃以下である。また、二次乾燥の温度は、タンパク質の立体構造維持の観点から、１０〜３０℃が好ましく、さらに好ましくは、１０〜２０℃である。
凍結乾燥時間は、タンパク質の立体構造維持の観点から、一次乾燥と二次乾燥との合計で、１２〜４８０時間が好ましく、さらに好ましくは１８〜４２０時間である。 As the lyophilization in the present invention, a known lyophilization method can be used.
Freeze drying includes primary drying and secondary drying. Primary drying is to sublimate ice from the sample surface. Secondary drying is the removal of water bound between molecules.
In lyophilization, the primary drying temperature is preferably 0 ° C. or lower, more preferably −10 ° C. or lower, from the viewpoint of maintaining the three-dimensional structure of the protein. The temperature for secondary drying is preferably 10 to 30 ° C., more preferably 10 to 20 ° C., from the viewpoint of maintaining the three-dimensional structure of the protein.
The lyophilization time is preferably 12 to 480 hours, more preferably 18 to 420 hours, in total from the primary drying and the secondary drying, from the viewpoint of maintaining the three-dimensional structure of the protein.

本発明の創傷治癒剤を患部に適用する方法としては、従来用いられている脱脂綿と同様の方法で用いることができ、例えば、患部の壊死組織を除去した後、患部に合わせた形に加工した創傷治癒剤を乗せて、ポリウレタンフィルム等で覆う等が挙げられる。   As a method of applying the wound healing agent of the present invention to the affected area, it can be used in the same manner as conventionally used absorbent cotton, for example, after removing the necrotic tissue of the affected area, it was processed into a shape according to the affected area For example, a wound healing agent is placed and covered with a polyurethane film or the like.

本発明の創傷治癒剤は、滲出液を吸収し、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせ、菌に感染しにくく、生分解性に優れているため、熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創、褥瘡性皮膚潰瘍及び糖尿病性皮膚潰瘍等の創傷を治癒する創傷治癒剤として用いることができる。   Since the wound healing agent of the present invention absorbs exudate, the absorbed exudate stays in the wound part appropriately, is less susceptible to infection with bacteria, and is excellent in biodegradability. It can be used as a wound healing agent for healing wounds such as wounds and traumatic skin defect wounds, decubitus skin ulcers and diabetic skin ulcers.

以下に実施例として本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。   Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples. However, the present invention is not limited to these examples.

＜製造例１＞
［ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製］
○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の生産
特許第４０８８３４１号公報の実施例記載の方法に準じて、ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５を作製した。
作製したプラスミドを大腸菌にトランスフォーメーションし、ＳＥＬＰ８Ｋ生産株を得た。以下、このＳＥＬＰ８Ｋ生産株を用いて、タンパク質（Ａ）の１種である配列（２３）のＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）を生産する方法を示す。 <Production Example 1>
[Preparation of SELP8K protein (A1-1)]
Production of SELP8K protein (A1) According to the method described in Examples of Japanese Patent No. 4088341, plasmid pPT0345 encoding SELP8K was prepared.
The prepared plasmid was transformed into E. coli to obtain a SELP8K production strain. Hereinafter, a method for producing SELP8K protein (A1) of sequence (23), which is one kind of protein (A), using this SELP8K production strain will be described.

○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の培養
３０℃で生育させたＳＥＬＰ８Ｋ生産株の一夜培養液を使用して、２５０ｍｌフラスコ中のＬＢ培地５０ｍｌに接種した。カナマイシンを最終濃度５０μｇ／ｍｌとなるように加え、該培養液を３０℃で攪拌しながら（２００ｒｐｍ）培養した。培養液が濁度ＯＤ６００＝０．８（吸光度計ＵＶ１７００：島津製作所製を使用）となった時に、４０ｍｌを４２℃に前もって温めたフラスコに移し、同じ温度で約２時間培養した。培養した培養液を氷上で冷却し、培養液の濁度ＯＤ６００を測定し、遠心分離にて大腸菌を集菌した。 O Culture of SELP8K protein (A1) An overnight culture of SELP8K producing strain grown at 30 ° C was used to inoculate 50 ml of LB medium in a 250 ml flask. Kanamycin was added to a final concentration of 50 μg / ml, and the culture was cultured at 30 ° C. with stirring (200 rpm). When the culture solution became turbidity OD600 = 0.8 (absorbance meter UV1700: manufactured by Shimadzu Corporation), 40 ml was transferred to a flask preheated to 42 ° C. and cultured at the same temperature for about 2 hours. The cultured broth was cooled on ice, the turbidity OD600 of the broth was measured, and Escherichia coli was collected by centrifugation.

○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製
集菌した大腸菌を用い、下記１：菌体溶解、２：遠心分離による不溶性細片の除去、３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー、６：限外濾過、７：凍結乾燥により大腸菌バイオマスからタンパク質を精製した。このようにして、分子質量が約８０ｋＤａの配列（２３）のタンパク質（Ａ１）の精製物であるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を得た。 ○ Purification of SELP8K protein (A1) Using collected E. coli, the following 1: lysis of cells, 2: removal of insoluble debris by centrifugation, 3: ammonium sulfate precipitation, 4: ultrafiltration, 5: anion exchange chromatography Protein was purified from E. coli biomass by chromatography, 6: ultrafiltration, 7: lyophilization. Thus, SELP8K protein (A1-1), which is a purified product of protein (A1) of sequence (23) having a molecular mass of about 80 kDa, was obtained.

１：菌体溶解
集菌した大腸菌１００ｇに対して、脱イオン水２００ｇを加えて、高圧ホモジナイザー（５５ＭＰａ）にて菌体溶解し、溶解した菌体を含む菌体溶解液を得た。その後、菌体溶解液を氷酢酸にてｐＨ４．０に調整した。 1: Bacterial cell dissolution To 100 g of collected Escherichia coli, 200 g of deionized water was added and the cell was dissolved with a high-pressure homogenizer (55 MPa) to obtain a cell solution containing the dissolved cells. Thereafter, the cell lysate was adjusted to pH 4.0 with glacial acetic acid.

２：遠心分離による不溶性細片の除去
さらに菌体溶解液を遠心分離（６３００ｒｐｍ、４℃、３０分間）して、上清を回収した。 2: Removal of insoluble debris by centrifugation Further, the cell lysate was centrifuged (6300 rpm, 4 ° C., 30 minutes), and the supernatant was collected.

３：硫安沈殿
回収した上清に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解した。溶解した液に対して、同様に硫安濃度が２５重量％となるように飽和硫安溶液を投入した。その後、８〜１２時間静置した後、遠心分離にて沈殿物を回収した。回収した沈殿物を脱イオン水に溶解し、溶液を得た。 3: Ammonium sulfate precipitation A saturated ammonium sulfate solution was added to the collected supernatant so that the ammonium sulfate concentration was 25% by weight. Then, after leaving still for 8 to 12 hours, the deposit was collect | recovered by centrifugation. The collected precipitate was dissolved in deionized water. Similarly, a saturated ammonium sulfate solution was added to the dissolved liquid so that the ammonium sulfate concentration was 25% by weight. Then, after leaving still for 8 to 12 hours, the deposit was collect | recovered by centrifugation. The collected precipitate was dissolved in deionized water to obtain a solution.

４：限外濾過
３で得た溶液を分子質量３０，０００カットの限外濾過装置（ホロファーバー：ＧＥヘルスケア製）に供した。３で得た溶液に対して、１０倍量の脱イオン水を用いて、限外濾過を実施し、限外濾過後のタンパク質を得た。 4: Ultrafiltration The solution obtained in 3 was subjected to an ultrafiltration apparatus (Holofarbar: manufactured by GE Healthcare) having a molecular weight of 30,000 cut. The solution obtained in 3 was subjected to ultrafiltration using 10 times the amount of deionized water to obtain a protein after ultrafiltration.

５：陰イオン交換クロマトグラフィー
限外濾過後のタンパク質を１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液に溶解して２０ｇ／Ｌとし、陰イオン交換カラムＨｉＰｒｅｐＳＰ ＸＬ１６／１０（ＧＥヘルスケア社製）をセットしたＡＫＴＡＰｒｉｍｅ（アマシャム社製）に供した。溶出液として５００ｍＭ １０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液を用いて、溶出画分を回収した。 5: Anion exchange chromatography AKTAPprim (Amersham) in which the protein after ultrafiltration was dissolved in 10 mM sodium acetate buffer to 20 g / L, and an anion exchange column HiPrepSP XL16 / 10 (manufactured by GE Healthcare) was set. Made). The eluted fraction was collected using 500 mM 10 mM sodium acetate buffer as the eluent.

６：限外濾過
５で得た溶液を上記「４：限外濾過」と同様にして処理し、限外濾過後のタンパク質を得た。 6: Ultrafiltration The solution obtained in 5 was treated in the same manner as in “4: Ultrafiltration” to obtain a protein after ultrafiltration.

７：凍結乾燥
タンパク質を脱イオン水に溶解して５ｇ／Ｌとし、水位が１５ｍｍ以下となるようにステンレス製のバットに入れる。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、−４０℃、１６時間かけて凍結させる。凍結後、真空度が８Ｐａ以下、−２０℃で、９０時間かけて１次乾燥、真空度が８Ｐａ以下、２０℃で、２４時間かけて２次乾燥させ、精製したＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を得た。 7: Lyophilization Protein is dissolved in deionized water to 5 g / L, and placed in a stainless steel vat so that the water level is 15 mm or less. Thereafter, it is put into a freeze dryer (manufactured by Nippon Techno Service Co., Ltd.) and frozen at −40 ° C. for 16 hours. SELP8K protein (A1-1) purified after freezing by primary drying over 90 hours at a vacuum degree of 8 Pa or less and −20 ° C., and secondary drying over 24 hours at a vacuum degree of 8 Pa or less and 20 ° C. Got.

○ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の同定
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を下記の手順で同定した。
ラビット抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及びＣ末端配列の６×Ｈｉｓタグに対するラビット抗６×Ｈｉｓ抗体（Ｒｏｌａｎｄ社製）を用いたウエスタンブロット法により分析した。ウエスタンブロット法の手順は下記の通りとした。見かけ分子質量８０ｋＤａの位置に、各抗体に抗体反応性を示すバンドが見られた。
また、アミノ酸分析システム（Ｐｒｏｍｉｎｅｎｃｅ島津製作所製）を用いたアミノ酸組成分析より得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）のアミノ酸の組成比率（実測値）と、合成遺伝子配列から推測されるＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）のアミノ酸の組成比率（理論値）を表１に示す。
これらから、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）はＧＶＧＶＰ配列（３）が８個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）中のバリン（Ｖ）のうち１個がリシン（Ｋ）に置換された（ＧＶＧＶＰ）₄ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ）₃配列（６）のポリペプチド鎖（Ｙ’１１）を１３個及びＧＡＧＡＧＳ配列（１）が４個連続した（ＧＡＧＡＧＳ）₄配列（５）のポリペプチド鎖（Ｙ１１）を１２個有し、これらが交互に化学結合してなる配列（２３）のタンパク質であることを確認した。 ○ Identification of SELP8K protein (A1-1) The obtained SELP8K protein (A1-1) was identified by the following procedure.
Analysis was carried out by Western blotting using a rabbit anti-SELP8K antibody and a rabbit anti-6 × His antibody (Roland) against a 6 × His tag of the C-terminal sequence. The Western blot procedure was as follows. A band showing antibody reactivity with each antibody was observed at an apparent molecular mass of 80 kDa.
In addition, the amino acid composition ratio (actually measured value) of SELP8K protein (A1-1) obtained by amino acid composition analysis using an amino acid analysis system (Prominence Shimadzu Corporation) and SELP8K protein (A1) estimated from the synthetic gene sequence Table 1 shows the composition ratio (theoretical value) of amino acids -1).
From these results, in the SELP8K protein (A1-1), one of the valine (V) in the polypeptide chain (Y) having 8 consecutive GVGVP sequences (3) was substituted with lysine (K) (GVGVP) _4. 13 polypeptide chains (Y′11) of GKGVP (GVGVP) ₃ sequence (6) and 4 consecutive GAGAGS sequences (1) (GAGAGS) 12 polypeptide chains (Y11) of ₄ sequence (5) It was confirmed that these were proteins of the sequence (23) formed by alternately chemically bonding.

＜ウエスタンブロット法＞
ウエスタンブロット用サンプル２０μＬに３×ＳＤＳ処理バッファ（１５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ６．８）、３００ｍＭ ジチオスレイトール、６％ ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０．３％ ブロモフェノールブルー、及び３０％ グリセロールを含む）１０μＬを添加して９５℃で５分間加温し、泳動用試料を調製した。この泳動用試料１５μＬを用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥを行った。泳動後のゲルをフッ化ポリビニリデンメンブレンにトランスファー（以下、「メンブレン」と略記）し、これをブロッキングバッファ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０、及び５％ スキムミルクを含む）に浸漬して１時間室温で振蕩することによりメンブレンのブロッキング処理を行った。ブロッキング処理後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔ（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．６）、１３７ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．１％ Ｔｗｅｅｎ２０を含む）で２分間洗浄した。次に、メンブレンを一次抗体溶液（一次抗体：抗ＳＥＬＰ８Ｋ抗体及び抗Ｈｉｓ−ｔａｇ抗体（Ｒｏｃｋｌａｎｄ社製）をＴＢＳ−Ｔで５００分の１に希釈した溶液）に浸漬し、４℃で一晩静置して抗体反応を行った。反応後、このメンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、一次抗体に結合可能であり且つ標識酵素として西洋ワサビペルオキシダーゼを結合させた二次抗体の溶液（二次抗体：ＥＣＬ ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ ＩｇＧ ＨＲＰ ｌｉｎｋｅｄ Ｆ（ａｂ’）２ ｆｒａｇｍｅｎｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）をＴＢＳ−Ｔで２０００分の１に希釈した溶液）にメンブレンを浸漬し、３０分間室温で静置して抗体反応を行った。反応後、メンブレンをＴＢＳ−Ｔで５分間、４回洗浄した後、ＥＣＬ−Ａｄｖａｎｃｅ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＧＥヘルスケアバイオサイエンス社製）により酵素反応を行った。ルミノメーターＦｏｒＥＣＬ（アマシャム社製）を用いて、高感度インスタント黒白フィルム（富士フイルム株式会社製）に感光させ、バンドを可視化した。肉眼でバンドが確認できない場合、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）が分解吸収され、無くなったと判断した。 <Western blot method>
Western blotting sample 20 μL with 3 × SDS processing buffer (containing 150 mM Tris HCl (pH 6.8), 300 mM dithiothreitol, 6% sodium dodecyl sulfate (SDS), 0.3% bromophenol blue, and 30% glycerol) 10 μL was added and heated at 95 ° C. for 5 minutes to prepare a sample for electrophoresis. SDS-PAGE was performed using 15 μL of the sample for electrophoresis. The gel after electrophoresis was transferred to a polyvinylidene fluoride membrane (hereinafter abbreviated as “membrane”), and this was added with blocking buffer (20 mM Tris (pH 7.6), 137 mM NaCl, 0.1% Tween 20, and 5% skim milk. And the membrane was subjected to blocking treatment by shaking at room temperature for 1 hour. After the blocking treatment, the membrane was washed with TBS-T (containing 20 mM Tris (pH 7.6), 137 mM NaCl, and 0.1% Tween 20) for 2 minutes. Next, the membrane was immersed in a primary antibody solution (primary antibody: a solution in which anti-SELP8K antibody and anti-His-tag antibody (manufactured by Rockland) were diluted 1: 500 with TBS-T) and allowed to stand at 4 ° C. overnight. The antibody reaction was performed. After the reaction, this membrane was washed 4 times with TBS-T for 5 minutes, and then a solution of a secondary antibody (secondary antibody: ECL anti--) capable of binding to the primary antibody and conjugated with horseradish peroxidase as a labeling enzyme. Rabbit IgG HRP linked F (ab ') 2 fragment (manufactured by GE Healthcare Bioscience) diluted to 1/2000 in TBS-T) and left at room temperature for 30 minutes for antibody reaction Went. After the reaction, the membrane was washed 4 times with TBS-T for 5 minutes, and then subjected to an enzyme reaction using ECL-Advanced Western Blotting Detection Kit (manufactured by GE Healthcare Bioscience). Using a luminometer ForECL (manufactured by Amersham), a high sensitivity instant black-and-white film (manufactured by Fujifilm Corporation) was exposed to light to visualize the band. When the band could not be confirmed with the naked eye, it was judged that the SELP8K protein (A1-1) was absorbed and lost.

○βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合の測定
得られたＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を用いて下記の手順でβターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。
＜βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合の測定＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を０．３ｍｇ／ｍｌとなるように脱イオン水（４℃）に溶解し、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を作製した。作製したＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）水溶液を円二色性スペクトル測定器（日本分光：Ｊ−８２０）にて測定し（測定温度：４℃）、二次構造解析プログラム（ＪＷＳＳＥ型：日本分光株式会社製）を用いて、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を算出した。結果を表２に示す。 ○ Measurement of total ratio of β-turn structure and random coil structure Using the obtained SELP8K protein (A1-1), the total ratio of β-turn structure and random coil structure was measured by the following procedure.
<Measurement of total ratio of β-turn structure and random coil structure>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in deionized water (4 ° C.) to a concentration of 0.3 mg / ml to prepare an SELP8K protein (A1-1) aqueous solution. The prepared SELP8K protein (A1-1) aqueous solution was measured with a circular dichroism spectrum measuring instrument (JASCO: J-820) (measurement temperature: 4 ° C.), and secondary structure analysis program (JWSSE type: JASCO Corporation) The total ratio of the β-turn structure and random coil structure was calculated. The results are shown in Table 2.

＜製造例２＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５−２：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−２）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。
５−２：リフォールディング（大希釈法）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置した。調製した溶液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の１０倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析した。その後、脱イオン水を捨て、新たに溶出画分の１０倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析した。この操作を残り３回、計５回の透析を繰り返した後、透析膜中の溶液を回収した。 <Production Example 2>
In “Preparation of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, between “5: anion exchange chromatography” and “6: ultrafiltration” in “Purification of SELP8K protein (A1)”, A SELP8K protein (A1-2) was prepared in the same manner except that “5-2: Refolding (large dilution method)” was performed, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.
5-2: Refolding (large dilution method)
The elution fraction of anion exchange chromatography was prepared with a 10M urea solution as a protein denaturing agent so as to become a 6M urea solution, and allowed to stand at 4 ° C. for 12 hours. The prepared solution was put into a dialysis membrane (manufactured by Viscose Companies, Inc.) and dialyzed for 12 hours against 10 times volume of deionized water of the eluted fraction. Thereafter, the deionized water was discarded, and newly dialyzed for 12 hours against 10 times the volume of deionized water of the eluted fraction. This operation was repeated three times for a total of 5 times, and then the solution in the dialysis membrane was recovered.

＜製造例３＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」と「６：限外濾過」との間に、下記「５−３：リフォールディング（大希釈法）」を行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−３）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。
５−３：リフォールディング（大希釈法）
陰イオン交換クロマトグラフィーの溶出画分をタンパク質変性剤である１０Ｍウレア溶液にて、６Ｍウレア溶液となるように調製し、１２時間、４℃で静置した。調製した溶液を透析膜（Ｖｉｓｋａｓｅ Ｃｏｍｐａｎｉｅｓ，Ｉｎｃ．社製）に投入し、溶出画分の１０倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析した。その後、脱イオン水を捨て、新たに溶出画分の３倍容量の脱イオン水にて１２時間、透析した。溶出画分の３倍容量の脱イオン水による透析を残り５回繰り返した後、透析膜中の溶液を回収した。 <Production Example 3>
In “Preparation of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, between “5: anion exchange chromatography” and “6: ultrafiltration” in “Purification of SELP8K protein (A1)”, A SELP8K protein (A1-3) was prepared in the same manner except that “5-3: Refolding (large dilution method)” was performed, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.
5-3: Refolding (large dilution method)
The elution fraction of anion exchange chromatography was prepared with a 10M urea solution as a protein denaturing agent so as to become a 6M urea solution, and allowed to stand at 4 ° C. for 12 hours. The prepared solution was put into a dialysis membrane (manufactured by Viscose Companies, Inc.) and dialyzed for 12 hours against 10 times volume of deionized water of the eluted fraction. Thereafter, the deionized water was discarded, and newly dialyzed for 12 hours against 3 times the volume of deionized water in the eluted fraction. After the dialysis with 3 times volume of deionized water for the elution fraction was repeated 5 times, the solution in the dialysis membrane was recovered.

＜製造例４＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」に代えて下記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−４）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。
５’：アフィニティクロマトグラフィー
「４：限外濾過」後のタンパク質を、Ｈｉｓ−ｔａｇを用いたアフィニティクロマトグラフィー（ＧＥヘルスケア社製、Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ６ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ）にて精製し、溶出画分を回収した。 <Production Example 4>
In “Production of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, the following “5 ′: affinity chromatography” is used instead of “5: anion exchange chromatography” in “Purification of SELP8K protein (A1)”. In the same manner, a SELP8K protein (A1-4) was prepared, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.
5 ′: Affinity chromatography Protein after “4: Ultrafiltration” is purified by affinity chromatography using His-tag (manufactured by GE Healthcare, Ni Sepharose 6 Fast Flow), and the eluted fraction is collected. did.

＜比較製造例１＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」に代えて下記「５’’：アフィニティクロマトグラフィー」とする以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−１）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。
５’’：アフィニティクロマトグラフィー
「４：限外濾過」後のタンパク質を、Ｈｉｓ−ｔａｇを用いたアフィニティクロマトグラフィー（クロンテック社製、ＴＡＬＯＮ（登録商標）Ｓｉｎｇｌｅ Ｓｔｅｐ Ｃｏｌｕｍｎｓ）にて精製し、溶出画分を回収した。 <Comparative Production Example 1>
In “Production of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, the following “5 ″: affinity chromatography” is used instead of “5: anion exchange chromatography” in “Purification of SELP8K protein (A1)”. A SELP8K protein (A1′-1) was prepared in the same manner as described above, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.
5 ″: Affinity Chromatography The protein after “4: Ultrafiltration” is purified by affinity chromatography using HIs-tag (Clontech, TALON (registered trademark) Single Step Columns) and eluted fractions. Was recovered.

＜比較製造例２＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「３：硫安沈殿、４：限外濾過、５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施せず、上記「５’：アフィニティクロマトグラフィー」行う以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−２）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。 <Comparative Production Example 2>
In “Preparation of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, perform “3: Ammonium sulfate precipitation, 4: Ultrafiltration, 5: Anion exchange chromatography” in “Purification of SELP8K protein (A1)”. First, SELP8K protein (A1′-2) was prepared in the same manner except that “5 ′: affinity chromatography” was performed, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.

＜比較製造例３＞
製造例１の「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）の作製」において、「ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１）の精製」の「５：陰イオン交換クロマトグラフィー」を実施しない以外は同様にして、ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−３）を作製し、βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した。結果を表２に示す。 <Comparative Production Example 3>
In the same manner as in “Production of SELP8K protein (A1-1)” in Production Example 1, except that “5: Anion exchange chromatography” in “Purification of SELP8K protein (A1)” was not performed, SELP8K protein (A1 ′ -3) was prepared, and the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure was measured. The results are shown in Table 2.

＜比較製造例４＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＥＬＰ１．２をコードしたプラスミドｐＰＴ０１０２−２」を用いる以外は同様にして、分子質量が約３７ｋＤａの配列（２５）のＥＬＰ１．２タンパク質（Ａ’−１）を得た。βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した結果を表２に示す。 <Comparative Production Example 4>
In the same manner as in Production Example 1, except that "plasmid pPT0102-2 encoding ELP1.2" is used instead of "plasmid pPT0345 encoding SELP8K", ELP1. Two proteins (A′-1) were obtained. Table 2 shows the result of measuring the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure.

＜比較製造例５＞
製造例１において、「ＳＥＬＰ８ＫをコードしたプラスミドｐＰＴ０３４５」に変えて、「ＳＬＰ４．１をコードしたｐＳＹ１３９８−１」を用いる以外は同様にして、分子質量が約９３ｋＤａの配列（１９）のＳＬＰ４．１タンパク質（Ａ’−２）を得た。βターン構造とランダムコイル構造の合計の割合を測定した結果を表２に示す。 <Comparative Production Example 5>
In the same manner as in Production Example 1, except that “pSY139-1 encoding SLP4.1” is used instead of “plasmid pPT0345 encoding SELP8K”, SLP4.1 of the sequence (19) having a molecular mass of about 93 kDa is used. A protein (A′-2) was obtained. Table 2 shows the result of measuring the total ratio of the β-turn structure and the random coil structure.

＜実施例１＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液（ＮａＣｌ：８ｇ／Ｌ、ＫＣｌ：０．２ｇ／Ｌ、ｐＨ７．４）に溶解し（１ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１）を得た。タンパク質水溶液（１）を２４穴プレート（ＩＷＡＫＩ社製）に入れた。その後、凍結乾燥機（日本テクノサービス社製）に入れて、−４０℃、１６時間かけて凍結させた。凍結後、真空度が８Ｐａ以下、−２０℃で、９０時間かけて１次乾燥し、真空度が８Ｐａ以下、２０℃で、２４時間かけて２次乾燥させ、創傷治癒剤（１）を得た。 <Example 1>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (NaCl: 8 g / L, KCl: 0.2 g / L, pH 7.4) (1 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (1). . The aqueous protein solution (1) was placed in a 24-well plate (IWAKI). Then, it put into the freeze dryer (made by Nippon Techno Service Co., Ltd.), and was frozen over -40 degreeC and 16 hours. After freezing, primary drying is performed over 90 hours at a vacuum degree of 8 Pa or less and −20 ° C., and secondary drying is performed over 24 hours at a vacuum degree of 8 Pa or less and 20 ° C. to obtain a wound healing agent (1). It was.

＜実施例２＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（２）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（２）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（２）を得た。 <Example 2>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (2).
In Example 1, wound healing agent (2) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (2)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例３＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（３）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（３）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（３）を得た。 <Example 3>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (10 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (3).
In Example 1, wound healing agent (3) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (3)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例４＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（４）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（４）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（４）を得た。 <Example 4>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (1 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (4).
In Example 1, wound healing agent (4) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (4)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例５＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（５）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（５）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（５）を得た。 <Example 5>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (5).
In Example 1, wound healing agent (5) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (5)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例６＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（６）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（６）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（６）を得た。 <Example 6>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (10 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (6).
In Example 1, wound healing agent (6) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (6)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例７＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（７）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（７）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（７）を得た。 <Example 7>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (1 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (7).
In Example 1, wound healing agent (7) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (7)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例８＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（８）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（８）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（８）を得た。 <Example 8>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (8).
A wound healing agent (8) was obtained in the same manner as in Example 1 except that “protein aqueous solution (8)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例９＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（９）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（９）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（９）を得た。 <Example 9>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (10 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (9).
In Example 1, wound healing agent (9) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (9)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１０＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（２５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１０）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１０）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１０）を得た。 <Example 10>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (25 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (10).
In Example 1, wound healing agent (10) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (10)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１１＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１２．５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１１）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１１）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１１）を得た。 <Example 11>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (12.5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (11).
In Example 1, wound healing agent (11) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (11)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１２＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（３０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１２）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１２）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１２）を得た。 <Example 12>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (30 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (12).
A wound healing agent (12) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (12)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１３＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−２）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１３）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１３）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１３）を得た。 <Example 13>
SELP8K protein (A1-2) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (13).
A wound healing agent (13) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (13)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１４＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−３）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１４）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１４）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１４）を得た。 <Example 14>
SELP8K protein (A1-3) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (14).
A wound healing agent (14) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (14)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜実施例１５＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−４）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１５）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１５）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１５）を得た。 <Example 15>
SELP8K protein (A1-4) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (15).
A wound healing agent (15) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (15)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例１＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（０．０１ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１’）を得た。 <Comparative Example 1>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (0.01 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (1 ′).
A wound healing agent (1 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (1 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例２＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１５０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（２’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（２’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（２’）を得た。 <Comparative example 2>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (150 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (2 ′).
A wound healing agent (2 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (2 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例３＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（３’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（３’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（３’）を得た。 <Comparative Example 3>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (3 ′).
A wound healing agent (3 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (3 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例４＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（４’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（４’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（４’）を得た。 <Comparative Example 4>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (4 ′).
A wound healing agent (4 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (4 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例５＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５０ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（５’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（５’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（５’）を得た。 <Comparative Example 5>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (50 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (5 ′).
In Example 1, a wound healing agent (5 ′) was obtained in the same manner except that “protein aqueous solution (5 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例６＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（１００ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（６’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（６’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（６’）を得た。 <Comparative Example 6>
SELP8K protein (A1-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (100 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (6 ′).
A wound healing agent (6 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (6 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例７＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（７’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（７’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（７’）を得た。 <Comparative Example 7>
SELP8K protein (A1′-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (7 ′).
A wound healing agent (7 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (7 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例８＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−２）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（８’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（８’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（８’）を得た。 <Comparative Example 8>
SELP8K protein (A1′-2) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (8 ′).
In Example 1, wound healing agent (8 ') was obtained in the same manner except that "protein aqueous solution (8')" was used instead of "protein aqueous solution (1)".

＜比較例９＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ１’−３）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（９’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（９’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（９’）を得た。 <Comparative Example 9>
SELP8K protein (A1′-3) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (9 ′).
A wound healing agent (9 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (9 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜比較例１０＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ’−１）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１０’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１０’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１０’）を得た。 <Comparative Example 10>
SELP8K protein (A′-1) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (10 ′).
In Example 1, wound healing agent (10 ') was obtained in the same manner except that "protein aqueous solution (10')" was used instead of "protein aqueous solution (1)".

＜比較例１１＞
ＳＥＬＰ８Ｋタンパク質（Ａ’−２）を、２０ｍＭリン酸緩衝液に溶解し（５ｍｇ／ｍｌ）、タンパク質水溶液（１１’）を得た。
実施例１において、「タンパク質水溶液（１）」に代えて「タンパク質水溶液（１１’）」を用いる以外は同様にして、創傷治癒剤（１１’）を得た。 <Comparative Example 11>
SELP8K protein (A′-2) was dissolved in 20 mM phosphate buffer (5 mg / ml) to obtain an aqueous protein solution (11 ′).
A wound healing agent (11 ′) was obtained in the same manner as in Example 1, except that “protein aqueous solution (11 ′)” was used instead of “protein aqueous solution (1)”.

＜評価１＞
○かさ密度の測定
予め重量［（Ｇ１）、単位：ｇ］を小数点以下１桁まで測定した５０ｍＬ容量の遠沈管［アズワン（株）製］に、タンパク質水溶液（１）〜（１５）及び（１’）〜（１１’）をそれぞれ１０ｍｌ入れ、実施例１〜１２及び比較例１〜９の条件で凍結乾燥させた。
凍結乾燥後の遠沈管の重さ（Ｇ２）（単位：ｇ）をそれぞれ小数点以下１桁まで測定した。また、遠沈管中の創傷治癒剤の体積（Ｖｏｌ）（ｍｌ）を、遠沈管の目盛りから読み取った。
得られた重量（Ｇ１）、（Ｇ２）及び体積（Ｖ）から、下記式によりかさ密度を算出し、結果を表３に示す。
かさ密度（ｇ／ｍｌ）＝｛（Ｇ２）−（Ｇ１）｝／（Ｖｏｌ） <Evaluation 1>
○ Measurement of bulk density A 50 mL capacity centrifuge tube [manufactured by ASONE Co., Ltd.], whose weight [(G1), unit: g] was measured to one decimal place in advance, was added to aqueous protein solutions (1) to (15) and (1 10 ml of each of ') to (11') was added and freeze-dried under the conditions of Examples 1 to 12 and Comparative Examples 1 to 9.
The weight (G2) (unit: g) of the centrifuge tube after lyophilization was measured to one decimal place. The volume (Vol) (ml) of the wound healing agent in the centrifuge tube was read from the scale of the centrifuge tube.
From the obtained weights (G1), (G2) and volume (V), the bulk density was calculated by the following formula, and the results are shown in Table 3.
Bulk density (g / ml) = {(G2)-(G1)} / (Vol)

＜評価２＞
○創傷治癒剤中の水分含有率の測定
創傷治癒剤（１）〜（１５）及び（１’）〜（１１’）をそれぞれ０．１ｇ用いて、微量水分測定装置（平沼産業社製、「ＡＱ−２２００」）にて創傷治癒剤中の水分含有率を測定した。評価結果を表３に示す。 <Evaluation 2>
○ Measurement of moisture content in wound healing agent Using 0.1 g each of wound healing agents (1) to (15) and (1 ′) to (11 ′), a trace moisture measuring device (Hiranuma Sangyo Co., Ltd., “ AQ-2200 ") and the moisture content in the wound healing agent was measured. The evaluation results are shown in Table 3.

＜評価３＞
○肉芽組織高及び上皮化長の測定
（健常モルモットを用いた全層欠損層モデルでの治療試験）
健常モルモット♀ ｓｔｄ Ｈａｒｔｌｅｙ（日本エスエルシー社製）７週齢を麻酔下で除毛し、消毒したモルモット背部皮膚に脂肪層が完全に露出した創面１０ｍｍ×１０ｍｍの全層皮膚欠損創を作製し、止血、乾燥した後、創傷面に創傷治癒剤（１）〜（１５）及び（１’）〜（１１’）を各々置き、ポリウレタンフィルムを貼付した。その後、各創傷部の上にガーゼをのせて、ナイロン糸で創傷部周囲と固定した。治療期間５、１０日目に検体を擬死させ、創傷部を含む皮膚を採取し、病理標本（ＨＥ染色）を作製した。それぞれの創傷治癒剤について、病理標本を１１個作製した。
作製した治療期間５日目の病理標本用いて、パニキュラス（筋様膜）からの肉芽組織高をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表３に示す。なお、評価結果は、病理標本１１個の平均値である。
また、治療期間１０日目の病理標本用いて、正常組織から伸長した上皮化長をマイクロルーラーを使用して測定した。評価結果は表３に示す。なお、評価結果は、病理標本１１個の平均値である。 <Evaluation 3>
○ Measurement of granulation tissue height and epithelialization length (Therapeutic test with full-thickness layer model using healthy guinea pig)
Healthy guinea pig std Hartley (manufactured by SLC Japan) 7 weeks of age under hair removal under anesthesia, creating a 10 mm × 10 mm full-thickness skin defect wound with the fat layer completely exposed to the sterilized guinea pig dorsal skin, After hemostasis and drying, wound healing agents (1) to (15) and (1 ′) to (11 ′) were placed on the wound surface, and a polyurethane film was adhered. Then, gauze was put on each wound part, and the wound part periphery was fixed with the nylon thread | yarn. On the 5th and 10th treatment period, the specimen was pseudo-dead, the skin containing the wound was collected, and a pathological specimen (HE staining) was prepared. Eleven pathological specimens were prepared for each wound healing agent.
Using the prepared pathological specimen on the fifth day of the treatment period, the granulation tissue height from the paniculus (muscle-like membrane) was measured using a micro ruler. The evaluation results are shown in Table 3. The evaluation result is an average value of 11 pathological specimens.
Moreover, the epithelialization length extended from normal tissue was measured using the micro ruler using the pathological specimen of the treatment period 10th day. The evaluation results are shown in Table 3. The evaluation result is an average value of 11 pathological specimens.

＜評価４＞
○水分保持率の測定
（湿潤環境維持評価）
１０ｍｍ角の創傷治癒剤（１）〜（１５）及び（１’）〜（１１’）に１００μＬの生理食塩水をたらし、３７℃、湿度５０％の環境下にて５日間静置した。その後、創傷治癒剤中に含まれている水分量［（Ｊ）、単位：μＬ］について、微量水分測定装置を用いて測定した。測定した水分量（Ｊ）から、水分保持率（％）を算出した。結果を表３に示す。
水分保持率（％）＝創傷治癒剤中に含まれている水分量（Ｊ）／１００（μＬ）×１００ <Evaluation 4>
○ Measurement of moisture retention (wet environment maintenance evaluation)
10 μm square wound healing agents (1) to (15) and (1 ′) to (11 ′) were dipped with 100 μL of physiological saline and allowed to stand in an environment of 37 ° C. and humidity of 50% for 5 days. Thereafter, the amount of water [(J), unit: μL] contained in the wound healing agent was measured using a trace moisture measuring device. From the measured water content (J), the water retention rate (%) was calculated. The results are shown in Table 3.
Moisture retention (%) = water content (J) / 100 (μL) × 100 contained in the wound healing agent

表３の結果から、本発明の創傷治癒剤（１）〜（１５）を用いた場合、肉芽組織高及び上皮化長が大きく、細胞親和性が高く、創傷治癒に優れていることが分かる。また、本発明の創傷治癒剤（１）〜（１５）は、水分保持率が１２．３〜２６．７％と適度であることから、吸収した生理食塩水を蒸散させる割合と、保持する割合とが適度であり、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせることができることが分かる。   From the results of Table 3, it can be seen that when the wound healing agents (1) to (15) of the present invention are used, the granulation tissue height and epithelialization length are large, the cell affinity is high, and the wound healing is excellent. In addition, the wound healing agents (1) to (15) of the present invention have an appropriate moisture retention rate of 12.3 to 26.7%, so that the absorbed physiological saline is evaporated and the retained rate. It is understood that the absorbed exudate can be appropriately retained in the wound part.

本発明の創傷治癒剤は、滲出液を吸収し、吸収した滲出液を適度に創傷部に留まらせることができ、細胞親和性が高く、生分解性に優れている。したがって、熱傷、採皮創、皮膚剥削創及び外傷性皮膚欠損創等の疾患ないし創傷による患部を治癒する創傷治癒剤として有効である。   The wound healing agent of the present invention absorbs exudate, can appropriately retain the absorbed exudate in the wound part, has high cell affinity, and is excellent in biodegradability. Therefore, it is effective as a wound healing agent for healing a disease such as a burn, a skin wound, a skin exfoliation wound, and a traumatic skin defect wound or an affected part caused by a wound.

Claims (6)

ＧＡＧＡＧＳ配列（１）並びに下記アミノ酸配列（Ｘ）及び／又は下記アミノ酸配列（Ｘ’）を有するタンパク質（Ａ）を含む多孔質形態を有する創傷治癒剤であって、
円二色性スペクトル法により求められる前記タンパク質（Ａ）中のβターン構造とランダムコイル構造との合計の割合が６０〜８５％であり、前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全ての前記アミノ酸配列（Ｘ）中のアミノ酸数と全ての前記アミノ酸配列（Ｘ’）のアミノ酸数の合計数の割合が５０〜７０％であり、創傷治癒剤のかさ密度が１〜３０ｍｇ／ｃｍ³であり、創傷治癒剤中の水分含有率が０〜２０重量％であり、タンパク質（Ａ）が、（ＧＡＧＡＧＳ） ₄ 配列（５）及び（ＧＶＧＶＰ） ₄ ＧＫＧＶＰ（ＧＶＧＶＰ） ₃ 配列（６）を有するタンパク質（Ａ１１−１−１）である創傷治癒剤。
アミノ酸配列（Ｘ）：ＶＰＧＶＧ配列（２）、ＧＶＧＶＰ配列（３）及びＧＡＨＧＰＡＧＰＫ配列（４）からなる群より選ばれる少なくとも１種のアミノ酸配列。
アミノ酸配列（Ｘ’）：前記アミノ酸配列（Ｘ）中の１個のアミノ酸がリシン（Ｋ）もしくはアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列又は前記アミノ酸配列（Ｘ）中の２個のアミノ酸がリシン（Ｋ）及び／又はアルギニン（Ｒ）で置換されたアミノ酸配列。 A wound healing agent having a porous form comprising a GAGAGS sequence (1) and a protein (A) having the following amino acid sequence (X) and / or the following amino acid sequence (X ′),
The total ratio of β-turn structure and random coil structure in the protein (A) determined by the circular dichroism spectrum method is 60 to 85%, and all the amino acids with respect to the total number of amino acids in the protein (A) The ratio of the total number of amino acids in the sequence (X) and all the amino acid sequences (X ′) is 50 to 70%, and the bulk density of the wound healing agent is 1 to 30 mg / cm ³ , moisture content in the wound-healing agent Ri 0-20% der, protein (a) is, (GAGAGS) ₄ sequence (5) and (GVGVP) ₄ GKGVP (GVGVP) ₃ protein having the sequence (6) ( A11-1-1) wound healing agent Ru der.
Amino acid sequence (X): At least one amino acid sequence selected from the group consisting of VPGVG sequence (2), GVGVP sequence (3) and GAHGGPGPK sequence (4).
Amino acid sequence (X ′): an amino acid sequence in which one amino acid in the amino acid sequence (X) is substituted with lysine (K) or arginine (R), or two amino acids in the amino acid sequence (X) are lysine Amino acid sequence substituted with (K) and / or arginine (R). 前記ＧＡＧＡＧＳ配列（１）の個数と前記アミノ酸配列（Ｘ）及び前記アミノ酸配列（Ｘ’）の合計個数との比［ＧＡＧＡＧＳ配列（１）：｛アミノ酸配列（Ｘ）及びアミノ酸配列（Ｘ’）の合計｝］が１：２〜１：６である請求項１に記載の創傷治癒剤。   Ratio of the number of GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′) [GAGAGS sequences (1): {of amino acid sequences (X) and amino acid sequences (X ′)] The wound healing agent according to claim 1, wherein the total}] is from 1: 2 to 1: 6. 前記タンパク質（Ａ）が、前記アミノ酸配列（Ｘ）の１種が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｙ）及び／又は下記ポリペプチド鎖（Ｙ’）を有し、
前記タンパク質（Ａ）中の前記ポリペプチド鎖（Ｙ）と前記ポリペプチド鎖（Ｙ’）との合計個数が１〜１００個である請求項１又は２に記載の創傷治癒剤。
ポリペプチド鎖（Ｙ’）：前記ポリペプチド鎖（Ｙ）中の全アミノ酸数の０．１〜２０％のアミノ酸がリシン（Ｋ）及び／又はアルギニン（Ｒ）で置換されたポリペプチド鎖。 The protein (A) has a polypeptide chain (Y) and / or the following polypeptide chain (Y ′) in which 2 to 200 consecutive amino acid sequences (X) are present,
The wound healing agent according to claim 1 or 2, wherein the total number of the polypeptide chain (Y) and the polypeptide chain (Y ') in the protein (A) is 1 to 100.
Polypeptide chain (Y ′): A polypeptide chain in which 0.1 to 20% of the total number of amino acids in the polypeptide chain (Y) is substituted with lysine (K) and / or arginine (R). 前記タンパク質（Ａ）が、前記ＧＡＧＡＧＳ配列（１）が２〜２００個連続したポリペプチド鎖（Ｓ）を有する請求項１〜３のいずれか１項に記載の創傷治癒剤。   The wound healing agent according to any one of claims 1 to 3, wherein the protein (A) has a polypeptide chain (S) in which 2 to 200 GAGAGS sequences (1) are continuous. 前記タンパク質（Ａ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法による分子質量が１５〜２００ｋＤａである請求項１〜４のいずれかに記載の創傷治癒剤。   The wound healing agent according to any one of claims 1 to 4, wherein the protein (A) has a molecular mass of 15 to 200 kDa as determined by SDS-PAGE (SDS polyacrylamide gel electrophoresis). 前記タンパク質（Ａ）の全アミノ酸数に対する全てのＧＡＧＡＧＳ配列（１）中のアミノ酸数の割合が５〜５０％である請求項１〜５のいずれか１項に記載の創傷治癒剤。   The wound healing agent according to any one of claims 1 to 5, wherein a ratio of the number of amino acids in all GAGAGS sequences (1) to the total number of amino acids of the protein (A) is 5 to 50%.