JP6322209B2 - 糖尿病の治療および/または発症抑制のための方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2012年12月18日に出願された、米国仮出願番号61/738835号の優先権を主張し、この出願の内容全体を本願に引用して援用する。
電位依存性カルシウム(Cav)チャネルはβ細胞の生理および病態生理において極めて重要である。これらのチャネルはインスリン分泌の調節において中心的位置を占めるだけでなく、タンパク質リン酸化、遺伝子発現および細胞周期の調節を通じてβ細胞の発生、生存および増殖にも関与する。β細胞のCavチャネルの機能および密度は、他の種類の細胞型と共通の、またはβ細胞に特有のいずれかの広範囲にわたる様々なメカニズム、例えばチャネルのリン酸化、他の分子との相互作用、およびグルコース代謝によるシグナル伝達による調節を受ける。Cavチャネルが正常に機能しないとβ細胞の機能不全が引き起こされ、最も一般的な代謝性疾患である糖尿病においてみられるように死をももたらす。実際、Tリンパ球を介した自己免疫性の攻撃は、1型糖尿病におけるβ細胞の死に重大な役割を果たしている。加えて、1型糖尿病の血清中の因子は、β細胞のCavチャネルの過剰な活性化により非生理的な量のCa2+を膵臓β細胞内に侵入させ、結果としてβ細胞のアポトーシスをもたらす。明らかに、このプロセスが自己免疫性の攻撃に加えてさらに疾患の発症を高める。そのような因子は2型糖尿病の血清中にもみられ、この血清中においてもそれらは1型糖尿病の血清中と同じように作用する。実際、β細胞の量の減少およびβ細胞Cavチャネルの過剰な活性化は、後藤−柿崎ラットにおけるような2型糖尿病の状態下で出現する。
(a)1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第1集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のアポリポタンパク質CIII(ApoCIII)と接触させること;
(b)前記1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第2集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の第2集団をスカベンジャー受容体クラスBタイプI(SRBI)の発現または活性を阻害する分子とさらに接触させること;および
(c)ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大をインスリン分泌細胞の第2集団でよりもインスリン分泌細胞の第1集団において強く阻害する陽性試験化合物を、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として同定すること、を含む。
(a)1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第1集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること;および
(b)インスリン分泌細胞の第1集団におけるSRBIの発現または活性を対照と比較して阻害する陽性試験化合物を同定することであって、陽性試験化合物が糖尿病の発症抑制および/または治療を行うための候補化合物であること、を含む。
(a)1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第1集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のアポリポタンパク質CIII(ApoCIII)と接触させること;
(b)前記1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第2集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の第2集団をスカベンジャー受容体クラスBタイプI(SRBI)の発現または活性を阻害する分子とさらに接触させること;および
(c)ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率のの増大をインスリン分泌細胞の第2集団でよりもインスリン分泌細胞の第1集団において強く阻害する陽性試験化合物を、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として同定すること、を含む。
(a)1つまたは複数の試験化合物の存在下において、インスリン分泌細胞の第1集団を、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること;ならびに
(b)対照と比較してインスリン分泌細胞の第1集団においてApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大を阻害しかつSRBIの発現または活性も阻害するそれらの陽性試験化合物を同定することであって、陽性試験化合物が糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物であること、を含む。
概要
アポリポタンパク質CIII(ApoCIII)はトリグリセリド加水分解の阻害剤としての役割を果たすのみならず、炎症過程および膵臓β細胞の電位依存性Ca2+(Cav)チャネルの過剰活性化のような糖尿病に関連する病理学的事象にも関与する。しかしながら、ApoCIIIがβ細胞Cavチャネルを過剰活性化する分子メカニズムについては何も知られていない。本発明者らは今回、ApoCIIIがCav1チャネルの開確率および密度を増大させたことを実証する。ApoCIIIは全細胞Ca2+電流を増大させ、Cav1チャネル遮断薬であるニモジピンはこの増大を完全に無効にした。ApoCIIIのこの作用は、PKA、PKCまたはSrcの個々の阻害によっては影響を受けなかった。しかしながら、PKA、PKCおよびSrcの複合的阻害によりApoCIIIの該作用は中和され、またPKAおよびSrcの共阻害によって同様の結果が得られた。さらに、β1インテグリンまたはスカベンジャー受容体クラスBタイプI(SRBI)のノックダウンはApoCIIIがβ細胞Cavチャネルを過剰活性化するのを防止した。これらのデータは、ApoCIIIがPKAおよびSrcのSRBI/β1インテグリン依存性の共活性化によりβ細胞Cav1チャネルを過剰活性化することを示している。
アポリポタンパク質CIIIは、β細胞におけるCav1チャネルの密度および導電率を増大させる。本発明者らのかつての研究から、ApoCIIIとのインキュベーションはマウス膵島β細胞における全細胞Ca2+電流を著しく増大させることが明らかとなっている5。いかなる種類のβ細胞Cavチャネルが影響を受け、密度または導電率のいずれが影響を受けるのかを明確にするために、本発明者らは、ApoCIIIとのインキュベーション後のマウス膵島β細胞(図1a)およびRINm5F細胞(図1c)において、持続的開口を伴う大きな単位Ba2+コンダクタンスを特徴とする、単位Cav1チャネル電流を分析した。マウス膵島β細胞での実験では、本発明者らは、ApoCIIIで処理した細胞の原形質膜パッチにおいて、対照細胞の原形質膜パッチよりも、より多層の単位Ba2+電流によって反映されるより多くのCav1チャネルを観察した(図1a)。ApoCIIIで処理した細胞(n=32)の単位Cav1チャネルの平均数、開確率および平均開時間は、対照ビヒクルに曝露した細胞(n=33)よりも有意に大きかった(図1b)。ApoCIIIとインキュベートした細胞のパッチにおいて記録された単位Cav1チャネルの平均閉時間は、対照のパッチにおける平均閉時間よりも有意に短かった(図1b)。同様に、ApoCIIIの類似の作用はインスリン分泌性のRINm5F細胞のCav1チャネルについても生じた。ApoCIIIとインキュベートした細胞の原形質膜パッチは、ビヒクルで処理した細胞の原形質膜パッチと比較してより多くのCav1チャネルを提供した(図1c)。前者のCav1チャネルは、後者のCav1チャネルよりも高頻繁で開口した(図1c)。ApoCIIIとのインキュベーション群(n=35)は、ビヒクル溶液とのインキュベーション群(n=34)と比較して、有意にCav1チャネルのチャネル数を増大させ、開確率を高め、平均開時間を延長し、かつ平均閉時間を短縮させた(図1d)。このデータは明らかに、ApoCIIIがβ細胞Cav1チャネルの密度および導電率の両方を増大させたことを示している。
Cavチャネルの全体的な導電率は、細胞の原形質膜中の機能的チャネルの密度および活性に依存する。1型糖尿病の血清およびその因子ApoCIIIによる全細胞Ca2+電流の増大は、β細胞原形質膜の機能的Cavチャネルの密度上昇および/または導電率増大に起因する可能性がある4、5。しかしながら、1件4を除く全ての研究1、2、5、24は、これまでのところ全細胞レベルについてしかCavチャネルに対する1型糖尿病の血清の作用を検討していない。Juntti−Berggrenらによる研究では、1型糖尿病の血清によるβ細胞Cavチャネル活性の増大が、単一チャネルおよび全細胞レベルの両方において特徴付けられた4。しかしながら、この研究では、1型糖尿病の血清がβ細胞原形質膜における機能的Cavチャネルの密度を変化させることができるかどうかは解析されなかった4。本発明者らはこれまでに、ApoCIIIが1型糖尿病の血清因子としての役割を果たしてβ細胞Cavチャネルを過剰活性化することを明らかにしているが、全細胞パッチクランプ分析しか実施しなかった5。ApoCIIIで処理した細胞における単一Cavチャネルの生物物理学的特性の詳細な検討を行い、このアポリポタンパク質によるβ細胞Cavチャネルの過剰活性化を機械論的に詳細に分析するべきであることは確かである。興味深いことに、本研究におけるセルアタッチモードの単一チャネル記録から、ApoCIIIとのインキュベーションは個々のβ細胞Cav1チャネルの活性を増大させるだけでなく、β細胞原形質膜の記録エリア内の機能的Cav1チャネルの数も増加させることが明らかである。単一Cav1チャネルの活性の増大は、平均開時間の延長および平均閉時間の短縮に起因する開確率の増大として観察される。機能的Cav1チャネルの数の増加は、より多くのレベルの単一Cav1チャネルのコンダクタンスが出現することによって確認される。
細胞の培養および処理
成体の雄および雌のマウスからランゲルハンス島を単離し、単一β細胞となるように分散させた。約70%コンフルエントのRINm5F細胞をトリプシン処理した。得られた細胞懸濁液をペトリ皿または12ウェルプレートに播種した。細胞は、10%ウシ胎児血清、2mMのL−グルタミンおよび100U/100μg/mlのペニシリン/ストレプトマイシン(Invitrogen、Carlsbad、Ca)が補足されたRPMI1640培地中で培養し、加湿された5%CO2インキュベータで37℃に維持した。これらの細胞を一晩増殖させ、次いでsiRNAトランスフェクションに供した。パッチクランプ分析については、細胞をApoCIII、PKA阻害剤H−89(Calbiochem,La Jolla,CA)、PKC阻害剤カルホスチンC(Calbiochem)、Srcキナーゼ阻害剤PP2(Calbiochem)およびCav1チャネル遮断薬ニモジピン(Calbiochem)でRPMI培地中それぞれ終濃度20μg/ml、0.5μM、0.1μM、0.1μMおよび5μMにて終夜処理した。ApoCIIIは0.1%のトリフルオロ酢酸(TFA)に溶解して1mg/mlの保存溶液を作り、H−89、カルホスチンC、PP2およびニモジピンはジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解してそれぞれ5mM、1mM、1mMおよび10mMの保存溶液を形成した。0.002%TFAおよび/または0.03%DMSOをビヒクル対照として使用した。
様々に処理された後のRINm5F細胞を、50mM HEPES、150mM NaCl、1mM EGTA、1mM EDTA、10%グリセロール、1%トリトンX−100、1mM PMSFおよびプロテアーゼインヒビターカクテル(Roche Diagnostics,Mannheim,Germany)で構成されている溶解バッファー(pH7.5)中に溶解した。溶解産物は細胞残屑と核を除去するために800×gで4℃にて10分間遠心分離処理された。得られた試料のタンパク質濃度は、Bio−Radタンパク質測定試薬(Bio−Rad,Hercules,CA)を用いて決定した。試料をSDSサンプルバッファー中96℃で3分間加熱することにより変性させ、その後ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS−PAGE)およびイムノブロット解析に供した。簡潔に述べると、50、90または180μgのタンパク質を、4%アクリルアミドの濃縮用ゲル(pH6.8)および8%アクリルアミドの分離用ゲル(pH8.8)で構成された不連続ゲル中で分離した。その後、分離されたタンパク質を疎水性のポリビニリデンジフルオリド膜(Hybond−P;GE Healthcare,Uppsala,Sweden)にエレクトロブロットした。ブロットは、50mMトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、150mM NaClおよび0.05%Tween20(pH7.5)を含有する洗浄用バッファー中で5%脱脂粉乳と1時間インキュベーションすることによってブロッキングした。その後、該ブロットを、β1インテグリン(1:500;Millipore,Billerica,MA)、SRBI(1:2500;Novus,Cambridge,UK)、Cav1.2(1:200)およびCav1.3(1:200)それぞれに対するアフィニティ精製されたウサギポリクローナル抗体と4℃で一晩インキュベートし、またグリセルアルデヒド−3−リン酸デヒドロゲナーゼに対するマウスモノクローナル抗体(GAPDH,1:4000;Applied Biosystems/Ambion,Austin,TX)とそれぞれ室温で1時間インキュベートした。洗浄用バッファーですすいだ後、該ブロットを、二次抗体(ワサビペルオキシダーゼ結合型ヤギ抗ウサギIgGまたはワサビペルオキシダーゼ結合型ヤギ抗マウスIgGのいずれか;1:50,000;Bio−Rad,Hercules,CA)と室温で45分間インキュベートした。免疫反応バンドを、ECL plus(商標)ウェスタンブロッティング検出システム(GE Healthcare,Uppsala,Sweden)を用いて視覚化した。
データはすべて平均±SEMとして示されている。統計的有意差は一元配置分散分析とその後の最小有意差(LSD)検定によって決定した。2群の比較時には、対応のないスチューデントt検定またはマン・ホイットニーU検定を使用した。有意水準は0.05または0.01に設定した。
1. Yang, S. N. & Berggren, P. O. β−Cell CaV channel regulation in physiology and pathophysiology. Am. J. Physiol. 288, E16−E28 (2005).
2. Yang, S. N. & Berggren, P. O. The role of voltage−gated calcium channels in pancreatic β−cell physiology and pathophysiology. Endocr. Rev. 27, 621−676 (2006).
3. Catterall, W. A. Structure and regulation of voltage−gated Ca2+ channels. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 16, 521−555 (2000).
4. Juntti−Berggren, L. et al. Increased activity of L−type Ca2+ channels exposed to serum from patients with type I diabetes. Science 261, 86−90 (1993).
5. Juntti−Berggren, L. et al. Apolipoprotein CIII promotes Ca2+−dependent β cell death in type 1 diabetes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101, 10090−10094 (2004).
6. Sol, E. M., Sundsten, T. & Bergsten, P. Role of MAPK in apolipoprotein CIII−induced apoptosis in INS−1E cells. Lipids Health Dis. 8, 3 (2009).
7. Holmberg, R. et al. Lowering apolipoprotein CIII delays onset of type 1 diabetes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 108, 10685−10689 (2011).
8. Gangabadage, C. S. et al. Structure and dynamics of human apolipoprotein CIII. J. Biol. Chem. 283, 17416−17427 (2008).
9. Jong, M. C., Hofker, M. H. & Havekes, L. M. Role of ApoCs in lipoprotein metabolism: functional differences between ApoC1, ApoC2, and ApoC3. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 19, 472−484 (1999).
10. Xu, S. et al. Apolipoproteins of HDL can directly mediate binding to the scavenger receptor SR−BI, an HDL receptor that mediates selective lipid uptake. J. Lipid Res. 38, 1289−1298 (1997).
11. Clavey, V., Lestavel−Delattre, S., Copin, C., Bard, J. M. & Fruchart, J. C. Modulation of lipoprotein B binding to the LDL receptor by exogenous lipids and apolipoproteins CI, CII, CIII, and E. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 15, 963−971 (1995).
12. Huard, K. et al. Apolipoproteins C−II and C−III inhibit selective uptake of low− and high−density lipoprotein cholesteryl esters in HepG2 cells. Int. J. Biochem. Cell Biol. 37, 1308−1318 (2005).
13. Chan, D. C., Watts, G. F., Redgrave, T. G., Mori, T. A. & Barrett, P. H. Apolipoprotein B−100 kinetics in visceral obesity: associations with plasma apolipoprotein C−III concentration. Metabolism 51, 1041−1046 (2002).
14. Sundsten, T., Ostenson, C. G. & Bergsten, P. Serum protein patterns in newly diagnosed type 2 diabetes mellitus−−influence of diabetic environment and family history of diabetes. Diabetes Metab. Res. Rev. 24, 148−154 (2008).
15. Atzmon, G. et al. Lipoprotein genotype and conserved pathway for exceptional longevity in humans. PLoS Biol. 4, e113 (2006).
16. Kawakami, A. et al. Apolipoprotein CIII in apolipoprotein B lipoproteins enhances the adhesion of human monocytic cells to endothelial cells. Circulation 113, 691−700 (2006).
17. Fang, D. Z. & Liu, B. W. Apolipoprotein C−III can specifically bind to hepatic plasma membranes. Mol. Cell. Biochem. 207, 57−64 (2000).
18. Kawakami, A. et al. Apolipoprotein CIII−induced THP−1 cell adhesion to endothelial cells involves pertussis toxin−sensitive G protein− and protein kinase Cα−mediated nuclear factor−kB activation. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 27, 219−225 (2007).
19. Rueckschloss, U. & Isenberg, G. Contraction augments L−type Ca2+ currents in adherent guinea−pig cardiomyocytes. J. Physiol. 560, 403−411 (2004).
20. Waitkus−Edwards, K. R. et al. α4β1 Integrin activation of L−type calcium channels in vascular smooth muscle causes arteriole vasoconstriction. Circ. Res. 90, 473−480 (2002).
21. Wu, X., Davis, G. E., Meininger, G. A., Wilson, E. & Davis, M. J. Regulation of the L−type calcium channel by α5β1 integrin requires signaling between focal adhesion proteins. J. Biol. Chem. 276, 30285−30292 (2001).
22. Gui, P. et al. Integrin receptor activation triggers converging regulation of Cav1.2 calcium channels by c−Src and protein kinase A pathways. J. Biol. Chem. 281, 14015−14025 (2006).
23. Bamberger, M. E., Harris, M. E., McDonald, D. R., Husemann, J. & Landreth, G. E. A cell surface receptor complex for fibrillar beta−amyloid mediates microglial activation. J. Neurosci. 23, 2665−2674 (2003).
24. Ristic, H., Srinivasan, S., Hall, K. E., Sima, A. A. & Wiley, J. W. Serum from diabetic BB/W rats enhances calcium currents in primary sensory neurons. J. Neurophysiol. 80, 1236−1244 (1998).
25. Kavalali, E. T., Hwang, K. S. & Plummer, M. R. cAMP−dependent enhancement of dihydropyridine−sensitive calcium channel availability in hippocampal neurons. J. Neurosci. 17, 5334−5348 (1997).
26. Yang, J. & Tsien, R. W. Enhancement of N− and L−type calcium channel currents by protein kinase C in frog sympathetic neurons. Neuron 10, 127−136 (1993).
27. Mukai, E. et al. Exendin−4 suppresses Src activation and reactive oxygen species production in diabetic Goto−Kakizaki rat islets in an Epac−dependent manner. Diabetes 60, 218−226 (2011).
28. Kantengwa, S. et al. Identification and characterization of α3β1 integrin on primary and transformed rat islet cells. Exp. Cell Res. 237, 394−402 (1997).
29. Bosco, D., Meda, P., Halban, P. A. & Rouiller, D. G. Importance of cell−matrix interactions in rat islet β−cell secretion in vitro: role of α6β1 integrin. Diabetes 49, 233−243 (2000).
30. Nikolova, G. et al. The vascular basement membrane: a niche for insulin gene expression and β cell proliferation. Dev. Cell 10, 397−405 (2006).
31. Luo, B. H., Carman, C. V. & Springer, T. A. Structural basis of integrin regulation and signaling. Annu. Rev. Immunol. 25, 619−647 (2007)
Claims (10)
- 糖尿病の発症抑制および/または治療を行うための候補化合物を同定する方法であって、
a)インスリン分泌細胞の第1集団を、1つまたは複数の試験化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のアポリポタンパク質CIII(ApoCIII)と接触させること;
b)インスリン分泌細胞の第2集団を、前記1つまたは複数の試験化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の前記第2集団をスカベンジャー受容体クラスBタイプI(SRBI)の発現または活性を阻害する分子とさらに接触させることであり、ここで前記SRBIの発現または活性を阻害する分子が、抗SRBI抗体、抗SRBIアプタマー、SRBI siRNA、SRBI shRNA、SRBIアンチセンスオリゴヌクレオチド、SRBI阻害小分子、インターフェロンアルファ、N−[4−(4−tert−ブトキシカルボニルペラジン−1−イル)フェニル]−(2−クロロ−5−ニトロフェニル)カルボキサミド(R−138329)、2−ヘキシル−1−シクロペンタノンチオセミカルバゾン、33M20(BLT1)、ならびにMIT9952−1、9952−2、9952−3、9952−4、9952−5、9952−6、9952−7、9952−8、9952−9、9952−10、9952−11、9952−12、9952−13、9952−14、9952−15、9952−16、9952−17、9952−18、9952−19、9952−20、9952−21、9952−22、9952−23、9952−24、9952−25、9952−26、9952−27、9952−28、9952−29、9952−30、9952−31、9952−32、9952−33、9952−34、9952−35、9952−36、9952−37、9952−38、9952−39、9952−40、9952−41、9952−42、9952−43、9952−44、9952−45、9952−46、9952−47、9952−48、9952−49、9952−50、9952−51、9952−52、9952−53、9952−54、9952−55、9952−56、9952−57、9952−58、9952−59、9952−60、9952−61、9952−62、9952−63、9952−64、9952−65、9952−66、9952−67、9952−68、9952−69、9952−70、9952−71、9952−72、9952−73、9952−74、9952−75、9952−76、9952−77、9952−78、9952−79、9952−80、9952−81、9952−82、9952−83、9952−84、9952−85、9952−86、9952−87、9952−88、9952−89、9952−90、9952−91、9952−92、9952−93、9952−94、9952−95、9952−96、9952−97、9952−98、9952−99、9952−100、9952−101、9952−102、9952−103、9952−104、9952−105、9952−106、9952−107、9952−108、9952−109、9952−110、9952−111、9952−112、9952−113、9952−114、9952−115、9952−116、9952−117、9952−118、9952−119、9952−120、9952−121、9952−122、9952−123、9952−124、9952−125、9952−126、9952−127、9952−128、9952−129、9952−130、9952−131、9952−132、9952−133、9952−134、9952−135、9952−136、9952−137、9952−138、9952−139、9952−140、9952−141、9952−142、9952−143、9952−144、9952−145、9952−146、9952−147、9952−148、9952−149、9952−150、9952−151、9952−152、9952−153、9952−154、9952−155、9952−156、9952−157、9952−158、9952−159、9952−160、9952−161、9952−162、9952−163、9952−164、9952−165、9952−166、9952−167、9952−168、9952−169、9952−170、9952−171、9952−172、9952−173、9952−174、9952−175、9952−176、9952−177、9952−178、9952−179、9952−180、9952−181、9952−182、9952−183、9952−184、9952−185、9952−186、9952−187、9952−188、9952−189、9952−190、9952−191、9952−192、9952−193、9952−194、9952−195、9952−196、9952−197、9952−198、9952−199、9952−200、9952−201、9952−202、9952−203、9952−204、9952−205、9952−206、9952−207、9952−208、9952−209、9952−210、9952−211、9952−212、9952−213、9952−214、9952−215、9952−216、9952−217、9952−218、9952−219、9952−220、9952−221、9952−222、9952−223、9952−224、9952−225、9952−226、9952−227、9952−228、9952−229、9952−230、9952−231、9952−232、9952−233、9952−234、9952−235、9952−236、9952−237、9952−238、9952−239、9952−240、9952−241、9952−242、9952−243、9952−244、9952−245、9952−246、9952−247、9952−248、9952−249、9952−250、9952−251、9952−252、9952−253、9952−254、9952−255、9952−256、9952−257、9952−258、9952−259、9952−260、9952−261、9952−262、9952−263、9952−264、9952−265、9952−266、9952−267、9952−268、9952−269、9952−270、9952−271、9952−272、9952−273、9952−274、9952−275、9952−276、9952−277、9952−278、9952−279、9952−280、9952−281、9952−282、9952−283、9952−284、9952−285、9952−286、9952−287、9952−288、9952−289、9952−290、9952−291、9952−292、9952−293、9952−294、9952−295、9952−296、9952−297、9952−298、9952−299、9952−300、9952−301、9952−302、9952−303、9952−304、9952−305、9952−306、9952−307、9952−308、9952−309、9952−310、9952−311、9952−312、9952−313、9952−314、9952−315、9952−316、9952−317、9952−318、9952−319、9952−320、9952−321、9952−322、9952−323、9952−324、9952−325、9952−326、9952−327、9952−328、9952−329、9952−330、9952−331、9952−332、9952−333、9952−334、9952−335、9952−336、9952−337、9952−338、9952−339、9952−340、9952−341、および9952−342、またはこれらの塩からなる群から選択される1つまたは複数のSRBI阻害剤、からなる群から選択されること;ならびに
c)前記ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大をインスリン分泌細胞の前記第2集団でよりもインスリン分泌細胞の前記第1集団において強く阻害する陽性試験化合物を、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として同定すること、を含む方法。 - インスリン分泌細胞の第3集団を、1つまたは複数の候補化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の前記第3集団をω−アガトキシンIVA、ω−コノトキシンGVIA、SNX482、ミベフラジル、およびNNC55−0396からなる群から選択されるCav2および/またはCaV3チャネル遮断薬とさらに接触させることをさらに含み、前記ApoCIIIが誘導する密度および/または導電率の増大をインスリン分泌細胞の前記第1集団でよりもインスリン分泌細胞の前記第3集団において強く阻害する候補化合物が、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として好ましい、請求項1に記載の方法。
- インスリン分泌細胞の第4集団を、1つまたは複数の候補化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の前記第4集団をPP1アナログ、PP2、アデノシン3’,5’−サイクリックモノホスホロチオエート−R、H−7、H−8、H−9、およびH−89からなる群から選択されるSrcキナーゼ阻害剤および/またはプロテインキナーゼA(PKA)阻害剤とさらに接触させることをさらに含み、前記ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大をインスリン分泌細胞の前記第4集団でよりもインスリン分泌細胞の前記第1集団において強く阻害するそれらの候補化合物が、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として好ましい、請求項1または2に記載の方法。
- 前記方法が、インスリン分泌細胞の第5集団を、1つまたは複数の候補化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率に有効な量のApoCIIIと接触させること、およびインスリン分泌細胞の前記第5集団をβ1インテグリン抗体、β1インテグリンアンチセンスRNA、β1インテグリンsiRNA、およびβ1インテグリンshRNAからなる群から選択されるβ1インテグリンの発現または活性を阻害する分子とさらに接触させることをさらに含み、前記ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大をインスリン分泌細胞の前記第5集団でよりもインスリン分泌細胞の前記第1集団において強く阻害するそれらの候補化合物が、糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物として好ましい、請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- 糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物を同定する方法であって、
a)インスリン分泌細胞の第1集団を、1つまたは複数の試験化合物の存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させること;ならびに
b)対照と比較してインスリン分泌細胞の前記第1集団において前記ApoCIIIが誘導するCav1チャネルの密度および/または導電率の増大を阻害しかつSRBIの発現または活性を阻害するそれらの陽性試験化合物を同定することであり、前記陽性試験化合物が糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物であること、を含む方法。 - 前記対照が、インスリン分泌細胞の第2集団を、試験化合物の非存在下において、Cav1チャネルの密度および/または導電率を増大させるのに有効な量のApoCIIIと接触させることを含む、請求項5に記載の方法。
- 前記インスリン分泌細胞が膵臓β細胞である、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 前記方法が細胞をApoCIIIと少なくとも6時間接触させることを含む、請求項1〜7のいずれかに記載の方法。
- 前記候補化合物が1型糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物である、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
- 前記候補化合物が2型糖尿病の発症抑制および/または治療のための候補化合物である、請求項1〜8のいずれかに記載の方法。
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