JP6255079B2

JP6255079B2 - シトルリンおよびアルギニンを含有する即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤

Info

Publication number: JP6255079B2
Application number: JP2016256686A
Authority: JP
Inventors: 将之落合; 幸治森下; 登志雄林
Original assignee: KYOUWA HAKKO BIO CO.,LTD; Nagoya University NUC; Tokai National Higher Education and Research System NUC
Current assignee: KYOUWA HAKKO BIO CO.,LTD; Nagoya University NUC; Tokai National Higher Education and Research System NUC
Priority date: 2007-10-10
Filing date: 2016-12-28
Publication date: 2017-12-27
Anticipated expiration: 2028-10-10
Also published as: US20140100284A1; EP2210600A4; CN101820871A; CA2967587C; US20170172962A1; JP5872636B2; JP5813919B2; JP2016121161A; EP2210600A1; US10052298B2; CN104248632A; EP3320895A1; US8609735B2; ES2861583T3; JPWO2009048148A1; CA2702045A1; US20150320713A1; EP2210600B1; JP2014193919A; US9060980B2

Description

本発明は、血中のアルギニン濃度を迅速かつ効果的に高めることのできる、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を含有する、即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤に関する。

アルギニンは、一酸化窒素（ＮＯ）合成酵素の直接的な基質となるアミノ酸である。また、肝臓においては尿素回路の中間体でもあり、体内で産生したアンモニアを解毒するのに重要な役割を担っている。その生理作用としては、アルギニンの経口摂取による血管拡張（非特許文献１）、血圧上昇抑制（非特許文献２）、性的機能改善（非特許文献３）などが報告されている。

また、アルギニンには、成長ホルモン分泌作用が知られている（非特許文献４）。成長ホルモンには、タンパク質合成、糖代謝、脂質代謝などを促進する作用があることから、アルギニンの摂取により、筋肉合成、創傷治癒作用が期待される。その他にも、アンモニア解毒（非特許文献５）、免疫賦活（非特許文献６）、インスリン分泌（非特許文献７）、ポリアミン合成作用（非特許文献８）など、動物やヒトで経口摂取されることにより発揮される効果が数多く知られている。

このため、生体内のアルギニンレベルを高めることは、健康維持や病状改善に有用であると考えられる。実際、該効果を期待して、アルギニンを医薬品や機能性食品等の形態で摂取することが行われている。

一方シトルリンは、生体内でタンパク質の合成原料としては使われず、遊離の状態で存在するアミノ酸の一種である。体内ではアルギニン前駆体としてアルギニン生合成や、ＮＯの供給に関わるＮＯサイクルの構成因子として重要な役割を果たしている。

シトルリンを経口摂取すると、大部分が腎臓でアルギニンに変換され、全身に効率よくアルギニンが供給されることが知られている（非特許文献９）。血中のアルギニンレベルを上昇させるには、シトルリンを摂取した方がアルギニンそのものを摂取するよりも有効であることが報告されている（非特許文献１０）。また、シトルリンとアルギニンを組合せて摂取した場合、それぞれを単独摂取するよりもＮＯ産生が増強され、抗動脈硬化作用が強化されることが報告されている（非特許文献１１）。しかしながら、これらはいずれも長期間の摂取による効果である。

一方、血中アルギニンレベルを高めることにより予防または改善が期待できる効果のうち、冷え症やむくみ、肩凝り、***不全など血流低下による一過性の症状や、運動後のアンモニア蓄積による筋肉疲労などにおいては、摂取後短時間で効果が現れることが望ましいと考えられる。ところが、摂取後血中のアルギニン濃度を迅速かつ効果的に高める経口剤は知られていない。

「ジャーナルオブジアメリカンカレッジオブカルディオロジー（Journal of the American College of Cardiology）」、２０００年、第３５巻、ｐ．７０６−７１３「ラボラトリーインベスティゲーション（Laboratory Investigation）」、１９９３年、第６８巻、ｐ．１７４−１８４「ビージェイユーインターナショナル（BJU International）」、１９９９年、第８３巻、ｐ．２６９−２７３「ジャーナルオブラボラトリーアンドクリニカルメディシン（Journal of Laboratory & Clinical Medicine）」、２０００年、第１３５巻、ｐ．２３１−２３７「ニューイングランドジャーナルオブメディシン（New England Journal of Medicine）」、１９５７年、第２５６巻、ｐ．９４１−９４３「サージェリー（Surgery）」、１９９０年、第１０８巻、ｐ．３３１−３３６、３３６−３３７「ジャーナルオブクリニカルインベスティゲーション（Journal of Clinical Investigation）」、１９６６年、第４５巻、ｐ．１４８７−１５０２「ニュートリション（Nutrition）」、１９９９年、第１５巻、ｐ．５６３−５６９「アミノアシッズ（Amino Acids）」、２００５年、第２９巻、ｐ.１７７−２０５「ガット（Gut）」、２００４年、第５３巻、ｐ.１７８１−１７８６「ピーエヌエーエス（PNAS）」２００５年、第１０２巻、ｐ.１３６８１−１３６８６

本発明の目的は、摂取後血中のアルギニン濃度を迅速かつ効果的に高めるための経口剤および方法の提供であり、速やかにアルギニンの摂取効果が得られる経口剤および方法を提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として経口剤に含有させることにより、経口摂取後速やかに血中のアルギニン濃度の上昇が得られることを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、下記の［１］〜［１８］に関する。
［１］シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含有する、即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤。
［２］シトルリンまたはその塩を有効成分として含有する経口剤と、アルギニンまたはその塩を有効成分として含有する経口剤を含む、キットまたはセット形態の即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤。
［３］血流促進用である、上記［１］または［２］に記載の経口剤。
［４］血流低下から生じる症状の予防または改善用である、上記［１］または［２］に記載の経口剤。
［５］血流低下から生じる症状が、肩凝り、冷え症、むくみおよび***不全より選ばれる少なくとも一つの症状である、上記［４］に記載の経口剤。
［６］血中アンモニア濃度の上昇抑制用である、上記［１］または［２］に記載の経口剤。
［７］血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状の予防または改善用である、上記［１］または［２］に記載の経口剤。
［８］血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状が、運動後の筋肉疲労または疲労感であ
る、上記［７］に記載の経口剤。
［９］即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤を製造するための、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の使用。
［１０］即効性血流促進用経口剤を製造するための、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の使用。
［１１］血流低下から生じる症状の即効的な予防または改善用経口剤を製造するための、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の使用。
［１２］即効性血中アンモニア濃度上昇抑制用経口剤を製造するための、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の使用。
［１３］血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状の即効的な予防または改善用経口剤を製造するための、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の使用。
［１４］即効的に血中アルギニン濃度を上昇させるための方法であって、即効的にアルギニンの血中濃度を上昇させる必要のある被験体に、該被験体の血中アルギニン濃度を即効的に上昇させるのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む、方法。
［１５］即効的に血流を促進させるための方法であって、即効的に血流を促進させる必要のある被験体に、該被験体の血流を促進させるのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む、方法。
［１６］血流低下から生じる症状を即効的に予防または改善するための方法であって、即効的に該症状の予防または改善の必要な被験体に、該被験体の該症状を予防または改善するのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む、方法。
［１７］即効的に血中アンモニア濃度の上昇を抑制するための方法であって、即効的に血中アンモニア濃度の上昇を抑制する必要のある被験体に、該被験体の血中アンモニア濃度上昇を抑制するのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む、方法。
［１８］血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状を即効的に予防または改善するための方法であって、即効的に該症状の予防または改善の必要な被験体に、該被験体の該症状を予防または改善するのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む、方法。

本発明によりアルギニンの血中濃度を迅速かつ効果的に増大させることができるので、血流低下や血中アンモニア濃度の上昇から生じる諸症状を短時間で改善することができる。また、本発明の経口剤は安全性が高いものであるため、該症状の発生が予想される前だけでなく、日常的に摂取することにより該症状の発生を効果的に予防することができる。

図１は、経口投与後の血漿中のアルギニン濃度（単位：ｎｍｏｌ／ｍＬ）の経時変化を示す図である。図２は、経口投与後の血漿中のアルギニン濃度（単位：ｎｍｏｌ／ｍＬ）の経時変化を示す図である。図３は、経口投与後の血漿中のＮＯ代謝産物（ＮＯ_ｘ）濃度（単位：ｎｍｏｌ／ｍＬ）の経時変化を示す図である。図４は、経口投与後の血漿中のｃＧＭＰ濃度（単位：ｎｍｏｌ／ｍＬ）の経時変化を示す図である。図５は、経口投与後３５〜４０分の耳動脈血流量の増加を示す図である。

本発明は、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含
有する、即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤（本発明の経口剤ということもある）に関する。本発明において、「即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤」とは、ヒトまたはヒト以外の動物への経口摂取または経口投与により、血中アルギニン濃度を速やかに増大させるための経口剤をいう。

つまり本発明の経口剤は、体内の血中アルギニン濃度を速やかに増大させることができる。本発明において「血中アルギニン濃度を増大させる」とは、アルギニンの血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ；area under the blood concentration-time curve）を、アルギ
ニンもしくはその塩またはシトルリンもしくはその塩をそれぞれ単独で投与した場合と比較して増大させることを意味する。ここで「血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ；area under the blood concentration-time curve）」とは、薬物等の血中濃度の時間経過を表し
たグラフで描かれる曲線（薬物血中濃度−時間曲線）と、横軸（時間軸）によって囲まれた部分の面積のことであり、体内薬物量等の有用な指標である。

本発明で用いるシトルリンおよびアルギニンとしては、Ｌ−体、Ｄ−体およびＤＬ−体のいずれであってもよいが、Ｌ−体が好ましい。

また、本発明で用いるシトルリンおよびアルギニン並びにこれらの塩は、これらを多く含有する動植物から単離精製する方法、化学的に合成する方法、発酵生産する方法等により取得することができる。さらにまた、例えばシグマ−アルドリッチ社等より市販品を購入することもできる。

本発明において用い得るシトルリンおよびアルギニンの塩としては、酸付加塩、金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、アミノ酸付加塩等が挙げられる。

上記酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩等の無機酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩、乳酸塩、α−ケトグルタル酸塩、グルコン酸塩、カプリル酸塩等の有機酸塩が挙げられる。

上記金属塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等が挙げられる。

上記アンモニウム塩としては、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム等の塩が挙げられる。

上記有機アミン付加塩としては、モルホリン、ピペリジン等の塩が挙げられる。

上記アミノ酸付加塩としては、グリシン、フェニルアラニン、リジン、アスパラギン酸、グルタミン酸等の塩が挙げられる。

なお、本発明においては、シトルリンの塩としては、リンゴ酸塩が好ましい。また、アルギニンの塩としては、塩酸塩およびアスパラギン酸塩が好ましい。

本発明の経口剤としては、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩をそのまま摂取または投与することも可能であるが、通常各種の製剤として提供するのが望ましい。

本発明に係る上記製剤は、有効成分としてシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を含有するが、更に任意の有効成分を含有していてもよい。また、それら製剤は、有効成分を薬理学的に許容される一種またはそれ以上の担体と一緒に混合し、製剤学
の技術分野においてよく知られている任意の方法により製造される。

本発明の経口剤の剤形としては、例えば錠剤、散剤、顆粒剤、乳剤、シロップ剤、カプセル剤等が挙げられるが、錠剤または顆粒剤が好ましい。また、本発明の経口剤を製剤化する際には、例えば賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、分散剤、懸濁剤、乳化剤、希釈剤、緩衝剤、抗酸化剤、細菌抑制剤、矯味剤、着香剤、着色剤等の添加剤を用いることができる。

例えば、経口剤の剤形が錠剤、散剤、顆粒剤等の場合には、乳糖、白糖、ブドウ糖、蔗糖、マンニトール、ソルビトール等の糖類、バレイショ、コムギ、トウモロコシ等の澱粉、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、塩化ナトリウム等の無機物、カンゾウ末、ゲンチアナ末等の植物末等の賦形剤、澱粉、寒天、ゼラチン末、結晶セルロース、カルメロースナトリウム、カルメロースカルシウム、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク、水素添加植物油、マクロゴール、シリコン油等の滑沢剤、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、カルメロース、ゼラチン、澱粉のり液等の結合剤、脂肪酸エステル等の界面活性剤、グリセリン等の可塑剤などを添加して製剤化することができる。

経口剤の剤形がシロップ剤等の液体調製物である場合は、水、蔗糖、ソルビトール、果糖等の糖類、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール等のグリコール類、ごま油、オリーブ油、大豆油等の油類、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル類等の防腐剤、ストロベリーフレーバー、ペパーミント等のフレーバー類などを添加して製剤化することができる。

また、本発明の経口剤においては、シトルリンまたはその塩とアルギニンまたはその塩とを、同一の経口剤に含有させて調製してもよいが、それぞれ別々に製剤化し、それらを組み合わせて、キットまたはセット形態の即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤（以下、単にキット等ともいう）として用いてもよい。

上記のキット等に含まれる各経口剤は、それぞれ別個に存在する形態であれば、いずれの状態で存在してもよい。例えば、それぞれの経口剤が異なる剤形であってもよく、また別個に包装されていてもよいし、同一の容器内に包含されていてもよい。

本発明の経口剤は、そのまま、または一般に飲食品に用いられる添加剤を加えて、例えば粉末食品、シート状食品、瓶詰め食品、缶詰食品、レトルト食品、カプセル食品、タブレット状食品、流動食品、ドリンク剤等の形態として、健康食品、機能性食品、栄養補助食品、特定保健用食品等の飲食品として用いてもよい。上記添加剤としては、例えば甘味料、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤、発色剤、漂白剤、防かび剤、ガムベース、苦味料、酵素、光沢剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料、香辛料抽出物等が挙げられる。また、飲食品が健康食品、機能性食品、栄養補助食品、特定保健用食品等である場合には、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩が１食あたりの摂取単位量の形態で包装された形態や、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩が懸濁あるいは溶解した飲料が１食あたりの飲み切りの形態で瓶等に充填された形態などが挙げられる。

本発明の経口剤におけるシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の含有量は、製剤の種類、当該製剤の投与または摂取により期待する効果等に応じて適宜決定されるが、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して通常は０．１〜１００重量％、好ましくは０．５〜
８０重量％、特に好ましくは１〜７０重量％である。また、本発明の経口剤におけるシトルリンまたはその塩とアルギニンまたはその塩の組成比は、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算した重量比で１：２０〜２０：１、好ましくは１：５〜５：１、特に好ましくは１：２〜２：１である。

本発明の経口剤を摂取または投与する場合の投与量および投与回数は、投与形態、被投与者の年齢、体重等により異なるが、通常、成人１日当り、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して通常は５０ｍｇ〜３０ｇ、好ましくは１００ｍｇ〜１０ｇ、特に好ましくは２００ｍｇ〜３ｇとなるように、１日１回ないし数回投与する。また投与期間は、特に限定されないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ヶ月間である。

なお、本発明の経口剤は、ヒトだけでなく、ヒト以外の動物（以下、非ヒト動物と略す）に対しても使用することができる。非ヒト動物としては、ほ乳類、鳥類、は虫類、両生類、魚類等、好ましくはほ乳類に属する非ヒト動物を挙げることができる。

非ヒト動物に投与する場合の投与量は、動物の年齢、種類、症状の性質もしくは重篤度等により異なるが、通常、体重１ｋｇ１日当たり、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して通常は１〜６００ｍｇ、好ましくは２〜２００ｍｇ、より好ましくは４〜６０ｍｇとなるように１日１回ないし数回投与する。また投与期間は、特に限定されないが、通常は１日間〜１年間、好ましくは１週間〜３ヶ月間である。

本発明の経口剤は、血流を促進するために使用することがきる。また、本発明の経口剤は、血流低下から生じる症状の予防または改善に使用することができる。血流低下から生じる症状としては、例えば肩凝り、冷え症、むくみ、***不全等が挙げられる。

また、本発明の経口剤は、血中アンモニア濃度の上昇を抑制するために使用することができる。また、本発明の経口剤は、血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状の予防または改善に使用することができる。血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状としては、例えば運動後の筋肉疲労や疲労感等が挙げられる。本発明の経口剤は即効性を有することから、運動前に摂取したり、運動後に摂取することにより、筋肉疲労や疲労感等を効果的に予防したり、回復を早めることができる。

さらに本発明においては、即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤を製造するために、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を使用する。即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤は、血流促進用経口剤もしくは血流低下から生じる症状の予防または改善用経口剤として、あるいは血中アンモニア濃度の上昇抑制用経口剤もしくは血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状の予防または改善用経口剤として、製造され得る。

さらにまた本発明は、即効的にアルギニンの血中濃度を上昇させるための方法を包含する。本発明の方法は、即効的にアルギニンの血中濃度を上昇させる必要のある被験体に、該被験体の血中アルギニン濃度を即効的に上昇させるのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む。該方法は、即効的に血流を促進させるための方法、または血流低下から生じる症状を即効的に予防または改善するための方法として、血流促進あるいは該症状の予防または改善の必要な被験体に、該被験体の血流を即効的に促進し、あるいは該症状を即効的に予防または改善するのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む。さらに該方法は、即効的に血中アンモニア濃度の上昇を抑制するための方法、あるいは血中アンモニア濃度の上昇から生じる症状を即効的に予防または改善するための方法であって、血中ア
ンモニア濃度の上昇抑制、あるいは該症状の予防または改善の必要な被験体に、該被験体の血中アンモニア濃度の上昇を即効的に抑制し、あるいは該症状を即効的に予防または改善するのに十分な量のシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を投与する工程を含む。

なお、上記の即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤の製造等、および即効的にアルギニンの血中濃度を上昇させるための方法等において用いられるシトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の具体的態様や、用いる量などについては、上記したものと同様である。また上記において、「被験体」にはヒトおよび非ヒト動物が含まれる。

以下に本発明について、実施例により詳細に説明する。

まず、Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤の効果を調べた試験例を示す。

［試験例１］
１５匹の９週齢雄性ＳＤラット（日本エスエルシー株式会社）の頸静脈にカテーテルを留置し、３日間予備飼育した後、３群に分けた。非絶食下にて、一匹あたりＬ−シトルリンまたはＬ−アルギニンが２．８５ｍｍｏｌ／ｋｇとなるように（それぞれ４９９．３ｍｇ／ｋｇおよび４９６．５ｍｇ／ｋｇ）、それぞれ第１群、第２群のラットにゾンデにて経口投与した。さらに、一匹あたりＬ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを１．４３ｍｍｏｌ／ｋｇずつとなるように（それぞれ２５０．５ｍｇ／ｋｇおよび２４９．１ｍｇ／ｋｇ）、第３群のラットにゾンデにて経口投与した。

投与前、投与後３０分、１、２および４時間に頸静脈より血液を採取した。血液は、あらかじめ１％ヘパリンを分注した１．５ｍＬチューブに採取し、遠心分離（１２０００ｒｐｍ，１０分間, ４℃）を行うことにより血漿を得た。その後、血漿と同量の３％スルホサリチル酸を加えて混和し氷上に１時間静置し、遠心分離（１２０００ｒｐｍ，１０分間，４℃）を行うことにより、除タンパクした血漿を分析用サンプルとした。分析用サンプル中のＬ−アルギニンの定量は、全自動アミノ酸分析機（ＪＯＥＬＪＬＣ−５００／Ｖ）を用いて実施した。

血漿中のＬ−アルギニン（Ａｒｇ）の定量結果を図１に示す。
図１にて、投与後３０分および１時間において、第１群（Ｌ−シトルリン投与群）および第２群（Ｌ−アルギニン投与群）と比較して、第３群（Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニン投与群）では有意な最高血中濃度（Ｃ_ｍａｘ）の上昇および最高血中濃度到達時間（Ｔ_ｍａｘ）の短縮が認められた。

さらに、薬物などの生物学的利用能を比較するのに有用な指標である血中濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ；area under the blood concentration-time curve、血中濃度と時間で
囲まれた面積）を計算した。結果を表１に示す。

表１より明らかなように、投与後３０分以内および１時間以内において、第１群（Ｌ−シトルリン投与群）および第２群（Ｌ−アルギニン投与群）と比較して、第３群（Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニン投与群）では有意な血中濃度時間曲線下面積の上昇を示していた。

［試験例２］
１４週齢雄性ニュージーランドウサギ（北山ラベス株式会社）を購入し、２８日間予備飼育した後、３群（ｎ＝３または４）に分けた。１６時間絶食させた後、一羽あたりＬ−シトルリンまたはＬ−アルギニンが２．８５ｍｍｏｌ／ｋｇとなるように（それぞれ４９９．３ｍｇ／ｋｇおよび４９６．５ｍｇ／ｋｇ）、それぞれ第１群、第２群のウサギにゾンデにて経口投与した。さらに、一羽あたりＬ−シトルリンおよびＬ−アルギニン１．４３ｍｍｏｌ／ｋｇずつとなるように（それぞれ２５０．５ｍｇ／ｋｇおよび２４９．１ｍｇ／ｋｇ）、第３群のウサギにゾンデにて経口投与した。

投与前、投与後３０分、１、２および４時間に耳静脈より血液を採取し、血漿中のＬ−アルギニン、ＮＯ代謝産物およびｃＧＭＰの定量に供した。血液は、あらかじめ１％ヘパリンを分注した１．５ｍＬチューブ（Ｌ−アルギニン定量用）、またはエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（ＥＤＴＡ−２Ｎａ）添加チューブ（ＮＯ代謝産物およびｃＧＭＰ定量用）に採取し、遠心分離（１２０００ｒｐｍ，１０分間, ４℃）を行うことにより血
漿を得た。ヘパリン血漿においては、その後、同量の３％スルホサリチル酸を加えて混和し氷上に１時間静置し、遠心分離（１２０００ｒｐｍ，１０分間, ４℃）を行うことにより、除タンパクした血漿を分析用サンプルとした。

分析用サンプル中のＬ−アルギニンの定量は全自動アミノ酸分析機（ＪＯＥＬＪＬＣ−５００／Ｖ）を、ＮＯ代謝産物（ＮＯ_ｘ：ＮＯ_２＋ＮＯ_３）の定量は窒素酸化物測定装置（ＥｉｃｏｍＥＮＯ１０）を、ｃＧＭＰの定量は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａＲＰＮ２２６）を用いて実施した。

また、投与後３５分から４０分において、耳動脈周囲の血流量をレーザードップラー血流測定装置（ＬａｓｅｒＤｏｐｐｌｅｒＰｅｒｆｕｓｉｏｎＩｍａｇｅｒＰＩＭＩＩ）を用いて測定した。耳動脈基部から３cmの部位と先端の２カ所でそれぞれ血流量を測定し、平均した。投与前の血流量を１とした場合の、各群の相対値を求め、投与前と比較した時の増加量（Δ血流量）で表した。

血漿中のＬ−アルギニン（Ａｒｇ）、ＮＯ代謝産物（ＮＯ_ｘ）およびｃＧＭＰの定量結果を図２〜図４に、血流量の測定結果を図５に示す。

図２〜図４より明らかなように、血漿中のＬ−アルギニン、ＮＯ代謝産物およびｃＧＭＰのいずれにおいても、投与後３０分および１時間において、第１群（Ｌ−シトルリン投与群）および第２群（Ｌ−アルギニン投与群）と比較して、第３群（Ｌ−シトルリンおよ
びＬ−アルギニン投与群）では最高血中濃度（Ｃ_ｍａｘ）の上昇が認められた。また、血漿中のＬ−アルギニンおよびｃＧＭＰにおいては、最高血中濃度到達時間（Ｔ_ｍａｘ）の短縮も認められた。

なお、図２において、０．５時間後の第３群の血漿中のＬ−アルギニン濃度について、第１群との間でＰ＜０．０５で有意差が見られた。図３においては、１時間後の第３群の血漿中のＮＯ代謝産物の濃度について、第１群および第２群との間で、Ｐ＜０．０５でそれぞれ有意差が見られた。また図４では、２時間後の第３群の血漿中のｃＧＭＰ濃度について、第２群との間でＰ＜０．０５で有意差が見られた。

また、図５より明らかなように、耳動脈の血流量においても、第１群（Ｌ−シトルリン投与群）および第２群（Ｌ−アルギニン投与群）と比較して、第３群（Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニン投与群）では増加していることが認められた。ただし、ｎ数が少ない（ｎ＝２）ため、統計学的な有意差は認められなかった。

さらに、血漿中のＬ−アルギニン、ＮＯ代謝産物およびｃＧＭＰの血中濃度時間曲線下面積を計算し、結果を表２〜表４に示した。

表２〜表４より明らかなように、血漿中のＬ−アルギニン、ＮＯ代謝産物およびｃＧＭＰのいずれにおいても、投与後３０分以内および１時間以内において、第１群および第２
群と比較して、第３群では血中濃度時間曲線下面積の上昇を示していた。

以下に、本発明の実施例を示す。

［実施例１：Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する錠剤の製造］
Ｌ−シトルリン６８．１ｋｇ、Ｌ−アルギニン６８．１ｋｇ、微結晶セルロース３６．０ｋｇ、ショ糖脂肪酸エステル６．６ｋｇ、リン酸カルシウム１．２ｋｇおよびβ-シク
ロデキストリン２０．０ｋｇを、コニカルブレンダーで混合する。得られる混合物をロータリー圧縮成形機で圧縮成形して錠剤を製造する。

［実施例２：Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する腸溶錠剤の製造］
実施例１で製造する錠剤の表面をシェラック溶液でコーティングして、腸溶錠剤を製造する。

［実施例３：Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する腸溶カプセルの製造］
Ｌ−シトルリン６８．１ｋｇ、Ｌ−アルギニン６８．１ｋｇ、微結晶セルロース３６．０ｋｇ、ショ糖脂肪酸エステル６．６ｋｇ、リン酸カルシウム１．２ｋｇおよびβ-シク
ロデキストリン２０．０ｋｇを、コニカルブレンダーで混合する。得られる混合物２０ｋｇと０．２ｋｇの二酸化ケイ素とを混合攪拌して得られた混合物をカプセル充填機に投入し、ハードカプセルに充填してハードカプセルを得る。得られるハードカプセルの表面をツェイン溶液でコーティングして腸溶カプセルを製造する。

［実施例４：Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する飲料の製造］
Ｌ−シトルリン０．６４ｋｇ、Ｌ−アルギニン０．６４ｋｇ、エリスリトール３ｋｇ、クエン酸０．０５ｋｇ、人工甘味料３ｇ、香料０．０６ｋｇを液温７０℃で水５０Ｌに攪拌溶解し、クエン酸でｐＨを３．３に調整後、プレート殺菌を用いて滅菌して瓶に充填する。次いで、パストライザー殺菌し、飲料を製造する。

［実施例５：Ｌ−シトルリンおよびＬ−アルギニンを含有する飲料の製造］
Ｌ−シトルリン１．００ｋｇ、Ｌ−アルギニン０．２８ｋｇ、エリスリトール３ｋｇ、クエン酸０．０５ｋｇ、人工甘味料３ｇ、香料０．０６ｋｇを液温７０℃で水５０Ｌに攪拌溶解し、クエン酸でｐＨを３．３に調整した後、プレート殺菌を用いて滅菌して瓶に充填する。次いで、パストライザー殺菌し、飲料を製造する。

本発明によれば、アルギニンの血中濃度を迅速かつ効果的に増大させ得る、即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤を提供することができる。本発明の経口剤を摂取することにより、血流低下や血中アンモニア濃度の上昇から生じる諸症状を短時間で改善することができ、またそれらを効果的に予防することができる。

以上、本発明の具体的な態様のいくつかを詳細に説明したが、当業者であれば示された特定の態様には、本発明の教示と利点から実質的に逸脱しない範囲で様々な修正と変更をなすことは可能である。従って、そのような修正および変更も、すべて後記の請求の範囲で請求される本発明の精神と範囲内に含まれるものである。

本出願は日本で出願された特願２００７−２６４０９０を基礎としており、その内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims

シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含有する、成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して５０ｍｇ〜３０ｇであり、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の組成比が、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算した重量比で１：２〜２：１となるように調整された、摂取後１時間に血中アルギニン濃度を上昇させる即効性血中アルギニン濃度上昇型経口剤。
成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して１００ｍｇ〜１０ｇである、請求項１記載の経口剤。
シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含有する、成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して５０ｍｇ〜３０ｇであり、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の組成比が、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算した重量比で１：２〜２：１となるように調整された、摂取後１時間以内に血中一酸化窒素代謝物の濃度を上昇させる即効性血中一酸化窒素代謝物上昇型経口剤。
成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して１００ｍｇ〜１０ｇである、請求項３記載の経口剤。
シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含有する、成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して５０ｍｇ〜３０ｇであり、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の組成比が、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算した重量比で１：２〜２：１となるように調整された、摂取後１時間以内に血流低下から生じる症状を改善させる、血流低下に起因する症状の即効性改善用経口剤。
成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して１００ｍｇ〜１０ｇである、請求項５記載の経口剤。
シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩を有効成分として含有する、成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して５０ｍｇ〜３０ｇであり、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の組成比が、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算した重量比で１：２〜２：１となるように調整された、摂取後４０分以内に血流低下から生じる症状を改善させる、血流低下に起因する症状の即効性改善用経口剤。
成人の１回あたりの摂取量が、シトルリンまたはその塩およびアルギニンまたはその塩の総量として、遊離のシトルリンおよびアルギニンに換算して１００ｍｇ〜１０ｇである、請求項７記載の経口剤。
血流低下から生じる症状が、肩凝り、冷え性、むくみおよび***不全より選ばれる少なくとも一つの症状である、請求項５〜８のいずれか１項に記載の経口剤。
経口剤が、錠剤、散剤、顆粒剤およびカプセル剤からなる群より選ばれる剤形である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の経口剤。