JP6232067B2 - タンパク質分離用多次元の液体クロマトグラフィーの分離システム及分離方法 - Google Patents
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Description
(1)クロマトグラフ最大流速(5ml/分だけ)及び蓄積装置における各蓄積管の最大体積(5mlだけ)に制限されて、分析のレベルしかで行うことができなく、調製のレベルに拡大することができなく、更に生産のレベルに拡大することができない。
(2)当該装置はクロマトグラフィのカラムの1本だけでタンパク質の分離を行い、複数のクロマトグラフィのカラムしか行うことができないmD-LC法純化の高純度(例えば、注射用インスリンの場合、タンパク質の純度が99%にあること)の目的に達成することができない。
(3)理論上の有力的なサポートがないので、経験により手動操作を行い、プログラムを作成してソフトウェアで制御することができなく、ポリペプチドを応用範囲に含めていない。
(4)利用するのクロマトグラフィのカラムは専門調製の「2D-LC」であり、関係の製品がないので、他人の実施が困難である。
(5)更に重要なこととして、当該方法の実施をサポートするすべてのものは機器の部品の既存のクロマトグラフ上での順序のない組み合わせだけであり、新しい機器の製造に関する全体上の考え方の枠組みがないだけでなく、実施に供するソリューションやパラメータもない。平板形2Dクロマトグラフィのカラムによる2D-LCの実施と比べてみると、円筒形2Dクロマトグラフィのカラム(以下「カラム2D」と略す)を使うと更に多くの長所がある。
(2)独立して前記の移動相リザーバーから液体クロマトグラフィーの分離に適用する移動相を取り出し、当該移動相を前記の多次元の液体クロマトグラフィーの分離システムの指定のチャンネルに輸送し、独立して流量を調節、計量できる輸液装置No.1及び輸液装置No.2
(3)サンプル供給装置No.1及びサンプル供給装置No.2。前記のサンプル供給装置No.2はサンプル供給混合機も含む。その中、サンプル供給装置No.1は六方サンプル供給弁によりオリジナルサンプルの供給することができ、サンプル供給装置No.2は2次元及び多次元のクロマトグラフィの純化のプロセスに用いられる。
(4)クロマトグラフィのカラム切替えユニット及びクロマトグラフィのカラムのn本、又はm種の以上の分離機能のあるクロマトグラフィのカラムのq本を含む分離装置。その中、前記のクロマトグラフィのカラム切替えユニット前記の分離装置に入った液体を選択的に前記のクロマトグラフィのカラムのn本におけるクロマトグラフィのカラムの1本に流入させる。nは非負整数、mは前記の多次元液相クロマトグラフィ分離システムに用いられることなる分離モードの数量のことであり、n及びmが下式を満たすこと。
m≧n
混合モードクロマトグラフィのカラムのq本を利用し、m個の(m≧2)分離モードにより効果的な分離を行う場合
n=m-qi その中、
i:正整数
q:分離モードのm種のあるクロマトグラフィのカラムの個数
その中、前記のサンプル供給装置No.1としての六方サンプル供給弁のドレン孔は前記の多次元の液体クロマトグラム分離システムの第一の排出装置にしてもいい。それと同時に、ドレン装置No.2留分の収集にも液体の排出にも用いられることができる。
[式3]
P≧max(xj)
その中、
xj:j次元目の分離の際に当たり収集、貯蔵して更なる分離を行うための中間留分の数
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記のサンプル供給装置No.1、前記の分離装置、前記の検出装置及び前記のドレン装置No.1を連通する。
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の分離装置、前記の検出装置、前記の蓄積装置及び前記のドレン装置No.2を連通する。
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の蓄積装置、前記のサンプル供給装置No.2、前記の分離装置、前記の検出装置、前記の蓄積装置及び前記のドレン装置No.2又はNo.3を連通し、それに、相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.2及び前記のサンプル供給装置No.2を連通する。
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の蓄積装置、前記のサンプル供給装置No.2、前記の分離装置、前記の検出装置及び前記のドレン装置No.1を連通し、それに、相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.2及び前記のサンプル供給装置No.2を連通する。
[式4]
n>q
[式5]
n=m=q=1
tR=a+bti+cti 2
その中、a、b、cはフィッティングされる常数であり、タンパク質自身の特性に関する。フィッティング後に式(4)となる。
tR = 0.1348 ti2 - 1.7985 ti + 32.652, R2 = 0.9993。 (4)
ここで、Rは、非線形相関係数を表す。
CCMP=tCMP×tg
その中、tgはリニア・グラジエント勾配、即ち単位時間に溶離剤の濃度の変化率の事であり、下式により算出する。
tg=V%/tT
その中、V %はリニア・グラジエント溶離で体積分数で表される溶離剤の濃度の変化量、tTはV%の対応する当該リニア・グラジエント溶離の時間である。実のところ、2次元の分離のサンプル供給期間はtTより3〜5分に早い。これは当該具体的実例における炭酸脱水酵素にとって適当であるからである。
0〜15分:100%Α-80%A(20%B)、2.0ml/min
15〜20分:80%A(20%B)-50%A(50%B)
20〜25分:50%A(50%B)
25〜28分:100%C、4.0ml/min
28〜33分:100%C、1.0ml/min+混合ポンプ:100%C,3.0ml/min
33〜53分:100%C-100%D、2.0ml/min
53〜56分:100%C、4.0ml/min
56〜61分:100%C、1.0ml/min+混合ポンプ:100%C、3.0ml/min
61〜81分:100%C-100%D、2.0ml/min
81分から完了まで:100%D。
0〜20分:100%Α-50%A(50%B)、1.0ml/min
20〜25分:50%C(50%D)、3.0ml/min
25-30分:50%C(50%D),1.0ml/min+100%C,1.0ml/min
30-40分:50%C(50%D)-100%D、l.Oml/min
40-45分:50%C(50%D)、3.0ml/min
45-50分:50%C(50%D)、1.0ml/min+100%C,1.0ml/min
50-60分:50%C(50%D)-100%D、1.0ml/min
60-65分:100%D完了。
0〜20分:100%溶液1、0-100%、溶液2、流速1.0ml/min
20〜30分:100%溶液3、流速2.5ml/min
30〜37分:Aポンプ100%、溶液3、1.0ml/min+Bポンプ100%溶液3、2.0ml/min37-47分:100%溶液3-100%溶液4、流速1.0ml/min
47〜52分:100%D。
2、移動相リザーバー
2-1、溶液1
2-2、溶液2
2-3、溶液3
2-4、溶液4
3、ポンプA
4、六方弁ユニット:サンプル供給六方弁の1つ及び六方弁の1つを含む。
4-1、サンプル供給六方弁4-1、サンプル供給(オリジナルサンプル)装置No.1である。
4-2、六方弁4-2、当該六方弁4-2と関係のバルブ及び混合機12と共にサンプル供給装置No.2を構成する。
5、三方弁
5-1、三方弁5-1
5-2、三方弁5-2
5-3、三方弁5-3
5-4、三方弁5-4
6、多方弁ユニット:多方弁の2つを含む。
6-1、多方弁
6-2、多方弁が流体をクロマトグラフィのカラムに導入する
7、クロマトグラフィのカラムユニット
8、低温恒温制御箱(滅菌装置を含む)
9、ポンプB
10、蓄積装置
10-1、蓄積装置10-1
10-2、蓄積装置10-2
10-3、蓄積装置10-3
10-4、蓄積装置10-4
10-5、蓄積装置10-5
10-6、蓄積装置10-6
10-7、蓄積装置10-7
10-8、蓄積装置10-8
11、多方弁ユニット: 八方弁の2つを含む。
11-1、八方弁1
11-2、八方弁2
12、混合機
13、検出器
14、クロマトグラフ
15、留分収集器
16、ワークステーション
17-1、メインドレンロ
17-2、2次オリジナルサンプル供給の場合の廃棄液体ドレンロ
17-3、大規模タンパク質純化の場合のドレンロ
18、発振器
19、並列分流管
図で、太い実線は管路、細い実線はデータ回線を示す。
Claims (20)
- 検出装置、移動相リザーバー、輸液装置No.1と輸液装置No.2、サンプル供給装置No.1及びサンプル供給装置No.2、分離装置、少なくとも1つの蓄積器を含む蓄積装置、少なくとも2つのドレン装置及びチャンネル切替え装置を含むタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システムであって、
(1)前記の移動相リザーバーは高次元の液体クロマトグラフィーの分離に用いられる移動相を貯蔵し、
(2)前記の輸液装置No.1と輸液装置No.2は独立して前記の移動相リザーバーから液体クロマトグラフィーの分離に適用する移動相を取り出し、当該移動相を前記の高次元の液体クロマトグラフィーの分離システムのチャンネルに輸送し、前記の輸液装置No.1と輸液装置No.2は独立して移動相の流量を調節、計量でき、1次元目の分離の際に当たり、前記の輸液装置No.1は当該1次元目の分離に適用する移動相をサンプル供給装置No.1に輸送し、2次元目又は更に高次元の分離の場合、前記の輸液装置No.1は当該2次元目又は更に高次元の分離に適用する移動相を前記の蓄積装置に輸送し、前記の少なくとも1つの蓄積器に貯蔵した中間留分を前記のサンプル供給装置No.2に押し入れると同時に、前記の輸液装置No.2は前記の移動相リザーバーから当該2次元目又は更に高次元の分離に適用する移動相を取出して前記のサンプル供給装置No.2に輸送し、
(3)前記のサンプル供給装置No.1はシステムの外部からオリジナルサンプルを導入し、このオリジナルサンプルを、輸液装置No.1からの移動相と同時に前記の分離装置に入るようにし、サンプル供給装置No.2はサンプル供給混合機を含み、当該サンプル供給混合機は前記の蓄積装置における少なくとも1つの蓄積器からの中間留分及び移動相が前記の輸液装置No.2の移動相と混合して供給サンプルの混合液を取得し、当該供給サンプルの混合液を前記の次の1次元の分離装置に輸送するようにし、
(4)前記の分離装置はクロマトグラフィのカラム切替えユニット及びクロマトグラフィのカラムのn本を含み、又は分離モード総数がmであるクロマトグラフィのあるカラムを含み、前記のクロマトグラフィのカラムにより分離装置に入った液体が異なる留分に分離するようにし、その中、前記のクロマトグラフィのカラム切替え弁は前記の分離装置に入った液体を選択的に前記のクロマトグラフィのカラムのn本におけるクロマトグラフィのカラムの1本に流入させ、nが非負整数であり、mが前記の高次元の液体クロマトグラフィーの分離システムに用いられる異なる分離モードの個数であり、nとmが下式を満たし、
m≧n (1)
m=n+qi (2)
その中、
i:正整数
qi:i種の分離モードのあるクロマトグラフィのカラムの個数
(5)前記の蓄積装置は蓄積器のp個及び蓄積器の切替えユニットを含み、その中、p≧1、前記の蓄積器の切替えユニットが前記の蓄積装置に入った液体が選択的に前記の蓄積装置の少なくとも1つの蓄積器に流入するようにし、当該蓄積装置は次元ごとの分離が行われて取得した異なる留分で更なる分離が必要である中間留分を収集し、蓄積器の少なくとも1つに貯蔵し、
(6)前記の少なくとも2つのドレン装置はチャンネルにおける液体をシステムの外部に排出し、
(7)前記のチャンネル切替え装置は前記の装置と連通するバルブと管路からなり、前記のチャンネル切替え装置におけるバルブに対する切替えにより、前記のチャンネル切替え装置は従来の液体クロマトグラフィーの分離におけるチャンネルを形成する外に、高次元の液体クロマトグラフィーの分離に用いられるチャンネルも形成し、
前記の輸液装置No.1と輸液装置No.2が輸送する2次元目又は更に高次元の分離に用いられる移動相の量に対して調節及び計量を行って、2次元目又は更に高次元の分離に用いられる前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度を臨界移転溶離剤の濃度CCMPより低く調節し、前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度が臨界移転溶離剤の濃度CCMPよりも低い場合には、前記の供給サンプルの混合液における目標タンパク質が2次元目又は更に高次元の分離で液体クロマトグラフィのカラムに保留されるタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。 - 前記の次の1次元の分離装置が混合分離モードを持つ分離装置であり、又は前の1次元の分離モードと異なるシングルモードの分離装置であることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の輸液装置No.1及び前記の輸液装置No.2がそれぞれ多元グラジエントユニット及びポンプからなり、前記の多元グラジエントユニットは複数の輸液チャンネルがあり、各チャンネルの流量を輸送、計量できることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の高次元の液体クロマトグラフィーシステムは全体式であり、即ち、すべてのハードウェアがケースに取付けられ、制御システムにより制御され、又は前記の高次元の液体クロマトグラフィーシステムは分割式であり、即ち、各ハードウェア及び自己制御システムが2つの又は2つの以上のケースに取付けられ、現状のクロマトグラフの自己制御システム及び他の操作の自己制御システムを利用することを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記のサンプル供給装置No.2におけるサンプル供給混合機が混合タンク又は管路混合機であることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記のサンプル供給装置No.2と前記の輸液装置No.2を連通する管路にバルブが設けられていて、前記のバルブは前記のサンプル供給装置No.2及び前記の輸液装置No.2が連通するように制御することに用いられることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記のクロマトグラフィのカラム切替えユニットが少なくとも1つの多方弁を含み、前記の多方弁が前記の分離装置の入口としてのバルブ入口の1ヶ所及び前記のn-q個のクロマトグラフィのカラムと一々に対応して連通するバルブ出口を持ち、前記の多方弁がn-qi個のバルブ出口を切替えて前記の分離装置に入った液体が選択的に前記のクロマトグラフィのカラムにおけるクロマトグラフィのカラムの1本に流入するようにすることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の高次元の液体クロマトグラフィーの分離システムが液体から少なくとも一部の塩を除去することに用いられる脱塩装置を含むことを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の蓄積器は容積が部分的に違っていることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の蓄積装置の蓄積器の切替えユニットが多方弁No.3及び多方弁No.4を含むことを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の多方弁No.3でも多方弁No.4でも液体が逆にバルブの本体を流れることを許容することを特徴とする請求項10に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記のチャンネル切替え装置が選択的に、
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記のサンプル供給装置No.1、前記の分離装置、前記の検出装置及び前記のドレン装置No.1とNo.2を連通する従来の分離チャンネル、
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の分離装置、前記の検出装置、前記の蓄積装置及び前記のドレン装置No.2を連通する1次元目の分離チャンネル、
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の蓄積装置、前記のサンプル供給装置No.2、前記の分離装置、前記の検出装置、前記の蓄積装置及び前記のドレン装置No.2を連通し、それに、相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.2及び前記のサンプル供給装置No.2を連通する中間留分を収集する2次元目又は更に高い次元の分離チャンネル、
相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.1、前記の蓄積装置、前記のサンプル供給装置No.2、前記の分離装置、前記の検出装置及び前記のドレン装置No.1を連通し、それに、相次ぎに前記の移動相リザーバー、前記の輸液装置No.2及び前記のサンプル供給装置No.2を連通する中間留分を収集しない2次元目又は更に高い次元の分離チャンネル、
のいずれかに切替えることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。 - 少なくとも前記の蓄積装置がタンパク質の不活性化時間を延長できる恒温温度で保持するようにする恒温装置を含むことを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 滅菌装置を含み、前記の滅菌装置は少なくとも前記の蓄積装置にある細菌が少なくとも部分的に殺されるようにすることを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 前記の分離装置、蓄積装置及びチャンネル切替え装置におけるバルブの自動切替えも行う自動化制御装置を含むことを特徴とする請求項1に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。
- 検出装置、移動相リザーバー、輸液装置No.1と輸液装置No.2、サンプル供給装置No.1及びサンプル供給装置No.2、分離装置、少なくとも1つの蓄積器を含む蓄積装置、少なくとも2つのドレン装置及びチャンネル切替え装置を含むタンパク質分離用2次元の液体クロマトグラフィーの分離システムであって、
(1)前記の移動相リザーバーは2次元の液体クロマトグラフィーの分離に用いられる移動相を貯蔵し、
(2)前記の輸液装置No.1と輸液装置No.2は独立して前記の移動相リザーバーから液体クロマトグラフィーの分離に適用する移動相を取り出し、当該移動相を前記の2次元の液体クロマトグラフィーの分離システムのチャンネルに輸送し、独立して流量を調節、計量でき、1次元目の分離の際に当たり、前記の輸液装置No.1は当該1次元目の分離に適用する移動相をサンプル供給装置No.1に輸送し、2次元目の分離の場合、前記の輸液装置No.1が当該2次元目分離に適用する移動相を前記の蓄積装置に輸送し、前記の少なくとも1つの蓄積器に貯蔵したすべての中間留分が当該移動相と共に前記のサンプル供給装置No.2に輸送されるようにし、前記の輸液装置No.2が前記の移動相リザーバーから当該2次元目分離に適用する移動相を取出し、前記のサンプル供給装置No.2に輸送し、
(3)前記のサンプル供給装置No.1がシステムの外部から分離されるタンパク質を含む分離されるサンプルを導入し、輸液装置No.1からの移動相と共に前記の分離装置に入らせ、サンプル供給装置No.2はサンプル供給混合機を含み、当該サンプル供給混合機は前記の蓄積装置からの少なくとも1つの蓄積器の中間留分及び移動相が前記の輸液装置No.2の移動相と混合するようにし、供給サンプルの混合液を取得し、当該供給サンプルの混合液を前記の分離装置に輸送し、
(4)前記の分離装置はクロマトグラフィのカラム切替えユニット及びクロマトグラフィのカラムのn本を含み、又はm種以上の分離機能を持つクロマトグラフィのカラムを含み、前記のクロマトグラフィのカラムにより分離装置に入った液体が異なる留分に分離するようにし、その中、前記のクロマトグラフィのカラム切替えユニットは前記の分離装置に入った液体を選択的に前記のクロマトグラフィのカラムのn本におけるクロマトグラフィのカラムの1本に流入させ、nが非負整数であり、mが前記の2次元の液体クロマトグラフィーの分離システムに用いられる異なる分離モードの数量であり、nとmが下式を満たし、
m≧2 (4)
(5)前記の蓄積装置は蓄積器のp個及び蓄積器の切替えユニットを含み、その中、p≧1、前記の蓄積器の切替えユニットは前記の蓄積装置に入った液体が選択的に前記の蓄積装置における少なくとも1つの蓄積器に流入するようにし、当該蓄積装置は次元ごとの分離が行われて取得した異なる留分で更なる分離が必要である中間留分を収集し、少なくとも1つの蓄積器に貯蔵し、
(6)前記の少なくとも2つのドレン装置はチャンネルにおける液体をシステムの外部に排出し、
(7)前記のチャンネル切替え装置は前記の装置と連通するバルブと管路からなり、前記のチャンネル切替え装置におけるバルブに対する切替えにより、前記のチャンネル切替え装置は従来の液体クロマトグラフィーの分離におけるチャンネルを形成する外に、2次元の液体クロマトグラフィーの分離に用いられるチャンネルも形成し、
前記の輸液装置No.1と輸液装置No.2は輸送する2次元目分離に用いられる移動相の量に対して調節と計量を行い、前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度を臨界移転溶離剤の濃度CCMPより低く調節し、前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度が臨界移転溶離剤の濃度CCMPよりも低い場合には、2次元目分離に用いられる前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度が当該供給サンプルの混合液に含む中間留分における当該2次元目分離で保留される目標タンパク質の臨界移転溶離剤の濃度CCMPより低くなるように調整することを特徴とするタンパク質分離用2次元の液体クロマトグラフィーの分離システム。 - タンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離方法であって、
(1)事前の準備:当該2次元目又は更に高次元の分離条件における分離されるタンパク質のサンプルで当該2次元目分離で保留される必要があるすべての目標タンパク質の臨界移転溶離剤の濃度CCMPを確定する工程と、
(2)1次元目の分離:グラジエント溶離によりタンパク質のサンプルに対して従来の液体クロマトグラフィーの分離を行って、異なる留分を取得する工程と、
(3)中間留分の収集及び貯蔵:前の1次元の分離により取得した留分で更なる分離が必要である中間留分を収集、貯蔵する工程と、
(4)2次元目又は更に多くの次元の分離:次の1次元の分離が必要である中間留分の全部又は一部を次の1次元の分離に用いられる移動相と混合して次の1次元の分離の供給サンプルの混合物を取得し、前記のサンプル供給混合物サンプルを次の1次元の分離のクロマトグラフィのカラム中に供給し、次に、グラジエント溶離により、前記のステップ4)の次の1次元の分離のクロマトグラフィのカラムに保留された前記の供給サンプルの混合物に対して2次元目又は更に高次元の液体クロマトグラフィーの分離を行って、再び異なる留分を取得し、前の1次元の分離により取得し、この次元の分離が必要であるすべての中間留分に対して前記の分離を行う工程と、
(5)前記のステップ(3)と(4)を繰り返してすべての目標タンパク質産物を取得する工程とを含み、
前記のステップ(4)で、前記の次の1次元の分離に用いられる移動相の量に対して調節及び計量を行い、前記の供給サンプルの混合液における溶離剤の濃度が当該供給サンプルの混合液に含む目標タンパク質の全部又は一部が中間留分における当該2次元目又は更に高次元の分離で保留される必要があるすべての目標タンパク質の臨界移転溶離剤の濃度CCMPより低くなるようにすることを特徴とする請求項1に記載された分離システムを用いた、タンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離方法。 - 前記のステップ(4)で、速い流速の移動相により前記の中間留分のサンプルが前記のクロマトグラフィカラムに供給されるようにすることを特徴とする請求項17に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離方法。
- 前記のステップ(4)のサンプル供給まで又はサンプル供給が完了してから、次の1次元の分離に用いられる移動相を緩衝液にし、前記の緩衝液が前記の次の1次元の分離のクロマトグラフィのカラムを流れるようにし、その中、前記の緩衝液における溶離剤の濃度が前記の目標タンパク質の中間留分で次の1次元の分離で保留される必要があるすべての目標タンパク質の臨界移転溶離剤の濃度C CMP より低く、少なくとも部分的に前記のクロマトグラフィのカラムにおける元の移動相を置換する緩衝液交換ステップを含むことを特徴とする請求項17に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離方法。
- 前記の緩衝液の流速がグラジエント溶離により液体クロマトグラフィーの分離を行う場合に常に利用する流動相の流速より速いということを特徴とする請求項17に記載のタンパク質分離用高次元の液体クロマトグラフィーの分離方法。
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