JP6071012B2

JP6071012B2 - ４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体、その製造および抗ウイルス剤としての使用

Info

Publication number: JP6071012B2
Application number: JP2014535117A
Authority: JP
Inventors: ヴェツラール，ペーター; シュミットケ，ミヒャエラ; マカロフ，ヴァディム
Original assignee: ドリッテパテントポルトフォーリオベタイリグングスゲゼルシャフトエムベーハーウントコー．カーゲー
Priority date: 2011-10-14
Filing date: 2012-10-15
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2032-10-15
Also published as: SG11201401351PA; RU2014118953A; BR112014008815A2; SI2766367T1; SG10201602846TA; WO2013053942A1; NZ623573A; BR112014008815B1; PL2766367T3; EP2766367A1; PT2766367T; MX2014003987A; JP2014528468A; AU2012322750A1; DK2766367T3; EP2766367B1; KR20140095467A; IL231934A0; LT2766367T; HRP20220928T1

Description

本発明は、新規な型の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体、および好ましくはピコルナウイルス感染症を治療するための抗ウイルス剤としてのその使用に関する。

ピコルナウイルス、特にエンテロウイルスおよびライノウイルスは、ヒトの広範囲の疾患の原因である。エンテロウイルスは、６０種を超える異なるヒト病原性血清型を含む（ＭｅｌｎｉｃｋＪｉｎ：ＦｉｅｌｄｓＢｅｔａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；１９９６，６５５−７１２）。エンテロウイルス、エコーウイルス、コクサッキーウイルスＡ型およびＢ型感染症は通常、非特異性熱の経過をたどり、しばしばライノウイルス感染症と識別することができない上気道の疾患を引き起こす。流行病としても生じ得るより深刻な臨床像には、出血性結膜炎、ヘルパンギナ、手足口病、無菌性髄膜炎、脳炎および急性心筋炎が含まれる。したがって、異なるウイルス型が同じ症状を引き起こすことがある、または１種のウイルス型が極めて異なる臨床像を引き起こすことがある。ウイルス診断への現代の高感度法の導入により、持続性エンテロウイルスＲＮＡならびにウイルスタンパク質は、２型糖尿病、ポリオ筋炎（ｐｏｌｉｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、特に慢性心筋炎などの慢性疾患と関連して同定され得る。持続性エンテロウイルス感染症はまた、無ガンマグロブリン症の患者にも起こり、持続性エンテロウイルス髄膜脳炎としてあらわれる。皮膚筋炎または多発性筋炎が、通常付随症状として生じる。ライノウイルスは約１００種の血清型を含む。ライノウイルス感染症は、ヒトの上気道の全呼吸器疾患の半数超を引き起こす（ＣｏｕｃｈＲＢｉｎ：ＦｉｅｌｄｓＢＭｅｔａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ：ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄｅｄｉｔｉｏｎ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６，７１３−３５）。約１０日の疾患の平均持続時間で、ほとんど無害の経過をたどるこれらの風邪は、毎年数百万のＧＰ来診をもたらし、学校および会社を休ませる。考えられる合併症には、中耳炎、副鼻腔炎、喘息憎悪および嚢胞性線維症ならびに特に幼児、高齢患者および免疫抑制患者の下気道の感染症が含まれる。型の多様性のために、予防的ワクチン接種は現在不可能である。これらの病気に関連する労働日の損失、ＧＰ来診および医薬品の結果として、ライノウイルスおよびエンテロウイルスは毎年相当なコストを意味する。ウイルス特異的治療剤が利用不可能であるために、これらのウイルス感染症の治療は、現在まで、対症療法となっている（ＲｏｔｂａｒｔＨＡ：ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ２００２，５３（２），８３−９８）。さらに、抗生物質が通常、不必要に処方される。そのため、新規なウイルス抑制剤（ｖｉｒｕｓｔａｔｉｋａ）の開発が必要不可欠である。

エンテロウイルスおよびライノウイルス感染症の潜在的治療についての集中的な研究の結果は、概説論文で２００２年にＲｏｔｂａｒｔにより要約された（ＲｏｔｂａｒｔＨＡ：ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ２００２，５３（２），８３−９８）。例えば、リバビリンは、宿主細胞酵素、イノシン５’−一リン酸（ＩＭＰ）デヒドロゲナーゼを阻害する。プリンヌクレオチドを合成するためのこの鍵酵素を不活性化することにより、ピコルナウイルスの複製がインビトロおよびインビボで阻害される。さらに、リバビリンは、ポリオウイルスのゲノムに直接挿入され、それによってＲＮＡウイルスにとっての突然変異原としても作用する（ＣｒｏｔｔｙＳｅｔａｌ．：ＮａｔＭｅｄ，２０００，６（１２），１３７５−９）。深刻な副作用のために、これらの化合物はライノウイルスおよびエンテロウイルス感染症を治療するために使用されない。ウイルスＲＮＡ合成を阻害するための特異的標的はゲノム自体、ウイルスＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼならびに複製複合体に必要な他のウイルスタンパク質である。グアニジン、チオセミカルバゾン、ベンズイミダゾール、ジピリダモールおよびフラボンが、長い間、細胞培養液中の異なるピコルナウイルスのポリメラーゼの阻害剤として知られてきた。それにより、様々な程度の成功がインビボで達成された。エンビロキシム誘導体は、広域の抗エンテロウイルスおよび抗ライノウイルス活性を有する最も有望な候補薬であるとみなされている。エンビロキシムは、ウイルス増殖におけるＲＮＡ中間体の形成に必要なウイルスタンパク質３Ａに結合することにより、プラス鎖ＲＮＡの合成を妨害する（ＨｅｉｎｚＢＡａｎｄＶａｎｃｅＬＭ：ＪＶｉｒｏｌ，１９９５，６９（７），４１８９−９７）。臨床研究では、中等度もしくは全く無い治療効果、劣った薬物動態および望ましくない副作用が観察された（ＭｉｌｌｅｒＦＤｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９８５，２７（１），１０２−６）。現在まで、より優れた生物学的利用能（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）および耐容性を有する新規な誘導体についての入手可能な臨床データは存在しない。

ウイルスプロテアーゼ２Ｃの微細構造および機能についての知見に基づいて、プロテアーゼ阻害剤ＡＧ７０８８が開発された。ＡＧ７０８８は、細胞培養液中、ナノモル濃度範囲で４８種のライノウイルス型ならびにコクサッキーウイルスＡ２１、Ｂ３、エンテロウイルス７０およびエコーウイルス１１に対して作用する（ＰａｔｔｉｃｋＡＫｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｌａＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９９，４３（１０），２４４４−５０）。臨床研究の結論付けられたデータは現在まで知られていない。

ウイルスのカプシドの分子構造の解明により、カプシド遮断剤、「ＷＩＮ物質」の標的化設計の必要条件が作成された（ＤｉａｎａＧＤ：ＣｕｒｒＭｅｄＣｈｅｍ２００３，２，１−１２）。これらの遮断剤は、ライノウイルスおよびエンテロウイルスの吸着および／または脱外被を妨げる。ＷＩＮ物質のいくつかのみが、ピコルナウイルスの個々の属型またはウイルス型に対して極めて特異的に作用する。他の誘導体は、ライノウイルスならびにエンテロウイルスの複製を阻害する。ＷＩＮ物質には、例えば、アリルドン、ジソキサリルおよびピロダビルが含まれる。これらの化合物は、細胞培養液中で極めて優れた抗ウイルス効果を示した。低い溶解度（アリルドン）、低い生物学的利用能（アリルドンおよびジソキサリル）、速い代謝および排出（ジソキサリルおよびＷＩＮ５４９５４）ならびに副作用、例えば、皮膚発疹（ＷＩＮ５４９５４）が臨床応用を不可能にした。別のカプシド阻害剤、プレコナリルに大きな望みが置かれた。プレコナリルは、極めて優れた経口生物学的利用能を有し、ウイルスカプシド中の疎水性ポケットに結合した後、ライノウイルス、エコーウイルスおよびコクサッキーウイルスの侵入を阻害する（ＰｅｖｅａｒＤＣｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ１９９９，４３（９），２１０９−１５；ＭｃＫｉｎｌａｙＭＡｅｔａｌ．：ＡｎｎｕＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ１９９２，４６，６３５−５４）。そのため、これは、一般的な風邪からウイルス性髄膜炎または心筋炎まで広範囲のウイルス疾患に対して潜在的に有効である。ライノウイルス、エンテロウイルス７１およびコクサッキーウイルスＢ３の場合には、耐性が観察された（ＬｅｄｆｏｒｄＲＭｅｔａｌ．：ＪＶｉｒｏｌ２００４，７８（７），３６６３−７４；ＧｒｏａｒｋｅＪＭｅｔａｌ．：ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ１９９９，１７９（６），１５３８−４１）。エンテロウイルス髄膜炎（ＡｂｚｕｇＭＪｅｔａｌ．：ＰｅｄｉａｔｒＩｎｆｅｃｔＤｉｓＪ，２００３，２２，３３５−４１）ならびにライノウイルスにより引き起こされる呼吸器感染症（ＨａｙｄｅｎＦＧｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｖｉｒＴｈｅｒ，２００２，７，５３−６５；ＨａｙｄｅｎＦＧｅｔａｌ．：ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２００３，３６，１５２３−３２）の小児および成人の臨床研究が成功した。しかしながら、証明された治療効果は、米国でライノウイルス感染症を治療するためのプレコナリル（Ｐｉｃｏｖｉｒ、Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ、米国）の認可に十分ではない。２００２年３月に、対応する出願は、好ましくない危険性−利益評価の理由で、米国食品医薬品局：ＦＤＡにより拒絶された。

ピラゾロピリミジンも、例えば、アデノシンキナーゼ（欧州特許第４９６６１７号明細書または米国特許第４９０４６６６号明細書）、キサンチンオキシゲナーゼ（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃ．Ｃｈｅｍ．１９，１５６５，１９８２）または他の酵素系（米国特許第２９６５６４３号明細書および米国特許第３６００３８９号明細書）を阻害する、ＣＲＦアンタゴニスト（副腎皮質刺激ホルモン放出因子アンタゴニスト）として記載されてきた（例えば、欧州特許第６７４６４２号明細書および欧州特許第６９１１２８号明細書）。

したがって、ライノウイルスおよびエンテロウイルス疾患を治療するための極めて有効な抗ウイルス剤を開発することが、抗ウイルス研究の重要な部分であり続けている。新規な化合物は十分に耐用性で、例えば、プレコナリルの場合の既存の耐性を克服すべきである。

国際公開第００／４３３９４Ａ号パンフレットは、置換ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体および抗ウイルス剤としてのその使用を開示している。

欧州特許第２０４９５４０号明細書も、４−アミノ−３−アリールアミノ−６−アリールピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体および抗ウイルス剤としてのその使用を開示している。

欧州特許第４９６６１７号明細書米国特許第４９０４６６６号明細書米国特許第２９６５６４３号明細書米国特許第３６００３８９号明細書欧州特許第６７４６４２号明細書欧州特許第６９１１２８号明細書国際公開第００／４３３９４Ａ号パンフレット欧州特許第２０４９５４０号明細書

ＭｅｌｎｉｃｌＪｉｎ：ＦｉｅｌｄｓＢｅｔａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ．Ｐｈｏｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−ＲａｖｅｎＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ；１９９６，６５５−７１２ＣｏｕｃｈＲＢｉｎ：ＦｉｅｌｄｓＢＭｅｔａｌ．，ｅｄｉｔｏｒｓ：ＦｉｅｌｄｓＶｉｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄｅｄｉｔｉｏｎ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９６，７１３−３５ＲｏｔｂａｒｔＨＡ：ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ２００２，５３（２），８３−９８ＲｏｔｂａｒｔＨＡ：ＡｎｔｉｖｉｒａｌＲｅｓ２００２，５３（２），８３−９８ＣｒｏｔｔｙＳｅｔａｌ．：ＮａｔＭｅｄ，２０００，６（１２），１３７５−９ＨｅｉｎｚＢＡａｎｄＶａｎｃｅＬＭ：ＪＶｉｒｏｌ，１９９５，６９（７），４１８９−９７ＭｉｌｌｅｒＦＤｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９８５，２７（１），１０２−６ＰａｔｔｉｃｋＡＫｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉｌａＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９９，４３（１０），２４４４−５０ＤｉａｎａＧＤ：ＣｕｒｒＭｅｄＣｈｅｍ２００３，２，１−１２ＰｅｖｅａｒＤＣｅｔａｌ．：ＡｎｒｉｍｉｃｒｏｂＡｇｅｎｔｓＣｈｅｍｏｔｈｅｒ１９９９，４３（９），２１０９−１５ＭｃＫｉｎｌａｙＭＡｅｔａｌ．：ＡｎｎｕＲｅｖＭｉｃｒｏｂｉｏｌ１９９２，４６，６３５−５４ＬｅｄｆｏｒｄＲＭｅｔａｌ．：ＪＶｉｒｏｌ２００４，７８（７），３６３３−７４ＧｒｏａｒｋｅＪＭｅｔａｌ．：ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ１９９９，１７９（６），１５３８−４１ＡｂｚｕｇＭＪｅｔａｌ．：ＰｅｄｉａｔｒＩｎｆｅｃｔＤｉｓＪ，２００３，２２，３３５−４１ＨａｙｄｅｎＦＧｅｔａｌ．：ＡｎｔｉｖｉｒＴｈｅｒ，２００２，７，５３−６５ＨａｙｄｅｎＦＧｅｔａｌ．：ＣｌｉｎＩｎｆｅｃｔＤｉｓ，２００３，３６，１５２３−３２Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃ．Ｃｈｅｍ．１９，１５６５，１９８２

本発明の目的は、エンテロウイルスおよびライノウイルスに対する抗ウイルス剤として使用することができる、ならびに例えば、物質の安定性および生物学的利用能に関して、先行技術の述べられた欠点を回避することができる、他のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体ならびにその製造および使用を特定することである。

この目的は、その薬学的に耐容される塩化合物およびそのプロファルマコン（ｐｒｏ−ｐｈａｒｍａｋａ）を含む、一般式Ｉの特異的に置換された４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体により達成される。

式中、フェニル基ＡおよびＢの少なくとも１つの中の少なくとも１個の水素原子は、０．２３より大きいハメット定数σ_pを有する置換基Ｒ^Hにより置き換えられており、
フェニル基ＡおよびＢの各々の中の全てのさらなる水素原子は互いに独立に、Ｒ¹残基により置き換えられていてもよく、
各Ｒ¹は独立に、ハロゲン、１〜７個の鎖構成（ｋｅｔｔｅｎｇｌｉｅｄｅｒｎ）を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝脂肪族遊離基、１〜８個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝アルカノール（ａｌｋａｎｏｌｅｓ）遊離基、ＮＯ₂、ＣＮ、ＣＯＮＲ² ₂、ＣＯＲ²、ＣＯＯＲ²、ＯＲ²、ＳＲ²、ＮＲ² ₂、ＳＯ₂ＮＲ² ₂、ＣＸ₃、ＣＲ²Ｘ₂、ＯＣＸ₃、ＯＣＲ²Ｘ₂またはフェニルであってもよく；
各Ｒ²は独立に、水素、１〜７個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、ハロゲン化もしくは非ハロゲン化、直鎖もしくは分枝脂肪族遊離基、ベンジル、フェニルまたはナフチル、ヘテロ原子Ｎ、ＳもしくはＯを有する飽和もしくは不飽和、モノ−もしくはポリ複素環であり、上記基の各々は独立に、フッ素、塩素、臭素、トリフルオロメチル、アルキル、アルコキシ、シアノ、ニトロ、アミノ、アミノアルキル、Ｃ（Ｏ）−アルキル、Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル、ベンジル、フェニルまたはナフチルで置換されていてもよく；
Ｘは独立に、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。

従属請求項で、特異的に置換された４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の利点、ならびに潜在的用途が説明されるが、本発明を何等限定しない。

フェニル基ＡおよびＢの少なくとも１つの中の少なくとも１個の水素原子が、ＮＯ₂、ＣＮ、ＣＦ₃、ＣＣｌ₃、ＣＢｒ₃、ＯＣＦ₃、ＯＣＣｌ₃、ＯＣＢｒ₃、ＣＨＦ₂、ＣＨＣｌ₂、ＣＨＢｒ₂、ＯＣＨＣｌ₂、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅまたはＣＯＯＥｔ、好ましくはＣＦ₃またはＯＣＦ₃から選択される置換基Ｒ^Hにより置き換えられている、一般式Ｉの４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が有利である。フェニル基ＡおよびＢの一方または両方で、１、２または３個の水素原子が置換基Ｒ^Hにより置き換えられているものが有利である。特別な実施形態では、フェニル基ＡおよびＢの１つの中の正確に１個の水素原子が、置換基Ｒ^Hにより置き換えられている。置換基Ｒ^Hは、フェニル環ＡまたはＢのパラ位にあることができる。

Ｒ^Hに加えて、フェニル基ＡおよびＢの各々は互いに独立に、さらなるＲ¹残基を有することができる。フェニル基ＡおよびＢが互いに独立に、０、１、２または３個のさらなるＲ¹残基、好ましくは０または１個のさらなるＲ¹残基を有することが有利である。

本発明に関連して、アルキルとして特に直鎖もしくは分枝Ｃ_1〜7−アルキル、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピルおよびブチルを考える価値がある。本発明に関連して、同じことがアルカノール、アルキルアミンおよびアルキルアミドにも当てはまる。

特に、一般式ＩＩ

式中、各置換基Ｒ^A、σ_X＝ｌｏｇＫ_X−ｌｏｇＫ_H

Ｒ^Bは独立に、水素、ハロゲン、１〜７個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝脂肪族遊離基、１〜８個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝アルカノール遊離基、ＮＯ₂、ＣＮ、ＣＯＮＲ² ₂、ＣＯＲ²、ＣＯＯＲ²、ＯＲ²、ＳＲ²、ＮＲ² ₂、ＳＯ₂ＮＲ² ₂、ＣＸ₃、ＣＲ²Ｘ₂、ＯＣＸ₃、ＯＣＲ²Ｘ₂またはフェニルであってもよく；Ｒ²およびＸは上で定義した通りであり；置換基Ｒ^A、Ｒ^Bの少なくとも１つは０．２３より大きいハメット定数σ_pを有する、４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が本発明により網羅される。

本発明は特に、一般式ＩＩａ

またはＩＩｂ

式中、Ｒ^HはＮＯ₂、ＣＮ、ＣＦ₃、ＣＣｌ₃、ＣＢｒ₃、ＯＣＦ₃、ＯＣＣｌ₃、ＯＣＢｒ₃、ＣＨＦ₂、ＣＨＣｌ₂、ＣＨＢｒ₂、ＯＣＨＣｌ₂、ＣＨＯ、ＣＯＯＨ、ＣＯＭｅ、ＣＯＥｔ、ＣＯＯＭｅまたはＣＯＯＥｔ、好ましくはＣＦ₃またはＯＣＦ₃から選択される、４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含む。

一般式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａまたはＩＩｂによる４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体を含有する医薬組成物も含まれる。このような医薬組成物は、さらなる物質、例えば、薬学的に許容される賦形剤および担体を含有することができる。特定の態様では、医薬組成物は、追加の有効成分、特に抗ウイルス剤、特にピコルナウイルスに対する活性剤を含むことができる。

驚くべきことに、本発明の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が、先行技術の物質と比較して、肝ミクロソームで有意に優れた安定性を有することが示された。さらに、マウスにおける薬物動態についての調査により、本発明の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体が、先行技術の物質よりも有意に優れた生物学的利用能を有することが示された。同時に、本発明の化合物は、ナノまたはマイクロモル濃度範囲で、ピコルナウイルス、特にエンテロウイルスおよびライノウイルスに対して強力な抗ウイルス活性を示す。

そのため、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩａまたはＩＩｂの化合物を含有する医薬製剤は、ピコルナウイルス、特にエンテロウイルスおよびライノウイルスにより引き起こされ得る、ヒトおよび動物の呼吸器感染症、無菌性髄膜炎、脳炎、ヘルパンギナ等の治療に特に適している。

４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体は、０．２３より大きいハメット定数σ_pを有する、一方または両方のフェニル基上の少なくとも１個の置換基Ｒ^Hを有するという事実により特徴付けられる。この値０．２３は、ハロゲンの中でパラ位について最高のハメット定数を示す臭素のハメット定数σ_pに相当する。

異なる置換基についてのハメット定数の決定は、ハメットの式
σ_X＝ｌｏｇＫ_X−ｌｏｇＫ_H
式中、Ｋ_Hは２５℃水中での安息香酸についてのイオン化定数であり、Ｋ_Xはメタまたはパラ置換安息香酸についての対応する定数である、安息香酸のイオン化定数に基づく。メタ位（σ_m）およびパラ位（σ_p）の異なる置換基についてのハメット定数を決定する方法ならびに種々の置換基の既に確認された値は、全体が本明細書に組み込まれている、Ｈａｎｓｃｈｅｔａｌ．，「ＡＳｕｒｖｅｙｏｆＨａｍｍｅｔｔＳｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔＣｏｎｓｔａｎｔｓａｎｄＲｅｓｏｎａｎｃｅａｎｄＦｉｅｌｄＰａｒａｍｅｔｅｒｓ」，ｉｎＣｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９１．９７，１６５−１９５の刊行物から引用することができる。したがって、少なくとも１つの置換基Ｒ^Hが最終的に位置している位置にかかわらず、パラ位についてのそれぞれの値σ（σ_p）がもっぱら本発明に重要である。

本発明の例には、その薬学的に耐容される塩化合物を含む、表１の化合物がある。

化合物のプロファルマコン（プロドラッグ）、特に一位のピラゾールヘテロ原子上の置換基により特徴付けられるものも網羅される。このような型の化合物は、インビボで１Ｈピラゾール化合物に変換されることが示されている。例として、例えば、ＩＵＰＡＣ名、１−ベンジルカルボキシイミドイル−６−フェニル−３−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−１Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］−ピリミジン−３，４−ジアミンとも命名される、１−［イミノ（フェニル）メチル］−４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンなどの一位のピラゾールヘテロ原子が、イミノ（フェニル）メチル置換基により置換されている化合物が言及されてきた。ここで、これは、化合物ＣＲＣＶ−３４０と反応混合物中の過剰のベンズアミジンの反応から生じ、以下の式：

ＣＲＣＶ−３４０−プロドラッグ
を有する、上記化合物ＣＲＣＶ−３４０の製造の副産物に関連する。

これらの化合物（例えば、ＣＲＣＶ−３４０プロドラッグ）はインビボで、血清中で最終有効成分（例えば、ＣＲＣＶ−３４０）のみを主に証明することができるように、標的化合物に極めて容易に変換されることが分かった。上記化合物により製造される塩、溶媒和物または塩の溶媒和物も含まれる。本発明の範囲内にある、好ましい塩は、本発明に関連する化合物の生理学的に無害の塩である。本発明に関連する化合物の生理学的に無害の塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸（ｐｈｏｓｐｈｏｒｓａｕｒｅ）、メタンスルホン酸、スルホン酢酸（Ｅｔｈａｎｓｕｌｆｏｎｓａｕｒｅ）、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。

本発明を、合成法、一般式（Ｉ）の特別な４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体ならびにその効果およびピコルナウイルス感染症に対する使用を用いて、以下でより詳細に説明する。

図解１（Ａｂｂ．１）は、ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１の合成の全体図を示し、第１のステップで、アルコール中での［ビス（メチルチオ）メチレン］マロノニトリル２とフェニルアミン３からフェニル誘導体４への縮合が含まれる。後者は、それぞれ単離することができ、さらなる反応のために精製するまたは精製せずにその後の反応に直接使用することができる（「ワンポット反応」）。その後のステップは、フェニル誘導体４とヒドラジンまたはヒドラジン誘導体の相互作用を構成する。反応は、１〜４時間沸騰させることにより起こり、高収率のピラゾール５をもたらす。ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１の合成の最終ステップは、酢酸、トリフルオロ酢酸または酢酸ナトリウムの存在下でのピラゾール５とフェニルアミジン６の縮合である。

図解１（Ａｂｂ．１）

これにより、溶媒の非存在下、２００〜２２０℃で、過剰の酢酸ナトリウムの存在下、対応するベンズアミジン塩酸塩を用いて最終合成ステップでピラゾール（５）を変換することにより、化合物を有利に得ることができる。

あるいは、マイクロ波照射を用いておよびカリウムｔｅｒｔ−ブチラートの存在下で、対応するベンゾニトリル（大過剰）を用いて最終合成ステップでピラゾール（５）を変換することにより、化合物を得ることができる。

代替合成法は、水酸化ナトリウムの存在下でのマロノニトリルとアリールイソチオシアネートの「ワンポット」反応およびヨウ化メチルもしくは硫酸ジメチルによる反応混合物のその後の処理である。このプロセスでは、大量のエナミンが製造される。ここでも、酢酸またはトリフルオロ酢酸などの酸の存在下でのピラゾール５とアリールアミジン６の縮合が、同様にピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン１を製造するための最終合成ステップとなる。

特に高収率でのピラゾール（５）のピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンへの変換は、遊離塩基としてベンズアミジン成分を使用することにより行うことができることが示され、この反応は極性溶媒中で行われる。この方法の利点はまた、分離が困難な副産物の割合を最小化することができることである。この反応は、以下の反応図による置換５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノ−ピラゾール（５）と任意の遊離塩基としての置換ベンズアミジン（６）から４−アミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１）までに基づいて行うことができる。

図解２（Ａｂｂ．２）

Ｒ^AおよびＲ^B残基は、Ｒ¹について上で定義した置換基である。

上記変換は、フェニル基ＡおよびＢの少なくとも１つの中の少なくとも１個の水素原子がハメット定数σ_p＞０．２３を有する置換基Ｒ^Hにより置き換えられている上記一般式（Ｉ）の４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の製造に特に適しているが、この方法は、前記置換基を有さない、すなわち、この残基が水素または式Ｉに関連して上で定義したＲ¹残基を表す４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの製造に使用することもできる。

好ましくは、本発明はまた、Ｒ^AおよびＲ^B残基が互いに独立に、ＮＯ₂、ＣＮ、ＣＯＮＲ³ ₂、ＣＯＯＲ³、ＣＨＯ、ＣＨＯＮＨ₂、ハロゲン、１〜６個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝脂肪族遊離基（アルキル基と呼ばれる）、１〜６個の鎖構成を有する飽和もしくは不飽和、直鎖もしくは分枝アルカノール（ａｌｃａｎｏｌ）遊離基（アルコキシ基とも呼ばれる）、ＯＲ³、ＳＲ³、ＮＲ³ ₂、ＳＯ₂ＮＲ³、ジ−またはトリフルオロメチルから選択されてもよく、Ｒ³残基がＨ、メチル−、エチル−、プロピル−またはブチル−基からなっていてもよい、上記の反応に関する。本発明の化合物が互変異性型で存在することができる限り、本発明は全ての互変異性型を含む。

上記段落の置換基は、別段の指定がない限り、以下の意味を有する。

アルキルならびにアルコキシ中のアルキル部分は直鎖または分枝アルキルを意味し、別段の指定がない限り、（Ｃ１〜Ｃ６）−アルキル、特に（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチルを含む。有利には、アルコキシは、特に１〜６個、特に好ましくは１〜４個、最も好ましくは１〜３個の炭素原子を有する、直鎖または分枝アルコキシ残基を意味する。例としておよび好ましいものとして、メトキシ、エトキシ、Ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ペントキシおよびｎ−ヘキソキシが挙げられる。アリールは、一般的に６〜１４個の炭素原子を有する単−〜三環芳香族、炭素環残基を意味する。例としておよび好ましいものとして、アリールは、フェニル、ナフチルおよびフェナントレニル（ｐｈｅｎａｎｔｒｅｎｙｌ）から選択され、特にフェニルが好ましい。ハロゲンはフッ素、塩素、臭素およびヨウ素、好ましくはフッ素および塩素を意味する。

この方法により、この場合、フェニルアミジン６が対応するアリールアミジンにより置き換えられていなければならない、一般的アリールピラゾロ［３，４ｄ］ピリミジン誘導体を製造することも可能である。特に、フェニル環ＡおよびＢの代わりに、ナフチル、ピリジル、キノリル（ｃｈｉｎｏｌｙｌ）、ピラジニル、ピリミジル、ピラゾリル、トリアジニル、イミダゾリル、フラニル、チエニルが最終生成物に含有されていてもよく、上記基の各々の中の各水素原子は互いに独立に、式Ｉに関連して上で定義したＲ¹残基により置き換えられていてもよい。このような方法も本発明の主題である。

図解２（Ａｂｂ．２）に示す反応は、不活性、極性有機溶媒中で行われる。不活性極性有機溶媒は、例えば、ジエチルエーテル、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、グリコールジエチルエーテルもしくはジエチレングリコールジメチルエーテルなどのエーテル、ジオキサン、テトラヒドロフランなどの環状エーテル、エチルベンゼン、キシレン、トルエンなどの炭化水素、またはエタノール、プロパノール、ブタノール、イソブタノールおよびイソプロパノールなどのアルコールである。溶媒としてｎ−ブタノールを使用することにより、特に純粋な生成物が得られる。ｎ−ブタノールは、ピラゾール誘導体の初期値に対して１〜１０、特に好ましくは１．５〜３のモル比で使用すべきである。

本発明の範囲内では、ベンズアミジン（６）が塩基性型で（遊離塩基として）新しく調製されることが特に有用であると分かった。この合成は、対応して利用可能な塩から通常の方法を使用して行われる。ピラゾール誘導体（５）に基づいて、１〜１．５のモル比でベンズアミジン（６）を使用することが最良である。

反応は、６０〜１１０℃、好ましくは８５〜９５℃の温度で、１０〜３０時間を上回り、好ましくは１８〜２０時間にわたって行われる。

こうして得られたアミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（１）は、再結晶により洗浄される。このために、好ましくはテトラヒドロフランまたはテトラヒドロフランと水もしくは有機溶媒の混合物、特に好ましくはトルエンとの混合物が使用される。その代わりに、テトラヒドロフランと水または有機溶媒、好ましくはトルエン中熱溶液からの沈殿により、アミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンを洗浄することもできる。

以下の実施例では、好ましくはピコルナウイルス感染症に対する適用に適した、一般式（Ｉ）の特別な化合物を列挙する。この化合物は、静脈内、皮下もしくは筋肉内による局所または非経口適用あるいは鼻腔内投与のために、薬学的に許容される水性、有機もしくは水性−有機媒体中の溶液または懸濁液で調製することができる、または経口投与のための従来の担体を使用した錠剤、カプセル剤もしくは水性懸濁液の形態でまたは坐剤として開発することができる。

例えば、式（Ｉ）で示される化合物は、０．１〜１０００ｍｇ／体重１ｋｇの用量で使用することができる。

４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体の製造および分析

本発明の化合物の構造解析を、合成、元素分析、ＮＭＲ分光法および質量分析の型により行う。

原材料：
５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノピラゾールを、図解１（Ａｂｂ．１）に示す方法ならびにＴｏｍｉｎａｇａＹら（Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９０，２７，７７５−７７９）の説明にしたがって合成した。アリールアミジンを、対応するシアン源化合物から既知の先行技術にしたがって合成する（Ｂｏｅｒｅ，ＲＴｅｔａｌ．：Ｊ．Ｏｒｇａｎｏｍｅｔ．Ｃｈｅｍ．，１９８７，３３１，１６１−１６７；ＧａｒｉｇｉｐａｔｉＲＳ：ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．，１９９０，３１，１９６９−１９７８；ＤａｎｎＯｅｔａｌ．：ＪｕｓｔｕｓＬｉｅｂｉｇｓＡｎｎ．Ｃｈｅｍ．，１９８２，１８３６−１８３９）。

参考実施例１：４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

（３−Ｎ，６−ジフェニル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）

ベンズアミジン塩酸塩水和物３．０ｇ（１７．２４ｍｍｏｌ）および酢酸ナトリウム２．２ｇ（２３．０ｍｍｏｌ）を撹拌しながら５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノピラゾール２．３ｇ（１１．５ｍｍｏｌ）に添加する。反応混合物を２２０℃で３０分間加熱する。得られた材料を５０ｍｌ水で処理し、濾過し、２０ｍｌ冷メタノールおよび２０ｍｌ冷エステルで洗浄する。生成物をＤＭＦ／水からの結晶化により洗浄する。

参考−１

淡黄色固体結晶材料。収率５７％。融点２５３〜５℃。Ｒ_f（クロロホルム−メタノール；１０／１）−０．８（シリカゲル６０）。ＭＳｍ／ｚ３０２（Ｍ⁺）。

参考実施例２：４−アミノ−３−（フェニルアミノ）−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（代替製造）

１１５℃で２．５時間予め乾燥させたベンズアミジン塩酸塩５．２２ｇを、ナトリウムメチラート１．７４ｇのメタノール１００ｍｌ中溶液にゆっくり添加し、室温で３０分間撹拌する。有機白色沈殿を濾過して取り除いた後、ｎ−ブタノール３．５ｍｌを添加し、体積を真空中で３ｍｌに減少させる。残渣は白っぽい油であり、ベンズアミジン４．０ｇに相当する。これを次の反応ステップに直ちに使用する。

５−アミノ−４−シアノ−３−（フェニルアミノ）−ピラゾール（６．０ｇ；粉末参考−１）をｎ−ブタノール１０ｍｌに溶解し、ｎ−ブタノール３ｍｌ中ベンズアミジン４．０ｇを室温で添加する。反応を８５℃で２０時間にわたって行う。最後に、溶液を冷却し、黄色沈殿を濾過して取り除き、ブタノール５ｍｌおよびトルエン５ｍｌで洗浄する。

収率：６８％
特性：融点：２６５〜２６７℃（テトラヒドロフラン）；ＭＳ（ｍ／ｚ）３０２（Ｍ⁺）；¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ１２．３８（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）、８．３０〜８．３６（２Ｈ、ｑ、２ＣＨ）、８．２３（１Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ）、７．６７（２Ｈ、ｄ、２ＣＨ）、７．４８（２Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ₂）、７．４２（３Ｈ、ｍ、３ＣＨ）、７．１２（２Ｈ、ｄ、２ＣＨ）および６．９８（１Ｈ、ｍ、ＣＨ）ｐｐｍ；元素分析Ｃ₁₇Ｈ₁₄Ｎ₆：計算％：Ｃ、６７．５４；Ｈ、４．６７；Ｎ，２７．８０；実測％：Ｃ、６７．４９；Ｈ、４．５３；Ｎ、２７．７４。

参考実施例３：４−アミノ−３−（４−クロロフェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

（３−Ｎ−（４−クロロフェニル）−６−フェニル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）

参考−３

参考実施例４：４−アミノ−３−（３，４−ジフルオロフェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（３−Ｎ−（３，４−ジフルオロフェニル）−６−フェニル−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）

参考−４

参考実施例５：４−アミノ−３−［（４−フルオロフェニル）アミノ］−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

参考−５

化合物参考−５は、参考実施例２に示したものと同様に製造するが、ここでは５−アミノ−４−シアノ−３−［（４−フルオロフェニル）アミノ］−ピラゾールを原材料として使用したので、淡黄色結晶沈殿を形成した。

収率：７０％
特性：融点：２６２〜２６３℃（ＴＨＦ／トルエン）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２０（Ｍ’）；¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ１２．６９（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）、８．３３〜８．４１（４Ｈ、ｍ、４ＣＨ）、８．１８（１Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ）、７．５８〜７．６５（５Ｈ、ｍ、ＮＨ₂、３ＣＨ）、７．２７〜７．３１（２Ｈ、ｎ、２ＣＨ）ｐｐｍ；元素分析Ｃ₁₇Ｈ₁₄ＦＮ₆：計算％：Ｃ、６３．７４；Ｈ、４．０９；Ｎ、２６．２４；実測％：Ｃ、６３．８１；Ｈ、４．１１；Ｎ、２６．２７。

参考実施例６：４−アミノ−３−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

参考−６

化合物参考−６は、参考実施例２で得たものと同様に製造するが、ここでは５−アミノ−４−シアノ−３−［（３−フルオロフェニル）アミノ］−ピラゾールを原材料として使用したので、淡黄色結晶沈殿を形成した。

収率：７６％
特性：融点：２７８〜２７９℃（ＴＨＦ／トルエン）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３２０（Ｍ⁺）；¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ１２．６１（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）、８．３４〜８．４２（２Ｈ、ｑ、２ＣＨ）、８．１４（１Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ）、７．４８（２Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ₂）、７．３〜７．４３（６Ｈ、ｍ、６ＣＨ）、６．６０（１Ｈ、ｓ、ＣＨ）ｐｐｍ；元素分析Ｃ₁₇Ｈ₁₄ＦＮ₆：計算％：Ｃ、６３．７４；Ｈ、４．０９；Ｎ、２６．２４；実測％：Ｃ、６３．８１；Ｈ、４．１１；Ｎ、２６．２７。

４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＣＲＣＶ−３４０）

（６−フェニル−３−Ｎ−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）

対応する置換前駆体化合物を使用して、参考実施例１に記載のように製造を行った。

ＣＲＣＶ−３４０

４−アミノ−６−フェニル−３−［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］アミノ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

化合物ＣＲＣＶ−３４０も、参考実施例２に示す反応スケジュールと同様に製造したので、淡黄色結晶沈殿を形成した。

収率：５８％
特性：融点：３１３〜３１４℃（ＴＨＦ／トルエン）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３７０（Ｍ⁺）；¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ１２．７７（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）、８．９１（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）、８．４７（２Ｈ、ｓ、ＮＨ₂）、７．８１、７．７９、７．６３、７．５８および７．４７（９Ｈ、ｍ、Ｃ₆Ｈ₄およびＣ₆Ｈ₅）ｐｐｍ；元素分析Ｃ₁₈Ｈ₁₃Ｆ₃Ｎ₆：計算％：Ｃ、５８．３８；Ｈ、３．５４；Ｎ、２２．６９；実測％：Ｃ、５８．４１；Ｈ、３．５８；Ｎ、２２．７４；ＨＰＬＣ：９９．３０％（ＳａｕｌｅＬｕｎａＣ１８（２）、アセトニトリル／水−９０：１０、流れ０．６ｍｌ／分、ＵＶ２５４ｎｍ；ｔ_R＝５．３分）

４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−［４−（トリフルオロメトキシ）−フェニル］ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン（ＭＳ−１１２）

（３−Ｎ−フェニル−６−［４−（トリフルオロメトキシ）フェニル］−２Ｈ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン−３，４−ジアミン）

ＭＳ−１１２

４−アミノ−６−フェニル−３−［（４−（トリフルオロメトキシ）−フェニルアミノ］−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン

この化合物も、参考実施例２に示す反応スケジュールと同様に製造し、ここでは原材料から５−アミノ−４−シアノ−３−［（４−トルフルオロメトキシフェニル）アミノ］ピラゾールを使用したので、白色結晶沈殿を形成した。

収率：６８％
特性：融点：２６０〜２６２℃（テトラヒドロフラン／ＤＭＦ）；ＭＳ（ｍ／ｚ）：３８６（Ｍ’）；¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）：δ１２．５６（１Ｈ、ｓ、ＮＨ）８．８２（２Ｈ、ｑ、２ＣＨ）、８．１６（１Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ）、７．４８（２Ｈ、ｂｒ．ｓ．、ＮＨ₂）、７．３〜７．４３（４Ｈ、ｍ、Ｃ₆Ｈ₅）、７．０５〜７．１１（２Ｈ、２ｓ、２ＣＨ）、６．９８（１Ｈ、ｍ、ＣＨ）ｐｐｍ；元素分析Ｃ₁₈Ｈ₁₃Ｆ₃Ｎ₆Ｏ：計算％：Ｃ、５５．９６；Ｈ、３．３９；Ｎ、２１．７５；実測％：Ｃ、５６．０７；Ｈ、３．３６；Ｎ、２１．６１。

４−アミノ−６−フェニル−３−［４−（トリフルオロメチル）−フェニル］アミノ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの洗浄

参考実施例２に記載の方法にしたがって合成した乾燥４−アミノ−６−フェニル−３−［（４−トリフルオロメチル）−フェニル］アミノ−ピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン５０ｇを、加温しながらＴＨＦ３００ｍｌに溶解する。この溶液を冷トルエン３００ｍｌで処理する。得られた溶液を冷凍庫中０℃未満の温度で６時間にわたって維持する。黄色結晶の４−アミノ−３−（４−トリフルオロフェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン３６ｇが濾過により得られる。

融点：３１３〜３１４℃（ＴＨＦ／ＤＭＦ）
ＨＰＬＣ：９９．１６％（ＳａｕｌｅＬｕｎａＣ１８（２）、アセトニトリル／水−９０：１０、流れ０．６ｍｌ／分、ＵＶ２５４ｎｍ；ｔ_R＝５．３分）

インビトロでのＯＢＲ５−３４０の代謝についてのＡＤＭＥＴ試験
目的：インビトロでのＯＢＲ５−３４０の吸収、分布、代謝、排出および毒性（ＡＤＭＥＴと略す）を調査すること、ならびに血漿タンパク質結合と血漿および肝ミクロソーム中でのおよび安定性についてのインビトロ試験
試験：ＣＲＣＶ−３４０で行ったインビトロ試験ならびに得られたデータを、参考２と比較して表２に要約する。

表２：参考２と比較したＣＲＣＶ−３４０についてのＡＤＭＥＴ試験の結果の要約

要約：物質ＣＲＣＶ−３４０は、参考−２と比較して、肝ミクロソーム中での優れた安定性ならびに血漿タンパク質の放出増加により特徴付けられる。

マウスにおけるＣＲＣＶ−３４０の薬物動態の検査
目的：ＣＲＣＶ−３４０についての薬物動態データを回収すること。
試験：物質および参考物質を、１０％Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ溶液０．５ｍｌ中、１００ｍｇ／ｋｇＫＧの濃度でマウスに経口的にそれぞれ１回施用した。０．５、１、２、３、４、５、６および７時間後、血清を採取し、ＨＰＬＣ分析により、マウスの血漿中のＣＲＣＶ−３４０、参考−２および参考−３の濃度を測定した。

ＨＰＬＣにより測定した血漿中の物質濃度を使用して、物質の薬物動態パラメータを、コンピュータプログラムＥＳＴＲＩＰを用いて計算した（表３）。

表３：マウスにおける１００ｍｇ／ｋｇＣＲＣＶ−３４０、参考−２および参考−３の単回胃内施用後の薬物動態データ

Ｃ_max 血中最大濃度
Ｔ_max 血中最大濃度に達するまでの時間
ＭＲＴ平均滞留時間
Ｔ_1/2 半減期
Ｋ_el 排出速度定数
ＣＬクリアランス
Ｖ_d 分布容積
ＡＵＣ曲線下面積
Ｃ_max／ＡＵＣ胃から血液への吸収速度
結果：ＣＲＣＶ−３４０についてのマウスにおける薬物動態についての試験により、参考−２および参考−３よりも有意に優れた生物学的利用能が得られた。

マウスにおけるＣＲＣＶ−３４０の急性毒性についての試験
目的：ＣＲＣＶ−３４０の５０％致死量を決定すること。
試験：物質ＣＲＣＶ−３４０の急性毒性を、体重１９．５〜２０．５ｇのマウスで試験した。この物質を、４０、６０、８０または１２０ｍｇ物質／マウス（１物質および１濃度当たり５匹のマウス）で経口投与した。これは、体重１ｋｇ当たり約２ｇ、３ｇ、４ｇまたは６ｇの用量に相当する。結果で認められた毒性効果は、投与した物質量に相関していた。物質を投与した最大３時間後に４０および６０ｍｇ／マウスの用量で、協調障害および活動亢進が副作用として観察された。２つのより高用量の投与後には、呼吸困難、攻撃行動および運動亢進もあった。ＣＲＣＶ−３４０については、３１２０ｍｇ／ｋｇのＬＤ₅₀が決定された（表４）。

表４：マウスにおける単回経口投与後の物質ＣＲＣＶ−３４０の急性毒性についての試験の結果

結果：生存率について得られたデータにより、両試験物質の極めて優れた耐容性が明らかになった。

マウスにおける毒性についての長期試験
目的：２８日間にわたるＣＲＣＶ−３４０の亜急性投与により生じるおそれがある、例えば、全身状態、体重、内臓および代謝に対する可能な副作用を明らかにするために、マウスにおける亜急性毒性を決定すること。
試験：例えば、体重約２０ｇの雄および雌マウスは、チューブを通して胃内投与で１日１回２８日間にわたって、１２．５、５０または２００ｍｇ／ｋｇのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ製剤中物質ＣＲＣＶ−３４０を受け、コントロール群は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒを受けた。実験の全期間中、毛皮および粘膜の状態、***物、ならびに全身状態を評価した。体重の記録は７、１４、２１および２８日に行った。最後の物質投与の約２４時間後、動物の方向感覚を検査した。血清中の以下の生化学的パラメータを分析した：タンパク質含量、尿素、クレアチニン、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、アラニンアミノトランスフェラーゼおよびアルカリホスファターゼの血清活性。ヘモグロビン濃度、ヘマトクリット、赤血球および白血球ならびに血小板の数を血液塗抹標本で測定した。実験の最後に、マウスを麻酔下でと殺および解剖し、内臓の状態を巨視的に評価し、臓器重量を決定し、その後の組織学的試験用の試料をホルマリンに漬け込んだ。

結果要約：結果は、検査した物質濃度の極めて優れた耐容性を証明した。動物の全身状態、毛皮、***物も方向感覚または可動性のいずれも与えられた物質の結果として変化しなかった。また、体重動力学に関して、ＣＲＣＶ−３４０で処置した動物は、コントロール群と異ならなかった。生化学的血液パラメータの点で、血液塗抹標本において物質で処置した試験群と媒体処置群との間に差はなかった。内臓（肝臓、腎臓、心臓、肺、脾臓、膵臓および精巣）の巨視的評価、臓器の重量ならびに心臓、肺、肝臓、脾臓、胸腺、膵臓、腎臓、腺、精巣、胃および腸組織試料の組織学試験の結果にも同じことが当てはまる（結果不掲載）。

ライノウイルスに対する抗ウイルススペクトルの決定
目的：５０種の異なるヒトライノウイルス血清型およびＣＶＢ３患者分離株に関するＣＲＣＶ−３４０の抗ウイルス有効スペクトルを決定すること。
試験：５０種のＨＲＶ血清型および２０種の臨床ＣＶＢ３分離株を、ＨｅＬａ、ＨｅＬａＷｉｓおよび／またはＬＦ細胞で増殖させ、その力価を決定し、配列決定を使用して血清型を確認した。こうして、ＨＲＶを用いたｚｐＥ（細胞変性（ｚｙｔｏｐａｔｈｉｓｃｈｅｒ）効果）阻害試験またはＣＶＢ３分離株を用いたプラーク減少試験を確立した。対応する抗ウイルス試験では、参考−３およびＣＲＣＶ−３４０を用いた用量効果試験を行った。表５および６は、平均５０％阻害濃度の概要を説明する。

表５：ＨＲＶに関する参考−３およびＣＲＣＶ−３４０の有効スペクトルの概説。全５０種の試験した血清型ならびに４５種のプレコナリル感受性および５種のプレコナリル耐性血清型についての平均値および標準偏差を別々に要約した。

表６：臨床ＣＶＢ３−分離株に関する参考−３およびＣＲＣＶ−３４０の有効スペクトルの概説。全２０種の試験した分離株ならびに１９種のプレコナリル感受性分離株および１種のプレコナリル耐性血清型についての平均値および標準偏差を別々に要約した。

*最大試験濃度１３．５μＭ
結果要約：ＨＲＶに関するＣＲＣＶ−３４０の有効スペクトルは、参考−３と比較して有意に広かった。

ＣＶＢ３−誘発型慢性心筋炎のマウスモデルにおけるインビボでの抗ウイルス効果の試験

目的：マウスモデルにおけるＣＲＣＶ−３４０の抗ウイルス効果を確認すること。
試験：ＣＲＣＶ−３４０の効果を、８週齢雄ＮＭＲＩマウスのＣＶＢ３−誘発型心筋炎のモデルで試験した。さらに、ＣＶＢ３３１−１−９３またはＣＶＢ３Ｈ３−感染動物に、水（プラセボ）中１％ＣＭＣ中５０％または２０％ＰＥＧ−４００中１００ｍｇ／ｋｇの物質を１日１回または２回、７日間にわたって投与した。治療効果を評価するためのパラメータには、体重、全身状態、心臓および膵臓組織におけるウイルス力価の変化ならびに心臓および膵臓における病理組織学的変化が含まれていた。感染の経過にわたって、偽感染、プラセボ処置またはＣＲＣＶ−３４０処置動物がネガティブコントロールとして作用し、感染、プラセボ−またはプレコナリル処置動物がポジティブコントロールとして作用する。

結果要約：プラセボおよびプレコナリルと対照的に、ＣＲＣＶ−３４０は、ＮＭＲＩ−マウスのＣＶＢ３３１−１−９３−誘発型慢性心筋炎のモデルで有効であった。プロセスにおいて、全ての試験したパラメータ（ｐ．ｉ．７日での体重、全身状態、心臓および膵臓組織におけるウイルス力価、ｐ．ｉ．７日および２１日での心臓および膵臓の組織病理学）についての臨床的および統計的に有意な効果が認められた。

参考物質プレコナリルと比較した致死マウスモデルにおけるＣＲＣＶ−３４０のインビボ有効性についての試験

目的：致死マウスモデルにおけるＣＲＣＶ−３４０の抗ウイルス効果を検証すること。
試験：開発候補薬ＣＲＣＶ−３４０の効果を、６〜７週齢雄ＢＡＬＢ／ｃマウスのＣＶＢ−誘発型心筋炎のモデルで感染量の試験後に試験した。さらに、ＣＶＢ３３１−１−９３またはＣＶＢ３Ｈ３−感染動物に、水（プラセボ）中１％ＣＭＣ中２０％ＰＥＧ−４００中１００ｍｇ／ｋｇの物質を１日２回、７日間にわたって投与した。体重、全身状態、代用マーカー、体重の２５％損失を通して定義される致死率が、治療効果を評価するためのパラメータとして作用した。感染の経過にわたって、偽感染、プラセボ−処置またはＣＲＣＶ−３４０−処置動物がネガティブコントロールを表し、感染、プラセボ−またはプレコナリル−処置動物がポジティブコントロールを表した。

結果要約：プラセボおよびプレコナリルと対照的に、ＣＲＣＶ−３４０は、ＣＶＢ３３１−１−９３の感染後の致死ＢＡＬＢ／ｃマウスモデルで有効であった。プロセスにおいて、全ての試験したパラメータ（体重、全身状態ならびに致死率）についての臨床的および統計的に有意な効果が認められた。

Claims

下記一般式の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン、またはその薬学的に許容される塩、またはそのプロファルマコンであって、一位のピラゾールヘテロ原子がイミノ（フェニル）メチル置換基により置換された化合物であるプロファルマコン。
請求項１記載の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンを含む医薬組成物。
薬学的に許容される担体も含む、請求項２に記載の医薬組成物。
１種または数種の他の有効成分も含む、請求項２または３に記載の医薬組成物。
前記１種または数種の他の有効成分が抗ウイルス剤である、請求項４に記載の医薬組成物。
薬学的に許容される担体による請求項１記載の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンの製剤化を含む、医薬組成物を製造する方法。
薬物として使用するための、請求項１記載の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン。
ウイルス感染症の予防的または治療的処置に使用するための、請求項１記載の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン。
前記ウイルス感染症がピコルナウイルス感染症であるという事実により特徴付けられる、請求項８に記載の４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン。
極性有機溶媒中での、遊離塩基のベンズアミジンによる５−アミノ−４−シアノ−３−フェニルアミノピラゾールの変換を含む、４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンを製造する方法。
前記４−アミノ−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジンが、次いで、テトラヒドロフランまたはその水もしくは有機溶媒との混合物を使用した再結晶により、あるいはテトラヒドロフランと水または有機溶媒中熱溶液を使用した沈殿により再結晶される、請求項１０に記載の方法。