JP6050227B2 - 多価糖ペプチド構築物およびその使用 - Google Patents

多価糖ペプチド構築物およびその使用 Download PDF

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１０年６月１１日出願の米国特許仮出願第６１／３５３，７２２号に対する優先権を主張し、その全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
政府支援
本発明は、国立衛生研究所によって授与された助成金番号ＣＡ２８８２４およびＰＯ１ＣＡ０５２４７７のもとに米国政府支援を受けて行われた。米国政府は、本発明においてある種の権利を有する。
悪性の形質転換細胞が、多くの場合、正常かつ健常な細胞と腫瘍細胞を特徴的に区別するのに役立つ特徴として、異常なレベルおよび種類の表面グリコシル化を示すことが良く知られている。腫瘍細胞表面上のこの異常なグリコシル化パターンは、腫瘍免疫学者が癌治療処置用の炭水化物ベースの抗癌ワクチンを開発する潜在的な機会を提供する。免疫系への腫瘍関連炭水化物抗原を含有するワクチン構築物の適切な曝露は、相当する抗体の形成を刺激するであろう。これらの抗体は、次いで、それらの炭水化物エピトープを過剰発現する腫瘍細胞に選択的に結合し、かつそれらを根絶する助けとなるであろう。
このような目的で、合成化学者および癌免疫学者は、癌免疫療法に効果的な炭水化物ベースの抗癌ワクチンの開発を目指している。近年、この分野における重要な進歩が、他の人々（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３、非特許文献４、非特許文献５、非特許文献６、非特許文献７、非特許文献８）、ならびに出願人（非特許文献９、非特許文献１０、非特許文献１１、非特許文献１２）によって報告されている。
Ｉｎｇａｌｅ，Ｓ．、Ｗｏｌｆｅｒｔ，Ｍ．Ａ．、Ｇａｅｋｗａｄ，Ｊ．、Ｂｕｓｋａｓ，Ｔ．、Ｂｏｏｎｓ，Ｇ．−Ｊ．Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２００７，３，６６３ Ｂｕｓｋａｓ，Ｔ．、Ｉｎｇａｌｅ，Ｓ．、Ｂｏｏｎｓ，Ｇ．−Ｊ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００５，４４，５９８５ Ｋｕｎｚ，Ｈ．、Ｄｚｉａｄｅｋ，Ｓ．、Ｗｉｔｔｒｏｃｋ，Ｓ．、Ｂｅｃｋｅｒ，Ｔ．ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ２００８，９８９（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−Ｂａｓｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ），２９３ Ｗｅｓｔｅｒｌｉｎｄ，Ｕ．、Ｈｏｂｅｌ，Ａ．、Ｇａｉｄｚｉｋ，Ｎ．、Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｅ．、Ｋｕｎｚ，Ｈ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００８，４７，７５５１ Ｗｉｔｔｒｏｃｋ，Ｓ．、Ｂｅｃｋｅｒ，Ｔ．、Ｋｕｎｚ，Ｈ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，４６，５２２６−５２３０ Ｄｚｉａｄｅｋ，Ｓ．、Ｂｒｏｃｋｅ，Ｃ．、Ｋｕｎｚ，Ｈ．Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２００４，１０，４１５０ Ｈｅｒｍａｎｓ，Ｉ．Ｆ．、Ｓｉｌｋ，Ｊ．Ｄ．、Ｇｉｌｅａｄｉ，Ｕ．、Ｓａｌｉｏ，Ｍ．、Ｍａｔｈｅｗ，Ｂ．、Ｒｉｔｔｅｒ，Ｇ．、Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｒ．、Ｈａｒｒｉｓ，Ａｄｒｉａｎ Ｌ．、Ｏｌｄ，Ｌ．、Ｃｅｒｕｎｄｏｌｏ，Ｖ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３，１７１，５１４０ Ｓｃｈｍｉｄｔ，Ｒ．Ｒ．、Ｃａｓｔｒｏ−Ｐａｌｏｍｉｎｏ，Ｊ．Ｃ．、Ｒｅｔｚ，Ｏ．Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．１９９９，７１、７２９ Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．、Ｂｉｌｏｄｅａｕ，Ｍ．Ｔ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．１９９６，３５，１３８０ Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．、Ａｌｌｅｎ，Ｊ．Ｒ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．２０００，３９，８３６ Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ−Ｂａｓｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ２００３，１，３８１ Ｗａｒｒｅｎ，Ｊ．Ｄ．、Ｇｅｎｇ，Ｘ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｔｏｐ．Ｃｕｒｒ．Ｃｈｅｍ．２００７，２６７，１０９
上に記載され、かつ本明細書に記載の他の参考文献に記載されるように、いくつかの合成構築物が近年開発されているが、より持続的または効果的（かつ好ましくは選択的）な免疫応答を誘発することのできる新規の構築物を開発するためのさらなる研究の必要性が未だ存在する。明らかに、この目標を達成する目的で、免疫原性応答を誘導するための新しい組成物および方法、ならびに癌治療のために改善された方法および／または新規の方法を開発することは有用であろう。
実施例１に示される五価ＫＬＨ構築物２で免疫されたマウスからのＥＬＩＳＡ力価データを示す。マウスは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈセラミド、ＧＭ２セラミド、ＳＴｎ（ＯＳＭ）、ＴＦ（ｄＰＳＭ）、およびＴｎ（ｄＯＳＭ）を含む炭水化物抗原の全てに対応する抗体のかなりの力価を産生した。 Ｇｂ５糖アミノ酸の合成のための合成スキームを示す。 Ｇｂ５糖アミノ酸の合成のための合成スキームを示す。 Ｇｂ５−脂質化合物４−４の合成スキームを示す。 五価ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ化合物の合成のための合成スキームを示す。 五価ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ化合物の合成のための合成スキームを示す。 五価ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ化合物の合成のための合成スキームを示す。 五価ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ化合物Ｇ−１の１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
（項目１）
癌に罹患する対象における癌を治療する方法であって、前記対象に、治療的に有効な量の免疫原性複合糖質を投与することを含み、前記免疫原性複合糖質は、少なくとも５つのアミノ酸残基で構成されるペプチド骨格を有する多抗原性糖ペプチドを含み、前記アミノ酸のうちの５つ以上は、独立して、以下の構造を有し、


式中、
Ｌ １ は、置換または非置換の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分であり、
Ａは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、
少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５またはＧＭ２である、
方法。
（項目２）
前記糖ペプチドは、５〜７つのＡが出現する、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記糖ペプチドは、７つのＡが出現する、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記糖ペプチドは、６つのＡが出現する、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記糖ペプチドは、５つのＡが出現する、項目１に記載の方法。
（項目６）
それぞれのＡの出現が異なる、項目５に記載の方法。
（項目７）
それぞれのＬ １ は、独立して、以下の構造を有するアミノ酸を提供する−ＣＨ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ Ｏ−であり、


式中、それぞれのｎは、独立して、１〜８である、項目１に記載の方法。
（項目８）
それぞれのｎは、独立して、３〜５である、項目７に記載の方法。
（項目９）
それぞれのｎは、独立して、３または５である、項目８に記載の方法。
（項目１０）
Ｌ １ は、−Ｏ−（ＣＨＭｅ）−または−Ｏ−ＣＨ ２ −ではない、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記治療的に有効な量は、腫瘍成長を阻害するのに有効な量を含む、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記治療的に有効な量は、前記炭水化物決定基のうちの少なくとも１つを認識する抗体を誘発するのに有効な量を含む、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記治療的に有効な量は、前記炭水化物抗原のそれぞれを認識する抗体を誘発するのに有効な量を含む、項目１２に記載の方法。
（項目１４）
前記治療的に有効な量は、１つ以上の固形腫瘍を治療するのに有効な量である、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記癌は、乳癌または前立腺癌である、項目１４に記載の方法。
（項目１６）
前記癌は、卵巣癌である、項目１４に記載の方法。
（項目１７）
前記癌は、腹膜癌である、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記癌は、卵管癌である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記癌は、上皮癌である、項目１４に記載の方法。
（項目２０）
前記対象は、臨床的寛解期にあるか、または前記対象が手術によって治療された場合、限定された切除不能な疾患を有する、項目１に記載の方法。
（項目２１）
前記糖ペプチドは、免疫原性担体タンパク質、ペプチド、または脂質に直接または間接的に結合される、項目１に記載の方法。
（項目２２）
前記免疫原性担体は、ウシ血清アルブミン、ポリリジン、キーホールリンペットヘモシアニン、またはトリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリンである、項目２１に記載の方法。
（項目２３）
前記方法は、１つ以上の免疫学的アジュバントを同時投与することをさらに含む、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、サポニンアジュバントである、項目２３に記載の方法。
（項目２５）
前記アジュバントは、ＱＳ−２１である、項目２３に記載の方法。
（項目２６）
前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、細菌またはリポソームである、項目２３に記載の方法。
（項目２７）
前記アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞またはカルメット・ゲラン桿菌である、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記方法は、薬学的に好適な担体を同時投与することをさらに含む、項目１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記複合糖質は、以下の構造を有し、

式中、
それぞれのＲ １ は、独立して、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖であり、
Ｒ ２ は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ ｃ は、免疫原性担体であり、
前記クロスリンカーは、前記リンカー上の反応部分を前記免疫原性担体上の反応部分と接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分であり、
前記リンカーは、共有結合、２〜約２０個のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２〜約２０個のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ １〜２０ 飽和もしくは不飽和の線状もしくは分岐した炭化水素鎖であり、前記鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−ＣＲ ２ −、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ ２ −、−ＳＯ ２ Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ ２ ）−によって置換され、
それぞれのＲは、独立して、水素または任意で置換されたＣ １〜６ 脂肪族基であり、
ｍは、５〜２０であり、
ｐは、０〜１００であり、
ｑは、０または１であり、
ｔは、前記免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数である、
項目１に記載の方法。
（項目３０）
ｍは、５〜７である、項目２９に記載の方法。
（項目３１）
ｍは、５である、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
ｐは、０である、項目２９に記載の方法。
（項目３３）
ｔは、５０〜１２００である、項目２９に記載の方法。
（項目３４）
ｔは、２００〜８００である、項目３３に記載の方法。
（項目３５）
ｔは、少なくとも３００である、項目３３に記載の方法。
（項目３６）
ｔは、少なくとも４００である、項目３５に記載の方法。
（項目３７）
ｔは、少なくとも５００である、項目３６に記載の方法。
（項目３８）
ｔは、５００〜８００である、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
それぞれのＡの出現が異なる、項目２９に記載の方法。
（項目４０）
前記複合糖質は、以下の構造を有する、項目２９に記載の方法。

（項目４１）
ｍは、５である、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
ｎは、３〜５である、項目４０に記載の方法。
（項目４３）
それぞれのＡは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、それぞれのＡの出現が異なる、項目４０に記載の方法。
（項目４４）
それぞれのＡは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基であり、それぞれのＡの出現が異なる、項目４０に記載の方法。
（項目４５）
前記クロスリンカーは、前記担体の表面アミンと前記リンカーのチオールを接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分である、項目２９に記載の方法。
（項目４６）
前記クロスリンカーは、以下の構造を有する部分であり、


それによって、前記構造が、マレイミド安息香酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルとリンカーとの接合時に生成される、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記リンカーは、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ １〜１０ 飽和もしくは不飽和の線状もしくは分岐した炭化水素鎖であり、前記鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−Ｓ−、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、または−Ｃ（Ｏ）−によって置換される、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ ２ ） ２−５ ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ ２ Ｓ−である、項目４７に記載の方法。
（項目４９）
前記リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ ２ ） ３ ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ ２ Ｓ−である、項目４８に記載の方法。
（項目５０）
前記複合糖質は、以下の構造を有し、

式中、ｔは、前記免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数である、項目１または４０に記載の方法。
（項目５１）
前記複合糖質は、以下の構造を有し、

式中、ｔは、前記免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数である、項目１または４０に記載の方法。
（項目５２）
対象における抗体を誘導する方法であって、前記抗体は、ヒト腫瘍細胞に特異的に結合することができ、前記方法は、前記対象に、免疫原性複合糖質を投与することを含み、前記免疫原性複合糖質は、少なくとも５つのアミノ酸残基で構成されるペプチド骨格を有する多抗原性糖ペプチドを含み、前記アミノ酸のうちの５つ以上は、独立して、以下の構造であり、


式中、
Ｌ １ は、置換または非置換の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分であり、
Ａは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、
少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５またはＧＭ２である、
方法。
（項目５３）
誘導された前記抗体は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される前記炭水化物決定基のうちの少なくとも１つを認識する、項目５２に記載の方法。
（項目５４）
生成された前記抗体は、前記糖ペプチド上に存在する前記炭水化物決定基のそれぞれを認識する、項目５２に記載の方法。
（項目５５）
（ａ）架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質を提供するために、免疫原性担体タンパク質を、架橋剤とともにインキュベートするステップと、
（ｂ）チオール含有生体分子を、好適なジスルフィド還元試薬で処置するステップと、
（ｃ）免疫原性担体タンパク質−生体分子接合体を提供するために、好適な条件下で、前記架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質を、前記チオール含有生体分子と合わせるステップと、
を含む、方法。
（項目５６）
架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質との接合の前に、チオール含有生体分子を新たに調製するステップをさらに含む、項目５５に記載の方法。
（項目５７）
（ａ）チオール含有生体分子を、好適なジスルフィド還元試薬で処置するステップと、
（ｂ）架橋の準備が整った生体分子を提供するために、前記チオール含有生体分子を、架橋剤とともにインキュベートするステップと、
（ｃ）免疫原性担体タンパク質−生体分子接合体を提供するために、好適な条件下で、前記架橋の準備が整った生体分子を、免疫原性担体タンパク質と合わせるステップと、
を含む、方法。
（項目５８）
好適なジスルフィド還元試薬での処置の前に、チオール含有生体分子を新たに調製するステップをさらに含む、項目５７に記載の方法。
（項目５９）
前記生体分子は、糖ペプチドである、項目５５または５７に記載の方法。
（項目６０）
ステップ（ａ）において、未反応の架橋剤を除去するステップをさらに含む、項目５５に記載の方法。
（項目６１）
接合ステップ（ｃ）後に、未反応の生体分子を除去するステップをさらに含む、項目５５に記載の方法。
（項目６２）
前記免疫原性担体タンパク質は、ＫＬＨである、項目５５に記載の方法。
（項目６３）
前記チオール含有生体分子は、糖ペプチドである、項目５５に記載の方法。
（項目６４）
前記架橋剤は、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドである、項目５５に記載の方法。
（項目６５）
チオール含有生体分子を、好適なジスルフィド還元試薬で処置する前記ステップは、ＴＣＥＰを含む、項目５５に記載の方法。
（項目６６）
１つの免疫原性担体タンパク質につき少なくとも２００個の生体分子の接合効率を有する、項目５５または５７に記載の方法。

（項目６７）
１つの免疫原性担体タンパク質につき、少なくとも４００個の生体分子の接合効率を有する、項目６６に記載の方法。
（項目６８）
１つの免疫原性担体タンパク質につき、少なくとも５００個の生体分子の接合効率を有する、項目６７に記載の方法。
（項目６９）
１つの免疫原性担体タンパク質につき、２００〜８００個の生体分子の接合効率を有する、項目６６に記載の方法。
（項目７０）
以下の構造を有する複合糖質であって、

式中、
それぞれのＡは、独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基であり、
それぞれのＬ １ は、独立して、置換または非置換の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分であり、
それぞれのＲ １ は、独立して、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖であり、
Ｒ ２ は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ ｃ は、免疫原性担体であり、
前記クロスリンカーは、前記リンカー上の反応部分を前記免疫原性担体上の反応部分と接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分であり、
前記リンカーは、共有結合、２〜約２０個のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２〜約２０個のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ １〜２０ 飽和もしくは不飽和の線状または分岐した炭化水素鎖であり、前記鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−ＣＲ ２ −、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ ２ −、−ＳＯ ２ Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ ２ ）−によって置換され、
それぞれのＲは、独立して、水素、またはＣ １〜６ 脂肪族、フェニル、３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の炭素環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の単環複素環、もしくは窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基であり、
ｍは、５〜２０であり、
ｐは、０〜２０であり、
ｑは、０または１であり、
ｔは、前記免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数であり、２００より大きい、
複合糖質。
（項目７１）
少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、またはＧＭ２から選択される、項目７０に記載の接合体。
（項目７２）
それぞれのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、またはＧＭ２から選択される、項目７０に記載の接合体。
（項目７３）
それぞれのＡの出現が異なる、項目７０に記載の接合体。
（項目７４）
少なくとも１つのＡの出現は、二糖類以上の炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目７５）
それぞれのＡの出現は、二糖類以上の炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目７６）
少なくとも１つのＡの出現は、三糖類以上の炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目７７）
それぞれのＡの出現は、三糖類以上の炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目７８）
少なくとも１つのＡの出現は、３５０ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目７９）
少なくとも１つのＡの出現は、５００ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目８０）
少なくとも１つのＡの出現は、７５０ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む、項目７０に記載の接合体。
（項目８１）
少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｇｂ５、またはＧＭ２である、項目７０に記載の接合体。
（項目８２）
ｔは、４００より大きい、項目７０に記載の接合体。
（項目８３）
ｔは、５００より大きい、項目８２に記載の接合体。
（項目８４）
ｔは、２００〜１２００である、項目７０に記載の接合体。
（項目８５）
以下の構造を有する糖ペプチドであって、

式中、
それぞれのＡは、独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基であり、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、
それぞれのＬ １ は、独立して、置換または非置換の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分であり、
それぞれのＲ １ は、独立して、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖であり、
Ｒ ２ は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ ３ は、水素または免疫原性担体であり、
前記クロスリンカーは、前記リンカー上の反応部分を前記免疫原性担体上の反応部分と接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分であり、
前記リンカーは、共有結合、２〜約２０個のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２〜約２０個のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ １〜２０ 飽和もしくは不飽和の線状または分岐した炭化水素鎖であり、前記鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−ＣＲ ２ −、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ ２ −、−ＳＯ ２ Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ ２ ）−によって置換され、
それぞれのＲは、独立して、水素、またはＣ １〜６ 脂肪族、フェニル、３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の炭素環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の単環複素環、もしくは窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基であり、
ｍは、５〜２０であり、
ｐは、０〜２０であり、
ｑは、０または１である、
糖ペプチド。
（項目８６）
ｍは、５〜７である、項目８５に記載の糖ペプチドまたは複合糖質。
（項目８７）
ｐは、０である、項目８５に記載の糖ペプチドまたは複合糖質。
（項目８８）
それぞれのＡは、Ｇｂ５、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、およびＴＦからなる群から選択される炭水化物決定基である、項目８５に記載の糖ペプチドまたは複合糖質。
（項目８９）
それぞれのＡの出現が異なる、項目８８に記載の糖ペプチドまたは複合糖質。
（項目９０）
以下の構造を有し、

式中、ｔは、ＫＬＨに付着した糖ペプチド基の数である、項目８８に記載の複合糖質。
（項目９１）
項目７０〜９０のいずれか一項に記載の糖ペプチドまたは複合糖質を含む薬学的組成物であって、薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物。
定義
本開示のある特定の化合物、および特定の官能基の定義が、以下により詳細に記載される。本開示の目的のために、化学元素は、ＣＡＳバージョンの元素周期表、化学および物理学のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ；第７５版、内表紙）に従って同定され、特定の官能基は、概して、それらの中で記載されるように定義される。さらに、有機化学の一般的な原理、ならびに特定の官能基および反応性は、「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ，Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９）に記載されており、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用されるとき、別途示されない限り、以下の定義が適用されるものとする。
本明細書で使用される「脂肪族」または「脂肪族基」という用語は、完全に飽和もしくは１つ以上の単位の不飽和を含有する、直鎖（すなわち、非分岐）もしくは分岐した、置換もしくは非置換の炭化水素鎖、または完全に飽和もしくは１つ以上の単位の不飽和を含有するが、芳香族ではなく（本明細書において、「炭素環」、「シクロ脂肪族」、または「シクロアルキル」とも称される）、残りの分子への付着の単一点を有する単環式炭化水素もしくは二環式炭化水素を意味する。別途特定されない限り、脂肪族基は、１〜１２個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、１〜６個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、脂肪族基は、１〜５個の脂肪族炭素原子を含有する。他の実施形態では、脂肪族基は、１〜４個の脂肪族炭素原子を含有する。さらに他の実施形態では、脂肪族基は、１〜３個の脂肪族炭素原子を含有し、さらなる他の実施形態では、脂肪族基は、１〜２個の脂肪族炭素原子を含有する。いくつかの実施形態において、「シクロ脂肪族」（または「炭素環」もしくは「シクロアルキル」）は、完全に飽和または１つ以上の不飽和単位を含有するが、芳香族ではなく、残りの分子への付着の単一点を有する、単環式Ｃ３〜Ｃ６炭化水素を指す。好適な脂肪族基は、線状もしくは分岐した、置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル基、および（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、または（シクロアルキル）アルケニル等のそれらの混成体を含むが、それらに限定されない。
「低級アルキル」という用語は、Ｃ１〜４線状または分岐したアルキル基を指す。例示的な低級アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、およびｔｅｒｔ−ブチルである。
「低級ハロアルキル」という用語は、１つ以上のハロゲン原子と置換されるＣ１〜４線状または分岐したアルキル基を指す。
「ヘテロ原子」という用語は、酸素、硫黄、窒素、リン、またはシリコン（窒素、硫黄、リン、もしくはシリコンの任意の酸化形態；任意の塩基性窒素の四級化形態；または複素環の置換可能な窒素、例えば、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおいて見られるような）、ＮＨ（ピロリジニルにおいて見られるような）、もしくはＮＲ＋（Ｎ−置換ピロリジニルにおいて見られるような）を含む）のうちの１つ以上を意味する。
本明細書で使用される「不飽和」という用語は、１つ以上の不飽和単位を有する部分を意味する。
本明細書で使用される「二価飽和または不飽和の、線状または分岐した炭化水素鎖」という用語は、本明細書に定義される、線状または分岐した二価アルキレン、アルケニレン、およびアルキニレン鎖を指す。
「アルキレン」という用語は、二価アルキル基を指す。「アルキレン鎖」は、ポリメチレン基、すなわち、−（ＣＨ２）ｎ−であり、式中、ｎは、正の整数、好ましくは、１〜６、１〜４、１〜３、１〜２、または２〜３である。置換アルキレン鎖は、１つ以上のメチレン水素原子が置換基で置換されるポリメチレン基である。好適な置換基は、置換脂肪族基について以下に記載されるものを含む。
「アルケニレン」という用語は、二価アルケニル基を指す。置換アルケニレン鎖は、１つ以上の水素原子が置換基で置換される、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。好適な置換基は、置換脂肪族基について以下に記載されるものを含む。
「アルキニレン」という用語は、二価アルキニル基を指す。置換アルキニレン鎖は、１つ以上の水素原子が置換基で置換される、少なくとも１つの二重結合を含有するポリメチレン基である。好適な置換基は、置換脂肪族基について以下に記載されるものを含む。
単独で、またはより大きな部分の一部として使用される「アシル」という用語は、カルボン酸からヒドロキシ基を除去することによって形成される基を指す。
「ハロゲン」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。
「アラルキル」および「アリールアルキル」という用語は、同義に使用され、水素原子がアリール基で置換されたアルキル基を指す。そのような基は、限定なく、ベンジル、シンナミル、およびジヒドロシンナミルを含む。
単独で、または「アラルキル」、「アラルコキシ」、もしくは「アリールオキシアルキル」におけるようなより大きな部分の一部として使用される「アリール」という用語は、合計５〜１４個の環員を有する単環式または二環式環系を指し、系中の少なくとも１つの環は芳香族であり、系中のそれぞれの環は、３〜７個の環員を含有する。「アリール」という用語を、「アリール環」という用語と同義で使用してもよい。
本開示のある特定の実施形態において、「アリール」は、１つ以上の置換基を担持し得るフェニル、ビフェニル、ナフチル、アントラシル等を含むが、それらに限定されない芳香族環系を指す。本明細書において使用されるとき、芳香族環がインダニル、フタルイミジル、ナフチミジル、フェナントリジニル、またはテトラヒドロナフチル等の１つ以上の非芳香族環に融合する基も、「アリール」という用語の範囲内に含まれる
「ヘテロアリール」、および単独で、またはより大きな部分、例えば、「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアラルコキシ」の一部として使用される「ヘテロアラ−」という用語は、５〜１０個の環原子、好ましくは、５、６、または９個の環原子を有し、環式配列において共有される６、１０、または１４個のπ電子を有し、および炭素原子に加えて、１〜５個のヘテロ原子を有する基を指す。「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素、または硫黄を指し、窒素または硫黄の任意の酸化形態、および塩基性窒素の任意の四級化形態を含む。ヘテロアリール基は、限定なく、チエニル、フラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリジニル、プリニル、ナフチリジニル、およびプテリジニルを含む。本明細書で使用される「ヘテロアリール」および「ヘテロアラ−」という用語は、ヘテロ芳香族環が１つ以上のアリール、シクロ脂肪族、またはヘテロシクリル環に融合し、ラジカルまたは付着点がヘテロ芳香族環上にある基も含む。非限定的な例には、インドリル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ−キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、およびピリド［２，３−ｂ］−１，４−オキサジン−３（４Ｈ）−オンが挙げられる。ヘテロアリール基は、単環式または二環式であり得る。「ヘテロアリール」という用語を、それらの用語のうちのいずれかが任意で置換される環を含む、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、または「ヘテロ芳香族」という用語と同義で使用してもよい。「ヘテロアラルキル」および「ヘテロアリールアルキル」という用語は、ヘテロアリール部分によって置換されるアルキル基を指し、アルキルおよびヘテロアリール部分は、独立して、任意で置換される。
本明細書で使用される「ヘテロ脂肪族」という用語は、１個もしくは２個の炭素原子が、独立して、酸素、硫黄、窒素、またはリンのうちの１つ以上によって置換される脂肪族基を意味する。ヘテロ脂肪族基は、置換または非置換、分岐または非分岐、環式または非環式であってもよく、「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクロ脂肪族」、または「複素環」基を含む。
本明細書で使用される「複素環」、「ヘテロシクリル」、「複素環ラジカル」、および「ヘテロシクリル環」という用語は、同義に使用され、飽和または部分的に不飽和のいずれかであり、かつ上で定義されるように、炭素原子に加えて、１個以上、好ましくは、１〜４個のヘテロ原子を有する、安定した５〜７員単環式または７〜１０員二環式複素環部分を指す。複素環の環原子に関して使用されるとき、「窒素」という用語は、置換された窒素を含む。例として、酸素、硫黄、または窒素から選択される０〜３個のヘテロ原子を有する飽和もしくは部分的に不飽和の環において、窒素は、Ｎ（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピロリルにおけるような）、ＮＨ（ピロリジニルにおけるような）、または＋ＮＲ（Ｎ−置換ピロリジニルにおけるような）であり得る。
複素環を、安定した構造をもたらす任意のヘテロ原子または炭素原子でそのペンダント基に付着させることができ、環原子のうちのいずれかを任意で置換することができる。そのような飽和もしくは部分的に不飽和の複素環ラジカルの例には、限定なく、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニルピロリジニル、ピペリジニル、ピロリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オキサゾリジニル、ピペラジニル、ジオキサニル、ジオキソラニル、ジアゼピニル、オキサゼピニル、チアゼピニル、モルホリニル、およびキヌクリジニルが含まれる。「複素環」、「ヘテロシクリル」、「ヘテロシクリル環」、「複素環基」、「複素環部分」、および「複素環ラジカル」という用語は、本明細書において同義に使用され、ヘテロシクリル環が、１つ以上のアリール、ヘテロアリール、またはインドリニル、３Ｈ−インドリル、クロマニル、フェナントリジニル、もしくはテトラヒドロキノリニル等のシクロ脂肪族環に融合し、ラジカルまたは付着点がヘテロシクリル環上にある基も含む。ヘテロシクリル基は、単環式または二環式であり得る。「ヘテロシクリルアルキル」という用語は、ヘテロシクリルによって置換されるアルキル基を指し、アルキルおよびヘテロシクリル部分は、独立して、任意で置換される。
本明細書で使用される「部分的に不飽和」という用語は、少なくとも１つの二重または三重結合を含む環部分を指す。「部分的に不飽和」という用語は、本明細書に定義されるように、複数の不飽和部位を有する環を包含するよう意図されているが、アリールまたはヘテロアリール部分を含むようには意図されていない。
別の態様では、本開示は、本明細書に記載される１つ以上の化合物の治療的に有効な量を含み、１つ以上の薬学的に許容される担体（添加物）および／または希釈剤とともに製剤化される「薬学的に許容される」組成物を提供する。詳細に説明されるように、本開示の薬学的組成物を、固体または液体形態での投与用に特別に製剤化することができ、以下に適したものを含む：例えば、水薬（水溶液もしくは非水溶液または懸濁液）、例えば口腔、舌下、および体内吸収を目的とした錠剤、大丸薬、粉末、顆粒、舌への適用のためのペーストなどの経口投与；例えば滅菌溶液もしくは懸濁液、または持続放出性製剤としての、例えば皮下、筋肉内、静脈内、または硬膜外注入による非経口投与；例えば、クリーム、軟膏、または皮膚、肺もしくは口腔に適用される制御放出性パッチもしくはスプレーなどとしての局所適用；例えばペッサリー、クリームまたは泡などとしての、膣内または直腸内投与；舌下投与；眼内投与；経皮投与；経鼻投与、肺および他の粘膜面への投与。
「薬学的に許容される」という語句は、健全な医学的判断の範囲内であり、妥当な利益対危険比に見合った、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を有しない、ヒトおよび動物の組織との接触における使用に好適な化合物、物質、組成物、および／または剤形を指すために、本明細書において採用される。
本明細書で使用される「薬学的に許容される担体」という語句は、１つの器官または体の一部から別の器官または体の一部への主題の化合物の担持または輸送に関与する、液体または固体充填剤、希釈剤、賦形剤もしくは物質をカプセル化する溶媒等の薬学的に許容される物質、組成物、またはビヒクルを意味する。それぞれの担体は、製剤の他の成分と適合性があり、かつ患者に有害ではないという意味で「許容される」ものでなければならない。薬学的に許容される担体として働くことができる物質のいくつかの例には、例えばラクトース、ブドウ糖、およびショ糖等の糖；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプン等のデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、および酢酸セルロース等のセルロースならびにその誘導体；粉末化トラガカント；麦芽；ゼラチン；滑石；ココアバターおよび坐薬ワックス等の賦形剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、コーン油、および大豆油等の油；プロピレングリコール等のグリコール；グリセリン、ソルビトール、マンニトール、およびポリエチレングリコール等のポリオール；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコール；ｐＨ緩衝液；ポリエステル、ポリカーボネート、および／またはポリ無水物；ならびに薬学的製剤に採用される他の非毒性適合性物質が挙げられる。
別途示されない限り、本明細書に示される構造は、構造の全ての異性体（例えば、鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体配座的））形態、例えば、それぞれの立体中心のＲおよびＳ立体配置、ＺおよびＥ二重結合異性体、ならびにＺおよびＥ立体配座的異性体も含むように意図されている。したがって、単一の立体化学的異性体、ならびに本化合物の鏡像異性、ジアステレオマー、および幾何学的（または立体配座的）混合物は、本開示の範囲内である。別途示されない限り、本開示の化合物の全ての互変異性形態は、本開示の範囲内である。
提供される化合物は、１つ以上のサッカライド部分を含み得る。別途特定されない限り、Ｄ立体配置およびＬ立体配置の両方、ならびにそれらの混合物は、本開示の範囲内である。別途特定されない限り、αおよびβ結合した実施形態、およびそれらの混合物は、本開示によって企図される。
例えば、本開示の化合物の特定の鏡像異性体が所望される場合、それを、不斉合成、キラルクロマトグラフィー、またはキラル補助基での誘導によって調製することができ、結果として得られるジアステレオマー混合物が分離され、補助基が切断されて、純粋な所望の鏡像異性体を提供する。あるいは、分子が、アミノ等の塩基性官能基またはカルボキシル等の酸性官能基を含有する場合、ジアステレオマー塩は、適切な光学活性酸または塩基で形成され、その後に、当技術分野において周知の分別結晶またはクロマトグラフ手段によってそのように形成されるジアステレオマーの分解、次に、純粋な鏡像異性体の回収が続く。
さらに、別途示されない限り、本明細書に示される構造は、１つ以上の同位体濃縮原子の存在においてのみ異なる化合物も含むように意図されている。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置換、または１３Ｃもしくは１４Ｃ濃縮炭素による炭素の置換を含む、本構造を有する化合物は、本開示の範囲内である。そのような化合物は、例えば、本開示に従って、分析手段として、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または治療薬として有用である。
当業者であれば、本明細書に記載の合成法が、様々な保護基を利用することを理解する。本明細書で使用される「保護基」という用語は、特定の官能基、例えば、Ｏ、Ｓ、もしくはＮが、マスクまたはブロックされ、所望の場合、多官能性化合物中の別の反応部位で選択的に実行される反応を可能にすることを意味する。好ましい実施形態において、保護基は、予測される反応に対して安定した保護基質を得るために、高収率で選択的に反応し、保護基は、好ましくは、容易に利用可能な好ましくは他の官能基を攻撃しない非毒性試薬によって選択的に除去可能であり、保護基は、分離可能な誘導体を（より好ましくは、新しい立体中心の生成なしで）形成し、かつ保護基は、好ましくは、さらなる反応部位を回避するために、最低限のさらなる官能性を有する。本明細書に詳述されるように、酸素、硫黄、窒素、および炭素保護基を利用することができる。非限定的な例として、ヒドロキシル保護基は、メチル、メトキシルメチル（ＭＯＭ）、メチルチオメチル（ＭＴＭ）、ｔ−ブチルチオメチル、（フェニルジメチルシリル）メトキシメチル（ＳＭＯＭ）、ベンジルオキシメチル（ＢＯＭ）、ｐ−メトキシベンジルオキシメチル（ＰＭＢＭ）、（４−メトキシフェノキシ）メチル（ｐ−ＡＯＭ）、グアヤコールメチル（ＧＵＭ）、ｔ−ブトキシメチル、４−ペンテニルオキシメチル（ＰＯＭ）、シロキシメチル、２−メトキシエトキシメチル（ＭＥＭ）、２，２，２−トリクロロエトキシメチル、ビス（２−クロロエトキシ）メチル、２−（トリメチルシリル）エトキシメチル（ＳＥＭＯＲ）、テトラヒドロピラニル（ＴＨＰ）、３−ブロモテトラヒドロピラニル、テトラヒドロチオピラニル、１−メトキシシクロヘキシル、４−メトキシテトラヒドロピラニル（ＭＴＨＰ）、４−メトキシテトラヒドロチオピラニル、４−メトキシテトラヒドロチオピラニルＳ，Ｓ−ジオキシド、１−［（２−クロロ−４−メチル）フェニル］−４−メトキシピペリジン−４−イル（ＣＴＭＰ）、１，４−ジオキサン−２−イル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフラニル、２，３，３ａ，４，５，６，７，７ａ−オクタヒドロ−７，８，８−トリメチル−４，７−メタノベンゾフラン−２−イル、１−エトキシエチル、１−（２−クロロエトキシ）エチル、１−メチル−１−メトキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシエチル、１−メチル−１−ベンジルオキシ−２−フルオロエチル、２，２，２−トリクロロエチル、２−トリメチルシリルエチル、２−（フェニルセレニル）エチル、ｔ−ブチル、アリル、ｐ−クロロフェニル、ｐ−メトキシフェニル、２，４−ジニトロフェニル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、３，４−ジメトキシベンジル、ｏ−ニトロベンジル、ｐ−ニトロベンジル、ｐ−ハロベンジル、２，６−ジクロロベンジル、ｐ−シアノベンジル、ｐ−フェニルベンジル、２−ピコリル、４−ピコリル、３−メチル−２−ピコリルＮ−オキシド、ジフェニルメチル、ｐ，ｐ’−ジニトロベンズヒドリル、５−ジベンゾスベリル、トリフェニルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル、ｐ−メトキシフェニルジフェニルメチル、ジ（ｐ−メトキシフェニル）フェニルメチル、トリ（ｐ−メトキシフェニル）メチル、４−（４’−ブロモフェナシルオキシフェニル）ジフェニルメチル、４，４’，４’’−トリス（４，５−ジクロロフタリミドフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（レブリノイルオキシフェニル）メチル、４，４’，４’’−トリス（ベンゾイルオキシフェニル）メチル、３−（イミダゾール−１−イル）ビス（４’，４’’−ジメトキシフェニル）メチル、１，１−ビス（４−メトキシフェニル）−１’−ピレニルメチル、９−アントリル、９−（９−フェニル）キサンテニル、９−（９−フェニル−１０−オキソ）アントリル、１，３−ベンゾジチオラン−２−イル、ベンズイソチアゾリルＳ，Ｓ−ジオキシド、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、トリエチルシリル（ＴＥＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）、ジメチルイソプロピルシリル（ＩＰＤＭＳ）、ジエチルイソプロピルシリル（ＤＥＩＰＳ）、ジメチルテキシルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、トリベンジルシリル、トリ−ｐ−キシリルシリル、トリフェニルシリル、ジフェニルメチルシリル（ＤＰＭＳ）、ｔ−ブチルメトキシフェニルシリル（ＴＢＭＰＳ）、ホルメート、ベンゾイルホルメート、アセテート、クロロアセテート、ジクロロアセテート、トリクロロアセテート、トリフルオロアセテート、メトキシアセテート、トリフェニルメトキシアセテート、フェノキシアセテート、ｐ−クロロフェノキシアセテート、３−フェニルプロピオネート、４−オキソペンタノエート（レブリネート）、４，４−（エチレンジチオ）ペンタノエート（レブリノイルジチオアセタール）、ピバロエート、アダマントエート、クロトネート、４−メトキシクロトネート、ベンゾエート、ｐ−フェニルベンゾエート、２，４，６−トリメチルベンゾエート（メシトエート）、アルキルメチルカーボネート、９−フルオレニルメチルカーボネート（Ｆｍｏｃ）、アルキルエチルカーボネート、アルキル２，２，２−トリクロロエチルカーボネート（Ｔｒｏｃ）、２−（トリメチルシリル）エチルカーボネート（ＴＭＳＥＣ）、２−（フェニルスルホニル）エチルカーボネート（Ｐｓｅｃ）、２−（トリフェニルホスホニオ）エチルカーボネート（Ｐｅｏｃ）、アルキルイソブチルカーボネート、アルキルビニルカーボネートアルキルアリルカーボネート、アルキルｐ−ニトロフェニルカーボネート、アルキルベンジルカーボネート、アルキルｐ−メトキシベンジルカーボネート、アルキル３，４−ジメトキシベンジルカーボネート、アルキルｏ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルｐ−ニトロベンジルカーボネート、アルキルＳ−ベンジルチオカーボネート、４−エトキシ−１−ナフチルカーボネート、メチルジチオカーボネート、２−ヨードベンゾエート、４−アジドブチラート、４−ニトロ−４−メチルペンタノエート、ｏ−（ジブロモメチル）ベンゾエート、２−ホルミルベンゼンスルホネート、２−（メチルチオメトキシ）エチル、４−（メチルチオメトキシ）ブチラート、２−（メチルチオメトキシメチル）ベンゾエート、２，６−ジクロロ−４−メチルフェノキシアセテート、２，６−ジクロロ−４−（１，１，３，３−テトラメチルブチル）フェノキシアセテート、２，４−ビス（１，１−ジメチルプロピル）フェノキシアセテート、クロロジフェニルアセテート、イソブチラート、モノスクシノエート、（Ｅ）−２−メチル−２−ブテノアート、ｏ−（メトキシカルボニル）ベンゾエート、α−ナフトエート、ナイトレート、アルキルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミダート、アルキルＮ−フェニルカルバメート、ボラート、ジメチルホスフィノチオイル、アルキル２，４−ジニトロフェニルスルフェナート、サルフェート、メタンスルホネート（メシレート）、ベンジルスルホネート、およびトシレート（Ｔｓ）を含む。
１，２−または１，３−ジオールを保護するために、保護基は、メチレンアセタール、エチリデンアセタール、１−ｔ−ブチルエチリデンケタール、１−フェニルエチリデンケタール、（４−メトキシフェニル）エチリデンアセタール、２，２，２−トリクロロエチリデンアセタール、アセトニド、シクロペンチリデンケタール、シクロヘキシリデンケタール、シクロヘプチリデンケタール、ベンジリデンアセタール、ｐ−メトキシベンジリデンアセタール、２，４−ジメトキシベンジリデンケタール、３，４−ジメトキシベンジリデンアセタール、２−ニトロベンジリデンアセタール、メトキシメチレンアセタール、エトキシメチレンアセタール、ジメトキシメチレンオルトエステル、１−メトキシエチリデンオルトエステル、１−エトキシエチリジンオルトエステル、１，２−ジメトキシエチリデンオルトエステル、α−メトキシベンジリデンオルトエステル、１−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エチリデン誘導体、α−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ベンジリデン誘導体、２−オキサシクロペンチリデンオルトエステル、ジ−ｔ−ブチルシリレン基（ＤＴＢＳ）、１，３−（１，１，３，３−テトライソプロピルジシロキサニリデン）誘導体（ＴＩＰＤＳ）、テトラ−ｔ−ブトキシジシロキサン−１，３−ジイリデン誘導体（ＴＢＤＳ）、環式カーボネート、環式ボロネート、エチルボロネート、およびフェニルボロネートを含む。
アミノ保護基は、メチルカルバメート、エチルカルバメート、９−フルオレニルメチルカルバメート（Ｆｍｏｃ）、９−（２−スルホ）フルオレニルメチルカルバメート、９−（２，７−ジブロモ）フルオロエニルメチルカルバメート、２，７−ジ−ｔ−ブチル−［９−（１０，１０−ジオキソ−１０，１０，１０，１０−テトラヒドロチオキサンチル）］メチルカルバメート（ＤＢＤ−Ｔｍｏｃ）、４−メトキシフェナシルカルバメート（Ｐｈｅｎｏｃ）、２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（Ｔｒｏｃ）、２−トリメチルシリルエチルカルバメート（Ｔｅｏｃ）、２−フェニルエチルカルバメート（ｈＺ）、１−（１−アダマンチル）−１−メチルエチルカルバメート（Ａｄｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−ハロエチルカルバメート、１，１−ジメチル−２，２−ジブロモエチルカルバメート（ＤＢ−ｔ−ＢＯＣ）、１，１−ジメチル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ＴＣＢＯＣ）、１−メチル−１−（４−ビフェニルイル）エチルカルバメート（Ｂｐｏｃ）、１−（３，５−ジ−ｔ−ブチルフェニル）−１−メチルエチルカルバメート（ｔ−Ｂｕｍｅｏｃ）、２−（２’−および４’−ピリジル）エチルカルバメート（Ｐｙｏｃ）、２−（Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボキサミド）エチルカルバメート、ｔ−ブチルカルバメート（ＢＯＣ）、１−アダマンチルカルバメート（Ａｄｏｃ）、ビニルカルバメート（Ｖｏｃ）、アリルカルバメート（Ａｌｌｏｃ）、１−イソプロピルアリルカルバメート（Ｉｐａｏｃ）、シンナミルカルバメート（Ｃｏｃ）、４−ニトロシンナミルカルバメート（Ｎｏｃ）、８−キノリルカルバメート、Ｎ−ヒドロキシピペリジニルカルバメート、アルキルジチオカルバメート、ベンジルカルバメート（Ｃｂｚ）、ｐ−メトキシベンジルカルバメート（Ｍｏｚ）、ｐ−ニトベンジルカルバメート、ｐ−ブロモベンジルカルバメート、ｐ−クロロベンジルカルバメート、２，４−ジクロロベンジルカルバメート、４−メチルスルフィニルベンジルカルバメート（Ｍｓｚ）、９−アントリルメチルカルバメート、ジフェニルメチルカルバメート、２−メチルチオエチルカルバメート、２−メチルスルホニルエチルカルバメート、２−（ｐ−トルエンスルホニル）エチルカルバメート、［２−（１，３−ジチアニル）］メチルカルバメート（Ｄｍｏｃ）、４−メチルチオフェニルカルバメート（Ｍｔｐｃ）、２，４−ジメチルチオフェニルカルバメート（Ｂｍｐｃ）、２−ホスホニオエチルカルバメート（Ｐｅｏｃ）、２−トリフェニルホスホニオイソプロピルカルバメート（Ｐｐｏｃ）、１，１−ジメチル−２−シアノエチルカルバメート、ｍ−クロロ−ｐ−アシルオキシベンジルカルバメート、ｐ−（ジヒドロキシボリル）ベンジルカルバメート、５−ベンズイソキサゾリルメチルカルバメート、２−（トリフルオロメチル）−６−クロモニルメチルカルバメート（Ｔｃｒｏｃ）、ｍ−ニトロフェニルカルバメート、３，５−ジメトキシベンジルカルバメート、ｏ−ニトロベンジルカルバメート、３，４−ジメトキシ−６−ニトロベンジルカルバメート、フェニル（ｏ−ニトロフェニル）メチルカルバメート、フェノチアジニル−（１０）−カルボニル誘導体、Ｎ’−ｐ−トルエンスルホニルアミノカルボニル誘導体、Ｎ’−フェニルアミノチオカルボニル誘導体、ｔ−アミルカルバメート、Ｓ−ベンジルチオカルバメート、ｐ−シアノベンジルカルバメート、シクロブチルカルバメート、シクロヘキシルカルバメート、シクロペンチルカルバメート、シクロプロピルメチルカルバメート、ｐ−デシルオキシベンジルカルバメート、２，２−ジメトキシカルボニルビニルカルバメート、ｏ−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）ベンジルカルバメート、１，１−ジメチル−３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルボキサミド）プロピルカルバメート、１，１−ジメチルプロピニルカルバメート、ジ（２−ピリジル）メチルカルバメート、２−フラニルメチルカルバメート、２−ヨードエチルカルバメート、イソボルニルカルバメート、イソブチルカルバメート、イソニコチニルカルバメート、ｐ−（ｐ’−メトキシフェニルアゾ）ベンジルカルバメート、１−メチルシクロブチルカルバメート、１−メチルシクロヘキシルカルバメート、１−メチル−１−シクロプロピルメチルカルバメート、１−メチル−１−（３，５−ジメトキシフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−（ｐ−フェニルアゾフェニル）エチルカルバメート、１−メチル−１−フェニルエチルカルバメート、１−メチル−１−（４−ピリジル）エチルカルバメート、フェニルカルバメート、ｐ−（フェニルアゾ）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリ−ｔ−ブチルフェニルカルバメート、４−（トリメチルアンモニウム）ベンジルカルバメート、２，４，６−トリメチルベンジルカルバメート、ホルムアミド、アセトアミド、クロロアセトアミド、トリクロロアセトアミド、トリフルオロアセトアミド、フェニルアセトアミド、３−フェニルプロパンアミド、ピコリンアミド、３−ピリジルカルボキサミド、Ｎ−ベンゾイルフェニルアラニル誘導体、ベンズアミド、ｐ−フェニルベンズアミド、ｏ−ニトフェニルアセトアミド、ｏ−ニトロフェノキシアセトアミド、アセトアセトアミド、（Ｎ’−ジチオベンジルオキシカルボニルアミノ）アセトアミド、３−（ｐ−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド、３−（ｏ−ニトロフェニル）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−ニトロフェノキシ）プロパンアミド、２−メチル−２−（ｏ−フェニルアゾフェノキシ）プロパンアミド、４−クロロブタンアミド、３−メチル−３−ニトロブタンアミド、ｏ−ニトロシンアミド、Ｎ−アセチルメチオニン誘導体、ｏ−ニトロベンズアミド、ｏ−（ベンゾイルオキシメチル）ベンズアミド、４，５−ジフェニル−３−オキサゾリン−２−オン、Ｎ−フタルイミド、Ｎ−ジチアスクシンイミド（Ｄｔｓ）、Ｎ−２，３−ジフェニルマレイミド、Ｎ−２，５−ジメチルピロール、Ｎ−１，１，４，４−テトラメチルジシリルアザシクロペンタン付加物（ＳＴＡＢＡＳＥ）、５−置換１，３−ジメチル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、５−置換１，３−ジベンジル−１，３，５−トリアザシクロヘキサン−２−オン、１−置換３，５−ジニトロ−４−ピリドン、Ｎ−メチルアミン、Ｎ−アリルアミン、Ｎ−［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチルアミン（ＳＥＭ）、Ｎ−３−アセトキシプロピルアミン、Ｎ−（１−イソプロピル−４−ニトロ−２−オキソ−３−ピロリン−３−イル）アミン、第四級アンモニウム塩、Ｎ−ベンジルアミン、Ｎ−ジ（４−メトキシフェニル）メチルアミン、Ｎ−５−ジベンゾスベリルアミン、Ｎ−トリフェニルメチルアミン（Ｔｒ）、Ｎ−［（４−メトキシフェニル）ジフェニルメチル］アミン（ＭＭＴｒ）、Ｎ−９−フェニルフルオレニルアミン（ＰｈＦ）、Ｎ−２，７−ジクロロ−９−フルオレニルメチレンアミン、Ｎ−フェロセニルメチルアミノ（Ｆｃｍ）、Ｎ−２−ピコリルアミノ、Ｎ’−オキシド、Ｎ−１，１−ジメチルチオメチレンアミン、Ｎ−ベンジリデンアミン、Ｎ−ｐ−メトキシベンジリデンアミン、Ｎ−ジフェニルメチレンアミン、Ｎ−［（２−ピリジル）メシチル］メチレンアミン、Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメチレン）アミン、Ｎ，Ｎ’−イソプロピリデンジアミン、Ｎ−ｐ−ニトロベンジリデンアミン、Ｎ−サリチリデンアミン、Ｎ−５−クロロサリチリデンアミン、Ｎ−（５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）フェニルメチレンアミン、Ｎ−シクロヘキシリデンアミン、Ｎ−（５，５−ジメチル−３−オキソ−１−シクロヘキセニル）アミン、Ｎ−ボラン誘導体、Ｎ−ジフェニルボリン酸誘導体、Ｎ−［フェニル（ペンタカルボニルクロムまたはタングステン）カルボニル］アミン、Ｎ−銅キレート、Ｎ−亜鉛キレート、Ｎ−ニトロアミン、Ｎ−ニトロソアミン、アミンＮ−オキシド、ジフェニルホスフィンアミド（Ｄｐｐ）、ジメチルチオホスフィンアミド（Ｍｐｔ）、ジフェニルチオホスフィンアミド（Ｐｐｔ）、ジアルキルホスホロアミダート、ジベンジルホスホロアミダート、ジフェニルホスホロアミダート、ベンゼンスルフェンアミド、ｏ−ニトロベンゼンスルフェンアミド（Ｎｐｓ）、２，４−ジニトロベンゼンスルフェンアミド、ペンタクロロベンゼンスルフェンアミド、２−ニトロ−４−メトキシベンゼンスルフェンアミド、トリフェニルメチルスルフェンアミド、３−ニトロピリジンスルフェンアミド（Ｎｐｙｓ）、ｐ−トルエンスルホンアミド（Ｔｓ）、ベンゼンスルホンアミド、２，３，６，−トリメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｒ）、２，４，６−トリメトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｂ）、２，６−ジメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｐｍｅ）、２，３，５，６−テトラメチル−４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｅ）、４−メトキシベンゼンスルホンアミド（Ｍｂｓ）、２，４，６−トリメチルベンゼンスルホンアミド（Ｍｔｓ）、２，６−ジメトキシ−４−メチルベンゼンスルホンアミド（ｉＭｄｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホンアミド（Ｐｍｃ）、メタンスルホンアミド（Ｍｓ）、β−トリメチルシリルエタンスルホンアミド（ＳＥＳ）、９−アントラセンスルホンアミド、４−（４’，８’−ジメトキシナフチルメチル）ベンゼンスルホンアミド（ＤＮＭＢＳ）、ベンジルスルホンアミド、トリフルオロメチルスルホンアミド、およびフェナシルスルホンアミドを含む。例示的な保護基が本明細書に詳述されているが、本開示は、これらの保護基に限定されるよう意図されておらず、むしろ、様々なさらなる同等の保護基を、上の基準を使用して容易に同定し、かつ本開示の方法において利用することができることが理解される。さらに、様々な保護基は、当技術分野において周知であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９９で詳細に記載されるものを含む。
本明細書に記載されるように、本開示の化合物は、「任意で置換された」部分を含有し得る。概して、「置換された」という用語は、「任意で」という用語が先行するか否かに関わらず、指定された部分の１つ以上の水素が好適な置換基で置換されることを意味する。別途示されない限り、「任意で置換された」基は、基のそれぞれの置換可能な位置に好適な置換基を有してもよく、任意の所与の構造における２つ以上の位置を、特定の基から選択される２つ以上の置換基と置換することができる場合、置換基は、あらゆる位置で同一であるか、または異なるかのいずれかであってもよい。本開示によって想定される置換基の組み合わせは、好ましくは、安定しているか、または化学的に実現可能な化合物の形成をもたらす組み合わせである。本明細書で使用される「安定した」という用語は、それらの産生、検出、ならびにある特定の実施形態において、それらの回収、精製、および本明細書に開示の目的のうちの１つ以上のための使用を可能にするための条件に供されるとき、実質的に変化していない化合物を指す。
「任意で置換された」基の置換可能な炭素原子上の好適な一価置換基は、独立して、ハロゲン；−（ＣＨ２）０〜４Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＲ°；−Ｏ（ＣＨ２）０〜４Ｒｏ；−Ｏ−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＣＨ（ＯＲ°）２；−（ＣＨ２）０〜４ＳＲ°；Ｒ°と置換され得る−（ＣＨ２）０〜４Ｐｈ；Ｒ°と置換され得る−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ；Ｒ°と置換され得る−ＣＨ＝ＣＨＰｈ；Ｒ°と置換され得る−（ＣＨ２）０〜４Ｏ（ＣＨ２）０〜１−ピリジル；−ＮＯ２；−ＣＮ；−Ｎ３；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｎ（Ｒ°）Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｓ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＯＳｉＲ°３；−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）Ｒ°；−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）０〜４ＳＲ−；ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＣ（Ｏ）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｃ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｓ）ＳＲ°；−ＳＣ（Ｓ）ＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＣ（Ｏ）ＮＲ°２；−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ°；−Ｃ（ＮＯＲ°）Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４ＳＳＲ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）２ＯＲ°；−（ＣＨ２）０〜４ＯＳ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−（ＣＨ２）０〜４Ｓ（Ｏ）Ｒ°；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２ＮＲ°２；−Ｎ（Ｒ°）Ｓ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｎ（ＯＲ°）Ｒ°；−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ°２；−Ｐ（Ｏ）２Ｒ°；−Ｐ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）Ｒ°２；−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ°）２；ＳｉＲ°３；−（Ｃ１〜４線状もしくは分岐したアルキレン）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２；または−（Ｃ１〜４線状もしくは分岐したアルキレン）Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ｎ（Ｒ°）２であり、式中、それぞれのＲ°は、以下で定義されるように置換されてもよく、かつ独立して、水素、Ｃ１〜６脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、−ＣＨ２−（５〜６員ヘテロアリール環）、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環であるか、あるいは上の定義にかかわらず、２つの独立したＲ°の出現は、それらの介在原子（複数を含む）と一緒になって、以下で定義されるように置換され得る、窒素、酸素、または硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する３〜１２員飽和、部分的に不飽和、またはアリールの単環式もしくは二環式環を形成する。
Ｒ°上の好適な一価置換基（または２つの独立したＲ°の出現をそれらの介在原子と一緒にすることによって形成される環）は、独立して、ハロゲン、−（ＣＨ２）０〜２Ｒ●、−（ハロＲ●）、−（ＣＨ２）０〜２ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＣＨ（ＯＲ●）２；−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｎ３、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）Ｒ●、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−（ＣＨ２）０〜２Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＳＨ、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨ２、−（ＣＨ２）０〜２ＮＨＲ●、−（ＣＨ２）０〜２ＮＲ● ２、−ＮＯ２、−ＳｉＲ● ３、−ＯＳｉＲ● ３、−Ｃ（Ｏ）ＳＲ●、−（Ｃ１〜４線状もしくは分岐したアルキレン）Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、または−ＳＳＲ●であり、式中、それぞれのＲ●は、非置換であるか、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみと置換され、かつ独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環から選択される。Ｒ°の飽和炭素原子上の好適な二価置換基は、＝Ｏおよび＝Ｓを含む。
「任意で置換された」基の飽和炭素原子上の好適な二価置換基は、以下：＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＲ＊ ２、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ＊、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ＊、＝ＮＮＨＳ（Ｏ）２Ｒ＊、＝ＮＲ＊、＝ＮＯＲ＊、−Ｏ（Ｃ（Ｒ＊ ２））２〜３Ｏ−、または−Ｓ（Ｃ（Ｒ＊ ２））２〜３Ｓ−を含み、式中、それぞれの独立したＲ＊の出現は、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環から選択される。「任意で置換された」基の置換可能な隣接炭素に結合される好適な二価置換基は、−Ｏ（ＣＲ＊ ２）２〜３Ｏ−を含み、式中、それぞれの独立したＲ＊の出現は、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環から選択される。
Ｒ＊の脂肪族基上の好適な置換基は、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ● ２、または−ＮＯ２を含み、式中、それぞれのＲ●は、非置換であるか、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみと置換され、かつ独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環である。
「任意で置換された」基の置換可能な窒素上の好適な置換基は、−Ｒ†、−ＮＲ† ２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ†、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ†、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ† ２、−Ｃ（Ｓ）ＮＲ† ２、−Ｃ（ＮＨ）ＮＲ† ２、または−Ｎ（Ｒ†）Ｓ（Ｏ）２Ｒ†を含み、式中、それぞれのＲ†は、独立して、水素、以下で定義されるように置換され得るＣ１〜６脂肪族、非置換−ＯＰｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環であるか、あるいは上の定義にかかわらず、２つの独立したＲ†の出現は、それらの介在原子（複数を含む）と一緒になって、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する非置換３〜１２員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの単環式もしくは二環式環を形成する。
Ｒ†の脂肪族基上の好適な置換基は、独立して、ハロゲン、−Ｒ●、−（ハロＲ●）、−ＯＨ、−ＯＲ●、−Ｏ（ハロＲ●）、−ＣＮ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ●、−ＮＨ２、−ＮＨＲ●、−ＮＲ● ２、または−ＮＯ２であり、式中、それぞれのＲ●は、非置換であるか、または「ハロ」が先行する場合、１つ以上のハロゲンのみと置換され、かつ独立して、Ｃ１〜４脂肪族、−ＣＨ２Ｐｈ、−Ｏ（ＣＨ２）０〜１Ｐｈ、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する５〜６員飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環である。
化学結合として使用されるとき、
は、炭素中心で未定義の立体化学を有する単一の炭素−炭素結合を示すと理解されるものとする。したがって、
結合で炭素原子に付着した置換基は、置換基が紙の平面から外に出ている実施形態、置換基が紙の平面の後ろにある実施形態、およびそれらの組み合わせ（すなわち、立体化学的混合物）を指す。
本明細書で使用される「生体分子」という用語は、自然に発生するか、または人工的に生成される（例えば、合成もしくは組換え方法によって）かにかかわらず、化学化合物のクラスに属する分子（例えば、タンパク質、アミノ酸、ペプチド、ポリヌクレオチド、ヌクレオチド、炭水化物、糖、脂質、核タンパク質、糖ペプチド、糖タンパク質、リポタンパク質、ステロイド等）を指し、通常、細胞および組織中に見出される。生体分子の例示的な種類には、糖ペプチド、酵素、受容体、神経伝達物質、ホルモン、サイトカイン、成長因子および化学走化性因子等の細胞応答修飾因子、抗体、ワクチン、ハプテン、毒素、インターフェロン、リボザイム、アンチセンス剤、プラスミド、ＤＮＡ、ならびにＲＮＡが含まれるが、それらに限定されない。
「炭水化物」という用語は、糖または糖のポリマーを指す。「糖類」、「多糖類」、「炭水化物」、および「オリゴ糖」という用語を、同義に使用することができる。ほとんどの炭水化物は、多くのヒドロキシル基を有するアルデヒドまたはケトンであり、通常、分子のそれぞれの炭素原子の上に１つある。炭水化物は、概して、分子式ＣｎＨ２ｎＯｎを有する。炭水化物は、単糖類、二糖類、三糖類、オリゴ糖、または多糖類であり得る。ほとんどの塩基性炭水化物は、ブドウ糖、ショ糖、ガラクトース、マンノース、リボース、アラビノース、キシロース、およびフルクトース等の単糖類である。二糖類は、２つの単糖類が結合したものである。例示的な二糖類には、ショ糖、マルトース、セロビオース、およびラクトースが含まれる。典型的には、オリゴ糖は、３〜６つの単糖類単位（例えば、ラフィノース、スタキオース）を含み、多糖類は、６つ以上の単糖類単位を含む。例示的な多糖類には、デンプン、グリコーゲン、およびセルロースが含まれる。炭水化物は、ヒドロキシル基が除去される２’−デオキシリボース、ヒドロキシル基がフッ素で置換される２’−フルオロリボース、またはブドウ糖の窒素含有形態（例えば、２’−フルオロリボース、デオキシリボース、およびヘキソース）であるＮ−アセチルグルコサミン等の修飾された単糖類単位を含有し得る。炭水化物は、多くの異なる形態、例えば、配座異性体、環式形態、非環式形態、立体異性体、互変異性体、アノマー、および異性体において存在し得る。
本明細書で使用される「天然アミノ酸側鎖」という用語は、自然発生タンパク質：グリシン（Ｇｌｙ）、アラニン（Ａｌａ）、バリン（Ｖａｌ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、リジン（Ｌｙｓ）、アルギニン（Ａｒｇ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、プロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、チロシン（Ｔｙｒ）、トリプトファン（Ｔｒｐ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、システイン（Ｃｙｓ）、およびメチオニン（Ｍｅｔ）において見出される一般的な自然発生Ｌ−アミノ酸のうちのいずれか１つの側鎖基を指す。
本明細書で使用される「非天然アミノ酸側鎖」という用語は、天然アミノ酸ではない全てのアミノ酸の側鎖基を指す。そのようなアミノ酸は、２０個の自然発生アミノ酸のうちのいずれかのＤ−異性体を含む。非天然アミノ酸は、ホモセリン、オルニチン、ノルロイシン、およびチロキシンも含む。さらなる非天然アミノ酸は、当業者に周知であり、非天然脂肪族側鎖を含む。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、Ｎ−アルキル化、環化、リン酸化、アセチル化、アミド化、アジジル化、標識化等である。いくつかの実施形態において、非天然アミノ酸は、Ｄ−異性体である。いくつかの実施形態において、非天然アミノ酸は、Ｌ−異性体である。ある特定の実施形態では、非天然アミノ酸は、アルファアミノ酸である。他の実施形態では、非天然アミノ酸は、ベータアミノ酸である。
より一般に、本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、天然アミノ酸および非天然アミノ酸を包含する。
本明細書および特許請求の範囲において使用される、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別途文脈が明確に示さない限り、複数の言及を含む。したがって、例えば、「化合物（ａ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」への言及は、複数のそのような化合物を含む。
「化合物」、「接合体」、および「構築物」という用語は、本開示において同義に使用される。したがって、本明細書に記載される構築物または接合体は、化合物と見なされ、逆もまた同様である。
本明細書で使用される「非経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、通常、注入による、腸内および局所投与以外の投与様式を意味し、制限なく、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、および胸骨内注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）ならびに点滴を含む。
本明細書で使用される「全身投与」、「全身に投与される」、「末梢投与」、および「末梢に投与される」という語句は、中枢神経系への直接投与以外の化合物、薬物、または他の物質の投与、例えば、皮下投与を意味し、その結果、それが患者の系に進入し、ひいては、代謝および他の同様のプロセスを受ける。
「苦痛緩和」という用語は、疾患の症状および／または治療レジメンの副作用の軽減に焦点が置かれているが、治療的ではない治療を指す。
本明細書で使用される「治療的に有効な量」という用語は、治療レジメンの一環として投与されるときに、所望の生物学的応答を誘発する物質（例えば、治療薬、組成物、および／または製剤）の量を意味する。いくつかの実施形態において、物質の治療的に有効な量は、疾患、障害、および／もしくは病気に罹患しているか、またはそれらにかかりやすい対象に投与されるとき、疾患、障害、および／もしくは病気を治療するのに十分な量である。当業者によって理解されるように、物質の有効量は、所望の生物学的エンドポイント、送達される物質、標的細胞または組織等の要素に応じて変化し得る。例えば、疾患、障害、および／または病気を治療するのに効果的な製剤中の化合物の量は、疾患、障害、および／または病気の１つ以上の症状または特性を緩和し、改善し、軽減し、阻害し、予防し、その発現を遅延させ、その重症度を減少させ、および／またはその発生率を減少させる量である。いくつかの実施形態において、治療的に有効な量は、単回用量で投与され、いくつかの実施形態において、複数の単位用量が、治療的に有効な量を送達するために必要とされる。
本明細書で使用される「治療する」、「治療」、もしくは「治療している」という用語は、疾患、障害、および／または病気の１つ以上の症状または特性を部分的もしくは完全に緩和し、改善し、軽減し、阻害し、予防し、その発現を遅延させ、その重症度を減少させ、および／またはその発生率を減少させるために使用される任意の方法を指す。治療を、疾患、障害、および／または病気の兆候を呈しない対象に施行することができる。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または病気に関連した病態を発現する危険性を減少させるために、治療を、疾患、障害、および／または病気の初期兆候のみを呈する対象に施行することができる。
本明細書で使用される「単位用量」という表現は、治療される対象に適切な製剤の物理的に分離した単位を指す。しかしながら、本発明の製剤の１日の総使用量は、健全な医学的判断の範囲内で主治医によって決定されることが理解される。任意の特定の対象または生物への特定の効果的な用量レベルは、治療される障害および障害の重症度；採用される特定の活性化合物の活性；採用される特定の組成物；対象の年齢、体重、一般的な健康状態、性別、および食生活；採用される特定の活性化合物の投与時間および排出速度；治療期間；採用される特定の化合物（複数を含む）と組み合わせて、またはそれと同時に使用される薬物および／もしくは付加療法；ならびに医療分野において周知の同様の要素を含む様々な要素に依存し得る。特定の単位用量は、治療的に有効な量の治療薬を含有してもよく、または含有しなくてもよい。
疾患、障害、および／もしくは病気に「罹患している」個人は、疾患、障害、および／もしくは病気のそれらの１つ以上の症状と診断され、かつ／またはそれらを示す。
疾患、障害、および／または病気に「かかりやすい」個人は、疾患、障害、および／または病気と診断されていない。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または病気にかかりやすい個人は、疾患、障害、および／または病気の症状を呈し得る。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または病気にかかりやすい個人は、疾患、障害、および／または病気の症状を呈しない場合もある。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または病気にかかりやすい個人は、疾患、障害、および／または病気を発現する。いくつかの実施形態において、疾患、障害、および／または病気にかかりやすい個人は、疾患、障害、および／または病気を発現しない。
ある特定の実施形態の詳細な説明
本発明は、癌の治療に有用であり、かつ／または複合糖質上に存在する全ての個々の炭水化物抗原に対して抗体を誘導するのに効果的である複合糖質ワクチンの必要性が未だ存在するという認識を包含する。
本発明は、とりわけ、複合糖質を生成するために糖ペプチドを担体に結合させる、新しい、および／または改善された技術を提供する。提供される技術は、予想外に大きな数の糖ペプチドを単一の担体に接合することを可能にする。いくつかの実施形態において、本発明に従って、３００、３５０、４００、３５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００、８５０、９００、９５０、または１０００個より多い糖ペプチドを、特定の担体に接合することができる。
本発明は、とりわけ、本明細書に記載の糖ペプチドおよび／または複合糖質における使用のために、グリカンを提供および／またはカップリングする新規の技術も提供する。例えば、本発明は、ＧＭ２および／またはＧｂ５グリカンの調製および／またはカップリングの技術を提供する。
本発明はさらに、ＧＭ２抗原を含むワクチン組成物が、対象の臨床的な展望を改善するというよりはむしろ悪化させ得るという従前の徴候にかかわらず、ＧＭ２を含むワクチン組成物が、発明の糖ペプチドおよび／または複合糖質との関連で、モデル系において有意な生物学的利益を示すことができるという驚くべき徴候を提供する。したがって、本発明は、ＧＭ２グリカンを含むワクチン組成物を投与することによって（例えば、糖ペプチドおよび／または複合糖質との関連で）、ある特定の癌に罹患しているか、またはそれにかかりやすい個人を治療する方法を提供する。
本発明は、様々な抗原、糖ペプチド、複合糖質、およびワクチン組成物、ならびにそれらの調製、同定、特徴付け、および／または使用に関連した種々の方法および試薬を提供する。
当業者であれば、本発明者が、炭水化物抗原、糖ペプチド、および／または複合糖質の調製、ならびにそれらの産生および使用に関する広範囲の経験を有することを理解する。本出願は、とりわけ、ある特定の炭水化物抗原を含有する組成物（例えば、糖ペプチド、複合糖質等）の調製、同定、特徴付け、および／または使用に関する方法ならびに試薬を説明する。いくつかの実施形態において、提供される物質および／または方法は、医学分野において有用である。いくつかの実施形態において、提供される物質および／または方法は、癌の治療において有用である。いくつかの実施形態において、提供される物質および／または方法は、固形腫瘍の治療において有用である。いくつかの実施形態において、提供される物質および／または方法は、上皮性起源の腫瘍の治療において有用である。いくつかの実施形態において、提供される物質および／または方法は、乳癌、卵巣癌、黒色腫、および前立腺癌の治療において有用である。
ＫＬＨ担体タンパク質に接合された第１世代構築物において、５つの異なる前立腺癌および乳癌関連炭水化物抗原、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｌｅｙ、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎは、単一のペプチド骨格に組み込まれた（Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００４，１０１，１１９３７、Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｋｏｉｄｅ，Ｆ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｃｈｏ，Ｙ．Ｓ．、Ａｔｓｕｓｈｉ，Ｅ．、Ｗａｎ，Ｑ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．Ｋ．、Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ａｌｌｅｎ，Ｊ．、Ｏｕｅｒｆｅｌｌｉ，Ｏ．、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，２７１５）。その後、このＫＬＨ接合体を、好適なアジュバント（ＱＳ−２１）と併用して、マウスにおいて評価し、その免疫原性を、対応するプールされた一価ワクチンのＫＬＨ接合体と比較した。実験結果は、このＫＬＨ接合体が、Ｌｅｙを除く炭水化物抗原の全てに対して抗体を誘導するのに最適であったことを示した。Ｌｅｙ抗原で観察された期待外れの免疫原性は、それが比較的高いレベルで内因的に発現されるという事実に起因する可能性が高い。
蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）アッセイ分析は、この第１世代単分子五価ワクチンによって誘導された抗体が、それぞれ、対応する抗原のうちの２つ以上を高レベルで発現する３つの評価細胞株と著しく反応したことを示した。したがって、これらの累積データにより、個々の抗原の免疫学的特性が、これらの非常に精巧なワクチンにおいて保存されていることが示唆される。
Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎ炭水化物抗原（以下のスキーム１の４〜８を参照のこと）を提示するグリコシルアミノ酸のプールの組み立てを介する五価糖ペプチド構築物の合成は、以前に説明されている（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｋｏｉｄｅ，Ｆ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｃｈｏ，Ｙ．Ｓ．、Ａｔｓｕｓｈｉ，Ｅ．、Ｗａｎ，Ｑ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．Ｋ．、Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ａｌｌｅｎ，Ｊ．、Ｏｕｅｒｆｅｌｌｉ，Ｏ．、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，２７１５）。この特定の構築物において、先に使用したペンタサッカライドＬｅｙ抗原を、前立腺癌および乳癌関連テトラサッカライド抗原ＧＭ２で置換した。ＧＭ２誘導性抗体がヒトＧＭ２陽性細胞に対して活性であることを示す報告に基づいて、ＧＭ２抗原が内包物として選択された。さらに、ＧＭ２のみを用いて行われたヒト臨床試験は、高められたＧＭ２抗体レベルと生存との間の相関関係を示唆している（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｎａｔｏｌｉ，Ｅ．Ｊ．、Ｃａｌｖｅｓ，Ｍ．Ｊ．、Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，Ｅ．、Ｏｅｔｔｇｅｎ，Ｈ．Ｆ．、Ｏｌｄ，Ｌ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８７，８４，２９１１、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｐ．Ｏ．、Ｗｏｎｇ，Ｇ．Ｙ．、Ａｄｌｕｒｉ，Ｓ．、Ｔａｏ，Ｙ．、Ｐａｄａｖａｎ，Ｍ．、Ｐａｒｅｎｔｅ，Ｒ．、Ｈａｎｌｏｎ，Ｃ．、Ｃａｌｖｅｓ，Ｍ．Ｊ．、Ｈｅｌｌｉｎｇ，Ｆ．、Ｒｉｔｔｅｒ，Ｇ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９４，１２，１０３６）。しかしながら、本開示より前には、この五価構築物の免疫原性は未知であった。
本出願は、とりわけ、医学分野において、例えば、卵巣癌、前立腺癌、および／または乳癌等の固形腫瘍の治療において有用な優れた第２世代単分子五価構築物の合成および使用を具体的に説明する。
ＧＭ２を含む癌ワクチンの臨床研究は、ある程度の成功を収めており、現在、腫瘍学の分野において、議論の的になっている話題である。黒色腫ワクチンのための大規模な第３相試験であるＥＯＲＴＣ１８９６１は、中間分析が治療の安全性および／または有効性に関する重大な問題を提起した後、早期に中断された（Ｅｇｇｅｒｍｏｎｔ，Ａ．Ｍ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２０（Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ ６）：ｖｉ３０−ｖｉ３４，２００９、Ｓａｕｌ，Ｈ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｉｓｓｕｅ １６，２００８）。具体的には、分析は、治療を受けた患者の生存する可能性は、観察結果と比較して低いことを明らかにした。主要エンドポイントである無再発生存期間について、試験は、全く効果がないと見なされた（すなわち、観察群における事象の数は、ワクチン群と全く同一であった）。
別の黒色腫試験であるＥＣＯＧ１６９４は、高用量インターフェロン（ＨＤＩ）をＧＭ２ベースのワクチンと比較した。中間分析は、ＨＤＩ治療がより良好に働き、かつワクチンが効果のないものと見なされたと判断した。その後の分析は、この結論が、値するよりも否定性が一層低く、かつワクチン治療が、実際には、観察結果よりも効果が低いことを示唆する（Ｓａｕｌ、上記）。
任意の特定の理論によって拘束されることを望むものではないが、本出願者は、ＧＭ２を含有する以前の癌ワクチンが、細胞表面補体の亜溶解レベルのそれらの活性化が原因で不成功であった可能性を提唱する。したがって、本発明は、いくつかの実施形態において、以前は未知であった問題の原因の同定を提供する。免疫学において、ある特定の閾値を上回る補体カスケードの活性化が、標的細胞の浸透圧溶解をもたらすことができることは周知である。しかしながら、補体の不完全な活性化または亜溶解活性化は、細胞保護的（すなわち、血管新生、増殖等の促進）であり得る。ＧＭ２が黒色腫細胞上で高度に発現されないため、上述の黒色腫研究において使用されたＧＭ２ワクチンが、細胞表面補体をそのような亜溶解レベルで活性化した可能性もある。他の理論も提唱されている（Ｓａｕｌ、上記）。
それにも関わらず、本明細書に記載の教示より前には、当業者は、ＧＭ２抗原を含有するワクチンが、特有の安全性および／または有効性の課題または他の欠陥を示し得ると理解していた。この背景に逆らって、本開示は、癌（例えば、乳癌、ならびに例えば黒色腫、前立腺癌、および卵巣癌等の他の癌）の治療において、本明細書に記載のＧＭ−２を含有する組成物の有用性および有効性の驚くべき証拠を示す。
本出願者は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎ抗原を含む五価接合体が、５つの炭水化物抗原のそれぞれに対してＩｇＧおよびＩｇＭ抗体を誘導することを見出した。さらに、産生された抗体は、これらの炭水化物抗原を発現する癌細胞株と反応することができた。
本発明は、別の炭水化物抗原であるＧｂ５を、多抗原性免疫原性複合糖質を調製するために使用することができるという認識を包含する（Ｐａｒｋ，Ｔ．Ｋ．ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．Ｖｏｌ．３６，Ｎｏ．５０，９０８９−９０９２，１９９５、国際特許出願公開第ＷＯ２０１０／００５５９８号、米国特許出願公開第２００９／０３１７４１１号）。いくつかの実施形態において、本発明は、炭水化物決定基としてＧｂ５を含む糖ペプチドおよび／または複合糖質を提供する。
いくつかの実施形態において、本発明は、以下の構造を有する糖ペプチドを提供し、
式中、
それぞれのＡは、独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基であり、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、
それぞれのＬ１は、独立して、置換または非置換の脂肪族またはヘテロ脂肪族部分であり、
それぞれのＲ１は、独立して、天然もしくは非天然アミノ酸側鎖であり、
Ｒ２は、水素またはアミノ保護基であり、
Ｒ３は、水素または免疫原性担体であり、
クロスリンカーは、リンカー上の反応部分を免疫原性担体上の反応部分と接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分であり、
リンカーは、共有結合、２〜約２０個のヒドロキシアシル残基を含むオリゴエステルフラグメント、２〜約２０個のアミノアシル残基を含むペプチドフラグメント、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ１〜２０飽和もしくは不飽和の線状もしくは分岐した炭化水素鎖であり、鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−Ｃｙ−、−ＣＲ２−、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｎ（Ｒ）ＳＯ２−、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｓ−、−ＳＯ−、−ＳＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｃ（＝ＮＲ）−、−Ｎ＝Ｎ−、または−Ｃ（＝Ｎ２）−によって置換され、
Ｃｙ−は、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜４個のヘテロ原子を有する任意で置換された５〜８員の二価、飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの環であるか、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される０〜５個のヘテロ原子を有する任意で置換された８〜１０員の二価、飽和、部分的に不飽和、もしくはアリールの二環式環であり、
それぞれのＲは、独立して、水素、あるいはＣ１〜６脂肪族、フェニル、３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の炭素環、窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜２個のヘテロ原子を有する３〜７員の飽和もしくは部分的に不飽和の単環複素環、または窒素、酸素、もしくは硫黄から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する５〜６員のヘテロアリール環から選択される任意で置換された基であり、
ｍは、３〜２０であり、
ｐは、０〜１００であり、
ｑは、０または１である。
当業者であれば、以下の部分：

は、ｐの括弧内の単位およびｍの括弧内の単位の出現が、任意の組み合わせで、または角括弧内の順に生じ得るように、本明細書において式中で示されることを理解する。例えば、単位を、…ｐ−ｍ−ｐ−ｍ−ｐ−ｍ…、…ｐ−ｐ−ｍ−ｐ−ｍ−ｍ−ｐ…、…ｍ−ｍ−ｍ−ｐ−ｐ−ｐ…等に配列することができる。
いくつかの実施形態において、ｍは、５〜２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、４〜１０である。いくつかの実施形態において、ｍは、５〜７である。いくつかの実施形態において、ｍは、３である。いくつかの実施形態において、ｍは、４．いくつかの実施形態において、ｍは、５である。いくつかの実施形態において、ｍは、６である。いくつかの実施形態において、ｍは、７である。いくつかの実施形態において、ｍは、８である。いくつかの実施形態において、ｍは、９である。いくつかの実施形態において、ｍは、１０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１１である。いくつかの実施形態において、ｍは、１２である。いくつかの実施形態において、ｍは、１３である。いくつかの実施形態において、ｍは、１４である。いくつかの実施形態において、ｍは、１５である。いくつかの実施形態において、ｍは、１６である。いくつかの実施形態において、ｍは、１７である。いくつかの実施形態において、ｍは、１８である。いくつかの実施形態において、ｍは、１９である。いくつかの実施形態において、ｍは、２０である。
いくつかの実施形態において、ｐは、０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜１００である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜８０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜５０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜４０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜３０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜２５である。いくつかの実施形態において、ｐは、０〜２０である。いくつかの実施形態において、ｐは、０〜５０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜２０である。いくつかの実施形態において、１つ以上のｐの出現は、ｍの出現の間にある。
ある特定の実施形態では、ｑは、０である。ある特定の実施形態では、ｑは０であり、Ｒ３は水素であり、リンカーは共有結合である。他の実施形態では、ｑは、１である。
ある特定の実施形態では、１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、Ａの他の出現は、それぞれ独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、それぞれのＡの出現は、Ｇｂ５である。いくつかの実施形態において、それぞれのＡは、独立して、フコシルＧＭ１、Ｌｅｘ、Ｇｂ３、ＫＨ−１、Ｎ３、ｇｌｏｂｏ−Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６−ＳＴｎ、Ｌｅｙ、ＧＭ２、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、それぞれのＡは、独立して、Ｇｂ５、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、およびＴＦからなる群から選択される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、それぞれのＡの出現が異なる。
いくつかの実施形態において、それぞれのＲ１は、独立して、天然アミノ酸側鎖である。いくつかの実施形態において、それぞれのＲ１は、独立して、非天然アミノ酸側鎖である。
いくつかの実施形態において、Ｒ２は、−Ａｃである。他の実施形態では、Ｒ２は、水素である。
いくつかの実施形態において、Ｒ３は、水素である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、免疫原性担体である。いくつかの実施形態において、Ｒ３は、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、カチオン化ウシ血清アルブミン、ポリリジン、ＯＭＰＣ、またはＫＬＨから選択される免疫原性担体タンパク質である。いくつかの実施形態において、免疫原性担体タンパク質は、ＫＬＨである。ある特定の実施形態では、免疫原性担体は、以下の構造を有する脂質であり、

式中、ｍ’、ｎ’、およびｐ’は、それぞれ独立して、約８〜２０の整数であり、ＲＶは、水素、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖低級アルキル、または置換もしくは非置換のフェニルである。ある特定の例示的な実施形態において、ｍ’、ｎ’、およびｐ’は、それぞれ、１４であり、脂質は、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリン（例えば、ＰａｍＣｙｓ）である。
いくつかの実施形態において、それぞれのＬ１は、独立して、分岐脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、天然または非天然アミノ酸側鎖を含む。いくつかの実施形態において、それぞれのＬ１の出現は、独立して、以下の構造を有するアミノ酸を提供する−ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＯ−であり、

式中、ｎは、１〜８である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ｎは、２である。いくつかの実施形態において、ｎは、３である。いくつかの実施形態において、ｎは、４である。いくつかの実施形態において、ｎは、５である。いくつかの実施形態において、ｎは、６である。いくつかの実施形態において、ｎは、７である。いくつかの実施形態において、ｎは、８である。
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−Ｏ−（ＣＨＭｅ）−または−Ｏ−ＣＨ２−以外である。
ある特定の実施形態では、提供される糖ペプチドは、以下の構造を有する。
いくつかの実施形態において、提供される複合糖質は、以下の構造を有し、

式中、Ｒ３は、免疫原性担体であり、ｔは、免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数である。ある特定の実施形態では、ｔは、１である。いくつかの実施形態において、ｔは、２００〜１２００である。いくつかの実施形態において、ｔは、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、または少なくとも１１００である。いくつかの実施形態において、免疫原性担体は、ＫＬＨである。
接合体を使用する方法
ある特定の実施形態では、本発明は、対象に、治療的に有効な量の免疫原性複合糖質を投与することを含む、癌に罹患する対象における癌を治療する方法を提供し、免疫原性複合糖質は、少なくとも３つのアミノ酸残基で構成されるペプチド骨格を有する多抗原性糖ペプチドを含み、該アミノ酸のうちの３つの以上は、独立して、以下の構造であり、

式中、
それぞれのＬ１は、独立して、本明細書において上で定義され、かつクラスおよびサブクラスで説明される通りであり、
それぞれのＡは、独立して、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、
少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５またはＧＭ２である。
ある特定の実施形態では、糖ペプチドは、３つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、４つのＡが出現する。
いくつかの実施形態において、本発明は、対象に、治療的に有効な量の免疫原性複合糖質を投与することを含む、癌に罹患する対象における癌を治療する方法を提供し、免疫原性複合糖質は、少なくとも５つのアミノ酸残基で構成されるペプチド骨格を有する多抗原性糖ペプチドを含み、前記アミノ酸のうちの５つ以上は、独立して、以下の構造であり、

式中、
それぞれのＬ１は、独立して、本明細書において上で定義され、かつクラスおよびサブクラスで説明される通りであり、
それぞれのＡは、独立して、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、
式中、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５またはＧＭ２である。
いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、５〜７つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、５つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、６つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、７つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、８つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、９つのＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、１０個のＡが出現する。いくつかの実施形態において、糖ペプチドは、１０個を超えるＡが出現する。
いくつかの実施形態において、それぞれのＡの出現が異なる。他の実施形態では、それぞれのＡの出現は、同一である。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、ＧＭ２である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５である。ある特定の実施形態では、１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、他のＡの出現は、それぞれ独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基である。ある特定の実施形態では、１つのＡの出現は、ＧＭ２であり、他のＡの出現は、それぞれ独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、ＧＭ２であり、それぞれの残りのＡは、独立して、フコシルＧＭ１、ＧＭ２、Ｌｅｘ、Ｇｂ３、ＫＨ−１、Ｎ３、ｇｌｏｂｏ−Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６−ＳＴｎ、Ｌｅｙ、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、それぞれの残りのＡは、独立して、フコシルＧＭ１、ＧＭ２、Ｌｅｘ、Ｇｂ３、ＫＨ−１、Ｎ３、ｇｌｏｂｏ−Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６−ＳＴｎ、Ｌｅｙ、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基である。
ある特定の実施形態では、５つのＡが出現し、１つのＡの出現は、Ｇｂ５であり、他のＡの出現は、それぞれ独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基である。ある特定の実施形態では、５つのＡが出現し、１つのＡの出現は、ＧＭ２であり、他のＡの出現は、それぞれ独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基である。
いくつかの実施形態において、それぞれのＡは、独立して、フコシルＧＭ１、ＧＭ２、Ｌｅｘ、Ｇｂ３、ＫＨ−１、Ｎ３、ｇｌｏｂｏ−Ｈ、グリコホリン、Ｔｎ、ＴＦ、ＳＴＮ、（２，３）ＳＴ、２，６−ＳＴｎ、Ｌｅｙ、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基である。
いくつかの実施形態において、それぞれのＡは、独立して、ＧＭ２、Ｇｂ５、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、およびＴＦからなる群から選択される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、５つのＡが出現し、それぞれのＡは、独立して、Ｇｂ５、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、およびＴＦからなる群から選択される炭水化物決定基である。いくつかの実施形態において、５つのＡが出現し、それぞれのＡは、独立して、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、およびＴＦからなる群から選択される炭水化物決定基である。
いくつかの実施形態において、それぞれのＬ１は、独立して、分岐脂肪族またはヘテロ脂肪族部分である。いくつかの実施形態において、Ｌ１は、天然または非天然アミノ酸側鎖を含む。いくつかの実施形態において、それぞれのＬ１の出現は、独立して、以下の構造を有するアミノ酸を提供する−ＣＨ２（ＣＨ２）ｎＯ−であり、

式中、ｎは、１〜８である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ｎは、２である。いくつかの実施形態において、ｎは、３である。いくつかの実施形態において、ｎは、４である。いくつかの実施形態において、ｎは、５である。いくつかの実施形態において、ｎは、６である。いくつかの実施形態において、ｎは、７である。いくつかの実施形態において、ｎは、８である。
いくつかの実施形態において、Ｌ１は、−Ｏ−（ＣＨＭｅ）−または−Ｏ−ＣＨ２−以外である。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫原性複合糖質の治療的に有効な量は、腫瘍成長を阻害するのに有効な量を含む。ある特定の実施形態では、治療的に有効な量は、ＩｇＭアイソタイプ抗体の相対量よりも高いＩｇＧアイソタイプ抗体の相対量を誘導する免疫応答を誘導するのに有効な量を含む。いくつかの実施形態において、治療的に有効な量は、炭水化物決定基のうちの少なくとも１つを認識する抗体を誘発するのに有効な量を含む。ある特定の実施形態では、治療的に有効な量は、炭水化物抗原のそれぞれに対する抗体を誘発するのに有効な量を含む。いくつかの実施形態において、治療的に有効な量は、１つ以上の固形腫瘍を治療するのに有効な量である。
ある特定の実施形態では、免疫原性複合糖質は、免疫原性担体に共有結合される多抗原性糖ペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、複合糖質は、以下の構造を有し、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｌ１、Ａ、ｐ、ｍ、ｑ、ｔ、リンカー、およびクロスリンカーのそれぞれは、本明細書において上記、ならびにクラスおよびサブクラスで定義される通りであり、Ｒｃは、免疫原性担体である。
いくつかの実施形態において、ｍは、５〜２０である。いくつかの実施形態において、ｍは、４〜１０である。いくつかの実施形態において、ｍは、５〜７である。いくつかの実施形態において、ｍは、３である。いくつかの実施形態において、ｍは、４である。いくつかの実施形態において、ｍは、５である。いくつかの実施形態において、ｍは、６である。いくつかの実施形態において、ｍは、７である。いくつかの実施形態において、ｍは、８である。いくつかの実施形態において、ｍは、９である。いくつかの実施形態において、ｍは、１０である。いくつかの実施形態において、ｍは、１１である。いくつかの実施形態において、ｍは、１２である。いくつかの実施形態において、ｍは、１３である。いくつかの実施形態において、ｍは、１４である。いくつかの実施形態において、ｍは、１５である。いくつかの実施形態において、ｍは、１６である。いくつかの実施形態において、ｍは、１７である。いくつかの実施形態において、ｍは、１８である。いくつかの実施形態において、ｍは、１９である。いくつかの実施形態において、ｍは、２０である。
いくつかの実施形態において、ｐは、０である。いくつかの実施形態において、ｐは、１〜２０である。いくつかの実施形態において、１つ以上のｐの出現は、ｍの出現の間にある。
ある特定の実施形態では、ｑは、０である。他の実施形態では、ｑは、１である。
ある特定の実施形態では、ｔは、１である。いくつかの実施形態において、ｔは、２００〜１２００である。いくつかの実施形態において、ｔは、少なくとも２００、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、または少なくとも１１００である。いくつかの実施形態において、ｔは、５０〜１２００である。いくつかの実施形態において、ｔは、２００〜８００である。いくつかの実施形態において、ｔは、５００〜８００である。
ある特定の実施形態では、複合糖質は、以下の構造を有し、
式中、Ｒ２、ｍ、ｎ、ｔ、およびＲｃのそれぞれは、本明細書において上で定義され、ならびにクラスおよびサブクラスで説明される通りである。
いくつかの実施形態において、ｍは、５であり、それぞれのｎの出現は、３または５である。いくつかの実施形態において、ｍは、５であり、それぞれのｎの出現は、３または５であり、それぞれのＡは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基であり、それぞれのＡの出現が異なる。いくつかの実施形態において、ｍは、５であり、それぞれのｎの出現は、３または５であり、それぞれのＡは、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、およびＧｂ５からなる群から選択される炭水化物決定基であり、それぞれのＡの出現が異なる。
ある特定の実施形態では、複合糖質は、以下の構造を有し、
式中、ｔは、本明細書において上で定義され、ならびにクラスおよびサブクラスで説明される通りである。
ある特定の実施形態では、複合糖質は、以下の構造を有し、
式中、ｔは、本明細書において上で定義され、ならびにクラスおよびサブクラスで説明される通りである。
ある特定の実施形態では、本発明は、対象における抗体を誘導する方法を提供し、抗体は、ヒト腫瘍細胞に特異的に結合することができ、本方法は、対象に、本明細書に記載の任意の免疫原性複合糖質を投与することを含み、免疫原性複合糖質は、本明細書に記載の任意の多抗原性糖ペプチドを含む。
いくつかの実施形態において、誘導された抗体は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、およびＧＭ２からなる群から選択される炭水化物決定基のうちの少なくとも１つを認識する。いくつかの実施形態において、抗体を誘導する方法は、ＩｇＭアイソタイプ抗体の相対量よりも高いＩｇＧアイソタイプ抗体の相対量を誘導することを含む。ある特定の実施形態では、生成された抗体は、糖ペプチド上に存在する炭水化物決定基のそれぞれを認識する。
接合体
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質を提供するために、免疫原性担体タンパク質を、架橋剤とともにインキュベートするステップ、
（ｂ）チオール含有生体分子を、好適なジスルフィド還元試薬で処置するステップ、および
（ｃ）免疫原性担体タンパク質−生体分子接合体を提供するために、好適な条件下で、架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質を、チオール含有生体分子と合わせるステップを含む方法を提供する。
ステップ（ｂ）の代案として、および／またはそれに加えて、ある特定の実施形態では、提供される方法は、架橋の準備が整った免疫原性担体タンパク質との接合の前に、チオール含有生体分子を新たに調製するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、ステップ（ａ）において、未反応の架橋剤を除去するステップをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、接合ステップ（ｃ）後に、未反応の生体分子を除去するステップをさらに含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、
（ａ）チオール含有生体分子を、好適なジスルフィド還元試薬で処置するステップ、
（ｂ）架橋の準備が整った生体分子を提供するために、チオール含有生体分子を、架橋剤とともにインキュベートするステップ、および
（ｃ）免疫原性担体タンパク質−生体分子接合体を提供するために、好適な条件下で、架橋の準備が整った生体分子を、免疫原性担体タンパク質と合わせるステップを含む方法を提供する。
ステップ（ｂ）の代案として、および／またはそれに加えて、ある特定の実施形態では、提供される方法は、チオール含有生体分子を架橋剤とともにインキュベートする前に、チオール含有生体分子を新たに調製するステップを含む。ある特定の実施形態では、方法は、ステップ（ｂ）において、未反応の架橋剤を除去するステップをさらに含む。
本明細書に記載の接合方法のある特定の実施形態では、免疫原性担体タンパク質は、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、カチオン化ウシ血清アルブミン、ポリリジン、ＯＭＰＣ、またはＫＬＨから選択される。いくつかの実施形態において、免疫原性担体タンパク質は、ＫＬＨである。
ある特定の実施形態では、チオール含有生体分子は、糖ペプチドである。いくつかの実施形態において、チオール含有生体分子は、本明細書に記載の任意の糖ペプチドである。
当業者は、提供される方法に従って使用することができる多数の好適な架橋試薬に精通している。そのような好適な架橋試薬は、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．（２００８）．Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに記載されている。ある特定の実施形態では、架橋試薬は、ヘテロ二官能性試薬である。ある特定の実施形態では、架橋試薬は、ホモ二官能性試薬である。いくつかの実施形態において、二官能性架橋試薬は、ほんの数例を挙げると、以下から選択される：
ｉ）マレイミド（ビスマレイミドエタン、１，４−ビスマレイミドブタン、ビスマレイミドヘキサン、トリス［２−マレイミドエチル］アミン、１，８−ビス−マレイミドジエチレングリコール、１，１１−ビス−マレイミドジエチレングリコール、１，４−ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン、ジチオ−ビスマレイミドエタン）、
ｉｉ）ピリジルジチオール（１，４−ジ−［３’−（２’−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ブタン）、
ｉｉｉ）アリールアジド（ビス−［ｂ−（４−アジドサリシルアミド）エチル］ジスルフィド）、
ｉｖ）ＮＨＳエステル／マレイミド（Ｎ−（ａ−マレイミドアセトキシ）スクシンイミドエステル、Ｎ−［s−マレイミドプロピルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル、Ｎ−［ｇ−マレイミドブチリルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、スルホスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート、［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スクシンイミドエステル、［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロイルオキシ］スルホスクシンイミドエステルスクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スルホスクシンイミジル４−［ｐ−マレイミドフェニル］ブチラート、スクシンイミジル−６−［s−マレイミドプロピオンアミド］ヘキサノエート、スクシンイミジル−４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロエート］、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカノイルオキシ］スルホスクシンイミドエステル、スクシンイミジル−（［Ｎ−マレイミドプロピオンアミド］−＃エチレングリコール）エステル）、
ｖ）ＮＨＳエステル／ピリジルジチオール（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−メチル−ａ−［２−ピリジルジチオ］トルエン、４−スルホスクシンイミジル−６−メチル−ａ−（２−ピリジルジチオ）トルアミドヘキサノエート）、
ｖｉ）ＮＨＳエステル／ハロアセチル（Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート、スクシンイミジル３−［ブロモアセトアミド］プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート、Ｎ−スルホスクシンイミジル［４−ヨードアセチル］アミノベンゾエート）、
ｖｉｉ）ピリジルジチオール／アリールアジド（Ｎ−［４−（ｐ−アジドサリシルアミド）ブチル］−３’−（２’−ピリジルジチオ）プロピオンアミド）、
ｖｉｉｉ）マレイミド／ヒドラジド（Ｎ−［s−マレイミドプロピオン酸］ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩、［Ｎ−ｅ−マレイミドカプロン酸］ヒドラジド、トリフルオロ酢酸塩、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド塩酸塩、Ｎ−［ｋ−マレイミドウンデカン酸］ヒドラジド）、
ｉｘ）ピリジルジチオール／ヒドラジド（３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンｙｌヒドラジド）、
ｘ）イソシアネート／マレイミド（Ｎ−［ｐ−マレイミドフェニル］イソシアネート）、および１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン。
任意の好適な還元剤を、提供される接合方法に従って使用することができる。いくつかの実施形態において、チオール含有生体分子を好適なジスルフィド還元試薬で処置するステップは、トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン）（ＴＣＥＰ）、２−メルカプトエチルアミン、システイン、２−メルカプトエタノール（ＢＭＥ）、またはジチオスレイトール（ＤＴＴ）から選択されるジスルフィド還元剤を含む。いくつかの実施形態において、還元剤は、固定化試薬である。いくつかの実施形態において、還元剤は、ＴＣＥＰゲルである。
ある特定の実施形態では、提供される接合方法は、１つの免疫原性担体タンパク質につき、少なくとも２００個の生体分子の効率を有する。ある特定の実施形態では、提供される接合方法は、１つの免疫原性担体タンパク質につき、少なくとも３００、少なくとも４００、少なくとも５００、少なくとも６００、少なくとも７００、少なくとも８００、少なくとも９００、少なくとも１０００、または少なくとも１１００個の生体分子の効率を有する。ある特定の実施形態では、提供される接合方法は、１つの免疫原性担体タンパク質につき、約２００〜約８００個の生体分子の効率を有する。
ある特定の実施形態では、本発明は、生物接合体のエピトープ比の著しい増加を可能にする改善された生物接合プロトコルを提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、以下の構造を有する免疫原性接合体を提供し、
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒｃ、Ｌ１、Ａ、ｐ、ｍ、ｑ、リンカー、およびクロスリンカーのそれぞれは、本明細書において上で定義され、かつクラスおよびサブクラスで説明される通りであり、
それぞれのＡは、独立して、腫瘍細胞上に見出される炭水化物決定基であり、
ｔは、免疫原性担体に付着した糖ペプチド基の数であり、２００より大きい。ある特定の実施形態では、ｔは、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、または１０００より大きい。
任意の特定の理論によって拘束されることを望むものではないが、そのような接合体の高エピトープ比（すなわち、ｔの高い値）が、投与される接合体の高められた免疫原性と相関する可能性もある。さらに、血清中の抗体の効率的な産生は、対応する炭水化物抗原を発現する腫瘍細胞を根絶するのに役立ち得る。
ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、またはＧＭ２から選択される。ある特定の実施形態では、それぞれのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、Ｇｂ５、またはＧＭ２から選択される。ある特定の実施形態では、それぞれのＡの出現が異なる。
いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、二糖類以上の炭水化物を含む。いくつかの実施形態において、それぞれのＡの出現は、二糖類以上の炭水化物を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、三糖類以上の炭水化物を含む。いくつかの実施形態において、それぞれのＡの出現は、三糖類以上の炭水化物を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＡの出現は、３５０ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＡの出現は、５００ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのＡの出現は、７５０ダルトンよりも大きい分子量を有する炭水化物を含む。いくつかの実施形態において、少なくとも１つのＡの出現は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｇｂ５、またはＧＭ２である。
ある特定の実施形態では、クロスリンカーは、上述の任意の二官能性架橋試薬に由来する。
リンカー
上述の方法、糖ペプチド、および複合糖質のある特定の実施形態では、リンカーは、共有結合である。いくつかの実施形態において、リンカーは、直鎖もしくは分岐鎖のアルキルもしくはアリールカルボン酸エステル、または任意で置換された二価Ｃ１〜１０飽和もしくは不飽和の線状もしくは分岐した炭化水素鎖であり、鎖の１〜６つのメチレン単位は、独立して、−Ｓ−、−ＮＲ−、−Ｎ（Ｒ）Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）−、−Ｏ−、または−Ｃ（Ｏ）−によって置換される。ある特定の実施形態では、リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ２）２−５ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｓ−である。いくつかの実施形態において、リンカーは、−ＮＨ（ＣＨ２）３ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ２Ｓ−である。
クロスリンカー
上述の方法、糖ペプチド、および複合糖質のある特定の実施形態では、クロスリンカーは、上述の二官能性架橋試薬に由来する部分である。いくつかの実施形態において、クロスリンカーは、担体の表面アミンとリンカーのチオールを接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分である。ある特定の実施形態では、クロスリンカーは、担体のヒドロキシル表面とリンカーのチオールを接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分である。いくつかの実施形態において、クロスリンカーは、担体のチオール表面とリンカーのチオールを接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分である。いくつかの実施形態において、クロスリンカーは、担体のカルボキシルの表面とリンカーのチオールを接合することができる二官能性架橋試薬に由来する部分である。いくつかの実施形態において、クロスリンカーは、以下の構造を有する部分であり、

それによって、該構造が、マレイミド安息香酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルとリンカーとの接合時に生成される。
製剤
上述のように、本発明は、新規の治療薬、具体的には、完全合成癌ワクチンおよび／または治療薬の開発において有用な化合物ならびに合成方法論を提供する。概して、本明細書に開示されるように調製される化合物および糖ペプチドを、癌に罹患する対象における癌の治療および／または予防（好ましくは、再発の予防）に有用な複合糖質を生成するために、タンパク質担体または脂質に接合することができる。加えて、本明細書に開示のプロセスによって調製される複合糖質は、種々の腫瘍細胞と免疫反応する抗体を誘導することができるワクチンとして、アジュバント療法において有用である。そのようなアジュバント療法は、ある特定の癌の再発率を減少させ、手術後の生存率を増加させ得る。外科的癌治療が行われ、その後、免疫の前に抗体が不足している患者において見出される細胞表面分化抗原から調製されるワクチンで治療される患者における臨床試験において、無病期間の非常に著しい増加が観察され得る（Ｐ．Ｏ．Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，１９９４，１２，１０３６）。
したがって、本発明は、任意で薬学的に許容される担体と組み合わせ、活性成分として、本明細書に開示の本発明の任意の化合物を含む、癌の治療および／または癌の再発を予防するための薬学的組成物を提供する。本発明の薬学的組成物は、他の治療的に活性な成分（例えば、化学療法薬および／または苦痛緩和剤）をさらに含み得る。例えば、苦痛緩和治療は、鎮痛剤、制吐薬、および抗吐き気薬を包含する。加えて、化学療法、放射線療法、および手術の全てを、苦痛緩和のために（すなわち、治療を試みることなく症状を軽減するためにであり、例えば、腫瘍を小さくし、ならびに圧力、出血、痛み、および癌の他の症状を軽減するために）使用することができる。
ある特定の実施形態では、本発明の薬学的組成物または方法は、免疫学的アジュバント、または免疫学的アジュバントの組み合わせを含む。
ある特定の実施形態では、アジュバントは、サポニンアジュバントである（例えば、Ｍａｒｃｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｖａｃｃｉｎｅ，２０００，１８，３１４１、米国特許第６，０８０，７２５号および同第５，９７７，０８１号を参照されたく、それらの全内容は、参照により本明細書に組み込まれる）。サポニンアジュバントの一例には、選択された天然サポニンを修飾することによって得られる半合成アジュバントであるＧＰＩ−０１００（Ｇａｌｅｎｉｃａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，ＭＤ）が挙げられるが、それらに限定されない。
キラヤ・サポナリア・モリナから単離されたサポニンは、２つのアシル部分、ノルモノテルペンカルボン酸およびノルモノテルペンカルボン酸グリコシドを含有し、それらは、Ｃ−２８位に結合するフコシル残基に線状に結合される。これらの親油性アシル基が、これらのサポニンの毒性、および外来性抗原に対する細胞傷害性Ｔ細胞を刺激するそれらの能力に関与し得ることが仮定されている。フコシル残基とアシル基との間の結合は、不安定であり、弱酸性条件（ｐＨ≧６）下で加水分解するとともに、細胞媒介性免疫応答を刺激するサポニンの能力を失う。それらのサポニン前駆体とは異なり、ＧＰＩ−０１００アジュバントは、サポニンのグルクロン残基中に安定した非毒性親油性部分を含む。これらの半合成アジュバントを調製するための方法は、当技術分野において周知である。例えば、ＧＰＩ−０１００アジュバントを、塩基性条件下で、（市販の）キラヤサポニンを加水分解することによって調製し、相当する脱アシル化産物を産出することができる。その後、脱アシル化中間体を、標準のカルボン酸部分活性化方法論を使用して、好適なアミン試薬と反応させて、所望の化合物を得ることができる。多種多様の手順は、サポニン化合物を抽出するのに効果的である。それらは、以下のように一般化される：（ｉ）石油エーテル等の疎水性有機溶媒を用いた有機物の脱脂、（ｉｉ）好適なアルコール（例えば、メタノールもしくはエタノール）またはアルコール−水混合物での抽出、（ｉｉｉ）カルビノール溶媒の蒸発、および（ｉｖ）水と水で飽和したｎ−ブタノールとの間への乾燥アルコール抽出物の分配、続いて、好適な有機溶媒（例えば、ジエチルエーテル）を用いたｎ−ブタノール／水からの粗サポニンの沈殿。サポニン抽出物の精製は、複数の分離ステップを必要とし得る。例えば、予備分別を、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液滴向流クロマトグラフィー（ＤＣＣＣ）、または遠心液体クロマトグラフィー（ＲＬＣＣ）等のより洗練されたクロマトグラフ技術と組み合わせて、従来のオープンカラムクロマトグラフィーまたはシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーを使用して実行することができる。これらの技術と分取ＴＬＣとの統合は、典型的には、分離および精製されたサポニンを産出する。
ある特定の実施形態では、アジュバントは、細菌もしくはリポソームであるか、または細菌もしくはリポソームを含む。ある特定の例示的な実施形態において、アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞、カルメット・ゲラン桿菌、ＧＰＩ−０１００、またはＱＳ−２１を含むが、それらに限定されない。
本発明の化合物を、薬学的に許容される担体と合わせて、薬学的組成物を形成することができる。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８０）は、薬学的組成物を製剤化する際に使用される種々の担体、およびその調製についての既知の技術を開示する。ある特定の実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される量の発明の化合物を含む。担体物質と合わせて、単一剤形を産生することができる活性成分の量は、治療する宿主および特定の投与様式に応じて変化する。担体物質と合わせて、単一剤形を産生することができる活性成分の量は、概して、治療効果をもたらす化合物の量である。概して、この量は、活性成分の約１％〜約９９％、約５％〜約７０％、または約１０％〜約３０％に及ぶ。
湿潤剤、乳化剤、ならびにラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、ならびに着色剤、放出剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、芳香剤、防腐剤、および抗酸化剤も、本組成物中に存在し得る。
薬学的に許容される抗酸化剤の例には、アスコルビン酸、塩酸システイン、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム等の水溶性抗酸化剤；パルミチン酸アスコルビル、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピル、アルファトコフェロール等の油溶性抗酸化剤；およびクエン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸等の金属キレート剤が挙げられる。
本発明の製剤は、経口、経鼻、局所（口腔および舌下を含む）、直腸、膣内、および／または非経口投与に好適なものを含む。本製剤を、単位剤形で提示することができ、かつ製薬学分野において周知の任意の方法で調製することができる。ある特定の実施形態では、本発明の製剤は、シクロデキストリン、リポソーム、ミセル形成剤、例えば、胆汁酸、および高分子担体、例えば、ポリエステルおよびポリ無水物からなる群から選択される賦形剤；ならびに本発明の化合物を含む。ある特定の実施形態では、前述の製剤は、本発明の化合物を経口的かつ生物学的に利用可能にする。
これらの製剤を調製する方法は、本発明の化合物を、担体および任意で１つ以上の副成分との会合に至らせるステップを含む。概して、本製剤は、本発明の化合物を、液体担体、もしくは微粉化された固体担体、またはそれらの両方との会合に均一かつ密接に至らせ、その後、必要に応じて産物を成形することによって調製される。
経口投与に好適な本発明の製剤は、カプセル、カシェー、丸薬、錠剤、薬用ドロップ（風味のある基礎原料、通常、ショ糖およびアカシアまたはトラガカントを使用）、粉末、顆粒の形態であり得るか、または水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁液、または水中油もしくは油中水液体エマルジョン、またはエリキシル剤もしくはシロップ剤、またはトローチ剤（ゼラチンおよびグリセリン等の不活性基礎原料、またはショ糖およびアカシアを使用）および／またはうがい薬等として投与することができ、それぞれ、活性成分として本発明の化合物の所定量を含有する。本発明の化合物を、ボーラス、舐剤、またはペーストとして投与することもできる。
経口投与（カプセル、錠剤、錠剤、糖衣錠、粉末、顆粒等）のための本発明の固体剤形において、活性成分は、１つ以上の薬学的に許容される担体と混合され、その担体としては例えば、クエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウム、および／または以下のうちのいずれかである：デンプン、ラクトース、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール、および／もしくはケイ酸等の充填剤または増量剤；例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、および／またはアカシア等の結合剤；グリセロール等の保湿剤；寒天−寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤；パラフィン等の溶液緩染剤；第四級アンモニウム化合物等の吸収促進剤；例えば、セチルアルコール、グリセロールモノステアレート、および非イオン界面活性剤等の湿潤剤；カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤；滑石、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の滑沢剤；ならびに着色剤。カプセル、錠剤、および錠剤の場合、薬学的組成物は、緩衝剤も含み得る。同様の種類の固体組成物を、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量ポリエチレングリコール等の担体を用いた軟質および硬質シェルゼラチンカプセル中の充填剤として、採用することもできる。
任意で１つ以上の副成分を伴って、錠剤を、圧縮または鋳造によって作製することができる。圧縮された錠剤を、結合剤（例えば、ゼラチンもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウムもしくは架橋カルボキシルメチルセルロースナトリウム）、表面活性剤、または分散剤を使用して調製することができる。粉末化合物の混合物を不活性液体希釈剤で湿らせる好適な機械の中で、鋳造された錠剤を作製することができる。
本発明の薬学的組成物の錠剤、ならびに糖衣錠、カプセル、錠剤、および顆粒等の他の固体剤形を、任意でスコア化することができるか、または腸溶性コーティングおよび製剤処方の分野で周知の他のコーティング等のコーティングならびにシェルを用いて調製することができる。例えば、所望の放出特性を提供するための様々な割合のヒドロキシプロピルメチルセルロース、他のポリマーマトリックス、リポソーム、および／またはマイクロスフェアを使用して、それらを、その中で活性成分の持続放出または制御放出を提供するように製剤化することもできる。それらを、迅速な放出のために、例えば、凍結乾燥のために製剤化することができる。それらを、例えば、細菌保持フィルタを通す濾過によって、または使用直前に滅菌水もしくは他の注入可能な滅菌培地中に溶解することができる滅菌剤を滅菌固体組成物の形態で組み込むことによって滅菌することができる。これらの組成物は、乳白剤を任意で含有することもでき、かつそれらが、任意で、遅延性様式で、活性成分（複数を含む）を消化管のある特定の部分でのみ、またはその部分で優先的に放出する組成物であってもよい。使用することができる包埋組成物の例には、高分子物質およびワックスが挙げられる。活性成分は、適切な場合、上述の賦形剤のうちの１つ以上を有するマイクロカプセル化形態であってもよい。
本発明の化合物の経口投与用の液体剤形には、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。活性成分に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、油（具体的には、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタン脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物等の当技術分野において一般に使用される不活性希釈剤を含有し得る。
不活性希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤、および懸濁化剤、甘味剤、香味剤、着色剤、芳香剤、ならびに防腐剤等のアジュバントを含むこともできる。
活性化合物に加えて、懸濁液は、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天−寒天およびトラガカント、ならびにそれらの混合物等の懸濁化剤を含有し得る。
直腸または膣内投与のための本発明の薬学的組成物の製剤を坐薬として提示することができ、それを、１つ以上の本発明の化合物を、室温では固体であるが、体温では液体になり、したがって、直腸または膣腔で融解して、活性化合物を放出する、例えば、ココアバター、ポリエチレングリコール、坐薬ワックス、もしくはサリチル酸塩を含む１つ以上の好適な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって調製することができる坐薬として提示することができる。
膣内投与に好適な本発明の製剤には、適切であるとして当技術分野において既知の担体を含有するペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、泡、またはスプレー製剤も含まれる。
本発明の化合物の局所または経皮投与用の剤形には、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パッチ、および吸入剤が含まれる。活性化合物を、滅菌条件下で、薬学的に許容される担体、および必要とされ得る任意の防腐剤、緩衝液、または推進剤と混合することができる。
軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、本発明の活性化合物に加えて、動物性および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカント、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、滑石、および酸化亜鉛、またはそれらの混合物等の賦形剤を含有し得る。
粉末およびスプレーは、本発明の化合物に加えて、ラクトース、滑石、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物等の賦形剤を含有し得る。スプレーは、クロロフルオロ炭化水素ならびにブタンおよびプロパン等の揮発性非置換炭化水素等の通例の推進剤をさらに含有し得る。
経皮パッチは、身体への本発明の化合物の制御送達を提供する追加の利点を有する。適切な培地中に化合物を溶解または分散することによって、そのような剤形を作製することができる。吸収促進剤を使用して、皮膚の全域で化合物の流動を増加させることもできる。律速膜を提供するか、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に化合物を分散するかのいずれかによって、そのような流動の速度を制御することができる。
眼科製剤、眼軟膏剤、粉末、溶液等も、本発明の範囲内にあるとして企図される。
非経口投与に好適な本発明の薬学的組成物には、１つ以上の薬学的に許容される滅菌等張水溶液もしくは非水溶液、分散液、懸濁液、もしくはエマルジョン、または使用直前に注入可能な滅菌溶液もしくは分散液に再構成することができる滅菌粉末と組み合わせた１つ以上の本発明の化合物が含まれ、糖、アルコール、抗酸化剤、緩衝液、静菌薬、製剤を目的とするレシピエントの血液と等張にする溶質、または懸濁化剤もしくは増粘剤を含有し得る。
本発明の薬学的組成物において採用することができる好適な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等）、およびそれらの好適な混合物、オリーブ油等の植物油、ならびにオレイン酸エチル等の注入可能な有機エステルが挙げられる。適切な流動性を、例えば、レシチン等のコーティング物質の使用によって、分散液の場合には要求される粒径の維持によって、かつ界面活性剤の使用によって維持することができる。
これらの組成物は、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤等のアジュバントも含有し得る。主題の化合物上での微生物の作用の阻止を、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等の包含によって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウム等の等張剤を組成物に包含することも望ましくあり得る。加えて、注入可能な製剤の持続的吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン等の吸収を遅延させる作用物質の包含によってもたらされ得る。
ある場合には、薬物の効果を長引かせるために、皮下または筋肉内注入からの薬物の吸収を減速することが望ましい。これを、難水溶性を有する結晶性または非晶質物質の液体懸濁液の使用によって達成することができる。その結果、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、次いで、結晶寸法および結晶形態に依存し得る。あるいは、非経口投与された薬物形態の遅延吸収は、油ビヒクル中で薬物を溶解または懸濁化することによって達成される。
注入可能なデポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に主題の化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。ポリマーに対する薬物の比率および採用する特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）が挙げられる。注入可能なデポー製剤は、薬物を、体内組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルジョン中に捕捉することによって調製される。
薬物溶出形態は、コーティングされたステントまたは薬用ステントおよび埋め込み型デバイスを含む。薬物溶出ステントおよび他のデバイスを、化合物または薬学的調製物でコーティングすることができ、持続放出するように設計されたポリマーをさらに含み得る。
ある特定の実施形態では、化合物または薬学的調製物は、経口投与される。他の実施形態では、化合物または薬学的調製物は、静脈内投与される。ある特定の実施形態では、化合物は、切断可能なリンカーを介して、カテーテルを用いて投与される固体支持体に取り付けられる。代替の投与経路は、舌下、筋肉内、および経皮投与を含む。
本発明の化合物が、薬剤としてヒトおよび動物に投与されるとき、それらを、それ自体で、または例えば、薬学的に許容される担体と組み合わせて、０．１％〜９９．５％または０．５％〜９０％の活性成分を含有する薬学的組成物として投与することができる。
本発明の調製物を、経口、非経口、局所、または直腸投与することができる。それらは、言うまでもなく、それぞれの投与経路に好適な形態で投与される。例えば、それらは、錠剤またはカプセル形態で、注入、吸入、点眼薬、軟膏、坐薬等によって、注入（ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）、点滴（ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、または吸入による投与によって、ローションまたは軟膏によって局所的に、かつ坐薬によって直腸的に投与される。
これらの化合物を、経口、経鼻（例えば、エアロゾル、スプレーによって等）、直腸、膣内、非経口、嚢内、ならびに口腔および舌下を含む局所（粉末、軟膏、または液滴によって等）を含む任意の好適な投与経路による治療のために、ヒトおよび他の動物に投与することができる。
選択される投与経路にかかわらず、好適な水和形態で使用することができる本発明の化合物、および／または本発明の薬学的組成物は、当業者に既知の従来の方法を用いて、薬学的に許容される剤形に製剤化される。
本発明の薬学的組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者に害を及ぼすことなく、特定の患者の所望の治療応答を達成するのに効果的な量の活性成分、組成物、および投与様式を得ることができるように変化し得る。
選択される投与量レベルは、採用される特定の本発明の化合物、またはそのエステル、塩もしくはアミドの活性、または採用される特定の化合物の投与経路、投与時間、排出もしくは代謝速度、または治療期間、または採用される特定の化合物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または物質、または年齢、性別、体重、状態、一般的な健康状態および治療される患者の以前の病歴、ならびに医療分野において周知の要素を含む様々な要素に依存する。
当業者を含む医師または獣医は、必要とされる薬学的組成物の有効量を容易に決定かつ処方することができる。例えば、医師または獣医は、所望の治療効果を達成するのに必要とされるレベルよりも低いレベルでの薬学的組成物中の採用される本発明の化合物の投与から開始し、その後、所望の効果が達成されるまで投与量を次第に増加させてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明の化合物または薬学的組成物は、長期にわたって対象に提供される。長期治療は、１ヶ月以上、１ヶ月〜１年、１年以上、またはそれ以上の期間の連続投与等の長期間の連続投与の任意の形態を含む。多くの実施形態において、長期治療は、本発明の化合物または薬学的組成物を対象の生涯にわたって繰り返し投与することを伴う。好ましい長期治療は、例えば、１日に１回以上、１週間に１回以上、または１ヶ月に１回以上の定期的な投与を伴う。概して、１日量等の本発明の化合物の好適な用量は、治療効果をもたらすのに効果的な最も低い用量である化合物の量である。そのような効果的な用量は、概して、上述の要素に依存する。概して、患者への本発明の化合物の用量は、望ましい効果を得るために使用されるとき、１日当たり、体重１ｋｇ当たり約０．０００１〜約１００ｍｇの範囲である。好ましくは、１日投与量は、体重１ｋｇ当たり０．００１〜５０ｍｇの化合物、さらにより好ましくは、体重１ｋｇ当たり０．０１〜１０ｍｇの化合物の範囲である。しかしながら、より低い用量またはより高い用量を使用することができる。いくつかの実施形態において、対象に投与される用量を、年齢、疾患の進行、体重、または他の要素により対象の生理機能が変化するにつれて修正することができる。
所望の場合、活性化合物の効果的な１日量を、適切な間隔で別々に投与される、２、３、４、５、６つ以上の部分用量として、任意で、単位剤形で、１日を通して投与することができる。
本発明の化合物を単独で投与することは可能であるが、化合物を上述の薬学的製剤（組成物）として投与することが好ましい。
本発明に従う化合物を、他の薬剤から類推して、人間医学または獣医学で用いる任意の好都合な方法での投与用に製剤化することができる。
本発明は、発明の化合物の薬学的組成物を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、そのようなキットは、本発明の化合物と別の化学療法薬との組み合わせを含む。治療薬を、別々に、または一緒にパッケージングすることができる。キットは、任意で、薬物の処方に関する使用説明書を含む。ある特定の実施形態では、キットは、それぞれの治療薬の複数の用量を含む。キットは、１週間、２週間、３週間、４週間、または複数ヶ月間、対象を治療するのに十分な量のそれぞれの構成要素を含み得る。キットは、化学療法の全サイクルを含み得る。ある特定の実施形態では、キットは、化学療法の複数のサイクルを含む。
使用
進行性卵巣癌を有する患者の現在の標準的治療は、積極的な侵攻性腫瘍縮小手術、続いて、タキサンおよび白金ベースの化学療法から成る。卵巣癌、卵管癌、または原発性腹膜癌を有する患者は、初期のタキサンおよび白金ベースの化学療法への臨床応答を得る確率を８０％有しており、かなりの割合が、治療の最後に臨床的完全寛解期に入る。最適にデバルクした患者の平均全生存期間が、６５．６ヶ月に増加した一方で、患者の３０％未満が疾患のないままであり、準最適にデバルクした疾患を有する患者の１０％が疾患のないままであり、それぞれ、２４ヶ月および１８ヶ月間進行がないままである（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ ＤＫ，Ｂｕｎｄｙ Ｂ，Ｗｅｎｚｅｌ Ｌ，ｅｔ ａｌ Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ３５４：３４−４３，２００６）。再発を有する患者は、概して、限られた期間のその後の応答を有し、最終的には、難治性疾患を発現する（Ｍａｒｋｍａｎ Ｍ，Ｍａｒｋｍａｎ Ｊ，Ｗｅｂｓｔｅｒ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２２：３１２０−５，２００４）。寛解を長引かせ、および／または再発を予防するための選択肢が必要とされており、本発明によって提供される。
免疫指向型治療は、疾患の苦しみが最も低い臨床的寛解期にある患者に魅力的な治験中の治療戦略を代表する（Ｓａｂｂａｔｉｎｉ Ｐ，Ｓｐｒｉｇｇｓ ＤＲ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２４：５３７−９，２００６）。前臨床モデルは、受動的に投与された抗体およびワクチンで誘導された抗体の両方を用いた循環腫瘍細胞の排除および全身性微小転移巣の除去を実証している（Ｚｈａｎｇ Ｈ，Ｚｈａｎｇ，Ｓ，Ｃｈｅｕｎｇ ＮＫ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ２３：３１１４−２２，２００５、Ｒａｇｕｐａｔｈｉ Ｇ，Ｇａｔｈｕｒｕ Ｊ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｐ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ Ｒｅｓ １２３：１５７−８０，２００５）。
ある特定の実施形態では、対象に、任意で、薬学的に許容される担体と組み合わせて、治療的に有効な量の本明細書に開示の複合糖質のうちのいずれかを投与することを含む治療方法が提供される。いくつかの実施形態において、本方法は、免疫学的アジュバント（以下でさらに定義される）、または免疫学的アジュバントの組み合わせを同時投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、癌は、固形腫瘍または上皮腫瘍である。上述のように、癌の治療および／または癌の再発の予防のための方法が提供され、対象に、抗体を誘導するのに効果的な量の上で開示される複合糖質のうちのいずれかを投与することを含む。ヒト対象における抗体を誘導するための方法も提供され、抗体は、ヒト腫瘍細胞に特異的に結合することができる。ある特定の実施形態では、炭水化物抗原は、直接的に、またはクロスリンカーを介してのいずれかで、免疫原性担体に結合され、担体は、タンパク質、ペプチド、もしくは脂質である。ある特定の実施形態では、担体は、ヒト血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、カチオン化ウシ血清アルブミン、ポリリジン、ＯＭＰＣ、またはＫＬＨである。ある特定の実施形態では、担体は、以下の構造を有する脂質であり、

式中、ｍ’、ｎ’、およびｐ’は、それぞれ独立して、約８〜２０の整数であり、ＲＶは、水素、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖低級アルキル、または置換もしくは非置換のフェニルである。ある特定の例示的な実施形態において、ｍ’、ｎ’、およびｐ’はそれぞれ、１４であり、脂質は、トリパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイニルセリン（例えば、ＰａｍＣｙｓ）である。
ある特定の実施形態では、提供される方法は、対象に、免疫原性担体と組み合わせて、任意で、薬学的に許容される担体と組み合わせて、治療的に有効な量の本明細書に開示の化合物および／または糖ペプチドのうちのいずれかを投与することを含む。具体的には、ある特定の実施形態では、提供される方法は、免疫原性担体に接合される炭水化物抗原を投与することを含む。ある特定の実施形態では、提供される方法は、接合されていない炭水化物抗原および免疫原性担体を投与することを含む。むしろ、それらは、別々の構成要素として、同時に、または連続して投与される。
本発明のために、化合物／糖ペプチドおよび担体は、それらが、（ｉ）化合物／糖ペプチドおよび担体を含有する単一の組成物として、または（ｉｉ）２つの別々の組成物として投与されるか、あるいは（ｉｉｉ）効果的な結果が、化合物／糖ペプチドおよび担体の両方が単一の組成物として投与されるときに得られる結果と同等である程度に短い期間内に別々の経路によって送達されるときに、同時に投与されると考えられている。
ある特定の実施形態では、本開示は、対象における抗体を誘発する方法を提供し、対象に、本開示の構築物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、本発明は、抗体を誘導する方法を提供し、免疫学的アジュバント、または免疫学的アジュバントの組み合わせを同時投与することをさらに含む。ある特定の実施形態では、アジュバントは、サポニンアジュバントである。ある特定の他の実施形態では、アジュバントは、細菌またはリポソームである。ある特定の実施形態では、アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞、カルメット・ゲラン桿菌、ＧＰＩ−０１００、またはＱＳ２１を含むが、それらに限定されない。具体的には、少なくとも２つの異なる抗原性ドメインを含む多抗原性糖ペプチドが使用されるとき、少なくとも２つの異なるタイプの抗体を誘導することが可能である。ある特定の実施形態では、糖ペプチド上に存在するそれぞれの抗原は、その抗原にタイプ特異的な抗体を誘発する。ある特定の実施形態では、産生される抗体は、糖ペプチド上に存在する少なくとも１つの抗原を認識する抗体である。ある特定の実施形態では、発明の多抗原性糖ペプチドは、対象に投与されるとき、糖ペプチド骨格上に存在する抗原のサブセットに対する抗体を産生する。ある特定の実施形態では、産生される抗体のうちのいくつかは、糖ペプチドの２つ以上の抗原を認識する。ある特定の実施形態では、発明の糖ペプチドは、炭水化物ドメイン、または腫瘍細胞上に見出される、その切断もしくは伸長バージョンを含む。
本発明の化合物を、生体外または生体内で使用することができる。本発明の化合物は、生体内での新生物または他の増殖性疾患の治療において特に有用であり得る。しかしながら、上述の発明の化合物を、研究または臨床目的のために（例えば、発明の化合物への患者の疾患の感受性を決定するため、作用機序を研究するため、細胞経路またはプロセス象を解明するため）、生体外で使用することもできる。
いくつかの実施形態において、本発明の化合物は、医学分野における使用のために提供される。いくつかの実施形態において、本発明は、増殖性疾患に罹患する対象における増殖性疾患を治療する方法を提供し、本方法は、対象に、治療的に有効な量の発明の化合物を投与することを含む。ある特定の実施形態では、増殖性疾患は、良性新生物である。ある特定の実施形態では、増殖性疾患は、癌である。
本発明の化合物を、新生物の治療または予防において使用することができる。ある特定の実施形態では、新生物は、良性新生物である。他の実施形態では、新生物は、悪性新生物である。
いくつかの実施形態において、癌は、血液学的悪性腫瘍である。ある特定の実施形態では、癌は、固形腫瘍である。発明の化合物を使用して治療することができる例示的な癌には、ほんの数例を挙げると、結腸癌、肺癌、骨癌、膵臓癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、皮膚癌、脳癌、肝臓癌、卵巣癌、子宮頸癌、子宮癌、睾丸癌、前立腺癌、膀胱癌、腎臓癌、神経内分泌癌、乳癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、眼癌、胆嚢癌、喉頭癌、口腔癌、陰茎癌、腺管腫瘍、直腸癌、小腸癌、肉腫、癌腫、黒色腫、尿道癌、膣癌が含まれる。いくつかの実施形態において、癌は、小細胞肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、卵巣癌である。いくつかの実施形態において、癌は、乳癌である。いくつかの実施形態において、癌は、肺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、子宮内膜起源である。いくつかの実施形態において、癌は、上皮起源である。いくつかの実施形態において、癌は、結腸癌である。いくつかの実施形態において、癌は、前立腺癌である。いくつかの実施形態において、癌は、胃癌である。いくつかの実施形態において、癌は、膵臓癌である。いくつかの実施形態において、癌は、腹膜癌である。いくつかの実施形態において、癌は、卵管癌である。いくつかの実施形態において、癌は、上述の器官または組織のうちのいずれか１つが起源である。
ある特定の実施形態では、本発明の化合物および薬学的組成物を、組み合わせ療法において採用することができ、すなわち、化合物および薬学的組成物を、１つ以上の他の所望の治療もしくは医療処置と同時に、その前に、またはその後に投与することができる。組み合わせレジメンにおいて採用する特定の組み合わせ療法（治療薬または手順）は、所望の治療薬および／または手順と達成される所望の治療効果との適合性を考慮する。採用される療法が、同一の障害において所望の効果を達成することができる（例えば、発明の化合物を、別の抗癌剤と同時に投与することができる）か、またはそれらが、異なる効果（例えば、任意の副作用の制御）を達成することができることも理解される。
例えば、本発明の化合物と組み合わせて使用することができる他の療法または抗癌剤には、数例を挙げると、手術、放射線療法（数例を挙げると、ガンマ放射線、中性子ビーム放射線療法、電子ビーム放射線療法、陽子線治療、小線源治療、および全身性放射性同位体）、内分泌療法、生物学的応答修飾因子（数例を挙げると、インターフェロン、インターロイキン、および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ））、温熱療法および凍結療法、任意の副作用を減弱させる作用物質（例えば、制吐薬）、ならびにアルキル化薬（メクロレタミン、クロラムブシル、シクロホスファミド、メルファラン、イホスファミド）、代謝拮抗薬（メトトレキサート）、プリン拮抗剤およびピリミジン拮抗剤（６−メルカプトプリン、５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン）、紡錘体毒（ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル）、ポドフィロトキシン（エトポシド、イリノテカン、トポテカン）、抗生物質（ドキソルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシン）、ニトロソウレア（カルムスチン、ロムスチン）、無機イオン（シスプラチン、カルボプラチン）、酵素（アスパラギナーゼ）、ならびにホルモン（タモキシフェン、ロイプロリド、フルタミド、およびメゲストロール）を含むが、それらに限定されない他の認可された化学療法薬が含まれる。さらに、本発明は、現在、臨床試験において使用され、かつ食品医薬品局によって最終的に承認され得る、ある特定の細胞毒性または抗癌剤（エポチロンおよびその類似体ならびにゲルダナマイシンおよびその類似体を含むが、それらに限定されない）の使用も包含する。最新の癌治療のより包括的な議論については、ｗｗｗ．ｎｃｉ．ｎｉｈ．ｇｏｖおよびＴｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｖｅｎｔｅｅｎｔｈ Ｅｄ．１９９９を参照されたく、その全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
ある特定の実施形態では、発明の化合物は、臨床的寛解期にある対象の治療において有用である。いくつかの実施形態において、対象は、手術によって治療されており、かつ限定された切除不能な疾患を有し得る。
例証
（実施例１）
Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎを含有する単分子五価ワクチン構築物の合成：
単分子五価構築物ＫＬＨ接合体（２）
本実施例は、接合体（２）の調製を説明する。以前の研究において、構造的に関連した第１世代単分子五価構築物は、１個のＫＬＨにつき２２８個の糖ペプチドの接合効率で、ＫＬＨ担体タンパク質に接合された（Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．２００４，１０１，１１９３７、Ｒａｇｕｐａｔｈｉ ２００６、上記、Ｂｉｓｗａｓ Ｋ，Ｃｏｌｔａｒｔ ＤＭ，Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ ＳＪ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ３：６１０７−１０，２００２、Ｃｈｏ ＹＳ，Ｗａｎ Ｑ，Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ ＳＪ．Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ １３：５２５９−６６，２００５、Ｗａｎ Ｑ，ｅｔ ａｌ．Ｏｌｅｆｉｎ Ｃｒｏｓｓ−Ｍｅｔａｔｈｅｓｉｓ：Ａ ｐｏｗｅｒｆｕｌ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｎｇｖａｃｃｉｎｅｓ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｃ ａｎｔｉｇｅｎｓ．Ｊ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｈｅｍ ２４：４２５−４０，２００５、Ｋｅｄｉｎｇ ＳＪ，ｅｔ ａｌ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ４４：３４１３−１６，２００３、Ｋｅｄｉｎｇ ＳＪ，Ｅｄｎｏ Ａ，Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ ＳＪ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ５９：７０２３−３１，２００３、Ｃｈｏ ＳＣ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３，５２５９−５２６６，２００５）。接合体（２）のより高いエピトープ／ＫＬＨ比率を得ることによって、より強固な免疫応答を生成するのが望ましいと理解し、本出願者は、以下に記載の接合のための新しい手順を開発した。
スキーム１．Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎを含有する接合体２の合成
担体タンパク質ＫＬＨを、最初に、ｐＨ６．０のリン酸緩衝液中で１時間、スルホ−ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）とともにインキュベートした。次に、接合していないスルホ−ＭＢＳを、Ｇ２５セファデックスカラム上を通過させることによって除去し、その後、マレイミド活性化ＫＬＨを得た。糖ペプチド構築物１（新たに調製され、使用直前にＴＣＥＰゲルを通過させた）を、ｐＨ６．５〜７．０のリン酸緩衝液中で、新たに調製されたマレイミド活性化ＫＬＨと混合し、室温で４時間撹拌した。インキュベーション後、３０，０００分子量をカットオフするＰｅｌｌｉｃｏｎ ＸＬ濾過器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、未反応の糖ペプチドを除去した。最後に、リン酸緩衝溶液として、相当するＫＬＨ接合体２を得た。
ＫＬＨ接合体に組み込まれた糖ペプチド構築物のコピーの数を、加水分解炭水化物分析（Ｌｌｏｙｄ，Ｋ．Ｏ．、Ｓａｖａｇｅ，Ａ．Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ．１９９１，８，４３９、Ｈａｒｄｙ，Ｍ．Ｒ．、Ｔｏｗｎｓｅｎｄ，Ｒ．Ｒ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８８，８５，３２８９）および標準のタンパク質分析（Ｂｉｏ−Ｒａｄ色素結合法）によって、１個のＫＬＨにつき５０５個であると決定した。接合収率は、単分子五価糖ペプチド構築物に対して５０％であり、ＫＬＨの回収収率は、約９８％であった。したがって、この修正された手順は、以前の接合負荷よりもはるかに高い効率の接合負荷（２２８／１）を提供した。任意の特定の理論によって拘束されることを望むものではないが、高酸化性メルカプト基を含有する新たに調製された糖ペプチド構築物１の使用が、そのような高いエピトープ比を達成するのに有用である可能性もある。感応性メルカプト基の既知の可能性のある酸化のうちの１つは、ジスルフィド形成を介して、その推定上の二量体の形成をもたらす。したがって、二量体を減少させ、かつ糖ペプチド構築物１の回収を可能にするために、使用直前に本構築物をＴＣＥＰゲルに通過させることは有用である。無傷のメルカプト基の保存は、恐らくマレイミドへのマイケル付加を介して開始するその後の生物接合反応に重要である。五価接合体２を手にして、実施例２に記載されるように、前臨床マウス設定における免疫学的研究を行った。
（実施例２）
本実施例は、実施例１に記載される接合体の生物学的研究を説明する（Ｚｈｕ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３１，９２９８−９３０３，２００９）。
動物免疫
５匹のマウス群（雌、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ）を、０、１、２、および５週間の時点で、２００μＬのＰＢＳ中に１０μｇの単分子五価構築物（ＵＰＣ）と２０μｇのＱＳ−２１アジュバントを含有するワクチン（２）で、１つの部位の皮下に免疫した。「前処理」血清を、初回のワクチン接種の１週間前に取り出した。「後処理」血清を、３回目のワクチン接種の１週間後に取り出した。「追加免疫」血清を、４回目のワクチン接種１週間後に取り出した。
血清ＥＬＩＳＡアッセイ
酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を既に記述されているように実行し（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｃａｐｐｅｌｌｏ，Ｓ．、Ｙｉ，Ｓ．Ｓ．、Ｃａｎｔｅｒ，Ｄ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．、Ｂｏｒｎｍａｎｎ，Ｗ．Ｇ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．Ｖａｃｃｉｎｅ ２００２，２０，１０３０．（ｂ）Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｋｏｉｄｅ，Ｆ．、Ｓａｔｈｙａｎ，Ｎ．、Ｋａｇａｎ，Ｅ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．、Ｂｏｒｎｍａｎｎ，Ｗ．、Ｇｒｅｇｏｒ，Ｐ．、Ｒｅｉｓ，Ｃ．Ａ．、Ｃｌａｕｓｅｎ，Ｈ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．２００３，５２，６０８）、個々の炭水化物抗原（Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎ）のそれぞれに関連した得られたＩｇＭおよびＩｇＧ血清抗体力価を決定した。具体的には、Ｇｌｏｂｏ−Ｈセラミド、ＧＭ２セラミド、Ｇｂ５セラミド、Ｇｂ５−脂質（実施例４および５を参照のこと）、羊顎下腺ムチン（ＯＳＭ、ｓＴｎを発現する）、脱シアル化豚顎下腺ムチン（ｄＰＳＭ、ＴＦを発現する）、および脱シアル化羊顎下腺ムチン（ｄＯＳＭ、Ｔｎを発現する）をそれぞれ、ＥＬＩＳＡプレート上に０．１μｇ／ウェルの抗原用量でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。非特異的部位を、３％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）で２時間ブロックし、連続希釈した抗血清を、それぞれのウェルに添加した。１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧを１：２００の希釈で添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）。抗体力価を、正常な対照マウス血清の抗体力価より０．１以上高い吸収度を有する最も高い希釈として定義した。
表１および図１に示されるように、５匹のマウス由来のワクチン接種前血清のうちのいずれも、ワクチン中の５つの抗原に対して反応性を示さなかった。化合物２ワクチンおよびＱＳ−２１アジュバントで免疫されたマウス由来の免疫後の血清は、５つの炭水化物抗原：Ｇｌｏｂｏ−Ｈセラミド、ＧＭ２セラミド、ＳＴｎ（ＯＳＭ）、ＴＦ（ｄＰＳＭ）、およびＴｎ（ｄＯＳＭ）のそれぞれに対応するかなりの力価の抗体を産生した。抗原のうちの１つ（Ｌｅｗｉｓｙ）に対する抗体をうまく誘導しなかった先の第１世代単分子五価構築物、ＫＬＨ接合体とは異なり、この第２世代構築物、接合体２は、本構築物においてＬｅｗｉｓｙを置換したＧＭ２抗原を含む全ての５つの抗原に対する優れたＩｇＧおよびＩｇＭ抗体力価を産生した。ＧＭ２は、前立腺および乳癌細胞株において過剰発現される重要なエピトープであるため（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｎａｔｏｌｉ，Ｅ．Ｊ．、Ｃａｌｖｅｓ，Ｍ．Ｊ．、Ｓｔｏｃｋｅｒｔ，Ｅ．、Ｏｅｔｔｇｅｎ，Ｈ．Ｆ．、Ｏｌｄ，Ｌ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １９８７，８４，２９１１、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｐ．Ｏ．、Ｗｏｎｇ，Ｇ．Ｙ．、Ａｄｌｕｒｉ，Ｓ．、Ｔａｏ，Ｙ．、Ｐａｄａｖａｎ，Ｍ．、Ｐａｒｅｎｔｅ，Ｒ．、Ｈａｎｌｏｎ，Ｃ．、Ｃａｌｖｅｓ，Ｍ．Ｊ．、Ｈｅｌｌｉｎｇ，Ｆ．、Ｒｉｔｔｅｒ，Ｇ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９４，１２，１０３６）、本出願者は、接合体２の免疫原性を大いに高めるために、ＧＭ２の構築物への組み込みに努めた。データの全ては、個々の炭水化物抗原の免疫学的特性が、これらの非常に複雑なワクチン構築物において保存されていることを示す。
ａ五価ワクチン中の５つの抗原について試験した、ワクチン接種前およびワクチン接種後の血清のＩｇＭまたはＩｇＧ抗体逆数力価。 既に記載のように（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ ２００２ ＆ ２００３、上記）ＥＬＩＳＡアッセイを実行し、ＩｇＭおよびＩｇＧ血清抗体力価を決定した。手短に書くと、Ｇｌｏｂｏ−Ｈセラミド、ＧＭ２セラミド、羊顎下腺ムチン（ＯＳＭ、ｓＴｎを発現する）、脱シアル化羊顎下腺ムチン（ｄＯＳＭ、Ｔｎを発現する）、または脱シアル化豚顎下腺ムチン（ｄＰＳＭ、ＴＦを発現する）を、ＥＬＩＳＡプレート上に０．１μｇ／ウェルの抗原量でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。非特異的部位を、１％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）で２時間ブロックし、連続希釈した抗血清を、それぞれのウェルに添加した。１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧを、１：４００の希釈で添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）。抗体力価を、正常な対照マウス血清の抗体力価より０．１以上高い吸収度を有する最も高い希釈と定義した。
フローサイトメトリー
接合体２ワクチンによって誘導された抗体の細胞表面反応性を、既に記載されているように（Ｓａｂｂａｔｉｎｉ，Ｐ．Ｊ．、Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ，Ｖ．、Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｂｏｒｎｍａｎｎ，Ｗ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．、Ｚａｔｏｒｓｋｉ，Ａ．、Ｓｐｒｉｇｇｓ，Ｄ．、Ａｇｈａｊａｎｉａｎ，Ｃ．、Ｓｏｉｇｎｅｔ，Ｓ．、Ｐｅｙｔｏｎ，Ｍ．、Ｏ’Ｆｌａｈｅｒｔｙ，Ｃ．、Ｃｕｒｔｉｎ，Ｊ．、Ｌｌｏｙｄ，Ｋ．Ｏ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．２０００，８７，７９）、ＭＣＦ−７乳癌細胞を用いたＦＡＣＳアッセイ分析によって決定した。５×１０５細胞／管の単一細胞懸濁液を、３％のウシ胎仔血清を有するリン酸緩衝生理食塩水中で洗浄し、その後、２０μＬの１／２００で希釈された抗血清とともに氷上で３０分間インキュベートした。ＦＩＴＣで標識した合計２０μＬの１／１５ヤギ抗マウスＩｇＧまたはＩｇＭを添加し、染色した細胞の陽性細胞パーセントおよび平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して分析した。
ワクチン２を受けた５匹のマウスに関するワクチン接種前の血清およびワクチン接種をブーストした血清フローサイトメトリー結果が、表２に記載される。これらのワクチン接種に対する血清学的応答は、ほぼ例外なくＩｇＭであった。示されるように、ワクチン接種後の血清中の陽性細胞の平均百分率は、１０％から３６％に増加し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）は、８５から３０２に増加した。ワクチン接種をブーストした血清は、陽性細胞のパーセンテージをさらに７０％まで増加させたことを示し、ＭＦＩは４８６に増加した。これらの実験結果は、接合体２が、実際に、特にブースト注入と併せて、非常に効果的かつ臨床的に有用なワクチン候補であり得ることを示唆する。
ａＭＣＦ−７乳癌細胞株上で試験した、５μｇの単分子五価−ＫＬＨワクチンならびにＱＳ−２１で免疫された５匹のマウスのＩｇＭおよびＩｇＧのＦＡＣＳプロファイル。ワクチン接種前、ワクチン接種後、およびワクチン接種をブーストした血清の結果が、陽性細胞パーセント（ＭＦＩ）で示される。ＦＡＣＳ分析（ｖ（ａ））：全ての５つの抗原を発現する（が、特にＧｌｏｂｏ−Ｈを発現する）ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞。５×１０７細胞／管の単一細胞懸濁液を、３％のウシ胎仔血清を有するリン酸緩衝生理食塩水中で洗浄し、２０μＬの１／２００で希釈された抗血清とともに氷上で３０分間インキュベートした。ＦＩＴＣで標識した合計２０μＬの１／１５ヤギ抗マウスＩｇＧまたはＩｇＭを添加し、染色した細胞の陽性細胞パーセントおよび平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、ＦＡＣＳｃａｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を使用して分析した。ワクチン接種前、ワクチン接種後、およびワクチン接種をブーストした血清をともに分析し、処理前の陽性細胞パーセントを１０％でゲーティングした。結果は、陽性細胞パーセントが負の対照の３倍であり（３０％超の陽性細胞）、かつＭＦＩが負の対照のＭＦＩの１５０％以上であったときに、肯定的であると見なされた。
（実施例３）
Ｇｂ５糖アミノ酸１０の合成

エタンチオスルホンアミド１２の合成
−８℃の乾燥エーテル（８０ｍＬ）中のグリカール１１（２．０ｇ、２．６３ｍｍｏｌ）、ベンゼンスルホンアミド（２．４８ｇ、１５．８ｍｍｏｌ）、および新たに活性化された粉末の４Å ＭＳ（２ｇ）の撹拌した混合物に、Ｉ（ｓｙｍ−ｃｏｌｌ）２ＣｌＯ４（４．９２ｇ、１０．５ｍｍｏｌ）を添加した。結果として得られた混合物を、暗所で一晩−８°Ｃで撹拌し、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１００ｍＬ）で反応停止処理した。エーテル（３×６０ｍＬ）で濾過抽出した後、合わせた有機層を、飽和ＣｕＳＯ４溶液（１００ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、真空内で濃縮した。粗生成物を、さらに精製することなく、次の反応に供した。−４０℃の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中のエタンチオール（１．９４ｍＬ、２６．２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＬＨＭＤＳ（１３．３ｍＬ、ＴＨＦ中の１．０Ｍ）を添加した。５分間の撹拌後、反応混合物を、カニューレを介して、−４０℃のＤＭＦ（４０ｍＬ）中のヨードスルホンアミド（粗）を含有するフラスコに移した。反応混合物を、０℃まで緩徐に温め、合計３時間撹拌した。エーテル（３００ｍＬ）で希釈した後、有機層を、ＮＨ４Ｃｌ溶液（５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。１０：１〜７：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーで、白色の泡として１２（９００ｍｇ、３５％）および回収出発原料（４２０ｍｇ）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．９２（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ、Ｊ＝１．３Ｈｚ）、７．５８〜７．５５（ｍ、１Ｈ）、７．５１〜７．４７（ｍ、２Ｈ）、５．３９（ｂｓ、１Ｈ）、５．０９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ）、４．６７（ｂｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．９Ｈｚ）、４．４９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０Ｈｚ）、４．４８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．５Ｈｚ）、４．３１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．１Ｈｚ）、４．２５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、Ｊ＝５．４Ｈｚ）、４．０９（ｓ、１Ｈ）、３．９２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、Ｊ＝５．９Ｈｚ）、４．０９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝２．６Ｈｚ）、３．９２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．６Ｈｚ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、３．８５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝９．１Ｈｚ、Ｊ＝５．３Ｈｚ）、３．８１〜３．７４（ｍ、３Ｈ）、３．５３（ｄｔ、１Ｈ、Ｊ＝１０．０Ｈｚ、Ｊ＝６．６Ｈｚ）、３．４７（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、２．９０（ｂｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．１Ｈｚ）、２．４０（ｄｑ、１Ｈ、Ｊ＝１２．４Ｈｚ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、２．２０（ｄｑ、１Ｈ、Ｊ＝１２．４Ｈｚ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、１．１２〜１．０５（ｍ、４２Ｈ）、０．９０（ｓ、９Ｈ）、０．２４（ｓ、３Ｈ）、０．１９（ｓ、３Ｈ）；Ｃ４５Ｈ８３ＮＯ１２Ｓ２Ｓｉ３［Ｍ＋Ｎａ］＋実測値についてのＬＲＭＳ：１０００．７；計算値：１０００．５；［Ｍ−Ｈ］＋実測値：９７６．７；計算値：９７６．５。
Ｇｂ５ペンタサッカライド１５の合成
チオグリコシド１２（３７３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）およびアクセプター１３（５０２ｍｇ、０．３６３ｍｍｏｌ）の混合物を、無水ベンゼンで３回共沸し、高真空下で１時間留置した。新たに活性化された４Å ＭＳ（１．０ｇ）を混合物に添加し、乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３．３ｍＬ）および乾燥エーテル（６．６ｍＬ）中に取り込み、室温で５分間撹拌し、０℃まで冷却させた。混合物を０℃で５分間撹拌し、ＭｅＯＴｆ（１００μＬ）を滴加した。反応物を０℃で２時間撹拌した後、別の量のＭｅＯＴｆ（１１６μＬ）を０℃で滴加した。反応混合物を室温になるまで２日間緩徐に温めた。固体ＮａＨＣＯ３（０．５ｇ）を添加し、反応混合物を、セライトパッドを通して濾過し、濃縮した。９：１〜６：１〜４：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーによる精製によって、白色の泡として混合物１３および１４を得た。混合物１３および１４をＭｅＯＨ（５ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＭｅ（０．１ｍＬ、ＭｅＯＨ中２５％）を添加してｐＨ＝１０にし、混合物を室温で一晩撹拌した。６：１〜４：１〜２：１のヘキサン／ＥｔＯＡｃを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーでの濃縮および精製によって、１５（４８６ｍｇ、５５％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．７９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ）、７．３４〜７．０３（ｍ、４６Ｈ）、６．９８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ）、５．８３〜５．７５（ｍ、１Ｈ）、５．０９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、５．０５〜４．９３（ｍ、３Ｈ）、４．８８〜４．８４（ｍ、２Ｈ）、４．７９〜４．７３（ｍ、３Ｈ）、４．６２〜４．５５（ｍ、２Ｈ）、４．５３〜４．４２（ｍ、５Ｈ）、４．３８〜４．３６（ｍ、１Ｈ）、４．３２〜４．２８（ｍ、３Ｈ）、４．１８〜４．０４（ｍ、９Ｈ）、３．９５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．１Ｈｚ）、３．９２〜３．７７（ｍ、８Ｈ）、３．７１〜３．６６（ｍ、４Ｈ）、３．６２〜３．４９（ｍ、７Ｈ）、３．４６〜３．４１（ｍ、２Ｈ）、３．３１〜３．２１（ｍ、５Ｈ）、２．７２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、２．６７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．４Ｈｚ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、２．５９（ｂｓ、１Ｈ）、２．４２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．１Ｈｚ）、２．１４〜２．０７（ｍ、２Ｈ）、１．７３〜１．６４（ｍ、２Ｈ）、１．０８〜１．０４（ｍ、３６Ｈ）、０．９０（ｓ、３Ｈ）、０．１５（ｓ、３Ｈ）、０．１１（ｓ、３Ｈ）。Ｃ１２８Ｈ１７３ＮＯ２７ＳＳｉ３［Ｍ＋Ｎａ］＋実測値についてのＬＲＭＳ：２２９５．０；計算値：２２９５．１。
Ｇｂ５ペンタサッカライド１６の合成
乾燥ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の１５（５００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＢＡＦ（２．２ｍＬ、ＴＨＦ中１．０Ｍ）を室温で添加した。混合物を室温で一晩撹拌した。１％〜２％〜４％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーでの濃縮および精製によって、６（３５２ｍｇ、８６．７％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ７．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．３３〜７．０５（ｍ、４６Ｈ）、６．９２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．２Ｈｚ）、５．８２〜５．７７（ｍ、１Ｈ）、５．０７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０Ｈｚ）、５．０２〜４．７３（ｍ、８Ｈ）、４．６４〜４．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ）、４．５７〜４．５３（ｍ、２Ｈ）、４．５１〜４．４８（ｍ、２Ｈ）、４．４６〜４．４４（ｍ、２Ｈ）、４．４０〜４．３７（ｍ、１Ｈ）。４．３４〜４．３１（ｍ、２Ｈ）、４．２３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、４．２０〜４．１３（ｍ、４Ｈ）、４．０８〜４．０４（ｍ、４Ｈ）、３．９５〜３．７３（ｍ、１１Ｈ）、３．６９〜３．６４（ｍ、６Ｈ）、３．６２〜３．４８（ｍ、９Ｈ）、３．４３〜３．４０（ｍ、２Ｈ）、３．３４〜３．３０（ｍ、２Ｈ）、３．２５〜３．１８（ｍ、４Ｈ）、３．０２（ｂｓ、１Ｈ）、２．８６（ｂｓ、２Ｈ）、２．７４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、Ｊ＝２．７Ｈｚ）、２．６６（ｂｓ、１Ｈ）、２．６２（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝５．６Ｈｚ）、２．１４〜２．１２（ｍ、２Ｈ）、１．７６〜１．６１（ｍ、１８Ｈ）、１．４０〜１．３５（ｍ、２Ｈ）。Ｃ１０４Ｈ１１９ＮＯ２７ＳＳｉ３［Ｍ＋Ｎａ］＋実測値についてのＬＲＭＳ：１８６９．１；計算値：１８６８．１。
ＧＢ５ペンタサッカライド１７の合成
Ｎａ（３５０ｍｇ、１５．２ｍｍｏｌ）を液体ＮＨ３（３０ｍＬ）に−７８℃で添加し、混合物をアルゴン下で２分間撹拌して、青色の溶液を形成し、ＴＨＦ（２ｍＬ）中の化合物１６（４００ｍｇ、０．２１７ｍｍｏｌ）を、青色の溶液に添加した。混合物を、−７８℃で１時間撹拌し、固体ＮＨ４Ｃｌ（１．０ｇ）で反応停止処理した。アンモニアをアルゴン流によって除去した。固体に、ピリジン（１５ｍＬ）、無水酢酸（１０ｍＬ）、および結晶性ＤＭＡＰを添加した。混合物を室温で２日間撹拌した。１％〜４％〜１０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーでの濃縮および精製によって、１７（３００ｍｇ、８８％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ５．８２〜５．７６（ｍ、１Ｈ）、５．６８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝５．７Ｈｚ）、５．５９（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、５．４２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．０Ｈｚ）、５．３４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．１Ｈｚ）、５．２１〜５．０９（ｍ、％Ｈ）、５．０３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．０Ｈｚ）、４．９９〜４．９５（ｍ、２Ｈ）、４．９２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．６Ｈｚ）、４．８９（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．１Ｈｚ）、４．７５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、Ｊ＝２．５Ｈｚ）、４．６７（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、Ｊ＝３．４Ｈｚ）、４．６１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．８Ｈｚ）、４．５３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、４．４６（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、４．４４（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．８Ｈｚ、Ｊ＝１．５Ｈｚ）、４．４１（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．９Ｈｚ、Ｊ＝６．２Ｈｚ）、４．３６（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝６．３Ｈｚ）、４．２２〜４．１８（ｍ、２Ｈ）、４．１７〜４．０３（ｍ、７Ｈ）、４．００（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．０Ｈｚ）、３．９３（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝６．１Ｈｚ）、３．８９〜３．８２（ｍ、２Ｈ）、３．８０〜３．７５（ｍ、２Ｈ）、３．６２〜３．５９（ｍ、２Ｈ）、３．５１〜３．４４（ｍ、１Ｈ）、３．２７（ｍ、３．２３（ｍ、１Ｈ）、２．１４、２．１２、２．１１、２．１０、２．１０、２．０８７、２．０８６、２．０８、２．０７、２．０６、２．０５６、２．０５６、２．０５６、２．０４、１．９７、１．９３（１６ｓ、４８Ｈ）、１．７０〜１．６２（ｍ、２Ｈ）。１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１７０．８９、１７０．４５、１７０．４５、１７０．３４、１７０．３０、１７０．２４、１７０．２１、１７０．１１、１７０．０１、１６９．７９、１６９．６６、１６９．３１、１６９．３１、１６９．２８、１６８．９４、１６８．６９、１３７．５９、１１４．９１、１００．６７、１００．４２、１００．３５、９９．２７、９８．９３、７６．５５、７６．３１、７４．２４、７２．６０、７２．５３、７２．３６、７２．２６、７１．８０、７１．４７、７１．０９、７０．７２、７０．４７、７０．３５、６９．８８、６９．５１、６９．１２、６９．０１、６８．９０、６８．４３、６７．５０、６６．７７、６２．１１、６１．４８、６１．２４、６１．００、６０．１３、５４．９６、５３．５６、２９．６０、２８．３６、２３．３０、２０．７８、２０．７１、２０．６８、２０．５９、２０．５７、２０．５５、２０．５１、２０．５１、２０．５１、２０．４７、２０．４４、２０．４４、２０．３８、２０．３０、２０．２５、１３．９８、１３．８７。Ｃ６７Ｈ９３ＮＯ４１［Ｍ＋Ｎａ］＋実測値についてのＬＲＭＳ：１５９０．６；計算値：１５９０．５。
Ｇｂ５糖アミノ酸１０の合成
ＤＣＭ（４ｍＬ）中の１７（２００ｍｇ、０．１２８ｍｍｏｌ）およびアリルグリシン（４５０ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｈｏｖｅｙｄａ Ｇｒｕｂｂｓ Ｉ型触媒（３６ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を３５℃で２日間撹拌した。１０：１〜３：１〜１：３のヘキサン／ＥｔＯＡｃ、続いて、１０％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーでの濃縮および精製によって、生成物の混合物および出発原料７（１９０ｍｇ）を得た。粗生成物をＭｅＯＨ／水（１０：１、１０ｍＬ）中に溶解し、Ｐｔ（Ｃ）５６ｍｇを添加し、１気圧の水素のシリンダーに接続し、混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を、セライトを通して濾過し、濾過物を蒸発させ、残渣を、０．３％のＨＯＡｃを含有する７％のＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するフラッシュクロマトグラフィーカラム上に装填した。生成物１０を収集した。生成物をＰＴＬＣ上に再装填し、ＡｃＯＨ−ＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２（０．３：７：１００）で溶出した。Ｇｂ５糖アミノ酸１０を収集した（１２０ｍｇ、収率５１％）。１Ｈ ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＭｅＯＤ）δ７．８１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．６Ｈｚ）、７．６８（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．１Ｈｚ）、７．４０（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、７．３１（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．４Ｈｚ）、５．６５（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）、５．３４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝３．２Ｈｚ）、５．３２（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝２．８Ｈｚ）５．１９〜５．１５（ｍ、２Ｈ）、５．１０〜４．９３（ｍ、５Ｈ）、４．８１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．３Ｈｚ），４．７０〜４．６７（ｍ、２Ｈ）、４．５７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．０Ｈｚ）、４．４８〜４．３６（ｍ、５Ｈ）、４．２５〜３．９４（ｍ、１７Ｈ）、３．８３〜３．７５（ｍ、３Ｈ）、３．７０〜３．６７（ｍ、１Ｈ）、３．５２〜３．４７（ｍ、１Ｈ）、２．１５、２．１２、２．１１、２．１０７、２．１０、２．０９、２．０８、２．０７、２．０３４、２．０２４、２．０３３、２．０３３、２．０２、１．９９、１．９４、１．９２、１．８４〜１．８０（ｍ、１Ｈ）、１．６８〜１．６６（ｍ、１Ｈ）、１．５７〜１．５４（ｍ、２Ｈ）、１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）δ１７１．９８、１７０．６６、１７０．６０、１７０．５７、１７０．４６、１７０．４２、１７０．３６、１７０．２４、１７０．１４、１７０．０６、１７０．００、１６９．６３、１６９．５６、１６９．４１、１６９．３０、１６８．９０、２５６．６７、１０１．０６、１００．４９、１００．１７、９９．３５、９８．７４、７９．４１、７６．０６、７４．３９、７２．８９、７２．６５、７２．４３、７０．０５、７１．８９、７１．７８、７１．２０、７０．９６、７０．７５、７０．１４、７０．０３、６９．９７、６９．２０、６８．９４、６７．９７、６７．６８、６６．７４、６２．２０、６２．１２、６１．１５、６１．１０、６０．８９、３６．９４、３５．８０、３２．５７、３０．００、２９．２２、２８．８９、２８．３８、２５．５７、２５．３３、２３．５９、２３．２２、２０．９６、２０．９３、２０．９３、２０．８８、２０．８０、２０．８０、２０．８０、２０．７７、２０．７７、２０．７７、２０．７７、２０．６９、２０．６８、２０．６５、２０．５４、２０．５０。Ｃ８５Ｈ１１０Ｎ２Ｏ４５［Ｍ＋Ｎａ］＋実測値についてのＬＲＭＳ：１９０１．７；計算値：１９０１．６。
（実施例４）
ＥＬＩＳＡアッセイのためのＧｂ５接合体の合成
Ｇｂ５−脂質４−４の合成
図３に示されるように、ＤＣＭ／ＴＦＡ（１／３、０．６ｍＬ）中の４−１（１３ｍｇ、７．０μｍｏｌ）の溶液を、室温で３０分間撹拌した。溶媒を除去し、残渣を、精製することなく、次のステップに直接取り入れた。残渣をＤＣＭ（１．０ｍＬ）および化合物４−２（３０ｍｇ、４１．７mｍｏｌ）中に溶解し（Ｓｃｈｍｉｔｔ，Ｌ．、Ｄｉｅｔｒｉｃｈ，Ｃ．、Ｔａｍｐｅ，Ｒ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４，１１６，８４８５−８４９１）、ＤＩＰＥＡ（５０μＬ）を混合物に添加した。反応を室温で一晩撹拌した。１％〜５％のＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用したフラッシュカラムクロマトグラフィーでの濃縮および精製によって、４−３（１４ｍｇ、８５％）を得た。
ＭｅＯＨ（１．０ｍＬ）中の４−３（１２ｍｇ、５．１μｍｏｌ）の溶液に、ＮａＯＭｅ（２５％のＮａＯＭｅ／ＭｅＯＨ、１２μＬ）を添加し、混合物を室温で２時間撹拌し、反応物を、１Ｎ ＨＣｌで反応停止処理して、最終的に６．５〜７．０のｐＨにした。溶媒を除去し、残渣をＨ２Ｏ（１．０ｍＬ）中に溶解した。凍結乾燥後に生成物４−４（８ｍｇ、９１％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）：８６５．２［Ｍ＋２Ｈ］＋、１７３０．２［Ｍ＋Ｈ］＋
Ｇｂ５−ＫＬＨの合成
手順：２０ｍｇのクロロトリチル樹脂（０．０２ｍｍｏｌ）を、メルカプト酢酸（５０ｕＬ＋９５０ｕＬの塩化メチレン）で１時間処理し、その後、ＤＭＦで３回洗浄した。次に、樹脂をＤＭＦ中で１０分間、ＰｙＢＯＰ（２１ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１６ｍｇ、２１ｕＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を用いて活性化し、その後に、１，３−ジアミノプロパン（１５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を添加した。２０分間後、樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。１０ｍｇの４−５（０．００５４ｍｍｏｌ）を、２００ｕＬのＤＭＦ中に溶解し、樹脂に添加した。１５０ｕＬのＤＭＦ中のＰｙＢＯＰ（８ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（７．４２ｍｇ、１０ｕＬ、０．０５７ｍｍｏｌ）を添加し、２時間混合した。樹脂をＤＭＦで３回洗浄した。ＤＭＦ中の３０％のピペリジンで１０分間、２回洗浄し、その後に、ＤＭＦで洗浄した（３回）。樹脂を、５００ｕＬのＤＭＦ中の２０ｕＬの無水酢酸で３０分間処理し、その後、ＤＭＦで洗浄した（３回）。塩化メチレンで数回洗浄した。その後、保護炭水化物を、ＤＣＭ中の５０％のＴＦＡでの１０分間の処理によって樹脂から切断し、蒸発させた。油を、水中の５０％のアセトニトリル中に再懸濁し、凍結させ、一晩凍結乾燥させ、白色の粉末を得た。粉末を０．３ＮのＮａＯＨの溶液で２時間処理し、ＨＣｌで中和し、逆相ＨＰＬＣ（Ｃ１８）で精製した。化合物４−６で、白色の粉末を得た。４−６のＭＳ（ｍ／ｚ）＝１１９９．１（Ｍ＋Ｈ＋）。
実施例５に記載のＧｂ５−ＫＬＨ接合体を調製するために、化合物４−６を、実施例１に記載の手順を使用して、ＫＬＨに接合した（段落［０１９２］を参照のこと）。
（実施例５）
本実施例は、実施例４で調製されたＧｂ５−ＫＬＨ接合体で免疫されたマウスを使用して実行した免疫原性研究を説明する。以下に別途示されない限り、実施例２に記載のプロトコルに従った。
任意の特定の理論によって拘束されることを望むものではないが、追加でワクチン接種した血清のＩｇＧ値が、表３に示されるＩｇＧ値よりも高い可能性があるように見受けられる。初期データ収集の間、この実験におけるＩｇＧの濃度は予想したよりもはるかに高く、表３に示されるＩｇＧ力価よりも高い値のＩｇＧ力価の定義においては、さらなる連続希釈が結果となる可能性が高い。
ａ一価Ｇｂ５−ＫＬＨワクチン中の抗原について試験した、ワクチン接種前およびワクチン接種後の血清のＩｇＭまたはＩｇＧ抗体相互力価。ＥＬＩＳＡアッセイを実行して、前述のように、ＩｇＭまたはＩｇＧ血清抗体力価を決定した（Ｒａｇｕｐａｔｈｉ ２００２ ＆ ２００３、上記）。手短に、Ｇｂ５−脂質を、ＥＬＩＳＡプレート上に０．１μｇ／ウェルの抗原用量でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。非特異的部位を１％のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）で２時間ブロックし、連続希釈した抗血清をそれぞれのウェルに添加した。１時間のインキュベーション後、プレートを洗浄し、アルカリホスファターゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＭまたはＩｇＧを１：４００の希釈で添加した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ）。抗体力価を、正常な対照マウス血清の抗体力価より０．１以上高い吸収度を有する最も高い希釈と定義した。
（実施例６）
Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｇｂ５、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎを含有する単分子五価ワクチン構築物の合成（図４を参照のこと）
本実施例は、接合体Ｇ−２の調製を説明する。本構築物を合成および接合するための手順は、ＡｃＨＮ−ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＣＨ２ＳＡｃ（Ｇ−０）の合成において、Ｇｂ５グリコシルアミノ酸が、ＧＭ２グリコシルアミノ酸に置き換えられたことを除いて、実施例１で接合体について記載された手順と実質的に同一である（Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ２００４，１０１，１１９３７−１１９４２、Ｒａｇｕｐａｔｈｉ，Ｇ．、Ｋｏｉｄｅ，Ｆ．、Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｐ．Ｏ．、Ｃｈｏ，Ｙ．Ｓ．、Ｅｎｄｏ，Ａ．、Ｗａｎ，Ｑ．、Ｓｐａｓｓｏｖａ，Ｍ．Ｋ．、Ｋｅｄｉｎｇ，Ｓ．Ｊ．、Ａｌｌｅｎ，Ｊ．、Ｏｕｅｒｆｅｌｌｉ，Ｏ．、Ｗｉｌｓｏｎ，Ｒ．Ｍ．、Ｄａｎｉｓｈｅｆｓｋｙ，Ｓ．Ｊ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００６，１２８，２７１５−２７２５）。Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｇｂ５、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎを含有する完全に脱保護された単分子五価構築物のスキームについては、図４を参照されたい。
ＡｃＨＮ−ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＣＨ２ＳＨ（Ｇ−１）の合成
過アセチル化ＡｃＨＮ−ＧｌｏｂｏＨ−Ｇｂ５−ＳＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ−ＣＯＮＨ−（ＣＨ２）３−ＮＨＣＯＣＨ２ＳＡｃ（Ｇ−０）（１１．８ｍｇ、２．０２μｍｏｌ）を含有する丸底フラスコに、１．２ｍＬの脱気した２：１のＭｅＯＨ／０．３ＭのＮａＯＨ水溶液を添加した。結果として得られた透明無色の溶液を、アルゴン雰囲気下で、室温で２４時間撹拌し、その後、１．２ｍＬの脱気した０．３ＭのＮａＯＨ水溶液をさらに添加した。さらに４０時間撹拌した後、反応混合物を、酢酸（２７μＬ、０．４７２ｍｍｏｌ）の滴加によって中和し、その後、回転蒸発によって濃縮した。結果として得られた溶液を、室温で２時間、ＴＣＥＰ（５０μＬ、０．０２５ｍｍｏｌ）で処理し、その後、溶出剤として水を用いて、Ｂｉｏ−Ｇｅｌ Ｐ−４カラム（１．５×１７ｃｍ）上で精製した。所望の生成物を含有する画分を合わせ、凍結乾燥させて、白色の粉末として９２％の収率（７．１ｍｇ、１．８７μｍｏｌ）のＧ−１を得た。ＭＳ（ＥＳＩ＋）ｍ／ｚ１２９０．９３［Ｍ＋３Ｎａ］３＋。
Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｇｂ５、ＳＴｎ、ＴＦ、およびＴｎ（Ｇ−２）を含有する単分子五価ワクチン構築物の接合
担体タンパク質ＫＬＨを、最初に、０．９Ｍの塩化ナトリウムを含有するｐＨ７．４のリン酸緩衝液中で、スルホ−ＭＢＳ（ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）とともに１時間４５分インキュベートした。次に、接合されていないスルホ−ＭＢＳを、Ｇ２５セファデックスカラム（ＰＤ ＭｉｎｉＴｒａｐ Ｇ−２５、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上を通過させることによって除去し、マレイミド活性化ＫＬＨを得た。糖ペプチド構築物Ｇ−１（新たに調製され、使用直前にＴＣＥＰゲルを通過させた）を、０．９Ｍの塩化ナトリウムおよび１００ｍＭのＥＤＴＡを含有するｐＨ７．４のリン酸緩衝液中で、新たに調製されたマレイミド活性化ＫＬＨと混合し、室温で４時間撹拌した。インキュベーション後、ＡｍｉｃｏｎｕＬｔｒａ−４遠心分離濾過装置（５０，０００分子量をカットオフ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、未反応の糖ペプチドを除去した。最後に、リン酸緩衝溶液として、相当するＫＬＨ接合体Ｇ−２を得た。
ＫＬＨ接合体に組み込まれた糖ペプチド構築物のコピーの数を、加水分解炭水化物分析および標準のタンパク質分析（Ｂｉｏ−Ｒａｄ色素結合法）によって、１個のＫＬＨにつき５９３個であると決定した。
（実施例７）
本実施例は、とりわけ、実施例１および２に記載の五価構築物での免疫後に毒性を測定する研究、ならびに免疫原性および安全性の基準を満たす事前選択されたワクチン用量レベルの中で最も低い免疫原性用量の決定を説明する。本実施例に記載の方法および物質が実施例５に記載の五価構築物に及び得ることが理解される。
卵巣癌は、炭水化物エピトープＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｌｅｗｉｓ、シアリルＴｎ（ｓＴｎ）、Ｔｎ、トンプソンフリードライヒ抗原（ＴＦ）、およびムチン１（Ｍｕｃ１）を含む、豊富な一連の細胞表面抗原を発現する（Ｆｅｄｅｒｉｃｉ ＭＦ，Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ Ｖ，Ｓａｉｇｏ ＰＥ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８１：１９３−８，１９９９、Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ Ｃ，Ｚｈａｎｇ ＨＳ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７３：４２−９，１９９７、Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｚｈａｎｇ ＨＳ，Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ４：２６６９−７６，１９９８、Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｚｈａｎｇ ＨＳ，Ｃｏｒｄｏｎ−Ｃａｒｄｏ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ７３：５０−６，１９９７）。種々の方法を使用して、そのような定義される抗原に対する免疫応答が生成されている。一価抗原を用いた先の作業において、研究者は、抗原を、免疫原性担体タンパク質であるキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、免疫学的アジュバントであるサポニンＱＳ−２１と接合させることによって、一貫した免疫原性を達成した（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ ＰＯ，Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｌｌｏｙｄ ＫＯ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ４５：１−９，１９９７）。一価ワクチン接種は、免疫学的応答をもたらした（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ ＰＯ，Ｎａｔｏｌｉ ＥＪ，Ｃａｌｖｅｓ ＭＪ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８４：２９１１−５，１９８７ Ｓｌｏｖｉｎ ＳＦ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｖａｃｃｉｎｅ ２３：３１１４−２２，２００５、Ｓｌｏｖｉｎ ＳＦ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ａｄｌｕｒｉ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９６：５７１０−５７１５，１９９９、Ｓａｂｂａｔｉｎｉ ＰＪ，Ｋｕｄｒｙａｓｈｏｖ Ｖ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉ Ｆ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ８７：７９−８５，２０００）。しかしながら、腫瘍細胞表面抗原は、著明な異質性を示し、より広範囲の免疫応答を生成するための多価アプローチが魅力的である。
本出願者は、最近になって、臨床的第２寛解期および臨床的完全寛解期にある上皮卵巣癌、卵管癌、または腹膜癌を有する患者における、個別に構築された多価抗原−ＫＬＨおよびＱＳ−２１ワクチン構築物の安全性ならびに免疫原性を明らかにした（Ｓａｂｂａｔｉｎｉ ＰＪ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｈｏｏｄ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａ Ｒｅｓ １３（１４）：４１７０−７，２００７）。このパイロット試験における１１名の患者は、ＫＬＨに個別に接合され、かつアジュバントＱＳ２１（１００μｇ）と混合された、ＧＭ２（１０μｇ）、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ（１０μｇ）、ＬｅＹ（１０μｇ）、Ｔｎ（ｃ）（３μｇ）、ＳＴｎ（ｃ）（３μｇ）、ＴＦ（ｃ）（３μｇ）、Ｔｎ−ＭＵＣ１（３μｇ）を含有する多価ワクチンを皮下に受けた。ワクチン接種を、１週目、２週目、３週目、７週目、および１５週目に施行した。安全性（ＣＢＣ、包括的なパネル、アミラーゼ、ＴＳＨ、検尿）および抗体産生（ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、ＣＤＣ）を監視するために、血液および尿試料を定期的に得た。１１名全ての患者が安全性分析に含まれ、１１名のうち９名が、４回目のワクチン接種後少なくとも２週間、研究に留まり、免疫学的分析に含まれた（疾患進行のあった２名が脱退した）。ワクチンは、良好な耐容性を示した。自己限定性および軽度の疲労（２名の患者において最高で等級ＩＩ）、発熱、筋肉痛、ならびに局所注入部位反応が最もよく見られた。臨床的に関連する血液学的異常は見られなかった。自己免疫の臨床的または実験的徴候は見られなかった。ＥＬＩＳＡによる血清学的応答は、ＩｇＭ応答およびＩｇＧ応答の両方が誘導されたＴｎ−ＭＵＣ１を除いて、大部分は、それぞれの抗原に対するＩｇＭであった。抗体応答は、概して、免疫前は検出不可能であった。免疫後の平均ＩｇＭ力価は、以下の通りであった：Ｔｎ−ＭＵＣ１ １：６４０（ＩｇＧ １：８０）、Ｔｎ １：１６０、ＴＦ １：６４０、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ １：４０、およびＳＴｎ １：８０。１つのみの応答がＬｅｗｉｓ−Ｙに対して、２つの応答がＧＭ２に対して見られた。９名のうち８名の患者が、少なくとも３つの抗原に対する応答を発現させた。抗体力価は、全ての患者において４〜８週目にピークに達した。ＦＡＣＳおよびＣＤＣ分析は、９名のうち７名の患者において、ＭＣＦ７細胞に対する反応性の大幅な増加を示し、ある程度の増加が全ての患者において見られた。本出願者は、多価ＫＬＨ接合体およびＱＳ２１ワクチンが、７個の抗原のうち５個の抗原に対する抗体応答を安全に誘導したことを結論付けており、かつ適切な力価の有効性試験が、ワクチン接種からの臨床的利益が存在するかを決定するための次のステップであると結論付ける。
利用可能な免疫原性および安全性データに基づいて、第ＩＩＩ相無作為化二重盲式試験（ｎ＝１６４名の患者）を行い、アジュバント単独に対して免疫学的アジュバントとともに、それぞれＫＬＨに個別に接合された抗原、ＧＭ２、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、Ｔｎ−Ｍｕｃ１、およびＴＦを含有する個別に構築された多価ワクチンを評価する。本出願者は、ワクチンを製造し、本研究を先導する中心の役割を果たす。規制要件は、（順次的な第１相試験にわたって行われた）ワクチン混合物のそれぞれの個々の構成要素の検証を必要とし、増加した量の担体タンパク質が必要とされ（それぞれの個々の構成要素の一定の量）、かつそれぞれの一価ＫＬＨ構築物の合成が、収率の低い最終接合ステップを伴う。本実施例で提案された単分子構築物は、製造を大幅に簡略化し、容易な拡張性を提供する。
ＫＬＨに接合され、かつアジュバントとしてＱＳ−２１を有する抗原、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ｓＴｎ、Ｔｎ、Ｌｅｗｉｓｙ、およびＴＦを担持する単分子五価ワクチンは、最近になって合成され、かつ前臨床設定において研究された（実施例２を参照のこと）（Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｋｏｉｄｅ Ｆ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ ＰＯ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ １２８：２７１５−２５，２００６）。マウスを免疫し、Ｌｅｗｉｓ抗原を除いて、免疫学的応答が見られた（Ｌｅｗｉｓ抗原を用いた免疫原性実証の困難は、一価の第Ｉ相試験において以前にも見られた）。実施例２に示されるＥＬＩＳＡおよびＦＡＣＳデータは、抗原の免疫学的特性が保存され、かつ単分子多抗原性合成ワクチンを考慮する概念を支持することを示唆する。本実施例は、第Ｉ相試験設定におけるヒト評価を説明する。
第Ｉ相試験について、ＫＬＨに接合され、かつＱＳ−２１と混合された抗原、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ｓＴｎ、ＴＦおよびＴｎを担持する単分子多価ワクチンは、実施例１に記載されるように調製される。
接合
ＫＬＨ分子量を８．６×１０６と想定して、抗原−ＫＬＨ比が８０：１〜１２００：１の範囲になると予想した。ＳＤＳ−Ｐａｇｅゲルを実行し、今後のロットとの比較のために、抗原−ＫＬＨのそれぞれのロットを用いてウエスタンブロット分析を行った。バイアルに入れた生成物を用いて、無菌および安全性試験を実行した。毒性試験を、臨床試験において使用される用量／平方メートルの５０倍を超えて実行した。培養の成長もマウスにおける有害反応（１０％以上の体重減少を含む）も認められなかった。３匹以上のマウスを、１〜２週間の間隔で３〜４回免疫し、免疫後血清を試験した。適切な免疫原性を確認するために、少なくとも４つの抗原に対する１：４０以上の抗体力価および２５％を超える抗原陽性細胞のＦＡＣＳ染色が必要とされた。
アジュバント
ＱＳ−２１は、Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから入手した免疫学的アジュバントである。ワクチンをバイアルに入れた時に、これを多価抗原接合体と混合した。ＱＳ−２１の用量は、１００ｍｃｇである。最終的な五価抗原−ＫＬＨとＱＳ−２１アジュバントを合わせ、滅菌濾過し、バイアルに入れた。その後、生成物を、無菌、エンドトキシン、免疫原性、および安全性について試験した。ワクチンバイアルを摂氏−７０〜−８０度で保存する。
本研究は、単分子五価Ｇｌｏｂｏ−Ｈ−ＧＭ２−ｓＴｎ−ＴＦ−Ｔｎ−ＫＬＨ接合体ならびに免疫学的アジュバントＱＳ−２１での免疫後の安全性および免疫応答を調査する。これは、毒性および免疫原性を評価する第Ｉ相試験である。上皮卵巣癌、卵管癌、および腹膜癌を有する約２４名の患者をワクチン接種する。
注入を、１週目、２週目、３週目、７週目、および１９週目の間に皮下投与し、本研究にわたって合計で５回の注入となる。３つの用量レベル：２５ｍｃｇ、５０ｍｃｇ、および１０ｍｃｇまたは１００ｍｃｇを計画し、２つの用量制限毒性が観察されない場合、６名の患者をそれぞれの用量レベルでワクチン接種し、６名の患者の拡張コホートを、登録に成功した最も低い免疫原性用量レベルで登録する。
対象適格性の基準
対象包含基準：
１．診断時に、以下の危険性の高い属性のうちの１つを有する、卵巣、卵管、または腹膜で生じる組織学的に確認されるＩＩＩ期もしくはＩＶ期上皮癌腫：ａ）明細胞または粘液性の特徴もしくは組織構造、ｂ）準最適なデバルク、あるいはｃ）一次化学療法の第３のサイクルによるＣＡ−１２５の標準化の失敗。
２．一次治療の一環として少なくとも１つの白金ベースの化学療法レジメンを用いた腫瘍縮小手術および化学療法の経歴。
３．患者は、第１の臨床的完全寛解期にあるべきである。臨床的完全寛解期は、組織正常限度の範囲内の血清ＣＡ−１２５、検診陰性、ならびに腹部および骨盤のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）による疾患の確定的な徴候なしとして定義される。１．０ｃｍ以下のリンパ節および／または軟組織の異常は、多くの場合、骨盤に存在し、疾患の確定的な徴候とは見なされない。適格性を、解剖学的画像化のみ（すなわち、ＭＲＩまたはＣＴ）によって決定する。陽性のＰＥＴ画像（もし実行される場合）は、たとえ他の基準が満たされ、かつ解剖学的画像が陰性である場合でも、患者を除外しない。
４．以下によって定義される適切な臓器機能：
ａ．骨髄機能：共通毒性基準（ＣＴＣＡＥ ｖ３．０）等級１と同等の１，０００／ｍｍ3以上の絶対好中球数（ＡＮＣ）。１００，０００／ｍｍ3以上の血小板。
ｂ．腎臓機能：１．５×組織正常上限（ＵＬＮ）、ＣＴＣＡＥ ｖ３．０等級１以下の血清中クレアチニン。
ｃ．肝機能：２．５×ＵＬＮ以下のビリルビン、ＳＧＯＴ、およびアルカリホスファターゼ。
５．グアヤック便は陰性である。
６．ＫＰＳ：８０％を超える。
７．年齢：１８歳を超える。
８．患者は、先の化学療法由来の臨床的に明らかな副作用から回復していなければならない。
対象除外基準：
１．妊娠中または授乳中の女性。
２．過去５年以内に他の癌の徴候があった（またはある）他の浸潤性悪性腫瘍を有する患者、または以前の癌治療がこのプロトコル治療に禁忌を示す患者を除外する。非黒色腫皮膚癌は例外であり、いかなる患者をも除外しない。
３．シーフードアレルギーの病歴を有する患者。
４．本試験における抗原のうちのいずれかを有するワクチンを以前に受けた患者。
５．免疫不全または自己免疫疾患（治療された甲状腺機能低下症を除く）の病歴を有する患者。
６．活性ＣＮＳ腫瘍を有する患者。
治療前評価
２週間以内：妊娠の可能性のある女性の妊娠検査。
３週間以内：全ての病歴および健康診断；差別的かつ包括的なパネルを有する完全血球算定（ＡＳＴ、ＡＬＴ、ナトリウム、カリウム、塩化物、ＣＯ２、カルシウム、ブドウ糖、総タンパク質、アルブミン、アルカリホスファターゼ、クレアチニン、ＢＵＮ、ビリルビン）；ＣＡ−１２５；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）レベル；検尿；便潜血。
４週間以内：腹部および骨盤（胸部を伴うか、または伴わない）のＣＴスキャンまたはＭＲＩ；ＣＸＲ（ＣＴが胸部を画像化する場合は必要とされない）；標準の病理学的検査。
治療／介入計画
単分子五価ワクチンを、１週目、２週目、３週目、７週目、および１９週目の間に投与する。ワクチンを、外来診療所において、皮下注入を介して投与する。上腕または大腿部上のランダムな部位を使用する。３つの用量レベルを使用する：２５ｍｃｇ、５０ｍｃｇ、ならびに最初の２つの用量レベルの免疫原性および安全性に応じて、１０ｍｃｇまたは１００ｍｃｇのいずれか。用量制限毒性が観察されない場合、それぞれの用量レベルで６名の患者に注入する。６名の患者の拡張コホートを、登録に成功した最も低い免疫原性用量レベルで登録する。試験のために約２４名の患者を得る。
１２名の患者への拡張は、登録に成功した最も低い免疫原性用量レベルで生じる。
所与のコホートの６名のうち１名を超えない患者が、ＤＬＴの徴候を示さずに計画された５つのワクチン接種のうち４つのワクチン接種を受けたとき、次のコホートまたは拡張コホートに進むことができる。
研究治療は、用量制限毒性（ＤＬＴ）を理由に中断されるべきである。毒性を理由に研究治療が中断される場合、患者を追跡する。ＤＬＴは、以下によって定義される：
ａ．等級ＩＩＩアレルギー反応（等級ＩＩは、発疹、顔面紅潮、蕁麻疹、呼吸困難、または摂氏３８度を超える薬剤熱と定義され、等級ＩＩＩは、蕁麻疹を伴うか、または伴わない、非経口薬物を必要とする症状性気管支痙攣、アレルギー関連浮腫もしくは血管性浮腫と定義され、等級ＩＶは、アナフィラキシーと定義される）。
ｂ．等級ＩＩＩ自己免疫反応（等級ＩＩは、免疫抑制薬以外の治療を必要とする、重要ではない器官または機能を巻き込む自己免疫反応の兆候（例えば、甲状腺機能低下症）と定義され、等級ＩＩＩは、主要な器官を巻き込む可逆的自己免疫反応（例えば、結腸炎）である）。
ｃ．発熱を含む、等級ＩＩＩ以上の血液学的または非血液学的毒性（等級ＩＩＩの発熱は、２４時間未満、４０℃を超える）。
ｄ．等級ＩＩＩ注入部位反応（等級ＩＩＩは、重症もしくは長期であるか、または手術を必要とする潰瘍または壊死と定義される）。
免疫学的応答
患者の血清を、このワクチン中のそれぞれの個々の抗原に対する抗体について、ＥＬＩＳＡを用いて試験する。ＦＡＣＳ分析および補体依存性細胞毒性も、これらの特定の抗原を発現する（か、または発現しない）様々な細胞株に対して、選択した血清を用いて評価する。１週目および７週目の間に、末梢血液（６０ｍＬ）を取り出す。２週目、３週目、１１週目、１５週目、１９週目、および２３週目の間に、末梢血液（３０ｍＬ）を取り出す。その後、患者が、研究の結果、追跡されたままであり、かつ寛解期にある限り、血液を、３ヶ月毎に得る。
毒性／副作用
提案されるワクチンの予想される安全性は、卵巣癌を含む様々な悪性腫瘍を有する患者における、同一の抗原を利用する多価単量体ワクチン（単分子構築物を使用しない）を用いた臨床経験の蓄積に基づく。個々の構成要素でのワクチン接種は、前述のように良好な耐容性を示している（Ｇｉｌｅｗｓｋｉ Ｔ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｂｈｕｔａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９８：３２７０−５，２００１、Ｈｅｌｌｉｎｇ Ｆ，Ｚｈａｎｇ Ｓ，Ｓｈａｎｇ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５５：２７８３−８，１９９５、Ｓｌｏｖｉｎ ＳＦ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｍｕｓｓｅｌｌｉ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５４：６９４−７０２，２００５、Ｓｌｏｖｉｎ ＳＦ，Ｒａｇｕｐａｔｈｉｇ，Ｍｕｓｓｅｌｌｉ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ ２１：４２９２−８，２００３）。毒性を、国立癌研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、ＮＣＩ）によって開発された共通毒性基準バージョン３．０に従って等級化する。
治療応答／結果評価の基準
本研究の主要なエンドポイントは、免疫原性を説明し、毒性を評価し、かつ複数の用量レベルにわたって最も低い免疫原性用量を決定することである。主要なエンドポイントではないが、疾患の程度を、病歴および健康診断、ＣＡ−１２５決定、ならびに画像化を用いて評価する。
種々の抗原に対する抗体を、ＥＬＩＳＡを用いて、そして適する場合にはヒト腫瘍細胞株に対しＦＡＣＳを用いて、研究する。
もし可能な場合、ワクチン試験の完了後、疾患進行の徴候が見られるまで、ＣＴ画像化により、患者を３ヶ月毎に追跡する。
評価中または結果において、本研究に参加した全ての患者を説明する努力がなされるべきである。全ての患者を、安全性および免疫応答の評価が可能であると見なす。
患者は、本研究の開始時に寛解期にあり、かつ疾患進行の放射線学的徴候のため排除されるか、または以下のようにＣＡ−１２５基準を利用して排除される。
４回目のワクチン接種の前に疾患進行を有し、かつ進行のみ（すなわち、さもなければＤＬＴと定義される毒性がない）が原因で本研究から排除される患者を、毒性を評価する適切なコホートを有するために置き換える。
研究からの排除の基準
重度の許容し難い副作用、定義される用量制限毒性、定義される治療計画に従わない患者、患者が妊娠した場合、同意の取り消し要請または研究医師が中断することが適切であると感じる場合の任意の時点で、治療を中断することができる。
患者は、疾患進行のため研究から脱退する。疾患進行は以下によって定義することができる：１）疾患再発の検診もしくは放射線学的徴候、または２）正常上限の２倍（すなわち、７０Ｕ／ｍＬ以上）へＣＡ−１２５が上昇し、第２の試料が７０Ｕ／ｍＬ以上であることによって確認される。生化学的再発による治療失敗までの期間を、第１の試料が７０Ｕ／ｍＬ以上になった日として記録する。
生物統計学
これは、ＫＬＨに接合され、かつ免疫学的アジュバントＱＳ−２１と混合される、単一のポリペプチド骨格上にＧｌｏｂｏ−Ｈ、ＧＭ２、ｓＴｎ、ＴＦ、およびＴｎを担持する単分子五価炭水化物ベースのワクチンの安全性ならびに免疫原性を評価するように設計された第Ｉ相試験である。これは、これらの個々の抗原ならびにこれらの抗原を発現する腫瘍細胞に対するＩｇＧおよびＩｇＭ抗体応答を誘導する。３つの五価ワクチン用量（２５ｍｃｇ、５０ｍｃｇ、および１０または１００ｍｃｇ）のうちの１つに６名の患者を得、６名の患者の拡張コホートを、安全性が満たされる最も低い免疫原性用量レベルで登録する。それぞれの用量レベルで別々に安全性および免疫応答をさらに評価するために、用量レベル毎に６名の患者を得る。この試験のために約２４名の患者を得る。第３の用量レベル（１０または１００ｍｃｇ）を、最初の２つの用量レベルに対する血清学的応答に基づいて選択し、調製する。
次のコホートに進むかは、所与のコホートで観察される１つ以下のＤＬＴに基づく。１つ以下のＤＬＴが観察される場合、次の用量への増大が生じる。２名の患者がＤＬＴを経験する場合、以前の用量レベルが安全であると見なされ、免疫応答がさらに考慮される。例えば、２つ以上のＤＬＴが２５ｍｃｇレベルで見られる場合、プロトコルは、１０ｍｃｇに減少する。
この試験の主要なエンドポイントは、複数の抗原ワクチンに対する免疫学的応答（ＩＲ）を評価することである。患者は、２３週までのフォローアップ時点のうちのいずれかで、ワクチンの５つの抗原のうちの少なくとも３つに対して血清学的応答を呈する場合、応答者であると見なされる。構成要素毎の血清学的応答は、１）検出可能なベースライン力価を有しない患者について、ＥＬＩＳＡによる１：８０以上の抗体力価、および２）検出可能なベースライン力価を有する患者について、ＥＬＩＳＡによるベースラインの８倍以上増の抗体力価と定義される。応答者の割合を、それぞれの用量レベルについて推定する。
応答の最大数は、３０である（６名の患者×５つの抗原）。用量レベル２５ｍｃｇおよび５０ｍｃｇの両方が安全であると見なされる場合、かつ２つの連続した用量レベルの３０個の起こりうる結果のうち５つ以下の応答の差が観察され、６名の患者のうちの少なくとも５名が２５ｍｃｇで応答する場合、用量レベル１０ｍｃｇへの減少が生じる。さもなければ、隣接する用量レベルの間の差が、３０個のうち５つを超えるか、または４名以下の患者が応答する場合、次のコホートは、１００ｍｃｇで登録される。ＩＲの差が３０個のうち５つ以下であり、かつ両方の用量レベルが６名の患者のうちの少なくとも５名を応答させる、２つの連続した用量レベルのうち最も低い用量は、最も低い免疫原性用量レベルと定義される。
最も低い免疫原性用量レベルで１２名の患者を得て、１２名の患者のうちの少なくとも７名が、免疫応答基準に基づいて、３つ以上の抗原への応答者である場合、本研究は、肯定的であると見なされる。この計算は、帰無仮説（すなわち、活性なし）下での免疫応答の確率が、０．７５の代替仮説（すなわち、目標とする応答確率）の確率に対して、０．３５であることを想定する。一段二項割合試験（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔａｇｅ ｂｉｎｏｍｉａｌ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｔｅｓｔ）を使用して、タイプＩエラーを８％で設定し、タイプＩＩエラーを５％で設定する。７名未満の患者がＩＲを有する場合、本研究は、この集団におけるＩＲ比率が３５％以下であることを結論付ける（Ｙａｏ ＴＪ，Ｂｅｇｇ ＣＢ，Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ Ｐ，Ｏｐｔｉｍａｌ ｓａｍｐｌｅ ｓｉｚｅ ｆｏｒ ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｐｉｌｏｔ ｔｒｉａｌｓ ｏｆ ｎｅｗ ａｇｅｎｔｓ．Ｂｉｏｍｅｔｒｉｃｓ，５２（３）：９９２−１００１，１９９６）。
無進行生存期間は、１回目のワクチン接種から疾患進行または死までと定義される。カプラン・マイヤー方法論を用いて、ＰＦＳを推定する。ＤＬＴを、最大７週目（すなわち、４回目のワクチン接種）で決定し、１つ未満のＤＬＴが、６名の登録患者のうち１名において７週目で観察される場合、次のコホートを登録することができる。

Claims (34)

  1. 卵巣癌に罹患するヒト対象における卵巣癌を治療するための組成物であって、治療的に有効な量の免疫原性複合糖質を含み、前記免疫原性複合糖質は、以下の構造を有し、
    式中、ｔは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に付着した糖ペプチド基の数であり、ｔは８０〜１２００である、
    組成物。
  2. 前記治療的に有効な量は、腫瘍成長を阻害するのに有効な量を含む、請求項１に記載の組成物。
  3. 前記治療的に有効な量は、前記炭水化物抗原のそれぞれを認識する抗体を誘発するのに有効な量を含む、請求項１に記載の組成物。
  4. 前記治療的に有効な量は、１つ以上の固形腫瘍を治療するのに有効な量である、請求項１に記載の組成物。
  5. 前記対象は、臨床的寛解期にあるか、または前記対象が手術によって治療された場合、限定された切除不能な疾患を有する、請求項１に記載の組成物。
  6. 前記組成物は、１つ以上の免疫学的アジュバントと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  7. 前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、サポニンアジュバントである、請求項６に記載の組成物。
  8. 前記アジュバントは、ＱＳ−２１である、請求項６に記載の組成物。
  9. 前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、細菌またはリポソームである、請求項６に記載の組成物。
  10. 前記アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞またはカルメット・ゲラン桿菌である、請求項９に記載の組成物。
  11. 前記組成物は、薬学的に好適な担体と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
  12. ｔは、２００〜８００である、請求項１に記載の組成物。
  13. ｔは、少なくとも３００である、請求項１に記載の組成物。
  14. ｔは、少なくとも４００である、請求項１に記載の組成物。
  15. ｔは、少なくとも５００である、請求項１に記載の組成物。
  16. ｔは、５００〜８００である、請求項１に記載の組成物。
  17. 卵巣癌に罹患するヒト対象における抗体を誘導するための組成物であって、前記抗体は、ヒト卵巣腫瘍細胞に特異的に結合することができ、前記組成物は、免疫原性複合糖質を含み、前記免疫原性複合糖質は、以下の構造を有し、
    式中、ｔは、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に付着した糖ペプチド基の数であり、ｔは８０〜１２００である、
    組成物。
  18. 誘導された前記抗体は、Ｇｌｏｂｏ−Ｈ、ＳＴＮ、Ｔｎ、ＴＦ、およびＧＭ２からなる群から選択される前記炭水化物決定基のうちの少なくとも３つを認識する、請求項１７に記載の組成物。
  19. 生成された前記抗体は、前記糖ペプチド上に存在する前記炭水化物決定基のそれぞれを認識する、請求項１７に記載の組成物。
  20. 治療的に有効な量の前記組成物が前記ヒト対象に投与される、請求項１７に記載の組成物。
  21. 前記治療的に有効な量は、腫瘍成長を阻害するのに有効な量を含む、請求項２０に記載の組成物。
  22. 前記治療的に有効な量は、１つ以上の固形腫瘍を治療するのに有効な量である、請求項２０に記載の組成物。
  23. 前記ヒト対象は、臨床的寛解期にあるか、または前記対象が手術によって治療された場合、限定された切除不能な疾患を有する、請求項１７に記載の組成物。
  24. 前記組成物は、１つ以上の免疫学的アジュバントと組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１７〜２３のいずれか一項に記載の組成物。
  25. 前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、サポニンアジュバントである、請求項２４に記載の組成物。
  26. 前記アジュバントは、ＱＳ−２１である、請求項２４に記載の組成物。
  27. 前記１つ以上の免疫学的アジュバントのうちの少なくとも１つは、細菌またはリポソームである、請求項２４に記載の組成物。
  28. 前記アジュバントは、サルモネラ・ミネソタ細胞またはカルメット・ゲラン桿菌である、請求項２４に記載の組成物。
  29. 前記組成物は、薬学的に好適な担体と組み合わせて投与されることを特徴とする、請求項１７〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
  30. ｔは、２００〜８００である、請求項１７に記載の組成物。
  31. ｔは、少なくとも３００である、請求項１７に記載の組成物。
  32. ｔは、少なくとも４００である、請求項１７に記載の組成物。
  33. ｔは、少なくとも５００である、請求項１７に記載の組成物。
  34. ｔは、５００〜８００である、請求項１７に記載の組成物。
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