JP6008937B2

JP6008937B2 - １−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸の結晶形とその製造方法

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Publication number: JP6008937B2
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Inventors: ユン・ジョンミン; パク・キスク; ユン・ジュヨン; リー・ジュヨン; キム・グゥンテ; ジョン・チョルキュ
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Description

本発明は、キサンチンオキシダーゼ（xanthine oxidase）阻害剤として有用な下記式（１）で示される化合物（化合物名：１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸）の結晶形及びその製造方法に関するものである。

（１）

キサンチンオキシダーゼは、ヒポキサンチン（hypoxanthine）をキサンチン（xanthine）に、また形成されたキサンチンを尿酸に転換させる酵素である。体内に尿酸が過度に存在する場合、様々な疾患を起こし、代表的に痛風が挙げられる。痛風（gout）は、尿酸結晶体が関節の軟骨、靭帯、そして周辺組織に蓄積されて激しい炎症と痛みを誘発する状態をいう。過去４０年間発病率が着実に増加する傾向を見せている（非特許文献１）。また、多くの研究者らによって尿酸と心臓まひ、高血圧、糖尿病、腎疾患及び心血管系疾患が緊密な相関関係があることが確認されており、これに伴い、尿酸管理の重要性が注目されている（非特許文献２）。従って、キサンチンオキシダーゼの活性を阻害する物質は高尿酸血症、痛風、心不全症、心血管系疾患、高血圧、糖尿病、腎疾患、炎症及び関節疾患、炎症性腸疾患などのようなキサンチンオキシダーゼ関連疾患を效果的に治療することができる。

一方、高度の品質を確保し、長期間これを保持しなければならない医薬品分野で活性成分として使用される薬物の化学的及び物理的安定性は非常に重要である。このような活性成分の製剤学的な優秀性は薬理効果の優秀性と共に発明の効果として重要な価値がある。

N. L. Edwards, Arthritis & Rheumatism, 2008, 58, 2587-2590 D. I. Feig et al., N. Eng. J. Med, 2008, 23, 1811-1821

本発明の目的は、式（１）の新規な化合物（以下、「化合物（１）」）の結晶形を提供し、それにより、安定性、非吸湿性、取扱容易性などの優れた薬剤学的品質、並びにキサンチンオキシダーゼに選択的に結合することによって達成される医薬的薬理活性、を提供することにある。

以下、本発明を詳細に説明する。
本発明は、キサンチンオキシダーゼ阻害剤として有用な新規な物質である化合物（１）（化合物名：１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸）の結晶形を提供する。

（１）

化合物（１）の結晶形、即ち、１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸の結晶形はキサンチンオキシダーゼに対する阻害活性を示し、その製造方法は下記製造例で詳細に説明される。

キサンチンオキシダーゼは、ヒポキサンチンをキサンチンに、また形成されたキサンチンを尿酸に転換させる酵素である。体内に尿酸が過度にたくさん存在する場合、様々な疾患を起こし、代表的には痛風が挙げられる。化合物（１）の結晶形はキサンチンオキシダーゼを選択的に阻害する。

化合物（１）の結晶形は、Ｘ線粉末回折（ＸＲＤ）分析時、１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１８．３゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜で特性ピーク（２θ）を示す。より具体的に、化合物（１）の結晶形は、Ｘ線粉末回折分析時、１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１６．６゜、１８．３゜、１９．６゜、２０．９゜、２３．１゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜で特性ピーク（２θ）を示す。

さらに、化合物（１）の結晶形は、示差走査熱量測定（Differential Scanning Calorimetry）を用いた分析時、オンセット値として２６３〜２６８℃で融点による吸熱ピークを示し、これより、本発明の新規な物質として化合物（１）の結晶形は２６３〜２６８℃の高い融点を示す熱に非常に安定な結晶形であることが分かる（図２）。これは、４０±２℃、７５±５％ＲＨ又は６０±２℃、５±５％ＲＨの高温で１２週間保管後、得られた熱安定性結果から確認することができる。１２週間保管した化合物の残留含量は、初期保管した含量対比全く消失されない。熱重量分析法（Thermogravimetric analysis）を用いた分析で、示差走査熱量測定の吸熱区間（２６３〜２６８℃）で重量減少を示さないことが確認された（図３）。

また、本発明の化合物（１）の結晶形は水分に対して非常に安定している。図４に示されるように、等温吸湿でもわずか約０．３％内の水分による重量変化が観察され、水分に対しても非常に安定な結晶形であることが確認できた。

以上のように、本発明の化合物（１）の結晶形は、広範囲な相対湿度範囲で湿度変化に伴う重量変化をほとんど示さなく、湿度変化に伴う結晶形の変化がなく、熱にも非常に安定している。したがって、貯蔵安定性や粉砕工程などの観点で特に有用である。

本発明は、また、化合物（１）を適した溶媒又は溶媒混合物から結晶化して、化合物（１）の結晶形を製造する方法を提供する。溶媒又は溶媒混合物は、化合物（１）の製造方法に既に使用された溶媒から選択されるのが好ましい。使用される溶媒又は溶媒混合物は、無水エタノール、２−メトキシエタノール、イソブタノール、ｎ−ブタノール、ｎ−オクタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール、酢酸、アセトン、ブチルアセテート、メチルアセテート、酢酸エチル、プロピルアセテート、ｔ−ブチルアセテート、イソブチルアセテート、メチルエチルケトン、２−ペンタノン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、クロロホルム、トルエン及びこれらの混合物よりなる群から選択される。さらに好ましくは、溶媒は無水エタノール、ｔ−ブタノール、アセトン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、クロロホルム及びこれらの混合物よりなる群から選択される。

化合物（１）の適した溶媒からの結晶化は、例えば、溶液を冷却させるか、溶媒を蒸発させるか、又は貧溶媒（化合物（１）があまり溶解しない溶媒、例えば水等）を加えて過飽和するか、スラリー状態への転換などの方法を使用することによって遂行されてもよい。

本発明の化合物（１）の化合物の結晶形は、ヒト患者にそれ自体として、又は混合療法でのように他の活性成分等と共に、又は適当なキャリアや賦形剤と共に混合された薬剤学的組成物として投与できる。

本発明の薬剤学的組成物は、例えば、通常的な混合、溶解、顆粒化、錠剤化、粉末化、エマルジョン化、カプセル化、トラッピング又は凍結乾燥過程などの手段により、公知方式で製造することができる。

従って、本発明に係る薬剤学的組成物は、薬剤学的に用いられる剤形への活性化合物の処理を容易にする賦形剤又は補助剤を含む一つ又はそれ以上の薬剤学的に許容されるキャリアを用いて、通常的な方法で製造することができる。適した剤形は、選択された投与ルートに左右される。公知技術、公知のキャリア及び賦形剤、そして当分野、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciencesにおける、知られた手段のいずれも適切に使用できる。

例えば、本発明では、化合物（１）の結晶形を目的に応じて、注射用製剤及び経口用製剤などに剤形化できる。

注射用調製物としては、本発明の活性化合物を、好ましくはＨａｎｋ溶液、リンガー溶液、又は生理食塩水のような薬剤学的に適したバッファーを用い、液状調製物として製剤化することができる。粘膜透過投与のためには、通過するバリアーに適した浸透補助剤が製剤に使用される。このような浸透補助剤は当分野において従来より知られている。

当業界において知られている薬剤学的に許容されるキャリアを本発明の活性化合物と組合せることによって、活性化合物を経口投与用の固形製剤として容易に剤形化できる。このようなキャリアを用いることで、本発明の化合物を錠剤、散剤、顆粒剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル、シロップ、スラリー、懸濁剤などとして剤形化することができる。好ましくはカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤及び顆粒剤が使用され、特にカプセル剤と錠剤が有用である。経口投与用の剤型は、例えば、以下の通りに得ることができる。

本発明に係る化合物（１）の結晶形と一つ又は二以上の賦形剤を混合し、場合によって、このような混合物を粉砕し、必要であれば、適した補助剤を投入した後、顆粒の混合物を処理して錠剤又は糖衣錠コアを得ることができる。適した賦形剤としてはラクトース、スクロース、マンニトール又はソルビトールのような充填材；トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、コメ澱粉、ポテト澱粉、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）のようなセルロース系物質などが挙げられる。必要であれば、架橋ポリビニールピロリドン、寒天、またはアルギン酸又はアルギン酸ナトリウムのようなその塩などの崩壊剤（disintegrating agent）、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、結合剤のようなキャリアが添加されてもよい。

経口に用いられる剤形は、ゼラチン及びグリコール又はソルビトールのような可塑剤で作られた軟らかい密封カプセルだけでなく、ゼラチンで作られた硬ゼラチンカプセルを含んでもよい。硬ゼラチンカプセルはラクトースのような充填剤、澱粉のような結合剤、及び／又はタルク又はステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤との混合物であり、活性成分を含んでもよい。軟質カプセルで、活性化合物は脂肪酸、液体パラフィン、又は液体ポリエチレングリコール等の適した媒体に溶解又は分散されていてもよい。また、安定化剤が含まれてもよい。経口投与のための全ての調製はそういう投与に適した含量を含んでいてもよい。

化合物（１）の結晶形、即ち、活性化合物は、また、注射剤、例えば、大きな丸薬型の注射や連続的な注入により、非経口投入用として剤形化できる。注射用剤形は、例えば、防腐剤を付加したアンプル又は複数投与容器に含む単位容量形態で提供されてもよい。組成物は油性又は液状ビヒクル中の懸濁液、溶液、エマルジョンのような形態であってもよく、懸濁剤、安定化剤及び／又は分散剤のような剤形用成分を含んでいてもよい。活性化合物は使用前に発熱物質無含有滅菌水のような適切なビヒクルとの組み合わせのために粉末の形態であってもよい。活性化合物は、例えば、ココアバターや他のグリセリドのような通常的な坐剤の基剤を含んでいる、坐剤又は停留かん腸のような直腸投与組成物として剤形化できる。

本発明に係る薬剤学的組成物には、化合物（１）の結晶形がその意図する目的を達成するのに有効な量で含有されている。具体的に、治療的有効量は治療される患者の生存を延ばすか、疾患の症状を防止、軽減又は緩和させるのに有効な化合物の量を意味する。当業者は、特に本明細書の詳細な説明に照らして、治療的有効量を決定することができる。

単位投与用量形態に剤形化する場合、化合物（１）の結晶形は、化合物（１）として単位用量あたり約０．１〜１，０００ｍｇの量で含有するのが好ましい。投与量は患者の体重、年齢及び疾患の特殊な性質と深刻性のような要因に基づいた医者の処方に従う。しかし、成人治療に必要な投与量は投与の頻度と強度によって一日に約１〜１０００ｍｇ範囲が通常である。成人に筋肉内又は静脈内投与するとき、単回用量に分けて投与する場合、一日に通常約１〜５００ｍｇの総用量であれば十分であるが、一部の患者は、更に高い日用量が好ましいこともある。

本発明は、また、化合物（１）の結晶形を治療的有効量で使用して、ヒトキサンチンオキシダーゼ関連疾患を治療するか、予防する方法を提供する。“ヒトキサンチンオキシダーゼ関連疾患”とは、ヒトキサンチンオキシダーゼを阻害することによって治療または予防できる疾患であり、例えば、高尿酸血症、痛風、心不全症、心血管系疾患、高血圧、糖尿病、糖尿病関連合併症、腎臓疾患、炎症及び関節疾患、炎症性腸疾患などが挙げられるが、これらに限定されない。前記糖尿病関連合併症の例には高脂血症、動脈硬化、肥満、高血圧、網膜症、腎不全症などが挙げられる（Circulation Research, 2006, 98, 169-171; Hypertension 2003, 41, 1183-1190）。また、本発明の化合物（１）の結晶形は、動物での毒性試験のデータによって確認されたとおり、遺伝毒性や反復毒性などの恐れのなく、安全性が非常に高い。

本明細書において用いられる“治療”とは、疾患の症状を示している患者に使用されたとき、疾患の進行を中断又は遅延させることを意味し、“予防”とは、症状を示さないが、そういう危険性の高い患者に使用されたとき、発症を中断又は遅延させることを意味する。

以下、本発明を下記実施例及び試験例に基づいてより具体的に説明する。しかし、これらの実施例及び試験例は本発明に対する理解を助けるためだけであり、本発明の範囲がこれらの実施例及び試験例によって限定されるものではない。

本発明によって新たに提供される化合物（１）の結晶形は、キサンチンオキシダーゼを選択的に阻害することによって達成し得る薬理活性を有すると同時に、安定性、例えば、熱安定性及び貯蔵安定性などの、優れた薬剤学的効果を有する。新規な物質として化合物（１）の結晶形は、広範囲な相対湿度範囲で湿度変化に伴う重量変化がほとんどなく、湿度変化に伴う結晶形の変化がないので有用である。また、本発明が提供する様々な方法にしたがって、この結晶形の製造を制御することが可能である。

化合物（１）の結晶形のＸ線粉末回折（ＸＲＤ）パターンである。化合物（１）の結晶形の示差走査熱量（ＤＳＣ）分析結果である。化合物（１）の結晶形の熱重量（ＴＧＡ）分析結果である。化合物（１）の結晶形の吸湿等温線及び脱湿等温線である。

製造例：化合物（１）の製造
製造例１−１：１−（３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造
下記手順（１）、（２）、（３）に従って表題化合物を得た。

（１）１−（３−ホルミル−１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造

無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）に塩化オキサリル（０．５６ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）を入れ、０℃でＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（０．５１ｍＬ、６．６ｍｍｏｌ）を入れた後、０℃で３０分間撹拌した。この反応液に化合物１−（１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１．４０ｇ、５．４７ｍｍｏｌ）とジクロロメタン（５０ｍＬ）の混合液を加え、室温で１時間還流撹拌した後、溶媒を除去した。テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）と２０％酢酸アンモニウム水溶液（１００ｍＬ）を入れ、３０分間加熱して還流撹拌した。反応終結後、反応液を冷却し、酢酸エチルを入れ、炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した後、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮して表題化合物を得た。
Mass(EI) 284(M⁺+1)

（２）１−［３−［（Ｅ，Ｚ）−ヒドロキシイミノメチル］−１Ｈ−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造

前記工程（１）で得た１−（３−ホルミル−１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルをピリジン（１５０ｍＬ）に溶かし、ヒドロキシ塩化アンモニウム（４９９ｍｇ、７．１８ｍｍｏｌ）を入れた。混合物を加熱し、５時間還流撹拌した。反応終結後、溶媒を減圧濃縮し、アセトンを溶媒とシリカゲルを通してろ過して表題化合物を得た。
Mass(EI) 299(M⁺+1)

（３）１−（３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造

前記工程（２）で得た１−［３−［（Ｅ，Ｚ）−ヒドロキシイミノメチル］−１Ｈ−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルを無水テトラヒドロフラン（９４ｍＬ）に溶かし、ジ（イミダゾール−１−イル）メタンチオン（９０％、２．７９ｇ、１４．１ｍｍｏｌ）を入れた後、２時間室温で撹拌した。反応終結後、反応液を減圧濃縮し、生成された固体化合物をカラム・クロマトグラフィーで分離して表題化合物（１．３２ｇ、４．７１ｍｍｏｌ、８６％収率）を得た。

製造例１−２：１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造

製造例１−１で得た１−（３−シアノ−１Ｈ−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１３．８４ｇ、４９．３８ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（２００ｍＬ）に溶かした。炭酸セシウム（３２．１７ｇ、９８．７４ｍｍｏｌ）及び２−ヨードプロパン（１９．７ｍＬ、１９８ｍｍｏｌ）を入れた後、加熱し、５時間還流撹拌した。反応終結後、反応液を減圧濃縮し、生成された固体化合物をカラム・クロマトグラフィーで分離して表題化合物（１３．８７ｇ、４３．０３ｍｍｏｌ、８７％収率）を得た。

製造例１−３：１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸（化合物（１））の製造

製造例１−２で得た１−（３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル）ピラゾール−４−カルボン酸エチルエステル（１３．８７ｇ、４３．０３ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１４０ｍＬ）、メタノール（１４０ｍＬ）及び６Ｎ水酸化ナトリウム（７０ｍＬ）溶液に加え、室温で１時間反応させた。反応後、有機溶媒を減圧下で除去し、残った水溶液層を酢酸エチルで洗浄した。濃縮塩酸を加え、水溶液をｐＨ１に酸性化し、沈澱した固体化合物をろ過した後、蒸留水で洗浄し、乾燥して表題化合物（１２．０９ｇ、４１．０８ｍｍｏｌ、９５％収率）を得た。

実施例１：化合物（１）の結晶形の製造
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（３．８２ｋｇ）をアセトン（３８２Ｌ）に溶かし、これを撹拌中の９０℃の水（４０Ｌ）にゆっくり滴加した。滴加が完了すれば、約１２時間更に撹拌した後、冷却し、ろ過して本発明の化合物（１）の結晶形（３．４０ｋｇ）を得た。得られた化合物（１）の結晶形を、^１Ｈ−ＮＭＲ及びＩＲにより特徴付けした。結果を下記に示す。
¹H-NMR (DMSO-D₆, ppm) 1.5 (6H, d), 4.9 (1H, q), 8.6 (1H, s), 8.2 (1H, d), 7.9 (1H, dd), 7.9 (1H, d), 8.1 (1H, s), 9.1 (1H, s), 12.6 (1H, br)
IR(cm-1) 2500-3150, 2215, 1669, 1558, 1502, 1263
また、ＸＲＤにより得られた図１のスペクトルに示されるように、化合物（１）の結晶形は１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１８．３゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜で特性ピーク（２θ）を示す。ＸＲＤの具体的な値を下記表１に示す。

実施例２
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（４０ｍｇ）をテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に溶かした後、溶媒を室温でゆっくり蒸発させて、化合物（１）の結晶形（３５ｇ）を得た。ＸＲＤの具体的な値を下記表２に示す。

実施例３
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ）をｔ−ブタノール（１２０ｍＬ）に入れ、室温で溶媒を蒸発させて、化合物（１）の結晶形（１９０ｇ）を得た。ＸＲＤの具体的な値を下記表３に示す。

実施例４
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ）をエタノール（６０ｍＬ）に入れ、スラリー状態で２４時間撹拌した後、ろ過して、化合物（１）の結晶形（１８４ｇ）を得た。ＸＲＤの具体的な値を下記表４に示す。

実施例５
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ）をアセトニトリル（７０ｍＬ）に入れ、スラリー状態で２４時間撹拌した後、ろ過して、化合物（１）の結晶形（１７９ｇ）を得た。ＸＲＤの具体的な値を下記表５に示す。

実施例６
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸（２００ｍｇ）をクロロホルム（１２０ｍＬ）に入れ、スラリー状態で２４時間撹拌した後、ろ過して、本発明の化合物（１）の結晶形（１９６ｇ）を得た。ＸＲＤの具体的な値を下記表６に示す。

実施例７
製造された１−［３−シアノ−１−イソプロピル−インドール−５−イル］ピラゾール−４−カルボン酸のナトリウム塩（７．３ｋｇ）を１０ＮＮａＯＨ溶液（１１．６Ｌ）に溶かした。この溶液に塩酸（１２．１ｋｇ）を撹拌しながらゆっくり滴加した。化合物（１）の結晶形が析出し始めた。ｐＨが約１〜２になったら塩酸滴加を中断した。混合物が均一になるまで撹拌し、ろ過して、化合物（１）の結晶形（１５．９６ｋｇ）を得た。

試験例１
粉末Ｘ線回折試験
実施例１で得た化合物（１）の結晶形（約４０ｍｇ）を試料ホルダーに充填し、Ｐａｎａｌｙｔｉｃａｌ製のＸ’ＰｅｒｔＰＲＯに取り付けた後、４〜４０゜／２θの範囲で回折パターンを測定した。結果を図１に示す。詳細な分析条件は下記の通りである。
ステップ時間：９９．４５
ステップ幅：０．０３９４°
スキャンモード：Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
電圧／電流：４５ｋＶ／４０ｍＡ
Ｃｕ−ターゲット（Ｎｉ−ｆｉｌｔｅｒ）
固定発散スリット
ソラースリット：ソラー０．０４ｒａｄ
検出スリット０．０４ｒａｄソラースリット、抗散乱スリットＰ７．５
図１で確認できるように、本発明の化合物（１）の結晶形を分析した結果、ＣｕＫα、４５ｋＶ、４０ｍÅで測定したＸＲＤスペクトルの特性ピーク値（２θ）は１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１８．３゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜であった。

試験例２
時差走査熱量法（ＤＳＣ）
時差走査熱量法（ＤＳＣ）をＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏのＤＳＣ８２１^ｅを使用して遂行した。実施例１で得た化合物（１）の結晶形（３ｍｇ）をアルミニウムパンに投入し、重量を正確に記録した。孔がかけられた蓋で、パンをカバーした後、形を整えた。パンを装置に取り付け、窒素パージ下に２５〜３００℃まで１０℃／分の速度で加熱した。インジウム金属を校正標準として使用した。得られた結果を図２に示す。図２で確認できるように、本発明の化合物（１）の結晶形は、オンセット値として２６３〜２６８℃で融点による吸熱ピークを示し、このことから、本発明の結晶形は、高い融点を有し、熱に安定であることが分かる。

試験例３
熱重量分析法（ＴＧＡ）
ＭｅｔｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏＴＧＡ８５０を利用して熱重量分析法（ＴＧＡ）を遂行した。実施例１で得た化合物（１）の結晶形（５ｍｇ）をアルミニウムパンに投入した。パンを装置に取り付けたのち、窒素パージ下に２５〜３００℃まで１０℃／分の速度で加熱した。ニッケル及びアルミニウム（登録商標）を校正標準として使用した。得られた結果を図３に示す。図３で確認できるように、本発明の化合物（１）の結晶形は、示差走査熱量測定の吸熱区間で重量減少を示さないことを確認した。これより、本発明の結晶形は熱に安定な結晶形であることが確認された。

試験例４
等温吸湿／脱湿分析法
実施例１で得た化合物（１）の結晶形に対して、ＶＴＩ−ＳＡＶａｐｏｒＳｏｒｐｔｉｏｎＡｎａｌｙｚｅｒ上で吸湿／脱湿データを収集した。試料は分析前に乾燥しなかった。２５℃を保持しながら相対湿度（ＲＨ）５〜９５％範囲から５％ＲＨ間隔で吸湿と脱湿を実施した。その結果を図４に示す。図４で確認できるように、本発明の化合物（１）の結晶形は５〜９５％ＲＨの外部湿度変化に対してわずか０．３％以下の重量変化しか示していないことが分かる。即ち、本発明に係る結晶形は相対湿度変化に対して非常に安定であり、湿度変化に伴う結晶形の変化がなかった。

試験例５
熱安定性
実施例１で得た本発明の結晶形（約５０ｍｇ）をＤｕｍａ瓶に入れ、４０±２℃、７５±５％ＲＨ又は６０±２℃、５±５％ＲＨに保管した。２週、８週及び１２週後に各試料をＤｕｍａ瓶から引き出し、アセトニトリル／水／０．１Ｎ水酸化ナトリウム溶液＝３０／６０／１０（ｖ／ｖ／ｖ％）混合溶媒に溶かし、ＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬＣ分析条件は以下の通りである。
ＨＰＣＬ分析条件
カラム：ｄＣ１８（４．６ｍｍＩ．Ｄ×４５０ｍｍＬ、粒子径５．０μｍ、Ａｇｉｌｅｎｔ）
カラム温度：２０℃
移動相：ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ／ＴＦＡ＝３５／６５／０．１
流速：１．０ｍＬ／分
検出：２５０ｎｍ、ＵＶ
注入量：１０μＬ
トータル分析時間：４０分
結晶形の熱安定性結果は下記表８に示した。

表８のデータは、本発明の化合物（１）の結晶形が、４０±２℃、７５±５％ＲＨ又は６０±２℃、５±５％ＲＨの条件下で、１２週間優れた安定性を示すことを示している。

試験例６
キサンチンオキシダーゼ（xanthine oxidase）酵素に対する選択性の評価
本発明の化合物（１）の結晶形を雄性マウス（ＢＡＬＢ／ｃ種）に１００、３００ｍｇ／ｋｇの容量で投与した後、２４時間後血液を採取し、血漿を分離した。血漿中のオロチン酸（ＯＡ）およびオロチジン（ＯＤ）濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて定量した。結果を下記表９に示す。本試験は、化合物（１）の結晶形が、ピリミジン代謝の主要酵素であるオロチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＯＰＲＴ）およびオロチジンモノホスフェートデカルボキシラーゼ（ＯＭＰＤＣ）に対する選択性を有するかを確認するためである。本生体内試験を遂行した結果、血中のＯＡ、ＯＤは増加しなかった（下記表９参照）。この結果から、化合物（１）の結晶形は、キサンチンオキシダーゼに選択的に結合すると評価された。

試験例７
動物での生体利用能の評価
本発明の化合物（１）の結晶形の生体利用能を評価するために、化合物（１）の結晶形を、ラット、サル、イヌに、単回用量で静脈および経口投与した。血液を採取し、血漿中の化合物（１）の結晶形の濃度をＬＣ−ＭＳ／ＭＳを利用して定量した。各投与経路での薬物動態パラメーター（Ｃ_ｍａｘ、ＡＵＣ_ｉｎｆ、ＣＬ、Ｖｄ_ｓｓ、ｔ_１．２）を求めた後、静脈投与時ＡＵＣに対する経口投与時ＡＵＣの百分率で生体利用能を求めた。ラット、サル、イヌでの生体利用能は、それぞれ３７〜６１％、２３〜３９％及び７５％と評価された。

Claims

下記式（１）

で示される化合物の結晶形であって、Ｘ線回折パターンスペクトルの特性ピーク（２θ）が、
１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１８．３゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．６゜、１８．２゜、２４．７゜、２５．６゜及び２６．６゜；
１２．２゜、１３．３゜、１５．９゜、１８．４゜、２４．７゜、２５．９゜及び２６．７゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１８．３゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．６゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．８゜、１８．３゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．６゜；または
１２．１゜、１３．３゜、１５．８゜、１８．３゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．７゜
で示される結晶形。
（１）
Ｘ線回折パターンスペクトルの特性ピーク（２θ）が、
１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１６．６゜、１８．３゜、１９．６゜、２０．９゜、２３．１゜、２４．８゜、２５．８゜及び２６．６゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．６゜、１６．６゜、１８．２゜、１９．６゜、２０．９゜、２４．７゜、２５．６゜及び２６．６゜；
１２．２゜、１３．３゜、１５．９゜、１６．７゜、１８．４゜、１９．７゜、２１．１゜、２４．７゜、２５．９゜及び２６．７゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１６．６゜、１８．３゜、１９．６゜、２０．９゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．６゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．７゜、１６．６゜、１８．３゜、１９．６゜、２１．０゜、２３．３゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．６゜；
１２．１゜、１３．２゜、１５．８゜、１６．７゜、１８．３゜、１９．６゜、２１．０゜、２３．１゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．６゜；または
１２．１゜、１３．３゜、１５．８゜、１６．７゜、１８．３゜、１９．６゜、２１．０゜、２３．２゜、２４．９゜、２５．８゜及び２６．７゜
で示される、請求項１に記載の結晶形。
ＤＳＣのオンセット値として２６３〜２６８℃の融点を有する時差走査熱量測定曲線を示す、請求項１に記載の結晶形。
請求項１に記載の式（１）の化合物を、無水エタノール、２−メトキシエタノール、イソブタノール、ｎ−ブタノール、ｎ−オクタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、ｔ−ブタノール、酢酸、アセトン、ブチルアセテート、メチルアセテート、酢酸エチル、プロピルアセテート、ｔ−ブチルアセテート、イソブチルアセテート、メチルエチルケトン、２−ペンタノン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、クロロホルム、トルエン及びこれらの混合物よりなる群から選択される溶媒に溶かした後、そこから結晶化することによる、式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
前記結晶化が、溶液を冷却すること、溶媒を蒸発させること、過飽和になるまで貧溶媒を添加すること、及びスラリー状態へ転換することよりなる群から選択される方法で遂行される、請求項４に記載の式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
請求項１に記載の式（１）の化合物をアセトンに溶かした後、アセトンを蒸発させる、請求項４に記載の式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
請求項１に記載の式（１）の化合物をエタノール、アセトニトリル又はクロロホルムに溶かしてスラリーを得た後、これを撹拌しろ過する、請求項４に記載の式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
請求項１に記載の式（１）の化合物をテトラヒドロフラン又はｔ−ブタノールに溶かした後、室温で溶媒を蒸発させる、請求項４に記載の式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
請求項１に記載の式（１）の化合物のナトリウム塩を水酸化ナトリウム溶液に溶かした後、塩酸を滴加して結晶を生成し、混合物が均一になるまで撹拌する、請求項４に記載の式（１）の化合物の結晶形を製造する方法。
請求項１に記載の式（１）の化合物の結晶形を含む、高尿酸血症、痛風、心不全症、心血管系疾患、高血圧、糖尿病、腎疾患、炎症及び関節疾患、炎症性腸疾患よりなる群から選択されるキサンチンオキシダーゼ関連疾患の治療又は予防用組成物。