JP5991624B2 - コラーゲン非線維化成形体及びその製造方法 - Google Patents
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Description
しかしながら、これらの成形体の強度は、再生医療用の足場材料、又は移植用材料として十分なものではなく、例えば非特許文献1及び2に記載のコラーゲン薄膜が、その周囲をナイロンフレームにより補強することによって、細胞培養基材として実用化されているのみである。
従って、本発明の目的は、非線維化のコラーゲン成形体において、一定以上の透明度を有し、且つ一定以上の強度を有するコラーゲンの非線維化成形体を提供することである。
具体的には、本発明の目的は、細胞培養基材、再生医療用の足場材料(例えば、軟骨・骨・靭帯・角膜実質・皮膚・肝臓組織の再生材料)、移植用材料(創傷被覆材料、骨補填剤、止血材料、癒着防止材など)、又は薬物送達担体に用いることのできる、十分な強度を有するコラーゲン非線維成形体を提供することである。例えば、本発明の目的の1つは、角膜の移植材料として用いることのできるコラーゲン非線維化透明膜を提供することである。また、本発明の別の目的は、細胞培養基材として、細胞培養において、通常の顕微鏡を用いて、細胞を観察することのできる透明度の高いコラーゲン膜を提供することである。更に、本発明の目的の1つは細胞を内部まで均一に播種可能で且つ強度の高い軟骨や弾性率が優れアルブミン産生能を有する肝臓などの組織を再生可能なコラーゲン非線維化多孔体を提供することである。
本発明者らは、細胞培養基材、再生医療用の足場材料、又は移植用材料として、十分な強度を有し、更に透明度の高いコラーゲン膜について、鋭意研究した結果、魚類由来のコラーゲン(特には、魚鱗由来のコラーゲン)を線維化せずに成形することにより、高い強度を有し、透明度の高い透明膜が得られることを見出した。また、透明で純度が高い膜を作製するためには、ゲルが塩を含まないこと、及び線維化していないコラーゲン分子が緻密に絡まった構造であることが重要であることを見出した。そして、二酸化炭素及び魚類コラーゲンが溶解したコラーゲン酸性溶液を用いることによって、コラーゲンが線維化せずに、高密度で、且つ高強度のコラーゲン非線維化透明膜を製造できることを見出した。本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン分子が緻密に絡まりあい、引張強度が30MPa以上を示す優れた膜であった。更に、グルタルアルデヒド蒸気を用いる架橋方法によって、コラーゲン非線維化透明膜が膨潤することなく、更に強度を向上させることが可能であることを見出した。更に、魚類由来のコラーゲンを用い、線維化しないコラーゲン非線維化多孔体は、高い気孔率を有し、強度の優れた多孔体を得ることができることを見出した。
本発明は、こうした知見に基づくものである。
なお、本明細書において、「非線維化」とは、コラーゲン細線維を形成していないことを意味するものであり、I型コラーゲンの5分子が1/4ずつ長軸方向にずれて自己組織化するナノ線維を形成していないことを意味するものではない。
[1]魚類由来コラーゲンを用いることを特徴とする、コラーゲン非線維化成形体、
[2]前記魚類由来コラーゲンが、魚鱗由来コラーゲンである、[1]に記載の成形体、
[3]前記非線維化成形体が非線維化透明膜であって、重量法による密度が0.4g/cm3以上であり、且つ引張強度が30MPa以上である、[1]又は[2]に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[4]表面粗さが30nm以下である、[3]に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[5]500nm〜700nmの範囲の波長の光を90%以上透過する、[3]又は[4]に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[6]コラーゲンが架橋されており、引張強度が50MPa以上である、[3]〜[5]のいずれかに記載のコラーゲン非線維化成形体、
[7]前記非線維化成形体が、気孔率80%以上の非線維化多孔体である、[1]又は[2]に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[8]多孔体の平均孔径が80μm以上である、請求項7に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[9]コラーゲンが架橋されている、[7]又は[8]に記載のコラーゲン非線維化成形体、
[10](1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、及び(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、を含む、コラーゲン非線維化成形体の製造方法、
[11](1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、及び(3)前記コラーゲン成形体を乾燥する工程、を含む、[10]に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法、
[12](1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、(3)前記コラーゲン成形体を乾燥する工程、及び(4)乾燥したコラーゲン成形体を架橋する工程を含む、[10]又は[11]に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法、
[13]前記魚類由来コラーゲンが、魚鱗由来コラーゲンである、[10]〜[12]のいずれかに記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法、
[14]前記コラーゲン成形体が、コラーゲン非線維化透明膜である、[10]〜[13]のいずれかに記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法、又は
[15]前記コラーゲン成形体が非線維化多孔体である、[10]〜[13]のいずれかに記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法、
に関する。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法の好ましい態様においては、コラーゲン非線維化透明膜を架橋する工程を含む。
更に、本発明のコラーゲン非線維化成形体の製造方法によれば、製造工程中のコラーゲンゲルが塩を含まないため、塩を除去するための洗浄作業等が不要であり、従って、製造コストの削減が可能である。また、本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン純度が極めて高いなどの特徴を有している。
加えて、本発明のコラーゲン非線維化成形体の原料は、魚類由来のコラーゲンであるが、この理由は魚類由来のコラーゲンは、人獣共通感染症がほとんど存在しないからである。従って、魚類由来のコラーゲンを用いることにより、ウシ(牛海綿状脳症(BSE))由来、ブタ(***)由来又は鳥(インフルエンザ)由来のコラーゲンを用いた成形体(材料)よりも、再生医療用の足場材料、又は移植用材料として、安全に使用することができる。更に、魚類由来のコラーゲン(特には魚鱗由来のコラーゲン)を用いることにより、線維化していない成形体にも係らず、十分な強度を得ることができるものである。魚類由来のコラーゲンを用いることにより、ウシ又はブタ由来のコラーゲンと比較して、高い強度を得られることについては、十分に解析されているわけではないが、魚類由来コラーゲン(特には、魚鱗由来コラーゲン)は、分子間の相互作用が、ウシやブタ由来のコラーゲンと比較して高いと考えられ、それによって高い強度を得ることができるものと考えられる。しかしながら、本発明はこのような推定によって、限定されるものではない。
本発明のコラーゲン非線維化成形体は、魚類由来コラーゲンを用いたものである。
本発明のコラーゲン非線維化成形体に含まれるコラーゲンは、魚類由来コラーゲンである。前記魚類由来コラーゲンの由来としては、例えば、テラピア、ゴンズイ、ラベオ・ロヒータ、カトラ、コイ、雷魚、ピラルク、タイ、ヒラメ、サメ、及びサケなどを挙げることができるが、後述の変性温度の観点から、水温の高い川、湖沼、又は海に生息する魚類が好ましい。このような魚類として、具体的には、オレオクロミス属の魚類を挙げる事ができ、特にはテラピアが好ましい。オレオクロミス属の魚類からは、変性温度が比較的高いコラーゲンを取得でき、例えば日本や中国で食用として養殖されているナイルテラピア(Oreochromis niloticus)は入手が容易であり、大量のコラーゲンを取得することができる。
なお、本発明のコラーゲン非線維化透明膜においては、コラーゲン溶解液が塩を含まず、線維化を起こすイオン強度及びpHとならないために、非線維化成形体とすることが可能である。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、引張強度が30MPa以上であり、重量法による密度が0.4g/cm3以上である。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の引張強度は30MPa以上であり、好ましくは40MPa以上であり、より好ましくは50MPa以上である。30MPa未満では、生体材料として使用した場合に、十分な強度を得ることができないからである。更に、架橋を行うことにより、本発明のコラーゲン非線維化透明膜の引張強度は、50MPa以上とすることができ、架橋されたコラーゲン非線維化透明膜の引張強度は、好ましくは60MPa以上であり、より好ましくは70MPa以上であり、最も好ましくは80MPa以上である。
また、引張強度の上限は、特に限定されるものではないが、200MPa以下が好ましく、150MPa以下がより好ましく、120MPa以下が最も好ましい。200MPaを超えると、移植した際に周辺組織と結合しないことがある。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、重量法による密度が、好ましくは0.4g/cm3以上であり、より好ましくは0.5g/cm3以上であり、更に好ましくは0.6g/cm3以上であり、最も好ましくは0.8g/cm3以上である。密度が0.4g/cm3未満であると機械的強度が不足するからである。また、密度の上限は、特に限定されるものではないが、1.2g/cm3以下が好ましく、1.15g/cm3以下がより好ましく、1.1g/cm3以下が最も好ましい。1.2g/cm3を超えると、乾燥工程における不純物が混入していることがある。重量法による密度は、コラーゲン非線維化透明膜の重量を体積で割ることによって計算することができる。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の表面粗さは、極めて低いものであるが、好ましくは30nm以下であり、より好ましくは20nm以下であり、最も好ましくは10nm以下である。30nmを超えると、コラーゲン分子だけではなく線維が混合していることがある。表面粗さが小さいことは、本発明のコラーゲン膜が、コラーゲン線維膜ではなく、コラーゲン分子からなるコラーゲン非線維膜であることを示している。すなわち、本発明のコラーゲン非線維化透明膜の表面が滑らかであるのは、コラーゲン細線維を含まず、表面にコラーゲン線維による凹凸の構造が現れないからである。表面が滑らかであることによって、本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、光を散乱せずに透過性の優れた膜である。
表面粗さは、以下の方法によって測定することができる。市販のカンチレバー及び原子間力顕微鏡を用いて表面粗さを測定できる。測定範囲を4μmとして、一定速度(0.7Hzから1.2Hz)で走査させ、高さ像(立体像)を計測する。更に原子間力顕微鏡に付随しているソフトウェアで面粗さ(表面粗さ)を計算することで得られる。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の透過率(透明度)は、極めて高いものであり、例えば、細胞培養用のポリスチレンのプレートの透過率に近いものである。本発明のコラーゲン非線維化透明膜の透過率は、480〜700nmのいずれかの波長における透過率が90%以上でもよいが、500〜700nmの範囲において90%以上であることが好ましく、480〜700nmの範囲において、90%以上であることが更に好ましい。また、架橋していないコラーゲン非線維化透明膜の透過率は、400〜700nmの範囲において、90%以上であることが最も好ましい。
透過率を測定する膜厚は、特に限定されるものではないが、1μm〜1mmの膜厚の範囲において90%以上の透過率を示す。
透過率は、以下の方法によって測定することができる。コラーゲン非線維化透明膜を細胞培養皿(ポリスチレンディッシュ)に貼り付け、例えばパワースキャンHT(DSファーマバイオメディカル)により波長300〜700nmの範囲でスキャンを行うことによって測定することができる。透過率は、吸光度(O.D.)から次の式、透過率=1/10^O.D.×100で算出することができる。
図4に示されるように、本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン細線維を含まないものであり、線維化されていないコラーゲン膜である。また、図5に示されているように、本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン分子(トポコラーゲン)を含み、表面の平滑性が高い膜である。本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン分子が緻密に絡まりあっているため引張強度(30MPa以上)が高く、後述の架橋を行うことにより、更に強度を向上させることが可能である。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、架橋されていてもよい。架橋により力学特性を更に向上させることが可能である。コラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン細線維を含まないため、架橋はコラーゲン分子(3重らせん構造)の間で起ると考えられる。このコラーゲン分子間の架橋により、コラーゲン非線維化透明膜の引張強度は、驚異的に向上する。具体的には、架橋されたコラーゲン非線維化透明膜の引張強度は、70MPa以上であり、好ましくは80MPa以上であり、より好ましくは90MPa以上である。また、架橋されたコラーゲン非線維化透明膜の引張強度の上限は、特に限定されるものではないが、200MPa以下が好ましく、150MPa以下がより好ましく、120MPa以下が最も好ましい。200MPaを超えると、移植した際に周辺組織と結合しないすることがある。
架橋の程度は、架橋度によって特定することができる。架橋度の特定方法は限定されるものではないが、例えば、コラーゲンをグルタルアルデヒドで架橋した場合、アミノ基が架橋に使用されるため、自由アミノ基を測定することにより、架橋度を測定することができる。具体的には、トリニトロベンゼンスルホン酸を用いたTNBS法により、自由アミノ基量を定量することができる。
本発明の架橋されたコラーゲン非線維化透明膜の架橋度は、特に限定されないが、下限は好ましくは5%以上、より好ましくは15%以上であり、最も好ましくは30%以上である。上限は好ましくは90%以下、より好ましくは80%以下、最も好ましくは75%以下である。5%未満であるとコラーゲン素材が酵素により分解されやすく、90%を超えると生体内で分解が殆んどされなくなるからである。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜は膨潤率が高く、ダルベッコスリン酸緩衝溶液―(カルシウム、マグネシウムを含まない)に対しても耐性を有するものである。
本発明のコラーゲン線維膜の膨潤率は、特に限定されないが、上限は好ましくは600%以下、より好ましくは500%以下である。なお、下限は100%以上であり、本明細書で膨潤率100%は、全く膨潤しないことを意味する。600%を超えるとコラーゲンが分散してしまうからである。
本発明のコラーゲン非線維化多孔体は、気孔率80%以上であり、より好ましくは85%以上であり、最も好ましくは90%以上である。気孔率が80%以上であると、多孔体内部への細胞や組織の侵入性に優れているからである。本発明のコラーゲン非線維化多孔体は、線維化せずに、高い気孔率を達成することができることから、細胞培養基材、再生医療用の足場材料(例えば、軟骨・骨・靭帯・角膜実質・皮膚・肝臓組織の再生材料)、移植用材料(創傷被覆材料、骨補填剤、止血材料、癒着防止材など)又は薬物送達担体などに用いることができる。
本発明のコラーゲン非線維化多孔体は、適当な水浸透性を有することが好ましい。この水浸透性は、細胞培養を行う際に、多孔体の中にまで細胞が侵入できるかどうかの目安として重要であるからである。後述の実施例に示すように、GA架橋コラーゲン多孔体(c)は、未架橋(a)及び熱脱水架橋(b)を行った多孔体と比較して吸水性がよく、細胞培養用の用途としては好ましい。
本発明のコラーゲン非線維化多孔体の弾性値は、特に限定されるものではないが、2.0kPa〜10MPaが好ましく、20kPa〜2MPaがより好ましい。2.0kPa〜10MPaであることによって、細胞を播種した際に多孔体内部への侵入性及び操作性に優れているからである。
本発明のコラーゲン非線維化多孔体の粘性値は、特に限定されるものではないが、1.0〜500kPaが好ましく、1.5〜100kPaがより好ましい。1.0〜500kPaであることによって、細胞を播種した際に内部への侵入性及び操作性に優れているからである。
本発明の多孔体の平均孔径は、特に限定されるものではないが、50〜500μmが好ましく、80〜300μmがより好ましい。50〜500μmであることによって、細胞や組織が材料内部に侵入しやすく、細胞培養基材や移植材料として最適であるからである。
多孔体の平均孔径は、水銀圧入法又は走査型電子顕微鏡観察によって、測定することができる。以下に走査型電子顕微鏡観察による平均孔径の測定法を記載する。作製した多孔体を任意の高さで断面を作製し、帯電防止のため、白金などによるコーティング(20nm以下)を行う。観察の際には、加速電圧10kV以下で行う。倍率は、1000倍以下が好ましく、100個以上の孔径を計測する。これにより、孔径の分布を計算し、その平均値を求めることで平均孔径を測定することが可能である。
本発明のコラーゲン成形体の製造方法は、(1)二酸化炭素及びコラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程(以下、コラーゲン酸性溶液調製工程と称する)及び(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程(以下、コラーゲン成形工程と称する)を含む。本発明のコラーゲン成形体の製造方法においては、前記コラーゲン酸性溶液を使用することを除けば、基本的には、従来のコラーゲン成形体の製造方法に従って、コラーゲン成形体を製造することができる。
本発明のコラーゲン成形体の製造方法に用いるコラーゲンは、特に限定されるものではなく、前記「[1]コラーゲン非線維化成形体」の欄に記載のコラーゲンを用いることができる。
コラーゲン酸性溶液は、例えば、水性溶媒に二酸化炭素をバブリングする方法、又は水性溶媒にドライアイスを投入する方法によって作製することができる。二酸化炭素の溶解量は、特に限定されないが、コラーゲンを溶解させるためには、溶媒のpHを2〜4とすることが好ましい。従って、pH4以下になるように、二酸化炭素を溶解させることが望ましい。
本発明のコラーゲン成形体の製造方法によって製造される成形体は、コラーゲンを含むものであれば、特に限定されるものではないが、コラーゲン膜、又はコラーゲン多孔体、を挙げることができる。コラーゲン成形体の形状も特に限定されるものではなく、例えば、フィルム状、シート状、又はスポンジ状の形態のものを挙げることができる。
コラーゲン酸性溶液調整工程は、例えば、(1)溶媒に二酸化炭素を溶解することによって二酸化炭素酸性溶液を調整し、その二酸化炭素酸性溶液にコラーゲンを溶解してもよい。また、(2)溶媒に二酸化炭素及びコラーゲンを同時に溶解させて、コラーゲン酸性溶液を製造してもよい。
コラーゲン成形工程においては、前記のコラーゲン酸性溶液を成形槽に注入し、乾燥させることによって、線維化を起こさずに、コラーゲン成形体を得ることもできる。
乾燥工程において、成形体からの溶媒の除去、及び乾燥を行う。この乾燥工程によって、成形体の密度が上昇し、機械的強度を向上させることができる。
特に、コラーゲン多孔体を乾燥させる方法としては、コラーゲンの3重らせん構造が破壊される変性温度以上の温度を使用しない限り、限定されるものではなく、例えば凍結乾燥法、キャスト法、風乾法、及び自然乾燥法を用いることができる。凍結乾燥法を用いる場合、得られたコラーゲンゲルを、0℃からマイナス80℃程度まで急速、一定速度、又は段階的に凍結し、凍結したコラーゲンゲルを、真空状態で水分を昇華させることによって、乾燥したコラーゲン多孔体を得ることができる。
本発明のコラーゲン成形体の製造方法は、更にコラーゲン成形体を架橋する工程を含むことができる。架橋は、コラーゲン分子間で起こってもよい。
以下に、本発明のコラーゲン非線維化成形体の1つであるコラーゲン非線維化透明膜の製造方法に述べる。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法は、(1)酸性溶液に、コラーゲンを溶解させる工程、(以下、コラーゲン溶解工程と称する)(2)コラーゲン溶液を成形槽に注入し、コラーゲン成形膜を得る工程(以下、コラーゲン成形工程と称する)、(3)前記コラーゲン成形膜を乾燥させる工程(以下、脱水・乾燥工程と称する)を含む。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法によって、本発明のコラーゲン非線維化透明膜を製造することができる。しかしながら、本発明のコラーゲン非線維化透明膜は、本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法以外の方法によっても製造することが可能である。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法に用いるコラーゲンとしては、前記の「[1]コラーゲン非線維化成形体」の項に記載のコラーゲンを用いることができる。
コラーゲン溶解工程においては、酸性溶液に、コラーゲンを溶解させる。
本明細書において、水性溶媒は水と有機溶媒とを混合した溶媒を意味する。有機溶媒としては水と混和し、コラーゲンを溶解することができれば、限定されるものではないが、好ましくは低級アルコールであり、例えば炭素数1〜4の低級アルコール(すなわち、メタノール、エタノール、n−プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、n−ブチルアルコール、イソブチルアルコール、sec−ブチルアルコール、又はtert−ブチルアルコール)を用いることができる。このような低級アルコールは、製造にかかるコストが、比較的低廉である。
コラーゲン酸性溶液は、例えば、水性溶媒に二酸化炭素をバブリングする方法、又は水性溶媒にドライアイスを投入する方法によって作製することができる。二酸化炭素の溶解量は、特に限定されないが、コラーゲンを溶解させるためには、溶媒のpHを2〜4とすることが好ましい。従って、pH4以下になるように、二酸化炭素を溶解させることが望ましい。
このように調整された酸性溶液に、前記コラーゲンを溶解させ、可溶化コラーゲン溶液を得ることができる。酸性溶液は、高濃度のコラーゲンを溶解することができ、例えば5%以上の高粘度の可溶化コラーゲン溶液を得ることができる。
コラーゲン成形工程においては、前記の可溶性コラーゲン溶液を成形槽に注入し、コラーゲン成形膜を得る。
脱水・乾燥工程において、コラーゲン成形膜からの水性溶媒の除去、及び乾燥を行う。この脱水・乾燥工程によって、コラーゲン分子の密度が上昇し、機械的強度を向上させることができる。
脱水及び乾燥は、ゲルの上面から水性溶媒を蒸発させることによって、行うことができる。また、ゲルの上面及び下面を、水性溶媒が通過しない平滑なプレートなど覆い、側面からのみ徐々に脱水させることにより行うことができる。また、平滑なプレートで覆うことによって、得られるコラーゲン成形膜の膜厚を均一にすることができ、機械的強度を上昇させることが可能である。プレートは、特に限定されるものではないが、ポリスチレン、シリコーン、ポリエステル、ポリアミド、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリメタクリル酸メチル又はガラスを挙げることができるが、得られたコラーゲン成形膜との解離性がよいことから、ポリスチレンが好ましい。
脱水及び乾燥の時間は、水性溶媒が90%以上除去される時間であれば、特に限定されないが、3時間〜14日が好ましく、5時間〜7日がより好ましく、12時間〜3日が最も好ましい。
本発明のコラーゲン非線維化透明膜の製造方法は、更にコラーゲン非線維化透明膜を架橋する工程を含むことができる。コラーゲン非線維化透明膜は、コラーゲン細線維を含まないため、架橋は、コラーゲン非線維化透明膜内の、コラーゲン分子(トポコラーゲン)の間で起こると考えられる。
テラピアの鱗からのコラーゲンの製造方法を以下に記載する。
テラピアの鱗を水で十分洗浄し、更に10%塩化ナトリウム溶液で十分洗浄し、鰭などの夾雑物を除去した後、室温にて乾燥した。含水率は18.5%であった。
このテラピア鱗1kgをpH2の塩酸溶液9kgに分散し、1Mの塩酸溶液を添加しながらpHを2に保った状態で、25℃、2時間穏やかに攪拌し、鱗に含まれる無機成分を溶かしだした。これをザルにあげて、十分水洗した後、総重量が4kgとなるようにpH2の塩酸溶液を添加した。
本実施例では、1mmの高さのコラーゲン水溶液から、コラーゲン非線維化透明膜を作製した。
二酸化炭素(炭酸ガス)を蒸留水にバブリングし、pH3.0の酸性溶液を調整した。この酸性溶液に、製造例1で得た凍結乾燥されたコラーゲンを1重量%になるように溶解させ、コラーゲン溶液を得た。シリコーン板(1mm厚さ)に直径18mmの円筒形の穴をあけ、下面をシリコーン板で被覆し、成形槽とした。前記の1重量%のコラーゲン溶液を、円筒形の穴に1mmの高さまで滴下し、28度で一晩乾燥させた。乾燥前のコラーゲン成形膜の体積は0.254cm3であり、含まれるコラーゲンの重量は2.54mgである。乾燥させたコラーゲン非線維化透明膜は厚さ8.7±0.4μmであり、従って得られたコラーゲン非線維化透明膜の密度は、1.034g/cm3である。図1にその外観を示す。
本実施例では、1mmの高さのコラーゲン水溶液から、架橋されたコラーゲン非線維化透明膜を作製した。
実施例1で得られたコラーゲン非線維化透明膜及び25%のグルタルアルデヒドをデシケータに入れた。デシケータを真空状態にし、グルタルアルデヒドを蒸発させた。37度にて、24時間静置することで、コラーゲン非線維化透明膜に化学架橋を導入した。
前記実施例1及び2で得られたコラーゲン非線維化透明膜及び架橋されたコラーゲン非線維化透明膜の透過率を測定した。ピンセットでそれぞれのコラーゲン非線維化透明膜を細胞培養皿(ポリスチレンディッシュ)に貼り付け、パワースキャンHT(DSファーマバイオメディカル)により波長300〜700nmの範囲でスキャンを行った。
結果を図2に示す。実施例1のコラーゲン非線維化透明膜は、細胞培養皿と同等の透明性を示すことが分かる。また、実施例2の架橋されたコラーゲン非線維化透明膜は、480m以下でグルタルアルデヒドによる透明度の低下が認められるものの、480nm以上では90%以上の透過率を示した。透過率は、吸光度(O.D.)から次の式、透過率=1/10^O.D.×100で算出した。この際に、ポリスチレンディッシュの吸光度を引き算してコラーゲン透明膜の透過率とした。
引張強度試験を行った。
シリコーン製の成形槽(直径18mm、高さ5mm)に代えて、ポリスチレン製の成形槽(幅45mm×長さ70mm×高さ1mm)を用いたことを除いては、実施例1及び2の操作を繰り返し、コラーゲン非線維化透明膜及び架橋されたコラーゲン非線維化透明膜を得た。
引張強度試験を行うため、幅10mm、長さ20〜30mmの試験片に加工した。なお、作製した膜の厚さは、マイクロメータにより計測し、いずれも8.7±0.4μmであった。
引張試験は、試験片の両端をガラスに張り付け、引張試験機(Orientec;STA−1150)を用いて行った。測定条件は、ロードセル間の距離を10mmとし、0.5mm/分の速度で行った。測定は、5個の試験片について行い、その平均値を求めた。図3にその結果を示す。
架橋されていないコラーゲン非線維化透明膜は、初期の応力変化が小さく、約2%の歪で立ち上がり、約8%の歪で破断した。また、最大応力は56MPaであった。一方、架橋されたコラーゲン非線維化透明膜は、初期の応力変化が大きく、7%の歪で破断した。最大応力は92MPaと高い値を示した。架橋により強度及びヤング率の両方が向上することが分かった。
実施例1及び2において得られたコラーゲン非線維化透明膜の表面の走査型電子顕微鏡像を、撮影した。それぞれの微鏡像を図4(A)及び図4(B)に示す。写真は、コラーゲン非線維化透明膜に、金を30nmコーティングし、表面を走査型電子顕微鏡により観察したものである。コラーゲン線維は観察されず、また化学架橋を導入した場合も、表面構造の変化は観察されなかった。
更に、実施例1及び2において得られたコラーゲン非線維化透明膜の原子間力顕微鏡像を撮影した。それぞれの微鏡像を図5(A)及び図5(B)に示す。走査型電子顕微鏡では、コラーゲンの構造は観察されなかったが、原子間力顕微鏡ではコラーゲン分子が観察された。
また、原子間力顕微鏡に付属のソフトウェアで面粗さを計算したところ、観測した領域での表面粗さ(RMS)は、それぞれ5.7nm及び4.6nmであり、極めて低いことが分かる。このことから、本発明のコラーゲン膜は、コラーゲン線維膜ではなく、コラーゲン分子からなるコラーゲン非線維膜であることが明らかであった。
酸性溶液のpH3.0をpH3.8としたこと、及び成形膜の厚さを1mmから2.5mmとしたこと以外は、実施例1の操作を繰り返して、コラーゲン非線維化透明膜を得た。
製造例1で得た魚類由来コラーゲンに代えて、ブタ真皮由来I型コラーゲン(新田ゼラチン製の)を用いたこと以外は、実施例3の操作を繰り返して、ブタコラーゲン非線維化透明膜を得た。
実施例3及び比較例1で得られた透明膜の引張強度試験を行うため、作製した膜の厚さをマイクロメータにより計測した。いずれも、25±5μmであった。引張強度は、試験片の両端を治具で挟み、引張試験器(Orientec;STA−1150)を用いて行った。測定条件は、ロードセル間の距離を10mmとし、0.5mm/分の速度で行った。測定は5個の試験片について行い、その平均値を求めた。
鱗コラーゲンで作製した膜の引張強度は、ブタ真皮コラーゲンで作製したものと比較して1.32倍の強度を示した。図6に原子間力顕微鏡による作製した魚鱗コラーゲン(A)及びブタ真皮コラーゲン(B)の透明膜の形態を示す。いずれも組織に大きな変化は観測されなかったが、鱗コラーゲンの方が小さなドメインより形成されていることが分かる。
本実施例では、実施例1で得られた非線維化コラーゲン透明膜に対し、時間を変化させて化学架橋(グルタルアルデヒド架橋)を行った。
10%のグルタルアルデヒド溶液(20mL)と作製した透明膜(網の上)をデシケータ―中におき、減圧させ、37度の乾燥機中に静置した。15分(実施例4)、30分(実施例5)、1時間(実施例6)、2時間(実施例7)、3時間(実施例8)処理した試料を作製した。これにより、グルタルアルデヒドは気化し、コラーゲン非線維化透明膜のコラーゲン同士を架橋させることができる。処理時間が長くなるにつれ、褐色に変化した。
得られた架橋非線維化コラーゲン透明膜の架橋度を測定した。架橋度は、トリニトロベンゼンスルホン酸を用いたTNBS法により、自由アミノ基量を定量することで行った。
実施例4〜8の作製したコラーゲン透明膜を10mg秤量し、1.0mLの炭酸水素ナトリウム(4重量体積%)/TNBS(0.5重量体積%)を加え、40℃で2時間処理した。更に、3mLの塩酸(6N)を加え、20から40分間80℃の浴槽で処理した。加水分解させた後、15mLの精製水を加え、1mLを分注し、室温まで冷却し、5mLの精製水で希釈した。345nmの波長で吸光度を計測した。自由アミノ基量(Ag−col;mol)/コラーゲン量(g)=(4×吸光度)/(1.46×106(L/mol・cm)・セルの長さ(cm))から算出した。何も処理しないコラーゲンを用いてTNBS法により自由アミノ基量(Acol)を計測した。架橋度(D;%)は(1−Ag−col/Acol)×100により計算した。架橋処理時間と架橋度の関係を図7Aに示す。図に示したように、架橋度は処理時間とともに直線的に上昇した。
得られた非線維化コラーゲン透明膜の膨潤率を測定した。膨潤率の測定は、以下のように行った。
実施例4〜8の作製したコラーゲン線維膜を、1時間、2時間、4時間、又は8時間、38℃でダルベッコスPBS―に浸漬し、その後溶液から取り出し、キムワイプで周りの水分を除去した重量変化から計測した。ここで、膨潤率(%)は(WPBS−WDRY)/WDRY×100の式から算出した。図7Bに浸漬時間による膨潤率の変化を示す。架橋時間が1hまでの透明膜は浸漬4hまで膀潤率が線形的に増加した。架橋時間が2h以降の透明膜では、浸漬1時間後からその膀潤率が変化しなかった。また、架橋度と浸漬4時間後の膨潤率は負の相関がみられた(図7C)。
化学架橋したコラーゲン非線維化透明膜の吸光度は分光光度計(UV−2450型)により波長300nm〜800nm範囲でスキャンした。図8に実施例4〜8の透明膜の測定波長による吸光度の変化を示す。架橋した透明膜では波長300nm〜380nm範囲の吸光度が線形的減少した。一方、波長500nm〜800nm範囲ではその吸光度が変化しなかった。
本実施例では、二酸化炭素が溶解したコラーゲン酸性溶液を用いて、コラーゲン多孔体を製造した。
炭酸ガスを先に蒸留水にバブリングしてpH4.0以下の酸性溶液を調整した。これに、製造例1で得られた凍結乾燥コラーゲンコラーゲンを5重量%になるように溶解させた。これを細胞培養皿(48well)に所定量(高さ約2cmまで)入れて、4℃の冷蔵庫に保管した。その後、ゆっくりと温度を−20℃まで下げて凍結させた。完全に凍結させたのち、凍結乾燥機により乾燥を行った。作製されたコラーゲン多孔体の外観を図9(a)に示す。
得られた多孔体の平均孔径を走査型電子顕微鏡観察により、1000倍の倍率で100個の孔の孔径を測定したところ、150μmであった。
作製したコラーゲン多孔体の上面に蒸留水を一滴滴下し、その水浸透性の試験を行った。浸透性は細胞培養を行う際に、多孔体の中にまで細胞が侵入できるかどうかの目安として重要である。GA架橋コラーゲン多孔体(c)は、滴下後ただちに吸水した(図10A)。一方で、未架橋(a)と熱脱水架橋(b)を行った多孔体は吸水性が悪いことが分かる。
更に10分後に観測した写真を図10Bに示す。図に示すように、GA架橋コラーゲン多孔体(c)及び熱脱水架橋コラーゲン多孔体(b)は、完全に吸水していた。GA架橋コラーゲン多孔体(c)は、下面にまで吸水していた。
炭酸ガスを蒸留水にバブリングしてpH4.0以下の酸性溶液を調整した。これに、製造例1で製造したコラーゲンを1重量%になるように溶解させた。得られたコラーゲン溶液を、直径33mmの細胞培養皿に高さが2mmになるように滴下した。4℃で一晩静置して、表面を平坦にした。更に温度をゆっくりと−20℃まで低下させて、完全に凍結させた後、凍結乾燥機による乾燥を行い、コラーゲン多孔体を得た。
得られた多孔体の平均孔径を査型電子顕微鏡観察により、1000倍の倍率で100個の孔の孔径を測定したところ、100μmであった。
作製したGA架橋コラーゲン多孔体を蒸留水に浸漬させた状態で、粘弾性特性を計測した。計測は線形粘弾性領域の範囲において行った。計測周波数範囲は、0.01Hzから10Hzの範囲で行った。コラーゲン濃度1wt%のGA架橋コラーゲン多孔体は、1Hzにおける弾性値28kPaと粘性値1.5kPaの値を示した(図12A)。
作製したGA架橋コラーゲン多孔体の走査型電子顕微鏡像を図11(A)に示す。構造を観察した部位は、多孔体の中央部分で切断して行った。孔径が100μm以上の大きさを示しており、細胞培養基材や移植材料として最適な大きさであることが分かる。
コラーゲン濃度を1重量%に代えて、5重量%としたこと以外は、実施例9の操作を繰り返し、コラーゲン多孔体、熱脱水架橋コラーゲン多孔体、及びGA架橋コラーゲン多孔体を得た。
作製したGA架橋コラーゲン多孔体を蒸留水に浸漬させた状態で、粘弾性特性を計測した。計測は線形粘弾性領域の範囲において行った。計測周波数範囲は、0.01Hzから10Hzの範囲で行った。コラーゲン濃度5wt%のGA架橋コラーゲン多孔体は、1Hzにおける弾性値592kPaと粘性値24.7kPaの値を示した(図12B)。
作製したGA架橋コラーゲン多孔体の走査型電子顕微鏡像を図11(B)に示す。構造を観察した部位は、多孔体の中央部分で切断して行った。孔径が100μm以上の大きさを示しており、細胞培養基材や移植材料として最適な大きさであることが分かる。1重量%の濃度から、コラーゲン濃度を5重量%、にしても多孔構造が維持されることが分かる。また、コラーゲン濃度を高くすることで孔径が小さくなっている。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変形や改良は本発明の範囲に含まれる。
Claims (15)
- 魚類由来コラーゲンを用いるコラーゲン非線維化成形体であって、前記魚類由来コラーゲンがトロポコラーゲン及びナノ線維を形成し、そしてコラーゲン細線維を形成していないことを特徴とする、前記コラーゲン非線維化成形体。
- 前記魚類由来コラーゲンが、魚鱗由来コラーゲンである、請求項1に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- 前記非線維化成形体が、重量法による密度が0.4g/cm3以上であり、且つ引張強度が30MPa以上である非線維化透明膜であって、前記引張強度は、幅10mmの試験片を10mmの距離に固定し、速度0.5mm/分で引っ張った場合の、破断時の伸び(%)及び応力(g)並びに試験片の厚みから計算されるものである、請求項1又は2に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- カンチレバー及び原子間力顕微鏡を用い、4μmの測定範囲を0.7Hzの速度で走査することによって得られる高さ像から計算される表面粗さが30nm以下である、請求項3に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- 500nm〜700nmの範囲の波長の光を90%以上透過する、請求項3又は4に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- コラーゲンが架橋されており、引張強度が50MPa以上である、請求項3〜5のいずれか一項に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- 前記非線維化成形体が、気孔率80%以上の非線維化多孔体である、請求項1又は2に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- 多孔体の平均孔径が80μm以上である、請求項7に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- コラーゲンが架橋されている、請求項7又は8に記載のコラーゲン非線維化成形体。
- (1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、及び
(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、
を含む、前記魚類由来コラーゲンがトロポコラーゲン及びナノ線維を形成し、そしてコラーゲン細線維を形成していないコラーゲン非線維化成形体の製造方法。 - (1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、及び
(3)前記コラーゲン成形体を乾燥する工程、
を含む、請求項10に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法。 - (1)二酸化炭素及び魚類由来コラーゲンを含む、コラーゲン酸性溶液を調製する工程、(2)コラーゲンを成形し、コラーゲン成形体を得る工程、
(3)前記コラーゲン成形体を乾燥する工程、及び
(4)乾燥したコラーゲン成形体を架橋する工程
を含む、請求項10又は11に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法。 - 前記魚類由来コラーゲンが、魚鱗由来コラーゲンである、請求項10〜12のいずれか一項に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法。
- 前記コラーゲン成形体が、コラーゲン非線維化透明膜である、請求項10〜13のいずれか一項に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法。
- 前記コラーゲン成形体が非線維化多孔体である、請求項10〜13のいずれか一項に記載のコラーゲン非線維化成形体の製造方法。
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9315562B2 (en) * | 2010-11-26 | 2016-04-19 | Tokyo Institute Of Technology | High-strength collagen fiber membrane and a manufacturing method thereof |
US20140066379A1 (en) * | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Body Organ Biomedical Corp. | Recombinant vector, transgenic fish egg using the same and biomaterial using the same |
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JP5633880B2 (ja) * | 2013-05-07 | 2014-12-03 | 国立大学法人東京工業大学 | コラーゲン成形体及びその製造方法 |
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WO2016049625A1 (en) * | 2014-09-26 | 2016-03-31 | University Of South Carolina | Novel biofabrication techniques for the implementation of intrinsic tissue geometries to an in vitro collagen hydrogel |
US9238090B1 (en) | 2014-12-24 | 2016-01-19 | Fettech, Llc | Tissue-based compositions |
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WO2016178586A2 (en) * | 2015-05-01 | 2016-11-10 | Auckland Uniservices Limited | Collagen compositions and preparation and uses thereof |
PL3305339T3 (pl) * | 2015-06-03 | 2021-09-27 | Sewon Cellontech Co., Ltd | Sposób wytwarzania filmu kolagenowego z użyciem światła nadfioletowego, film kolagenowy wytworzony z jego użyciem oraz biomateriał wytworzony z użyciem filmu kolagenowego |
BR102015021435B1 (pt) | 2015-09-03 | 2023-10-10 | Marcelo José Borges De Miranda | Processo de beneficiamento da pele da tilápia e seu uso na cobertura de lesões cutâneas |
CN105169478A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-23 | 深圳爱生再生医学科技有限公司 | 3d复合细胞支架及其制备方法 |
CN108314791A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-07-24 | 西南大学 | 一种制备糙面丝素膜的方法及其产品和应用 |
CN108752619A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-11-06 | 广东医科大学 | 一种提高胶原蛋白海绵机械性能的简易方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003534858A (ja) * | 2000-05-26 | 2003-11-25 | コレティカ | 組織工学用にデザインされた担体を製造するための水生動物起源のコラーゲンの使用並びにそれにより得られる担体及び生体材料 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3368911A (en) * | 1965-03-25 | 1968-02-13 | Ethicon Inc | Collagen-carbonic acid surgical sponge |
US3393080A (en) * | 1965-10-20 | 1968-07-16 | Fmc Corp | Microcrystalline colloidal collagen dispersions in dispersing media containing dimethyl sulfoxide and water-miscible organic solvents |
TW501934B (en) * | 1996-11-20 | 2002-09-11 | Tapic Int Co Ltd | Collagen material and process for making the same |
WO2005079879A1 (ja) * | 2004-02-25 | 2005-09-01 | Ihara & Company Ltd. | コラーゲンゲルおよびその製造方法 |
JP4463702B2 (ja) | 2004-04-28 | 2010-05-19 | 井原水産株式会社 | 伸縮性コラーゲン成形体、その製造方法および用途 |
EP1791499A4 (en) * | 2004-08-13 | 2011-08-17 | Ottawa Health Research Inst | OPHTHALMIC DEVICES ENHANCING VISION AND METHODS AND COMPOSITIONS THEREFOR |
JP2006257013A (ja) * | 2005-03-16 | 2006-09-28 | National Institute For Materials Science | 魚鱗由来コラーゲンゲルとその作成方法 |
JP4863433B2 (ja) * | 2005-03-16 | 2012-01-25 | 独立行政法人物質・材料研究機構 | 魚鱗由来コラーゲンの取得方法 |
KR100700324B1 (ko) * | 2005-11-07 | 2007-03-29 | 주식회사 웰스킨 | 자극시스템을 이용한 다공성 및 인장 강도가 높은 콜라겐지지체 배양방법 |
US8357774B2 (en) * | 2007-09-13 | 2013-01-22 | National University Corporation NARA Institute of Science and Technology | Polypeptide and process for producing the same |
WO2009156866A2 (en) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | Sofradim Production | Biosynthetic implant for soft tissue repair |
US7964704B2 (en) * | 2009-07-27 | 2011-06-21 | Life Fusion, Llc | Preparation of high purity collagen |
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Patent Citations (1)
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JP2003534858A (ja) * | 2000-05-26 | 2003-11-25 | コレティカ | 組織工学用にデザインされた担体を製造するための水生動物起源のコラーゲンの使用並びにそれにより得られる担体及び生体材料 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
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JPN6011065770; 小川展弘 他: 'うろこI型コラーゲンを用いた細胞培養用膜材料の創出' 第32回日本バイオマテリアル学会大会 予稿集 , 20101129, p.380 * |
JPN6011065771; 松本令奈 他: '魚ウロココラーゲンコートディッシュを用いたヒト間葉系幹細胞の分化過程の研究' 第32回日本バイオマテリアル学会大会 予稿集 , 20101129, p.129 * |
JPN6011065773; 植村寿公 他: '魚ウロココラーゲンを用いた細胞培養' 再生医療 vol.10 suppl., 20110201, p.262 * |
JPN6015043729; Acta Biomaterialia vol.7, 20100917, p.644-52 * |
JPN6015043735; Biochem. Biophys. Res. Commun. vol.48, no.2, 1972, p.320-5 * |
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