JP5985394B2 - 酵素を用いた卵殻膜の可溶化方法 - Google Patents
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Description
[1]タンパク質分解酵素と還元剤を併用することを特徴とする、卵殻膜可溶化方法。
[2]還元剤の共存下、卵殻膜にタンパク質分解酵素を作用させる工程を含む、[1]に記載の卵殻膜可溶化方法。
[3]以下の工程(1)及び(2)を含む、[1]に記載の卵殻膜可溶化方法:
(1)溶媒中に卵殻膜を用意する工程、
(2)前記溶媒に還元剤及びタンパク質分解酵素を添加し、反応させる工程。
[4]工程(2)における反応溶液のpHが4.5〜9.5である、[3]に記載の卵殻膜可溶化方法。
[5]前記還元剤の濃度が5mM〜1Mである、[3]又は[4]に記載の卵殻膜可溶化方法。
[6]固形物が認められなくなるまで、前記工程(2)の反応を継続する、[3]〜[5]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[7]以下の工程(3)を更に含む、[3]〜[6]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法:
(3)工程(2)後の溶液を濾過し、固形物を除去する工程。
[8]前記タンパク質分解酵素がアルカリ性プロテアーゼ又は中性プロテアーゼである、[1]〜[7]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[9]前記タンパク質分解酵素が、セリンエンドペプチダーゼ、システインエンドペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ及びアスパラギン酸エンドペプチダーゼからなる群より選択される一種以上の酵素である、[1]〜[7]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[10]前記タンパク質分解酵素がキモトリプシン、サブチリシン、パパイン、バシロライシン、ステムブロメライン、ロイシルアミノペプチダーゼ、ペプシン及びトリプシンからなる群より選択される一種以上の酵素である、[1]〜[7]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[11]前記タンパク質分解酵素がビオソーク、プロレザーFG−F、パパインW40、プロテアーゼN、ブロメラインF、ウマミザイムG、サモアーゼY100、ProteAX、プロテアーゼS、スミチームLP500、デスキンC、プロチンNY10、プロチンPC10、スミチームMP、プロチンAY及びプロテイナーゼK(Proteinase K)からなる群より選択される一種以上の酵素である、[1]〜[7]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[12]前記還元剤が、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、L−システイン、N−アセチル−L−システイン、2−メルカプトエタノール、グルタチオン及びDTTからなる群より選択される一種以上の還元剤である、[1]〜[11]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[13]前記還元剤が亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムである、[1]〜[11]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
[14]以下の工程(1)及び(2’)を含む、[1]に記載の卵殻膜可溶化方法:
(1)溶媒中に卵殻膜を用意する工程、
(2’)前記溶媒に還元剤を添加して反応させた後、還元剤を除去し、次いでタンパク質分解酵素を添加し、反応させる工程。
[15]タンパク質分解酵素と還元剤を組合せてなる、卵殻膜可溶化剤。
[16]タンパク質分解酵素と還元剤を含有することを特徴とする、[15]に記載の卵殻膜可溶化剤。
[17]タンパク質分解酵素を含有する第1構成要素と、還元剤を含有する第2構成要素とからなるキットであることを特徴とする、[15]に記載の卵殻膜可溶化剤。
[18][1]〜[13]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法で得られる、卵殻膜可溶物。
[19]リゾチーム、β−N−アセチルグルコサミニダーゼ、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群より選択される一以上の成分を含む、[18]に記載の卵殻膜可溶物。
[20]抗酸化活性及びアンジオテンシン変換酵素阻害活性からなる群より選択される一以上の活性を示す、[18]に記載の卵殻膜可溶物。
[21][14]に記載の卵殻膜可溶化方法で得られる、卵殻膜可溶物。
[22]リジルオキシダーゼを含む、[21]に記載の卵殻膜可溶物。
[23]卵殻膜の完全な可溶物である、[18]〜[22]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶物
[24][18]〜[23]のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶物を含む組成物。
[25]医薬、医薬部外品、食品又は化粧料である、[24]に記載の組成物。
[26]以下の工程(i)及び(ii)を含む、卵殻膜有用成分抽出方法:
(i)[1]〜[13]のいずれか一項に記載の方法による可溶化工程;
(ii)前記可溶化工程で得られた卵殻膜可溶物を精製する工程。
[27]工程(ii)で精製される成分が、リゾチーム及びβ−N−アセチルグルコサミニダーゼからなる群より選択される酵素、又はヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群より選択される酸性ムコ多糖である、[26]に記載の卵殻膜有用成分抽出方法。
[28][27]に記載の方法で得られるリゾチーム、β−N−アセチルグルコサミニダーゼ、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸又はデルマタン硫酸。
[29]以下の工程(i’)及び(ii)を含む、卵殻膜有用成分抽出方法:
(i’)[14]に記載の方法による可溶化工程;
(ii)前記可溶化工程で得られた卵殻膜可溶物を精製する工程。
[30]工程(ii)で精製される成分がリジルオキシダーゼである、[29]に記載の卵殻膜有用成分抽出方法。
[31][30]に記載の方法で得られるリジルオキシダーゼ。
[32][26]又は[29]に記載の卵殻膜有用成分抽出方法で得られる卵殻膜抽出物。
本発明の第一の局面は卵殻膜の可溶化方法に関する。本発明の方法によれば、茶褐色の着色やアミノ酸分解による異臭発生の問題を回避しつつ、卵殻膜を効率的に可溶化できる。また、前処理を行わなくとも高い可溶化(分解)率を達成できる。
(1)溶媒中に卵殻膜を用意する工程
(2)前記溶媒に還元剤及びタンパク質分解酵素を添加し、反応させる工程
(1)溶媒中に卵殻膜を用意する工程
(2’)前記溶媒に還元剤を添加して反応させた後、還元剤を除去し、次いでタンパク質分解酵素を添加し、反応させる工程
本発明の第2の局面は卵殻膜可溶化剤に関する。本発明の卵殻膜可溶化剤はタンパク質分解酵素と還元剤を組合せてなる点に特徴を有する。換言すれば、本発明の卵殻膜可溶化剤ではタンパク質分解酵素と還元剤を併用する。典型的には、タンパク質分解酵素と還元剤とを混合した配合剤として本発明の卵殻膜可溶化剤が提供されることになる。一方、例えば、タンパク質分解酵素を含有する要素(第1構成要素)と、還元剤を含有する要素(第2構成要素)とからなるキットの形態で本発明の卵殻膜可溶化剤を提供することもできる。2種類以上のタンパク質分解酵素を併用してもよい。同様に2種類以上の還元剤を併用してもよい。尚、タンパク質分解酵素と還元剤については、本発明の卵殻膜可溶化方法の場合と同様であるため、重複する説明は省略する。
本発明の更なる局面は本発明の卵殻膜可溶化方法で得られる卵殻膜可溶物を提供する。好ましい一態様として、卵殻膜の完全な可溶物が提供される。本発明の卵殻膜可溶化方法によれば、温和な条件で卵殻膜を可溶化することができる。従って、当該方法により得られる卵殻膜可溶物は、卵殻膜に含まれる有用成分(タンパク質(リジルオキシダーゼ、リゾチーム、β−N−アセチルグルコサミニダーゼ等の酵素、コラーゲンタンパク質を含む)、糖タンパク質、ペプチド(コラーゲンペプチドを含む)、糖ペプチド、アミノ酸、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸等の酸性ムコ多糖等)を多く含有する。一態様では、本発明の方法により得られる卵殻膜可溶物は、リゾチーム、β−N−アセチルグルコサミニダーゼ、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群より選択される一以上の成分を含む。また、本発明の方法により得られる卵殻膜可溶物を、抗酸化活性を示すこと及び/又はアンジオテンシン変換酵素阻害活性を示すことによって特徴付けることもできる。一方、他の一態様の卵殻膜可溶物はリジルオキシダーゼを含む点が特徴的である。リジルオキシダーゼを含む当該卵殻膜可溶物は、典型的には、上記工程(1)及び(2’)を含む卵殻膜可溶化方法によって得られる。
本発明は更に、本発明の卵殻膜可溶化方法を応用した卵殻膜有用成分抽出方法を提供する。本発明の卵殻膜有用成分抽出方法では、以下の工程(i)及び(ii)を行う。
(i)本発明の卵殻膜可溶化方法による可溶化工程
(ii)前記可溶化ステップで得られた卵殻膜可溶物を精製する工程
鶏卵を割卵して卵液を取り出した後、卵殻膜付きの卵殻を4重量%酢酸水溶液に5〜10分程度浸漬させ、手で卵殻膜を剥がして採取した。剥がし取った卵殻膜を水洗いし、十分に水気を切ったものを使用した。
酵素剤単独では卵殻膜の可溶化は見られなかったため、還元剤との組み合わせによる効果を検証した。本試験では対象酵素剤としてビオソークおよびプロレザーFG-Fを用いた。緩衝液として100 mM Glycine-NaOH pH 9.0を用い、10 mM DTTを添加した、または添加していない条件にて可溶化を試みた。酵素量は0.1% (w/v)、卵殻膜量は1.0% (w/v)、反応温度は60℃でインキュベーションした。図2は、試験酵素剤としてビオソークを用いた場合の結果を示している。図2が示すように、DTT単独および酵素剤単独では卵殻膜の可溶化は見られないが、DTTと酵素剤が共存する条件下では1.5時間という短時間での可溶化が見られた。また、プロレザーFG-Fを用いた場合も同様の結果が得られたが、完全可溶化に要する時間はビオソークよりも長かった(約2時間)。卵殻膜を構成する蛋白質中に存在するジスルフィド結合を還元剤が開裂させた結果、可溶化を容易にしたと考えられる。また、セリンプロテアーゼ阻害剤であるPMSFによって可溶化が阻害されたことから、当試験での卵殻膜の可溶化はプロテアーゼによるものであると考えられる。
安全性とコスト面を考慮し、食品添加物から卵殻膜の可溶化を可能にする還元剤を探索した。まず、ビオソークを試験酵素剤として用い、10種の還元剤(亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、L−アスコルビン酸、L−システイン塩酸塩、亜硝酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、L−システイン、グルタチオン、DTT、水素化ホウ素ナトリウム、ハイチオンエキスYH-8、ハイチオンエキスYH-15、ハイチオンエキスYH-D12)を各々添加し、可溶化を試みた。亜硫酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、L−アスコルビン酸、亜硝酸ナトリウム、硝酸ナトリウム、DTT、水素化ホウ素ナトリウムの濃度は1、10、100 mMを試験した。L−システイン塩酸塩、L−システイン、グルタチオンの濃度は1、10、20、50 mMを試験した。ハイチオンエキスYH-8、ハイチオンエキスYH-15、ハイチオンエキスYH-D12の濃度は1、5、10% (w/v)を試験した。緩衝液のpH条件は4.0〜13.0でそれぞれ行い、前述と同じものを用いた。酵素量は0.1% または0.5% (w/v)、卵殻膜量は1.0% (w/v)、反応温度は60℃とし、6時間または12時間インキュベーションした。亜硫酸ナトリウム存在下におけるpH変化による分解能の比較では、亜硫酸ナトリウムの濃度を100mMとし、pH 4.0〜13.0の各緩衝液(100 mM)を用いて試験を行った。ビオソークおよびプロレザーFG-Fを用いた試験においては、pH 4.0〜5.5はNaOAcバッファー、pH 5.5〜6.5はMES-NaOHバッファー、pH 6.5〜7.5はHEPES-NaOHバッファー、pH 7.5〜9.0はTris-HClバッファー、pH 9.0〜12.5はGlycine-NaOHバッファー、pH 12.5〜13.0はKCl-NaOHバッファーを用いた。他の13種類の酵素剤を用いた試験では、NaOAcバッファー(pH 4.0、5.0)、MES-NaOHバッファー(pH 6.0)、HEPES-NaOHバッファー(pH 7.0)、Tris-HClバッファー(pH 8.0)、Glycine-NaOHバッファー(pH 9.0)を用いて行った。酵素量は0.1% (w/v)、卵殻膜量は1.0% (w/v)、反応温度は60℃でインキュベーションを行い、完全な可溶化に要する時間を測定した。分解パターンの確認では、ビオソークおよびプロレザーFG-Fを対象酵素剤とし、各pH条件にて反応後の溶液にPMSFを終濃度1 mMとなるように添加することで反応を停止し、各サンプルをSDS-PAGEに供した。図3は、試験した還元剤の種類と添加による卵殻膜可溶化(分解)の有無を示している。食品添加物では亜硫酸塩と亜硫酸水素塩が100 mMの濃度条件で顕著な効果を示した。亜硫酸ナトリウムを用いた場合、卵殻膜の可溶化はpH 6.0〜8.0において効率よく見られた。L-システインを使用した場合、一部可溶化を認めた。
卵殻膜可溶化において、至適な亜硫酸ナトリウム濃度の探索を行った。本試験では対象酵素剤としてビオソークおよびプロレザーFG-Fを用いた。緩衝液として50 mM Tris-HCl pH 7.0を用い、10〜1000 mM 亜硫酸ナトリウムを添加した、または添加していない条件にて可溶化を試みた。酵素量は0.1% (w/v)、卵殻膜量は1.0% (w/v)、反応温度は60℃でインキュベーションを行い、完全な可溶化に要する時間を測定した。図6に示すように、ビオソーク、プロレザーFG-Fともに至適な亜硫酸ナトリウム濃度は200 mMであった。一方で、10〜1000 mMの広い濃度条件下で可溶化可能であることも確認できた。尚、ビオソーク及びプロレザーFG-Fを用いた場合の卵殻膜の可溶化の結果をそれぞれ図7及び図8に示す。
卵殻膜可溶化において、至適な酵素濃度の探索を行った。本試験では対象酵素剤としてビオソークを用いた。緩衝液として50 mM Tris-HCl pH 7.0を用い、200 mM 亜硫酸ナトリウムを添加した条件にて可溶化を試みた。酵素量は0.01、0.1、1.0% (w/v)、卵殻膜量は10% (w/v)、反応温度は60℃でインキュベーションを行い、完全な可溶化に要する時間を測定した。また、本試験からインキュベーション中に撹拌することにした。表3に示すように、ビオソークを用いた場合、1.0%濃度では45分、0.1%濃度では60分で完全に可溶化することが分かった。一方、0.01%濃度では可溶化は見られなかった。本試験から卵殻膜量を10% (w/v)としているにもかかわらず、可溶化時間は1% (w/v)のときよりも短縮された。おそらく撹拌の影響が大きいと考えられる。用いる酵素量に関して、1.0%と0.1%ではそれほど大きな違いはないといえる。コスト面を考慮した場合、0.1%での使用がより効率的と思われる。
卵殻膜の量を変化させ、どこまでの量を可溶化可能か検証した。本試験では対象酵素剤としてビオソークを用いた。緩衝液として50 mM Tris-HCl pH 7.0を用い、200 mM 亜硫酸ナトリウムを添加した条件にて可溶化を試みた。酵素量は0.1 (w/v)、卵殻膜量は10〜50% (w/v)、反応温度は60℃でインキュベーションを行い、完全な可溶化に要する時間を測定した。また、本試験でもインキュベーション中に撹拌した。図9左に示すように、10〜50%の卵殻膜量であっても完全に可溶化することが可能であった。また図9右には、卵殻膜量に伴う可溶化時間のグラフを示す。横軸は卵殻膜量、縦軸は可溶化に要した時間を示しており、各卵殻膜量で完全可溶化に要する時間をプロットしている。10〜40%の卵殻膜量ではプロットが直線にのることから、同効率で分解反応が進んでいることを示している。
15種類の市販酵素剤のうち10種類の酵素剤において、還元剤、特に亜硫酸ナトリウムの共存下で卵殻膜の可溶化が見られた。これら10種類の酵素剤の中には中性およびアルカリ性プロテアーゼが含まれていた。本実験では酸性プロテアーゼによる卵殻膜の分解能を実証することを目的とし、複数の酸性プロテアーゼを用いて分解能の有無を検証した。また、新たな中性およびアルカリ性プロテアーゼを用いた実験も並行して行った。
(1)酸性プロテアーゼ:スミチームAP(Aspergillus niger由来酸性プロテアーゼ、新日本化学)、ペプシン(Sigma)
(2)中性プロテアーゼ:スミチームFP(Aspergillus oryzae由来中性プロテアーゼ、新日本化学)、スミチームLP500(Aspergillus oryzae由来中性プロテアーゼ、新日本化学)、スミチームLPL(Aspergillus oryzae由来中性プロテアーゼ、新日本化学)、デスキンC(由来は不明、中性プロテアーゼ、大和化成)、プロチンNY10(Bucillus subtilis由来中性プロテアーゼ、大和化成)、プロチンPC10(Bucillus subtilis由来中性プロテアーゼ、大和化成)、トリプシン(Trypsin)(Roche)
(3)アルカリ性プロテアーゼ:スミチームMP(Aspergillus sp.由来アルカリ性プロテアーゼ、新日本化学)、プロチンAY(Bucillus licheniformis由来アルカリ性プロテアーゼ、大和化成)、プロテナーゼK(Proteinase K)(Roche)
上記の通り、プロテアーゼによる効率的な卵殻膜の可溶化には還元剤の添加が有効であることが示された。これまでに、卵殻膜の可溶化を可能にする還元剤として、亜硫酸ナトリウム(関東化学株式会社)、亜硫酸水素ナトリウム(和光純薬工業)、L-システイン(Sigma Aldrich)、DTT(和光純薬工業)の4種類が確認された。以下では、新たに数種類の還元剤を用いて可溶化試験を行った。
卵殻膜にはコラーゲン様蛋白質以外に、デルマタン硫酸やコンドロイチン硫酸といった硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)と、ヒアルロン酸が存在することが知られている。これら酸性ムコ多糖は関節症の治療や、保水性を活かした化粧品に利用されている。したがって、本法によって得られる卵殻膜可溶物中にこれらの多糖類が確認できれば、その利用価値を高めることができる。そこで本実験では、今回得られた卵殻膜可溶物を用いて、硫酸化GAGとヒアルロン酸の同定を試みた。
卵殻膜にはリジルオキシダーゼ(EC 1.4.3.13)が存在することが知られている。当酵素はタンパク質中のリジン残基のε-アミノ基を酸化的に脱アミノすることでアルデヒド(アリシン残基)を生成し、コラーゲンやエラスチン等のタンパク質の架橋化反応に関与する。この架橋化反応は、表皮の弾性や伸張性などの機能発現だけではなく、組織の構築に必要不可欠な特異的プロセスである。したがって、本法によって得られる卵殻膜可溶物中からリジルオキシダーゼ活性を同定できれば、その利用価値をさらに高めることになる。そこで本実験では、卵殻膜可溶物を用いて、リジルオキシダーゼ活性の検出を試みた。
卵殻膜には、リゾチーム(EC 3.2.1.17)やβ-N-アセチルグルコサミニダーゼ(EC 3.2.1.96)といった溶菌(抗菌)活性を持つ酵素が存在している。本法によって得られる卵殻膜可溶物中にこれらの酵素が存在しておれば、当可溶物の利用範囲を拡大できる。当実験では、卵殻膜可溶物を用いて溶菌活性の有無を検証した。
癌、生活習慣病、身体の老化において、活性酸素、フリーラジカル、過酸化脂質などの酸化ストレスが大きな要因であることが明らかにされている。酸化ストレスを防ぐ抗酸化物質として、ビタミンC、ビタミンE、β-カロテンなどが利用されている一方で、タンパク質に由来する抗酸化ペプチドも、その安全性の面から注目されている。特に、グルタチオンのようにシステイン残基を持つペプチドは高い抗酸化能を示す。卵殻膜を構成するアミノ酸のうち約10%はシステイン(シスチン)であることから、その可溶物は高い抗酸化能を持つことが期待できる。本実験では、本法によって得られる卵殻膜可溶物について、抗酸化能を持つ素材としての可能性を探るため、その抗酸化活性を測定した。
ヒトの血圧調節機構においてアンジオテンシン変換酵素(ACE)は極めて重要な役割を持っている。ACEは血圧調節メカニズムの一つであるレニン-アンジオテンシン系において、アンジオテンシンIから昇圧作用を有するアンジオテンシンIIを生成するなど、血圧上昇に大きく関係している酵素である。近年、高血圧予防を目的とした機能食品(特定保健用食品)が多く販売されるなど、ACE阻害作用を有する食品成分が注目を集めている。そこで本実験では、本法で得られる卵殻膜可溶物について、血圧降下作用を有する素材としての可能性を探るため、そのACE阻害活性を測定した。
本明細書の中で明示した論文、公開特許公報、及び特許公報などの内容は、その全ての内容を援用によって引用することとする。
Claims (19)
- 還元剤の共存下、卵殻膜にタンパク質分解酵素を作用させる工程を含み、
タンパク質分解酵素と還元剤を併用することを特徴とする、卵殻膜可溶化方法であって、
前記還元剤が、亜硫酸塩、亜硫酸水素塩、L−システイン塩酸塩、L−システイン、及びグルタチオンからなる群より選択される一種以上の還元剤である、卵殻膜可溶化方法。 - 以下の工程(1)及び(2)を含む、請求項1に記載の卵殻膜可溶化方法:
(1)溶媒中に卵殻膜を用意する工程、
(2)前記溶媒に還元剤及びタンパク質分解酵素を添加し、反応させる工程。 - 工程(2)における反応溶液のpHが4.5〜9.5である、請求項2に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 前記還元剤の濃度が5mM〜1Mである、請求項2又は3に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 固形物が認められなくなるまで、前記工程(2)の反応を継続する、請求項2〜4のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 以下の工程(3)を更に含む、請求項2〜5のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法:
(3)工程(2)後の溶液を濾過し、固形物を除去する工程。 - 前記タンパク質分解酵素がアルカリ性プロテアーゼ又は中性プロテアーゼである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 前記タンパク質分解酵素が、セリンエンドペプチダーゼ、システインエンドペプチダーゼ、メタロエンドペプチダーゼ、アミノペプチダーゼ及びアスパラギン酸エンドペプチダーゼからなる群より選択される一種以上の酵素である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 前記タンパク質分解酵素がキモトリプシン、サブチリシン、パパイン、バシロライシン、ステムブロメライン、ロイシルアミノペプチダーゼ、ペプシン及びトリプシンからなる群より選択される一種以上の酵素である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 前記タンパク質分解酵素がビオソーク、プロレザーFG−F、パパインW40、プロテアーゼN、ブロメラインF、ウマミザイムG、サモアーゼY100、ProteAX、プロテアーゼS、スミチームLP500、デスキンC、プロチンNY10、プロチンPC10、スミチームMP、プロチンAY及びプロテイナーゼK(Proteinase K)からなる群より選択される一種以上の酵素である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 前記還元剤が亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶化方法で得られる、卵殻膜可溶物。
- リゾチーム、β−N−アセチルグルコサミニダーゼ、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群より選択される一以上の成分を含む、請求項12に記載の卵殻膜可溶物。
- 抗酸化活性及びアンジオテンシン変換酵素阻害活性からなる群より選択される一以上の活性を示す、請求項12に記載の卵殻膜可溶物。
- 卵殻膜の完全な可溶物である、請求項12〜14のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶物
- 請求項12〜15のいずれか一項に記載の卵殻膜可溶物を含む組成物。
- 医薬、医薬部外品、食品又は化粧料である、請求項16に記載の組成物。
- 以下の工程(i)及び(ii)を含む、卵殻膜有用成分抽出方法:
(i)請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法による可溶化工程;
(ii)前記可溶化工程で得られた卵殻膜可溶物を精製する工程。 - 工程(ii)で精製される成分が、リゾチーム及びβ−N−アセチルグルコサミニダーゼからなる群より選択される酵素、又はヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸及びデルマタン硫酸からなる群より選択される酸性ムコ多糖である、請求項18に記載の卵殻膜有用成分抽出方法。
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