JP4791913B2 - 卵殻膜タンパク質の分解能を有する微生物 - Google Patents
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Description
兵庫県、大阪府、京都府より採取した200種の土壌各0.5gに0.8質量%のNaCl水溶液5mLを加えて懸濁、上清を滅菌した表1に示す組成の培養液からなる平板培地に塗布し、卵殻膜の分解によるハローの形成を指標として6株の分解菌を得た。この内、兵庫県の耕作土より単離されたME−2株の同定を行ったところ、Pseudomonasであることが明らかとなった。但し、病原菌として知られている緑膿菌とは異なることも明らかとなった。
滅菌した表2の培養液に上記Pseudomonas Sp. ME−2株(以下、ME2株)を接種し、72時間、30℃で振とう培養し、培養液を得た。この培養上清を卵殻膜タンパク質と反応させたところ分解が確認された。
上記培養上清420mLを遠心分離、硫安分画、CM52Celluloseカラムクロマトグラフィー、DE52Celluloseカラムクロマトグラフィー、DEAE−TOYOPEARL650Sカラムクロマトグラフィーにて精製し14mgの酵素を得た。本酵素をPAGE、及びSDS−PAGEに供したところ単一蛋白質であることが明らかとなった。SDS−PAGE法により分子量を測定したところ32000であった。また、効果の高いpHは7.5〜8.5、最適温度は60℃であった。以下、本酵素を本発明の卵殻膜分解剤(実施例1)とした。
(1)方法
卵殻膜粉末0.625%を含む20mM緩衝液800μLと各種酵素280μgを含む水溶液200μLを混合し、30℃で24時間浸透し、Folin法、Lowly法にて分解された蛋白量を測定した。
実施例1の卵殻膜分解剤及び表3に示す蛋白質分解酵素をそれぞれの最適pHで分解させた結果を示す。表3より明らかなように本発明の酵素を用いた場合(実施例1)、他の酵素と比較して高い分解性が認められた。
表4に基づき実施例1の卵殻膜タンパク質分解物を配合したスキンクリームを調製した(処方例1〜3)。
(A)成分及び(B)成分を各々80℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、30℃まで冷却して、スキンクリームを調製した。
表5に基づき実施例1の卵殻膜タンパク質分解物を配合したローションを調製した(処方例4〜6)。
各成分をそれぞれ混合溶解し、攪拌して、ローションを調製した。
表6に基づき実施例1の卵殻膜タンパク質分解物を配合したジェルを調製した(処方例7〜9)。
(A)成分及び(B)成分を各々60℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、30℃まで冷却して、クリームを調製した。
表7に基づき実施例1の卵殻膜タンパク質分解物を配合したW/Oクリームを調製した(応用例10〜12)。
(A)成分及び(B)成分を各々60℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、30℃まで冷却して、親油クリームを調製した。
表8に基づき実施例1の卵殻膜タンパク質分解物を配合したサンスクリーンを調製した(処方例13〜15)。
(A)成分及び(B)成分を各々80℃に加熱溶解した後混合して、攪拌しつつ冷却し、30℃まで冷却して、サンスクリーンを調製した。
Claims (3)
- Pseudomonas Sp.ME−2株(独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 受託番号:FERM P−20951)。
- Pseudomonas Sp.ME−2株(独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 受託番号:FERM P−20951)の培養液又はそれより単離された酵素による卵殻膜タンパク質の分解方法。
- Pseudomonas Sp.ME−2株(独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 受託番号:FERM P−20951)の培養液又はそれより単離された酵素によって得られた卵殻膜タンパク質分解物。
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