JP5872806B2 - Mfap−4産生促進剤 - Google Patents
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妊娠に伴って生じる皮膚伸展線条は、妊娠線(striae gravidarum)と呼ばれ、妊婦のほとんどに認められる。妊娠線は、妊娠半年ぐらいから出産後にわたって、腹部、***、股部に発生する。出産後は時間の経過とともに目立たなくなるが、多くは完全には元に戻らない。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするミクロフィブリル形成促進剤を提供する。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする弾性線維形成促進剤を提供する。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする弾性線維分解抑制剤を提供する。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするコラーゲン分解抑制剤を提供する。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする皮膚伸展線条予防剤を提供する。
本発明における「MFAP−4産生促進」は、MFAP−4タンパク質の量の増加、MFAP−4タンパク質の発現レベルの亢進、MFAP−4タンパク質をコードするmRNAの発現レベルの亢進、MFAP−4タンパク質をコードする遺伝子の転写制御領域の活性化レベルの亢進等の任意のパラメーターに基づいて測定することができる。
溶媒の使用量としては、上記植物(乾燥質量換算)1gに対して1〜100mLが好ましく、抽出時間としては、1分間〜2ヶ月間が好ましく、10分間〜4週間がより好ましい。このときの抽出温度は、0℃〜溶媒沸点、より好ましくは10〜60℃、さらに好ましくは15〜40℃である。
別の態様として、本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするミクロフィブリル形成促進剤を提供する。
別の態様として、本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする弾性線維形成促進剤を提供する。
別の態様として、本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする弾性線維分解抑制剤を提供する。
別の態様として、本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするコラーゲン分解抑制剤を提供する。
別の態様として、本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とする皮膚伸展線条の予防剤を提供する。
本発明において、上記剤は、本質的にヒメウズ、ローズマリー及びセイヨウシナノキ、ならびにそれらの抽出物から選択される少なくとも1つから構成される。
本発明において、これらの植物及び抽出物は、単独で使用されてもよく、いずれか2以上の組み合わせで使用されてもよい。
一例として、当該医薬又は医薬部外品は、ローション、クリーム、ジェル、軟膏、貼布剤等の形態の皮膚外用剤の形態であり得る。
斯かる担体としては、例えば、賦形剤、被膜剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、希釈剤、分散剤、緩衝剤、浸透圧調整剤、pH調整剤、分散剤、乳化剤、防腐剤、安定剤、酸化防止剤、着色剤、紫外線吸収剤、保湿剤、増粘剤、活性増強剤、抗炎症剤、殺菌剤、香料、矯味剤、矯臭剤等が挙げられる。また、当該化粧料は、上記植物又はそれらの抽出物のMFAP−4産生促進作用が失われない限り、他の有効成分や化粧成分、例えば、保湿剤、美白剤、紫外線保護剤、細胞賦活剤、洗浄剤、角質溶解剤、メークアップ成分(例えば、化粧下地、ファンデーション、おしろい、パウダー、チーク、口紅、アイメーク、アイブロウ、マスカラ、その他)等を含有していてもよい。
化粧料の形態としては、クリーム、乳液、ローション、懸濁液、フォーム、ジェル、パウダー、パック、シート、パッチ、スティック、ケーキ等、化粧料に使用され得る任意の形態が挙げられる。
一例として、上記化粧料は、妊娠線予防用の化粧料であり得る。
また本発明は、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを投与することを特徴とする、組織における弾性線維の形成促進及び分解抑制、又はコラーゲンの分解抑制方法、あるいは妊娠線等の皮膚伸展線条の予防方法を提供する。当該方法において、上記植物及びそれらの抽出物から選択される少なくとも1つは、組織における弾性線維の形成促進及び分解抑制、又はコラーゲンの分解抑制、あるいは妊娠線等の皮膚伸展線条の予防のために、それらを必要とする対象に有効量で投与される。
製造例1 ヒメウズ抽出物の調製
ヒメウズ塊根(新和物産)40gに50%エタノール水溶液400mLを加え、室温で22日間浸漬した。これをろ過し、ヒメウズ抽出液を得た。この抽出液を濃縮したところ、その固形分は14.89gであった。この抽出物を50%エタノールにて希釈し、1%(w/v)の溶液とした。
ローズマリー葉(新和物産)40gに50%エタノール水溶液400mLを加え、室温で28日間浸漬した。これをろ過し、ローズマリー抽出液を得た。この抽出液を濃縮したところ、その固形分は6.53gであった。この抽出物を50%エタノールにて希釈し、1%(w/v)の溶液とした。
セイヨウシナノキ葉(新和物産)40gに50%エタノール水溶液400mLを加え、室温で19日間浸漬した。これをろ過し、セイヨウシナノキ抽出液を得た。この抽出液を濃縮したところ、その固形分は5.89gであった。この抽出物を50%エタノールにて希釈し、1%(w/v)の溶液とした。
正常ヒト真皮線維芽細胞(倉敷紡績株式会社)を、3.0×105細胞/ウェルで24ウェルプレートに添加し、24時間培養した。培地を交換し、次いで各ウェルに、試験物質として製造例1〜3で調製した植物抽出物のいずれか(最終濃度0.1%(v/v);エキス分として0.001%(w/v))、又は対照として同量の50%エタノールを添加した。3日後、培養上清を回収し、それをサンプルとしてウェスタンブロティング法によりMFAP−4のバンドを検出してMFAP−4タンパク質の発現量を定量し、対照に対する相対発現量を求めた。
結果を表1に示す。表1記載の植物抽出物は、いずれもMFAP−4発現を促進した。
実施例1と同様の手順で、正常ヒト真皮線維芽細胞を1.0×105細胞/ウェルで24ウェルプレートに添加し、24時間培養した。培地を交換し、細胞を3群に分けて8日間培養した。2つの群は、10nMの組換えMFAP−4(rMFAP−4)の存在下又は非存在下で培養し、培養中に2回、MFAP−4に対する特異性がない対照siRNA配列(20μMで3.75μl)を培地に添加することにより、siRNAを細胞に導入した。残りの1群はrMFAP−4非存在下で培養し、培養中に2回、MFAP−4 siRNA配列(20μMで3.75μl)を培地に添加して細胞に導入した。
培養後、細胞からトータルRNAを抽出して、TaqMan(登録商標)gene expression assays(Applied Biosystems)を用いたRT−PCRによりMMP−12発現を測定し、内部標準(GAPDH)に対する相対値として定量化した。同様の手順で、MMP−1発現を調べた。
結果を図1に示す。siRNAでMFAP−4発現を抑えた場合、MMP−12(図1A)やMMP−1(図1B)の発現は増加した。MMP−12やMMP−1はECM分解に関わる酵素であることから、この結果よりMFAP−4はコラーゲン線維や弾性線維などのECMの分解に関わることが示された。
参考例1と同様の手順で細胞を調製した後、メタノールで細胞を固定し、トロポエラスチン抗体及びフィブリリン−1抗体を用いて免疫染色を、DAPIを用いて核染色を行い、蛍光顕微鏡下で弾性線維の形成を観察した。
結果を図2に示す。siRNAでMFAP−4発現を抑えた場合、トロポエラスチン及びフィブリリン−1からなる重合体の形成が損なわれたことから、MFAP−4がフィブリリン−1の重合化に寄与していることが示された。
実施例1と同様の手順で、正常ヒト真皮線維芽細胞を1.0×105細胞/ウェルで24ウェルプレートに添加し、24時間培養した。培地を交換し、細胞を8日間培養した。培養上清を回収し、0.45μmメンブレン(Millipore)で濾過した後3kDaカットオフメンブレン(Millipore)を用いて10倍に濃縮し、濃縮液500μLを10μgのMFAP−4抗体又は正常ウサギIgGとともにインキュベートした。これに20μLのProtein Gセファロースビーズ(GE Healthcare)を添加してインキュベートした後、遠心によりビーズを回収した。回収したビーズからタンパク質を集め、1×SDSサンプルバッファー(Thermo Fisher scientific)に懸濁し、フィブリリン−1抗体を用いたウェスタンブロティング法に供した。
結果を図3に示す。MFAP−4抗体により回収した画分にフィブリリン−1が検出されたことから、ECM内でMFAP−4とフィブリリン−1とが共存していることが示唆された。この結果を参考例2で示されたMFAP−4のフィブリリン−1の重合化に対する影響とあわせて考慮すると、MFAP−4は、ECM内でフィブリリン−1と相互作用して、フィブリリン−1からミクロフィブリルへの重合化を促進し、弾性線維形成に関与していることが示唆される(図4)。
参考例1〜3に示すように、MFAP−4は、MMPを介したコラーゲン線維や弾性線維などのECMの分解を抑制するとともに、ECM内でフィブリリン−1と相互作用してフィブリリン−1からミクロフィブリルへの重合化を促進することで弾性線維の形成を促し、結果としてECMの構造を維持するように機能する。
従って、MFAP−4発現を促進することによって、上記MFAP−4の機能を介して組織の弾性を向上させることができ、ひいては妊娠や成長、肥満等によって起こる皮膚の急速な過伸展による真皮の弾性線維構造の破綻や弾性線維の減少を防ぎ、妊娠線等の皮膚伸展線条を予防することができる。
Claims (2)
- ヒメウズ、ローズマリー及びセイヨウシナノキ、ならびにそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするMFAP−4産生促進剤。
- ヒメウズ、ローズマリー及びセイヨウシナノキ、ならびにそれらの抽出物から選択される少なくとも1つを有効成分とするミクロフィブリル形成促進剤。
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