JP5703022B2 - 脂質の製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、甲殻類に含まれる脂質、特にリン脂質を効率よく製造する方法、特に悪臭を発生させずに製造する方法に関する。

食用脂質は古くから工業的に製造されている。例えば現在最も製造量の多い大豆油の場合、原料大豆を洗浄後、必要に応じて脱皮し、破砕・圧扁して、多くの場合５０〜６０℃程度のヘキサンなどの有機溶媒で抽出する。次に抽出物をろ過、脱溶剤（多くの場合蒸留）して粗油を得る。この粗油をさらに不溶性画分をろ過または遠心分離法で除去し、水を添加して水可溶性物を除去（脱ガム）、脱酸、脱色、脱臭工程を経て製品となる。一般に植物種子など脂質高含有植物原料からの脂質製造は比較的容易である（非特許文献１）。一方、動物原料の場合には、一般に原料を洗浄した後加熱するだけで油分が分離してくるのでより簡単に製造が可能である。例えば魚類の場合、原料を煮熟して圧搾することにより液状部が水分と粗油とに自然分離するため、これを精製することで魚油が製造される（非特許文献２）。しかし、これらの方法で得られる脂質は、トリグリセリドが中心である。

脂質のひとつであるリン脂質は、その健康機能としてコリン欠乏症に由来する脂肪肝の改善、血中LDL（悪玉コレステロール）を減少させ、血中HDL（善玉コレステロール）を増加させるなどが知られ、そのほか高血圧やアセチルコリン欠乏症に由来する神経障害の改善、脂溶性ビタミンの吸収促進等が期待されている。従来リン脂質は大豆や鶏卵黄から分離・精製されることが多い。大豆からの場合、大豆油製造工程中の脱ガム工程で、不溶性として除去される画分にリン脂質が含まれ、これを脱色・乾燥してレシチンと呼ばれるリン脂質製品を得る（非特許文献３）。大豆油は非常に大きなマーケットであり、派生物としてのリン脂質も大量に得られる。鶏卵黄の場合にはその重量の３分の１程度が脂質であり、さらに脂質の３分の１程度がリン脂質であることから比較的リン脂質の抽出・精製は容易であるが、効率よいリン脂質の抽出とその安定性の確保のためにはあらかじめ原料卵黄から水分を除去する必要があり、熱コストを投入して乾燥卵黄を製造し、これからリン脂質を抽出している。

リン脂質含量が比較的高い他の原料としては、水産魚卵やオキアミなどの水産物が知られる。ところがこれらの原料は鶏卵黄と比較すると原料のリン脂質含量は低く、有機酸その他の夾雑物が多いため、精製は容易ではない。これまでに水産物から脂質を得るための方法として、原料を予め乾燥した後脂質を抽出する方法、例えば原料水産物をあらかじめ水分１０重量％以下まで乾燥させてから脂質を抽出する方法（特許文献１）や、原料を凍結乾燥にて乾燥させた後脂質を抽出する方法（特許文献２）、あるいは有機溶媒を使用する方法、例えば原料魚介類に対しアセトンと水の混合液を用いて脂質を抽出する方法（特許文献３）、あるいは原料オキアミから脂質を抽出するにあたり第一段階としてアセトンを使用する方法（特許文献４）等の種々の方法が提案されているが、これらはいずれもコスト的な課題、工程の煩雑性、法的規制による使用制限等の問題を抱えるものである。

ところで、高度不飽和脂肪酸には生活習慣病（動脈硬化、高脂血症、痴呆など）の予防・改善や免疫抑制作用（アレルギー、アトピー軽減）等が知られ、さらにEPAには中性脂肪の減少や血小板凝集抑制作用など循環器系疾患の予防、DHAには神経組織の発育や機能維持、視力の向上などの効果が期待される（非特許文献４）。水産物の脂質はリン脂質の供給源であると同時にＥＰＡ、ＤＨＡ等高度不飽和脂肪酸の供給源としても有望である。しかし、前述の通り水産物にはアミノ酸、脂肪酸等の有機酸その他の夾雑物が多いため、脂質の抽出、精製は容易ではなかった。

以前から、甲殻類であるオキアミから高度不飽和脂肪酸を含む脂質を抽出する試みがなされてきた。オキアミにはタンパク質分解酵素が多く含まれるため、加熱せずタンパク質が変成しない状態（以下、未加熱という）のオキアミから脂質を濃縮しようとしても、すぐにオキアミのタンパク成分が分解してしまい、オキアミに多く含まれるリン脂質とともにエマルジョンを形成し水層に流出してしまって、脂質の回収が困難になる。
そこで従来、オキアミから脂質を濃縮する場合には、粉砕したオキアミを乾燥してオキアミミールを得て、ここから濃縮する方法が採られていたが、この方法では乾燥の過程で悪臭が生じ、食用に耐えられる脂質を得ることが難しい。また方法によっては精製時に灰分が多いため、しばしば装置に付着して装置の腐食や連続運転の妨げとなる。
一方、甲殻類であるオキアミからタンパク質を抽出する方法として従来から、オキアミのタンパク成分を熱により凝固させることでタンパク質を得る方法が知られている（特許文献５）。しかし、この方法で得られる凝固物“Okean”はタンパク質を得ることを目的としており、脂質を得ることは目的としていない（非特許文献５）。
また、本願出願後、優先権主張期間内に開示された発明として、オキアミをそのまま60〜75℃付近になるまで熱水を入れて加熱して、得られた上澄みである水溶液を90℃以上に再加熱して凝固物を得る方法が開示されている（特許文献６）。

特開平８−３２５１９２号公報 特許第２９０９５０８号公報 特開２００４−２６２６７号公報 国際公開第００／２３５４６号 ソ連発明者証第２２７０４１号 国際公開第０９／０２７６９２号

小原哲二郎編，「最新食品加工講座 食用油脂とその加工」，建帛社，1981年，ｐ．49-74 松下七郎編，「魚油とマイワシ」，恒星社厚生閣，1991年，ｐ．21-28 フィー（Y. H. Hui）編，「ベイリーズ・インダストリアル・オイル・アンド・ファット・プロダクツ（Bailey’s Industrial Oil and Fat Products）」，ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（John Wiley & Sons），1996年，第5版、第1巻，ｐ．336 クラーク（A. Clarke）著，ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・マリン・バイオロジー・アンド・エコロジー（Journal of Experimental Marine Biology and Ecology），1980年，第43巻，第3号、ｐ．221-236 Vopr Pitan，1977年，第1号，p．70-73

本発明は、甲殻類から脂質、特にリン脂質を効率よく製造することを課題とする。特に悪臭のしないサプリメントなどの食品用途に好ましい品質の脂質を製造することを課題とする。

本発明者らは上述の現状に鑑み、甲殻類由来の脂質を簡便に分離、濃縮する方法について鋭意検討を重ねた結果、甲殻類の殻、筋肉以外の内臓や頭胸部の内部組織など液状部分をあらかじめ圧搾により分離回収し、この水溶性夾雑物を含む液状部分を加熱してそのタンパク質を熱凝固させることにより脂質が固形部分に局在することを見出し、さらに水溶性有機酸やアミノ酸、ペプチドなど夾雑物はろ過、遠心分離など簡易な方法でこの固形部分から除去可能なことを見出した。さらに、この固形部分を水洗いしてから、脂質を抽出することにより、悪臭の原因物質が除去されることを見出し、本発明の完成に至った。

本発明は、以下（１）〜（１０）の内容を要旨とする。
（１）甲殻類全体またはその部分を、湿重量の５〜５０％に相当する量の圧搾液を得るように圧搾して圧搾液を得、圧搾液に含まれるタンパク質が凝固する温度に圧搾液を加熱し、脂質成分を含む固形分と水溶性成分を含む水分とを固液分離し、得られた脂質含有固形分又はそれを乾燥させた脂質含有乾燥物を水洗いし、脱水及び／又は乾燥した後、それら脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物から脂質を抽出することを特徴とする脂質の製造方法。
（２）水洗いにおいて脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物の乾物重量あたり４倍以上の水を用いるものである（１）の方法。
（３）水洗いを２回以上行う（１）又は（２）の方法。
（４）脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物を直径１ｃｍ以上１０ｃｍ以下に裁断して水洗いを行う（１）乃至（３）いずれかの方法。
（５）水洗い及び／又は脱水を脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物をメッシュバッグに入れて行う（１）乃至（４）いずれかの方法。
（６）分子量100〜200の揮発成分を吸着する吸着剤で吸着される成分の匂いがで感知できない程度、水洗いを行うことを特徴とする（１）乃至（５）いずれかの方法。
（７）脂質含有乾燥物の乾物重量あたりの灰分が５％以下になる程度、水洗いすることを特徴とする（１）乃至（５）いずれかの方法。
（８）脂質を抽出する方法が、有機溶媒抽出、酵素処理した後有機溶媒抽出、超臨界抽出のいずれかの方法によることを特徴とする（１）乃至（７）いずれかの方法。
（９）甲殻類がオキアミ目に属する甲殻類である、（１）乃至（８）いずれかの方法。
（１０）（１）乃至（９）いずれか記載の方法により得た脂質含有組成物。

本発明によれば、甲殻類からリン脂質を豊富に含む脂質を簡便且つ安価に製造することができる。特に、悪臭がせず、灰分が少なく腐食を起しにくい脂質を製造することができる。

図１は、実施例１８において得られたクロマトグラムである。

本発明は、甲殻類全体またはその部分を圧搾して得られる圧搾液を加熱し、脂質成分を含む固形分と水溶性成分を含む水分とを固液分離することによって得られる固形分から脂質を抽出することを特徴とする、甲殻類に含まれる脂質の製造方法に関する。本発明の原料である甲殻類は、軟甲綱（エビ綱）に属するものであれば特に限定されないが、特にオキアミ目あるいは十脚目に属するものが用いられる。具体的には、オキアミ、エビ、カニ等が挙げられ、またその部分であるエビ頭胸部、エビガラミール、オキアミミール等も用いることができる。この時、オキアミの種類は特に限定されないが、特に好ましくはナンキョクオキアミ（Euphausia superba）が用いられる。また、これら原料は、脂質を含有する状態であれば加熱あるいは未加熱のもののどちらでも良いが、好ましくは未加熱品、例えば鮮魚（生）、冷凍、あるいは冷凍されたものを解凍したものが用いられる。
圧搾方法としては一般に用いられるものであれば特に限定されないが、例えば油圧式圧搾機、スクリュープレス、採肉機、プレス脱水機、遠心分離機等、あるいはこれらを組み合わせて用いる。脂質を取得することを目的とする場合には、甲殻類全体またはその部分を圧搾して湿重量の５〜５０％に相当する量の圧搾液を得るように圧搾を行うと良い。５％以下の圧搾では脂質を十分に圧搾抽出できていないこと、また５０％以上の圧搾では脂質は十分に圧搾できているものの、水溶性有機酸、アミノ酸、ペプチド、タンパク質等他の夾雑物が混入し、その後脂質を分離抽出する際の工程が煩雑になってしまうことからである。但し、脂質成分を含む固形分を取得することを目的とする時には、５０％以上圧搾しても構わない。また、圧搾液を得た際に発生する圧搾ガラについては、通常のオキアミの利用方法に準じて飼料原料等に利用することが可能である。

次に得られた圧搾液を加熱する。加熱方法は特に限定されずあらゆる常法が用いられ、加熱温度はタンパク質が凝固する温度に加熱すれば良く、例えば５０℃以上、好ましくは７０〜１５０℃、特に好ましくは８５〜１１０℃の範囲である。加圧あるいは減圧下で加熱しても良い。これにより、脂質成分を含む固形分と水溶性成分を含む水分とに分離される。これをろ過又は遠心分離等の方法により固液分離することにより、脂質含有固形分（以下、熱凝固物と言うこともある）が得られる。

この脂質含有固形分又はその乾燥物から脂質を抽出する。脂質の抽出方法としては、一般に用いられる方法であれば特に限定されないが、溶媒抽出、ｐＨ調整あるいはプロテアーゼ又はリパーゼ等の酵素処理等によるタンパク質成分の分離除去、超臨界抽出等、あるいはこれらを組み合わせた方法が用いられ、好ましくは有機溶媒による抽出、酵素処理した後有機溶媒により抽出、又は超臨界二酸化炭素抽出が用いられる。溶媒抽出において用いる溶媒としては、適当な有機溶媒、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、プロピレングリコール、ブチレングリコール等のアルコール類、酢酸メチル、酢酸エチル、アセトン、クロロホルム、トルエン、ペンタン、ヘキサン、シクロヘキサン等を単独あるいは２種以上を組み合わせて用いることができ、好ましくはエタノール又はヘキサン−エタノール混液を用いて脂質を抽出する。この時、溶媒混合比、あるいは原料：溶媒比は任意に設定すれば良い。又、酵素処理において用いられる酵素としては、食品に用いられるものであれば特に限定されないが、プロテアーゼ、例えばアルカラーゼ（登録商標）（ノボザイム社製）、プロテアーゼＡ、Ｍ、Ｐ、パンクレアチンＦ（天野エンザイム社製）等が用いられる。酵素処理のｐＨや温度条件等は、用いる酵素にあわせて設定すれば良く、例えば山下隆司編，「新しい食品加工技術Ｉ」（工業技術会，1986年，ｐ．204-284）に記載の方法等を参考にできる。又、超臨界二酸化炭素抽出法においては、常法に従い実施すれば良く、例えば山下隆司編，「新しい食品加工技術Ｉ」，工業技術会，1986年，ｐ．79-102に記載の方法等を参考にできる。以上の方法により、甲殻類よりリン脂質を豊富に含む脂質を簡便且つ安価に製造することができる。

上述の方法により得られた脂質含有固形分は、脂質が効率よく濃縮されたものである。この脂質含有固形分は、全体に対し脂質を３５重量％以上、好ましくは４０重量％以上含有するものであり、その脂質中、４０重量％以上がリン脂質であることを特徴とする。この脂質含有固形分又はその乾燥物、あるいはそれより前記方法により抽出した脂質は、リン脂質を豊富に含むものであり、EPA、DHA等の高度不飽和脂肪酸も含む脂質が得られ、これらは医薬原料、食品素材、あるいは飼料原料等として用いることができる。
固形分を乾燥する方法は、常法に従えば良い。例えば、熱風乾燥、蒸気での乾燥を行ってもよい。また高周波・マイクロ波加熱での乾燥、真空・減圧乾燥、凍結融解、乾燥剤による乾燥を行ってもよいし、これらを組み合わせてもよい。乾燥する際に高温になりすぎると酸化した脂質が悪臭を発するので、乾燥は90℃以下、好ましくは75℃以下、より好ましくは55℃以下で行うとよい。乾燥は脂質含有固形分を作製した後に行ってもよいし、後述の水洗いの後に行ってもよい（以下、水洗いの後に乾燥を行ったものを洗浄・乾燥物ということもある）。漁獲したオキアミを用いて洋上で脂質含有固形分を作製する場合には、輸送のコストを考えて輸送前に乾燥したほうがよい。洋上乾燥の場合は機器の性能等を考慮して途中で一端止めて、陸揚げしてから再度乾燥を行ってもよい。洋上乾燥から陸上での乾燥をする間に脂質含有固形分が高温に晒されてしまうことによる悪臭の発生がなければ、その後に行う水洗いによりオキアミ臭及び悪臭の元が除去できるからである。また輸送期間が長い場合には腐敗してしまう恐れがあるため、冷蔵又は冷凍で輸送することが好ましい。

上述の方法により得られた脂質含有固形分は、さらに水洗いをすることによりオキアミ臭及び悪臭の元を除去することができる。オキアミ臭及び悪臭は、濃縮した脂質を食用とする場合に特に問題となる。これらを抽出後の脂質から除去するのは困難である。またリン脂質そのものは元来、水溶性でも脂溶性でもあり、何かに固定しない状態で水洗いをすることはできない。このため水洗いによって臭いの成分を除去するためには、臭いの成分が吸着せず、且つ、リン脂質を吸着して水に不溶性となる支持体が必要となる。本発明においては、オキアミの圧搾液に含まれるタンパク質の熱凝固物がそのような支持体として好適であることを見出し、当該性質を利用してオキアミから臭いのしない脂質を濃縮するものである。

本発明においては、オキアミ臭あるいは悪臭の元の成分として、カラムに吸着される揮発成分を特定している。すなわち、本発明におけるオキアミ臭あるいは悪臭の元は、分子量100〜200の揮発成分を吸着させるカラム、より好ましくは分子量100〜150の揮発成分を吸着させるカラム、より好ましくは
Porapak Qで吸着させることができ、吸着させた後の脂質には臭いが残らない。吸着に際しては60℃以下で30分以上蒸留したものをカラムに通せばよく、この際の加熱は突沸を避けるために25℃から徐々に昇温させることが好ましい。ただしカラムに吸着させる方法で脂質からオキアミ臭あるいは悪臭の元の成分を除去すると、膨大な手間と費用を要するので実用的ではない。このため、本発明のように、水洗いという簡便な操作で除去することはたいへん実用的である。

上述の方法により得られた脂質含有固形分は、水洗いをすることによりさらに灰分と水溶性タンパク質の一部を除去することができる。灰分は主に体液及び体表に付着する海水に含まれる塩化ナトリウム、カリウム、塩化カルシウムからなる。塩素塩は脂質の濃縮過程において乾燥時や蒸留時には塩素塩としても析出することがある。灰分の多くはリン脂質と同様に水に溶解する。このためリン脂質が溶解しない条件で水洗いをすることにより灰分の多くは除去される。
また特に塩化ナトリウムが析出すると濃縮装置など金属製の機械を腐食させやすい。このため析出した灰分の中の塩化ナトリウムはできるだけ少ないほうがよい。塩化ナトリウムを相対的に減らす方法として、甲殻類全体またはその部分を圧搾して、その殻に含まれるカルシウムを溶解させておく方法がある。圧搾方法としては一般に用いられるものであれば特に限定されないが、例えば油圧式圧搾機、スクリュープレス、採肉機、プレス脱水機、遠心分離機等、あるいはこれらを組み合わせて用いる。多く圧搾すればするほど塩化カルシウムが相対的に増加して、塩化ナトリウムが相対的に減少するが、多く圧搾しすぎると上述のように脂質の濃縮という点においては問題となる。このため、脂質中に含まれる灰分に含まれる塩化ナトリウムを相対的に減少させるためには、甲殻類全体またはその部分を圧搾して湿重量の５〜５０％に相当する量の圧搾液を得るように圧搾を行うと良い。甲殻類全体またはその部分を圧搾しない方法では灰分に含まれる多くが塩化ナトリウムとなってしまい、このような目的には適さない。
このようにして得られた圧搾液を加熱凝固して得られる脂質含有固形分から灰分を除去するためには、水洗いすることが有効である。灰分は塩素塩としては水溶性であるが、脂質含有固形分の中に閉じ込められた状態では溶出しにくい。そこで、脂質含有固形分を細かく粉砕して行うことが好ましい。このようにして脂質含有固形分を水洗いすることにより灰分が１０％以下、好ましくは５％以下に低減させることができる。また、灰分のうち塩化ナトリウムは、４０％以下、好ましくは３０％以下、より好ましくは２０％以下、さらに好ましくは１０％以下に低減することができる。

また水溶性タンパク質は、本来水溶性であるタンパク質に加え加熱による変性により生じるさまざまなタンパク質が含まれるが、アクチン、ミオシン、トロポニン、トロポミオシン、ＡＴＰａｓｅ、カルモジュリンなどが含まれる。水洗いによって、水洗いをする前の脂質含有固形分に対してタンパク質が５％以上、好ましくは１０％以上、より好ましくは２０％以上が洗い流される。灰分とタンパク質の一部が除去された結果、水洗いすることにより脂質含有固形分中の脂質含量を水洗い前の脂質含有固形分中の脂質含量に比べて乾物重量あたり５％以上、好ましくは１０％以上、より好ましくは１５％以上、さらに好ましくは２０％以上増やすことができる。また脂質含有固形分に含まれる脂質の割合を４５％以上、より好ましくは５０％以上の割合で含まれるようにすることができる。

水洗いの程度は、官能検査により臭いがしない程度に洗えばよい。オキアミの臭いの成分、灰分並びに水溶性タンパク質を除去するための水洗いは脂質含有固形分中の乾物重量に対して４倍量、好ましくは１０倍量以上の真水及び／又は海水で行う。好ましくは２回以上、より好ましくは３回以上洗浄するとよい。水洗いは、容器に入れた脂質含有固形分に対して注水し、5分以上置いてから、水分を分離することで行うことができる。脂質含有固形分の形状によっては十分に攪拌することも有効である。また水洗いは、容器に入れた脂質含有固形分を流水で洗うことで行うこともできる。上述の方法により得られた脂質含有固形分は水に不溶性であるため、水洗いを多く行えば行うほどオキアミ臭あるいは悪臭の元、灰分及び水溶性タンパク質を除去できるようになるが、洗浄時に脂質含有固形分の断片が流出してしまわないよう目の細かいメッシュで脂質含有固形物を留めたほうがよい。メッシュの径は目詰まりしない程度の細かさであればよく、好ましくは1mm以下、より好ましくは250μm以下であるほうがよい。また脂質含有固形物は塊が大きすぎると臭いの元を除去しにくいため、細かく粉砕しておくとよい。好ましくは直径１０ｃｍ以下、より好ましくは５ｃｍ以下に破砕する。ただし破片の流出を防ぐために直径1ｃｍ以下にはしないほうがよい。
脂質含有固形分は水より比重が重いタンパク質と水より比重が軽い脂質の含有比率により様々な比重を持ち得る。このため水洗い後に遠心分離を行っても効率的に水分を除去することができない。水分の分離は脂質含有固形分をスクリュープレスなどの圧搾機を用いるか、又は脂質含有固形分を留めるサイズのメッシュを用いた自然落下法又はメッシュで区切りを持たせた遠心管若しくはメッシュの袋に脂質含有固形分を閉じ込めて行う遠心分離を行うことが好ましい。このようにして、脂質含有固形分から臭いの成分、灰分及び／又は水溶性タンパク質を除去することができる。

また上述の方法により得られた脂質含有固形分は、アスタキサンチンを多く含む。甲殻類のアスタキサンチンは甲殻内部の組織に多く含まれ、甲殻内部の組織の破壊は加熱処理等だけでは不十分であるため、オキアミを圧搾するからこそ、アスタキサンチンを多く含む脂質が濃縮可能となる。圧搾方法としては一般に用いられるものであれば特に限定されないが、例えば油圧式圧搾機、スクリュープレス、採肉機、プレス脱水機、遠心分離機等、あるいはこれらを組み合わせて用いる。多く圧搾すればするほど甲殻内部の組織が破壊され、脂質中のアスタキサンチン濃度は増加するが、多く圧搾しすぎると上述のように脂質の濃縮という点においては問題となる。このため、脂質の濃縮を行いやすいよう脂質中に含まれるアスタキサンチンを増加させるためには、甲殻類全体またはその部分を圧搾して湿重量の５〜５０％に相当する量の圧搾液を得るように圧搾を行うと良い。甲殻類全体またはその部分を圧搾しない方法では甲殻内部の組織に含まれるアスタキサンチンを得ることができず、このような目的には適さない。このようにして得られた脂質含有固形分には、脂質のうちアスタキサンチンが100ppm、好ましくは150ppmの割合で含まれるようにすることができる。

本発明の脂質含有固形分は、甲殻類の圧搾液に由来する脂質とタンパク質を含有する組成物であって、少なくとも脂質を３０重量％以上、好ましくは４０重量％以上含有することができる。さらに、水洗により灰分のうち塩化ナトリウムが４０％以下にもすることができる。さらに、アスタキサンチンを100ppm以上含むものである。本発明の脂質含有固形分に含まれる脂質は５０重量％以上がリン脂質であり、１５重量％以上のEPA及び／又はDHAが含まれる。この組成物はリン脂質及びEPA、DHA等の高度不飽和脂肪酸を豊富に含む脂質を含有し、これらは医薬原料、食品素材、あるいは飼料原料等として用いることができる。

以下に本発明の実施例を記載するが、本発明はこれらに何ら限定されるものではない。

オキアミ圧搾液の取得（バッチ式）と加熱処理
２００５年７月下旬に南極海にて漁獲し、直ちに−３０℃に冷凍した全長45mm以上のナンキョクオキアミ４００ｋｇを室温（１５℃）にて通風解凍した。この解凍オキアミを油圧式圧搾機（東京テクノ社製、原料セル約2m×約68cm×約40cmH）を用いて搾液率（解凍オキアミ投入量に対する圧搾液の収量）１３重量％（ロット１）及び２６重量％（ロット２）にて圧搾した。圧搾液は先に得られた解凍ドリップと合一し、容量１ｔの蒸気式加熱釜（ニーダー）にて加熱し、９５℃達温を確認して加熱を停止し、発生した熱凝固物（脂質含有固形分）をステンレス製市販ザルにて自然落下法にて分別した。熱凝固物は蒸気加熱型真空乾燥機（大川原製作所製リボコーン、型式ＲＭ２００ＶＤ）を用いて乾燥し、乾燥物９．０ｋｇ（ロット１）及び１５．８ｋｇ（ロット２）を得た。原料のオキアミ及び得られた熱凝固物の乾燥物の成分を表１に示す。

この結果、本発明方法により甲殻類より脂質が効率良く濃縮されていることが確認された。また、得られた熱凝固物（脂質含有固形分）の脂質について分析した。その脂質組成及び代表的な脂肪酸組成を表２に示す。なお、脂質組成はベンゼン：クロロホルム：酢酸＝150：60：1.5の展開溶媒により分離した各脂質成分を薄層自動検出装置（三菱化学ヤトロン社製、型式イアトロスキャン（登録商標）MK-6）を用いて定量した。また、脂肪酸組成は構成脂肪酸を三フッ化ホウ素中メチルエステル化してガスクロマトグラフィー（アジレント・テクノロジー社、型式６８９０Ｎ）により分析した。使用したガスクロマトグラフィー用カラムはJ&W Scientific社、ＤＢ−ＷＡＸ（型番１２２−７０３２）、キャリアガスはヘリウムを使用し、水素炎イオン化検出器で検出した。
本熱凝固物の乾燥物は、室温で１年間保存した場合でも、におい、色などで判別される変性はなく、その脂質成分が酸化されず安定に保持された。また、表１および表２に示されるように、本発明の熱凝固物の成分は畜産及び水産飼料原料として有用である。

オキアミ圧搾液の取得（スクリュープレス）と加熱処理
実施例１と同じオキアミを室温（８℃）で通風解凍し、解凍ドリップを除去した。この解凍オキアミをスクリュープレス脱水機（富国工業社製SHX-200型×1.5ML）に投入して、搾液率（解凍オキアミ投入量に対する圧搾液の収量）１７〜３６重量％にて圧搾液を得た（ロット３〜６）。それぞれの圧搾液の約５ｋｇを容量５０Ｌの蒸気式加熱釜（ライスボイラー）にて加熱し、９５℃達温を確認して加熱を停止し、発生した熱凝固物（脂質を含有する固形分）をステンレス製市販ザルにて自然落下法にて分別した。得られた各ロットの熱凝固物の収率及び成分を、表３に示す。収率は用いた解凍原料に対する重量比率を示す。なお乾重％とは全重量から水分重量を引いた重量あたりの各成分の重量％を示す（特に記載のある場合の除き、以下の実施例で同じ）。

この結果、本発明方法により甲殻類より脂質が効率良く濃縮されていることが確認された。また、得られた熱凝固物（脂質含有固形分）の脂質について、実施例１と同様に分析した。結果を表４及び表５にそれぞれ示す。

オキアミから圧搾液の取得（採肉機）と加熱処理
２００６年７月中旬に南極海にて漁獲した全長45mm以上のナンキョクオキアミ１０ｔを漁獲直後に採肉機（バーダー社製、型式ＢＡＡＤＥＲ６０５）にて圧搾し、圧搾液３ｔを得、直ちに冷凍した。この冷凍圧搾液を蒸気式加熱釜中加熱し、９５℃達温を確認して加熱を停止した。加熱物全量を２００メッシュの濾布を用いて遠心脱水機（大栄製作所製型式DT-1）に投入し、エキス（濾液）を分離し熱凝固物（脂質含有固形分）を得た。原料及び得られた熱凝固物の成分を、表６に示す。

この結果、本発明方法により甲殻類より脂質が効率良く濃縮されていることが確認された。また、得られた熱凝固物（脂質含有固形分）の脂質について、実施例１と同様に分析した。結果を表７に示す。

クロロホルムを用いた加熱圧搾液熱凝固物からの脂質の抽出
実施例３にて製造した熱凝固物（脂質含有固形分）の乾燥品１０ｇを用い、１００ｍＬのクロロホルム中にてホモジナイズ処理し、抽出油３．７１ｇを得た。この抽出油をシリカゲル（旭硝子社製、マイクロスフェアゲル、型番Ｍ．Ｓ ＧＥＬ ＳＩＬ、３００ｇ）カラムに吸着させ、クロロホルムにて中性脂質など洗脱した。その後移動層をメタノールに変更してリン脂質０．２２８ｇを回収した。熱凝固物乾燥品１０ｇ中の脂質の分析値は４．７２ｇであった。本リン脂質についてイアトロスキャン法（展開溶媒はクロロホルム：メタノール：水＝６５：２５：４）で検討したところ、このリン脂質はホスファチジルコリンが９６重量％、ホスファチジルエタノールアミンが４重量％を占めることがわかった。また、本実施例により得られたリン脂質の脂肪酸組成について、実施例１と同様に分析した。結果を表８に示す。

この結果、抽出油からリン脂質のみを取り出すことによりＥＰＡ、ＤＨＡなど高度不飽和脂肪酸の純度が高くなることが確認された。

ヘキサン＝エタノールを用いた加熱圧搾液凝固物からの脂質の抽出
実施例３にて製造した熱凝固物（脂質を含有する固形分）の乾燥品２．００ｇ（総脂質含有量の分析値は０．９４ｇ）を用い、５０ｍＬのヘキサン−エタノール混液にて脂質を抽出した（原料：溶媒＝１：２５）。この脂質を用い、２種類の溶媒の混合比を１００：０から０：１００まで変更して抽出効率を比較した。抽出油の収量と、これをイアトロスキャン法にて脂質分析したリン脂質の純度を表９に示す。

この結果、本試験ではヘキサンが２０％以下の混合比の場合には減圧濃縮で抽出油から溶媒を除去する際に水分が残りエマルジョンを形成したため収率を求めていないが、ヘキサンの混合比が４０〜８０％において９０％以上の収率で脂質を回収できた。一方抽出油中のリン脂質純度はヘキサン１００％を用いた場合を除くいずれの溶媒混合比でもほぼ一定であることが確認された。

溶媒抽出時の溶媒量の検討
実施例３にてオキアミ圧搾液から得た熱凝固物（脂質を含有する固形分）乾燥品を用い、これからヘキサン−エタノール混合比６０：４０の溶媒を用いて、実施例５と同様の手順で抽出油を得た。ただし、原料：溶媒比を１：５〜１：２０に変更した。抽出油について分析結果を表１０に示す。

この結果、溶媒比を変化させても抽出油のリン脂質純度はほぼ一定であることが確認された。

熱凝固物中のプロテアーゼ処理による抽出油の分離
実施例３において製造した熱凝固物（脂質を含有する固形分）３ｇに対し、蒸留水３０ｇを加えてホモジナイズ処理した。熱凝固物は均一に分散した。この液（ｐＨ７．５）に対し、市販液状酵素（ノボザイム社製アルカラーゼ２．４Ｌ）を１μＬまたは市販粉末状酵素（天野エンザイム製プロテアーゼＡ、プロテアーゼＭ、プロテアーゼＰまたはパンクレアチンＦ）を１ｍｇ添加して、５０℃で２時間酵素反応を作用させた。その後反応液のｐＨを２規定濃度塩酸で１．４に調整し、５０℃で遠心分離（２２３０ｇ、１０分）処理した。表層に分離した油を含む液層全体を回収した。この液層全体と沈殿物とに含まれる脂質をそれぞれクロロホルム：メタノール＝２：１混合溶媒にて定量し、回収率を求めた。結果を表１１に示す。

この結果、酵素処理することで、熱凝固物（脂質を含有する固形分）から液層への脂質の遊離が進むことが確認された。

熱凝固物の超臨界二酸化炭素による脂質の抽出
実施例３において製造した熱凝固物（脂質を含有する固形分；水分６１．２重量％のもの）またはこれから得た乾燥物（水分２．０重量％）を用い、３４．３ＭＰａ、４０℃の条件にて超臨界二酸化炭素による脂質成分の抽出を実施し、抽出物と抽出残渣とを得た。結果を表１２に示す。

得られた抽出物と抽出残渣中の脂質について、実施例１と同様にして脂質組成を分析した。結果を表１３に示す。

この結果、熱凝固物（脂質を含有する固形分）の乾燥状態に因らず、本抽出法ではトリグリセリドが優先的に抽出され、抽出残渣にはリン脂質が優先的に濃縮することが確認された。

ナンキョクオキアミの魚体サイズと圧搾液の加熱処理
２００７年４〜８月に南極海にて漁獲後直ちに−３０℃に冷凍した全長30mm〜44mmのナンキョクオキアミ２０ｋｇを冷蔵庫内（４℃）にて一晩通風解凍した。この解凍オキアミをフィルタースクリュープレス（荒井鉄工所製、型式ＭＭ−２）を用いて、搾液率（解凍オキアミ投入量に対する圧搾液の収量）４０〜４５重量％にて圧搾した。得られた圧搾液の約５ｋｇを容量５０Ｌの蒸気式加熱釜（ライスボイラー）にて加熱し、９５℃達温を確認して加熱を停止し、発生した熱凝固物（脂質を含有する固形分）をステンレス製市販ザルにて自然落下法にて分別した。同じ実験を異なるオキアミのロットで３回行い、原料及び得られた熱凝固物の成分を表１４及び表１５にそれぞれ示す。また、熱凝固物の脂質組成及び脂肪酸組成を表１６に示す。

オキアミ圧搾液熱凝固物の大量生産（１）
２００８年３月下旬に南極海にて漁獲した全長45mm以上のナンキョクオキアミ１０ｔを漁獲直後に採肉機（バーダー社製、型式ＢＡＡＤＥＲ６０５）にて圧搾し、圧搾液３ｔを得た。この圧搾液を瞬間加熱乾燥機（西村鐵工所製、ＣＤドライヤー ＣＤ−５００）にて処理し、熱凝固物を１０８０ｋｇ得た。得られた熱凝固物の成分を表１７、表１８に示す。乾重％とは全重量から水分重量を引いた重量あたりの各成分の重量％を示す（特に記載のある場合の除き、以下の実施例で同じ）。また同様の方法で独立に５回の実験を行い、同年３〜４月の間に生産した合計５ロットの平均値と標準偏差を表１７、表１８に示す。
なお、脂質組成はベンゼン：クロロホルム：酢酸＝150：60：1.5の展開溶媒により分離した各脂質成分を薄層自動検出装置（三菱化学ヤトロン社製、型式イアトロスキャン（登録商標）MK-6）を用いて定量した。また、脂肪酸組成は構成脂肪酸を三フッ化ホウ素中メチルエステル化してガスクロマトグラフィー（アジレント・テクノロジー社、型式６８９０Ｎ）により分析した。使用したガスクロマトグラフィー用カラムはJ&W Scientific社、ＤＢ−ＷＡＸ（型番１２２−７０３２）、キャリアガスはヘリウムを使用し、水素炎イオン化検出器で検出した。

オキアミ圧搾液熱凝固物の大量生産（２）
２００８年６月中旬に南極海にて漁獲した全長45mm以上のナンキョクオキアミ１０ｔを漁獲直後に採肉機（バーダー社製、型式ＢＡＡＤＥＲ６０５）にて圧搾し、圧搾液３ｔを得た。この圧搾液８００ｋｇをステンレスタンクに収納し、１４０℃の水蒸気を直接投入することにより加熱した。約６０分の加熱において８５℃達温を確認して加熱を停止した。タンク底部のバルブを開放し、目合い２ｍｍメッシュを通過する液状成分を自然落下により除去し、固形分（熱凝固物）は同量の水をシャワリングすることにより洗浄した後、アルミ製のトレイに１２ｋｇずつ収納してコンタクトフリーザにより急速冷凍した。得られた熱凝固物の成分を表１９、表２０に示す。また同様の実験を８回行い、同年５〜８月の間に生産した合計８ロットの平均値と標準偏差を表１９、表２０に示す。尚、表中ＴＧはトリグリセリド、ＦＦＡは遊離脂肪酸、ＰＬはリン脂質をそれぞれ表す。

熱凝固物の洗浄・乾燥
実施例１１で製造し、冷凍庫で３ヶ月保管した熱凝固物３００ｋｇをフローズンカッター（湘南産業社製、ＦＺ型）にて粉砕し、ナイロン袋（２０メッシュ）に収納した。これを７５℃の温水９００リットルに投入して６０分間漬け込んだ（終温度３６℃）。次いで遠心脱水機（タナベ製遠心分離機 Ｏ−３０、６０秒）で処理し、袋を７５℃温水９００リットル（新たに調製）に４０分間漬け込んだ（終温度６１℃）。このときの漬け込み液の塩分終濃度は屈折率計（ＡＴＡＧＯ社製）にて０．１２％と記録された。袋を再度遠心脱水機処理（１分）し、固形分（水分６７％）を袋から取り出した。これにトコフェロールを３００ｇ添加してミキサーにてよく混和し、６０℃の熱風にて撹拌しながら４時間乾燥した。その結果、最終品温５４℃、水分２．９％の洗浄・乾燥物４８．０８ｋｇを得た。得られた洗浄・乾燥物の成分を表２１、表２２に示す。また同様の実験を２７回行い、同工程で製造した洗浄・乾燥物合計２７ロットの分析値の平均値と標準偏差を表２１、表２２に示す。

熱凝固物の洗浄・乾燥
実施例１１で製造し、冷凍庫で３ヶ月保管した熱凝固物１トンを３０００リットルの水に投入し、これを撹拌しながら加熱して６５℃に達温後１０分保持した。２４メッシュナイロンを用いて水切りし、固形分を３０００リットルの水（２０℃）に投入した。１５分の撹拌後、２４メッシュナイロンにて水切りし、さらに遠心脱水機（タナベ製遠心分離機 Ｏ−３０、１５秒）で処理して固形分５６４ｋｇ（水分７３％）を得た。このものにトコフェロール１．５４ｋｇを添加し、ミキサーでよく混和し、熱風温度６０℃にて３．２時間乾燥し、洗浄・乾燥物１４８．４ｋｇを得た。得られた洗浄・乾燥物の成分を表２３、表２４に示す。

熱凝固物（未乾燥）の洗浄物からの脂質抽出
実施例１０で製造し、冷凍庫で3ヶ月保管した熱凝固物1トンをフローズンカッターにて粉砕し、８０〜９０℃の熱水３０００リットル中に投入した。これを温度を保持したまま３０分間撹拌し、６０メッシュにてろ過し、固形分ａを得た。固形分ａに対し、８０〜９０℃の熱水３０００リットルを添加し、温度を保持したまま３０分間撹拌し、さらに６０メッシュにて排水して固形分ｂを得た。同じ操作を繰り返し、固形分ｃを得て、再度同じ操作にて固形分ｄを得た。固形分ｄに対して、９２％エタノールを３０００リットル添加して、１５分間撹拌し、６０メッシュにて排液することにより固形分ｅおよびエタノール置換液Ｆを得た。固形分ｅに９２％エタノールを３０００リットル添加して常圧で２時間還流させ脂質を抽出した。脂質抽出液Ｇは６０メッシュにてろ過し、残渣Ｈを得た。残渣Ｈに対し、３０００リットルの９２％エタノールを添加して常圧で２時間還流させたのち６０メッシュで処理し、脂質抽出液Ｉおよび残渣Ｊを得た。エタノール置換液Ｆ、脂質抽出液Ｇ、脂質抽出液Ｉを合一して減圧濃縮機でエタノールおよび水を溜去し、抽出脂質８８ｋｇを得た。得られた抽出脂質の成分を表２５、表２５に示す。なお、表２５において水分はＡＯＡＣ国際基準法（第１８版）９８４．２０により測定し、またリン脂質は抽出脂質３００ｍｇをヘキサン溶液としてシリカゲルクロマトグラフィに供し、吸着画分をクロロホルムにて回収し、溶出させ溶媒を減圧溜去させた後に重量にて計測した。また固形分ａ、ｂの一部を分取して９２％エタノール添加以後の操作を行って比較用抽出液Ｋ、Ｌをそれぞれ得た。

熱凝固物の洗浄・乾燥物からの脂質抽出
実施例１３にて製造した洗浄・乾燥物２９９．６ｋｇに９９％エタノール１２００リットルを添加し、６０℃に加温して２時間撹拌した。その後ナイロンの１００メッシュを用い自然落下法により固液分離して抽出液Ａおよび抽出粕ａを得た。抽出粕ａに９９％エタノール８００リットルを添加し、６０℃に加温して２時間撹拌後ナイロン１００メッシュを用いて固液分離し、抽出液Ｂおよび抽出粕ｂを得た。抽出粕ｂに９９％エタノール７００リットルを添加し、６０℃に加温して２時間撹拌後ナイロン１００メッシュを用いて固液分離し、抽出液Ｃおよび３９０ｋｇ（うち１０５℃、４時間の乾燥減量は６１．８％）の抽出粕ｃを得た。抽出液Ａ、抽出液Ｂ及び抽出液Ｃを合一すると２０８９ｋｇとなった。これを液温６０℃以下で減圧濃縮し、エタノールおよび水を溜去し、抽出脂質１４１．６ｋｇを得た。得られた抽出脂質の成分を表２７、表２８に示す。

熱凝固物の洗浄・乾燥物からの脂質抽出
実施例１２にて製造した熱凝固物の洗浄・乾燥物７０ｋｇに対し、９５％エタノール２１０リットルを加え、５０℃にて２時間撹拌した。これを６０メッシュ自然落下法により固液分離して、抽出液Ａおよび固形分ａを得た。固形分ａに対し９５％エタノール２１０Ｌを加え、５０℃にて２時間撹拌した。これを６０メッシュ自然落下法により固液分離して、抽出液Ｂおよび固形分ｂを得た。固形分ｂに対し９５％エタノール２１０Ｌを加え、５０℃にて２時間撹拌した。これを６０メッシュ自然落下法により固液分離して、抽出液Ｃおよび固形分ｃ（抽出残渣：５８．７ｋｇ）を得た。抽出液Ａ、抽出液Ｂ及び抽出液Ｃを合一し、ろ紙にて微小な固形分を排除したものを減圧濃縮し、抽出脂質２４．０ｋｇを得た。この抽出脂質の成分を表２９、表３０に示す。

オキアミ圧搾液熱凝固物の脂質重量比較
２００８年６〜７月に南極海にて漁獲し、冷凍したオキアミ（生冷）を室温で解凍した。このオキアミを30メッシュのナイロンシーブを用いて圧搾し、全重量に対して5〜53重量%の圧搾液を得るような圧搾率で圧搾した。得られた各圧搾液を85℃以上で5分間加熱し、熱凝固物を調製した。また圧搾率５０％の圧搾液から得られた熱凝固物を４倍量の水で２回洗浄し、得られた洗浄物を６０℃の熱風にて撹拌しながら４時間乾燥して、熱凝固物の洗浄・乾燥物を得た。各熱凝固物の分析値を表３１に示す。表中の脂質、タンパク質、灰分は全体重量に対しての重量%を示し、熱凝固物の水分についてはこれらを全体100％から引いたものとして計算した。各脂質組成は全脂質に対しての各組成成分の重量%を示す。総脂質は全体固形分すなわち、脂質とタンパク質と灰分を足した重量に対しての脂質の重量%を示す。

非特許文献５に記載の「Okean（乾燥ペースト）」では脂質含量23.0%〜28.4%であるのに対して、圧搾加熱凝集物の総脂質含量（乾燥物）は34.4%〜48.4%であることが分かり、圧搾加熱凝集物の脂質含量が非常に高いことが分かる。
また、水洗いにより水溶性のタンパク質と灰分が洗い流されるため、固形分あたりの脂質の重量%は水洗い前より増加していることが分かる。

オキアミ臭及び悪臭の元の分析
実施例１０に示した加熱凝集物（乾燥）Fを原料にし、99.8%エタノール（9倍量）を用いることによりオキアミ油を抽出した。
この抽出油に15倍量の蒸留水を加えて加熱し、生じた水蒸気を捕集した後にPorapakQ（Waters社製、50〜80mesh）に吸着させ、エチルエーエーテルにより溶出させてオキアミ臭気サンプルとした。
更にこのオキアミ臭気サンプルを表３２の条件に設定したGCを用いて匂い嗅ぎ法（スニッフィング）によりオキアミ臭気成分の画分を確認した。

その結果、図１のようなクロマトグラムが得られ、匂い嗅ぎでは表３３に示すように特にフラクション（Fr）3と4にオキアミ特有の臭気を感じた。

抽出した脂質の官能検査
実施例１８で抽出したオキアミ油をサンプル１、オキアミ臭気サンプルをサンプル２、実施例１４で抽出した脂質をサンプル３、実施例１５で抽出した脂質をサンプル４、実施例１６で抽出した脂質をサンプル５とし、それぞれ50mlずつバイアル瓶に入れ、臭いの評価を６人の被験者で官能検査を行った。結果を表３４に示す。

この結果からオキアミから脂質を抽出した際に出てくるオキアミ臭及び悪臭は、抽出油を過熱水蒸気で抽出した際に PorapakQ カラムで捕捉される成分であり、オキアミ臭及び悪臭のもとは熱凝固物を脂質抽出する前に水洗いすることにより除去できるものと考えられた。

本発明は、リン脂質を豊富に含む脂質を簡便且つ安価に製造する方法として有用である。又、該方法により抽出した脂質、甲殻類を由来とする有用な脂質を豊富に含む組成物は、医薬原料、食品素材、あるいは飼料原料等として有用である。

Claims (10)

1. 甲殻類全体またはその部分を、湿重量の５〜５０％に相当する量の圧搾液を得るように圧搾して得られる圧搾液を得、圧搾液に含まれるタンパク質が凝固する温度に圧搾液を加熱し、脂質成分を含む固形分と水溶性成分を含む水分とを固液分離し、得られた脂質含有固形分又はそれを乾燥させた脂質含有乾燥物を水洗いし、脱水及び／又は乾燥した後、それら脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物から脂質を抽出することを特徴とする脂質の製造方法。
2. 水洗いにおいて脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物の乾物重量あたり４倍以上の水を用いるものである請求項１の方法。
3. 水洗いを２回以上行う請求項１又は２の方法。
4. 脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物を直径１ｃｍ以上１０ｃｍ以下に裁断して水洗いを行う請求項１乃至３いずれかの方法。
5. 水洗い及び／又は脱水を脂質含有固形分又は脂質含有乾燥物をメッシュバッグに入れて行う請求項１乃至４いずれかの方法。
6. 分子量100〜200の揮発成分を吸着する吸着剤で吸着される成分の匂いが感知できない程度、水洗いを行うことを特徴とする請求項１乃至５いずれかの方法。
7. 脂質含有乾燥物の乾物重量あたりの灰分が５％以下になる程度、水洗いすることを特徴とする請求項１乃至５いずれかの方法。
8. 脂質を抽出する方法が、有機溶媒抽出、酵素処理した後有機溶媒抽出、超臨界抽出のいずれかの方法によることを特徴とする請求項１乃至７いずれかの方法。
9. 甲殻類がオキアミ目に属する甲殻類である、請求項１乃至８いずれかの方法。
10. 請求項１乃至９いずれか記載の方法により得た脂質含有組成物。
    

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