JP5679458B2

JP5679458B2 - 内臓脂肪重量の低下剤

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Publication number: JP5679458B2
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Inventors: 俊明滝沢; 村上　健太郎; 健太郎村上
Original assignee: Kowa Co Ltd
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Filing date: 2010-09-27
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Description

本発明は、ペルオキシゾーム増殖剤応答性受容体（ＰＰＡＲ；ＰｅｒｏｘｉｓｏｍｅＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ−ＡｃｔｉｖａｔｅｄＲｅｃｅｐｔｏｒ）のうちαタイプ（ＰＰＡＲα）を選択的に活性化する化合物（１）を有効成分とするＦＧＦ２１産生促進剤、内臓脂肪重量の低下剤、並びに肥満、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療剤に関する。

ＰＰＡＲは核内受容体ファミリーに属する受容体の一つである。ＰＰＡＲは標的遺伝子の特定の部位（ＰＰＲＥ：ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔｓ）に結合し、遺伝子の転写を正または負に調節する。この受容体には現在までに３つのサブタイプ（α、γ、δ）の存在が知られている（非特許文献１）。

これらのうち、ＰＰＡＲαは主に肝臓に発現しており、ＰＰＡＲαが活性化されるとリポプロティンリパーゼ（ＬＰＬ）の阻害タンパクであるアポＣ−ＩＩＩの産生が抑制され、次いでＬＰＬが活性化されて、その結果、脂肪が分解される。
ＰＰＡＲαアゴニストとしては、不飽和脂肪酸やフィブラート系薬剤、例えばフェノフィブラート、ベザフィブラート、ゲムフィブロジル等の薬剤が知られている（非特許文献２）。ＰＰＡＲαアゴニストは、脂肪酸のβ酸化に関与するアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）やカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ１（ＣＰＴ−１）を活性化することも報告されている。

一方、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦｓ：Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓ）は、アミノ酸配列の相同性からヒトにおいて現在２２種類存在することが明らかにされている（特許文献１）。その作用は、単に線維芽細胞に対する増殖活性のみならず、形態形成、血管形成、腫瘍形成、創傷治癒、神経生存維持、代謝調節等多様な生命現象に深く関与していることが知られている（非特許文献３−４）。ＮｉｓｈｉｍｕｒａらがヒトＦＧＦ２１を同定したこと（非特許文献５）を契機として、ＦＧＦ２１が、脂肪の分解促進と蓄積の抑制、高コレステロール血症、糖尿病（高血糖、インスリン抵抗性）及び肥満を改善することが報告されている（非特許文献６）。

Ｉｔｏらは、ゼブラフィシュにおいてＦＧＦ２１の機能を抑制し、その形質を解析したところ、当該ゼブラフィシュでは赤血球が消失又は減少すること、並びにこの赤血球の消失又は減少は、造血幹細胞の赤血球−骨髄球系列細胞への分化の抑制によるものであることを見出した（非特許文献７）。また、ゼブラフィシュにおけるＦＧＦ２１の機能抑制より、造血幹細胞のリンパ球系列細胞への分化が促進し得ることを見出した。
従って、ＦＧＦ２１は、造血幹細胞の赤血球−骨髄球系列細胞（例えば、赤血球、巨核球、好酸球、好中球、好塩基球、単球、樹状細胞）への分化、あるいは造血幹細胞のリンパ球系列細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞）への分化を制御し得ると考えられる。また、ＦＧＦ２１の発現又は機能を調節する物質は、造血幹細胞の赤血球−骨髄球系列細胞又はリンパ球系列細胞への分化調節能を有し、血液細胞の異常に起因する疾患（例えば、造血疾患、免疫疾患、アレルギー疾患）に対する医薬あるいは研究用試薬の開発などに有用であることが報告されている（特許文献１）。

ＦＧＦ２１の産生を促進する物質としてＰＰＡＲαアゴニストの一つであるフェノフィブラートが知られ、フェノフィブラート製剤を２週間、高トリグリセライド血症患者に投与することにより、ＦＧＦ２１の血清中濃度が２８％上昇したことが報告されている（非特許文献８）。しかし、フェノフィブラートにより内臓脂肪重量の低下作用を発現させるには、より高用量の投与が必要であるが、フェノフィブラートは高用量投与するとヘモグロビン量の減少、肝細胞の壊死などの有害事象を発現することがラットのモデルで報告されており（非特許文献９）、高用量投与には限界がある。実際に、臨床に於いてフェノフィブラート投与により内臓脂肪重量が低下したとの報告はない。

また、近年、フィブラート系薬剤よりも強力且つ選択的にＰＰＡＲα活性化作用をもつ化合物が報告されている（特許文献２〜１１）が、これらの化合物がＦＧＦ２１の産生を促進するとの報告はなく、また、内臓脂肪重量の低下作用を有するとの報告もない。
これまでに血中のＦＧＦ２１濃度を著明に増加させる方法としては、ＦＧＦ２１タンパク質の注射（非特許文献１０）、ＦＧＦ２１遺伝子の導入（非特許文献１１）あるいはＦＧＦ２１の発現を促進するもうひとつの転写因子ＣＲＥＢ−Ｈを遺伝子導入により活性化する方法（非特許文献１２）が報告されているのみである。しかも、これらの方法は、安全性が確立されていない。特に、ＦＧＦ２１遺伝子の導入やＣＲＥＢ−Ｈ遺伝子の導入には、ベクターを用いる必要があり、もしヒトに用いた場合には、高い確率で副作用が発現すると考えられる。

肥満には、皮下に脂肪がたまるタイプの皮下脂肪型肥満、内臓の周りに脂肪がたまるタイプの内臓脂肪型肥満、見た目は標準だが体脂肪率が高いタイプの隠れ肥満等がある。メタボリックシンドロームとして問題になるのは特に内臓脂肪型肥満であり、重大な疾患に進みやすい危険性をはらんでいる。従って、内臓脂肪重量の低下作用を有する化合物は、肥満、とりわけ内臓脂肪型肥満やメタボリックシンドロームの予防又は治療剤として有用である可能性がある。以上のことから、副作用を伴わない内臓脂肪重量の低下剤が求められている。

特開２００６−２４６８２３号公報ＷＯ２００５／０２３７７７号パンフレットＷＯ２００９／０８０２４８号パンフレットＷＯ２００９／０４７２４０号パンフレットＷＯ２００８／００６０４３号パンフレットＷＯ２００６／０４９２３２号パンフレットＷＯ２００６／０３３８９１号パンフレットＷＯ２００５／００９９４２号パンフレットＷＯ２００４／１０３９９７号パンフレットＷＯ２００５／０９７７８４号パンフレットＷＯ２００３／０４３９９７号パンフレット

Ｊ．ＬｉｐｉｄＲｅｓｅａｒｃｈ３７，９０７−９２５（１９９６）ＴｒｅｎｄｓｉｎＥｎｄｏｃｌｉｎｏｌｏｇｙＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ１５，３２４−３３０（２００４）ＧｅｎｏｍｅＢｉｏｌ．２１，ＲＥＶＩＥＷ，３００５（２００１）ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．２０，５６３−５６９（２００４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１４９２，２０３−２０６（２０００）Ｂｉｏｄｒｕｇｓ，２２（１），３７−４４（２００８）ＥＭＢＯＲｅｐ．７，６４９−５４（２００６）ＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ，８，１６９−１７４（２００８）Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．２３，１５−３６（１９９５）Ｄｉａｂｅｔｅｓ，５８，２５０−２５９（２００９）ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ１１５，１６２７−１６３５（２００５）糖尿病５２（Ｓｕｐｐｌ．１），Ｓ−１５７（２００９）第２４回日本糖尿病学会、２００９年抄録

本発明の課題は、副作用が少なく、ＦＧＦ２１の産生を促進し、内臓脂肪重量を低下させ、肥満並びにメタボリックシンドロームの予防及び／又は治療に有用な薬剤を提供することにある。

本発明者らは、斯かる実情に鑑み、鋭意研究した結果、前記特許文献２において、選択的なＰＰＡＲα活性化作用を有し、ヒトを含む哺乳類における体重増加や肥満を伴わない、高脂血症、動脈硬化症、糖尿病、糖尿病合併症（糖尿病性腎症等）、炎症、心疾患等の予防及び／又は治療薬として有用であることが開示されている下記一般式（１）で表されるフェノキシ酢酸誘導体又はその塩が、血漿中のＦＧＦ２１濃度を有意に上昇させ、さらには内臓脂肪重量を低下させる効果に優れることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、次の一般式（１）：

（式中、Ｒ^１及びＲ^２は同一又は異なって水素原子、メチル基又はエチル基を示し；Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂは同一又は異なって水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、水酸基、Ｃ_１−４アルキル基、トリフルオロメチル基、Ｃ_１−４アルコキシ基、Ｃ_１−４アルキルカルボニルオキシ基、ジ−Ｃ_１−４アルキルアミノ基、Ｃ_１−４アルキルスルフォニルオキシ基、Ｃ_１−４アルキルスルフォニル基、Ｃ_１−４アルキルスルフィニル基、又はＣ_１−４アルキルチオ基を示すか、Ｒ^３ａとＲ^３ｂあるいはＲ^４ａとＲ^４ｂが結合してアルキレンジオキシ基を示し；Ｘは酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ^５（Ｒ^５は水素原子、Ｃ_１−４アルキル基、Ｃ_１−４アルキルスルフォニル基、Ｃ_１−４アルキルオキシカルボニル基を示す）を示し；Ｙは酸素原子、Ｓ（Ｏ）_ｌ基（ｌは０〜２の数を示す）、カルボニル基、カルボニルアミノ基、アミノカルボニル基、スルフォニルアミノ基、アミノスルフォニル基、又はＮＨ基を示し；ＺはＣＨ又はＮを示し；ｎは１〜６の数を示し；ｍは２〜６の数を示す。）
で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とするＦＧＦ２１産生促進剤を提供するものである。
また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とする、内臓脂肪重量の低下剤を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とする肥満の予防及び／又は治療剤を提供するものである。より詳細には、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とする内臓脂肪型肥満の予防及び／又は治療剤を提供するものである。

さらに、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を有効成分とするメタボリックシンドロームの予防及び／又は治療剤を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする、ＦＧＦ２１の産生促進方法を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする、内臓脂肪重量の低下方法を提供するものである。

また、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする、肥満の予防及び／又は治療方法を提供するものである。より詳細には、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする、内臓脂肪型肥満の予防及び／又は治療方法を提供するものである。

さらに、本発明は、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の有効量を投与することを特徴とする、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療方法を提供するものである。

また、本発明は、ＦＧＦ２１の産生促進剤を製造するための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の使用を提供するものである。

また、本発明は、内臓脂肪重量の低下剤を製造するための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の使用を提供するものである。

また、本発明は、肥満の予防及び／又は治療剤を製造するための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の使用を提供するものである。より詳細には、内臓脂肪型肥満の予防及び／又は治療剤を製造するための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の使用を提供するものである。

また、本発明は、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療剤を製造するための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物の使用を提供するものである。
また、本発明は、ＦＧＦ２１産生促進のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を提供するものである。
また、本発明は、内臓脂肪重量の低下のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を提供するものである。
また、本発明は、肥満、より詳細には、内臓脂肪型肥満の予防及び／又は治療のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を提供するものである。
さらに、本発明は、メタボリックシンドロームの予防及び／又は治療のための、前記一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物を提供するものである。

本発明の薬剤は、優れたＦＧＦ２１の産生促進作用及び内臓脂肪重量の低下作用を有し、且つ安全性も高いため、肥満、とりわけ内臓脂肪型肥満や、その上流に位置するメタボリックシンドロームの予防及び／又は治療に有用である。

化合物Ａ及びフェノフィブラートの血漿中トリグリセリド（ＴＧ）に対する作用を示す図である。化合物Ａ及びフェノフィブラートの血漿中ＦＧＦ２１に対する作用を示す図である。化合物Ａ及びフェノフィブラートにおける血漿中ＦＧＦ２１濃度と血漿トリグリセリド（ＴＧ）値との相関を示す図である。化合物Ａ及びフェノフィブラートの精巣上体脂肪重量に対する作用を示す図である。

一般式（１）中、Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子等が挙げられる。このうちフッ素原子と塩素原子が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ、Ｒ^４ｂ及びＲ^５のＣ_１−４アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ブチル基等が挙げられる。このうちメチル基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのＣ_１−４アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、ｎ−プロポキシ基、イソプロポキシ基、ブトキシ基等が挙げられる。このうちメトキシ基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのＣ_１−４アルキルカルボニルオキシ基としては、メチルカルボニルオキシ基、エチルカルボニルオキシ基、ｎ−プロピルカルボニルオキシ基、イソプロピルカルボニルオキシ基、ブチルカルボニルオキシ基等が挙げられる。このうちメチルカルボニルオキシ基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのジ−Ｃ_１−４アルキルアミノ基としては、ジメチルアミノ基、ジエチルアミノ基、ジイソプロピルアミノ基等が挙げられる。このうちジメチルアミノ基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのＣ_１−４アルキルスルフォニルオキシ基としては、メチルスルフォニルオキシ基、エチルスルフォニルオキシ基等が挙げられる。このうちメチルスルフォニルオキシ基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ、Ｒ^４ｂ及びＲ^５のＣ_１−４アルキルスルフォニル基としては、メチルスルフォニル基、エチルスルフォニル基等が挙げられる。このうちメチルスルフォニル基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのＣ_１−４アルキルスルフィニル基としては、メチルスルフィニル基、エチルスルフィニル基等が挙げられる。このうちメチルスルフィニル基が特に好ましい。

Ｒ^３ａ、Ｒ^３ｂ、Ｒ^４ａ及びＲ^４ｂのＣ_１−４アルキルチオ基としては、メチルチオ基、エチルチオ基等が挙げられる。このうちメチルチオ基が特に好ましい。

Ｒ^３ａとＲ^３ｂあるいはＲ^４ａとＲ^４ｂが結合してできるアルキレンジオキシ基としては、メチレンジオキシ基、エチレンジオキシ基等が挙げられる。このうちメチレンジオキシ基が特に好ましい。

Ｒ^５のＣ_１−４アルキルオキシカルボニル基としては、メチルオキシカルボニル基、エチルオキシカルボニル基等が挙げられる。このうちメチルオキシカルボニル基が特に好ましい。

Ｒ^１及びＲ^２としては、同時に水素原子であるか、同時にメチル基である場合、又はそれぞれメチル基と水素原子、エチル基と水素原子である場合が特に好ましい。

Ｘは酸素原子、硫黄原子又はＮ−Ｒ^５を示すが、酸素原子が好ましい。また、Ｙは酸素原子、Ｓ（Ｏ）_ｌ、カルボニル基、カルボニルアミノ基、アミノカルボニル基、スルフォニルアミノ基、アミノスルフォニル基又はＮＨ基を示すが、酸素原子が好ましい。ＺはＣＨ又はＮを示すが、ＣＨが好ましい。ｌは０〜２の数を示すが、２が好ましい。ｎは１〜６の数を示すが、１〜３の数が好ましい。ｍは２〜６の数を示すが、２〜４、特に２又は３が好ましい。

本発明化合物のうち、より好ましい化合物としては、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、又は（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸を挙げることができる。

本発明の一般式（１）で表される化合物は、例えば、ＷＯ２００５／０２３７７７号パンフレットに記載の方法に従って製造することができる。

また、本発明では一般式（１）で表される化合物の塩若しくは溶媒和物を用いることもできる。塩及び溶媒物は常法により、製造することができる。

本発明の一般式（１）で表される化合物の塩としては、薬学的に許容できるものであれば特に制限はないが、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩；アンモニウム塩、トリアルキルアミン塩等の有機塩基塩；塩酸塩、硫酸塩等の鉱酸塩；酢酸塩等の有機酸塩等が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表される化合物若しくはその塩の溶媒和物としては、水和物、アルコール和物（例えば、エタノール和物）等が挙げられる。

本発明の一般式（１）で表される化合物は不斉炭素を有しているためＲ体及びＳ体の光学異性体が存在するが、それらはすべて本発明に包含される。

後述する実施例において示されるように、前記一般式（１）で表される化合物は、多食による肥満を伴い高脂血症を呈するＺｕｃｋｅｒｆａｔｔｙラットを用いた評価系及びＫＫ−Ａｙマウスを用いた評価系において、血漿中トリグリセリドを顕著に低下させ、ＦＧＦ２１濃度を有意に上昇させる作用を示した。また、内臓脂肪重量を有意に低下させた。従って、本発明の薬剤は、肥満、とりわけ内臓脂肪型肥満や、その上流に位置するメタボリックシンドロームの予防及び／又は治療に有用である。

本発明の一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物は単独又は他の薬学的に許容される担体を用いて、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、粉末剤、ローション剤、軟膏剤、注射剤、座剤等の剤型とすることができる。これらの製剤は、公知の方法で製造することができる。例えば、経口投与用製剤とする場合には、トラガントガム、アラビアガム、ショ糖脂肪酸エステル、レシチン、オリーブ油、大豆油、ＰＥＧ４００等の溶解剤；澱粉、マンニトール、乳糖等の賦形剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤；結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤；タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて処方することにより製造することができる。

本発明の一般式（１）で表される化合物、若しくはその塩又はこれらの溶媒和物は、経口投与又は非経口投与により投与される。本発明の医薬の投与量は、患者の体重、年齢、性別、症状等によって異なるが、通常成人の場合、化合物（１）として一日０．０１〜１０００ｍｇ、好ましくは０．１〜１００ｍｇを１〜３回に分けて投与するのが好ましい。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定されるものではない。

実施例１Ｚｕｃｋｅｒｆａｔｔｙラットに対する作用
本試験には、前記特許文献２に実施例１４として開示されている化合物の光学活性体である、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸（以下、化合物Ａと表記する）を使用した。化合物Ａ及びフェノフィブラートをＺｕｃｋｅｒｆａｔｔｙラットに投与したときの血漿中トリグリセリド（ＴＧ）、血漿中ＦＧＦ２１濃度、及び精巣上体脂肪重量に対する効果を、次法に従って測定した。

１．供試動物及び飼育環境
多食による肥満を伴い高脂血症を呈するＺｕｃｋｅｒｆａｔｔｙラット（Ｃｒｌｊ：ＺＵＣ−Ｌｅｐｒ＜ｆａ＞Ｇｅｎｏｔｙｐｅ：ｆａ／ｆａ）及び肥満を呈さないＺｕｃｋｅｒｌｅａｎラット（Ｃｒｌｊ：ＺＵＣ−Ｌｅｐｒ＜ｆａ＞Ｇｅｎｏｔｙｐｅ：ｆａ／＋ｏｒ＋／＋）を日本チャールス・リバー株式会社より購入し、８週齢で供試した。
実験期間を通じて、明暗サイクル（室内光による明るい期間：午前７時〜午後７時）、温度２３±３℃、湿度５５±１５％に維持された飼育室で飼育し、固形飼料（ＣＥ−２；オリエンタル酵母工業（株））及び水道水を自由摂取させた。

２．薬物調製
化合物Ａ及びフェノフィブラートのそれぞれを、メチルセルロース（メトローズ（商標登録）、ＳＭ−４００、信越化学工業（株））の０．５質量％水溶液に懸濁し、水溶液の投与量が２ｍＬ／ｋｇになるように調製した。懸濁液は遮光ビンにて冷蔵（４℃）保存し、調製は７日ごとに行った。

３．試験方法
ラットを体重、血漿中総コレステロール濃度及びトリグリセライド濃度が平均化されるように、以下の４群（各群６匹）、すなわち、第一群として対照群、第二群として化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）投与群、第三群として化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、第四群としてフェノフィブラート（３００ｍｇ／ｋｇ）投与群に群分けした。また、陰性対照群としてｚｕｃｋｅｒｌｅａｎｒａｔ（５匹）を用いた。
各薬剤は、１日１回（午前中）に１４日間反復経口投与した。第一群の対照群には、メチルセルロース０．５質量％水溶液２ｍＬ／ｋｇを経口投与した。
投与開始から１４日目に、投与より４時間絶食した後、採血を行い、血漿中のトリグリセライド濃度を酵素法により、ＦＧＦ２１濃度をＥＬＩＳＡ法（ＨｕｍａｎＦＧＦ−２１ＥＬＩＳＡＫｉｔ，Ｂｉｏｖｅｎｄｅｒ社）にて測定した。採血の翌日、麻酔下に開腹後、精巣脂肪上体脂肪を摘出し、その重量を測定した。なお、精巣上体脂肪重量は、内臓脂肪の全体重量と高く相関していることから、薬剤の内臓脂肪重量を評価するための指標として使用される（ＦＡＳＥＢＪ．２０，１２０３−１２０５（２００６））。

４．統計解析及びデータ処理法
結果は、平均値±標準誤差で示した。対照群とＺｕｃｋｅｒｌｅａｎラットとの比較はｕｎｐａｉｒｅｄＳｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ−ｔｅｓｔで行い、対照群と薬物投与群との比較はＤｕｎｎｅｔｔの多重比較検定またはＴｕｋｅｙの多重比較検定で行い、危険率５％未満を有意差ありと判定した。

５．試験結果
図１に血漿中トリグリセライドの濃度を示す。横軸は左側から第一群の対照群、第二群の化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）投与群、第三群の化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、第四群のフェノフィブラート（３００ｍｇ／ｋｇ）投与群、及び陰性対照群（ｚｕｃｋｅｒｌｅａｎｒａｔ）である。図１中の＊印はｐ＜０．０５、＃はｐ＜０．００１で有意差があることを示している。
その結果、血漿中のトリグリセライド濃度は、第三群では対照群に比べて大幅な低下が認められ、危険率ｐ＜０．０５で明らかな血漿トリグリセライド低下作用を示した。一方、第四群では僅かに低下傾向を示すに過ぎなかった。

図２に血漿中ＦＧＦ２１の濃度を示す。横軸は左側から第一群の対照群、第二群の化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）投与群、第三群の化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、第四群のフェノフィブラート（３００ｍｇ／ｋｇ）投与群、及び陰性対照群（ｚｕｃｋｅｒｌｅａｎｒａｔ）である。図２中の＊＊＊印はｐ＜０．００１で有意差があることを示している。
その結果、血漿中のＦＧＦ２１濃度は、第三群では対照群に比べて大幅な上昇が認められ、危険率ｐ＜０．００１で明らかな血漿ＦＧＦ２１産生促進作用を示した。一方、第四群では対照群に比して僅かに上昇傾向を示すに過ぎなかった（Ｐ＝０．２）。

図３に、血漿中トリグリセライド濃度と血漿中ＦＧＦ２１濃度の相関関係を調べた結果を示す。その結果、両者の間には有意な負の相関が認められた。
以上のデータが示すように、本モデル動物において化合物Ａは血漿中のＴＧを低下させ、新規の糖・脂質代謝改善因子であるＦＧＦ２１の発現を著しく増大させる作用を有することが確認され、化合物Ａは高度な脂質代謝異常を有する病態でも血漿中のＦＧＦ２１濃度を増大させて脂質代謝を改善できる可能性が示唆された。

図４に内臓脂肪重量の指標である、精巣上体脂肪重量の測定結果を示す。その結果、化合物Ａ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群において、対照群に比べて強力で、なおかつ統計学的にも有意な精巣上体脂肪重量の低下が認められた（＊：ｐ＜０．０５）。また、投与期間中に特に有害事象は確認されなかった。一方、フェノフィブラートの精巣上体脂肪重量に対する効果は僅かであり、統計学的な有意差も認められなかった。ところで、フェノフィブラートはラットに３０ｍｇ／ｋｇ以上の投与で種々の有害事象が発現することが報告されている（非特許文献９）。ラットの摂餌量を検討したところ、フェノフィブラート３００ｍｇ／ｋｇを投与した群において、投与から１０日間は対照群と同等であったが、１１日後から１４日後における摂餌量が１４％低下したことから、毒性が懸念された。しかし、このような状態であっても脂肪重量は僅かに減少する傾向を示すに留まった。
以上のことから、化合物ＡがＦＧＦ２１を著明に増加させ、なおかつ、その結果として、内臓脂肪重量を強力に低下させることが確認された。さらに、これらの効果が既存のフィブラート、すなわちＰＰＡＲαアゴニストで最も優れているフェノフィブラートと比較しても、明らかに強力であり、高い安全性を示すことが確認された。

実施例２ＫＫ−Ａｙマウスに対する内臓脂肪重量低下作用
本試験には、前記化合物Ａ、及び前記特許文献２に実施例２２９として開示されている化合物の光学活性体である、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸（以下、化合物Ｂと表記する）を使用した。化合物Ａ、化合物Ｂ及びフェノフィブラートをＫＫ−Ａｙマウスに投与したときの精巣上体脂肪重量、腸間膜脂肪重量に対する効果を、次法に従って測定した。

１．供試動物及び飼育環境
方法：雄性ＫＫ−Ａｙマウス（ＫＫ−Ａｙ／ＴａＪｃｌ）を日本クレアより購入し、１０週齢で供試した。マウスに化合物を４週間、１日１回経口投与した。実験期間を通じて、明暗サイクル（室内光による明るい期間：午前７時〜午後７時）、温度２３±３℃、湿度５５±１５％に維持された飼育室で飼育し、固形飼料（ＣＥ−２；オリエンタル酵母工業（株））及び水道水を自由摂取させた。

２．薬物調製
化合物Ａ、Ｂ及びフェノフィブラートのそれぞれを、メチルセルロース（メトローズ（商標登録）、ＳＭ−４００、信越化学工業（株））の０．５質量％水溶液に懸濁し、水溶液の投与量が５ｍＬ／ｋｇになるように調製した。懸濁液は遮光ビンにて冷蔵（４℃）保存し、調製は７日ごとに行った。

３．試験方法
動物を、以下の４群（各群６匹）、すなわち、第一群として対照群、第二群として化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）投与群、第三群として化合物Ｂ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群、第四群としてフェノフィブラート（３００ｍｇ／ｋｇ）投与群に群分けした。
各薬剤は、１日１回（午前中）に３５日間反復経口投与した。第一群の対照群には、メチルセルロース０．５質量％水溶液５ｍＬ／ｋｇを経口投与した。
投与終了後に、精巣上体脂肪及び腸間膜脂肪を摘出し、重量を測定した。

４．計解析及びデータ処理法
結果は、対照群における脂肪重量に対する各化合物投与群における脂肪重量の低下率について、平均値で示した。

５．試験結果
表１に結果を示す。化合物Ａ（１ｍｇ／ｋｇ）投与群及び化合物Ｂ（３ｍｇ／ｋｇ）投与群は、フェノフィブラート（３００ｍｇ／ｋｇ）投与群よりも強力な脂肪重量の低下作用を有していた。なお、化合物Ａ及び化合物Ｂの投与期間中に特に有害事象は確認されなかった。

Claims

（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、これらの塩及びこれらの溶媒和物から選ばれる化合物を有効成分とするＦＧＦ２１産生促進剤。
（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、これらの塩及びこれらの溶媒和物から選ばれる化合物を有効成分とする内臓脂肪重量の低下剤。
（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、これらの塩及びこれらの溶媒和物から選ばれる化合物、並びに薬学的に許容される担体を含有してなるＦＧＦ２１産生促進用医薬組成物。
（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（ベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−３−（４−メトキシフェノキシ）プロピル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、（Ｒ）−２−［３−［［Ｎ−（５−フルオロベンズオキサゾール−２−イル）−Ｎ−２−フェノキシエチル］アミノメチル］フェノキシ］酪酸、これらの塩及びこれらの溶媒和物から選ばれる化合物、並びに薬学的に許容される担体を含有してなる内臓脂肪重量の低下用医薬組成物。