JP5611755B2 - ＴＧＦ−β抑制剤 - Google Patents

Description

本発明は、サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするＴＧＦ−β抑制剤に関する。より具体的には、ＴＧＦ−βの作用を抑制することにより、ケロイド及び肥厚性瘢痕の、治療及び予防につながる薬剤に関する。

ＴＧＦ（Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ）−βは、ＴＧＦ−βスーパーファミリーに属するサイトカインの一種であり、極めて多様な作用を持つことが知られている。主な機能としては、様々な細胞の増殖及び分化の制御（非特許文献１）や、線維芽細胞における種々の細胞外マトリックスタンパク、例えばコラーゲン等の産生亢進（非特許文献２）等が挙げられる。

ＴＧＦ−βは、生体の恒常性維持に非常に重要な役割を持つが、ＴＧＦ−βシグナルの異常によって強皮症や皮膚硬化症、種々の線維症等の様々な疾患を引き起こすことが知られている。これらの疾患に共通する原因としては、過度のＴＧＦ−βシグナルによって、過剰な組織の線維化が誘導されるためと考えられている。

ケロイド及び肥厚性瘢痕は、皮膚損傷後の過剰な組織修復反応の結果、創面が***する結合組織の肥大増殖症を指す。非損傷組織と比較すると、外観及び内部構造共に異常であり、症状がひどい場合は、赤みを帯びたり、強い痒み、痛み及び突っ張り感等を感じることもある。

ケロイド及び肥厚性瘢痕では、過剰な結合組織が蓄積していることから、結合組織の主成分であるコラーゲンの産生亢進に関わるＴＧＦ−βとの関連が示唆されている（非特許文献３）。よって、過度のＴＧＦ−βシグナルを抑制することは、ケロイド及び肥厚性瘢痕の治療に重要であると考えられる。

従来、ＴＧＦ−βを抑制する方法としては、シクロプロパンカルボン酸アミド化合物又は製薬学的に許容されるその塩を有効成分とするＴＧＦ−β作用抑制剤（特許文献１）、ＴＧＦ−β阻害活性を有するキノリン誘導体及びキナゾリン誘導体を含む医薬組成物（特許文献２）等の技術が報告されている。

しかし、これらの技術は副作用の危険を伴うこと、効果が十分ではないこと、又は、開発に多額のコストがかかること等から、より安全で効果の高いＴＧＦ−β抑制剤の開発が望まれている。

一方、サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスのＴＧＦ−β抑制効果については報告がなされていない。

特開２００４−３５４７５号 ＷＯ２００４／０１８４３０号

Ｍａｓｓａｇｕｅ Ｊ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．８３：８２０６−１０，１９８６． Ｒｏｂｅｒｔｓ ＡＢ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．８３：４１６７−７１，１９８６． Ｃａｍｐａｎｅｒ ＡＢ．Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１２６：１１６８−７６，２００６．

本発明は、過度のＴＧＦ−βシグナルにより誘導されるケロイド及び肥厚性瘢痕を、治療及び予防する効果を有する、より安全で効果の高い薬剤を提供することを課題とする。

本発明者らは、この問題点を解決すべく、鋭意研究を重ねた結果、サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスに優れたＴＧＦ−β抑制効果を発見し、本発明を完成するに至った。本発明は、過度のＴＧＦ−βシグナルにより誘導されるケロイド及び肥厚性瘢痕に対して、ＴＧＦ−βシグナルを抑制することで、治療及び予防し、並びに患部における強い痒み及び痛み等を改善するための薬剤を提供する。

本発明のサクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスは、ケロイド及び肥厚性瘢痕部位において優れたＴＧＦ−β抑制効果を示し、ケロイド及び肥厚性瘢痕の症状並びに患部における強い痒み及び痛み等を改善することができる。

本発明で使用されるサクラエキスは、バラ科に属するソメイヨシノ（学名：Ｐｒｕｎｕｓ Ｙｅｄｏｅｎｓｉｓ）の葉の抽出物であり、市販されている品種又は自生するものを利用することができる。

本発明で使用されるボタンピエキスは、ボタン科ボタン（学名：Ｐａｅｏｎｉａ Ｓｕｆｆｒｕｔｉｃｏｓａ）の根皮の抽出物であり、市販されている品種又は自生するものを利用することができる。

本発明で使用されるケルプエキスは、海産の多細胞藻類を中心とする褐藻植物門に属する生物群である褐藻類（学名：Ｐｈａｅｏｐｈｙｔａ）の混合物の全藻の抽出物であり、市販されている品種又は自生するものを利用することができる。

本発明で使用されるアナツバメ巣エキスは、アマツバメ科アナツバメ（学名：Ｃｏｌｌｏｃａｌｉａｅｓｃｕｌｅｎｔａ）が産卵期に発達した唾液腺から分泌される唾液を固めて作り上げる巣の抽出物である。アナツバメ巣は、中華料理では食用素材としても広く利用されており、市販されているものを利用することができる。

また、本発明で使用するサクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスの抽出法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温又は低温で抽出したものであっても良い。抽出する溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）、炭化水素（ヘキサン、ペンタン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）、アセトニトリル等が挙げられる。これらの溶媒は単独で用いても２種以上を混合して用いてもよい。好ましくは、水あるいは水溶性溶媒（水と任意の割合で混合可能な溶媒。例えば、エタノール、１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール等）のうち１種又は２種以上の溶媒を用いるのが良い。抽出物はそのまま用いても良いし、溶媒を一部、又は全部留去して用いても良い。

本発明のＴＧＦ−β抑制剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、必要に応じて、濃縮、希釈及び濾過処理、活性炭等による脱色、脱臭処理等をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。

本発明に用いるＴＧＦ−β抑制剤は、医薬品または医薬部外品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、軟膏剤、クリーム剤、ローション、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、注射剤等が挙げられる。

本発明におけるサクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスの配合量は特に限定されないが、製剤全重量に対して、乾燥物として、０．００１〜１０重量％の範囲が好ましく、さらに好ましくは０．０１〜５重量％である。０．００１重量％未満では効果が低く、また１０重量％を超えても効果に大きな増強はみられにくく、効率的でない。又、添加の方法については、予め加えておいても製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。

本発明におけるケロイド及び肥厚性瘢痕とは、皮膚損傷後の過剰な組織修復反応の結果、創面が***する結合組織の肥大増殖症を指す。非損傷組織と比較すると、外観及び内部構造共に異常であり、症状がひどい場合は、赤みを帯びたり、強い痒み、痛み及び突っ張り感等を感じることもある。

本発明のケロイド及び肥厚性瘢痕を治療及び予防し、並びに患部における強い痒み及び痛み等を改善するための薬剤は、通常局所的に外用される。外用方法としては、患部に直接適用したり、布等に塗布及び含浸させて適用する等の方法が挙げられる。

次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いるエキスの製造例、処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量は重量％を示す。

製造例１ サクラエキス１
ソメイヨシノの葉１００ｇを生のまま細かく切断し、１，３−ブチレングリコールの５０重量％水溶液を１ｋｇ加え、室温で２日間抽出した。抽出後、その抽出液を濾過してソメイヨシノの葉の５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を９５０ｇ得た。尚、この抽出物の乾燥重量は、１９．０ｇ（２．０重量％）である。

製造例２ ボタンピエキス１
ボタンピの乾燥物１００ｇに、１，３−ブチレングリコールの５０重量％水溶液を１ｋｇ加え、室温で２日間抽出した。抽出後、その抽出液を濾過してボタンピの５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を９５０ｇ得た。尚、この抽出物の乾燥重量は、８．５５ｇ（０．９重量％）である。

製造例３ ケルプエキス１
褐藻類の乾燥物１００ｇに、１，３−ブチレングリコールの５０重量％水溶液を１ｋｇ加え、室温で２日間抽出した。抽出後、その抽出液を濾過して褐藻類の５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を９５０ｇ得た。尚、この抽出物の乾燥重量は、７．６ｇ（０．８重量％）である。

製造例４ アナツバメ巣エキス１
アナツバメ巣の乾燥物１００ｇに、１，３−ブチレングリコールの５０重量％水溶液を１ｋｇ加え、室温で２日間抽出した。抽出後、その抽出液を濾過してアナツバメ巣の５０％１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を９５０ｇ得た。尚、この抽出物の乾燥重量は、９．５ｇ（１．０重量％）である。

製造例５ サクラエキス２
ソメイヨシノの葉１００ｇを生のまま細かく切断し、１ｋｇの精製水を加え、１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥してソメイヨシノの葉の熱水抽出物８．５ｇを得た。

製造例６ ボタンピエキス２
ボタンピの乾燥物１００ｇに、１ｋｇの精製水を加え、１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥してボタンピの熱水抽出物４．２ｇを得た。

製造例７ ケルプエキス２
褐藻類の乾燥物１００ｇに、１ｋｇの精製水を加え、１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥して褐藻類の熱水抽出物３．８ｇを得た。

製造例８ アナツバメ巣エキス２
アナツバメ巣の乾燥物１００ｇに、１ｋｇの精製水を加え、１００℃で２時間抽出した。得られた抽出液を濾過し、濃縮した後に凍結乾燥してアナツバメ巣の熱水抽出物２．８ｇを得た。

本発明のサクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスは、処方例として下記の製剤化を行うことができる。

処方例１ 軟膏１
処方 配合量（重量％）
１．サクラエキス（製造例１） ０．５
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．１，３−ブチレングリコール ８．５
１１．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水 ６７．７５
［製造方法］成分２〜９を加熱して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して成分１を加え、製品とする。

処方例２ 軟膏２
処方例１において、サクラエキスをボタンピエキス（製造例２）に置き換えたものを軟膏２とした。

処方例３ 軟膏３
処方例１において、サクラエキスをケルプエキス（製造例３）に置き換えたものを軟膏３とした。

処方例４ 軟膏４
処方例１において、サクラエキスをアナツバメ巣エキス（製造例４）に置き換えたものを軟膏４とした。

比較例１ 従来の軟膏
処方例１において、サクラエキスを精製水に置き換えたものを従来の軟膏とした。

処方例５ クリーム
処方 配合量（重量％）
１．ボタンピエキス（製造例２） ０．１
２．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
３．モノステアリン酸グリセリン １０．０
４．流動パラフィン ５．０
５．セタノール ６．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
７．プロピレングリコール １０．０
８．精製水 ６６．８
［製造方法］成分２〜５を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び６〜８を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

処方例６ ローション
処方 配合量（重量％）
１．ケルプエキス（製造例３） ０．５
２．アナツバメ巣エキス（製造例４） ０．５
３．１，３−ブチレングリコール ８．０
４．グリセリン ２．０
５．キサンタンガム ０．０２
６．クエン酸 ０．０１
７．クエン酸ナトリウム ０．１
８．エタノール ５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１１．精製水 ８３．６７
［製造方法］成分１〜７及び１１と、成分８〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。

処方例７ 乳液
処方 配合量（重量％）
１．アナツバメ巣エキス（製造例４） ０．０５
２．サクラエキス（製造例１） ０．０５
３．スクワラン ５．０
４．オリーブ油 ５．０
５．ホホバ油 ５．０
６．セタノール １．５
７．モノステアリン酸グリセリン ２．０
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
９．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ２．０
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水 ７３．２
［製造方法］成分３〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。

以下、本発明を効果的に説明するために、実施例３として本発明の実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。

実験例１ ヒトケラチノサイトにおける、試料添加によるＴＧＦ−β１遺伝子の発現変化
ヒトケラチノサイトを、１０％ ＦＢＳを含むＤｅｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉｕｍ（以下、ＤＭＥＭとする）にて３７℃、５％ＣＯ_２条件下で培養した。セミコンフルエントになった状態で、各エキスを、乾燥物として、１、１０、１００μｇ／ｍｌとなるよう添加した１％ ＦＢＳを含むＤＭＥＭにてさらに２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。総ＲＮＡの抽出は、ＴＲＩＺＯＬ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて行い、総ＲＮＡ量は分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ）を用いて２６０ｎｍにおける吸光度により求めた。ｍＲＮＡ発現量の測定は、細胞から抽出した総ＲＮＡを基にしてリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法により行った。リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法には、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ３ Ｐｌａｔｉｎｕｍ Ｔｗｏ−Ｓｔｅｐ
ｑＲＴ−ＰＣＲ Ｋｉｔ ｗｉｔｈ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。すなわち、５００ｎｇの総ＲＮＡを逆転写反応後、ＰＣＲ反応（９５℃：１５秒間、６０℃：３０秒間、４０ｃｙｃｌｅｓ）を行った。その他の操作は定められた方法に従い、ＴＧＦ−β１ ｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの発現量に対する割合として求めた。尚、各遺伝子の発現量の測定に使用したプライマーは次の通りである。

ＴＧＦ−β１用のプライマーセット
ＣＣＣＴＧＣＣＣＣＴＡＣＡＴＴＴＧＧＡ（配列番号１）
ＣＧＧＧＴＴＡＴＧＣＴＧＧＴＴＧＴＡ（配列番号２）
ＧＡＰＤＨ用のプライマーセット
ＴＧＡＡＣＧＧＧＡＡＧＣＴＣＡＣＴＧＧ（配列番号３）
ＴＣＣＡＣＣＡＣＣＣＴＧＴＴＧＣＴＧＴＡ（配列番号４）

その結果を表１に示す。その結果、サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスには、優れたＴＧＦ−β１抑制効果が認められた。

実験例２ ケロイド又は肥厚性瘢痕の症状並びに痒み及び痛みに対する改善度
痒み及び痛みを伴う、ケロイド又は肥厚性瘢痕患者３０人に、サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスを含有する処方例１〜４の軟膏又は比較例１の軟膏を患部に外用した場合の、症状並びに痒み及び痛みに対する改善度の検討を行った。ここで、症状とは、患部の大きさや厚み等の外観を意味する。患部への外用は、１日４回、２ヶ月間行った。改善度は、Ａ：著効、Ｂ：有効、Ｃ：やや有効、Ｄ：変化なし、Ｅ：悪化の５段階で評価した。その結果を表２〜３に示す。

表２の結果より、比較例１を使用した場合に比べて、処方例１〜４を使用した場合の方が、患部の大きさの減少又は軽減による症状の改善度が高い。また、表３の結果より、比較例１を使用した場合に比べて、処方例１〜４を使用した場合の方が、痒み及び痛みの改善度が高い。すなわち、本発明のＴＧＦ−β抑制剤は、ケロイド又は肥厚性瘢痕患者に対して優れた症状改善効果に加え、患部における痒み及び痛みを軽減する効果を示すことが明らかとなった。

本発明のサクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスから選ばれる１種又は２種以上を含むＴＧＦ−β抑制剤は、ケロイド及び肥厚性瘢痕部位において、優れたＴＧＦ−β抑制効果を示し、ケロイド及び肥厚性瘢痕の症状を軽減し、更に、患部における強い痒み及び痛み等を、治療及び予防することができる。

Claims (2)

1. サクラエキス、ボタンピエキス、ケルプエキス及びアナツバメ巣エキスから選ばれる１種又は２種以上を含有することを特徴とするＴＧＦ−β抑制剤。
2. 請求項１記載のＴＧＦ−β抑制剤を含む、ケロイド及び／又は肥厚性瘢痕の治療薬。