JP5186679B2

JP5186679B2 - Food composition effective in preventing vascular disease

Info

Publication number: JP5186679B2
Application number: JP2005378927A
Authority: JP
Inventors: 誠小林; 博子岸
Original assignee: NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION YAMAGUCHI UNIVERSITY
Current assignee: NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION YAMAGUCHI UNIVERSITY
Priority date: 2005-06-10
Filing date: 2005-12-28
Publication date: 2013-04-17
Anticipated expiration: 2025-12-28
Also published as: JP2007112784A

Description

本発明は、血管病を予防するための食品組成物に関し、詳しくは、魚類などから得られる不飽和脂肪酸の一種であるエイコサペンタエン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｅｎｏｉｃａｃｉｄ、以下ＥＰＡと略す）を有効成分とし、血管攣縮に起因する血管病予防用に提供される食品組成物に関する。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to a food composition for preventing vascular disease, and more specifically, contains eicosapentaenoic acid (hereinafter abbreviated as EPA), which is one of unsaturated fatty acids obtained from fish and the like, as an active ingredient, and vasospasm. The present invention relates to a food composition provided for the prevention of vascular diseases caused by the above.

本明細書において、以下の用語は次の様に定義される。血管攣縮とは、血管平滑筋の異常収縮、特に細胞質Ｃａ^２＋濃度の増加に依存しないＣａ^２＋非依存性の収縮を指す。メンブレンラフト（ｍｅｍｂｒａｎｅｒａｆｔ）とは、血管表面に形成されるコレステロールおよびスフィンゴ脂質に富んだ細胞膜上の構造を指す。血管病のシグナル伝達の場として重要であり、コレステロールの除去により消失するという特徴を有す。ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡ（シス型エイコサペンタエン酸）とは、分子中に含まれる二重結合の全てがシス位に配位したＥＰＡを指し、ｔｒａｎｓ−ＥＰＡ（トランス型エイコサペンタエン酸）とは、分子中の二重結合がトランス位に配位したＥＰＡを指す。 In this specification, the following terms are defined as follows. Vasospasm refers to abnormal contraction of vascular smooth muscle, particularly Ca ²⁺ -independent contraction that does not depend on an increase in cytoplasmic Ca ²⁺ concentration. Membrane raft refers to the structure on the cell membrane rich in cholesterol and sphingolipids formed on the surface of blood vessels. It is important as a signal transduction site for vascular diseases, and is characterized by disappearance by removing cholesterol. all-cis-EPA (cis-type eicosapentaenoic acid) refers to EPA in which all the double bonds contained in the molecule are coordinated to the cis-position, and trans-EPA (trans-type eicosapentaenoic acid) is a molecule. EPA in which the double bond in the middle is coordinated to the trans position.

血管攣縮とそれに伴う突発的な血行障害は、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞などを引き起こし、これらの疾患による突然死の死亡者数が毎年６万人を数えるなど、社会的にも重大な問題となっている。特に、くも膜下出血後に高頻度で起こる「脳血管スパズム」は、脳の血管の大部分が攣縮して広範囲にわたり脳が梗塞状態に陥る疾患であり、くも膜下出血の手術が成功したにもかかわらず患者さんの命が救えないといった、深刻な事態を引き起こしている。 Vasospasm and the accompanying sudden blood flow disturbances cause cerebral infarction, angina pectoris, myocardial infarction, etc., and the number of deaths of sudden death due to these diseases is estimated to be 60,000 every year. It is a problem. In particular, “cerebral vascular spasm” that occurs frequently after subarachnoid hemorrhage is a disease in which most of the blood vessels in the brain contract and widen the infarcted state of the brain, despite the success of subarachnoid hemorrhage surgery. It is causing a serious situation where the patient's life cannot be saved.

血管の収縮にはＣａ^２＋に依存した「正常収縮」と、Ｃａ^２＋に依存しない「異常収縮（攣縮）」が知られており、正常収縮についてはその機構を含めかなりの部分が明らかになってきている。このため、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞などの疾患に対しては、まず機構の明らかな正常収縮の阻害、特にＣａ^２＋チャネルの阻害による治療法や治療薬が提示されている（特許文献１） The contraction of the blood vessel depending on the Ca ²⁺ "normal shrinkage", not dependent on Ca ²⁺ are known "abnormal contraction (spasm)", for the normal shrinkage have revealed significant portion including its mechanism ing. Therefore, for diseases such as cerebral infarction, angina pectoris, and myocardial infarction, firstly, a therapeutic method and a therapeutic agent based on inhibition of normal contraction with obvious mechanism, particularly inhibition of Ca ²⁺ channel have been proposed (Patent Literature). 1)

しかしながら、脳梗塞、狭心症、心筋梗塞などの疾患に対しより重要な関連を持つ血管攣縮については、ほとんど詳細が明らかになっていない。現時点における前記疾患の治療法は、疾患への関連性が少ない正常収縮を抑制することにより血管の収縮を抑制するという、いわば見かけ上の治療法であり、本質的な治療法、すなわち血管攣縮の原因究明と対策が切望されている。 However, little is known about vasospasm, which has a more important association with diseases such as cerebral infarction, angina pectoris, and myocardial infarction. At present, the treatment method for the disease is an apparent treatment method that suppresses the vasoconstriction by suppressing the normal contraction that is less related to the disease. The cause investigation and countermeasures are anxious.

本発明者らは、上記問題を解決すべく研究を重ね、血管攣縮にはスフィンゴ脂質の一種であるスフィンゴシルフォスフォリルコリン(ｓｐｈｉｎｇｏｓｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ、以下ＳＰＣと略す)が重要な役割を持つこと、ＳＰＣはＲｈｏｋｉｎａｓｅの活性化を介してＣａ^２＋非依存的に血管平滑筋を収縮させること、更にはＳＰＣによりＦｙｎという別のタンパク質が活性化され、これが血管平滑筋細胞膜壁上のメンブレンラフトと呼ばれる構造に結合することがＲｈｏｋｉｎａｓｅの活性化に重要な役割を果たしていることを明らかにした。これらの事実は、ＳＰＣの刺激による一連のＲｈｏｋｉｎａｓｅ活性化過程をどこかで阻害することができれば、血管の正常な収縮を阻害することなく血管攣縮を治療できる可能性を示唆した（図１、非特許文献１−４）。 The present inventors have repeated researches to solve the above problems, and sphingosylphosphorylcholine (hereinafter abbreviated as SPC), which is a kind of sphingolipid, has an important role in vasospasm, and SPC is Rho. Ca ²⁺ independent manner to contract the vascular smooth muscle through activation of kinase, further activated another protein that Fyn is the SPC, structures coupling which called membrane rafts on vascular smooth muscle cells membrane wall It has been clarified that playing an important role in the activation of Rho kinase. These facts suggested that vasospasm could be treated without inhibiting normal vasoconstriction if the series of Rho kinase activation process by SPC stimulation can be inhibited somewhere (FIG. 1, Non-Patent Documents 1-4).

上記予測に基づき、本発明者らは研究を進め、ＳＰＣによる血管攣縮を特異的に阻害する効果のある物質として、魚類などに含まれる高度不飽和脂肪酸の一種であるエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を見出した。 Based on the above predictions, the present inventors have advanced research, and eicosapentaenoic acid (EPA), which is a kind of highly unsaturated fatty acid contained in fish, is used as a substance that specifically inhibits vasospasm caused by SPC. I found it.

ＥＰＡは海産植物プランクトンや青魚に多く含まれる高度不飽和脂肪酸の一種であり、これまでに血小板凝固の抑制、血栓の溶解などの効果が報告されている（特許文献２）。これに加えて本発明者らは、ＥＰＡが平滑筋異常収縮を阻害し、かつ平滑筋の正常収縮には全く影響しないという事実を明らかにした（特許文献３）。すなわち、本発明者らにより、脳血管スパズムの様な循環器系疾患に対する新規な治療法が確立された。 EPA is a kind of highly unsaturated fatty acid that is abundant in marine phytoplankton and blue fish, and effects such as suppression of platelet coagulation and thrombus dissolution have been reported so far (Patent Document 2). In addition to this, the present inventors have clarified the fact that EPA inhibits abnormal smooth muscle contraction and does not affect normal contraction of smooth muscle at all (Patent Document 3). That is, the present inventors have established a novel treatment method for circulatory system diseases such as cerebrovascular spasm.

しかるに、血管攣縮に起因する種々の疾患に対しては、治療と並んでその予防も極めて重要である。脳血管攣縮や冠血管攣縮はいずれも重篤な疾患につながるものであり、症状が現れてから適切な対策を講じるのは勿論のこと、これらの疾患につながるリスクを軽減し、日々の生活の中で疾患発生を予め防ぐことが重要である。しかしながら、これまでのところ、血管攣縮の予防に効果のある物質を主成分とする機能性食品については、報告が無い。 However, for various diseases caused by vasospasm, prevention thereof is extremely important as well as treatment. Both cerebral vasospasm and coronary vasospasm can lead to serious diseases. Of course, appropriate measures should be taken after symptoms appear, and risks associated with these diseases can be reduced. It is important to prevent the occurrence of disease in advance. However, there has been no report so far on functional foods whose main component is a substance effective in preventing vasospasm.

また、血管攣縮に効果のあるＥＰＡの使用に関しては、高濃度の脂肪酸を血液に注射することの危険性もあり、「経口投与」が主たる投与形態になると考えられるが、下記実施例でも述べる通り、ＥＰＡの腸管における吸収効率は健康状態、年齢によって大きく左右される。特に疾患等で体力が著しく低下している患者さんなどにおいては、ＥＰＡを投与しても腸管において十分に吸収されず、期待される効果が現れないといった問題が考えられ、血管攣縮に起因する疾患を予防し、かつ、健康状態にかかわらず効率的に有効成分の摂取が可能な食品組成物の開発が待たれていた。
特開２００４−４３３７４カルシウムチャンネル阻害剤特開平９−１７６００５オメガ−３系のポリ不飽和脂肪酸を併用するＬ−カルニチンまたはアルカノイルＬ−カルニチン含有医薬組成物特開２００１−２６１５５６平滑筋異常収縮の抑制剤月刊バイオインダストリー２００３年１１月号「エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）による血管攣縮の予防効果」ＮａｋａｏＦ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＳ．ｅｔａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：９５３−９６０．ＳｈｉｒａｏＳ，ＫｏｂａｙａｓｈｉＳ．ｅｔａｌ．（２００２）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：１１２−１１９．ＳｏｍｌｙｏＡ．Ｖ．（２００２）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．９１：８３−８４（Ｅｄｉｔｏｒｉａｌｓ）． In addition, regarding the use of EPA effective for vasospasm, there is a risk of injecting blood with a high concentration of fatty acid, and it is considered that “oral administration” is the main administration form, but as described in the following examples, too. The absorption efficiency of EPA in the intestinal tract depends greatly on the health condition and age. In particular, in patients whose physical strength is significantly reduced due to diseases etc., there is a problem that even if EPA is administered, it is not sufficiently absorbed in the intestinal tract and the expected effect does not appear, and diseases caused by vasospasm Development of a food composition that can prevent ingestion and can efficiently ingest active ingredients regardless of their health condition has been awaited.
Patent application title: Calcium channel inhibitor JP-A-9-176005 L-carnitine or alkanoyl L-carnitine-containing pharmaceutical composition in combination with omega-3 polyunsaturated fatty acid Suppressor of abnormal smooth muscle contraction Monthly Bioindustry November 2003 "Evasapentaenoic acid (EPA) prevents vasospasm" Nakao F, Kobayashi S .; et al. (2002) Circ. Res. 91: 953-960. Shirao S, Kobayashi S. et al. et al. (2002) Circ. Res. 91: 112-119. Somlyo A. V. (2002) Circ. Res. 91: 83-84 (Editorials).

本発明は、上記の現状に鑑み、血管攣縮に起因する種々の疾患の予防に関連して、血管攣縮の原因物質であるＳＰＣにより活性化される反応経路を特異的に阻害する物質を有効成分とし、血管攣縮に起因する種々の疾患の予防用食品組成物を提供することを目的とする。 In view of the above situation, the present invention relates to the prevention of various diseases caused by vasospasm, and an active ingredient is a substance that specifically inhibits a reaction pathway activated by SPC that is a causative agent of vasospasm. And it aims at providing the food composition for the prevention of the various diseases resulting from vasospasm.

本発明者らは、血管平滑筋の攣縮について研究を進め、ＥＰＡがＳＰＣ−Ｒｈｏｋｉｎａｓｅ系のシグナル伝達作用を阻害することを見いだし、更に今回、この作用が、メンブレンラフトへのＦｙｎタンパク質の移動を阻害することによって起こる事を新たに見いだし、本発明を完成した。また本発明者が発見したＥＰＡの効果は、疾患を起こした部位に作用してそれを治療するといったものではなく、血管攣縮を起こす可能性があるメンブレンラフトに作用し血管の攣縮を抑えるという、いわば予防的で穏やかな作用であり、本発明を食品組成物に応用することで血管病の予防に効果のある食品を製造することが可能となることを示した。 The present inventors have proceeded with research on vasoconstriction of vascular smooth muscle, and found that EPA inhibits the signal transduction action of the SPC-Rho kinase process, and this time, this action has caused the movement of Fyn protein to membrane rafts. The present invention has been completed by newly finding out what is caused by the inhibition. In addition, the effect of EPA discovered by the present inventor is not to act on a diseased site and treat it, but to act on a membrane raft that may cause vasospasm to suppress vasospasm, In other words, it is a preventive and gentle action, and it has been shown that by applying the present invention to a food composition, a food effective for the prevention of vascular disease can be produced.

また本発明は、有効成分であるＥＰＡを経口投与する際の問題と考えられる「腸管における吸収効率」を解決するため、胆汁の分泌を促進し、かつ食品組成物として危険性の無い動植物由来の補助成分も含むものであり、疾患などで胃腸の働きが弱った患者さんにおいても効率的にＥＰＡを体内に摂取でき、血管攣縮に起因する疾患を予防可能な食品組成物を提供するものである。 In addition, the present invention is intended to solve the “absorption efficiency in the intestinal tract”, which is considered to be a problem when orally administering EPA as an active ingredient, so as to promote secretion of bile and is derived from animals and plants that are not dangerous as a food composition. Provided is a food composition that also includes an auxiliary component, can efficiently take EPA into the body even in patients whose gastrointestinal function is weak due to diseases, etc., and can prevent diseases caused by vasospasm .

すなわち、本発明の第１の態様は、〔１〕エイコサペンタエン酸（以下「ＥＰＡ」という）及びこれらの薬理学上許容可能な塩から選ばれる少なくとも１つの化合物を有効成分とする血管攣縮の予防用組成物であって、前記ＥＰＡがａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡからなることを特徴とする血管攣縮の予防用組成物からなる。 That is, the first aspect of the present invention, (1) eicosapentaenoic acid (hereinafter referred to as "EPA") and prevention of vasospasm comprising as an active ingredient at least one compound selected from those pharmaceutically acceptable salts A composition for preventing vasospasm, characterized in that the EPA comprises all-cis-EPA .

本発明の第２の態様は、〔２〕ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡが、魚介類より、摂氏１００度以下の温度で抽出されることを特徴とする、上記〔１〕に記載の組成物からなる。

A second aspect of the present invention, (2) all-cis-EPA is from fish, characterized in that it is extracted at a temperature below 100 degrees Celsius, comprising the composition according to [1] .

本発明の第３の態様は、〔３〕ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡが、魚介類より、摂氏１００度以下の温度で抽出され、抽出の全工程において生体内での立体構造を保持した状態で抽出されることを特徴とする、上記〔１〕又は〔２〕に記載の組成物からなる。

In the third aspect of the present invention, [ 3 ] all-cis-EPA is extracted from fish and shellfish at a temperature of 100 degrees Celsius or less, and is extracted in a state in which a three-dimensional structure in a living body is maintained in all extraction steps. It consists of the composition as described in [1] or [2] above.

本発明の第４の態様は、〔４〕血管攣縮が、スフィンゴシルフォスフォリルコリンによって誘導されることを特徴とする、上記〔１〕から〔３〕のうちいずれかに記載の組成物からなる。

A fourth aspect of the present invention is the composition according to any one of [1] to [3] above, wherein [ 4 ] vasospasm is induced by sphingosylphosphorylcholine. .

本発明の第５の態様は、〔５〕血管攣縮が、スフィンゴシルフォスフォリルコリンによって活性化されたＦｙｎタンパク質が、血管壁上メンブレンラフトに移動することによって生じることを特徴とする、上記〔１〕から〔４〕のうちいずれかに記載の組成物からなる。

According to a fifth aspect of the present invention, [ 5 ] vasospasm is caused by migration of a Fyn protein activated by sphingosylphosphorylcholine to a membrane raft on a blood vessel wall, [1] To [4] .

本発明の第６の態様は、〔６〕セイヨウタンポポ粉末、アーティチョーク粉末、クルクミン粉末、カキ肉エキス、マリアアザミ抽出物、ウルソデオキシコール酸及びウコン抽出物から選ばれる少なくとも１種類の吸収補助成分を含むことを特徴とする、上記〔１〕から〔５〕のうちいずれかに記載の組成物からなる。

A sixth aspect of the present invention includes [ 6 ] at least one absorption auxiliary component selected from dandelion powder, artichoke powder, curcumin powder, oyster meat extract, Maria thistle extract, ursodeoxycholic acid and turmeric extract The composition according to any one of [1] to [ 5 ] above.

本発明の第７の態様は、〔７〕セイヨウタンポポ粉末と、アーティチョーク粉末と、クルクミン粉末と、カキ肉エキスと、マリアアザミ抽出物とを含むことを特徴とする上記〔６〕に記載の組成物からなる。

A seventh aspect of the invention, [7] and dandelion powder, and artichoke powder, and Kurukumi emissions Powder, and oyster meat extract, according to the above [6], which comprises a milk thistle extract It consists of a composition.

本発明の第８の態様は、〔８〕アスコルビン酸、トコフェロール、これらの塩またはエステル、ビタミンＥ、大豆発酵エキスから選ばれる少なくとも１種類の酸化防止用補助成分を含むことを特徴とする、上記〔１〕から〔７〕のうちいずれかに記載の組成物からなる。

The eighth aspect of the present invention includes [ 8 ] ascorbic acid, tocopherol, salts or esters thereof, vitamin E, and at least one antioxidant auxiliary component selected from fermented soybean extract, It consists of a composition in any one of [1] to [ 7 ].

本発明の第９の態様は、〔９〕消化吸収促進と、高コレステロール血症改善用補助成分として、卵黄レシチンを含むことを特徴とする、上記〔１〕から〔８〕のうちいずれか１に記載の組成物からなる。
The ninth aspect of the present invention includes any one of [ 9 ] to [ 8 ] above, wherein [ 9 ] includes yolk lecithin as an auxiliary component for promoting digestion and absorption and improving hypercholesterolemia. It consists of a composition as described in above.

本発明の第１０の態様は、〔１０〕更に調整、安定化用補助成分として蜜蝋及び／またはグリセリン脂肪酸エステルを含むことを特徴とする、上記〔９〕に記載の組成物からなる。

A tenth aspect of the present invention consists of the composition according to [ 9 ] above, wherein [ 10 ] further comprises beeswax and / or glycerin fatty acid ester as an auxiliary component for adjustment and stabilization.

本発明の第１１の態様は、〔１１〕上記〔１〕から〔１０〕のうちいずれかに記載の組成物を配合することを特徴とする、血管攣縮予防用の機能性食品の製造方法からなる。

An eleventh aspect of the present invention is [ 11 ] from the method for producing a functional food for preventing vasospasm , which comprises blending the composition according to any one of [1] to [ 10 ] above. Become.

本発明の第１２の態様は、〔１２〕主成分であるａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡを７０〜７５重量％、セイヨウタンポポ粉末、マリアアザミ抽出物、カキ肉エキス、ウルソデオキシコール酸、ウコン抽出物から選ばれる少なくとも１種類の吸収補助成分を５〜１５重量％、アスコルビン酸、トコフェロール、これらの塩またはエステル、ビタミンＥ、大豆発酵エキスから選ばれる少なくとも１種類の酸化防止用補助成分を２〜１５重量％、卵黄レシチンを０．５〜２重量％、調整安定化用補助成分を１０〜１２重量％含んでなり、全体で１００重量％となる組成を含む機能性食品であって、血管病が血管攣縮に起因することを特徴とする、血管攣縮予防用の機能性食品からなる。

In a twelfth aspect of the present invention, [ 12 ] all-cis-EPA as a main component is selected from 70 to 75% by weight, dandelion powder, Maria thistle extract, oyster meat extract, ursodeoxycholic acid, turmeric extract. 5 to 15% by weight of at least one absorption auxiliary component, and 2 to 15% by weight of at least one antioxidant auxiliary component selected from ascorbic acid, tocopherol, salts or esters thereof, vitamin E, and soybean fermented extract A functional food comprising 0.5% to 2% by weight of egg yolk lecithin, 10 to 12% by weight of auxiliary components for adjustment and stabilization, and 100% by weight as a whole. It consists of a functional food for preventing vasospasm characterized by

本発明の第１３の態様は、〔１３〕ａｌｌ−ｃｉｓ−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を有効成分とし、主成分として７３．６重量％のａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡ（２８％溶液）を含み、ＥＰＡの腸管における吸収効率を高めるための補助成分として、２重量％のセイヨウタンポポ粉末と、２重量％のアーティチョーク粉末と、２重量％のクルクミン９０％粉末と、２重量％のカキ肉エキスと、２重量％のマリアアザミ抽出物とを含み、ＥＰＡの酸化を防止するための補助成分として、２重量％のビタミンＥと、１重量％のビタミンＣと、１重量％の大豆発酵エキスとを含み、摂取時における消化吸収促進と、高コレステロール血症改善のための補助成分として、１重量％の卵黄レシチンを含み、調整、安定化用の補助成分として、１１．４重量％の蜜蝋とグリセリン脂肪酸エステルを含む機能性食品であって、血管病が血管攣縮に起因することを特徴とする、前記〔１２〕に記載の機能性食品からなる。
A thirteenth aspect of the present invention comprises [ 13 ] all-cis-eicosapentaenoic acid (EPA) as an active ingredient, and contains 73.6% by weight of all-cis-EPA (28% solution) as a main component. 2% by weight dandelion powder, 2% by weight artichoke powder, 2% by weight curcumin 90% powder, 2% by weight oyster meat extract, 2% 2% Vitamin E, 1% Vitamin C and 1% by weight soy fermented extract as supplementary ingredients to prevent EPA oxidation As an auxiliary component for promoting digestion and absorption at the time and improving hypercholesterolemia, 1% yolk lecithin is included, and as an auxiliary component for adjustment and stabilization, 11.4% A functional food comprising an amount percent of beeswax and glycerol fatty acid ester, wherein the vascular disease is due to vasospasm, consisting functional food according to the above [12].

本発明の食品組成物を利用することによって、血管攣縮に起因する種々の疾患に予防効果のある機能性食品を製造することが可能となる。また本発明は、有効成分であるＥＰＡの腸管における吸収効率を高めるための補助成分を含んでおり、これによって消化機能が弱った人や高齢者でも効果的に血管病を予防できる食品を製造することが可能となる。 By using the food composition of the present invention, it is possible to produce functional foods that have a preventive effect on various diseases caused by vasospasm. The present invention also includes an auxiliary component for increasing the absorption efficiency of EPA, which is an active ingredient, in the intestinal tract, thereby producing a food that can effectively prevent vascular disease even in persons with weak digestive function and the elderly. It becomes possible.

以下に本発明を詳細に説明する。本発明の第１の態様は、ＥＰＡを主成分とし、血管病の予防に効果のある食品組成物である。ＥＰＡそれ自体は公知の物質であり、血栓溶解などに効果を持つことがこれまでに知られているが、血管病の予防に効果のある物質としてのＥＰＡはこれまでに知られておらず、本発明により初めて明らかとなった。 The present invention is described in detail below. The first aspect of the present invention is a food composition having EPA as a main component and effective in preventing vascular diseases. EPA itself is a known substance and has been known so far to be effective in thrombolysis, but EPA as a substance effective in preventing vascular disease has not been known so far. First revealed by the present invention.

本発明の第２から第５の態様においては、ＥＰＡを有効成分とし、血管攣縮に起因する血管病の予防用食品組成物が提示される。本発明におけるＥＰＡは、好ましくはａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡであって、更に好ましくは、魚介類より抽出されるａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡであって、抽出の全工程において立体構造を保持した状態で抽出されるａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡである（図２）。前記立体構造を保持するためには、例えば、抽出工程において摂氏１００度以上の加熱を受けないことが望ましいが、実施例で述べるとおり、重要なのはＥＰＡの立体構造であって、抽出温度そのものは本発明を何ら限定するものではない。これは、これまでに知られている健康食品の組成物としてのＥＰＡが、その抽出の過程で高温条件にさらされる事が多く、その結果としてＥＰＡ分子の二重結合が全てトランス位に置き換わったｔｒａｎｓ−ＥＰＡに変化していることを考慮に入れたものであり、実施例で示す様に、実質的にａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡはｔｒａｎｓ−ＥＰＡに比べて血管攣縮に対する効果を持つことが本発明者によって初めて明らかになった事を考慮したものである。 In the second to fifth aspects of the present invention, a food composition for preventing vascular disease caused by vasospasm, which contains EPA as an active ingredient, is presented. The EPA in the present invention is preferably all-cis-EPA, more preferably all-cis-EPA extracted from fish and shellfish, which is extracted in a state in which a three-dimensional structure is maintained in all extraction steps. All-cis-EPA (FIG. 2). In order to maintain the three-dimensional structure, for example, it is desirable not to be heated to 100 degrees Celsius or higher in the extraction process. However, as described in the examples, what is important is the three-dimensional structure of EPA, and the extraction temperature itself is The invention is not limited in any way. This is because EPA as a health food composition known so far is often exposed to high temperature conditions in the process of extraction, and as a result, all double bonds of EPA molecules are replaced by trans positions. The present invention takes into account the change to trans-EPA, and as shown in the Examples, all-cis-EPA substantially has an effect on vasospasm compared to trans-EPA. It takes into account what became clear for the first time.

本発明の第６、第７の態様においては、ＥＰＡを有効成分とし、下記要因が引き起こす血管攣縮に起因する血管病の予防用食品組成物が提示される。本態様における血管病は、詳しくは、スフィンゴシルフォスフォリルコリン（ＳＰＣ）によって誘導されるカルシウム非依存性の血管異常収縮に起因するものであって、更に詳しくは、前記血管病に対するＥＰＡの作用がＳＰＣによって活性化されたＦｙｎタンパク質の血管壁上メンブレンラフトへの移動を阻害するものであることを特徴とする。本発明者らによって、Ｆｙｎタンパク質がＳＰＣの刺激によって活性化されメンブレンラフトに移動し、活性化されたＦｙｎタンパク質がＲｈｏｋｉｎａｓｅを活性化することで血管攣縮を引き起こすことが明らかとなった（図１）。メンブレンラフトは血管壁にコレステロールが沈着することで形成される構造であり、ＥＰＡはこの構造にＦｙｎタンパク質が移動するのを阻害する効果を持つことから、本発明は血管攣縮が起こった後の治療だけではなく、血管攣縮に至る過程を阻害する、いわば「予防的」な効果を持つことが初めて明らかとなった。上記態様において、第２から第５の態様に記載のＥＰＡを含む食品組成物もまた、本発明に含まれるものである。 In the sixth and seventh aspects of the present invention, a food composition for preventing vascular diseases caused by vasospasm caused by the following factors is presented, which comprises EPA as an active ingredient. The vascular disease in this embodiment is specifically caused by calcium-independent abnormal vasoconstriction induced by sphingosylphosphorylcholine (SPC), and more specifically, the action of EPA on the vascular disease is It is characterized in that it inhibits the movement of the Fyn protein activated by SPC to the membrane raft on the blood vessel wall. The present inventors have revealed that the Fyn protein is activated by SPC stimulation and moves to a membrane raft, and the activated Fyn protein activates Rho kinase to cause vasospasm (FIG. 1). ). Membrane raft is a structure formed by the deposition of cholesterol on the blood vessel wall, and EPA has the effect of inhibiting the migration of Fyn protein to this structure. Therefore, the present invention is a treatment after vasospasm occurs. It has become clear for the first time that it has a so-called “preventive” effect that inhibits the process leading to vasospasm. In the above aspect, food compositions containing the EPA according to the second to fifth aspects are also included in the present invention.

本発明の第８、第９の態様においては、ＥＰＡを有効成分とし、「腸管での吸収効率を高める補助成分」を含む、血管攣縮に起因する血管病の予防用食品組成物が提示される。特に高齢者や疾患の患者さんにおいては、消化器系の機能が低下しており、有効成分が十分に吸収されず期待した効果が現れないという問題がある。この点を考慮し、また健康な状態においても十分な吸収を保証するために、腸管におけるＥＰＡの吸収効率を高めるための補助成分が示される。ここでいう補助成分とは、好ましくはセイヨウタンポポ粉末、アーティチョーク粉末、クルクミン９０％粉末、カキ肉エキス、マリアアザミ抽出物のうち少なくとも１種類であり、より好ましくは上記全てを組み合わせたものである。これら補助成分は全て天然の動植物由来の成分であって、胆汁分泌を促進するものであり、食品としての安全性も確立されたものである。本発明の実施においては、これらを適宜組み合わせて使用すれば良く、その配合割合等は本発明を限定するものではない。また同様に、経口投与される薬剤の吸収効率を高める目的で臨床的に使用されているウルソデオキシコール酸、または本発明が食品組成物であることに鑑み、消費者に添加物として抵抗を感じさせない目的で、ウルソデオシキコール酸を含む「ウコン抽出物」も、本態様の補助成分として有効である。 In the eighth and ninth aspects of the present invention, a food composition for preventing vascular disease caused by vasospasm is provided, which contains EPA as an active ingredient and includes an “auxiliary ingredient that enhances absorption efficiency in the intestinal tract”. . Particularly in elderly people and patients with diseases, the function of the digestive system is lowered, and there is a problem that the effective effect is not sufficiently absorbed and the expected effect does not appear. In view of this point, and in order to guarantee sufficient absorption even in a healthy state, an auxiliary component for increasing the absorption efficiency of EPA in the intestinal tract is shown. The auxiliary component here is preferably at least one of dandelion powder, artichoke powder, curcumin 90% powder, oyster meat extract, and thistle extract, and more preferably a combination of all of the above. These auxiliary ingredients are all derived from natural animals and plants, promote bile secretion, and have been established as food safety. In the practice of the present invention, these may be used in appropriate combination, and the blending ratio and the like do not limit the present invention. Similarly, ursodeoxycholic acid, which is clinically used for the purpose of increasing the absorption efficiency of orally administered drugs, or the present invention is a food composition, the consumer feels resistance as an additive. For this purpose, “turmeric extract” containing ursodeoxycholic acid is also effective as an auxiliary component of this embodiment.

本発明の第１０の態様においては、ＥＰＡを有効成分とし、「ＥＰＡの酸化を防止する補助成分」を含む、血管攣縮に起因する血管病の予防用食品組成物が提示される。本発明においては、上述の通り立体構造が保持されたＥＰＡ、好ましくはａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡを有効成分としており、その酸化を防止することは本発明の効果を有効に得るために重要である。前記補助成分は、ビタミンＥ、ビタミンＣ、大豆発酵エキスのうち少なくとも１つであり、好ましくはこれら全てである。これら補助成分は抗酸化成分として効果を持つものであるが、ビタミン類はそれ自身でも栄養的に重要な要素であり、本発明の実施形態が健康食品であることを考えれば、これらの補助成分を含むことは食品として好ましいものである。 In a tenth aspect of the present invention, a food composition for preventing vascular disease caused by vasospasm, comprising EPA as an active ingredient and comprising an “auxiliary ingredient for preventing EPA oxidation” is presented. In the present invention, as described above, EPA having a steric structure, preferably all-cis-EPA, is used as an active ingredient, and preventing its oxidation is important for effectively obtaining the effects of the present invention. The auxiliary component is at least one of vitamin E, vitamin C, and fermented soybean extract, preferably all of them. Although these auxiliary ingredients have an effect as an antioxidant ingredient, vitamins are nutritionally important elements themselves, and considering that the embodiment of the present invention is a health food, these auxiliary ingredients It is preferable as food to contain.

本発明の第１１、１２の態様においては、ＥＰＡを有効成分とし、「その他の補助成分」を含む、血管攣縮に起因する血管病の予防用食品組成物が提示される。本態様におけるその他の補助成分は、摂取時における消化吸収促進と、高コレステロール血症改善のための卵黄レシチンと、調整、安定化用の蜜蝋とグリセリン脂肪酸エステルである。本発明を利用した機能性食品は、必ずしも健康状態が良好な人のみが利用するものでは無く、これらの場合にも有効に消化吸収される補助成分と調整用成分は、本発明の効果を引き出すために重要である。 In the eleventh and twelfth aspects of the present invention, a food composition for preventing vascular disease caused by vasospasm, comprising EPA as an active ingredient and containing “other supplementary ingredients” is presented. Other auxiliary components in this embodiment are egg yolk lecithin for promoting digestion and absorption at the time of ingestion and improvement of hypercholesterolemia, beeswax and glycerin fatty acid ester for adjustment and stabilization. Functional foods using the present invention are not necessarily used only by people with good health. In these cases, auxiliary ingredients and adjustment ingredients that are effectively digested and absorbed also bring out the effects of the present invention. Is important for.

本発明の第１３から第１５の態様においては、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を有効成分とし、更に吸収補助成分、酸化防止成分、消化吸収と高コレステロール血症改善用補助成分及び調整安定化用補助成分を含有する食品組成物を含む、血管攣縮に起因する血管病の予防用機能性食品が提供される。食品の態様は特に本発明を限定するものではないが、魚類から抽出されたＥＰＡがいわゆる「魚臭さ」を持つことから、例えば外側を消化性材料で覆われたカプセル状食品、タブレットなどが提示される。 In the thirteenth to fifteenth aspects of the present invention, eicosapentaenoic acid (EPA) is used as an active ingredient, and further, an absorption auxiliary component, an antioxidant component, an auxiliary component for improving digestion and absorption and hypercholesterolemia, and an auxiliary for stabilizing stabilization. Provided is a functional food for preventing vascular disease caused by vasospasm, comprising a food composition containing an ingredient. The aspect of the food is not particularly limited to the present invention. However, since EPA extracted from fish has a so-called “fish odor”, for example, capsule foods, tablets and the like whose outer sides are covered with digestible materials are used. Presented.

以下に本発明の実施例を述べる。（標本の調製）ブタ冠状動脈（左前下行枝）を主幹分岐部から１ｃｍ遠位で約３ｃｍ切り取り、あらかじめ混合ガス（９５％Ｏ_２，５％ＣＯ_２）を通気し氷冷したＫｒｅｂｓ液（１２３ｍＭＮａＣｌ，４．７ｍＭＫＣｌ，１５．５ｍＭＮａＨＣＯ_３，１．２ｍＭＭｇＣｌ_２，１．２５ｍＭＣａＣｌ_２，１１．５ｍＭＤ−ｇｌｕｃｏｓｅ）に浸した。以下サンプル調製は上記Ｋｒｅｂｓ液を１５分おきに交換しながら行った。血管の周りの脂肪を取り除いた後、外膜を取り除き、綿棒で内皮を除去し、剃刀を用いて平滑筋条片１ｍｍ×４ｍｍを作製した。 Examples of the present invention will be described below. (Preparation of specimen) A porcine coronary artery (left anterior descending branch) was cut about 3 cm 1 cm distal from the main trunk bifurcation, and a Krebs solution (123 mM) previously aerated with a mixed gas (95% O ₂ , 5% CO ₂ ) and ice-cooled. NaCl, 4.7 mM KCl, 15.5 mM NaHCO ₃ , 1.2 mM MgCl ₂ , 1.25 mM CaCl ₂ , 11.5 mM D-glucose). Sample preparation was performed while exchanging the Krebs solution every 15 minutes. After removing the fat around the blood vessel, the outer membrane was removed, the endothelium was removed with a cotton swab, and a smooth muscle strip 1 mm × 4 mm was prepared using a razor.

（平滑筋条片へのＦｕｒａ−２（カルシウム指示薬）の負荷）まず試験管に混合液を負荷したＫｒｅｂｓ液２ｍｌを入れ、１００μｌのｆｅｔａｌｃａｌｆｓｅｒｕｍ（ＦＣＳ）を加えて十分にピペッティングを行った。次にその１ｍｌを１．５ｍｌチューブに移した。暗室で５０μｇのＦｕｒａ−２ＡＭ（ＤＯＪＩＮＤＯ）に４０μｌのＤＭＳＯを加えた後、５０−６０回ピペッティングをし、そのうちの１０μｌを上記１．５ｍｌチューブに加え、すぐに十分にピペッティングをした。その後、遮光してある超音波破砕装置で氷冷しながら５分間破砕を行い、激しく撹拌する操作を６回繰り返した。暗室で１．５ｍｌチューブから元の試験管にＦｕｒａ−２ＡＭを溶かした液を戻し、上記標本を入れ、３７℃に保ち、Ｆｕｒａ−２を４時間負荷した。４時間後、標本を取り出し、Ｋｒｅｂｓ液に浸し４５分間おき、細胞に付着したＦｕｒａ−２ＡＭを除いた後、平滑筋条片を測定装置に取り付けた。 (Loading of Fura-2 (calcium indicator) on smooth muscle strip) First, 2 ml of Krebs solution loaded with the mixed solution was put into a test tube, and 100 μl of fat calf serum (FCS) was added and pipetting was performed sufficiently. . The 1 ml was then transferred to a 1.5 ml tube. After adding 40 μl of DMSO to 50 μg of Fura-2AM (DOJINDO) in a dark room, pipetting was performed 50-60 times, 10 μl of which was added to the 1.5 ml tube and immediately pipetting thoroughly. Thereafter, the operation of crushing for 5 minutes while cooling with ice in an ultrasonic crushing apparatus protected from light and vigorously stirring was repeated 6 times. In a dark room, the solution in which Fura-2AM was dissolved was returned from the 1.5 ml tube to the original test tube, the sample was put in, kept at 37 ° C., and Fura-2 was loaded for 4 hours. After 4 hours, the specimen was taken out, immersed in Krebs solution for 45 minutes, and after removing Fura-2AM adhering to the cells, a smooth muscle strip was attached to the measuring device.

（装置）Ｆｕｒａ−２を負荷した平滑筋条片は、容積５ｍｌのマグヌス管中で３７℃に保たれた。平滑筋条片を吊したワイヤーをトランスデューサー（ＦＤピックアップ：日本光電）につなぎ、増幅器（歪圧力用アンプ：日本光電）を通して記録計（卓上型ペンレコーダーＵ−２２８：Ｐａｎｔｏｓ）で張力を検出した。細胞内カルシウム濃度測定には、蛍光測定装置（ＣＡＭ２３０：ＪＡＳＣＯ）を用いて、平滑筋条片を３４０ｎｍと３８０ｎｍの光で交互に励起し、その蛍光強度の比（Ｆ３４０／３８０）を検出することによって測定した。 (Apparatus) The smooth muscle strip loaded with Fura-2 was kept at 37 ° C. in a Magnus tube having a volume of 5 ml. A wire with a smooth strip strip was connected to a transducer (FD pickup: Nihon Kohden), and the tension was detected with a recorder (desktop pen recorder U-228: Pantos) through an amplifier (distortion pressure amplifier: Nihon Kohden). . For intracellular calcium concentration measurement, a smooth muscle strip is alternately excited with light of 340 nm and 380 nm using a fluorescence measuring device (CAM230: JASCO), and the ratio of the fluorescence intensity (F340 / 380) is detected. Measured by.

（測定方法）１１８ｍＭ高カリウム溶液による脱分極性の収縮を１５分間起こし、その後Ｋｒｅｂｓ液で１５分間弛緩させる操作をくり返し、高カリウム脱分極による張力の波形が安定したところで、４０ｍＭカリウム溶液を加え、その収縮がプラトーに達したところでＢｒａｄｙｋｉｎｉｎを１μＭ加えて内皮の有無を確認した。Ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎによって平滑筋が弛緩しない場合、内皮が除去されていると判断した。その後、Ｋｒｅｂｓ液で１５分弛緩させ、３０μＭＳＰＣで刺激を加えた。更に、ＳＰＣ刺激による張力が最大かつプラトーになったところで、ＥＰＡを最終濃度が６０μＭになるように加えた。またＥＰＡは、生体内の立体構造を保持したａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡと、高温処理等によって分子内の全ての二重結合がｔｒａｎｓ位に配位したａｌｌ−ｔｒａｎｓ−ＥＰＡの両方の効果を同一実験条件下で比較した。 (Measuring method) Depolarization contraction by 118 mM high potassium solution was caused for 15 minutes, and then the operation of relaxing with Krebs solution for 15 minutes was repeated. When the waveform of tension due to high potassium depolarization was stabilized, 40 mM potassium solution was added, When the contraction reached a plateau, 1 μM of Bradykinin was added to confirm the presence or absence of endothelium. When smooth muscle was not relaxed by Bradykinin, it was judged that the endothelium was removed. Thereafter, the membrane was relaxed with Krebs solution for 15 minutes and stimulated with 30 μM SPC. Furthermore, when the tension due to SPC stimulation reached a maximum and a plateau, EPA was added to a final concentration of 60 μM. EPA has the same experiment with all-cis-EPA, which maintains the in-vivo steric structure, and all-trans-EPA in which all double bonds in the molecule are coordinated to the trans position by high-temperature treatment or the like. Comparison was made under conditions.

（結果）血管平滑筋の収縮実験において、ＥＰＡはＳＰＣによる収縮を抑制する一方で、高カリウム脱分極による収縮は抑制しなかった。この実験において細胞内カルシウム濃度の変化も同時に測定したが、ＳＰＣによる収縮は細胞内カルシウム濃度の上昇を伴わないのに対し、高カリウム脱分極による収縮は細胞内カルシウム濃度の上昇を伴い、ＥＰＡが異常収縮（細胞内カルシウム濃度の上昇を伴わない）を抑制する一方で正常収縮（細胞内カルシウム濃度の上昇を伴う）には影響しない事を明らかにした。 (Results) In the vascular smooth muscle contraction experiment, EPA did not suppress contraction due to high potassium depolarization, while EPA suppressed contraction due to SPC. In this experiment, the change in intracellular calcium concentration was measured simultaneously. The contraction due to SPC was not accompanied by an increase in intracellular calcium concentration, whereas the contraction due to high potassium depolarization was accompanied by an increase in intracellular calcium concentration. It was clarified that abnormal contraction (with no increase in intracellular calcium concentration) was suppressed but normal contraction (with an increase in intracellular calcium concentration) was not affected.

血管攣縮に対するＥＰＡの効果を、その立体構造に注目して調べた。３０μＭＳＰＣ投与処理によって誘導される血管攣縮のシグナルを指標とし、ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡとｔｒａｎｓ−ＥＰＡのそれぞれを処理した時の血管攣縮を比較した（図３、図４）。グラフに示すとおり、ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡはｔｒａｎｓ−ＥＰＡに比べ、血管攣縮抑制の早さ、程度ともに有意に高い効果を示した。 The effect of EPA on vasospasm was examined by paying attention to its three-dimensional structure. Using the signal of vasospasm induced by treatment with 30 μM SPC as an index, vasospasm when all-cis-EPA and trans-EPA were treated was compared (FIGS. 3 and 4). As shown in the graph, all-cis-EPA showed significantly higher effects in terms of the speed and degree of vasospasm suppression than trans-EPA.

（メンブレンラフトへのＦｙｎの結合に対する、ＥＰＡの阻害的作用）ヒト冠状動脈平滑筋（ＣＡＳＭＣｓ，Ｃａｍｂｒｅｘ社）は、ＳｍＧＭ−２培地で培養した。実験２４時間前に血清を除去し、６０μＭのＥＰＡで１０分間前処理し、３０μＭのＳＰＣにて５分間刺激した後、Ｆｙｎの局在と、メンブレンラフトに局在すると言われるＣａｖｅｏｌｉｎ−１タンパク質の局在の関係を、免疫蛍光染色及び共焦点顕微鏡観察（ＬＳＭ−５１０，ＣａｒｌＺｅｉｓｓ）により検討した。結果を図５に示す。対照のＥＰＡ前処理をしなかった細胞（上段）では、ＳＰＣ刺激によりＦｙｎタンパク質が細胞内から形質膜に結合し（左側、矢印）、またＣａｖｅｏｌｉｎ−１（中央）と共局在して（右側に合成像）、ＳＰＣ刺激によりＦｙｎタンパク質がメンブレンラフトに移動する事が示された。一方、ＥＰＡ前処理をした細胞（下段）においては、ＳＰＣ刺激によるＦｙｎタンパク質の形質膜への移動が見られず（左側）、またＣａｖｅｏｌｉｎ−１タンパク質（中央）との共局在も見られなかったことから（右側に合成像）、ＥＰＡがＦｙｎタンパク質のメンブレンラフトへの移動を抑制する事が示された。 (Inhibitory action of EPA on binding of Fyn to membrane raft) Human coronary artery smooth muscle (CASMCs, Cambrex) was cultured in SmGM-2 medium. Serum was removed 24 hours prior to the experiment, pretreated with 60 μM EPA for 10 minutes, and stimulated with 30 μM SPC for 5 minutes, followed by localization of Fyn and Caveolin-1 protein, which is said to be localized in membrane rafts. The relationship of localization was examined by immunofluorescence staining and confocal microscopy (LSM-510, Carl Zeiss). The results are shown in FIG. In cells not subjected to EPA pretreatment (upper), Fyn protein bound to the plasma membrane from inside the cell by SPC stimulation (left, arrow), and colocalized with Caveolin-1 (middle) (right) ), It was shown that the Fyn protein moves to the membrane raft by SPC stimulation. On the other hand, in EPA-pretreated cells (lower stage), no movement of Fyn protein to the plasma membrane by SPC stimulation was observed (left side), and no co-localization with Caveolin-1 protein (middle) was observed. (A composite image on the right side) shows that EPA suppresses the movement of the Fyn protein to the membrane raft.

（本発明を利用した機能性食品の組成と吸収効率）ＥＰＡは油であるため、食事に伴い産生される胆汁により分散され、吸収される。しかし、市販のＥＰＡ含有食品には、「食後に服用すべき」等の説明は無く、また摂取後におけるＥＰＡの血中濃度がどの様になるのか等のデータも明らかでない。そこで本実施例では、絶食時におけるＥＰＡの吸収効果を得る目的で、「本発明の補助成分を含むＥＰＡ含有食品（ＥＰＡ−Ｐ）」と「補助成分を含まないＥＰＡ含有食品（ＥＰＡ−Ｎ）」それぞれの絶食時における吸収効率を調べた。「補助成分を含むＥＰＡ含有食品」の組成は表1の通りであり、ＥＰＡ−ＮのＥＰＡ含有量はＥＰＡ−Ｐと同じである。

(Composition and Absorption Efficiency of Functional Food Utilizing the Present Invention) Since EPA is an oil, it is dispersed and absorbed by bile produced with meals. However, there is no explanation such as “should be taken after meals” in commercially available EPA-containing foods, and data such as the blood concentration of EPA after ingestion is not clear. Therefore, in this example, for the purpose of obtaining an absorption effect of EPA at the time of fasting, “EPA-containing food containing supplemental component of the present invention (EPA-P)” and “EPA-containing food not including supplemental component (EPA-N)”. The absorption efficiency at the time of fasting was examined. The composition of the “EPA-containing food containing supplemental ingredients” is as shown in Table 1, and the EPA content of EPA-N is the same as that of EPA-P.

本実施例における測定スケジュールを、表２に示した。Ａさん（５０代）、Ｂさん（４０代）、Ｃさん（３０代）の３名を対象に、スケジュールの各段階において約１０ｍｌの血液を採取し、血中のＥＰＡ濃度及びアラキドン酸濃度（対照）を計測した。ＥＰＡ−Ｎ，ＥＰＡ−Ｐ各計測の間には約１週間の間隔をおいた。

The measurement schedule in this example is shown in Table 2. About 3 people, Mr. A (50s), Mr. B (40s), and Mr. C (30s), about 10 ml of blood was collected at each stage of the schedule, and EPA concentration and arachidonic acid concentration ( Control) was measured. There was an interval of about 1 week between EPA-N and EPA-P measurements.

表２に示したスケジュールの各段階における脂肪酸の濃度を、図６、図７及び表３に示す（ＥＰＡ含有食品摂取前の血中濃度を１００とした相対値は図７と表４）。３名の血中脂肪酸のうち、アラキドン酸濃度（対照）は補助成分の有無によらず１０％前後の上昇を示した。ＥＰＡでは、補助成分無し（Ｎ）ではＣさん（３０代）で６時間後に３７％の増加を示したのに対し、Ａさん（５０代）、Ｂさん（４０代）ではほとんど上昇が見られなかった。これに対して、補助成分有り（Ｐ）では、３名とも４時間後、６時間後それぞれでＥＰＡ濃度が上昇し、６時間後における上昇率はＡさんで５９％、Ｂさんが１３％、Ｃさんが５３％であった。これらの結果は、（１）絶食後など胃腸の働きが弱った状態では、ＥＰＡ含有食品を摂取しても有効成分が血中に届かない場合があり、若年齢（〜３０代）より高年齢（４０代〜）でその傾向が強い（２）これらの状態においても、本発明における補助成分を追加することによって、ＥＰＡが血中に取り込まれるようになる、という事を示唆しており、これはＥＰＡ含有食品における本発明の有効性を示すものである。

The concentration of fatty acid at each stage of the schedule shown in Table 2 is shown in FIG. 6, FIG. 7 and Table 3 (relative values with blood concentration before taking EPA-containing food as 100 are FIG. 7 and Table 4). Of the three blood fatty acids, the arachidonic acid concentration (control) showed an increase of around 10% regardless of the presence or absence of auxiliary components. In EPA, without supplemental ingredients (N), Mr. C (30's) showed a 37% increase after 6 hours, whereas Mr. A (50's) and Mr. B (40's) showed almost an increase. There wasn't. On the other hand, in the case of supplementary component (P), the EPA concentration increased after 4 hours and 6 hours for all three persons, and the increase rate after 6 hours was 59% for A and 13% for B. C was 53%. These results are as follows: (1) In the state where the function of the gastrointestinal tract is weak, such as after fasting, the active ingredient may not reach the blood even if the EPA-containing food is ingested. (2) In these states, the tendency is strong (2) Even in these states, it is suggested that EPA can be taken into blood by adding an auxiliary component in the present invention. Indicates the effectiveness of the present invention in EPA-containing foods.

（本発明を利用した機能性食品の組成と吸収効率２）上記実施例７において、ＥＰＡ−Ｐ、ＥＰＡ−Ｎそれぞれの摂取後における血中のＤＨＡ濃度の変化を、ＥＰＡ濃度の変化と対比した（表５、表６）。血中ＤＨＡ濃度は、摂取後４−６時間でやや増加する傾向が見られたが、増加率はＥＰＡに比べ低い数値を示した。本発明の食品組成物が、血中ＥＰＡ濃度を特異的に増加させる事が示された。

(Composition of functional food using the present invention and absorption efficiency 2) In Example 7 above, the change in blood DHA concentration after each intake of EPA-P and EPA-N was compared with the change in EPA concentration. (Table 5, Table 6). The blood DHA concentration tended to increase slightly 4-6 hours after ingestion, but the increase rate was lower than that of EPA. It has been shown that the food composition of the present invention specifically increases the blood EPA concentration.

本発明は、いわゆる「健康食品産業」において、血管病を予防しうる新たな食品を製造するための食品組成物を提供するものであり、健康に対する意識が高まり、また疾患を日々の生活の中で予防する事の重要性が認識されつつある今日において、本発明の提供する食品組成物は「健康食品」の組成物として利用可能である。 In the so-called “health food industry”, the present invention provides a food composition for producing a new food that can prevent vascular diseases. Today, the importance of prevention is being recognized, and the food composition provided by the present invention can be used as a composition of “health food”.

本発明者らによって明らかにされた、カルシウム非依存性血管攣縮に係るＳＰＣ−Ｆｙｎ−Ｒｈｏｋｉｎａｓｅカスケードの模式図を示す。The schematic diagram of the SPC-Fyn-Rho kinase cascade related to calcium-independent vasospasm revealed by the present inventors is shown. （Ａ）ＥＰＡの分子式を示す。（Ｂ）ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡの立体構造の模式図を示す。（Ｃ）ｔｒａｎｓ−ＥＰＡの立体構造の模式図を示す。(A) shows the molecular formula of EPA. (B) A schematic diagram of the three-dimensional structure of all-cis-EPA is shown. (C) The schematic diagram of the three-dimensional structure of trans-EPA is shown. ＳＰＣによって誘導される血管攣縮に対するＥＰＡの効果を、その立体構造に着目して比較した。縦軸は血管収縮の度合を示し、横軸は時間を表す。グラフ下部のバーはそれぞれの刺激（カリウム、ＳＰＣ）を与えた時間を表す。ＳＰＣ刺激によって引き起こされた血管攣縮に対し、ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡはｔｒａｎｓ−ＥＰＡに比べて高い抑制効果（時間の早さ及び抑制の度合い）を示した。The effect of EPA on vasospasm induced by SPC was compared by focusing on its three-dimensional structure. The vertical axis represents the degree of vasoconstriction, and the horizontal axis represents time. The bar at the bottom of the graph represents the time when each stimulus (potassium, SPC) was applied. For vasospasm caused by SPC stimulation, all-cis-EPA showed a higher inhibitory effect (faster time and degree of inhibition) than trans-EPA. ＳＰＣ刺激によって誘導される血管攣縮からの回復を、ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡとｔｒａｎｓ−ＥＰＡとで比較した。縦軸はＳＰＣ刺激による収縮からの回復（弛緩）の割合を表す。ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡは、ｔｒａｎｓ−ＥＰＡに比べて、弛緩の割合が有意に高かった（ｔ−ｔｅｓｔ，ｐ＜０．０５）。Recovery from vasospasm induced by SPC stimulation was compared between all-cis-EPA and trans-EPA. The vertical axis represents the rate of recovery (relaxation) from contraction by SPC stimulation. all-cis-EPA had a significantly higher rate of relaxation compared to trans-EPA (t-test, p <0.05). ヒト冠状動脈平滑筋細胞において、ＳＰＣによる刺激はＦｙｎタンパク質のメンブレンラフトへの移動を誘導する（上段左側の矢印）。一方、ＥＰＡによる前処理を行った平滑筋細胞においては、ＳＰＣ刺激によるＦｙｎタンパク質の移動が見られず（下段左側）、ＥＰＡがＦｙｎタンパク質のメンブレンラフトへの移動を阻害することが示された。In human coronary artery smooth muscle cells, stimulation with SPC induces migration of Fyn protein to the membrane raft (upper left arrow). On the other hand, in smooth muscle cells pretreated with EPA, Fyn protein migration by SPC stimulation was not observed (lower left), indicating that EPA inhibits Fyn protein migration to membrane rafts. ＥＰＡ含有食品摂取後の血中ＥＰＡ濃度の変化を、本発明の補助成分無し（Ａ）、補助成分有り（Ｂ）のそれぞれについて調べた。調査対象はＡさん（５０代）、Ｂさん（４０代）、Ｃさん（３０代）の３名で、表２のスケジュールに沿って血液を採取し、ＥＰＡ濃度を計測した。補助成分無しでは、３名ともＥＰＡ濃度の大きな上昇は見られなかったのに対し（Ａ）、補助成分有りでは３名ともＥＰＡ濃度の上昇が見られた。図中縦軸はＥＰＡ濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。Changes in blood EPA concentration after ingestion of EPA-containing foods were examined for each of the present invention without the auxiliary component (A) and with the auxiliary component (B). Three subjects, Mr. A (50s), Mr. B (40s), and Mr. C (30s), collected blood according to the schedule in Table 2 and measured the EPA concentration. In the absence of an auxiliary component, no significant increase in EPA concentration was observed in all three subjects (A), whereas in the presence of an auxiliary component, all three subjects showed an increase in EPA concentration. In the figure, the vertical axis represents the EPA concentration (μg / ml). ＥＰＡ含有食品摂取後の血中アラキドン酸濃度の変化を、本発明の補助成分無し（Ａ）、補助成分有り（Ｂ）のそれぞれで比較した。ＥＰＡ含有食品を摂取した場合においても、血中のアラキドン酸濃度は大きな変化が見られなかった。図中縦軸はアラキドン酸濃度（μｇ／ｍｌ）を示す。Changes in blood arachidonic acid concentration after ingestion of EPA-containing foods were compared in the present invention without the auxiliary component (A) and with the auxiliary component (B). Even when the EPA-containing food was ingested, the blood arachidonic acid concentration did not change significantly. In the figure, the vertical axis represents the arachidonic acid concentration (μg / ml). 図６、図７の結果を、ＥＰＡ含有食品摂取時（０ｈ）の濃度を１００とした相対値で表した。各成分の血中濃度のうち、「補助成分有りのＥＰＡ濃度」が最も大きな上昇率を示した。図中縦軸は脂肪酸濃度の相対値（０ｈ＝１００）を表し、ＡＲＡ（Ｓｏｌｉｄｂａｒ）はアラキドン酸を表す。The results of FIGS. 6 and 7 were expressed as relative values with the concentration at the time of ingesting the EPA-containing food (0 h) being 100. Among the blood concentrations of each component, “EPA concentration with auxiliary components” showed the largest increase rate. In the figure, the vertical axis represents the relative value of fatty acid concentration (0h = 100), and ARA (Solid bar) represents arachidonic acid.

Claims

エイコサペンタエン酸（以下「ＥＰＡ」という）及びこれらの薬理学上許容可能な塩から選ばれる少なくとも１つの化合物を有効成分とする血管攣縮の予防用組成物であって、前記ＥＰＡがａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡからなることを特徴とする血管攣縮の予防用組成物。 A composition for preventing vasospasm comprising at least one compound selected from eicosapentaenoic acid (hereinafter referred to as “EPA”) and a pharmacologically acceptable salt thereof , wherein the EPA is all-cis- A composition for preventing vasospasm, which comprises EPA .

ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡが、魚介類より、摂氏１００度以下の温度で抽出されることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。 The composition according to claim 1, wherein all-cis-EPA is extracted from seafood at a temperature of 100 degrees Celsius or less.

ａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡが、魚介類より、摂氏１００度以下の温度で抽出され、抽出の全工程において生体内での立体構造を保持した状態で抽出されることを特徴とする、請求項１又は請求項２に記載の組成物。 The all-cis-EPA is extracted from fish and shellfish at a temperature of 100 degrees Celsius or less, and is extracted in a state in which a three-dimensional structure in a living body is maintained in all extraction steps. The composition according to claim 2.

血管攣縮が、スフィンゴシルフォスフォリルコリンによって誘導されることを特徴とする、請求項１から請求項３のうちいずれか１項に記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 3, wherein vasospasm is induced by sphingosylphosphorylcholine.

血管攣縮が、スフィンゴシルフォスフォリルコリンによって活性化されたＦｙｎタンパク質が、血管壁上メンブレンラフトに移動することによって生じることを特徴とする、請求項１から請求項４のうちいずれか１項に記載の組成物。 5. The vasospasm is caused by migration of a Fyn protein activated by sphingosylphosphorylcholine to a membrane raft on a vascular wall, according to any one of claims 1 to 4. Composition.

セイヨウタンポポ粉末、アーティチョーク粉末、クルクミン粉末、カキ肉エキス、マリアアザミ抽出物、ウルソデオキシコール酸及びウコン抽出物から選ばれる少なくとも１種類の吸収補助成分を含むことを特徴とする、請求項１から請求項５のうちいずれか１項に記載の組成物。 The at least one absorption auxiliary component selected from dandelion powder, artichoke powder, curcumin powder, oyster meat extract, maria thistle extract, ursodeoxycholic acid and turmeric extract is characterized by claim 1 to claim 6. The composition according to any one of 5 above.

セイヨウタンポポ粉末と、アーティチョーク粉末と、クルクミン粉末と、カキ肉エキスと、マリアアザミ抽出物とを含むことを特徴とする請求項６に記載の組成物。 The composition according to claim 6, comprising dandelion powder, artichoke powder, curcumin powder, oyster meat extract, and Maria thistle extract.

アスコルビン酸、トコフェロール、これらの塩またはエステル、ビタミンＥ、大豆発酵エキスから選ばれる少なくとも１種類の酸化防止用補助成分を含むことを特徴とする、請求項１から請求項７のうちいずれか１項に記載の組成物。 8. The composition according to claim 1, comprising at least one antioxidant auxiliary component selected from ascorbic acid, tocopherol, salts or esters thereof, vitamin E, and soybean fermented extract. A composition according to 1.

消化吸収促進と、高コレステロール血症改善用補助成分として、卵黄レシチンを含むことを特徴とする、請求項１から請求項８のうちいずれか１項に記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 8, comprising yolk lecithin as an auxiliary component for promoting digestion and absorption and improving hypercholesterolemia.

更に調整、安定化用補助成分として蜜蝋及び／またはグリセリン脂肪酸エステルを含むことを特徴とする、請求項９に記載の組成物。 The composition according to claim 9, further comprising beeswax and / or glycerin fatty acid ester as an auxiliary component for adjustment and stabilization.

請求項１から請求項１０のうちいずれか１項に記載の組成物を配合することを特徴とする、血管攣縮予防用の機能性食品の製造方法。 A method for producing a functional food for preventing vasospasm, wherein the composition according to any one of claims 1 to 10 is blended.

主成分であるａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡを７０〜７５重量％、セイヨウタンポポ粉末、マリアアザミ抽出物、カキ肉エキス、ウルソデオキシコール酸、ウコン抽出物から選ばれる少なくとも１種類の吸収補助成分を５〜１５重量％、アスコルビン酸、トコフェロール、これらの塩またはエステル、ビタミンＥ、大豆発酵エキスから選ばれる少なくとも１種類の酸化防止用補助成分を２〜１５重量％、卵黄レシチンを０．５〜２重量％、調整安定化用補助成分を１０〜１２重量％含んでなり、全体で１００重量％となる組成を含む機能性食品であって、血管病が血管攣縮に起因することを特徴とする、血管攣縮予防用の機能性食品。 70 to 75% by weight of all-cis-EPA as a main component, 5 to 15 at least one absorption auxiliary component selected from dandelion powder, Maria thistle extract, oyster meat extract, ursodeoxycholic acid, turmeric extract % By weight, ascorbic acid, tocopherol, salts or esters thereof, vitamin E, at least one antioxidant auxiliary ingredient selected from fermented soybean extract, 2-15% by weight, yolk lecithin 0.5-2% by weight, Prevention of vasospasm, comprising 10 to 12% by weight of an auxiliary component for adjustment and stabilization, and a functional food comprising a composition of 100% by weight as a whole, wherein vascular disease is caused by vasospasm Functional food for use.

ａｌｌ−ｃｉｓ−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）を有効成分とし、主成分として７３．６重量％のａｌｌ−ｃｉｓ−ＥＰＡ（２８％溶液）を含み、ＥＰＡの腸管における吸収効率を高めるための補助成分として、２重量％のセイヨウタンポポ粉末と、２重量％のアーティチョーク粉末と、２重量％のクルクミン９０％粉末と、２重量％のカキ肉エキスと、２重量％のマリアアザミ抽出物とを含み、ＥＰＡの酸化を防止するための補助成分として、２重量％のビタミンＥと、１重量％のビタミンＣと、１重量％の大豆発酵エキスとを含み、摂取時における消化吸収促進と、高コレステロール血症改善のための補助成分として、１重量％の卵黄レシチンを含み、調整、安定化用の補助成分として、１１．４重量％の蜜蝋とグリセリン脂肪酸エステルを含む機能性食品であって、血管病が血管攣縮に起因することを特徴とする、請求項１２に記載の機能性食品。 All-cis-eicosapentaenoic acid (EPA) as an active ingredient, containing 73.6% by weight of all-cis-EPA (28% solution) as a main ingredient, as an auxiliary ingredient for increasing the absorption efficiency of EPA in the intestinal tract 2% by weight dandelion powder, 2% by weight artichoke powder, 2% by weight curcumin 90% powder, 2% by weight oyster meat extract and 2% by weight maria thistle extract, As an auxiliary ingredient to prevent oxidation, it contains 2% by weight vitamin E, 1% by weight vitamin C and 1% by weight fermented soybean extract, promoting digestion and absorption when ingested, and improving hypercholesterolemia As an auxiliary ingredient for the preparation, it contains 1% by weight of egg yolk lecithin, and as an auxiliary ingredient for preparation and stabilization, 11.4% by weight of beeswax and glycerin fatty acid ester A functional food containing the Le, wherein the vascular disease is due to vasospasm, functional food according to claim 12.