JP5048246B2 - スキンケア用の内服組成物 - Google Patents
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Description
しかし、これらの化粧料は皮膚に直接適用されるもので、ケフィアが内服により良好なスキンケア効果を及ぼし得るか否かは不明であった。
また、本発明は、スキンケアのために上記内服組成物を使用する方法にも関する。
さらに、本発明は、スキンケア用内服組成物を製造するための、ケフィア発酵乳を使用する方法にも関する。
ケフィア粒は、乳酸菌と酵母とが共生している菌塊、すなわち天然の固定化微生物共生体のことをいう。共生とは、異種の生物が位置的・地理的に定常的な緊密関係を保って、生活している現象のことをいう。
本発明で使用されるケフィア粒は、ケフィアの種菌として使用されるものであれば、特に制限されない。例えば、コーカサス地方で広く飲食されているケフィアの種菌を使用してよい。
本発明で使用されるケフィア粒は乳酸菌と酵母との共生体である点で、乳酸菌と酵母とが単に混在しているものとは相違する。
本発明のケフィア粒は、菌以外にも、例えば粘性多糖類(ケフィランなど)をケフィア粒の総量の50〜55%含んでもよい。
また、ケフィア粒内で共生している菌は、互いに相手の分泌するバクテリオシンなどの物質の作用を受けたりすることなどにより、単独または混在して存在している同種の菌より、生命力および有効成分分泌力で優れている。
本発明のケフィア粒内で共生している菌と、乳酸菌と酵母とが混在しているものとは、以下の方法により区別することができる。
乳中の抗生物資の検出に一般的に使用されるディスク法またはカップ法などを準用した試験において、本発明のケフィア粒内で共生している菌は、単に混在している乳酸菌と酵母より優れた大腸菌群などに対する抗菌活性を示す。上記のディスク法は、例えば、McGroarty,J.A.およびReid,G.1988.Detection of a lactobacillus substance that inhibits Escherichia coli.Can.J.Microbiol,34:974−978に記載されている。
また、本発明においては、ケフィアから慣用の方法で分離して得られたもの、例えば、カルチャーパウダーをケフィア粒として使用することもできる。このようなカルチャーパウダーなどは、ウィズバイ社(ドイツ)、リョーサン社(カナダ)およびローゼル社(カナダ)などから市販されている。
工程1)殺菌した豆乳配合物100gに対し、ケフィア粒0.15〜15g(好ましくは0.3〜10g、より好ましくは0.5〜4.5g)を接種し;
工程2)5〜30℃(好ましくは15〜25℃、より好ましくは18℃〜23℃)で8〜72時間、及び/又は酸度が0.55〜1.50(好ましくは0.60〜1.20、より好ましくは0.65〜0.90)になるまで発酵させる。
なお、この発酵において、ケフィア粒を以下のようにして処理して得た種菌を使用することもできる。
工程a)殺菌した牛乳100gに対し、0.15〜15g(好ましくは0.3〜10g、より好ましくは0、5〜4.5g)のケフィア粒を接種し;
工程b)5〜30℃(好ましくは15〜25℃、より好ましくは18℃〜23℃)で培養して種菌を調製する。
本明細書で「酸度」というときは、特別な場合を除き、乳酸酸度をいう。この乳酸酸度は、1%フェノールフタレイン溶液を指示薬として、1/10N NaOHで中和滴定を行い、要した1/10N NaOHから食品中に含まれる酸を乳酸量に換算して求めることができる。
上記工程1において用いられる豆乳配合物は、豆乳、又は加水した豆乳以外に、発酵助剤も含む。この助剤により、豆乳配合物の組成を牛乳に近いものとするとよい。本発明に用いる助剤としては、市販されている発酵助剤、例えばヨーグルト、チーズなどの製造の際に用いられるものを単独で又は組み合わせて用いることができるが、好ましくはCa、P、Fe、Na、K、Mg、Cl、リン酸塩及び乳糖からなる群より選択される成分の1又は2以上を含むものであり、より好ましくは、少なくともP、Fe、K、Cl及び乳糖を含むか、またはこれらの7成分のすべてを含むものである。各成分の添加量は、豆乳配合物の成分、発酵に用いる菌の種類などに基づいて種々の範囲に設定することができるが、豆乳配合物100g中の好ましいおよその含量(g)は、それぞれ:Caは0.005以上であり、より好ましくは0.5以下であり;P(無機リンとして)は0.009以上であり、より好ましくは0.9以下であり;Feは0.001以上であり、より好ましくは1以下であり;Naは0.006以上であり、より好ましくは0.6以下であり;Kは0.001以上であり、より好ましくは1以下であり;Mgは0.0007以上であり、より好ましくは0.07以下であり;Clは0.008以上であり、より好ましくは0.8以下であり;乳糖は0.01以上であり、より好ましくは50以下である。
乳酸桿菌として、例えば、Lactobacillus kefiranofaciens;Lactobacillus casei;Lactobacillus kefiri;またはLactobacillus brevisなどが挙げられる。
また、乳酸球菌として、例えば、Lactococcus lactis、;Enterococcus faecalis;Streptococcus lactis;Streptococcus cremoris;Streptococcus diacetylactis;Leuconostoc mesenteroides、特にLeuconostoc mesenteroides subsp dextranicum;またはLeuconostoc cremorisなどが挙げられる。
乳糖発酵性酵母として、例えば、Kluyveromyces marxianus、特にKluyveromyces marxianus var.marxianusもしくはKluyveromyces marxianus var.lactis;Candita kefyr;またはBrettanomyces anomalusなどが挙げられる。
また、乳糖非発酵性酵母として、例えば、Saccharomyces unisporous;Saccharomyces cerevisiae;Candita holmii;またはSaccharomyces unisporaqsなどが挙げられる。
これら成分は、合成品であっても、または天然由来品であってもよく、また天然由来品である場合、粗抽出物であっても、精製物であってもよい。
また、本発明において、上記に示した成分を、単独で使用することも、2種以上を併用することもできる。
また、本発明の植物油は粗抽出物であっても、精製物であってもよい。さらに、本発明においては、上記の植物油を単独で使用しても、2種以上を併用してもよい。
また、これらカロテノイドは天然由来品が好ましい。例えば、ルテインを含有するマリーゴールド抽出物、特にマリーコールドの花弁からの抽出物が好ましい。
本発明において、これらカロテノイドを単独で使用することも、2種以上を併用することもでき、例えば、β−カロチンとルテインとを併用することもできる。
これら抗酸化物質は天然由来品が好ましい。例えば、ビタミンEを含有する大豆抽出物、特にビタミンE含有大豆油が好ましい。
本発明において、これら抗酸化物質を単独で使用することも、2種以上を併用することもできる。
美白用とは、例えば、肌を美しく白くするために、具体的には色ムラのない、すなわちシミ、ソバカスがない、くすんでいない、美しい肌色にするために使用することをいう。したがって、本発明の組成物は、例えば、日焼けの防止・改善用またはシミ・ソバカスの予防・治療用などに使用することができる。
美肌用とは、例えば、皮膚にハリ、つや、柔らかさ、なめらかさ、透明感を与え、きめを細かくし、かつ整えるために使用することをいう。したがって、本発明の組成物は、例えば、老化、紫外線暴露、ホルモンバランスの変化および活性酸素傷害などにより生じるシワやたるみの防止・改善用、皮膚弾性向上用、皮膚保湿用、ニキビもしくは吹き出物の防止・改善用、または肌荒れの防止・改善用などに使用することができる。
Lactobacillus kefiranofaciens、Lactobacillus kefiri、Lactobacillus brevis、Kluyveromyces marxianus、Candita kefyr、Candita holmiiおよびSaccharomyces unisporaqsを含むケフィア粒(日本ケフィア社より入手)を使用した。
ケフィア粒中に生存している菌と、ケフィア由来ではない菌との、大腸菌群に対する抗菌活性を、McGroarty,J.A.およびReid,G.1988.Detection of a lactobacillus substance that inhibits Escherichia coli.Can.J.Microbiol,34:974−978に記載の方法に準じて比較した。先ず、Escherichia coliの18時間培養液の1白金耳量をBYEプレート培地上に滅菌スワブを用いて均一に播種した。続いて、抗菌活性を調べる対象の菌培養液5μlをろ紙ディスク(直径6mm)にしみ込ませた。このディスクを上記BYEプレート培地上のほぼ中央に置いた。次に、このBYEプレート培地を4℃、3時間インキュベートすることで、ディスクにしみ込ませた菌培養液を培地中に拡散させた。続いて、37℃、18時間培養させた後、ディスク周辺の阻止帯を調べた。
その結果、ケフィア粒で共生している菌は、ケフィア粒由来ではない同種の菌と比較して、大腸菌群の生育をより強く阻害し、優れた抗菌活性を示すことが認められた。
牛乳に脱脂粉乳を加えて調整した調整乳を殺菌し、次いで冷却して、そこに上記のケフィア粒を種菌として接種し、25℃で24時間発酵させて発酵乳を得た。この発酵乳を凍結乾燥してケフィアMSLを粉体として得た。
凍結乾燥後に殺菌処理をした以外、上記のケフィアMSLと同様にして、ケフィアMSDを粉体として得た。
豆乳(マルサン社製)1013gを80℃達温殺菌した。これにケフィア粒(日本ケフィア社より入手)50gを接種し、20℃で培養した。接種19時間後には柔らかいカードが形成されたが、酸度は0.40であった。接種24時間後、酸度は0.50であった。
(1)ケフィア粒を用いた種菌の調製
90℃達温殺菌した牛乳に、コーカサス地方のケフィア粒(日本ケフィア社より入手)を1.5%(重量比)接種し、20℃で20時間培養し、種菌を得た。
豆乳(日本ビーンズ社製)900gを70℃達温殺菌し、冷却した(10℃)。他方、表1の組成の助剤34g、ペプトン2gを水64gに溶解したものを殺菌し、殺菌済み豆乳に加えた。上記で調製した種菌を1.5%(重量比)接種し、20℃で培養した。
(1)種菌の調製
90℃達温殺菌した牛乳160gの各々に、ケフィア粒(日本ケフィア社より入手)を2.5gずつ接種し、20℃で20時間培養した。カードが良好に形成されていた。接種24時間後に冷却した。
表3、4の割合で加水した豆乳(日本ビーンズ社製;BX 13.1)を75℃で5分間殺菌した。他方、表3、4の割合の、助剤(組成は表1と同じ)と市販のペプトンを別に殺菌して加水豆乳に添加し、17℃で上記で調製した種菌をそれぞれ1.5%(重量比)接種し、20℃で培養した。
表6の豆乳(マルサン社製;無調製、BX 10.6)を含む配合物を通常の方法で殺菌処理した。
得られた発酵産物を加熱したところ、加熱中に八方による液面上昇があり、液量の約1.5倍に盛り上がり、凝固が発生した。しかし、乳タンパク質の凝固とは異なり、冷却することにより消失した。液面も元に戻った。加水豆乳と助剤液とを別殺菌しなくても問題ないものと思われた。
(1)種菌の調製
1)90℃達温殺菌した牛乳に、コーカサス地方のケフィア粒(日本ケフィア社より入手)を1.5%(重量比)接種した。
2)20℃で20時間培養した(酸度0.78)。
1)豆乳(日本ビーンズ社製;BX12.8)150kgに水を20kg加えた(BX11.1)。80℃で5分間殺菌した。
2)他方、表1の助剤1.9kg(最終濃度1.1%)、ペプトン0.36kg(最終濃度0.2%)を水10kgに溶解したものを80℃で5分間殺菌した。
3)豆乳・水−混合物が25℃に冷却されたところで、助剤・ペプトン・水−混合物を加え、さらに上記で調製した種菌3kgを接種し、培養を開始した(24℃)。
4)接種18時間後(23.5℃)、カードが良好に形成されていた。これは、豆乳発酵産物調製例4で形成されたカードより、やや固かった。撹拌した(22℃)。
発酵産物を通常の方法により凍結乾燥し、薄黄色の粉末を得た。粉末には豆乳独特の臭いがまったく感じられなかった。
表7に示した組成になるように、試験食1および2を調製した。
1.被験者
被験者は、31〜40歳の健康な女性10名で、自覚症状として、乾燥肌および荒れ肌、またはニキビ肌を有していた。試験期間中は、被験者には、試験食1および2以外の、肌に対する効果がある医薬品、外用薬、健康食品は使用させなかった。
(1)試験食の摂取方法
被験者に試験食1または試験食2のいずれか一つを1回2g、1日3回、28日間、水とともに摂取させた。
先ず、被験者の一方の上腕部内側に最小紅斑量の紫外線を照射し、その14日後と28日後にメグザメーターおよび色差計でメラニン値、エリスマ値およびL値を測定した。続いて、試験食の摂取を開始させ、28日間継続して摂取させた。試験食摂取開始時に、前回紫外線を照射されたのとは別の上腕部内側に、前回と同じ最小紅斑量の紫外線を照射して、その14日後と28日後にメグザメーターおよび色差計でメラニン値、エリスマ値およびL値を測定した。
なお、紫外線の照射量が同じであっても、個人により紅斑の出方が違うため、試験開始前日に紫外線を照射し、翌日の試験開始時に被験者の紅斑の出る照射量を判定し、その1.5倍量を上記の最小紅斑量とした。
試験食摂取前に目尻のシワをレプリカにとり、続いて、試験食の摂取を開始させ、28日間継続して摂取させ、その28日目に再び目尻のシワをレプリカにとった。このレプリカに一定方向(30°)から並行光を照射して、生じた陰影を画像処理し、そこから陰影面積とその長さを算出した。同様に標準スケールからも陰影面積とその長さを算出し、目尻シワレプリカの数値を補正した。これら数値からシワ面積率、最大シワ平均深さおよび最大シワ最大深さを算出した。
上記の標準スケールとして、0.2mm、0.4mm、0.6mm、0.8mm、1.0mmの各深さの鋳型から作製したレプリカを用いた。
試験食摂取前に、キュトメーターのプローブを前腕部内側の皮膚表面に密着させ、一定の陰圧をかけることによりプローブ内に吸引された皮膚の変化で皮膚の粘弾性を測定した。続いて、試験食の摂取を開始させ、28日間継続して摂取させ、その28日目に再び上記のようにして皮膚の粘弾性を測定した。
試験食摂取前に、コルネオメーターのプローブを前腕部内側の皮膚表面に密着させることにより、装置内のマイクロプロセッサーがプローブ内のスイッチ情報と電気の流れる測定時間を読み取り、それらを登録されている校正データで評価することにより、角質水分量を測定した。続いて、試験食の摂取を開始させ、28日間継続して摂取させ、その28日目に再び角質水分量を上記のようにして測定した。
試験食の摂取前と摂取終了後(摂取開始28日目)において、大便中のビフィズス菌の菌数を常法に従い測定した。
被験者に対し、試験開始時に生活習慣に関するアンケート調査を行い、続いて、試験食の摂取開始直前、摂取後14日目および摂取後28日目に肌に関するアンケート調査も行った。
被験者に、試験食の摂取期間中における、毎日の食事、体調および試験食の摂取などについて日誌に記入させた。
上記の測定はすべて、一定の室内条件(温度20℃・湿度60%以下)で、洗顔の約1時間後に行った。
(1)美白効果(紫外線誘導色素沈着の抑制効果)
結果を表8に示した。
メラニン:
試験食摂取前と摂取中のそれぞれの期間における、紫外線照射前のメラニン値を100とした場合のメラニンINDEX値(被験者10例の平均値±標準偏差)について、14日目は、試験食摂取前の期間では101.74±1.33%を、試験食摂取中の期間では99.74±1.40%を示し、試験食の摂取により2.0%低下した。28日目は、試験食摂取前の期間では101.24±1.02%を、試験食摂取中の期間では99.21±1.02%を示し、試験食の摂取により2.03%低下し、有意な差が認められた(p<0.01、t検定)。
エリスマ:
試験食摂取前と摂取中のそれぞれの期間における、紫外線照射前のエリスマ値を100とした場合のエリスマINDEX値(被験者10例の平均値±標準偏差)について、14日目は、試験食摂取前の期間では102.39±1.52%を、試験食摂取中の期間では101.50±1.52%を示し、試験食の摂取により0.89%低下した。28日目は、試験食摂取前の期間では102.64±3.02%を、試験食摂取中の期間では101.51±1.89%を示し、試験食の摂取により1.13%低下が認められた。
L値:
試験食摂取前と摂取中のそれぞれの期間における、紫外線照射前のL値を100とした場合のL−INDEX値(被験者10例の平均値±標準偏差)について、14日目は、試験食摂取前の期間では97.74±1.97%を、試験食摂取中の期間では113.69±3.51%を示し、試験食の摂取により15.95%増加し、有意な差が認められた(p<0.01、t検定)。28日目は、試験食摂取前の期間では97.23±2.57%を、試験食摂取中の期間では102.00±3.33%を示し、試験食の摂取により4.77%増加し、有意な差が認められた(p<0.01、t検定)。
シワ面積率:
シワ面積率は被験者10例中3例に、試験食の摂取により3.2〜11.8%の低下を認め、平均して7.83%低下した。
最大シワ平均深さ:
最大シワ平均深さは縮緬ジワのようなシワでの測定は困難であるため、測定できたのは被験者10例中6例のみであった。そのうちの4例に、試験食の摂取による改善が認められ、最大135.3μm、平均して47.7μm改善した。
最大シワ最大深さ:
最大シワ平均深さの測定が可能だった6例中5例に、試験食の摂取による改善が認められ、最大70.7μm、平均して45.98μm改善した。
頬部:
試験食の摂取前と摂取後とを比較し改善が認められたのは被験者10例中4例であった。
腕部:
試験食の摂取前と摂取後とを比較し改善が認められたのは被験者10例中4例であった。
頬部:
試験食の摂取前と摂取後とを比較し改善が認められたのは被験者10例中7例であった。10例の角層水分量(平均値±標準偏差)は、摂取前が51.83±63.87μsであるのに対して、摂取後が63.87±10.68μsと、12.04μs改善し、有意に上昇した(p<0.05、t検定)。
腕部:
試験食の摂取前と摂取後とを比較し改善が認められたのは被験者10例中10例であり、10例の角層水分量(平均値±標準偏差)は、摂取前が33.93±6.76μsであるのに対して、摂取後が40.33±7.64μsと、6.4μs改善し、有意に上昇した(p<0.01、t検定)。
大便中ビフィズス菌(Bifidobacterium spp.):
試験食の摂取前と摂取後とを比較し、被験者10例中5例において、ビフィズス菌の増加が認められ、最大で6.0×108から4.1×109個/g大便と6.8倍に増加し、10例の菌数(平均値±標準偏差)は3.4×109から6.4×109個/g大便と2.12倍に増加した。
被験者本人の自覚により、潤い、はり、弾力、キメ、透明感およびシワについての肌の状態を評価させた。各状態を自覚できない場合を−5〜−1点の間のスコアーで、各状態を自覚できる場合を1〜5点の間のスコアーで、それぞれ評価させた。表9に被験者10例の平均値を示した。10例の平均値でみた場合、いずれの状態においても試験食摂取前と比較して摂取後14日目と28日目の点数は増加しており、肌の潤い(摂取前と摂取後28日目)、はり(摂取前と摂取後14日目)、キメ(摂取前と摂取後14日目)、透明感(摂取前と摂取後14日目、摂取前と摂取後28日目)およびシワ(摂取前と摂取後14日目、摂取前と摂取後28日目)において有意な差が認められた(p<0.05、符号検定)。
被験者の摂取後の感想では、「カサカサ肌に潤いが出てきた」、「便通がとてもよくなって、お腹の張った感じがなくなった」、「娘につやが出てきたといわれた」、「便の回数が増えた」、「摂取前より肌の調子がよくなった」などがあった。
試験食1および2の美白効果については、色素沈着の抑制・早期改善が認められ、シワの改善も認められた。皮膚の粘弾性においては頬部で改善が認められた。保湿機能(角層水分量)においては頬部、腕部共に改善が認められた。特に、保湿効果に優れていた。
また、腸内細菌においては、善玉菌といわれるビフィズス菌の増加が認められた。
試験食1において、優れた美白効果とシワ改善効果が認められた。一方、試験食2において、優れた保湿効果が認められた。
また、上記において調製した豆乳発酵産物にも、美白効果、皮膚の粘弾性における改善効果、保湿機能(角層水分量)における改善効果、ビフィズス菌増加効果が認められた。
Claims (12)
- ケフィア菌発酵乳を含有する、美白用、シワやたるみの防止・改善用、皮膚弾性向上用、又は皮膚保湿用の内服組成物。
- ケフィア菌発酵乳がケフィア粒を種菌として用いて得られた発酵乳である、請求項1記載の内服組成物。
- ケフィア粒が乳酸菌と酵母とが共生している菌塊である、請求項2記載の内服組成物。
- ケフィア粒が粘性多糖類を含む、請求項2または3記載の内服組成物。
- 粘性多糖類を総量の50〜55%含む、請求項4記載の内服組成物。
- 粘性多糖類がケフィランである、請求項4または5記載の内服組成物。
- ケフィア菌発酵乳が乳酸菌と酵母とが混在しているものを種菌として用いて得られた発酵乳である、請求項1記載の内服組成物。
- 乳酸菌が乳酸桿菌および乳酸球菌からなる群より選択される1種以上の菌である、請求項3〜7のいずれか1項記載の内服組成物。
- 酵母が乳糖発酵性酵母および乳糖非発酵性酵母からなる群より選択される1種以上の菌である、請求項3〜8のいずれか1項記載の内服組成物。
- 種菌として酢酸菌をさらに用いる、請求項1〜9のいずれか1項記載の内服組成物。
- ケフィア菌発酵乳が豆乳を発酵させて得られた発酵乳である、請求項1〜10のいずれか1項記載の内服組成物。
- ケフィア菌発酵乳が牛乳を発酵させて得られた発酵乳である、請求項1〜10のいずれか1項記載の内服組成物。
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