TWI389698B - Fermented milk for use in skin improvement and / or treatment, and methods of making the same - Google Patents
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Description
本發明係關於皮膚改善效果及/或治療效果高之組成物，與使用其之飲食物及發酵乳，特別係關於含有製造特性優良的乳酸菌之組成物以及發酵乳。
以皮膚改善及治療為目的之組成物及飲食品中，係包含乳酸菌及其培養物。
關於這些組成物及飲食品之先前技術有如下所述者。
使用特定乳酸菌之異位性皮膚炎的抑制劑及食品(專利文件1)。
使用特定乳酸菌之培養物而具有皮膚改善效果之保濕劑，及有效預防．治療皮膚粗糙與乾燥，且賦予皮膚「光澤」、「緊緻」之化妝料組成物(專利文件2)。
為保持皮膚免疫系統平衡而使用的特定乳酸菌及其培養物，及含有乳酸菌及其培養物之食品等(專利文件3)。
藉由使用膠原胜肽與神經醯胺及乳酸菌的組合，可改善皮膚狀況以外，亦可期待改善便秘、恢復疲勞、減輕肩頸部酸痛等效果的美容食品(專利文件4)。
如上所述，發現乳酸菌及其培養物具有皮膚改善效果及治療效果，而事實上自過去即期待其應用於產業上。一般認為目前正進行許多具體的研究，且亦存在實際上已完成製品化者。
然而，迄今的研究中，針對乳酸菌與皮膚的關係，或於乳酸菌中添加膠原胜肽與神經醯胺等所組成之組成物與皮膚的關係的檢討並不充分。因此，針對因乳酸菌及發酵乳而具有皮膚改善效果等，目前仍處於缺乏科學性根據的狀態。
於具有皮膚改善效果等迄今的乳酸菌中，製造發酵乳時，會有無法形成凝乳，以及凝乳形成前需要極長時間等情形出現。於此情形下，需分別管理雖然具有皮膚改善效果等但發酵乳製造特性不佳之乳酸菌，與為形成凝乳而使用之製造特性優良的乳酸菌，以及因發酵時間變長，而使全體之製造時間延長。此時，具有皮膚改善效果等迄今的乳酸菌並非生菌，而或為死菌，或為耐熱性高，被限定的菌體等。亦即，具有皮膚改善效果等迄今的乳酸菌，並不適用於發酵乳工業上大量的生產(商業性生產)等。
例如，欲使用號稱具有皮膚改善效果等之乳酸菌進行發酵乳製造時，大約需要如下所述之製作步驟。亦即為(1)單獨培養具有皮膚改善效果等之乳酸菌。(2)因應情況藉由使用離心分離法及膜分離法，將該乳酸菌(培養菌體)濃縮至規定之濃度，或為提高乳酸菌之保存性，對培養液進行加熱殺菌，與進行乾燥。(3)將另一種形成凝乳之乳酸菌，與其經濃縮後之培養菌體，或經加熱殺菌及乾燥後之菌體，添加入發酵前之調合乳，並進行混合培養。
這些製作步驟的管理十分複雜，且亦增加製造費用及製造時間，混入雜菌之可能性亦高。另外，亦難以獲得受大眾喜愛之口味良好的發酵乳。
專利文件1：特開2000－095697號公報專利文件2：特開2003－081808號公報專利文件3：特表2004－510740號公報專利文件4：特開2004－254632號公報
本發明有鑑於上述先前技術之課題點，以提供因來自天然物質而具高安全性，皮膚改善效果及/或治療效果高之組成物，且適於皮膚改善及/或治療用途之組成物為目的。另外，亦以使用該組成物，提供皮膚改善效果及/或治療效果高之飲食品及發酵乳，特別係含有製造特性優良的乳酸菌之組成物以及發酵乳為目的。
本發明之發明者們有鑑於上述課題，專心研究結果，自使用於調製發酵乳之乳酸菌，以選出皮膚改善效果及治療效果高者為目的，藉由進行in vitro試驗，發現嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)特別地具有高的皮膚改善效果及/或治療效果，本發明遂至完成。
亦即，與本申請案之申請專利範圍第1項相關之發明係一種嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)之用途，其係使用於皮膚改善及/或治療。
與申請專利範圍第2項相關之發明係一種皮膚改善用及/或治療用之組成物，其係含有嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物所成。
與申請專利範圍第3項相關之發明係如申請專利範圍第2項之皮膚改善用及/或治療用之組成物，其係進而含有保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1)及/或其培養物。
與申請專利範圍第4項相關之發明係一種飲食品，其特徵係含有如申請專利範圍第2項之組成物。
與申請專利範圍第5項相關之發明係一種皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，其係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)而調製。
與申請專利範圍第6項相關之發明係如申請專利範圍第5項之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，其係含有膠原胜肽及/或神經醯胺。
與申請專利範圍第7項相關之發明係一種製造如申請專利範圍第5或6項之皮膚改善用及/或治療用發酵乳之方法，其中於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，填充於容器使其發酵，形成凝乳後進行冷藏。
與申請專利範圍第8項相關之發明係一種製造如申請專利範圍第5或6項之皮膚改善用及/或治療用發酵乳之方法，其中於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，形成凝乳後，破碎凝乳再填充於容器中進行冷藏。
與申請專利範圍第9項相關之發明係一種製造如申請專利範圍第5或6項之皮膚改善用及/或治療用發酵乳之方法，其中於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，形成凝乳後，破碎凝乳後將其冷卻，填充於容器中並進行冷藏。
於本發明中，「皮膚改善效果及/或治療效果」，係指針對皮膚的光澤、緊緻、暗沉、斑點、下垂、毛孔明顯、皮膚紋理、皺紋、乾燥情形、黏膩感、透明感、泛紅、妝容持久性、浮腫、黑眼圈明顯、皮疹、保濕、色素沉澱中至少一種以上的狀態，具有改善效果。
另外，「皮膚改善及/或治療」，係指針對皮膚的光澤、緊緻、暗沉、斑點、下垂、毛孔明顯、皮膚紋理、皺紋、乾燥情形、黏膩感、透明感、泛紅、妝容持久性、浮腫、黑眼圈明顯、皮疹、保濕、色素沉澱中至少一種以上的狀態，具有改善效果。
進而，「皮膚改善及/或治療」，係包含異位性皮膚炎等各種過敏性皮膚炎所引起皮膚症狀之改善及抑制發病。
另外，「皮膚改善用及/或治療用」係指使前述之皮膚改善效果及/或治療效果發揮為目的而使用，特別係指適於使前述之皮膚改善效果及/或治療效果之用途。
於本發明中，由於將「保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)」於調製發酵乳時，與嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)組合用作為菌酛，而包含所有具有形成凝乳能力之乳酸菌。例如自明治乳業股份有限公司所製之原味優格、硬質優格、軟質優格中所分離出之乳酸菌。
本發明中之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)係存放於獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物存放中心，存放編號為FERM P－15487(識別：Streptococcus thermophilus OLS3059，存放日(收領日)：平成8年2月29日)之微生物。
自該原存放處基於布達佩斯條約於2006年11月29日進行存放的轉移，國際存放收領編號係FERM BP－10740。
該嗜熱鏈球菌OLS3059之菌體特徵如下所述。
菌落特徵：圓形．凸起．平滑型(BL平板培養基(無馬血)，培養溫度：37℃，培養時間：48小時)菌體型態：球菌革蘭氏染色：陽性氧氣需求性：好氧性對糖類的同化作用核酸糖：－，甘露醇：－，山梨糖醇：－，乳糖：＋，海藻糖：－，寡糖：－，麥芽糖：－，蜜二糖：－，松三糖：－，樹膠醛糖：－。
本發明中之保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1)係存放於獨立行政法人產業技術綜合研究所專利生物存放中心，收領編號為FERM P－17227(識別：Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1，存放日(收領日)：平成11年2月19日)之微生物。
自該原存放處基於布達佩斯條約於2006年11月29日進行存放的轉移，國際存放收領編號係FERM BP－10741。
該保加利亞桿菌OLL1073R－1之菌體特徵如下所述。
菌落特徵：不透明．粗糙型(BL洋菜培養基，培養溫度：37℃，培養時間：48小時)菌體型態：桿菌革蘭氏染色：陽性氧氣需求性：兼氣性厭氧性對糖類的同化作用核酸糖：－，甘露醇：－，山梨糖醇：－，乳糖：＋，海藻糖：－，寡糖：－，麥芽糖：－，蜜二糖：－，松三糖：－，樹膠醛糖：－。
本發明可提供使用於皮膚改善及/或治療之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)之用途。
根據本發明可提供因來自天然物質而具高安全性，且適合用於皮膚改善效果及/或治療用途之組成物。另外，使用該組成物，可提供皮膚改善效果及/或治療效果高之飲食品及發酵乳，特別係含有製造特性優良的乳酸菌之組成物以及發酵乳。
根據本發明，對增高整腸(通便)改善效果及/或治療效果的人，可供皮膚改善效果及/或治療效果高之發酵乳及其製造方法。
本申請案係提案使用於皮膚改善及/或治療之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)之用途。亦即，本發明之發明者們專心研究結果，自使用於調製發酵乳之乳酸菌，以選出皮膚改善效果及治療效果高者為目的，藉由進行in vitro試驗，發現嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)特別地具有高的皮膚改善效果及/或治療效果，本發明遂至完成。
其次，本發明之組成物係皮膚改善用及/或治療用之組成物，且係含有嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物。本發明之皮膚改善用及/或治療用之組成物，因來自天然物質而具高安全性，進而皮膚改善效果及/或治療效果高，且適合用於這些用途。
本發明之發明者們為自使用於調製發酵乳，且具有凝乳形成能力，同時製造特性優良之乳酸菌，選出皮膚改善效果及治療效果高者，進行in vitro試驗後，如前所述，發現嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)特別地具有高的皮膚改善效果及/或治療效果。
上述本發明之含有嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物所成之皮膚改善用及/或治療用之組成物，可進而含有保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii SubSpecies bulgaricus OLL1073R－1)及/或其培養物。
根據發明者們之實驗，發現組合使用嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物，與於菌體外生產黏多醣類之保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1)時，皮膚改善效果及/或治療效果高，且適合用於這些用途。
嗜熱鏈球菌OLS3059係使用於例如保加利亞優格LB81((註冊商標)明治乳業股份有限公司製)。
前述之嗜熱鏈球菌OLS3059及/或其培養物，與保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1)，除乳酸菌經分離．精製後之菌體外，均係包含菌體之培養物、菌體之萃取物、培養物之上清液、這些物質之濃縮液、濃縮物、乾燥物，進而因應需要之稀釋液、稀釋物等，及處理培養液、培養物所得之全部型態者。
前述之嗜熱鏈球菌OLS3059，無論活菌及死菌，其皮膚改善效果及/或治療效果高，且可使用於皮膚改善及/或治療。另外，保加利亞桿菌OLL1073R－1亦可使用活菌及死菌任一種。進而，嗜熱鏈球菌OLS3059與保加利亞桿菌OLL1073R－1，其菌體之培養法、萃取法、分離法、濃縮法、乾燥法、稀釋法等均無特別限制。使用於菌體培養之培養基一般係含有脫脂乳、乳清、乾酪素等牛乳蛋白，糖類酵母萃取物等，培養方法可適宜地使用一般性的好氧性或厭氧性之方法，培養溫度可使用例如設定於35~45℃，於培養中亦可使用氫氧化鈉等鹼性物質，維持培養基之pH在酸性至中性之間，例如維持pH在5~6之中和培養法。除類似之中和培養法之外，尚可使用分批培養等培養方法，於進行培養後，亦可因應需求對其培養物及上清液進行濃縮、乾燥、稀釋等。進而亦可使用離心分離法及膜分離法，使培養物之上清液與菌體分離，使菌體於濃縮狀態下進行回收。因而可藉由對菌體進行超音波處理及酵素處理等，而萃取出菌體內的成分，以及可對培養物及其上清液，菌體及其萃取物進行乾燥。亦可將這些物質作為本發明前述之組成物之有效成分。
本發明之組成物可添加任意之成分，且可遵循常用方法使用為皮膚外用劑。例如可適宜地混合用於一般的化妝料、藥品、醫藥品等各種成分、油劑、增黏劑、防腐劑、乳化劑、顏料、pH調整劑、抗氧化劑、香料等，而可適宜地因應目的而使用於乳霜、乳液、化妝料、粉底、化妝水、洗髮精等。
本發明之飲食品係含有前述之本發明之組成物者。與本發明有關之飲食品係具皮膚改善效果及/或治療效果高，且適合用於這些用途者。
前述之本發明之組成物，因係使用可用於食用之乳酸菌為有效成分，安全無虞，且可作為飲食品、醫藥品而經口及/或非經口地投予。
此時，可單獨使用嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)之菌體，或是混合於一般日常飲食中而加以使用。另外，亦可分別單獨使用嗜熱鏈球菌OLS3059與保加利亞桿菌OLL1073R－1之菌體，或將其組合後混合於一般日常飲食中而加以使用。進而，可將嗜熱鏈球菌OLS3059，或嗜熱鏈球菌OLS3059與保加利亞桿菌OLL1073R－1之組合，使用於製造經口投予劑及/或非經口投予劑，再與通常的各種輔助劑等混合而進行製劑化。
將嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，或嗜熱鏈球菌OLS3059與保加利亞桿菌OLL1073R－1組合者，與一般日常飲食成分，及製造經口投予劑及/或非經口投予劑時所使用之一般的各種輔助劑等混合使用時，嗜熱鏈球菌OLS3059之添加量(混合量)係考慮攝取本發明之飲食品之對象其年齡、體重、投予方法等，而可適宜地加以決定。例如以109
(10的9次方)cfu/天以上為佳，1010
(10的10次方)cfu/天以上更佳。
本發明之飲食品係含有前述本發明之組成物之飲料、錠劑之外，亦可為餅乾、麵包、海綿蛋糕、發酵乳、優格、乳酪、奶油、乳瑪琳、鮮奶油、果凍等。本發明之飲食品的使用型態、使用方法，有直接添加本發明之組成物於前述之飲食品中之型態、方法。另外，亦有將由此所得本發明之飲食品之優格、乳酪、奶油等，進而添加於飲食品中之型態、方法。
因此，本發明之飲食品以使皮膚改善效果及/或治療效果發揮為目的，可在使用於一般的飲食品之外，使用於特定保健用食品、營養機能食品、健康食品等。
進而，因本發明之飲食品具有皮膚改善效果及/或治療效果，亦可使用於顯示目的為皮膚改善效果及/或治療效果而使用之飲食品。表示方法除可表示於包裝上之外，亦包含揭示於廣告單以及宣傳等。
本發明之組成物及飲食品用作為醫藥品時，可採用錠劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、糖漿劑等型態而加以使用。此時，可於作為主劑之賦型劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑、矯臭劑、溶解輔助劑、懸浮劑、包覆劑等中，依據常用方法使用輔助劑而加以製劑化。
本發明之發酵乳係皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)調製而成。
關於本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，因係使用選自用於調製發酵乳，且具有凝乳形成能力，同時製造特性優良之乳酸菌中之皮膚改善效果及/或治療效果高之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，並加以調整，故皮膚改善效果及/或治療效果高。亦即前述本發明之發酵乳係皮膚改善效果及/或治療效果高，且適於這些用途。
將如前所述之嗜熱鏈球菌OLS3059與保加利亞桿菌組合，而調整乳酸菌例如藉由組合二者並使用為菌酛，可於較短的時間內形成凝乳。
於前述本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳中，保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)可使用為例如明治乳業股份有限公司所製之原味優格、硬質優格、軟質優格中所分離出之乳酸菌。這些藉由組合保加利亞桿菌與嗜熱鏈球菌而調製出之本發明的乳酸菌，係風味佳且受消費者喜愛，口感滑順，於運輸製品時不易使凝乳崩解，具有凝乳穩定之特徵。
前述使用保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)而調製之本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，可含有膠原胜肽及/或神經醯胺。
如於後述之實施例中所載，將含有膠原胜肽及/或神經醯胺之本發明之前述發酵乳，與未含之本發明之前述發酵乳相比較後，發現於含有膠原胜肽及/或神經醯胺之發酵乳，皮膚改善效果及/或治療效果有較高的傾向。即與如前所述之僅使用保加利亞桿菌與嗜熱鏈球菌OLS3059所調製之本發明之發酵乳相比較，藉由混合膠原胜肽及/或神經醯胺而使用，可提高皮膚改善效果及/或治療效果。認為其係由於皮膚改善效果及/或治療效果高之乳酸菌(嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059))，與膠原胜肽及/或神經醯胺混合所產生的加乘效果。
且自使此效果發揮之觀點，發酵乳中所含之膠原胜肽以500mg%以上為佳，700mg%以上更佳，900mg%以上最佳。發酵乳中所含之神經醯胺，自使前述效果發揮之觀點，以100 μ g%以上為佳，200 μ g%以上更佳，250 μ g%以上最佳。
自皮膚改善效果及/或治療效果的加乘效果之觀點，於本發明之發酵乳中，除膠原胜肽及/或神經醯胺之外，亦可添加鞘磷脂、異黃酮素、軟骨素、玻尿酸等使用於飲食品、醫藥品之具有新陳代謝改善效果的有效成分。
針對以上本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，為尋找影響皮膚改善效果及/或治療效果的因素，以人類試驗進一步詳細探討後，發現上述本發明之發酵乳，對於人類具有發酵乳被公認的高整腸效果此一代表性作用外，亦具有極高之皮膚改善效果及/或治療效果。
具體而言，使用含有膠原胜肽及/或神經醯胺之本發明之前述皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，與未含之本發明之前述皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，藉由比較二者之整腸改善效果程度及皮膚改善效果程度，而獲得如前所述之發現。
即本發明之前述皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，係具有相對於提高整腸(通便)改善效果及/或治療效果的人，有極高之皮膚改善效果及/或治療效果之特徵。
以下為製造上述本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳之發酵乳製造方法。
於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，填充於容器使其發酵，形成凝乳後進行冷藏。
或於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，於形成凝乳後將凝乳破碎，再填充於容器後進行冷藏。
又或者，於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，形成凝乳後，破碎凝乳後將其冷卻，填充於容器中並進行冷藏。
此處之添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)為止所進行之調製原料乳，係與過去一般調製發酵乳之步驟相同，係調製原料乳，並進行均質化及殺菌．冷卻等處理而調製原料乳。
製造前述本發明之發酵乳之製造方法中，係使用選自用於調製發酵乳，且具有凝乳形成能力，同時製造特性優良之乳酸菌中之皮膚改善效果及/或治療效果高之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，與保加利亞桿菌此二菌之組合，並將其做為菌酛。
因此，解決了具皮膚改善效果之迄今之乳酸菌的問題點(課題點)。過去之乳酸菌雖具有皮膚改善等效果，但由於需分別管理製造特性不佳之乳酸菌，與為形成凝乳之製造特性優良之乳酸菌，及發酵時間變長，而引起使全體製造時間變長之問題。亦即，具有皮膚改善等效果之迄今的乳酸菌，並不適用於發酵乳之工業上大量的生產(商業性生產)等。
然而，本發明之發酵乳之製造方法，因解決前述問題點，而可適用於商業性生產。商業性生產重要係為非複雜步驟數。
於前述本發明之發酵乳之製造方法，調製原料乳步驟中之均質化，可於殺菌前或殺菌後，或於其進行中而施行。
且如前所述，使其進行發酵後之冷卻，可於使凝乳形成後，將凝乳破碎後，或填充於容器後再進行。
進而，將凝乳破碎後，可添加．混合果肉、蔬菜、各種醬料及/或各種添加劑。
本發明之發酵乳之製造方法，其發酵時間係可為用於製造一般發酵乳的時間，以8小時之內為佳，6或5小時以內更佳，4小時以內最佳。
本發明之皮膚改善用及/或治療用之發酵乳，因其風味極佳，可時常飲用，且可輕鬆地持續攝取。因此，可更提高其皮膚改善效果及治療效果。
以下舉出與本發明相關之最佳實施例並加以說明，但本發明並未限定於此。
(根據in vivo試驗進行異位性皮膚炎抑制效果之驗證)將雌性4周大之NC/Nga小鼠(Japan SLC(股份有限)生產)，經馴化飼養後，分做下述4群。
投予蒸餾水群(n＝10)投予嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下亦稱為OLS3059。其係分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業股份有限公司製))群(n＝10)。
非引發皮膚炎群(n＝7)投予Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103(以下亦稱為ATCC 53103。)群(係用作與投予OLS3059群之對照)(n＝10)。
使這些小鼠可自由攝取飼料(商品名：CRF－1，Oriental酵母工業(股份有限)製)及蒸餾水。
已知ATCC 53103係具有治療異位性皮膚炎效果之乳酸菌。
除非引發皮膚炎群之外，3試驗群於試驗期間中，以管餵方式經口進行投予。接著，根據下述方法，自引發皮膚炎群試驗開始7天後(day 0)連續進行。亦即，投予蒸餾水群於試驗期間(第1天(day－7)~21天後(day 14))中，每日進行經口投予蒸餾水至胃內(1mg/天/小鼠)，且投與各種乳酸菌群亦進行相同試驗，每日進行經口投予乳酸菌之水懸浮液至胃內(1mg/天/小鼠)。各種乳酸菌之水懸浮液係將經加熱處理(溫度75℃，60分鐘)後之菌體的凍結乾燥物懸浮於蒸餾水中而製成。各種乳酸菌之懸浮液的菌體濃度分別係ATCC 53103為7.13×108
(10的8次方)cfu/g，OLS3059為8.56×107
(10的7次方)cfu/g。
試驗開始7天後(day 0)引起皮膚炎，將症狀演變數據化。且於開始引起皮膚炎15天後(day 15)採取血清，以ELISA法測定IgE濃度。IgE濃度係使用Pharmingen公司製之抗體，且變更該公司所推薦之試驗步驟之一部分而進行測定。
以下述方法進行調製塵蟎破碎液。即將Dermatophagoides pteronyssinus之成蟲(Mite－Dp，LSL公司製)以無水甲醇進行脫脂後，添加蒸餾水進行超音波破碎處理。接著，已離心處理分離水溶性畫分，並將其凍結乾燥後，以蒸餾水調製蛋白質濃度為4.5 mg/ml(以BSA換算，並以BioRAD公司之DC protein assay測定)。
引起皮膚炎試驗係變更海野氏等之方法(海野哲史及其他，過敏50：1152－1162，2001)而進行。以剃毛刀剃去引起異位性皮膚炎部位(頭部、外耳部及頸部)之毛，再以毛刷將SDS溶液(4%)塗佈於全部的引起異位性皮膚炎部位20次。塗佈量20次共計約60 μ l。待SDS溶液乾燥後，於引起皮膚炎試驗群塗佈塵蟎破碎液，非引起皮膚炎試驗群塗佈蒸餾水，同樣為分別塗佈20次。藉由每日重複進行前述之步驟而引起皮膚炎，於試驗開始後7天(day 0)，每日重複進行至試驗終止。
以下述方法測定IgE。即於96孔盤上添加2 μ g/ml之1次抗體用之抗IgE抗體(Pharmingen公司製)，靜置於37℃下1小時。以Tween 20/PBS(PBS－Tween，0.05%)洗淨後，添加BSA/PBS(1%)，靜置於室溫下30分鐘。再以PBS－Tween洗淨後，添加血清試樣及製作標準曲線之IgE(Pharmingen公司製)，靜置於室溫下30分鐘。以PBS－Tween洗淨後，添加0.5 μ g/ml之2次抗體用之biotin－抗IgE抗體(Pharmingen公司製)，靜置於室溫下1小時。以PBS－Tween洗淨後，添加Streptavidin－HRP(Pharmingen公司製)，靜置於室溫下30分鐘。PBS－Tween洗淨後，添加TMB＋SubStrate Chromogen(DAKO公司製)，而開始呈色反應。於呈色反應後加入硫酸(1N)，以微量盤判讀機測定吸光度(450nm)，而計算出血清中之IgE濃度。
將皮膚炎症狀數據之演變示於圖1。數據化係針對〔1〕形成乾皮．痂皮，〔2〕發紅．出血，〔3〕組織脫落．擦傷，〔4〕浮腫，〔5〕搔癢行為等5個項目，以「0.無症狀」，「1.輕度」，「2.中度」，「3.重度」等4個階段，計算並評價各小鼠所得之各數據。針對引起皮膚炎開始第13天(day 13)之症狀數據，投予OLS3059群與投予蒸餾水群相比為有意義的低。反之，投予ATCC 53103群與投予蒸餾水群相比並無大的差異。
將總IgE濃度示於圖2。針對引起皮膚炎開始第15天(day 15)血清中之總IgE，投予OLS3059群與投予蒸餾水群相比IgE濃度為有意義的低。反之，投予ATCC 53103群與投予蒸餾水群相比IgE濃度稍低，但不具統計上之差異。已知ATCC 53103為具有治療異位性皮膚效果之乳酸菌，但OLS3059對較異位性皮膚之症狀抑制效果較ATCC 53103為高。
(根據in vivo試驗進行異位性皮膚炎抑制效果之驗證)將雌性4周大之NC/Nga小鼠(Japan SLC(股份有限)生產)，經馴化飼養後，分做下述3群。
投予蒸餾水群(n＝4)投予保加利亞桿菌OLL1073R－1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1，以下亦稱為OLL1073R－1)群(n＝6)。
投予嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059，係分離自保加利亞優格LB81(明治乳業(股份有限)公司製)群(n＝5)。
使這些小鼠可自由攝取飼料(商品名：CRF－1，Oriental酵母工業(股份有限)製)及蒸餾水。除引起皮膚炎期間為30天之外，其餘試驗條件均與施實施例1相同。
將皮膚炎症狀數據之演變示於圖3。針對引起皮膚炎開始第13天(day 13)之症狀數據，投予OLL1073R－1群與投予OLS3059群和投予蒸餾水群相比為有意義的低。
將總IgE濃度示於圖4。針對血清中之總IgE，投予OLL1073R－1群與投予OLS3059群和投予蒸餾水群相比IgE濃度為有意義的低。可知本發明之OLS3059對異位性皮膚炎之症狀具抑制效果。另外，亦發現OLL1073R－1對異位性皮膚炎之症狀具抑制效果，但IgE濃度係本發明之OLS3059較低。
(根據in vivo試驗進行異位性皮膚炎抑制效果之驗證)針對異位性皮膚炎之症狀，將發揮毫不遜色於本發明之OLS3059之抑制效果且已於實施例2中確認之OLL1073R－1，與本發明之OLS3059組合使用時，對抑制異位性皮膚炎之症狀進行檢討。
採用二種均分離自保加利亞優格(明治乳業(股份有限)製)之Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus MEP1705601，與Streptococcus thermophilus MEP1705601之組合，做為本發明之OLS3059與OLL1073R－1組合之比較對象。
將雌性4周大之NC/Nga小鼠(Japan SLC(股份有限)生產)，經馴化飼養後，分做下述4群。
投予以Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R－1，與Streptococcus thermophilus OLS3059所調製之發酵物之群(以下亦稱做OLL1073R－1＋OLS3059投予群)(n＝8)。
投予以Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus MEP1705601，與Streptococcus thermophilus MEP1705601所調製之發酵物之群(以下亦稱做LB MEP 1705601＋ST MEP 1705601投予群)(n＝9)。
未發酵物之投予群(n＝9)，及非引起皮膚炎且未發酵物之投予群(以下亦稱做非引起群)(n＝4)。
發酵物及未發酵物之攝取量均為100mg/mouse/day，至試驗終止日為止每日連續經口投予。
發酵物之菌數分別係OLL1073R－1為1×109
cfu/g，OLS3059為3×109
9 cfu/g，LB MEP 1705601為8.6×108
cfu/g，ST MEP 1705601為2.1×109
cfu/g。
將發酵物及未發酵物凍結乾燥後，於投予時以蒸餾水將其懸浮而調製。除引起皮膚炎期間為29天之外，其餘試驗條件均與施實施例1相同。
將皮膚炎症狀數據之演變示於圖5。針對引起皮膚炎開始第14天(day 14)之症狀數據，OLL1073R－1＋OLS3059投予群，與LB MEP 1705601＋ST MEP 1705601投予群及未發酵物投予群相比為低。
於引起皮膚炎開始第14天(day 14)之後，OLL1073R－1＋OLS3059投予群，與LB MEP 1705601＋ST MEP 1705601投予群及未發酵物投予群相比，為有意義的低。
由此可知，對異位性皮膚之症狀發揮毫不遜色於本發明之OLS3059之抑制效果且已於實施例2中確認之OLL1073R－1，與本發明之OLS3059組合使用時，具有抑制異位性皮膚炎之症狀之效果。
(發酵乳之製造例1)將50.0kg之生乳、5.0kg之脫脂奶粉、8.0kg之砂糖、1.0kg之膠原胜肽(商品名：Nippi Peptide，Nippi Collogen化妝品公司製)、0.1kg之含神經醯胺之蒟蒻芋萃取物(商品名：蒟蒻神經醯胺，Unitika(股份有限)製)、0.1kg之香料、33.8kg之水於65℃下混合溶解，製成調和乳。該調和乳經於65℃下均質化處理(壓力100kg/cm2
)後，於95℃下進行2分鐘之殺菌處理，再冷卻至43~45℃。於該經殺菌處理之調和乳中，添加2.0kg之乳酸菌菌酛，於填充至容器後，使其於43℃下進行4小時之發酵，而得發酵乳(靜置型優格)。此處乳酸菌菌酛係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus bulgaricus2038，分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業(股份有限)製)，與嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下亦稱做OLS3059，係分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業股份有限公司製)之等量培養液。
(發酵乳飲料之製造例1)將23.0kg之生乳、12.1kg之脫脂奶粉、62.9kg之水於70℃下混合溶解，製成調和乳。該調和乳經於65℃下均質化處理(壓力150kg/cm2
)後，於95℃下進行10分鐘之殺菌處理，再冷卻至40~45℃。於該經殺菌處理之調和乳中，添加2.0kg之乳酸菌菌酛，使其於40~45℃下進行5小時之發酵，而得發酵乳。
此處乳酸菌菌酛係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus bulgaricus2038，分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業(股份有限)製)，與嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下亦稱做OLS3059，係分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業股份有限公司製)之等量培養液。
為機械性地破壞該發酵乳之凝乳，均質化處理(壓力150kg/cm2
)後，冷卻至5℃，而得調和發酵乳。另外，將3.0kg之果膠、2.0kg之砂糖、0.02kg之甜味料、0.1kg之香料、34.0kg之水於65℃下混合溶解，以130℃進行2秒鐘之殺菌處理後，再冷卻至5℃而製成糖液。
將調和發酵乳與糖液以規定之濃度混合，而得發酵乳飲料(攪拌型優格)。
(發酵乳飲料之製造例2)將23.0kg之生乳、12.1kg之脫脂奶粉、62.9kg之水於70℃下混合溶解，製成調和乳。該調和乳經於65℃下均質化處理(壓力150kg/cm2
)後，於95℃下進行10分鐘之殺菌處理，再冷卻至40~45℃。於該經殺菌處理之調和乳中，添加2.0kg之乳酸菌菌酛，使其於40~45℃下進行5小時之發酵，而得發酵乳。
此處乳酸菌菌酛係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus bulgaricus2038，分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業(股份有限)製)，與嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下亦稱做OLS3059，係分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業股份有限公司製)之等量培養液。
為機械性地破壞該發酵乳之凝乳，均質化處理(壓力150kg/cm2
)後，冷卻至5℃，而得調和發酵乳。另外，將3.0kg之果膠、2.0kg之砂糖、0.02kg之甜味料、1.0kg之膠原胜肽(商品名：膠原胜肽5200，新田明膠公司製)、0.03kg之含神經醯胺之玉米萃取物(商品名：玉米神經醯胺ME1－R辻製油(股份有限)製)、0.1kg之香料、34.0kg之水於65℃下混合溶解，以130℃進行2秒鐘之殺菌處理後，再冷卻至5℃而製成糖液。
將調和發酵乳與糖液以規定之濃度混合，而得發酵乳飲料(攪拌型優格)。
(乳飲料之製造例)於1000mL之生乳中，添加1g之嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)(以下亦稱做OLS3059，係分離自保加利亞優格LB81(註冊商標)明治乳業股份有限公司製)之凍結乾燥粉末，製成調和乳。將該調和乳均質化處理後，以130℃進行3秒鐘之殺菌處理後，再冷卻至10℃以下。將該經殺菌處理之調和乳填充於容器中而得乳飲料。
(根據人體試驗進行皮膚改善效果之驗證)以前述實施例4中之發酵乳(Streptococcus thermophilus OLS3059，菌體濃度為85×107
(10的7次方)cfu/g，膠原胜肽為1000mg/90g，神經醯胺為300 μ g/90g)做為試驗食品，進行攝取量為90g/次，攝取次數為2次/日(早上與晚上各一次)，28天之人體實驗。以31位女性(平均年齡為31.8歲)為受訊者。
於開始日(攝取試驗食品前)與終止日(第28天)，進行對受試者之皮膚彈性與皮膚紋理密度之評價．觀察，及由醫師進行皮疹之觀察。皮膚彈性測定係選擇左或右邊臉頰，一個位置進行2次測定(商品名：CUTOMETER SEM575，Courage＋Khazaka製)。皮膚紋理密度係選擇皮膚乾燥部位，測定1個位置(商品名：Visual Imager VI－20，Inforward股份有限公司製)。總皮疹數係計算皮疹而進行評價。
於開始日(攝取試驗食品前)與終止日(第28天)，對受試者本人實施問卷調查。間卷調查之內容示於表1。如表1所示，針對〔1〕光澤、〔2〕緊緻、〔3〕暗沉、〔4〕斑點、〔5〕下垂、〔6〕毛孔明顯、〔7〕皮膚紋理、〔8〕皺紋(額頭)、〔9〕皺紋(嘴角)、〔10〕皺紋(眼角)、〔11〕乾燥情形、〔12〕黏膩感、〔13〕透明感、〔14〕泛紅、〔15〕妝容持久性、〔16〕浮腫、〔17〕便秘、〔18〕黑眼圈明顯等18個項目，以5個階段進行評價。再於終止日，受試者本人與醫師進行試驗食品之有效性評價。
攝取實施例5之試驗食品後，評價皮膚彈性之結果示於圖6。藉由攝取實施例5之試驗食品，皮膚彈性有意義地增加，且改善肌膚光澤。攝取實施例5之試驗食品後，評價皮膚紋理密度之結果示於圖7。藉由攝取實施例5之試驗食品，皮膚紋理密度有意義地增加，且改善皮膚紋理。攝取實施例5之試驗食品後，評價總皮疹數之結果示於圖8。藉由攝取實施例5之試驗食品，總皮疹數有意義地減少，且改善肌膚粗糙。
對受試者本人之問卷調查結果示於表2。確認藉由攝取試驗食品，對受試者之肌膚狀態及便秘被改善。受試者本人與醫師進行試驗食品之有效性評價結果示於圖9。由受試者本人或醫師確認攝取試驗食品對肌膚有效。證實嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)具有出色的皮膚改善效果及/或治療效果，確認嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)係最適於使皮膚改善效果及/或治療效果發揮之用途。
(根據人體試驗進行整腸改善效果與皮膚改善效果之關係之驗證)以前述實施例5中之發酵乳(Streptococcus thermophilus OLS3059，菌體濃度為50×107
(10的7次方)cfu/g)，及實施例6中之發酵乳(Streptococcus thermophilus OLS3059，菌體濃度為50×107
(10的7次方)cfu/g，膠原胜肽為1000mg/120ml，神經醯胺為300 μ g/120ml)做為試驗食品，進行攝取量為120ml/次，攝取次數為2次/日(早上與晚上各一次)，28天之人體實驗。實施例5中之發酵乳飲料以28位女性(平均年齡為31.1歲)，實施例6中之發酵乳飲料，以28位女性(平均年齡為30.3歲)為受試者。
與實施例8相同，對受試者本人實施問卷調查。問卷調查之內容如表1所示。對受試者本人問卷調查之結果示於表3及表4。確認藉由攝取試驗食品，對受試者之肌膚狀態及便秘被改善。針對表1之〔1〕光澤、〔2〕緊緻、〔7〕皮膚紋理、〔11〕乾燥情形、〔15〕妝容持久性、〔17〕便秘等6個項目，於實施例6之試驗食品(含膠原胜肽及神經醯胺)，具有較實施例5之試驗食品優異之效果。
將整腸(通便)數據之演變示於表4。數據化係以「1.無便秘」、「2.幾乎無便秘」、「3.無法判定」、「4.稍有便秘」、「5.有便秘」5階段進行，算出各受試者攝取實驗食品前及攝取後之差，並加以評價。例如攝取實驗食品前為「5.有便秘」之受試者，於攝取後變為「3.無法判定」時，解析為「整腸改善為「2以上」」。
攝取實施例5及6之試驗食品後，評價皮膚彈性之結果示於圖10~12。圖10係「整腸改善為「1以上」」之受試者，圖11係「整腸改善為「2以上」」之受試者，圖12係「整腸改善為「3以上」」之受試者評價皮膚彈性後之結果。證實對整腸(通便)改善效果較高者，皮膚改善效果亦高。該傾向於實施例6之試驗食品(含膠原胜肽及神經醯胺)，具有較實施例5之試驗食品優異之效果。藉由攝取實施例5及6之試驗食品，可增加肌膚彈性，改善肌膚光澤。
攝取實施例5及6之試驗食品後，評價皮膚紋理密度之結果示於圖13~15。圖13係「整腸改善為「1以上」」之受試者，圖14係「整腸改善為「2以上」」之受試者，圖15係「整腸改善為「3以上」」之受試者評價皮膚紋理密度後之結果。證實對整腸(通便)改善效果較高者，皮膚改善效果亦高。該傾向於實施例4之試驗食品(含膠原胜肽及神經醯胺)，具有較實施例5之試驗食品優異之效果。藉由攝取實施例5及6之試驗食品，可增加皮膚紋理密度，改善皮膚紋理。
根據本發明可提供因來自天然物質而具高安全性，進而其皮膚改善效果及/或治療效果高，且含有製造特性優良的乳酸菌之組成物以及發酵乳。進而可提供特徵為對整腸改善效果及/或治療效果較高者，皮膚改善效果及/或治療效果亦高之發酵乳。
〔圖1〕於蒸餾水投予群，Lactobacillus rhamnosusATCC 53103投予群，Streptococcus thermophilus OLS3059投予群，及非引發皮膚炎群，試驗期間中之皮膚炎症狀數據之演變圖(以平均值±標準偏差值表示。＊＊
P<0.01，＊
P<0.05，Dunnett之多重比較)。
〔圖2〕於蒸餾水投予群，Lactobacillus rhamnosus ATCC 53103投予群，Streptococcus thermophilus OLS3059投予群，及非引發皮膚炎群，15天後(day 15)之血清中總IgE濃度圖(以平均值±標準偏差值表示。＊＊
P<0.01，Dunnett之多重比較)。
〔圖3〕於蒸餾水投予群，Lactobacillus bulgaricus OLL1073R－1投予群，及Streptococcus thermophilus OLS3059投予群，試驗期間中之皮膚炎症狀數據之演變圖(以平均值±標準偏差值表示。＊＊
P<0.01，＊
P<0.05，Dunnett之多重比較)。
〔圖4〕於蒸餾水投予群，Lactobacillus bulgaricus OLL1073R－1投予群，及Streptococcus thermophilus OLS3059投予群，15天後(day 15)之血清中總IgE濃度圖(以平均值±標準偏差值表示。＊＊
P<0.01，Dunnett之多重比較)。
〔圖5〕於以Lactobacillus bulgaricus OLL1073R－1與Streptococcus thermophilus OLS3059所調製之發酵物之投予群，及以Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus MEP1705601，與Streptococcus thermophilus MEP1705601所調製之發酵物之投予群，未發酵物投予群及非引發皮膚炎且未發酵物投予群，試驗期間中之皮膚炎症狀數據之演變圖(以平均值±標準偏差值表示。＊＊
P<0.01，＊
P<0.05，Dunnett之多重比較)。
〔圖6〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，受試者皮膚彈性圖。
〔圖7〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，受試者皮膚紋理密度圖。
〔圖8〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，受試者總皮疹數之觀察結果圖。
〔圖9〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，根據受試者及醫師進行有效性評價結果圖。
〔圖10〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「1以上」」之受試者其皮膚彈性圖。
〔圖11〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「2以上」」之受試者其皮膚彈性圖。
〔圖12〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「3以上」」之受試者其皮膚彈性圖。
〔圖13〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「1以上」」之受試者其皮膚紋理密度圖。
〔圖14〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「2以上」」之受試者其皮膚紋理密度圖。
〔圖15〕以嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcusthermophilus OLS3059)所調製之發酵乳做為試驗食品，「整腸改善為「3以上」」之受試者其皮膚紋理密度圖。
Claims (8)
- 一種飲食品，其特徵係含有嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物，與保加利亞桿菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R-1)及/或其培養物。
- 一種發酵乳，其特徵係含有嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)及/或其培養物，與保加利亞桿菌OLL1073R-1(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus OLL1073R-1)及/或其培養物。
- 一種發酵乳，其係使用保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)調製而成者。
- 如申請專利範圍第3項之發酵乳，其係含有膠原胜肽及/或神經醯胺。
- 如申請專利範圍第2~4項中任一項之發酵乳，其中，該發酵乳係對藉由如申請專利範圍第2~4項中任一項之發酵乳而有整腸改善效果及/或治療效果的人，具有皮膚改善效果及/或治療效果。
- 一種製造如申請專利範圍第2~5項中任一項發酵乳之方法，其係於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus )及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，填充於容器使其發酵，形成凝乳後進行冷藏。
- 一種製造如申請專利範圍第2~5項中任一項發酵乳之方法，其係於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，形成凝乳後，破碎凝乳再填充於容器中進行冷藏。
- 一種製造如申請專利範圍第2~5項中任一項發酵乳之方法，其係於調製原料乳後，添加做為菌酛之保加利亞桿菌(Lactobacillus delbrueckii subspecies bulgaricus)及嗜熱鏈球菌OLS3059(Streptococcus thermophilus OLS3059)，使其發酵，形成凝乳後破碎凝乳，將其冷卻，填充於容器中並進行冷藏。
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