JP4909744B2

JP4909744B2 - Capillary electrophoresis apparatus and electrophoresis method

Info

Publication number: JP4909744B2
Application number: JP2007005357A
Authority: JP
Inventors: 基博山▲崎▼; 良仁伊名波; 智高橋; 功原浦; 友幸坂井
Original assignee: Hitachi High Technologies Corp
Current assignee: Hitachi High Tech Corp
Priority date: 2006-01-16
Filing date: 2007-01-15
Publication date: 2012-04-04
Anticipated expiration: 2027-01-15
Also published as: JP2007212449A

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a capillary electrophoresis apparatus in which simultaneity can be ensured between sensitivity and data acquisition to decrease false signals while spectral calibration data acquisition is eliminated in each capillary exchange. <P>SOLUTION: In the capillary electrophoresis apparatus, a capillary position shift is detected in each capillary exchange by detecting a capillary position. A capillary position measuring light source is provided in the capillary electrophoresis apparatus. The capillary is irradiated with light emitted from the capillary position measuring light source, and a capillary image is detected with a two-dimensional detector, whereby a position deviation of the capillary is determined. On the basis of the position deviation of the capillary, a data acquisition area is set in the two-dimensional detector, or a reference fluorescent light spectrum determined from the capillary at the standard position is corrected. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は核酸やタンパク質等を電気泳動によって分離分析する電気泳動装置に関し、特に、キャピラリ電気泳動装置に関する。 The present invention relates to an electrophoresis apparatus for separating and analyzing nucleic acids, proteins, and the like by electrophoresis, and more particularly to a capillary electrophoresis apparatus.

キャピラリ電気泳動装置では、一般に、励起用光源としてレーザ光源が用いられる。しかしながら、近年、キャピラリ電気泳動装置の低価格化を目的として、励起用光源として発光ダイオード（ＬＥＤ）を用いることが提案されている。特許文献１には、発光ダイオード（ＬＥＤ）を使用する電気泳動装置が開示されている。 In a capillary electrophoresis apparatus, a laser light source is generally used as an excitation light source. However, in recent years, it has been proposed to use a light emitting diode (LED) as an excitation light source for the purpose of reducing the price of a capillary electrophoresis apparatus. Patent Document 1 discloses an electrophoresis apparatus using a light emitting diode (LED).

また、特許文献２や３には、キャピラリ軸と垂直にレーザ光を照射する方法ではなく、キャピラリ軸方向に励起光を照射する電気泳動装置が提案されている。励起光は、キャピラリ内を伝播し、キャピラリ中を移動する検出目的物質をその位置に関係なく励起する。
広範囲の励起領域つまり検出領域を得るので、装置の高感度化が可能となる。その線状の発光部からの検出光を回折格子によって分光し、２次元検出器によって検出する。 Patent Documents 2 and 3 propose an electrophoresis apparatus that irradiates excitation light in the direction of the capillary axis, rather than a method of irradiating laser light perpendicular to the capillary axis. The excitation light propagates in the capillary and excites the detection target substance moving in the capillary regardless of its position.
Since a wide excitation region, that is, a detection region is obtained, the sensitivity of the apparatus can be increased. The detection light from the linear light emitting part is dispersed by a diffraction grating and detected by a two-dimensional detector.

また、特許文献４及び５には、従来の波長校正データの取得方法の例が記載されている。
また、非特許文献１には、回折格子の代わりに複数のフィルタを用いる方法が開示されている。 Patent Documents 4 and 5 describe examples of conventional methods for acquiring wavelength calibration data.
Non-Patent Document 1 discloses a method using a plurality of filters instead of a diffraction grating.

ＵＳ２００３／０１７８３１２−Ａ１US2003 / 0178312-A1 特開平５−５２８１０JP 5-52810 A 特許第２８３３１１９号Japanese Patent No. 2833119 ＵＳ６,８２１,４０２US 6,821,402 ＵＳ６,８６３,７９１US 6,863,791 シー・コーネル他；バイオテクニクス５巻、６４８頁（１９８７年）（C.Connell et.al.;BioTechniques5,342(1987））Sea Cornell et al .; Biotechnics, Vol. 5, 648 (1987) (C. Connell et.al .; BioTechniques 5, 342 (1987))

本願発明者が鋭意検討した結果、次のような課題が判明した。 As a result of intensive studies by the present inventor, the following problems have been found.

特許文献２や３に開示の技術においては、キャピラリ自身が励起部兼検出部となるので、キャピラリの交換により検出位置がずれるといった問題が生じる。従って、キャピラリ交換毎に、波長校正データの取得が必要である。波長校正データが不正確であると、分析処理において、波長ずれに起因した擬似信号が生じる。波長ずれが大きくなると、擬似信号も大きくなり、分析結果の信頼性が低下する。 In the techniques disclosed in Patent Documents 2 and 3, since the capillary itself serves as an excitation part and a detection part, there arises a problem that the detection position shifts due to replacement of the capillary. Therefore, it is necessary to acquire wavelength calibration data every time the capillary is replaced. If the wavelength calibration data is inaccurate, a pseudo signal due to a wavelength shift is generated in the analysis process. When the wavelength shift increases, the pseudo signal also increases, and the reliability of the analysis result decreases.

また、特許文献４や５に開示された波長校正データの取得方法は、既知のサンプルを実際に電気泳動させる必要があるため、操作者にとっては、大変な手間となっている。 In addition, the wavelength calibration data acquisition methods disclosed in Patent Documents 4 and 5 require a known sample to be actually electrophoresed, which is very troublesome for the operator.

また、非特許文献１に開示された方法では、複数のフィルタを回転させるため、感度及びデータ取得の同時性を確保することが困難である。 Further, in the method disclosed in Non-Patent Document 1, since a plurality of filters are rotated, it is difficult to ensure the sensitivity and the synchronization of data acquisition.

つまり、回折格子を用いる方法では、感度及びデータ取得の同時性を確保することができるが、キャピラリ交換毎の波長校正データの取得が必要である。一方、複数のフィルタを用いる方法では、キャピラリ交換毎の波長校正データの取得は不要であるが、感度及びデータ取得の同時性を確保することができない。 That is, in the method using a diffraction grating, it is possible to ensure the sensitivity and the synchronization of data acquisition, but it is necessary to acquire the wavelength calibration data every time the capillary is replaced. On the other hand, in the method using a plurality of filters, it is not necessary to acquire wavelength calibration data for each capillary exchange, but it is not possible to ensure the sensitivity and the synchronization of data acquisition.

本発明の目的は、キャピラリ交換毎の波長校正データの取得を不要にし、且つ、感度、データ取得の同時性を確保し、擬似信号を低減することができるキャピラリ電気泳動装置を提供することにある。 An object of the present invention is to provide a capillary electrophoresis apparatus that makes it unnecessary to acquire wavelength calibration data every time a capillary is exchanged, secures the sensitivity and synchronization of data acquisition, and reduces pseudo signals. .

本発明は、キャピラリの交換毎にキャピラリの位置を検出し、キャピラリの位置ずれを検出するキャピラリ電気泳動装置に関する。 The present invention relates to a capillary electrophoresis apparatus that detects the position of a capillary every time the capillary is replaced and detects a displacement of the capillary.

本発明によると、キャピラリ電気泳動装置には、キャピラリ位置測定用光源が設けられている。キャピラリ位置測定用光源からの光をキャピラリに照射し、２次元検出器によってキャピラリの像を検出することによって、キャピラリの位置の偏差を求める。 According to the present invention, the capillary electrophoresis apparatus is provided with a light source for capillary position measurement. The capillary position is irradiated with light from a capillary position measurement light source, and a capillary image is detected by a two-dimensional detector, thereby obtaining a capillary position deviation.

キャピラリの位置の偏差に基づいて、２次元検出器におけるデータ取得領域を設定し、又は、基準位置のキャピラリから求めた基準蛍光スペクトルを修正する。 Based on the deviation of the capillary position, a data acquisition region in the two-dimensional detector is set, or the reference fluorescence spectrum obtained from the capillary at the reference position is corrected.

本発明によると、キャピラリ交換毎に波長校正データの取得を行う必要がなく、また、信号強度及び信号取得の同時性も損なわず、擬似信号を低減することが可能となる。 According to the present invention, it is not necessary to acquire wavelength calibration data every time a capillary is exchanged, and it is possible to reduce the pseudo signal without impairing the signal intensity and the simultaneity of signal acquisition.

以下、上記及びその他の本発明の新規な特徴と利益を、図面を参酌して説明する。ただし、図面はもっぱら解説のためのものであって、本発明の範囲を限定するものではない。 The above and other novel features and benefits of the present invention will be described below with reference to the drawings. However, the drawings are for explanation only, and do not limit the scope of the present invention.

図１Ａに示すように、本例のキャピラリ電気泳動装置は、キャピラリアレイ１０１、照射光学ユニット１２１、検出光学ユニット１３１、オートサンプラユニット１４１、泳動媒体充填ユニット１５０、電源ユニット１１０、及び、温度制御ユニット１６１を有する。本例のキャピラリ電気泳動装置は、泳動媒体が充填された複数本のキャピラリを用い、各キャピラリに試料を導入し、試料中の試料成分を電気泳動分離し、分析する。例えば、ＤＮＡ含有試料を有する複数のサンプルを同時に分析し、塩基配列を解析する。 As shown in FIG. 1A, the capillary electrophoresis apparatus of this example includes a capillary array 101, an irradiation optical unit 121, a detection optical unit 131, an autosampler unit 141, an electrophoresis medium filling unit 150, a power supply unit 110, and a temperature control unit. 161. The capillary electrophoresis apparatus of this example uses a plurality of capillaries filled with an electrophoresis medium, introduces a sample into each capillary, and separates and analyzes sample components in the sample. For example, a plurality of samples having a DNA-containing sample are analyzed at the same time to analyze the base sequence.

キャピラリアレイ１０１は、複数のキャピラリ１０２から構成されている。図１の例では、２本のキャピラリ１０２から構成されているが、１本であってもよく、４本、８本等であってもよい。キャピラリ１０２は、内径が数十〜数百ミクロン、外径が数百ミクロンの石英製の細管であり、強度を向上させるために表面がポリイミドによってコーティングされている。光を伝播させる部分では、フッ素コーティングでもよい。 The capillary array 101 is composed of a plurality of capillaries 102. In the example of FIG. 1, the capillaries are composed of two capillaries 102, but may be one, four, eight, or the like. The capillary 102 is a quartz thin tube having an inner diameter of several tens to several hundreds of microns and an outer diameter of several hundreds of microns. The surface of the capillary 102 is coated with polyimide to improve the strength. A fluorine coating may be used in the portion where light is propagated.

キャピラリアレイ１０１は、着脱可能な交換部材であり、所定回数の分析によって品質が劣化し、分離能が低下したとき、新品に交換される。また、測定手法を変更し、キャピラリ１０２の長さを変更する必要がある場合には、長さが異なるキャピラリアレイ１０１に交換する。それによって、キャピラリ１０２の長さを任意に調節することができる。 The capillary array 101 is a detachable replacement member, and is replaced with a new one when the quality deteriorates due to a predetermined number of analyzes and the separation performance decreases. When the measurement method is changed and the length of the capillary 102 needs to be changed, the capillary array 101 is replaced with a different length. Thereby, the length of the capillary 102 can be arbitrarily adjusted.

キャピラリアレイ１０１は、励起光が照射される照射部１０３、試料を導入するための試料導入端１０５、及び、複数本のキャピラリを束ねて形成されたキャピラリヘッド１０８を有する。試料導入端１０５は試料導入部１０４によって保持される。 The capillary array 101 includes an irradiation unit 103 irradiated with excitation light, a sample introduction end 105 for introducing a sample, and a capillary head 108 formed by bundling a plurality of capillaries. The sample introduction end 105 is held by the sample introduction unit 104.

図１Ｂに示すように、キャピラリ１０２の先端には中空電極１０６が挿入され、その先端は中空電極１０６から少し突出している。中空電極１０６は、例えば、ステンレス製パイプである。キャピラリヘッド１０８は泳動媒体充填ユニット１５０に接続されている。 As shown in FIG. 1B, a hollow electrode 106 is inserted at the tip of the capillary 102, and the tip protrudes slightly from the hollow electrode 106. The hollow electrode 106 is, for example, a stainless steel pipe. The capillary head 108 is connected to the electrophoresis medium filling unit 150.

照射光学ユニット１２１は、光源１２３、第１の集光レンズ１２４、照射用フィルタ１２５、及び、第２の集光レンズ１２６を有する。 The irradiation optical unit 121 includes a light source 123, a first condenser lens 124, an irradiation filter 125, and a second condenser lens 126.

照射部１０３では、キャピラリ１０２はガラス基板１０７上に支持されている。照射光学ユニット１２１からの励起光はキャピラリ１０２に照射される。光源１２３は、キャピラリアレイ１０１の照射部１０３に照射する励起光１２２を発生する。光源１２３として、通常、レーザ光源が用いられるが、本例では、発光ダイオード（ＬＥＤ）を用いる。 In the irradiation unit 103, the capillary 102 is supported on the glass substrate 107. Excitation light from the irradiation optical unit 121 is applied to the capillary 102. The light source 123 generates excitation light 122 that irradiates the irradiation unit 103 of the capillary array 101. A laser light source is usually used as the light source 123, but in this example, a light emitting diode (LED) is used.

第１の集光レンズ１２４は光源１２３からの励起光１２２を集光する。照射用フィルタ１２５は、励起光１２２より不要な波長成分をカットする。第２の集光レンズ１２６は、励起光１２２を集光する。第２の集光レンズ１２６によって集光された光はキャピラリ
１０２に照射される。本例によると、励起光はキャピラリの軸線に沿って、又は、キャピラリの軸線に対して所定の角度にて傾斜して照射される。 The first condenser lens 124 condenses the excitation light 122 from the light source 123. The irradiation filter 125 cuts unnecessary wavelength components from the excitation light 122. The second condenser lens 126 condenses the excitation light 122. The light collected by the second condenser lens 126 is applied to the capillary 102. According to this example, the excitation light is irradiated along the capillary axis or inclined at a predetermined angle with respect to the capillary axis.

キャピラリ１０２内にて電気泳動によって分離された試料成分に励起光１２２を照射する。試料成分に標識された蛍光体は、試料成分毎に異なる波長の光を放出する。この光は、検出光学ユニット１３１によって検出される。 A sample component separated by electrophoresis in the capillary 102 is irradiated with excitation light 122. The phosphor labeled on the sample component emits light having a different wavelength for each sample component. This light is detected by the detection optical unit 131.

検出光学ユニット１３１は、第１カメラレンズ１３２、検出フィルタ１３３、回折格子１３４、第２カメラレンズ１３５、及び、２次元検出器１３６を有する。検出光学ユニット１３１の詳細に後に図３を参照して説明する。 The detection optical unit 131 includes a first camera lens 132, a detection filter 133, a diffraction grating 134, a second camera lens 135, and a two-dimensional detector 136. Details of the detection optical unit 131 will be described later with reference to FIG.

オートサンプラユニット１４１は、サンプル容器１４３、バッファ容器１４４、洗浄容器１４５、及び、廃液容器１４６を、試料導入部１０４の直下に搬送する。 The autosampler unit 141 conveys the sample container 143, the buffer container 144, the cleaning container 145, and the waste liquid container 146 directly under the sample introduction unit 104.

サンプル容器１４３は、複数の微量試料を保持する容器であり、試料導入時に試料導入部１０４の直下に搬送される。試料は、例えば、４種類のヌクレオシド塩基分子が蛍光標識された、多数の適当な長さ（大きさ）の核酸を含む溶液である。 The sample container 143 is a container that holds a plurality of trace samples, and is transported immediately below the sample introduction unit 104 when the sample is introduced. The sample is, for example, a solution containing a large number of nucleic acids having an appropriate length (size) in which four types of nucleoside base molecules are fluorescently labeled.

サンプル容器１４３は、例えば、数１０μＬの試料を保持することができるウェルを２４行１６列備えたサンプルプレートに、樹脂製のシートであるセプタを乗せ、それをホルダとクリップで挟むように構成されている。セプタは、ウェルに対応する位置に通常は密閉状態の貫通孔を有し、ウェル中の試料の蒸発を防止する。試料導入時には貫通孔を介して試料導入端１０５が試料に接触することができる。また、セプタの上面に保護フィルムを貼り付け、試料蒸発を防止することもできる。 For example, the sample container 143 is configured such that a septa, which is a resin sheet, is placed on a sample plate having 24 rows and 16 columns of wells capable of holding a sample of several tens of μL, and is sandwiched between the holder and a clip. ing. The septa usually have a sealed through hole at a position corresponding to the well to prevent evaporation of the sample in the well. When the sample is introduced, the sample introduction end 105 can come into contact with the sample through the through hole. Moreover, a protective film can be stuck on the upper surface of the septa to prevent sample evaporation.

バッファ容器１４４は、試料導入端１０５を浸す緩衝液を保持する容器であり、泳動分析時、試料導入部１０４の直下に搬送される。また、装置の待機中にも、泳動分析時と同様に試料導入部１０４の直下に搬送され、試料導入端１０５を緩衝液に浸し、キャピラリ１０２内の泳動媒体の乾燥を防止する。 The buffer container 144 is a container that holds a buffer solution that immerses the sample introduction end 105, and is transported directly below the sample introduction unit 104 during electrophoresis analysis. Further, during the standby of the apparatus, it is transported directly under the sample introduction unit 104 as in the case of electrophoresis analysis, and the sample introduction end 105 is immersed in a buffer solution to prevent the electrophoresis medium in the capillary 102 from drying.

洗浄容器１４５は、試料導入端１０５を洗浄する洗浄液を保持する容器であり、泳動媒体充填時、予備泳動時、及び試料導入の後に、試料導入部１０４の直下に搬送される。試料導入端１０５を、洗浄容器中の洗浄液に浸すことによって、試料導入端１０５を洗浄し、コンタミネーションを回避することができる。 The cleaning container 145 is a container that holds a cleaning liquid for cleaning the sample introduction end 105, and is transported immediately below the sample introduction unit 104 when the electrophoresis medium is filled, during preliminary migration, and after sample introduction. By immersing the sample introduction end 105 in the cleaning liquid in the cleaning container, the sample introduction end 105 can be cleaned and contamination can be avoided.

廃液容器１４６は、使用済の泳動媒体を保持する容器であり、泳動媒体充填時に試料導入部１０４の直下に搬送される。泳動媒体充填時に、試料導入端１０５から排出される使用済の泳動媒体を受け入れる。 The waste liquid container 146 is a container that holds a used electrophoresis medium, and is transported immediately below the sample introduction unit 104 when the electrophoresis medium is filled. When the electrophoresis medium is filled, the used electrophoresis medium discharged from the sample introduction end 105 is received.

泳動媒体充填ユニット１５０は、ポリマ充填ブロック１５１、シリンジ１５２、チューブ１５３、電磁弁１５４、及び、陽極バッファ容器１１２を有し、分析開始前に新しい泳動媒体をキャピラリ１０２内に自動的に充填する。 The electrophoresis medium filling unit 150 includes a polymer filling block 151, a syringe 152, a tube 153, a solenoid valve 154, and an anode buffer container 112, and automatically fills the capillary 102 with a new electrophoresis medium before starting analysis.

ポリマ充填ブロック１５１は、ポリマ流路１５５を有する。ポリマ流路１５５は、泳動媒体によって満たされたシリンジ１５２と、電磁弁１５４を備えたチューブ１５３に連通している。チューブ１５３の他端は、陽極バッファ容器１１２に保持された緩衝液に浸されている。キャピラリヘッド１０８は、耐圧気密を維持しながらポリマ充填ブロック１５１に装着される。 The polymer filling block 151 has a polymer flow path 155. The polymer flow path 155 communicates with a syringe 152 filled with a migration medium and a tube 153 provided with an electromagnetic valve 154. The other end of the tube 153 is immersed in a buffer solution held in the anode buffer container 112. The capillary head 108 is attached to the polymer filling block 151 while maintaining pressure and air tightness.

電源ユニット１１０は、１５ｋＶ前後の高電圧を発生する高圧電源１１１を含む。高圧電源１１１の負極は中空電極１０６に接続され、正極は電流計１１４を介して接地されている。尚、陽極電極１１３の一端は陽極バッファ容器１１２内の緩衝液に浸けられており、他端は接地されている。 The power supply unit 110 includes a high-voltage power supply 111 that generates a high voltage of around 15 kV. The negative electrode of the high voltage power supply 111 is connected to the hollow electrode 106, and the positive electrode is grounded via an ammeter 114. One end of the anode electrode 113 is immersed in a buffer solution in the anode buffer container 112, and the other end is grounded.

泳動媒体充填ユニット１５０を用いてキャピラリ１０２内に泳動媒体を充填する方法を簡単に説明する。試料導入部１０４の直下に廃液容器１４６を配置し、電磁弁１５４を閉じ、シリンジ１５２のプランジャを押す。それによって、シリンジ１５２内の泳動媒体が、ポリマ流路１５５を経由して、キャピラリヘッド１０８からキャピラリ１０２内に流入する。キャピラリ１０２内の使用済泳動媒体は、試料導入端１０５から排出され、廃液容器１４６にて受け入れられる。 A method for filling the capillary 102 with the electrophoresis medium using the electrophoresis medium filling unit 150 will be briefly described. A waste liquid container 146 is disposed immediately below the sample introduction unit 104, the electromagnetic valve 154 is closed, and the plunger of the syringe 152 is pushed. As a result, the electrophoresis medium in the syringe 152 flows into the capillary 102 from the capillary head 108 via the polymer channel 155. The used electrophoresis medium in the capillary 102 is discharged from the sample introduction end 105 and received in the waste liquid container 146.

キャピラリ１０２内に試料を導入する方法を簡単に説明する。キャピラリ１０２、ポリマ流路１５５及びチューブ１５３の内部を泳動媒体で満たす。試料導入部１０４の直下にサンプル容器１４３を配置し、サンプル容器１４３のウェルに保持された試料に試料導入端１０５を浸し、電磁弁１５４を開く。これによって、高圧電源１１１の正極と負極の間に、中空電極１０６、サンプル容器１４３中の試料、キャピラリ１０２内の泳動路、ポリマ充填ブロック１５１のポリマ流路１５５、チューブ１５３、陽極バッファ容器１１２内の緩衝液、及び、陽極電極１１３からなる通電路が形成される。そして、中空電極１０６を負電位、陽極電極１１３を正電位として、この通電路にパルス電圧を印加する。これによって、ウェル内に存在する負に帯電する試料成分、例えばＤＮＡが、試料導入端１０５から泳動路に導入される。尚、試料の導入方法は、電気泳動に限定されず、圧力や分注によって試料を泳動路に導入してもよい。 A method for introducing a sample into the capillary 102 will be briefly described. The inside of the capillary 102, the polymer channel 155, and the tube 153 is filled with the electrophoresis medium. The sample container 143 is disposed immediately below the sample introduction unit 104, the sample introduction end 105 is immersed in the sample held in the well of the sample container 143, and the electromagnetic valve 154 is opened. Thus, the hollow electrode 106, the sample in the sample container 143, the migration path in the capillary 102, the polymer flow path 155 of the polymer filling block 151, the tube 153, and the anode buffer container 112 are provided between the positive electrode and the negative electrode of the high-voltage power supply 111. Current path composed of the buffer solution and the anode electrode 113 is formed. Then, a pulse voltage is applied to this energization path with the hollow electrode 106 as a negative potential and the anode electrode 113 as a positive potential. As a result, a negatively charged sample component, such as DNA, present in the well is introduced from the sample introduction end 105 into the migration path. The sample introduction method is not limited to electrophoresis, and the sample may be introduced into the electrophoresis path by pressure or dispensing.

泳動分析時は、試料導入部１０４の直下にバッファ容器１４４を配置し、バッファ容器１４４に保持された緩衝液に試料導入端１０５を浸す。これによって、高圧電源１１１の正極と負極の間に、中空電極１０６、バッファ容器１４４中の緩衝液、キャピラリ１０２内の泳動路、ポリマ充填ブロック１５１のポリマ流路１５５、チューブ１５３、陽極バッファ容器１１２内の緩衝液、及び、陽極電極１１３からなる通電路が形成される。中空電極１０６を負電位、陽極電極１１３を正電位として、この通電路に、１５ｋＶ前後の高電圧を印加する。これによって、照射部１０３から試料導入部１０４の方向に電界が生じ、泳動路に導入された負に帯電する試料成分が、照射部１０３の方向に電気泳動する。 At the time of electrophoretic analysis, the buffer container 144 is disposed immediately below the sample introduction unit 104, and the sample introduction end 105 is immersed in the buffer solution held in the buffer container 144. Thus, between the positive electrode and the negative electrode of the high-voltage power supply 111, the hollow electrode 106, the buffer solution in the buffer container 144, the migration path in the capillary 102, the polymer flow path 155 of the polymer filling block 151, the tube 153, and the anode buffer container 112 A current path composed of the buffer solution and the anode electrode 113 is formed. A high voltage of about 15 kV is applied to this energization path with the hollow electrode 106 as a negative potential and the anode electrode 113 as a positive potential. As a result, an electric field is generated in the direction from the irradiation unit 103 to the sample introduction unit 104, and the negatively charged sample component introduced into the migration path is electrophoresed in the direction of the irradiation unit 103.

温度制御ユニット１６１は、試料成分の泳動速度に影響を与える泳動路の温度を制御する。本例の温度制御ユニットは、図示しない恒温槽内にキャピラリ１０２を収容する。そして、ペルチェ等の温度制御機構によって一定温度に保たれた空気を、ファン等の送風機構によって恒温槽内を循環させ、キャピラリ１０２を所定温度に保持する。 The temperature control unit 161 controls the temperature of the migration path that affects the migration speed of the sample components. The temperature control unit of this example accommodates the capillary 102 in a thermostat (not shown). Then, air maintained at a constant temperature by a temperature control mechanism such as Peltier is circulated in the thermostatic chamber by a blowing mechanism such as a fan, and the capillary 102 is held at a predetermined temperature.

本例では、更に、キャピラリ１０２が配列されたガラス基板１０７と検出光学ユニット１３１の間に、キャピラリ位置測定用光源１２７が設けられている。キャピラリ位置測定用光源１２７は、単一波長を照射する光源であり、例えば、レーザダイオードであってよい。キャピラリ交換毎に、キャピラリ位置測定用光源１２７によって、キャピラリ１０２を照射する。キャピラリ１０２の反射光は、検出光学ユニット１３１によって検出される。２次元検出器１３６上にキャピラリ１０２の反射像を結像させ、キャピラリの位置を正確に測定する。それによって、キャピラリ交換時のキャピラリ１０２の位置ずれ又は傾斜を測定することができる。 In this example, a capillary position measuring light source 127 is further provided between the glass substrate 107 on which the capillaries 102 are arranged and the detection optical unit 131. The capillary position measuring light source 127 is a light source that irradiates a single wavelength, and may be, for example, a laser diode. Each time the capillary is replaced, the capillary 102 is irradiated by the capillary position measuring light source 127. The reflected light from the capillary 102 is detected by the detection optical unit 131. A reflected image of the capillary 102 is formed on the two-dimensional detector 136, and the position of the capillary is accurately measured. Thereby, it is possible to measure the displacement or inclination of the capillary 102 when the capillary is replaced.

キャピラリ１０２に位置ずれ又は傾斜があると、２次元検出器１３６の画面上の蛍光スペクトルは、ずれて表示される。しかしながら、本例ではキャピラリ１０２のずれ又は傾斜が測定されているため、蛍光スペクトルのずれを補正することができる。こうして、キャピラリ交換時の新たな波長校正データの取得は不要となる。 If the capillary 102 is misaligned or inclined, the fluorescence spectrum on the screen of the two-dimensional detector 136 is displayed deviated. However, in this example, since the displacement or inclination of the capillary 102 is measured, the displacement of the fluorescence spectrum can be corrected. Thus, it is not necessary to acquire new wavelength calibration data when the capillary is replaced.

図２を参照して、照射部１０３を詳細に説明する。図２Ａに示すように、キャピラリヘッド１０８に近い位置にて、ガラス基板１０７が設けられている。図２Ｂに示すように、複数のキャピラリ１０２は、ガラス基板１０７上に配列されている。各キャピラリ１０２は、ガラス基板１０７上にて、互いにある程度平行に、且つ、ガラス基板に対して実質的に平行に配列されている。ある程度とは、数度の傾斜があってもよいことを意味し、実質的にとは、精度誤差に収まる程度であることを意味する。 The irradiation unit 103 will be described in detail with reference to FIG. As shown in FIG. 2A, a glass substrate 107 is provided at a position close to the capillary head 108. As shown in FIG. 2B, the plurality of capillaries 102 are arranged on a glass substrate 107. The capillaries 102 are arranged on the glass substrate 107 so as to be parallel to each other to some extent and substantially parallel to the glass substrate. The term “a certain degree” means that there may be an inclination of several degrees, and the term “substantially” means that it is within the accuracy error.

照射光学ユニット１２１からの励起光は、キャピラリ１０２の軸方向に沿って、又は、キャピラリ１０２の軸方向に対して所定の角度にて傾斜した方向に沿って照射される。照射部１０３では、キャピラリ１０２のポリイミド皮膜は除去されている。従って、励起光は、複数のキャピラリ１０２の外面を全反射してキャピラリ１０２内をそれぞれ伝播し、各キャピラリ１０２内の試料を同時に励起する。キャピラリ１０２内を伝播する励起光によって、キャピラリ１０２内の試料は、数ｍｍから数十ｍｍの範囲にて、蛍光を発生する。こうして本例では、線状の発光部位を形成する。 Excitation light from the irradiation optical unit 121 is irradiated along the axial direction of the capillary 102 or along a direction inclined at a predetermined angle with respect to the axial direction of the capillary 102. In the irradiation unit 103, the polyimide film of the capillary 102 is removed. Therefore, the excitation light is totally reflected from the outer surfaces of the plurality of capillaries 102 and propagates through the capillaries 102 to excite the samples in the capillaries 102 simultaneously. By the excitation light propagating in the capillary 102, the sample in the capillary 102 generates fluorescence in the range of several mm to several tens mm. Thus, in this example, a linear light emitting region is formed.

キャピラリ１０２内の試料から発生した蛍光は、図１に示したように、キャピラリ１０２の軸方向に対して垂直な方向に沿って配置された検出光学ユニット１３１によって検出される。 Fluorescence generated from the sample in the capillary 102 is detected by a detection optical unit 131 arranged along a direction perpendicular to the axial direction of the capillary 102 as shown in FIG.

図３を参照して検出光学ユニット１３１を説明する。図３Ａに示すように、検出光学ユニット１３１は、第１カメラレンズ１３２、検出フィルタ１３３、回折格子１３４、第２カメラレンズ１３５、及び、２次元検出器１３６を含む。本例では、波長分散方法として、回折格子１３４を用いる。キャピラリ１０２の発光部位から放出された蛍光は、第１カメラレンズ１３２によって、平行光束になる。この平行光束は、検出フィルタ１３３に導かれる。検出フィルタ１３３は、分析に使用する波長領域の蛍光のみを透過させる。検出フィルタ１３３を透過した蛍光は、回折格子１３４によって波長分散され、第２カメラレンズ１３５によって、２次元検出器１３６上に結像される。２次元検出器１３６は、例えば、ＣＣＤカメラである。２次元検出器１３６からの画像信号は、コンピュータによって処理され、試料の分析がなされる。 The detection optical unit 131 will be described with reference to FIG. As shown in FIG. 3A, the detection optical unit 131 includes a first camera lens 132, a detection filter 133, a diffraction grating 134, a second camera lens 135, and a two-dimensional detector 136. In this example, a diffraction grating 134 is used as a wavelength dispersion method. The fluorescence emitted from the light emitting portion of the capillary 102 becomes a parallel light beam by the first camera lens 132. This parallel light beam is guided to the detection filter 133. The detection filter 133 transmits only fluorescence in the wavelength region used for analysis. The fluorescence transmitted through the detection filter 133 is wavelength-dispersed by the diffraction grating 134 and imaged on the two-dimensional detector 136 by the second camera lens 135. The two-dimensional detector 136 is a CCD camera, for example. The image signal from the two-dimensional detector 136 is processed by a computer and the sample is analyzed.

図３Ｂは、２次元検出器１３６によって得られた画像を示す。本例では、２本のキャピラリに対応して２つの画像が得られる。この画像の横軸は波長分散方向、縦軸はキャピラリの軸方向である。 FIG. 3B shows an image obtained by the two-dimensional detector 136. In this example, two images are obtained corresponding to two capillaries. The horizontal axis of this image is the chromatic dispersion direction, and the vertical axis is the axial direction of the capillary.

尚、回折格子１３４の代わりに、プリズムを適宜組み合わせた波長分散手段を用いてもよい。２次元検出器１３６は、ＣＣＤカメラの代わりに、１次元検出器、フォトマル、フォトダイオード等、及び、光学機構を適宜組み合わせて構成したものであってもよい。 In place of the diffraction grating 134, wavelength dispersion means in which prisms are appropriately combined may be used. The two-dimensional detector 136 may be configured by appropriately combining a one-dimensional detector, a photomultiplier, a photodiode, and the like and an optical mechanism instead of the CCD camera.

以下に、本発明によるキャピラリ電気泳動装置によってキャピラリの位置を測定し、キャピラリの位置に基づいて、蛍光スペクトルのずれを補正する方法を説明する。第１の方法では、データ取得領域を設定する。第２の方法では、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルを補正する。ここでは、１本のキャピラリを用い、４色の蛍光色素を用いた場合を説明する。 Hereinafter, a method for measuring the position of the capillary using the capillary electrophoresis apparatus according to the present invention and correcting the deviation of the fluorescence spectrum based on the position of the capillary will be described. In the first method, a data acquisition area is set. In the second method, the reference fluorescence spectrum acquired as the wavelength calibration data is corrected. Here, a case where a single capillary is used and four color fluorescent dyes are used will be described.

図４は、赤色レーザダイオードの特性を示す。本例では、キャピラリ位置測定用光源１２７として、赤色レーザダイオードを用いる。赤色レーザダイオードは、ピーク波長が６５５ｎｍ、半値幅が約２ｎｍの発光帯域が狭い単色光源である。 FIG. 4 shows the characteristics of the red laser diode. In this example, a red laser diode is used as the capillary position measuring light source 127. The red laser diode is a monochromatic light source having a narrow emission band with a peak wavelength of 655 nm and a half width of about 2 nm.

図５は、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルを示す。ここでは、４色の蛍光色素、ｄＲ１１０、ｄＲ６Ｇ、ｄＴＡＭＲＡ、ｄＲＯＸを用いる。４色の蛍光色素からの蛍光は回折格子１３４によって波長分散されてスペクトルとなる。実際の分析では、これらの基準蛍光スペクトルを用いる。こうして、ＤＮＡサンプルの検出光から４色の蛍光スペクトルを分離し、４種類のＤＮＡを正確に同定することができる。 FIG. 5 shows a reference fluorescence spectrum acquired as wavelength calibration data. Here, four color dyes, dR110, dR6G, dTAMRA, and dROX are used. The fluorescence from the four color fluorescent dyes is wavelength-dispersed by the diffraction grating 134 and becomes a spectrum. In the actual analysis, these reference fluorescence spectra are used. In this way, the fluorescence spectra of four colors can be separated from the detection light of the DNA sample, and the four types of DNA can be accurately identified.

図６を参照してキャピラリの位置ずれに起因する波長シフトを説明する。２次元検出器１３６に結像された蛍光スペクトルの像の位置は、キャピラリ１０２と２次元検出器１３６の相対的な位置によって決まる。２次元検出器１３６は固定されているものとする。キャピラリの交換によってキャピラリ１０２の位置が変わると、２次元検出器１３６の画像上の蛍光スペクトル像の形状は変化しないが、その位置は、波長分散方向又はキャピラリ軸方向に平行移動する。 With reference to FIG. 6, the wavelength shift caused by the displacement of the capillary will be described. The position of the fluorescence spectrum image formed on the two-dimensional detector 136 is determined by the relative positions of the capillary 102 and the two-dimensional detector 136. It is assumed that the two-dimensional detector 136 is fixed. When the position of the capillary 102 is changed by exchanging the capillary, the shape of the fluorescence spectrum image on the image of the two-dimensional detector 136 does not change, but the position is translated in the wavelength dispersion direction or the capillary axis direction.

図６の太線の曲線６１は、キャピラリ１０２が基準位置にあるときの２次元検出器１３６に結像した蛍光スペクトル像を示す。基準位置とは、波長校正データ取得時のキャピラリ１０２の位置である。 A thick curve 61 in FIG. 6 shows a fluorescence spectrum image formed on the two-dimensional detector 136 when the capillary 102 is at the reference position. The reference position is the position of the capillary 102 when wavelength calibration data is acquired.

縦軸は信号強度、横軸は波長である。但し、横軸の波長の目盛は、波長校正データ取得時に設定されたものである。従って、横軸は、２次元検出器１３６の画像における波長分散方向の位置を表す。図６の細線の曲線６２は、キャピラリ１０２の位置が波長分散方向に移動した場合の２次元検出器１３６上に結像した蛍光スペクトル像を示す。キャピラリ１０２の位置が変わると、蛍光スペクトル像は波長方向にシフトする。この現象は、キャピラリアレイ１０１の取り付け交換の際に生じる。 The vertical axis represents signal intensity, and the horizontal axis represents wavelength. However, the wavelength scale on the horizontal axis is set when wavelength calibration data is acquired. Therefore, the horizontal axis represents the position in the wavelength dispersion direction in the image of the two-dimensional detector 136. A thin line curve 62 in FIG. 6 shows a fluorescence spectrum image formed on the two-dimensional detector 136 when the position of the capillary 102 moves in the wavelength dispersion direction. When the position of the capillary 102 changes, the fluorescence spectrum image shifts in the wavelength direction. This phenomenon occurs when the capillary array 101 is attached and replaced.

波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトル像の位置に対して分析時の蛍光スペクトル像の位置がずれた状態で、データ取得し、分析を行うと、ＤＮＡサンプルからの蛍光スペクトルを正確に分離することができない。例えば、蛍光色素ｄＲ１１０の蛍光を検出する場合、ｄＲ６Ｇの蛍光信号が擬似信号として発生し、分析の信頼性が低下する。蛍光スペクトルのずれが大きければ大きいほど、擬似信号は大きくなり、分析の精度は悪くなる。 When the data is acquired and analyzed with the position of the fluorescence spectrum image at the time of analysis shifted from the position of the reference fluorescence spectrum image acquired as wavelength calibration data, the fluorescence spectrum from the DNA sample is accurately separated. I can't. For example, when detecting the fluorescence of the fluorescent dye dR110, the fluorescence signal of dR6G is generated as a pseudo signal, and the reliability of the analysis is reduced. The greater the deviation in the fluorescence spectrum, the larger the pseudo signal and the worse the analysis accuracy.

そこで、本発明では、分析時のキャピラリ１０２の位置を正確に測定し、蛍光スペクトル像が、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトル像とずれないように、所定の操作を行う。これについては後に説明する。 Therefore, in the present invention, the position of the capillary 102 at the time of analysis is accurately measured, and a predetermined operation is performed so that the fluorescence spectrum image does not deviate from the reference fluorescence spectrum image acquired as wavelength calibration data. This will be described later.

図７を参照して、キャピラリの位置を測定する方法を説明する。図７Ａは、キャピラリ位置測定用光源１２７をキャピラリ１０２に照射したとき、２次元検出器１３６の画像上のキャピラリの像を示し、縦軸はキャピラリ軸方向の位置、横軸は波長分散方向の位置である。図７Ｂは、キャピラリの像のスペクトルであり、縦軸は光強度、横軸は波長である。本例では、キャピラリ位置測定用光源１２７として、単一波長光源である赤色レーザダイオードを用いる。従って、キャピラリ１０２からの反射光を回折格子１３４によって分光しても、単一波長の像及びスペクトルが得られる。図７Ｂのスペクトルにおける２本のピークは、キャピラリ１０２の外面における反射光を表す。２つのピーク間の距離は、キャピラリ１０２の外径と同一である。 A method for measuring the position of the capillary will be described with reference to FIG. FIG. 7A shows the capillary image on the image of the two-dimensional detector 136 when the capillary 102 is irradiated with the capillary position measuring light source 127, the vertical axis is the position in the capillary axis direction, and the horizontal axis is the position in the wavelength dispersion direction. It is. FIG. 7B is a spectrum of the capillary image, where the vertical axis represents the light intensity and the horizontal axis represents the wavelength. In this example, a red laser diode that is a single wavelength light source is used as the capillary position measuring light source 127. Therefore, even if the reflected light from the capillary 102 is split by the diffraction grating 134, a single wavelength image and spectrum can be obtained. Two peaks in the spectrum of FIG. 7B represent the reflected light at the outer surface of the capillary 102. The distance between the two peaks is the same as the outer diameter of the capillary 102.

本例では、外径が３２６μｍのキャピラリを用いた。ピーク間の距離は、約３３０μｍである。図７のキャピラリの像又はスペクトルより、２次元検出器１３６の画像上におけるキャピラリの中心位置を示す波長が得られる。本例では、キャピラリ軸方向に関してある程度の長さの画像を取得することができるので、キャピラリの位置ずれを正確に得ることができるばかりでなく、キャピラリの傾斜角を正確に得ることができる。 In this example, a capillary having an outer diameter of 326 μm was used. The distance between the peaks is about 330 μm. A wavelength indicating the center position of the capillary on the image of the two-dimensional detector 136 is obtained from the image or spectrum of the capillary in FIG. In this example, an image having a certain length with respect to the capillary axis direction can be acquired, so that not only can the position of the capillary be accurately obtained, but also the inclination angle of the capillary can be accurately obtained.

図８を参照して、２次元検出器１３６によって得られる画像上におけるデータ取得領域の設定方法を説明する。図８は、図７Ａと同様であり、キャピラリ位置測定用光源１２７からの光をキャピラリ１０２に照射したとき、２次元検出器１３６の画像上のキャピラリの像８１を示し、縦軸はキャピラリ軸方向の位置、横軸は２次元検出器１３６の画像上の波長方向の位置を表す。 With reference to FIG. 8, a method for setting a data acquisition region on an image obtained by the two-dimensional detector 136 will be described. FIG. 8 is the same as FIG. 7A, and shows the capillary image 81 on the image of the two-dimensional detector 136 when the capillary 102 is irradiated with light from the capillary position measurement light source 127, and the vertical axis indicates the capillary axis direction. The horizontal axis represents the position of the two-dimensional detector 136 in the wavelength direction on the image.

先ず、データ取得領域の横方向の範囲の設定方法を説明する。上述のように、キャピラリ位置測定用光源１２７として赤色レーザダイオードを用いることによって、２次元検出器１３６の画像上におけるキャピラリ中心位置が求められる。このキャピラリ中心位置は、キャピラリ位置測定用光源１２７の波長６５５ｎｍを表す。即ち、２次元検出器１３６によって得られた２次元像における波長６５５ｎｍの位置を特定することができる。波長６５５ｎｍの位置に基づいて、２次元検出器１３６上におけるデータ取得領域を設定することができる。 First, a method for setting the horizontal range of the data acquisition area will be described. As described above, the capillary center position on the image of the two-dimensional detector 136 is obtained by using a red laser diode as the capillary position measuring light source 127. The capillary center position represents the wavelength 655 nm of the capillary position measuring light source 127. That is, the position of the wavelength 655 nm in the two-dimensional image obtained by the two-dimensional detector 136 can be specified. A data acquisition region on the two-dimensional detector 136 can be set based on the position of the wavelength 655 nm.

分析実験では、分析波長領域は予め決まっている。例えば、分析波長領域が５２５ｎｍ〜７１５ｎｍであるとする。波長６５５ｎｍの位置に基づいて、波長５２５ｎｍの位置及び波長７１５ｎｍの位置を特定する。例えば、２次元検出器１３６として、１画素が２ｎｍに相当する分解能を有するＣＣＤを用いるものとする。波長６５５ｎｍと波長５２５ｎｍの差は、１３０ｎｍであり、これは６５画素に相当する。従って、波長６５５ｎｍの位置より６５画素左側にずれた位置が、波長５２５ｎｍを表す。同様に、波長６５５ｎｍと波長７１５ｎｍの差は、６０ｎｍであり、これは３０画素に相当する。従って、波長６５５ｎｍの位置より３０画素右側にずれた位置が、波長７１５ｎｍを表す。尚、分析波長領域５２５ｎｍ〜７１５ｎｍは９５画素に相当する。即ち、波長６５５ｎｍの位置より６５画素左側にずれた位置から３０画素右側にずれた位置までを、２次元検出器１３６におけるデータ取得領域として設定する。ここでは、分析波長領域が５２５ｎｍ〜７１５ｎｍの場合を説明したが、他の分析波長領域であっても同様にデータ取得領域が求められる。 In the analysis experiment, the analysis wavelength region is predetermined. For example, it is assumed that the analysis wavelength region is 525 nm to 715 nm. Based on the position of wavelength 655 nm, the position of wavelength 525 nm and the position of wavelength 715 nm are specified. For example, a CCD having a resolution corresponding to 2 nm per pixel is used as the two-dimensional detector 136. The difference between the wavelength 655 nm and the wavelength 525 nm is 130 nm, which corresponds to 65 pixels. Therefore, the position shifted to the left of 65 pixels from the position of the wavelength 655 nm represents the wavelength 525 nm. Similarly, the difference between the wavelength 655 nm and the wavelength 715 nm is 60 nm, which corresponds to 30 pixels. Therefore, the position shifted to the right of 30 pixels from the position of the wavelength 655 nm represents the wavelength 715 nm. The analysis wavelength region of 525 nm to 715 nm corresponds to 95 pixels. That is, the data acquisition region in the two-dimensional detector 136 is set from a position shifted 65 pixels to the left from the position of wavelength 655 nm to a position shifted 30 pixels to the right. Here, the case where the analysis wavelength region is 525 nm to 715 nm has been described, but a data acquisition region is similarly obtained even in other analysis wavelength regions.

本発明によると、２次元検出器１３６上におけるデータ取得領域をキャピラリ位置測定用光源１２７の波長６５５ｎｍを基準として設定するので、予め設定された分析波長領域におけるスペクトル像を得ることができる。 According to the present invention, since the data acquisition region on the two-dimensional detector 136 is set with reference to the wavelength 655 nm of the capillary position measurement light source 127, a spectrum image in a preset analysis wavelength region can be obtained.

データ取得領域の横方向の範囲が設定されると、次に、データ取得領域の縦方向の範囲を設定する。２次元検出器１３６の画像領域を、横軸に平行な線によって複数の領域に等分する。本例では、５つのデータ取得領域８２を設定する。 Once the horizontal range of the data acquisition area is set, next, the vertical range of the data acquisition area is set. The image area of the two-dimensional detector 136 is equally divided into a plurality of areas by lines parallel to the horizontal axis. In this example, five data acquisition areas 82 are set.

図９を参照して、本発明によるキャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第１の例を説明する。図９Ａはキャピラリ１０２が基準位置にある場合を示す。基準位置とは、波長校正データ取得時におけるキャピラリの位置のことである。基準位置では、キャピラリ１０２は、位置ずれ、傾斜がない。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９１を示す画像２０１、波長校正データとして取得された基準蛍光スペクトル９２を示す画像２０２である。画像２０２では、５つのデータ取得領域が設定されている。 With reference to FIG. 9, the 1st example of the analysis method using the capillary electrophoresis apparatus by this invention is demonstrated. FIG. 9A shows the case where the capillary 102 is at the reference position. The reference position is the position of the capillary at the time of wavelength calibration data acquisition. At the reference position, the capillary 102 is not displaced or inclined. From left to right, an arrangement state of the capillaries 102, an image 201 showing an image 91 of the capillary, and an image 202 showing a reference fluorescence spectrum 92 acquired as wavelength calibration data. In the image 202, five data acquisition areas are set.

図９Ｂは、キャピラリの交換によって、キャピラリ１０２の位置が、基準位置より、波長分散方向にずれた場合を示す。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９３を示す画像２０３、分析試料の蛍光スペクトル９４を示す画像２０４である。画像２０４では、５つのデータ取得領域が設定されている。尚、図９Ａの画像２０１におけるキャピラリの像９１の位置と図９Ｂの画像２０３におけるキャピラリの像９３の位置は異なるため、図９Ｂの画像２０４におけるデータ取得領域の位置は、図９Ａの画像２０２におけるデータ取得領域の位置より横方向にずれている。 FIG. 9B shows a case where the position of the capillary 102 is shifted from the reference position in the wavelength dispersion direction due to the replacement of the capillary. From left to right, an arrangement state of the capillaries 102, an image 203 showing an image 93 of the capillary, and an image 204 showing a fluorescence spectrum 94 of the analysis sample. In the image 204, five data acquisition areas are set. Since the position of the capillary image 91 in the image 201 of FIG. 9A is different from the position of the capillary image 93 in the image 203 of FIG. 9B, the position of the data acquisition region in the image 204 of FIG. It is shifted laterally from the position of the data acquisition area.

図９Ｃは、キャピラリの交換によって、キャピラリ１０２が、波長校正データ取得時における位置より、キャピラリ軸に対して傾斜した場合を示す。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９５を示す画像２０５、分析試料の蛍光スペクトル９６を示す画像２０６である。 FIG. 9C shows a case where the capillary 102 is tilted with respect to the capillary axis from the position at the time of wavelength calibration data acquisition by exchanging the capillary. From left to right, an arrangement state of the capillaries 102, an image 205 showing an image 95 of the capillary, and an image 206 showing a fluorescence spectrum 96 of the analysis sample.

キャピラリ１０２がキャピラリ軸に対して傾斜した場合は、キャピラリ１０２が複数の短い部分からなると考え、各部分が順に波長分散方向にずれた場合を想定すればよい。本例では、画像は、縦方向に５つのデータ取得領域に分割されている。従って、キャピラリ１０２を、５つのデータ取得領域に対応するように５つの部分に分割し、各部分が波長分散方向にずれた場合を想定すればよい。但し、各部分のずれ量は、画像の縦方向の中心位置では０であり、中心位置から離れるに従って大きくなる。 When the capillary 102 is inclined with respect to the capillary axis, it can be assumed that the capillary 102 is composed of a plurality of short portions, and that each portion is sequentially shifted in the wavelength dispersion direction. In this example, the image is divided into five data acquisition areas in the vertical direction. Therefore, the capillary 102 may be divided into five parts so as to correspond to the five data acquisition regions, and each part may be assumed to be shifted in the wavelength dispersion direction. However, the shift amount of each portion is 0 at the center position in the vertical direction of the image, and increases as the distance from the center position increases.

図９Ｄは、各データ取得領域から取り出した蛍光スペクトル７１のグラフ２０７である。図９Ａの画像２０２に含まれる５つのデータ取得領域から波長校正データとして５個の基準蛍光スペクトルが得られる。同様に、図９Ｂの画像２０４に含まれる５つのデータ取得領域から５個の蛍光スペクトルが得られる。図９Ｃの画像２０６に含まれる５つのデータ取得領域から５個の蛍光スペクトルが得られる。図９Ａの５つのスペクトルと、図９Ｂの５つのスペクトルは、キャピラリ軸方向に分割したデータ取得領域ごとに同一になる。図９Ａの５つのスペクトルと、図９Ｃの５つのスペクトルは、縦方向の分割数に依存して若干異なるものの、擬似信号は小さくなる。細かく分割すればするほど、擬似信号は小さくなる。 FIG. 9D is a graph 207 of the fluorescence spectrum 71 extracted from each data acquisition region. Five reference fluorescence spectra are obtained as wavelength calibration data from the five data acquisition regions included in the image 202 of FIG. 9A. Similarly, five fluorescence spectra are obtained from the five data acquisition regions included in the image 204 in FIG. 9B. Five fluorescence spectra are obtained from the five data acquisition regions included in the image 206 of FIG. 9C. The five spectra in FIG. 9A and the five spectra in FIG. 9B are the same for each data acquisition region divided in the capillary axis direction. Although the five spectra in FIG. 9A and the five spectra in FIG. 9C are slightly different depending on the number of vertical divisions, the pseudo signal is small. The more finely divided, the smaller the pseudo signal.

以上説明したように本発明によると、キャピラリの交換によって、キャピラリの位置ずれが生じた場合でも、又は、キャピラリが傾斜した場合でも、キャピラリの位置を測定し、それに基づいてデータ取得領域を設定するので、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルと同一の位置にて蛍光スペクトルが得られる。従って、キャピラリの交換毎に波長校正データを取得する必要がない。また、こうして得られた蛍光スペクトルを用いることにより擬似信号を防ぐことができる。 As described above, according to the present invention, the capillary position is measured and the data acquisition area is set based on the capillary position even when the capillary is displaced due to the replacement of the capillary or when the capillary is inclined. Therefore, a fluorescence spectrum is obtained at the same position as the reference fluorescence spectrum acquired as wavelength calibration data. Therefore, it is not necessary to acquire wavelength calibration data every time the capillary is replaced. Moreover, a pseudo signal can be prevented by using the fluorescence spectrum thus obtained.

なお、キャピラリの発光部位は、温度制御ユニット１６１の影響によって、熱膨張をする場合がある。そこで、キャピラリの位置の測定は、温度制御ユニット１６１の温度が安定し、キャピラリの位置が固定した後、分析データ取得直前に行うのがよい。 Note that the light emitting part of the capillary may thermally expand due to the influence of the temperature control unit 161. Therefore, the measurement of the capillary position is preferably performed immediately before acquisition of analysis data after the temperature of the temperature control unit 161 is stabilized and the capillary position is fixed.

図１０を参照して、本発明によるキャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第１の例の操作の詳細手順を説明する。ステップ２００にて、波長校正データの取得を行う。波長校正データの取得は通常出荷前に製造工場にて行う。例えば４色の蛍光色素によって標識された波長校正済みのＤＮＡサンプルを電気泳動させ、基準蛍光スペクトルを取得する。こうして波長校正データとして基準蛍光スペクトルが得られると、以下のように電気泳動分析を行う。 With reference to FIG. 10, the detailed procedure of the operation of the first example of the analysis method using the capillary electrophoresis apparatus according to the present invention will be described. In step 200, wavelength calibration data is acquired. Wavelength calibration data is usually acquired at the manufacturing plant before shipment. For example, a wavelength-calibrated DNA sample labeled with four color dyes is electrophoresed to obtain a reference fluorescence spectrum. When the reference fluorescence spectrum is obtained as the wavelength calibration data in this way, electrophoretic analysis is performed as follows.

電気泳動分析の基本的手順は、ステップ２０１の分析前準備、ステップ２０２の分析開始、ステップ２０３の泳動媒体充填、ステップ２０４の予備泳動、ステップ２０５の試料導入、ステップ２０６Ａのキャピラリの位置測定及びデータ取得領域の設定、ステップ２０７の電気泳動、及び、ステップ２０８の分析を含み、ユーザ側にて行う。 The basic procedure of electrophoretic analysis is: preparation before analysis in step 201, start of analysis in step 202, loading of electrophoresis medium in step 203, preliminary migration in step 204, sample introduction in step 205, capillary position measurement in step 206A and data The acquisition area setting, electrophoresis in step 207, and analysis in step 208 are performed on the user side.

オペレータは、ステップ２０１の分析前準備を行う。キャピラリ１０２が劣化している場合、又は、キャピラリ１０２の長さを変更する必要がある場合、キャピラリアレイ１０１を交換する。ここではキャピラリの交換を行ったものとする。先ず、バッファ容器１４４と陽極バッファ容器１１２に、緩衝液を満たす。緩衝液は、例えば、電気泳動用として市販されている電解質液である。次に、サンプル容器１４３のウェル内に、分析対象である試料を分注する。試料は、例えば、ＤＮＡのＰＣＲ産物である。また、洗浄容器１４５に洗浄液を分注する。洗浄液は、例えば、純水である。また、シリンジ１５２内に、泳動媒体を注入する。泳動媒体は、例えば、電気泳動用として市販されているポリアクリルアミド系分離ゲルである。 The operator makes preparations before analysis in step 201. When the capillaries 102 are deteriorated or when the length of the capillaries 102 needs to be changed, the capillary array 101 is replaced. Here, it is assumed that the capillary has been replaced. First, the buffer container 144 and the anode buffer container 112 are filled with a buffer solution. The buffer solution is, for example, an electrolyte solution that is commercially available for electrophoresis. Next, a sample to be analyzed is dispensed into the well of the sample container 143. The sample is, for example, a DNA PCR product. In addition, the cleaning liquid is dispensed into the cleaning container 145. The cleaning liquid is pure water, for example. Further, the electrophoresis medium is injected into the syringe 152. The electrophoresis medium is, for example, a polyacrylamide separation gel that is commercially available for electrophoresis.

オペレータは、ステップ２０２の分析開始を行う。ステップ２０３の泳動媒体充填では、キャピラリ１０２内に新しい泳動媒体を充填し、泳動路を形成する。先ず、オートサンプラユニットによって、廃液容器１４６を試料導入部１０４の直下に搬送する。次に、シリンジ１５２を駆動して、キャピラリ１０２内に新しい泳動媒体を充填し、使用済の泳動媒体を廃液容器１４６に廃棄する。最後に、オートサンプラユニットによって、洗浄容器１４５を試料導入部１０４の直下に搬送し、洗浄液に試料導入端１０５を浸し、泳動媒体によって汚れた試料導入端１０５を洗浄する。 The operator starts analysis in step 202. In step 203, the electrophoresis medium is filled, and a new electrophoresis medium is filled in the capillary 102 to form an electrophoresis path. First, the waste liquid container 146 is transported directly under the sample introduction unit 104 by the auto sampler unit. Next, the syringe 152 is driven to fill the capillary 102 with a new electrophoresis medium, and the used electrophoresis medium is discarded in the waste liquid container 146. Finally, the auto sampler unit transports the cleaning container 145 directly below the sample introduction unit 104, immerses the sample introduction end 105 in the cleaning liquid, and cleans the sample introduction end 105 contaminated by the electrophoresis medium.

ステップ２０４の予備泳動では、泳動媒体に所定の電圧を印加し、泳動媒体を電気泳動に適した状態にする。先ず、オートサンプラユニットによって、バッファ容器１４４を試料導入部１０４の直下に搬送し、緩衝液に試料導入端１０５を浸し、通電路を形成する。
次に、電源ユニットによって、泳動媒体に数〜数十キロボルト程度の電圧を数〜数十分間印加する。それによって、泳動媒体は電気泳動に適した状態となる。最後に、オートサンプラユニットによって、洗浄容器１４５を試料導入部１０４の直下に搬送し、洗浄液に試料導入端１０５を浸し、緩衝液によって汚れた試料導入端１０５を洗浄液によって洗浄する。 In the preliminary electrophoresis in step 204, a predetermined voltage is applied to the electrophoresis medium so that the electrophoresis medium is in a state suitable for electrophoresis. First, the buffer container 144 is transported directly below the sample introduction unit 104 by the autosampler unit, and the sample introduction end 105 is immersed in the buffer solution to form a current path.
Next, a voltage of several to several tens of kilovolts is applied to the electrophoresis medium for several to several tens of minutes by the power supply unit. Thereby, the electrophoresis medium is in a state suitable for electrophoresis. Finally, the auto sampler unit transports the cleaning container 145 directly below the sample introduction unit 104, immerses the sample introduction end 105 in the cleaning solution, and cleans the sample introduction end 105 contaminated with the buffer solution with the cleaning solution.

ステップ２０５の試料導入では、試料成分を泳動路に導入する。先ず、オートサンプラユニットによって、サンプル容器１４３を試料導入部１０４の直下に搬送し、サンプル容器１４３のウェル内に保持された試料に試料導入端１０５を浸す。これによって、通電路が形成され、泳動路に試料成分を導入することができる状態となる。電源ユニットによって、パルス電圧を通電路に印加し、泳動路に試料成分を導入する。最後に、オートサンプラユニットによって、洗浄容器１４５を試料導入部１０４の直下に搬送し、洗浄液に試料導入端１０５を浸し、試料によって汚れた試料導入端１０５を洗浄液によって洗浄する。 In step 205, sample components are introduced into the migration path. First, the sample container 143 is transported directly below the sample introduction unit 104 by the autosampler unit, and the sample introduction end 105 is immersed in the sample held in the well of the sample container 143. As a result, an energization path is formed, and a sample component can be introduced into the migration path. A pulse voltage is applied to the energization path by the power supply unit, and the sample component is introduced into the migration path. Finally, the auto sampler unit transports the cleaning container 145 directly below the sample introduction unit 104, immerses the sample introduction end 105 in the cleaning liquid, and cleans the sample introduction end 105 contaminated with the sample with the cleaning liquid.

ステップ２０６Ａでは、キャピラリの位置測定及びデータ取得領域の設定を行う。キャピラリの位置測定では、キャピラリ位置測定用光源１２７を用いて、キャピラリの位置を測定する。データ取得領域の設定では、キャピラリの位置に基づいて２次元検出器１３６のデータ取得領域を設定する。ステップ２０６Ａの詳細は図９を参照して説明した。 In step 206A, the capillary position is measured and the data acquisition area is set. In the capillary position measurement, a capillary position measurement light source 127 is used to measure the capillary position. In setting the data acquisition area, the data acquisition area of the two-dimensional detector 136 is set based on the capillary position. Details of step 206A have been described with reference to FIG.

ステップ２０７の電気泳動では、電気泳動によって、試料中に含まれる各試料成分を分離分析する。まず、オートサンプラユニットによって、バッファ容器１４４を試料導入部１０４の直下に搬送し、緩衝液に試料導入端１０５を浸し、通電路を形成する。次に、電源ユニットによって、通電路に１５ｋＶ前後の高電圧を印加し、泳動路に電界を発生させる。 In the electrophoresis of step 207, each sample component contained in the sample is separated and analyzed by electrophoresis. First, the buffer container 144 is transported directly under the sample introduction unit 104 by the autosampler unit, and the sample introduction end 105 is immersed in the buffer solution to form a current path. Next, a high voltage of about 15 kV is applied to the energization path by the power supply unit to generate an electric field in the migration path.

発生した電界によって、泳動路内の試料成分は、各試料成分の性質に依存した速度で照射部１０３へ移動する。つまり、試料成分は、その移動速度の差によって分離される。そして、照射部１０３に到達した試料成分から順番に検出される。例えば、試料が、塩基長の異なるＤＮＡを多数含む場合は、その塩基長によって移動速度に差が生じ、塩基長の短いＤＮＡから順に照射部１０３に到達する。照射部１０３にて励起光を照射する。蛍光標識された各ＤＮＡの末端塩基配列は照射部１０３に到達した順に蛍光を発生する。 Due to the generated electric field, the sample component in the migration path moves to the irradiation unit 103 at a speed depending on the property of each sample component. That is, the sample components are separated by the difference in movement speed. And it detects in order from the sample component which reached the irradiation part 103. For example, when the sample includes a large number of DNAs having different base lengths, the moving speed varies depending on the base length, and reaches the irradiation unit 103 in order from the DNA having the shorter base length. The irradiation unit 103 irradiates excitation light. The terminal base sequence of each fluorescently labeled DNA generates fluorescence in the order in which it reaches the irradiation unit 103.

２次元検出器１３６によって蛍光スペクトルが検出される。蛍光スペクトルの検出は、ステップ２０６Ａにて設定したデータ取得領域に基づいて行う。 The two-dimensional detector 136 detects the fluorescence spectrum. The detection of the fluorescence spectrum is performed based on the data acquisition area set in step 206A.

ステップ２０８の分析では、ステップ２００にて得られた波長校正データを利用して、電気泳動によって得られたデータを正規化し、目的とする波長分散データを得る。波長校正データが不正確であると、擬似信号が生じ、分析結果の信頼性が低下する。 In the analysis in step 208, the wavelength calibration data obtained in step 200 is used to normalize the data obtained by electrophoresis to obtain target chromatic dispersion data. If the wavelength calibration data is inaccurate, a pseudo signal is generated, and the reliability of the analysis result is lowered.

予定していたデータを取り終えたら処理を終了する。電圧印加を停止し、泳動分析を終了する。以上が、一連の分析手順である。更に分析を実施したい場合には、ステップ２０３の泳動媒体充填から分析手順を繰り返す。他の分析を実施する場合には、ステップ２０１の分析前準備から分析手順を繰り返す。いずれにしても、ステップ２００の波長校正データの取得は繰り返さない。 When the planned data is collected, the process is terminated. The voltage application is stopped and the electrophoretic analysis is terminated. The above is a series of analysis procedures. If further analysis is desired, the analysis procedure is repeated from filling of the migration medium in step 203. When performing another analysis, the analysis procedure is repeated from the preparation before the analysis in step 201. In any case, the acquisition of wavelength calibration data in step 200 is not repeated.

図１１を参照して、本発明によるキャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第２の例を説明する。本例では、キャピラリの交換によってキャピラリの位置が変化したとき、キャピラリの位置を測定し、それに基づいて、波長校正データを補正する。即ち、データ取得領域を設定する代わりに波長校正データ取得時の基準蛍光スペクトルを補正する。こうして補正した基準蛍光スペクトルは、キャピラリの交換時に新たに取得したなら得られたであろう波長校正データと実質的に同一である。 With reference to FIG. 11, the 2nd example of the analysis method using the capillary electrophoresis apparatus by this invention is demonstrated. In this example, when the position of the capillary changes due to the replacement of the capillary, the position of the capillary is measured, and the wavelength calibration data is corrected based on the measured position. That is, instead of setting the data acquisition area, the reference fluorescence spectrum at the time of wavelength calibration data acquisition is corrected. The corrected reference fluorescence spectrum is substantially the same as the wavelength calibration data that would have been obtained if it was newly acquired when the capillary was replaced.

図１１Ａはキャピラリ１０２が基準位置にある場合を示す。即ち、波長校正データ取得時におけるキャピラリ１０２を示す。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９１及び波長校正データとして取得された基準蛍光スペクトル９２を示す画像３０１、画像３０１から得た基準蛍光スペクトル７１のグラフ３０２、である。 FIG. 11A shows the case where the capillary 102 is at the reference position. That is, the capillary 102 at the time of wavelength calibration data acquisition is shown. In order from the left, there are an arrangement state of the capillaries 102, an image 91 of the capillary and an image 301 showing the reference fluorescence spectrum 92 acquired as wavelength calibration data, and a graph 302 of the reference fluorescence spectrum 71 obtained from the image 301.

画像３０１では、５つのデータ取得領域が設定されている。本例では、データ取得領域は固定されており、キャピラリ１０２の位置に基づいて設定されたものではない。この５つのデータ取得領域は、例えば、２次元検出器１３６の画像上に予め設定されたものである。 In the image 301, five data acquisition areas are set. In this example, the data acquisition area is fixed and is not set based on the position of the capillary 102. These five data acquisition areas are set in advance on the image of the two-dimensional detector 136, for example.

各データ取得領域より基準蛍光スペクトルのグラフが得られるが、それらは光学系の収差による違いはあるもののほぼ同一である。従って、グラフ３０２には、波長校正データとして取得された基準蛍光スペクトル７１のグラフの１つを示す。 Although a graph of the reference fluorescence spectrum is obtained from each data acquisition region, they are almost the same although there are differences due to aberrations of the optical system. Therefore, the graph 302 shows one of the graphs of the reference fluorescence spectrum 71 acquired as the wavelength calibration data.

図１１Ｂはキャピラリの交換によって、キャピラリ１０２の位置が、基準位置より波長分散方向にずれた場合を示す。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９３及び分析試料の蛍光スペクトル９４を示す画像３０３、画像３０３から得た分析試料の蛍光スペクトル７２のグラフ３０４、補正後の分析試料の蛍光スペクトル７３のグラフ３０５、である。画像３０３のデータ取得領域は画像３０１のデータ取得領域と同一である。 FIG. 11B shows a case where the position of the capillary 102 is shifted from the reference position in the wavelength dispersion direction by replacing the capillary. From left to right, the arrangement state of the capillaries 102, the image 303 showing the capillary image 93 and the fluorescence spectrum 94 of the analysis sample, the graph 304 of the fluorescence spectrum 72 of the analysis sample obtained from the image 303, and the fluorescence spectrum 73 of the analysis sample after correction The graph 305 of FIG. The data acquisition area of the image 303 is the same as the data acquisition area of the image 301.

各データ取得領域より分析試料の蛍光スペクトルのグラフが得られるが、それらは光学系の収差による違いはあるもののほぼ同一である。従って、グラフ３０４には、分析試料の蛍光スペクトル７２のグラフの１つを示す。 Although a graph of the fluorescence spectrum of the analysis sample is obtained from each data acquisition region, they are almost the same although there are differences due to aberrations of the optical system. Therefore, the graph 304 shows one of the graphs of the fluorescence spectrum 72 of the analysis sample.

グラフ３０４にて示す蛍光スペクトル７２のグラフの位置は、グラフ３０２にて示す基準蛍光スペクトル７１の位置よりずれている。このずれ量は、画像３０１のキャピラリの像９１の位置と画像３０３のキャピラリの像９３の位置の間のずれ量に相当する。このずれ量だけ、グラフ３０２の基準蛍光スペクトル７１を横方向に移動させることによりグラフ３０５にて示す補正後の基準蛍光スペクトル７３が得られる。 The position of the fluorescence spectrum 72 indicated by the graph 304 is shifted from the position of the reference fluorescence spectrum 71 indicated by the graph 302. This shift amount corresponds to the shift amount between the position of the capillary image 91 in the image 301 and the position of the capillary image 93 in the image 303. The corrected reference fluorescence spectrum 73 shown in the graph 305 is obtained by moving the reference fluorescence spectrum 71 of the graph 302 in the horizontal direction by this shift amount.

図１１Ｃは、キャピラリの交換によって、キャピラリ１０２が、基準位置よりキャピラリ軸に対して傾斜した場合を示す。左から順に、キャピラリ１０２の配置状態、キャピラリの像９５及び分析試料の蛍光スペクトル９６を示す画像３０６、画像３０６から得た分析試料の蛍光スペクトル７４、７６のグラフ３０７、３０９、補正後の分析試料の蛍光スペクトル７５、７７のグラフ３０８、３１０である。画像３０６のデータ取得領域は画像３０１のデータ取得領域と同一である。 FIG. 11C shows a case where the capillary 102 is inclined with respect to the capillary axis from the reference position by replacing the capillary. From left to right, the arrangement state of the capillary 102, the image 306 showing the capillary image 95 and the fluorescence spectrum 96 of the analysis sample, the graphs 307 and 309 of the fluorescence spectra 74 and 76 of the analysis sample obtained from the image 306, and the corrected analysis sample The graphs 308 and 310 of the fluorescence spectra 75 and 77 of FIG. The data acquisition area of the image 306 is the same as the data acquisition area of the image 301.

５つのデータ取得領域における分析試料の蛍光スペクトル９６は、キャピラリ１０２の傾斜に対応してずれている。５つのデータ取得領域から５つの蛍光スペクトルが得られるがそれらは互いに横方向にずれている。グラフ３０７は、最上段のデータ取得領域から得た蛍光スペクトルであり、グラフ３０９は、最下段のデータ取得領域から得た蛍光スペクトルである。 The fluorescence spectra 96 of the analysis samples in the five data acquisition regions are shifted corresponding to the inclination of the capillary 102. Five fluorescence spectra are obtained from the five data acquisition regions, but they are laterally offset from each other. A graph 307 is a fluorescence spectrum obtained from the uppermost data acquisition region, and a graph 309 is a fluorescence spectrum obtained from the lowermost data acquisition region.

グラフ３０７にて示す蛍光スペクトル７４のグラフの位置は、グラフ３０２にて示す蛍光スペクトル７１の位置より横方向にずれている。このずれ量は、画像３０１のキャピラリの像９１の位置と画像３０６の最上段のデータ取得領域におけるキャピラリの像９５の位置の間のずれ量に相当する。このずれ量だけグラフ３０２の基準蛍光スペクトル７１のグラフを横方向左側に移動させることによって、補正後の基準蛍光スペクトル７５のグラフ３０８が得られる。 The position of the graph of the fluorescence spectrum 74 indicated by the graph 307 is shifted in the horizontal direction from the position of the fluorescence spectrum 71 indicated by the graph 302. This shift amount corresponds to the shift amount between the position of the capillary image 91 in the image 301 and the position of the capillary image 95 in the uppermost data acquisition region of the image 306. By moving the graph of the reference fluorescence spectrum 71 of the graph 302 to the left in the horizontal direction by this shift amount, the corrected graph 308 of the reference fluorescence spectrum 75 is obtained.

同様に、グラフ３０９にて示す蛍光スペクトル７６のグラフの位置は、グラフ３０２にて示す基準蛍光スペクトル７１の位置より横方向にずれている。このずれ量は、画像３０１のキャピラリの像９１の位置と画像３０６の最下段のデータ取得領域におけるキャピラリの像９５の位置の間のずれ量に相当する。このずれ量だけグラフ３０２にて示す基準蛍光スペクトル７１のグラフを横方向右側に移動させることによって、補正後の基準蛍光スペクトル７７のグラフ３１０が得られる。 Similarly, the position of the graph of the fluorescence spectrum 76 indicated by the graph 309 is shifted in the horizontal direction from the position of the reference fluorescence spectrum 71 indicated by the graph 302. This shift amount corresponds to a shift amount between the position of the capillary image 91 in the image 301 and the position of the capillary image 95 in the lowermost data acquisition region of the image 306. By moving the graph of the reference fluorescence spectrum 71 indicated by the graph 302 to the right in the horizontal direction by this amount of deviation, the corrected graph 310 of the reference fluorescence spectrum 77 is obtained.

但し、各データ取得領域におけるキャピラリの像９５は傾斜しているため、キャピラリの像９５の位置は、各データ取得領域におけるキャピラリの像９５の中心の位置を求めることによって得る。 However, since the capillary image 95 in each data acquisition region is inclined, the position of the capillary image 95 is obtained by obtaining the position of the center of the capillary image 95 in each data acquisition region.

こうして本例では、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルを、キャピラリの位置ずれ量又は傾斜に基づいて修正する。この修正後の基準蛍光スペクトルを用いて分析を行うため、キャピラリ交換毎に波長校正データを取得する必要はない。 In this way, in this example, the reference fluorescence spectrum acquired as the wavelength calibration data is corrected based on the displacement amount or inclination of the capillary. Since the analysis is performed using the corrected reference fluorescence spectrum, it is not necessary to acquire wavelength calibration data every time the capillary is replaced.

電気泳動にて得られた蛍光スペクトルの分析処理に、補正後の基準蛍光スペクトルを用いることにより、擬似信号の発生を防止することができる。 By using the corrected reference fluorescence spectrum for the analysis of the fluorescence spectrum obtained by electrophoresis, generation of a pseudo signal can be prevented.

図１２を参照して、本発明によるキャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第２の例の操作の詳細手順を説明する。ステップ２００にて、波長校正データの取得を行う。波長校正データの取得は通常出荷前に製造工場にて行う。例えば４色の蛍光色素によって標識された波長校正済みのＤＮＡサンプルを電気泳動させ、基準蛍光スペクトルを取得する。こうして波長校正データとして基準蛍光スペクトルが得られると、以下のように電気泳動分析を行う。 With reference to FIG. 12, the detailed procedure of the operation of the second example of the analysis method using the capillary electrophoresis apparatus according to the present invention will be described. In step 200, wavelength calibration data is acquired. Wavelength calibration data is usually acquired at the manufacturing plant before shipment. For example, a wavelength-calibrated DNA sample labeled with four color dyes is electrophoresed to obtain a reference fluorescence spectrum. When the reference fluorescence spectrum is obtained as the wavelength calibration data in this way, electrophoretic analysis is performed as follows.

電気泳動分析の基本的手順は、ステップ２０１の分析前準備、ステップ２０２の分析開始、ステップ２０３の泳動媒体充填、ステップ２０４の予備泳動、ステップ２０５の試料導入、ステップ２０６Ｂのキャピラリの位置測定及び波長校正データの補正、ステップ２０７の電気泳動、及び、ステップ２０８の分析を含み、ユーザ側にて行う。 The basic procedure of electrophoretic analysis is as follows: preparation before analysis in step 201, start of analysis in step 202, loading of electrophoresis medium in step 203, preliminary migration in step 204, sample introduction in step 205, capillary position measurement in step 206B and wavelength This includes correction of calibration data, electrophoresis in step 207, and analysis in step 208, and is performed on the user side.

ステップ２０１の分析前準備、ステップ２０２の分析開始、ステップ２０３の泳動媒体充填、ステップ２０４の予備泳動、ステップ２０５の試料導入、及び、ステップ２０７の電気泳動は、図１０を参照して説明した。 The preparation before analysis in step 201, the start of analysis in step 202, filling of the migration medium in step 203, preliminary migration in step 204, sample introduction in step 205, and electrophoresis in step 207 have been described with reference to FIG.

ステップ２０６Ｂでは、キャピラリの位置測定及び波長校正データの補正を行う。キャピラリの位置測定では、キャピラリ位置測定用光源１２７を用いて、キャピラリの位置を測定する。波長校正データの補正では、キャピラリの位置に基づいて波長校正データを補正する。 In step 206B, the capillary position is measured and the wavelength calibration data is corrected. In the capillary position measurement, a capillary position measurement light source 127 is used to measure the capillary position. In the correction of the wavelength calibration data, the wavelength calibration data is corrected based on the position of the capillary.

ステップ２０８の分析では、ステップ２０６Ｂにて得られた波長校正データを利用して、電気泳動によって得られたデータを正規化し、目的とする波長分散データを得る。 In the analysis of step 208, the wavelength calibration data obtained in step 206B is used to normalize the data obtained by electrophoresis to obtain target chromatic dispersion data.

図１３を参照して、キャピラリ位置測定用光源の他の例を説明する。本例ではキャピラリ位置測定用光源１７１は、ある程度の発光波長帯域を有する。このような光源として、例えば、発光ダイオード（ＬＥＤ）、Ｎｅランプ等がある。図１３Ａに示すように、キャピラリ位置測定用光源１７１の出力側に、キャピラリ位置測定用フィルタ１７２が設けられている。キャピラリ位置測定用フィルタ１７２は、キャピラリ位置測定用光源１７１の発光波長帯域のうちの所定の波長領域を遮断する。こうしてキャピラリ位置測定用フィルタ１７２を透過した光は、キャピラリ１０２の表面を反射し、第１カメラレンズ１３２に到達する。 With reference to FIG. 13, another example of the capillary position measuring light source will be described. In this example, the capillary position measuring light source 171 has a certain emission wavelength band. Examples of such a light source include a light emitting diode (LED) and a Ne lamp. As shown in FIG. 13A, a capillary position measuring filter 172 is provided on the output side of the capillary position measuring light source 171. The capillary position measurement filter 172 blocks a predetermined wavelength region in the emission wavelength band of the capillary position measurement light source 171. The light transmitted through the capillary position measurement filter 172 thus reflects the surface of the capillary 102 and reaches the first camera lens 132.

図１３Ｂは、キャピラリ位置測定用光源１７１の発光波長帯域を示し、図１３Ｃは、キャピラリ位置測定用フィルタ１７２の透過特性を示す。このフィルタ特性は、温度に依存しないため、温度変化による光源の波長シフトの影響を受けない。 13B shows the emission wavelength band of the capillary position measuring light source 171, and FIG. 13C shows the transmission characteristics of the capillary position measuring filter 172. Since this filter characteristic does not depend on temperature, it is not affected by the wavelength shift of the light source due to temperature change.

キャピラリ位置測定用フィルタ１７２は所定の狭い波長領域を通過させるバンドパスフィルタであってよいが、所定の波長より大きい波長領域を通過させるロングパスフィルタであってもよい。バンドパスフィルタを用いる場合、図７に示したような狭い波長領域のスペクトルが得られるから、このスペクトルの位置よりキャピラリ１０２の位置を特定することができる。ロングパスフィルタを用いる場合、所定の波長位置より大きい波長領域のスペクトルが得られるから、このスペクトルの開始位置よりキャピラリ１０２の位置を特定することができる。 The capillary position measurement filter 172 may be a band-pass filter that passes a predetermined narrow wavelength region, but may be a long-pass filter that passes a wavelength region larger than a predetermined wavelength. When the band-pass filter is used, a spectrum in a narrow wavelength region as shown in FIG. 7 is obtained. Therefore, the position of the capillary 102 can be specified from the position of this spectrum. When a long pass filter is used, a spectrum in a wavelength region larger than a predetermined wavelength position is obtained, so that the position of the capillary 102 can be specified from the start position of this spectrum.

図１４を参照して、本発明のキャピラリ電気泳動装置の他の例を説明する。本例のキャピラリ電気泳動装置では、キャピラリ１０２の発光部位からの蛍光は、キャピラリの末端から放出される。検出光学ユニット１３１は、キャピラリの末端からの蛍光を検出することができるように、キャピラリの軸線方向に沿って配置されている。 With reference to FIG. 14, another example of the capillary electrophoresis apparatus of the present invention will be described. In the capillary electrophoresis apparatus of this example, the fluorescence from the light emitting portion of the capillary 102 is emitted from the end of the capillary. The detection optical unit 131 is arranged along the axial direction of the capillary so that fluorescence from the end of the capillary can be detected.

光源１２３からの励起光１２２は、キャピラリ１０２を照射し、検出光は、キャピラリの末端から放出される。この検出光は、泳動媒体充填ユニット１５０の検出窓１８１を経由して検出光学ユニット１３１に達する。 The excitation light 122 from the light source 123 irradiates the capillary 102, and the detection light is emitted from the end of the capillary. This detection light reaches the detection optical unit 131 via the detection window 181 of the electrophoresis medium filling unit 150.

本例の検出光学ユニット１３１は、第１カメラレンズ１３２、検出フィルタ１３３、プリズム１８２、第２カメラレンズ１３５、及び、２次元検出器１３６を含む。本例では、波長分散素子として、回折格子の代わりにプリズム１８２を用いる。キャピラリ１０２の末端から放出された蛍光は、第１カメラレンズ１３２によって、平行光束になる。この平行光束は、検出フィルタ１３３に導かれる。検出フィルタ１３３は、分析に使用する波長領域の蛍光のみ透過する。検出フィルタ１３３を透過した蛍光は、プリズム１８２によって波長分散され、第２カメラレンズ１３５によって、２次元検出器１３６上に結像される。２次元検出器１３６は、例えば、ＣＣＤカメラである。２次元検出器１３６からの画像信号は、コンピュータによって処理され、試料の分析がなされる。 The detection optical unit 131 of this example includes a first camera lens 132, a detection filter 133, a prism 182, a second camera lens 135, and a two-dimensional detector 136. In this example, a prism 182 is used as the wavelength dispersion element instead of the diffraction grating. The fluorescence emitted from the end of the capillary 102 becomes a parallel light beam by the first camera lens 132. This parallel light beam is guided to the detection filter 133. The detection filter 133 transmits only fluorescence in the wavelength region used for analysis. The fluorescence transmitted through the detection filter 133 is wavelength-dispersed by the prism 182 and imaged on the two-dimensional detector 136 by the second camera lens 135. The two-dimensional detector 136 is a CCD camera, for example. The image signal from the two-dimensional detector 136 is processed by a computer and the sample is analyzed.

本例のキャピラリ電気泳動装置においても、キャピラリの交換によってキャピラリの位置がずれることがある。しかしながら、上述の方法によって、２次元検出器のデータ取得領域を設定し、又は、波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルを補正することにより、キャピラリの位置ずれに起因した擬似信号の発生を防止することができる。 Also in the capillary electrophoresis apparatus of this example, the position of the capillary may be displaced by the replacement of the capillary. However, by setting the data acquisition area of the two-dimensional detector or correcting the reference fluorescence spectrum acquired as the wavelength calibration data by the above-described method, generation of a pseudo signal due to the displacement of the capillary is prevented. be able to.

以上、本発明の例を説明したが、本発明はこれに限定されるものではなく、特許請求の範囲に記載された発明の範囲にて様々な変更が可能であることは当業者に理解される。各実施例を適宜組み合わせることも、本発明の範囲である。 As mentioned above, although the example of this invention was demonstrated, this invention is not limited to this, It is understood by those skilled in the art that various changes are possible in the range of the invention described in the claim. The It is also within the scope of the present invention to appropriately combine the embodiments.

キャピラリ電気泳動装置の概略を示す斜視図である。It is a perspective view which shows the outline of a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置のキャピラリの照射部の概略を示す斜視図である。It is a perspective view which shows the outline of the irradiation part of the capillary of a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置の検出光学ユニットの概略を示す斜視図である。It is a perspective view which shows the outline of the detection optical unit of a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置のキャピラリ位置測定用光源の波長特性を示す図である。It is a figure which shows the wavelength characteristic of the light source for capillary position measurement of a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置による波長校正データとして取得した基準蛍光スペクトルを示す図である。It is a figure which shows the reference | standard fluorescence spectrum acquired as wavelength calibration data by a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置において、キャピラリの位置ずれに起因した蛍光スペクトルのシフトを説明するための説明図である。In a capillary electrophoresis apparatus, it is explanatory drawing for demonstrating the shift of the fluorescence spectrum resulting from the position shift of a capillary. キャピラリ電気泳動装置において、キャピラリの位置を検出するための画像の例を示す。An example of an image for detecting the position of a capillary in a capillary electrophoresis apparatus is shown. キャピラリ電気泳動装置において、２次元検出器による画像にてデータ取得領域を設定する方法を示す図である。It is a figure which shows the method to set a data acquisition area | region with the image by a two-dimensional detector in a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第１の例を説明するための説明図である。It is explanatory drawing for demonstrating the 1st example of the analysis method using a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第１の例の操作の詳細手順を示す図である。It is a figure which shows the detailed procedure of operation of the 1st example of the analysis method using a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第２の例を説明するための説明図である。It is explanatory drawing for demonstrating the 2nd example of the analysis method using a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置を使用した分析方法の第２の例の操作の詳細手順を示すための説明図である。It is explanatory drawing for showing the detailed procedure of operation of the 2nd example of the analysis method using a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置のキャピラリ位置測定用光源の他の例を示す図である。It is a figure which shows the other example of the light source for capillary position measurement of a capillary electrophoresis apparatus. キャピラリ電気泳動装置の他の例の概略を示す斜視図である。It is a perspective view which shows the outline of the other example of a capillary electrophoresis apparatus.

符号の説明Explanation of symbols

１０１キャピラリアレイ
１０２キャピラリ
１０３照射部
１０４試料導入部
１０５試料導入端
１０６中空電極
１０７ガラス基板
１０８キャピラリヘッド
１１０電源ユニット
１１１高圧電源
１１２陽極バッファ容器
１１３陽極電極
１１４電流計
１２１照射光学ユニット
１２２励起光
１２３光源
１２４集光レンズ
１２５照明用フィルタ
１２６集光レンズ
１２７キャピラリ位置測定用光源
１３１検出光学ユニット
１３２第１カメラレンズ
１３３検出フィルタ
１３４回折格子
１３５第２カメラレンズ
１３６２次元検出器
１４１オートサンプラユニット
１４３サンプル容器
１４４バッファ容器
１４５洗浄容器
１４６廃液容器
１５０泳動媒体充填ユニット
１５１ポリマ充填ブロック
１５２シリンジ
１５３チューブ
１５４電磁弁
１５５ポリマ流路
１６１温度制御ユニット
１７１キャピラリ位置測定用光源
１７２キャピラリ位置測定用フィルタ
１８１検出窓
１８２プリズム DESCRIPTION OF SYMBOLS 101 Capillary array 102 Capillary 103 Irradiation part 104 Sample introduction part 105 Sample introduction end 106 Hollow electrode 107 Glass substrate 108 Capillary head 110 Power supply unit 111 High voltage power supply 112 Anode buffer container 113 Anode electrode 114 Ammeter 121 Irradiation optical unit 122 Excitation light 123 Light source 124 Condensing lens 125 Illumination filter 126 Condensing lens 127 Capillary position measuring light source 131 Detection optical unit 132 First camera lens 133 Detection filter 134 Diffraction grating 135 Second camera lens 136 Two-dimensional detector 141 Autosampler unit 143 Sample container 144 Buffer container 145 Cleaning container 146 Waste liquid container 150 Electrophoresis medium filling unit 151 Polymer filling block 152 Syringe 153 Tube 154 Solenoid valve 15 Polymer flow path 161 temperature control unit 171 capillary position measuring light source 172 capillary position measuring filter 181 detection window 182 prisms

Claims

交換可能なキャピラリと；
該キャピラリに励起光を照射する照射光学系と；
上記キャピラリからの蛍光を分光させる波長分散素子と、該波長分散素子から得られる蛍光スペクトル像を検出する２次元検出器と、を有する検出光学系と；
を有するキャピラリ電気泳動装置において、
さらに、キャピラリ位置測定用光源を設け、上記キャピラリ位置測定用光源からの光を上記キャピラリに照射し、上記２次元検出器によって上記キャピラリの像を検出することによって、上記キャピラリを交換したとき上記キャピラリの軸方向の基準位置に対する上記キャピラリの位置の偏差を検出し、
上記偏差に基づいて上記２次元検出器におけるデータ取得領域を設定し、該データ取得領域において試料の蛍光スペクトル像を検出することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。 With replaceable capillaries;
An irradiation optical system for irradiating the capillary with excitation light;
A detection optical system comprising: a wavelength dispersion element that separates fluorescence from the capillary; and a two-dimensional detector that detects a fluorescence spectrum image obtained from the wavelength dispersion element;
In a capillary electrophoresis apparatus having
Furthermore, when the capillary is replaced by providing a light source for capillary position measurement, irradiating the capillary with light from the light source for capillary position measurement, and detecting the image of the capillary with the two-dimensional detector, the capillary Detecting the deviation of the capillary position relative to the axial reference position of
A capillary electrophoresis apparatus , wherein a data acquisition region in the two-dimensional detector is set based on the deviation, and a fluorescence spectrum image of a sample is detected in the data acquisition region .

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記データ取得領域はキャピラリ軸方向に沿って並んだ複数のデータ取得領域からなり、各データ取得領域は波長分散方向の範囲とキャピラリ軸方向の範囲によって確定されていることを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。 2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the data acquisition region includes a plurality of data acquisition regions arranged along the capillary axis direction, and each data acquisition region is determined by a range in the wavelength dispersion direction and a range in the capillary axis direction. Capillary electrophoresis apparatus characterized by being made.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリが上記基準位置に対して波長分散方向にずれている場合には、上記データ取得領域は、波長分散方向に上記偏差に相当する距離だけ移動されていることを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。 2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein when the capillary is displaced in the wavelength dispersion direction with respect to the reference position, the data acquisition region is moved by a distance corresponding to the deviation in the wavelength dispersion direction. A capillary electrophoresis apparatus characterized by comprising:

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリが上記基準位置に対して傾斜している場合には、上記データ取得領域は、上記傾斜に相当する角度にて傾斜していることを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein when the capillary is inclined with respect to the reference position, the data acquisition region is inclined at an angle corresponding to the inclination. Capillary electrophoresis device.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記２次元検出器による上記キャピラリの像の位置に上記キャピラリ位置測定用光源の波長が対応するように上記２次元検出器の画像に波長の目盛を設定し、予め与えられた分析波長範囲の長波長端と短波長端を上記波長の目盛によって読み取ることにより、上記分析波長範囲に対応したデータ取得領域を設定することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein a scale of a wavelength is set in the image of the two-dimensional detector so that the wavelength of the light source for capillary position measurement corresponds to the position of the image of the capillary by the two-dimensional detector. And a data acquisition region corresponding to the analysis wavelength range is set by reading a long wavelength end and a short wavelength end of the analysis wavelength range given in advance by the wavelength scale.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリ位置測定用光源は、単一波長光源を含むことを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the capillary position measuring light source includes a single wavelength light source.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリ位置測定用光源は、所定の発光波長帯域を有する光源と該光源からの光のうち所定の波長領域を遮断するフィルタを有することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the capillary position measuring light source includes a light source having a predetermined emission wavelength band and a filter for blocking a predetermined wavelength region of light from the light source. Capillary electrophoresis device.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記照射光学系は上記キャピラリの軸線に沿った方向から又は上記キャピラリの軸線に対して所定の角度傾斜した方向から上記キャピラリに励起光を照射することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。 2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the irradiation optical system irradiates the capillary with excitation light from a direction along an axis of the capillary or from a direction inclined at a predetermined angle with respect to the axis of the capillary. A capillary electrophoresis device characterized.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記照射光学系は励起光源として発光ダイオードを有することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the irradiation optical system includes a light emitting diode as an excitation light source.

請求項１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記基準位置は出荷時に実施される波長校正データの取得時における上記キャピラリの位置であることを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。2. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 1, wherein the reference position is a position of the capillary when wavelength calibration data is acquired at the time of shipment.

交換可能なキャピラリと；With replaceable capillaries;
該キャピラリに励起光を照射する照射光学系と；An irradiation optical system for irradiating the capillary with excitation light;
上記キャピラリからの蛍光を分光させる波長分散素子と、該波長分散素子から得られる蛍光スペクトル像を検出する２次元検出器と、を有する検出光学系と；A detection optical system comprising: a wavelength dispersion element that separates fluorescence from the capillary; and a two-dimensional detector that detects a fluorescence spectrum image obtained from the wavelength dispersion element;
を有するキャピラリ電気泳動装置において、In a capillary electrophoresis apparatus having
さらに、キャピラリ位置測定用光源を設け、上記キャピラリ位置測定用光源からの光を上記キャピラリに照射し、上記２次元検出器によって上記キャピラリの像を検出することによって、上記キャピラリを交換したとき上記キャピラリの軸方向の基準位置に対する上記キャピラリの位置の偏差を検出し、Furthermore, when the capillary is replaced by providing a light source for capillary position measurement, irradiating the capillary with light from the light source for capillary position measurement, and detecting the image of the capillary with the two-dimensional detector, the capillary Detecting the deviation of the capillary position relative to the axial reference position of
上記偏差に基づいて上記基準位置における蛍光スペクトルの位置を補正することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。A capillary electrophoresis apparatus, wherein the position of the fluorescence spectrum at the reference position is corrected based on the deviation.

請求項１１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリ位置測定用光源は、単一波長光源を含むことを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。12. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 11, wherein the capillary position measuring light source includes a single wavelength light source.

請求項１１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記キャピラリ位置測定用光源は、所定の発光波長帯域を有する光源と該光源からの光のうち所定の波長領域を遮断するフィルタを有することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。12. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 11, wherein the capillary position measuring light source includes a light source having a predetermined emission wavelength band and a filter for blocking a predetermined wavelength region of light from the light source. Capillary electrophoresis device.

請求項１１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記照射光学系は上記キャピラリの軸線に沿った方向から又は上記キャピラリの軸線に対して所定の角度傾斜した方向から上記キャピラリに励起光を照射することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。12. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 11, wherein the irradiation optical system irradiates the capillary with excitation light from a direction along an axis of the capillary or from a direction inclined at a predetermined angle with respect to the axis of the capillary. A capillary electrophoresis device characterized.

請求項１１記載のキャピラリ電気泳動装置において、上記照射光学系は励起光源として発光ダイオードを有することを特徴とするキャピラリ電気泳動装置。12. The capillary electrophoresis apparatus according to claim 11, wherein the irradiation optical system includes a light emitting diode as an excitation light source.

試料をキャピラリ内に電気泳動させ、上記キャピラリに励起光を照射し、上記キャピラリからの蛍光を分光させて蛍光スペクトルを生成し、該蛍光スペクトルを２次元検出器によって検出し、該検出結果に基づいて試料を分析するキャピラリ電気泳動方法において、上記キャピラリを交換したとき、上記キャピラリの位置を検出することと、
上記キャピラリの基準位置に対する上記キャピラリの位置の偏差を測定することと、
上記偏差に基づいて上記２次元検出器におけるデータ取得領域を設定し、該データ取得領域において分析試料の蛍光スペクトル像を検出することと、を含むキャピラリ電気泳動方法。 The sample is electrophoresed in the capillary, the capillary is irradiated with excitation light, the fluorescence from the capillary is dispersed to generate a fluorescence spectrum, the fluorescence spectrum is detected by a two-dimensional detector, and based on the detection result In the capillary electrophoresis method for analyzing a sample, when the capillary is replaced, detecting the position of the capillary;
Measuring the deviation of the capillary position relative to the capillary reference position;
Setting a data acquisition region in the two-dimensional detector based on the deviation, and detecting a fluorescence spectrum image of the analysis sample in the data acquisition region .

試料をキャピラリ内に電気泳動させ、上記キャピラリに励起光を照射し、上記キャピラリからの蛍光を分光させて蛍光スペクトルを生成し、該蛍光スペクトルを２次元検出器によって検出し、該検出結果に基づいて試料を分析するキャピラリ電気泳動方法において、The sample is electrophoresed in the capillary, the capillary is irradiated with excitation light, the fluorescence from the capillary is dispersed to generate a fluorescence spectrum, the fluorescence spectrum is detected by a two-dimensional detector, and based on the detection result In a capillary electrophoresis method for analyzing a sample, 上記キャピラリを交換したとき、上記キャピラリの位置を検出することと、Detecting the position of the capillary when the capillary is replaced;
上記キャピラリの基準位置に対する上記キャピラリの位置の偏差を測定することと、Measuring the deviation of the capillary position relative to the capillary reference position;
上記偏差に基づいて上記基準位置における蛍光スペクトル像の位置を補正することと、を含むキャピラリ電気泳動方法。Correcting the position of the fluorescence spectrum image at the reference position based on the deviation, and a capillary electrophoresis method.