JP4845363B2 - 経口投与組成物及び美白剤 - Google Patents
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24穴プレートにマウス由来B16細胞(JCRB0202)を5×104cells/wellになるように適量の培地とともに接種し、37℃、二酸化炭素濃度5%中にて静置培養した。1日後、培地を吸引除去し、DMSOに溶かしたクリプトキサンチン(EXTRASYNTHESE S. A.社製)、あるいは水に溶かしたL−システイン(和光純薬工業製)、あるいはその両方を、所定の最終濃度になるように添加した培地と交換した。なお、L−システインのみを添加した系にはDMSOを、クリプトキサンチン添加の系と同濃度になるように添加した。3日間上記と同条件で培養後に培地を除去し、PBSにて3回洗浄した後トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞をPBSで遠心洗浄(2000rpm、5分)し、培地を除去した。さらに遠心し上清を除去し細胞ペレットを得た。このペレットに2N NaOHを400μl添加し、よく懸濁した後、超音波処理を30分間行った。このようにして得られたメラニン粗抽出液を96wellマイクロプレートに100μl/well、3well/サンプルで添加し、マイクロプレートリーダーで405nm、690nmにおける吸光度を測定した。メラニン合成阻害率は以下のように算出した。
メラニン合成阻害率(%)={1−(OD405S−OD690S)/(OD405C−OD690C)}×100
OD405C:被験物質無添加時の細胞からの粗抽出液の405nmにおける吸光度
OD690C:被験物質無添加時の細胞からの粗抽出液の690nmにおける吸光度
OD405S:被験物質添加時の細胞からの粗抽出液の405nmにおける吸光度
OD690S:被験物質添加時の細胞からの粗抽出液の690nmにおける吸光度
また、96穴プレートにメラノーマ細胞を5×103cells/wellとなるように接種し、上記と同条件で培養した。培養3日目に450nmと690nmの吸光度を測定した後、CCK−8(同人堂)を10μl添加し軽く振とうし37℃、二酸化炭素濃度5%中にて2時間静置培養した。培養後、450nmと690nmにおける吸光度を再度測定し以下の式により細胞生存率を算出した。
細胞生存率(%)={(OD450t=2h−OD450t=0)−(OD690t=2h−OD690t=0)/(OD450t=2hC−OD450t=0C)−(OD690t=2hC−OD690t=0C)}×100
OD450t=2h:被験物質添加時のCCK添加2時間後の450nmにおける吸光度
OD450t=0:被験物質添加時のCCK添加前の450nmにおける吸光度
OD690t=2h:被験物質添加時のCCK添加2時間後の690nmにおける吸光度
OD690t=0:被験物質添加時のCCK添加前の690nmにおける吸光度
OD450t=2hC:被験物質無添加時のCCK添加2時間後の450nmにおける吸光度
OD450t=0C:被験物質無添加時のCCK添加前の450nmにおける吸光度
OD690t=2hC:被験物質無添加時のCCK添加2時間後の690nmにおける吸光度
OD906t=0C:被験物質無添加時のCCK添加前の690nmにおける吸光度
以上の結果を表1に示す。
β−クリプトキサンチンとして温州みかん抽出物を用いて参考例1と同じ実験を実施した。温州みかん抽出物は以下の方法で調製した。温州みかんパルプの乾燥粉末20gにエタノール200mlを加え、撹拌しながら30分間抽出し、0.45μmのPTFEメンブレンフィルターでろ過した。この濾液のエタノールをエバポレーターで完全に蒸発させ、生成した温州みかん抽出物を10mlのDMSOに溶解した。さらに0.20μmのPTFEメンブレンフィルターで滅菌、除粒子を行い、温州みかん抽出物とした。その他の実験方法は参考例1に従った。以上の結果を表2に示す。
Weiser-Maples系雄性褐色モルモット6週齢を購入し、2週間予備飼育を行った後、背部皮膚全体の色調を判断して、1群5匹に群分けした。検体については、試験期間中下記用量で毎日経口摂取させた。
検体2:酵素処理温州みかんパルプ(β―クリプトキサンチン0.5%含有) 8mg/kg
検体3:L−シスチン 25mg/kg(和光純薬工業製)
検体4:(検体2)+(検体3)
検体5:ビタミンC 25mg/kg(和光純薬工業製)
検体6:リコペン 1mg/kg(和光純薬工業)
試験開始8日目から、紫外線照射を1日1回、8日目、10日目、13日目、15日目、17日目、19日目の計6回照射して色素を沈着させた。照射開始前及び、試験開始20日目に照射部位を色差計(CR−300、ミノルタ製)を用いてL*値(明度)を測定した。以上の結果を表3に示す。
以下の組成(1日量として2錠)で常法により錠剤を製造した。
温州みかん抽出物(β−クリプトキサンチン1mg含有) 20mg
L−システイン 240mg
結晶セルロース 80mg
ショ糖脂肪酸エステル 42mg
ソルビトール 100mg
酸化チタン 18mg
以下の組成(1日量として4錠)で常法により錠剤を製造した。
酵素処理温州みかんパルプ(β−クリプトキサンチン1mg含有) 200mg
シスチン 120mg
コラーゲン 30mg
エピガロカテキンガレート 10mg
結晶セルロース 100mg
ショ糖脂肪酸エステル 15mg
ソルビトール 25mg
Claims (1)
- (a)クリプトキサンチン、および(b)システイン、N−アセチルーL−システイン、L−ホモシステイン、L−システイン酸、L−ホモシステイン酸、L−システインスルフィン酸、S−スルフィノ−L−システイン、シスチン(システインの2量体)又はそれらの塩を含有し、前記(a)と前記(b)の配合比((a):(b))が、質量比として、1:10〜1:7500である経口投与組成物を有効成分とする皮膚の美白剤。
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