JP4845166B2 - ゲルを形成する濃度の性腺刺激ホルモン放出ホルモン拮抗物質 - Google Patents

Description

本発明は、性ホルモン依存性疾患の治療において有用なＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドの投与のための医薬組成物に関する。

視床下部−下垂体−性腺軸における第一メディエイターとしてのＧｎＲＨ（性腺刺激ホルモン放出ホルモン、以前の黄体化ホルモン放出ホルモン、ＬＨＲＨ）の発見と特性付けは、前立腺癌及び性的早熟などの性ホルモン依存性状態の治療のために新たな可能性を切り開いた。第一世代の治療薬はＧｎＲＨスーパーアゴニストであった。これらはＧｎＲＨ受容体を持続的に刺激することによって作用し、経路の脱感作を導いた。しかし、これらの薬剤は「フレア（発赤）」反応を惹起する傾向があり、そのため第二世代のＧｎＲＨ拮抗物質に置き換えられつつある。

治療薬の慢性投与の必要性から問題が生じる。前の世代のスーパーアゴニストと同様に、現在の世代のＧｎＲＨ拮抗物質は経口投与に適さないペプチドである。皮下又は筋肉内注射はそれらの化合物に関して良好に作用するが、毎日の注射は患者群に受け入れられないであろうことから、現在の研究は前記拮抗物質のデポー製剤を開発することを目指している。スーパーアゴニストについてはそのようなデポーテクノロジーが広く確立されている。該ペプチドは、（典型的には）１ヶ月から３ヶ月の期間にわたって生分解性ポリマー基質から放出される。このテクノロジーの拮抗物質への移行は、より多量の薬剤物質を投与する必要があることから複雑になる。結果として、より強力な（従ってデポー剤に含まれるべき薬剤物質の量がより少ない）又はより高い薬剤／ポリマー比と適合性の物理化学特性を有する拮抗物質を開発するために、ならびにより洗練されたデポーテクノロジーの開発に向けて、多大に努力が為されてきた。

米国特許第５，９２５，７３０号（国際特許願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０７４３８号、欧州特許第１００３７７４号に対応する）は、特に、一般式１に従ったＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドを開示している。

これらのペプチドは、ＧｎＲＨ受容体に高い親和性を有し、これまでに記述されているＧｎＲＨ類似体よりもはるかによく水に溶ける。前記の開示の中で、これらの化合物の高い溶解度が、少なくとも一部には、一部のインビボモデルにおける３又は４日間までの長い作用期間の原因であることが示唆された。また、これらの化合物の作用期間が用量相関性であること、すなわち作用期間は投与されるペプチドの量に依存することも示唆された。しかし、これらのペプチドを製剤するための最適条件は論じられなかった。

我々は今や、一般式１に従ったある種のペプチドは皮下注射後ゲルを形成することができること、及びこのゲルは数週間、さらには数ヶ月間にわたって前記ペプチドを放出するデポー剤として作用しうることを発見した。我々はまた、鍵となる変数は投与する物質の量ではなく溶液の濃度であることを見出した。その溶液の濃度は機能性範囲内でなければならない。溶液があまりに希薄であれば、どれだけ多くの薬剤物質を投与してもデポー剤は形成されず、長い作用期間は失われる。

従って、第一の局面では、本発明は、ある種の尿生殖器路の疾患及び他の性ホルモン依存性状態の治療のための医薬組成物に関し、かかる組成物は、皮下又は筋肉内注射によって投与される溶液であり、一定期間（例えば２週間以上）にわたってＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドの持続放出を提供する。この組成物は即時投与用の溶液として提供されうるが、好ましくは、ペプチド（例えば固体として）及び使用の直前に溶液を作製することができるような溶媒成分を含むパーツのキットとして提供される。第二の局面では、本発明は、前記疾患状態の治療におけるそのような組成物の使用を提供する。第三の局面では、本発明は、そのような組成物を個体に投与することによる、前記疾患状態の治療方法を提供する。

本発明は医薬組成物を含む。その組成物は、注射用溶液、好ましくは皮下注射用溶液である。その組成物の第一必須成分は、一般式１に従ったＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドである。

この一般式において略語は下記の意味を有する：
Ａｃ アセチル
ＤＮａｌ Ｄ−β−（２−ナフチル）アラニン
ＤＣｐａ Ｄ−４−クロロフェニルアラニン
ＤＰａｌ Ｄ−β−（３−ピリジル）アラニン
Ｓｅｒ セリン
Ａｐｈ（Ｘ^１） ω−アミノ基が置換基Ｘ^１を有する４−アミノフェニルアラニン
ＤＡｐｈ（Ｘ^２） ω−アミノ基が置換基Ｘ^２を有するＤ−４−アミノフェニルアラニン
Ｌｅｕ ロイシン
Ｌｙｓ（ｉＰｒ）− Ｎ^ω−イソプロピルリシン
Ｐｒｏ プロリン
ＤＡｌａ−ＮＨ_２ Ｄ−アラニンアミド
置換基Ｘ^１及びＸ^２は、ＲがＨ又は低級（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキル基、Ｄ−及びＬ−ヒドロオロチル（Ｄ−及びＬ−Ｈｏｒ）基、及びＤ−及びＬ−２−イミダゾリドン−４−カルボニル（Ｄ−及びＬ−ｉｍｚ）基である、カルバモイル基−ＣＯＮＨＲから独立して選択される。

本発明の好ましい実施形態では、Ｘ^１はＤ−又はＬ−Ｈｏｒである。本発明のもう１つの好ましい実施形態では、Ｘ^２はカルバモイル基である。本発明のより好ましい実施形態では、Ｘ^１はＤ−又はＬ−Ｈｏｒであり、Ｘ^２はカルバモイル基である。本発明の最も好ましい実施形態では、Ｘ^１はＬ−Ｈｏｒであり、Ｘ^２はカルバモイル基−ＣＯＮＨ_２である。

上記の定義に従ったペプチドは塩を形成することができる。特に、それらは塩酸、酢酸及びトリフルオロ酢酸などの酸と共に付加塩を形成することができる。医薬適合性のことを条件として、そのような塩はすべて本発明の開示の範囲内に包含される。酢酸塩及び塩酸塩が特に好ましい。

該組成物の第二必須成分は、水、アルコール（例えばエタノール）、Ｎ−メチルピロリドン又はジメチルスルホキシドなどの溶媒である。本発明の好ましい実施形態では、溶媒は、水、又は水が溶媒混合物の少なくとも９０重量％を構成するような、水とアルコール、Ｎ−メチルピロリドン又はジメチルスルホキシドの混合物である。該組成物は、浸透圧調節剤、例えば塩化ナトリウム及びマンニトール、防腐剤、緩衝剤等のような他の成分を含みうる。本発明の好ましい実施形態では、塩化ナトリウムの濃度は２ｍｇ／ｍｌ以下である。より好ましい実施形態では、塩化ナトリウムは該組成物中に存在せず、溶液の浸透圧を調節するためにマンニトールを使用する。

該組成物はさらに、付加的な製薬活性物質を含みうるが、前記ＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドが唯一のそのような物質であることが好ましい。

本発明による組成物は、密封容器又は予備充填シリンジ中の溶液のような、即時使用の形態で提供されうる。選択的に及び好ましくは、該組成物は、投与前に多少の調製を必要とする形態で提供されうる。例えば、該組成物は、該ペプチドを凍結乾燥粉末として含む密封容器と溶媒又は希釈剤を含む第二容器を含む、パーツのキットとして提供されうる。該ペプチドは凍結乾燥しうる。固体又は液体パーツと共にさらなる成分を含んでもよい。それ故、該キットは、該ペプチドを含む第一容器と等張食塩水を含む第二容器、又は該ペプチドとマンニトールを含む第一容器と無菌水を含む第二容器を含みうる。投与の前に、注射用溶液を作製するために該ペプチド成分を含む容器に溶媒を加える。このキットは、ペプチドを含有する溶液が長期安定性を欠くことから生じる問題を予防しうる。

本発明の組成物の基本特性は、溶液が投与前は安定であるが、投与後すぐに（好ましくは直ちに）ゲルに転換することである。この特性は、ペプチドの濃度の機能である。本発明のために有効である正確な濃度範囲は、ケースに応じて、例えばペプチドや溶媒及び存在するときには第二成分の同一性に従って、及び意図する保存期間に従って、多少変化しうる。所与の場合に達成されるべき結果及びそのための有効な濃度範囲は、ごく簡単な試験と最小限の実験しか必要としない観察によって直接且つ確実に確認しうることは明白である。一般的な指針として、０．３ｍｇ／ｍｌの最小ペプチド濃度は、注射が、満足しうる速度と程度で注射部位においてゲル形成を生じさせるのに十分なはずである。該組成物を調製済溶液として保存するときは、ペプチド濃度は通常、保存中（例えば４週間まで）のゲル形成を防ぐために５ｍｇ／ｍｌ以下であり、投与後すぐにゲルが形成することを保証するために０．３ｍｇ／ｍｌ以上である。しかし、該組成物が混合後直ちに（例えば混合から３０分以内に）投与されるパーツのキットとして提供されるときは、最終溶液中のペプチド濃度はより高くてもよく、例えば１２０ｍｇ／ｍｌの高さでありうる。最小濃度は、注射後ゲルを形成する必要性によって決定されるので、該組成物が提供される方法には依存しない。本発明の好ましい実施形態では、該ペプチドの濃度は８０ｍｇ／ｍｌ以下である。より好ましい実施形態では、該ペプチドの濃度は４０ｍｇ／ｍｌ以下である。本発明のもう１つの好ましい実施形態では、該ペプチドの濃度は１ｍｇ／ｍｌ以上である。もう１つのより好ましい実施形態では、該ペプチドの濃度は５ｍｇ／ｍｌ以上、例えば５ｍｇ／ｍｌから４０ｍｇ／ｍｌである。

さらなる好ましい実施形態では、該ペプチドの濃度は５ｍｇ／ｍｌから８０ｍｇ／ｍｌである。この範囲内（例えば２０ｍｇ／ｍｌ又は２５ｍｇ／ｍｌ）の濃度のペプチドは、投与後、少なくとも２週間、好ましくは３ヶ月の期間にわたって該ペプチドを放出するゲルを形成するために使用しうる。

本発明による組成物は、数日間、数週間、またさらには数ヶ月間にわたってＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドを全身循環中に放出する。従って、ＧｎＲＨ受容体の長期的な遮断を生じさせ、ＬＨ及びＦＳＨの放出の十分な抑制をもたらす。これが、今度は、性腺からの性ステロイドホルモンの放出の抑制を含む、性腺機能の抑制を生じさせる。それ故本発明による組成物は、性ステロイドホルモンによるか若しくは直接ＬＨ又はＦＳＨによる組織の刺激に関わる疾患の治療において有用である。そのような疾患は、良性前立腺過形成、前立腺癌、エストロゲン依存性乳癌、子宮内膜症及び性的早熟を包含する。第二の局面では、それ故、本発明は、そのような治療を必要とする個体に上述した組成物の治療上有効な量を投与することによってこれらの疾患を治療する方法を含む。該組成物はまた、避妊薬、特に男性用避妊薬としても使用しうる。このために使用するときは、リビドーを維持するためにテストステロンを投与する必要があると考えられる。該組成物のさらなる用途は、体外受精プログラムに関連する卵巣機能の調節及び性犯罪者の治療のための行動修正薬としての使用を包含する。

一般に、主治医は所望の治療結果と病歴及び患者の現在の状態を考慮に入れて用法・用量の詳細を決定するであろう。投与する組成物の容量は一般に、例えば０．３ｍｇから１２００ｍｇのペプチド用量を与える、１ｍｇから１０ｍｌである。投与は、１つの部位に若しくは２又はそれ以上の部位に分けて、皮下又は筋肉内注射によって、好ましくは皮下注射によって行う。治療期間中２週間から３ヶ月間の適切な間隔で投与を反復する。

本発明による治療の方法は、疾患の唯一の治療法として使用しうる。選択的に、主治医は、本発明の方法を、同時に又は連続的に実施する他の治療と組み合わせることを選択しうる。他の治療は、ＧｎＲＨ−ＬＨ／ＦＳＨ−性腺経路とは独立した機序によって作用するものを含む、他の薬剤の投与、及び手術のような非薬剤治療を包含しうる。

さらなる局面では、本発明は、上述した医薬組成物の製造のための成分としての、ＧｎＲＨ拮抗物質ペプチドについての用途を提供する。

本発明を下記の非制限的実施例においてさらに説明する。

（実施例）

ペプチドの製造
本発明の組成物において使用するペプチドは、米国特許第５，９２５，７３０号に述べられている方法に従って製造することができる。特に、ペプチドＡｃ−ＤＮａｌ−ＤＣｐａ−ＤＰａｌ−Ｓｅｒ−Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＤＡｐｈ（ＣＯＮＨ_２）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−ＤＡｌａ−ＮＨ_２（「ペプチド１」）を前記米国特許の実施例１の方法に従って製造し、その酢酸塩として単離した。

水溶液の安定性
ペプチド１を様々な濃度で水に溶解し、生じた溶液を長期間にわたって室温で放置した。肉眼検査によってゲル形成を判定した。その所見を表１に要約する。

インビボでゲルを形成するために必要な最小濃度
ペプチド１を様々な濃度で５％マンニトールに溶解し、ラットに皮下注射した。動物を２４時間後に犠牲剖検し、注射部位を切開して検査した。ゲルの沈着物が認められたときは、それらを切除して計量し、ゲル形成の完全性を評価した。０．３ｍｇ／ｍｌ超えるペプチド濃度に関して有意のゲル形成を認めた。

インビボでの製剤の効力
ペプチド１を５％マンニトールに溶解する（２５ｍｇ／ｍｌ）。３匹の卵巣摘出アカゲザルを皮下注射によってこの溶液（８０μｇ／ｋｇ）で処置する。その後１０１日間、血清中ＬＨレベルを測定する。その結果を表２に要約する。

本発明による組成物
５Ａ−注射用溶液
ペプチドＡｃ−ＤＮａｌ−ＤＣｐａ−ＤＰａｌ−Ｓｅｒ−Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＤＡｐｈ（ＣＯＮＨ_２）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−ＤＡｌａ−ＮＨ_２酢酸塩（ペプチド１、実施例１参照）５１．８４ｇ及びマンニトール５００ｇを無菌水１０リットルに溶解して溶液を調製し、５％マンニトール水溶液中ペプチド５ｍｇ／ｍｌ（遊離塩基として算定）の最終濃度を得る。その溶液を０．２ミクロンフィルターでろ過し、５０００のガラス製バイアルに分配して、各々２ｍｌの、前記溶液の５０００の個別用量を作製する。

５Ｂ−２成分キット
ペプチドＡｃ−ＤＮａｌ−ＤＣｐａ−ＤＰａｌ−Ｓｅｒ−Ａｐｈ（Ｌ−Ｈｏｒ）−ＤＡｐｈ（ＣＯＮＨ_２）−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ（ｉＰｒ）−Ｐｒｏ−ＤＡｌａ−ＮＨ_２（ペプチド１、実施例１参照）４１４．７ｇ及びマンニトール２５０ｇを無菌水１０リットルに溶解して溶液を調製する。その溶液を０．２ミクロンフィルターでろ過し、５０００のガラス製バイアルに分配して、その後凍結乾燥する。

マンニトール２５０ｇを無菌水１０リットルに溶解して第二溶液を調製する。この溶液を０．２ミクロンフィルターでろ過し、５０００のガラス製バイアルに分配する。次に、投与前に凍結乾燥物をマンニトール溶液に溶解したとき５％マンニトール水溶液中ペプチド４０ｍｇ／ｍｌ溶液の２ｍｌ用量を生じるように、凍結乾燥物１バイアルとマンニトール溶液１バイアルでキットを作成する。

実施例２に示すデータは、それ以上であればペプチドがあまりに急速にゲルを形成して臨床状況では好都合に投与することができない、最大濃度を確立している。実施例３は、それ以下であれば投与後ペプチドがゲルを形成せず、そのため所望の長い作用期間を生じない、最小濃度を確立している。実施例４は、本発明による組成物が動物モデルにおいてＬＨ及びテストステロンの放出を遮断する上で有効であることを明らかにしている。そのような結果は、ヒトステロイド依存性疾病における臨床効果の指標として広く受け入れられている。それ故、それらは、実施例５に示すもののような、しかしそれらに限定されない、本発明の組成物の臨床的有用性を例示する。

ビーグル犬への皮下又は筋肉内注射後のペプチド１の薬物動態の分析は、臨床状況において高い初期濃度が必要である場合は、皮下ではなく筋肉内経路で用量を投与することによって達成しうることを示唆する。長期的放出プロフィールを得ることが焦点である場合は、皮下注射が、吸収される総用量のより高い割合（筋肉内投与に比べてほぼ２倍高い）を導くであろう。

配列表

Claims (14)

1. 一般式（１）：
   Ac-DNal-DCpa-DPal-Ser-Aph(L-Hor)-DAph(CONH₂)-Leu-Lys(iPr)-Pro-DAla-NH₂（１）
   で表されるＧｎＲＨ拮抗ペプチド又は医薬適合性のその塩の医薬適合性の溶媒中の溶液の形態の注射用医薬組成物であって、前記ペプチドの溶液中の濃度が、前記ペプチドがゲル形態ではないが注射後ゲルを形成するよう少なくとも２５ｍｇ／ｍｌの濃度であって、前記ゲルが少なくとも２週間にわたって前記ペプチドを放出するデポー剤として働く注射用医薬組成物。
2. 溶液中の前記ペプチドの濃度が１２０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項１に記載の組成物。
3. 溶液中の前記ペプチドの濃度が８０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項１又は２に記載の組成物。
4. 請求項１で定義されたＧｎＲＨ拮抗ペプチド又はその塩を含有する第一コンポーネント及びそれらのための医薬適合性の溶媒を含有する第二コンポーネントを含むパーツの医薬キットであって、第一コンポーネント及び第二コンポーネントは混合され請求項１から３いずれかに記載の注射用医薬組成物を提供する医薬キット。
5. 前記溶液中の前記ペプチドの濃度が１２０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項４に記載のキット。
6. 前記ペプチドの濃度が８０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項５に記載のキット。
7. 前記ペプチドの濃度が４０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
8. 前記溶媒が、水、又は溶媒の少なくとも９０重量％が水であるような水と第二の溶媒の混合物である、請求項１から３及び７のいずれかに記載の組成物。
9. 前記ペプチドがその塩酸塩又は酢酸塩の形態である、請求項１から３、７及び８のいずれかに記載の組成物。
10. 良性前立腺過形成、前立腺癌、エストロゲン依存性乳癌、子宮内膜症又は性的早熟の治療のための、避妊薬としての使用又は体外受精プログラムにおける使用のための、又は性犯罪者の治療のための、請求項１から３及び７から９のいずれかに記載の組成物。
11. 前記ペプチドの濃度が４０ｍｇ／ｍｌ以下である、請求項４から６のいずれかに記載のキット。
12. 前記溶媒が、水、又は溶媒の少なくとも９０重量％が水であるような水と第二の溶媒の混合物である、請求項４から６及び１１のいずれかに記載のキット。
13. 前記ペプチドがその塩酸塩又は酢酸塩の形態である、請求項４から６、１１及び１２いずれかに記載のキット。
14. 良性前立腺過形成、前立腺癌、エストロゲン依存性乳癌、子宮内膜症又は性的早熟の治療のための、避妊薬としての使用又は体外受精プログラムにおける使用のための、又は性犯罪者の治療のための、請求項４から６及び１１から１３のいずれかに記載のキット。