JP4761068B2 - Magnetic particles and probe binding particles - Google Patents

Description

本発明は、生化学用の磁性粒子およびプローブ結合粒子に関する。   The present invention relates to biochemical magnetic particles and probe binding particles.

磁性粒子は、例えば、感染症・癌マーカー・ホルモン等の検査対象物質の検出を行うため、抗原抗体反応を利用した診断薬の反応固相として用いられている。このような診断薬においては、抗体または抗原等の検査用プローブ（一次プローブ）が粒子上に固定化される。サンプル中の検査対象物質は一次プローブを介して粒子上に捕捉された後、第二の検査プローブと反応する。第二の検査プローブ（二次プローブ）は蛍光物質や酵素で標識されており、蛍光や酵素反応によって検出が行われる。   For example, magnetic particles are used as a reaction solid phase of a diagnostic agent using an antigen-antibody reaction in order to detect a substance to be examined such as an infectious disease / cancer marker / hormone. In such a diagnostic agent, an inspection probe (primary probe) such as an antibody or an antigen is immobilized on the particle. The substance to be inspected in the sample is captured on the particle via the primary probe and then reacts with the second inspection probe. The second inspection probe (secondary probe) is labeled with a fluorescent substance or an enzyme, and is detected by fluorescence or an enzyme reaction.

近年、疾病の早期発見等の目的のため、検査の高感度化が求められており、診断薬の感度向上は大きな課題となっている。磁性粒子を用いた診断薬においても、感度向上のため、検出方式が酵素発色を用いる方式から、より高い感度が得られる蛍光や化学発光を用いる方式へと切り替わりつつある。   In recent years, for the purpose of early detection of diseases, etc., it has been required to increase the sensitivity of tests, and improving the sensitivity of diagnostic agents has become a major issue. In diagnostic agents using magnetic particles, the detection method is being switched from a method using enzyme color development to a method using fluorescence or chemiluminescence that can obtain higher sensitivity in order to improve sensitivity.

これらの検出技術の発展により、理論上は一分子の検査対象物質の存在まで検出できるレベルに達しているといわれているが、実際には十分な感度が得られていない。その原因としては、粒子表面への二次プローブや夾雑物の非特異的な吸着が挙げられる。例えば、理論上一分子の検査対象物質を検出可能な検査技術であっても、数分子の二次プローブが粒子表面に非特異的に吸着すると、一分子検出は不可能である。このようなことから、粒子表面への検査に使用される物質に対して非特異的な吸着の抑制が強く求められている。   With the development of these detection techniques, it is theoretically said that it has reached a level at which even the presence of a single molecule of a test substance can be detected, but in reality, sufficient sensitivity has not been obtained. The cause is nonspecific adsorption of secondary probes and impurities on the particle surface. For example, even with an inspection technique that can theoretically detect a single molecule of a test target substance, single molecule detection is impossible when several molecules of secondary probes are adsorbed nonspecifically on the particle surface. For these reasons, there is a strong demand for suppression of non-specific adsorption with respect to substances used for inspection on the particle surface.

このような非特異吸着の抑制方法として、ブロッキングと言われる方法が行われてきた。ブロッキングは、一次プローブを粒子上に固定化した後に、二次プローブや夾雑物等の吸着の少ないアルブミンやスキムミルク等のブロッキング剤で粒子表面を被覆する方法である。しかし、ブロッキング剤の被覆効果が十分得られない場合があり、また、生体物質であるブロッキング剤の品質安定性が低い場合がある。一方、ブロッキングが十分に行われた場合でも、ブロッキング剤の変質等によってその作用が経時的に変化して非特異吸着が発生する場合があり、十分な非特異吸着の抑制効果は得られていなかった。   As a method for suppressing such nonspecific adsorption, a method called blocking has been performed. Blocking is a method in which the surface of the particle is coated with a blocking agent such as albumin or skim milk, which is less adsorbed by the secondary probe or impurities, after the primary probe is immobilized on the particle. However, the covering effect of the blocking agent may not be sufficiently obtained, and the quality stability of the blocking agent which is a biological material may be low. On the other hand, even when blocking is sufficiently performed, nonspecific adsorption may occur due to changes in the action over time due to alteration of the blocking agent, etc., and sufficient nonspecific adsorption suppression effect has not been obtained It was.

非特異吸着の問題を解決するための方法として、９６ウェルプレートに代表される免疫測定用基材の表面に親水性ポリマーを導入する方法が提案されている（特許文献１〜３）。しかし、このような平面を利用した免疫測定用基材では、一次プローブを固定化する面積が限られること、ならびに、一次プローブと検査対象物質との反応は固液反応であるため、抗原抗体反応の効率が悪く、検査時間が長くなること等の欠点があった。   As a method for solving the problem of non-specific adsorption, a method of introducing a hydrophilic polymer to the surface of an immunoassay substrate typified by a 96-well plate has been proposed (Patent Documents 1 to 3). However, in the immunoassay substrate using such a flat surface, the area for immobilizing the primary probe is limited, and the reaction between the primary probe and the test substance is a solid-liquid reaction. There are disadvantages such as poor efficiency and long inspection time.

さらに、非特異吸着を少なくするための対応策として、スチレン−グリシジルメタクリレート共重合体等からなる有機ポリマー粒子にスペーサを介して生理活性物質を結合したミクロスフィア（特許文献４，５，６）や、粒子表面に親水性のスペーサを導入した有機ポリマー粒子（特許文献７，８）等が提案されている。しかしながら、これらはいずれも、非特異吸着の低減効果が充分ではなく、また、免疫検査用としては感度が不十分であった。   Furthermore, as countermeasures for reducing non-specific adsorption, microspheres (Patent Documents 4, 5, and 6) in which a physiologically active substance is bound to organic polymer particles made of a styrene-glycidyl methacrylate copolymer or the like via a spacer, Organic polymer particles (Patent Documents 7 and 8) in which hydrophilic spacers are introduced on the particle surface have been proposed. However, none of these has a sufficient effect of reducing non-specific adsorption, and the sensitivity is insufficient for immunoassay.

本発明者らは、親水性モノマーとして、ヒドロキシアルキル（メタ）アクリレート、アルコキシアルキル（メタ）アクリレート、ポリオキシアルキレン（Ｃ２−Ｃ４）基含有（メタ）アクリレート、エポキシ基含有（メタ）アクリレート、ホスホリルコリン類似基含有単量体等を粒子表面に共重合させた、非特異吸着の少ない免疫検査用磁性粒子を提案しているが（特許文献９）、さらなる低ノイズの発現が望まれる。
特開平１１−１７４０５７号公報 特開２０００−３０４７４９号公報 特開２００１−２７２４０６号公報 特開平１０−１９５０９９号公報 特開２０００−３００２８３号公報 国際公開第０４／０２５２９７号パンフレット 特開２００４−３３１９５３号公報 国際公開第０４／０４０３０５号パンフレット 特開２００５−６９９２６号公報 As hydrophilic monomers, the present inventors have hydroxyalkyl (meth) acrylate, alkoxyalkyl (meth) acrylate, polyoxyalkylene (C2-C4) group-containing (meth) acrylate, epoxy group-containing (meth) acrylate, and phosphorylcholine analog. A magnetic particle for immunoassay with little non-specific adsorption obtained by copolymerizing a group-containing monomer or the like on the particle surface has been proposed (Patent Document 9), but further low noise expression is desired.
Japanese Patent Laid-Open No. 11-174057 JP 2000-304749 A JP 2001-272406 A Japanese Patent Laid-Open No. 10-195099 JP 2000-300823 A International Publication No. 04/025297 Pamphlet JP 2004-331953 A International Publication No. 04/040305 Pamphlet JP 2005-69926 A

本発明の目的は、抗体または抗原等のタンパク質や核酸等の検査用プローブ（一次プローブ）の結合が容易で、タンパク質や核酸等の非特異吸着が少ないゆえに低ノイズを発現できる磁性粒子、ならびに前記磁性粒子にプローブが結合されたプローブ結合粒子を提供することである。   An object of the present invention is to easily bind a test probe (primary probe) such as a protein or nucleic acid such as an antibody or an antigen, and to reduce the non-specific adsorption of a protein or nucleic acid. Providing probe-bound particles in which probes are bound to magnetic particles.

上記目的を達成するため、本発明者らは鋭意研究を重ね、特定の水との相互作用を有するポリマーを少なくとも表面に有する磁性粒子が、タンパク質や核酸等の非特異吸着が極めて少ないこと、ならびに、この磁性粒子を用いることにより、生化学・医薬品分野で特出する低ノイズを発現するプローブ結合粒子が得られることを見出し、本発明を完成させた。本発明によれば、以下の態様の磁性粒子およびプローブ結合粒子を提供することができる。   In order to achieve the above object, the present inventors have conducted intensive research, and that magnetic particles having at least a polymer having an interaction with specific water on the surface thereof have very little nonspecific adsorption of proteins, nucleic acids, etc., and The present inventors have found that by using these magnetic particles, probe-bound particles that express low noise, which are outstanding in the biochemical / pharmaceutical field, can be obtained, and the present invention has been completed. According to the present invention, it is possible to provide magnetic particles and probe binding particles of the following modes.

本発明の一態様に係る磁性粒子は、
自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有する。 The magnetic particles according to one aspect of the present invention are:
A polymer having intermediate water in the presence of free water is present at least on the surface, and the polymer has a functional group that can be used for chemical bonding with the probe.

上記磁性粒子において、前記ポリマーは、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、およびトリ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレートから選ばれる少なくとも１種のモノマーを含むモノマー部を重合して得ることができる。   In the magnetic particles, the polymer is methoxyethyl acrylate, tetrahydrofurfuryl acrylate, di (ethylene glycol) methyl ether acrylate, di (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, di (ethylene glycol) ethyl ether acrylate, di (ethylene glycol). Including at least one monomer selected from ethyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether acrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) ethyl ether acrylate, and tri (ethylene glycol) ethyl ether methacrylate It can be obtained by polymerizing the monomer part.

上記磁性粒子において、核粒子と、該核粒子の表面に設けられた超常磁性微粒子を含む磁性体層とを含む母粒子をさらに含み、前記ポリマーは前記磁性体層を被覆することができる。   The magnetic particle may further include a mother particle including a core particle including a core particle and a superparamagnetic fine particle provided on a surface of the core particle, and the polymer may cover the magnetic layer.

本発明の一態様に係るプローブ結合粒子は、上記磁性粒子と、該磁性粒子に結合するプローブとを含む。   A probe-coupled particle according to one embodiment of the present invention includes the magnetic particle and a probe that binds to the magnetic particle.

上記磁性粒子は、自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有することにより、タンパク質や核酸等の非特異吸着が極めて少ない。また、上記磁性粒子にプローブを結合させることにより、生化学・医薬品分野で特出する低ノイズを発現するプローブ結合粒子を得ることができる。   The magnetic particles have at least a polymer having intermediate water in the presence of free water on the surface, and the polymer has a functional group that can be used for chemical bonding with a probe, so that non-specific proteins and nucleic acids can be used. Very little adsorption. Further, by binding a probe to the magnetic particle, it is possible to obtain a probe-binding particle that expresses low noise that is outstanding in the biochemical / pharmaceutical field.

以下、本発明の一実施形態に係る磁性粒子およびプローブ結合粒子について説明する。   Hereinafter, magnetic particles and probe binding particles according to an embodiment of the present invention will be described.

１．磁性粒子およびプローブ結合粒子
１．１．磁性粒子
本発明の一実施形態に係る磁性粒子は、少なくともその表面が自由水共存下で中間水を有するポリマーで形成されている。 1. Magnetic particles and probe binding particles 1.1. Magnetic Particle The magnetic particle according to an embodiment of the present invention is formed of a polymer having at least a surface having intermediate water in the presence of free water.

本発明において、「中間水を有するポリマー」とは、示差走査熱量計（ＤＳＣ）による示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で−１０℃未満に水の結晶化による発熱ピークが観測されるポリマーをいう。すなわち、「中間水」とは、示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で、−１０℃未満で結晶化による発熱ピークとして観測される水をいう。ここで、「昇温過程」とは、示差走査熱量分析において、磁性粒子を−１００℃以下まで冷却したのちの昇温過程をいう。また、「自由水」とは、示差走査熱量分析によって得られるＤＳＣ曲線において、昇温過程で０℃付近の融点（吸熱ピーク）として観測される水をいう。   In the present invention, the “polymer having intermediate water” refers to a DSC curve obtained by differential scanning calorimetry using a differential scanning calorimeter (DSC), and has an exothermic peak due to crystallization of water below −10 ° C. during the temperature rising process. Refers to the observed polymer. That is, “intermediate water” refers to water that is observed as an exothermic peak due to crystallization at a temperature lower than −10 ° C. in the DSC curve obtained by differential scanning calorimetry. Here, the “temperature raising process” refers to a temperature raising process after cooling the magnetic particles to −100 ° C. or lower in differential scanning calorimetry. Further, “free water” refers to water observed as a melting point (endothermic peak) near 0 ° C. in the temperature rising process in a DSC curve obtained by differential scanning calorimetry.

本発明の一実施形態に係る磁性粒子によれば、自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有することにより、検体中に含まれる蛋白質などの表面に存在する水和水を破壊することを防ぎ、その結果、蛋白質などの変性を防ぐことができる。これにより、非特異吸着を少なくすることができる。   According to the magnetic particle according to one embodiment of the present invention, at least the surface has a polymer having intermediate water in the presence of free water, thereby destroying hydrated water present on the surface of a protein or the like contained in the specimen. And as a result, denaturation of proteins and the like can be prevented. Thereby, non-specific adsorption can be reduced.

このような自由水共存下で中間水を有するポリマー（以下、「中間水を有するポリマー」ともいう。）としては、好ましくは、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、トリ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレートなどの弱親水性（メタ）アクリレート類を含むモノマー部を重合して得られるポリマーであり、さらに好ましくは、メトキシエチルアクリレートおよび／またはテトラヒドロフルフリルアクリレートを含むモノマー部を重合して得られるポリマーである。モノマー部は、上記に例示した弱親水性（メタ）アクリレート類を少なくとも１種含むことができる。   Such a polymer having intermediate water in the presence of free water (hereinafter also referred to as “polymer having intermediate water”) is preferably methoxyethyl acrylate, tetrahydrofurfuryl acrylate, di (ethylene glycol) methyl ether acrylate. , Di (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, di (ethylene glycol) ethyl ether acrylate, di (ethylene glycol) ethyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether acrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) ) Polymerize monomer parts containing weakly hydrophilic (meth) acrylates such as ethyl ether acrylate and tri (ethylene glycol) ethyl ether methacrylate A polymer obtained Te, more preferably a polymer obtained by polymerizing a monomer part containing methoxyethyl acrylate and / or tetrahydrofurfuryl acrylate. The monomer portion can contain at least one weakly hydrophilic (meth) acrylate exemplified above.

中間水を有するポリマーは、プローブ（検査用プローブ）との化学結合に使用可能な官能基を有する。このような官能基としては、例えば、カルボキシル基、アミノ基、エポキシ基、トシル基、活性エステル基、ヒドラジノ基、およびケト基・アルデヒド基に基づくカルボニル基から選ばれる少なくとも１種の官能基であることが好ましい。   The polymer having intermediate water has a functional group that can be used for chemical bonding with a probe (test probe). Examples of such a functional group include at least one functional group selected from a carboxyl group based on a carboxyl group, an amino group, an epoxy group, a tosyl group, an active ester group, a hydrazino group, and a keto group / aldehyde group. It is preferable.

本実施形態に係る磁性粒子において、基材となる磁性粒子には特に制限は無く、例えば、特開昭６１−９３６０３号公報や特開平１０−２７０２３３号公報、特開２００４−２０５４８１号公報等に記載された方法により製造される磁性粒子が利用可能であるが、本実施形態に係る磁性粒子は好ましくは、核粒子と、該核粒子の表面に設けられた超常磁性微粒子を含む磁性体層とを含む母粒子をさらに含み、中間水を有するポリマーが磁性体層を被覆することが好ましい。   In the magnetic particles according to the present embodiment, there are no particular limitations on the magnetic particles serving as a base material. For example, JP-A 61-93603, JP-A 10-270233, JP-A 2004-205481 and the like Although magnetic particles produced by the described method can be used, the magnetic particles according to this embodiment are preferably core particles and a magnetic layer containing superparamagnetic fine particles provided on the surfaces of the core particles. It is preferable that a polymer having intermediate water and further having intermediate water covers the magnetic layer.

磁性粒子の表面に、中間水を有するポリマー、および、プローブとの化学結合に使用可能な官能基を導入する方法としては、例えば、（１）磁性粒子の存在下、特定のモノマーを含むモノマー部を液体中で重合する方法、（２）磁性粒子の存在下、特定のモノマーを含むモノマー部を液体中で重合したのち、さらにその表面を化学修飾する方法等を挙げることができる。   Examples of a method for introducing a polymer having intermediate water and a functional group that can be used for chemical bonding with a probe onto the surface of magnetic particles include (1) a monomer portion containing a specific monomer in the presence of magnetic particles. And (2) a method of polymerizing a monomer portion containing a specific monomer in the liquid in the presence of magnetic particles and then chemically modifying the surface thereof.

（１）の方法としては、例えば、磁性粒子の存在下で、主原料としての上記弱親水性アクリレート類、上記官能基を有する共重合性モノマー、および必要に応じて他の共重合性モノマーを含むモノマー部、ならびに、副原料である重合開始剤、界面活性剤、電解質、架橋剤、分子量調節剤などを必要に応じて添加し、液体中、好ましくは水中で重合を行う方法を挙げることができる。   As the method of (1), for example, in the presence of magnetic particles, the weakly hydrophilic acrylates as the main raw material, the copolymerizable monomer having the functional group, and other copolymerizable monomers as necessary. Examples include a monomer part, and a method of performing polymerization in a liquid, preferably in water, by adding a polymerization initiator, a surfactant, an electrolyte, a crosslinking agent, a molecular weight regulator, and the like, which are auxiliary materials, as necessary. it can.

弱親水性アクリレート類の使用量は、モノマー部に含まれる全モノマー１００重量部中、好ましくは５０重量部以上、さらに好ましくは６０重量部以上、最も好ましくは７０重量部以上である。   The amount of the weakly hydrophilic acrylate used is preferably 50 parts by weight or more, more preferably 60 parts by weight or more, and most preferably 70 parts by weight or more, in 100 parts by weight of the total monomers contained in the monomer part.

官能基を有する共重合性モノマーとしては、例えば、アクリル酸、メタクリル酸、イタコン酸、無類マレイン酸、クロトン酸、安息香酸ビニル、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸などのカルボキシル基を有する共重合性モノマー；グリシジル（メタ）アクリレート、アリルグリシジルエーテル、ビニルベンジルグリシジルエーテルなどのエポキシ基を有する共重合性モノマー；アリルアミン、アミノスチレンなどのアミノ基を有する共重合性モノマー；ダイアセトンアクリルアミド、アクロレイン、ホルミルスチロールなどのケト基・アルデヒド基に基づくカルボニル基を有する共重合性モノマーを挙げることができる。カルボキシル基を有する共重合性モノマーとして、より好ましくは、２−（メタ）アクリロイロキシエチルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシエチルヘキサヒドロフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルコハク酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルフタル酸、２−（メタ）アクリロイロキシプロピルヘキサヒドロフタル酸であり、さらに好ましくは、２−メタクリロイロキシエチルコハク酸である。   Examples of the copolymerizable monomer having a functional group include acrylic acid, methacrylic acid, itaconic acid, non-maleic acid, crotonic acid, vinyl benzoate, 2- (meth) acryloyloxyethyl succinic acid, and 2- (meth). Acryloyloxyethyl phthalic acid, 2- (meth) acryloyloxyethyl hexahydrophthalic acid, 2- (meth) acryloyloxypropyl succinic acid, 2- (meth) acryloyloxypropyl phthalic acid, 2- (meth) Copolymerizable monomer having a carboxyl group such as acryloyloxypropyl hexahydrophthalic acid; Copolymerizable monomer having an epoxy group such as glycidyl (meth) acrylate, allyl glycidyl ether, vinylbenzyl glycidyl ether; allylamine, aminostyrene, etc. Copolymerizable monomer having an amino group Diacetone acrylamide, acrolein, can be mentioned copolymerizable monomer having a carbonyl group based on keto-aldehyde group, such as formyl styrol. More preferably, the copolymerizable monomer having a carboxyl group is 2- (meth) acryloyloxyethyl succinic acid, 2- (meth) acryloyloxyethyl phthalic acid, 2- (meth) acryloyloxyethyl hexahydrophthal Acid, 2- (meth) acryloyloxypropyl succinic acid, 2- (meth) acryloyloxypropylphthalic acid, 2- (meth) acryloyloxypropylhexahydrophthalic acid, more preferably 2-methacryloyl Roxyethyl succinic acid.

他の共重合性モノマーとしては、例えば、スチレン、ジビニルベンゼンなどの芳香族ビニル単量体、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ブチル（メタ）アクリレート、シクロヘキシル（メタ）アクリレートなどのエチレン性不飽和カルボン酸アルキルエステルなどを挙げることができる。   Other copolymerizable monomers include, for example, aromatic vinyl monomers such as styrene and divinylbenzene, ethylene such as methyl (meth) acrylate, ethyl (meth) acrylate, butyl (meth) acrylate, and cyclohexyl (meth) acrylate. And unsaturated unsaturated carboxylic acid alkyl esters.

（２）の方法は、トシル基、活性エステル基、ヒドラジノ基などを導入するために有効であり、磁性粒子の存在下、所望の官能基を導入するための前駆体となる官能基を有するモノマーを液体中で重合したのち、さらにその官能基を公知の方法で化学修飾すればよい。   The method (2) is effective for introducing a tosyl group, an active ester group, a hydrazino group, and the like, and a monomer having a functional group serving as a precursor for introducing a desired functional group in the presence of magnetic particles. After the polymerization in a liquid, the functional group may be chemically modified by a known method.

本実施形態に係る磁性粒子に含まれる官能基の量（磁性粒子１ｇ当たりのモル数）は、好ましくは１μｍｏｌ／ｇ以上、さらに好ましくは２〜２００μｍｏｌ／ｇ以上、最も好ましくは５〜５０μｍｏｌ／ｇである。   The amount of functional groups contained in the magnetic particles according to this embodiment (number of moles per gram of magnetic particles) is preferably 1 μmol / g or more, more preferably 2 to 200 μmol / g or more, and most preferably 5 to 50 μmol / g. It is.

１．２．プローブ結合粒子およびその利用
本実施形態に係る磁性粒子の使用に当たってプローブを結合させる方法としては、物理吸着法または化学結合法を挙げることができるが、安定的な使用のためには、通常、プローブを磁性粒子表面の官能基と化学的に結合させる。この方法としては、例えば、粒子表面のカルボキシル基とプローブのアミノ基とを反応させる場合、カルボジイミド等の縮合剤を使用することができ、粒子表面のアミノ基とプローブのアミノ基とを反応させる場合、グルタルアルデヒドを使用することができる。 1.2. Probe-bound particles and use thereof As a method for binding a probe in using the magnetic particles according to the present embodiment, a physical adsorption method or a chemical binding method can be exemplified. For stable use, a probe is usually used. Are chemically bonded to the functional groups on the surface of the magnetic particles. As this method, for example, when reacting the carboxyl group on the particle surface with the amino group of the probe, a condensing agent such as carbodiimide can be used, and when reacting the amino group on the particle surface with the amino group of the probe Glutaraldehyde can be used.

また、エポキシ基やトシル基、活性エステル基、ヒドラジノ基などの活性基を粒子表面に導入した場合、プローブと磁性粒子とを混合するだけで、一次プローブの化学的な結合が達成できる。   When an active group such as an epoxy group, a tosyl group, an active ester group, or a hydrazino group is introduced on the particle surface, chemical bonding of the primary probe can be achieved simply by mixing the probe and magnetic particles.

磁性粒子にプローブを結合した後、過剰のプローブを洗浄し、必要に応じて未反応の官能基を不活化する。不活化剤としては、エタノールアミン、トリスヒドロキシアミノメタン等の水酸基を含有する不活化剤の利用が好ましい。また、プローブの結合の後、通常行われるブロッキングの操作は不要であるが、上記不活化の工程にアルブミン等のブロッキング剤を併用してもかまわない。以降は、通常の生化学的な工程に移行すればよい。   After binding the probe to the magnetic particles, excess probe is washed, and unreacted functional groups are inactivated as necessary. As the inactivating agent, it is preferable to use an inactivating agent containing a hydroxyl group such as ethanolamine or trishydroxyaminomethane. Further, although the blocking operation usually performed after the probe binding is unnecessary, a blocking agent such as albumin may be used in combination with the inactivation step. Thereafter, the process may be shifted to a normal biochemical process.

本発明の一実施形態のプローブ結合粒子に担持することができるプローブは、例えば、抗原・抗体、（ストレプト）アビジン、プロテインＡ、プロテインＧ、酵素・ホルモン等のタンパク質、ＤＮＡ・ＲＮＡ等の核酸、脂質、あるいは生理活性糖鎖化合物、各種のアフィニティー用タグ捕捉物質、ビオチン等の補酵素、特定の生理活性作用を有する（あるいは、特定の生理活性作用を有する可能性がある）化学物質等である。   Examples of probes that can be carried on the probe-binding particles according to one embodiment of the present invention include antigens / antibodies, (strept) avidin, protein A, protein G, proteins such as enzymes and hormones, nucleic acids such as DNA and RNA, Lipids or physiologically active sugar chain compounds, various tag capture substances for affinity, coenzymes such as biotin, chemical substances having a specific physiological activity (or possibly having a specific physiological activity), etc. .

診断薬用のプローブ結合粒子には、プローブとして主に、抗原または抗体が使用される。この場合、抗原または抗体としては、被検体中に一般に含まれている成分に反応するものであれば特に制限されないが、例えば、アンチプラスミン検査用抗アンチプラスミン抗体、Ｄダイマー検査用抗Ｄダイマー抗体、ＦＤＰ検査用抗ＦＤＰ抗体、ｔＰＡ検査用抗ｔＰＡ抗体、ＴＡＴ検査用抗トロンビン＝アンチトロンビン複合体抗体、ＦＰＡ検査用抗ＦＰＡ抗体等の凝固線溶関連検査用抗原または抗体；ＢＦＰ検査用抗ＢＦＰ抗体、ＣＥＡ検査用抗ＣＥＡ抗体、ＡＦＰ検査用抗ＡＦＰ抗体、フェリチン検査用抗フェリチン抗体、ＣＡ１９−９検査用抗ＣＡ１９−９抗体等の腫瘍関連検査用抗原または抗体；アポリポタンパク検査用抗アポリポタンパク抗体、β２−ミクロブロブリン検査用抗β２−ミクロブロブリン抗体、α１−ミクログロブリン検査用抗α１―ミクログロブリン抗体、免疫グロブリン検査用抗免疫グロブリン抗体、ＣＲＰ検査用抗ＣＲＰ抗体等の血清蛋白関連検査用抗原または抗体；ＨＣＧ検査用抗ＨＣＧ抗体等の内分泌機能検査用抗原または抗体；ＨＢｓ抗原検査用抗ＨＢｓ抗体、ＨＢｓ抗体検査用ＨＢｓ抗原、ＨＣＶ抗体検査用ＨＣＶ抗原、ＨＩＶ−１抗体用ＨＩＶ−１抗原、ＨＩＶ−２抗体検査用ＨＩＶ−２抗原、ＨＴＬＶ−１検査用ＨＴＬＶ−１抗原、マイコプラズマ症検査用マイコプラズマ抗原、トキソプラズマ検査用トキソプラズマ抗原、ＡＳＯ検査用ストレプトリジンＯ抗原等の感染症関連検査用抗原または抗体；抗ＤＮＡ抗体検査用ＤＮＡ抗原、ＲＦ検査用熱変成ヒトＩｇＧ等自己免疫関連検査用抗原または抗体；ジゴキシン検査用抗ジゴキシン抗体、リドカイン検査用抗リドカイン抗体等の薬物分析用抗原または抗体等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。抗体としては、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体のどちらを用いてもかまわない。   For probe-binding particles for diagnostic agents, antigens or antibodies are mainly used as probes. In this case, the antigen or antibody is not particularly limited as long as it reacts with a component generally contained in a subject. For example, anti-antiplasmin antibody for antiplasmin test, anti-D dimer antibody for D dimer test Anti-FDP antibody for FDP test, Anti-tPA antibody for tPA test, Anti-thrombin = antithrombin complex antibody for TAT test, Anticoagulation-related test antigen or antibody such as anti-FPA antibody for FPA test; Anti-BFP for BFP test Anti-Apolipoprotein for testing apolipoprotein such as antibodies, anti-CEA antibodies for CEA testing, anti-AFP antibodies for AFP testing, anti-ferritin antibodies for testing ferritin, anti-CA19-9 testing for CA19-9 Antibody, anti-β2-microblob antibody for β2-microblob test, α1-microglob Anti-α1-microglobulin antibody for serum test, anti-immunoglobulin antibody for immunoglobulin test, serum protein-related test antigen or antibody such as anti-CRP antibody for CRP test; endocrine function test antigen such as anti-HCG antibody for HCG test or Antibody: Anti-HBs antibody for HBs antigen test, HBs antigen for HBs antibody test, HCV antigen for HCV antibody test, HIV-1 antigen for HIV-1 antibody, HIV-2 antigen for HIV-2 antibody test, HTLV-1 test HTLV-1 antigen, Mycoplasma antigen for Mycoplasma test, Toxoplasma antigen for Toxoplasma test, Streptridine O antigen for ASO test, etc. Antigen-related test antigen or antibody; Anti-DNA antibody test DNA antigen, RF test heat-modified human Antigens or antibodies for autoimmune related tests such as IgG; antidigoxin anti And antigens for drug analysis such as anti-lidocaine antibodies for lidocaine testing, and the like, but are not limited thereto. As the antibody, either a polyclonal antibody or a monoclonal antibody may be used.

また、アフィニティー担体用のプローブ結合粒子には、プローブとして主に、プロテインＡ、プロテインＧ、酵素・ホルモン等のタンパク質、ＤＮＡ・ＲＮＡ等の核酸、脂質、あるいは生理活性糖鎖化合物が使用される。さらに、創薬用のプローブ結合粒子としては、プローブとして解析対象の化学物質（被解析化学物質；リガンド分子に該当する）を化学結合により固定化し、タンパク物質等との特異的相互作用を用いて当該相互作用を解析および／または測定することによって、被解析化学物質と特異的な相互作用を有するタンパク質等（ターゲット分子に該当する）を選別、精製することにより創薬研究が可能である。   For the probe-bound particles for affinity carriers, protein A, protein G, proteins such as enzymes and hormones, nucleic acids such as DNA and RNA, lipids, or physiologically active sugar chain compounds are mainly used as probes. Furthermore, as a probe-binding particle for drug discovery, a chemical substance to be analyzed (chemical substance to be analyzed; corresponding to a ligand molecule) is immobilized as a probe by chemical bonding, and the probe binding particle is used by using a specific interaction with a protein substance or the like. By analyzing and / or measuring the interaction, drug discovery research is possible by selecting and purifying a protein or the like (corresponding to the target molecule) having a specific interaction with the chemical substance to be analyzed.

２．実施例
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。 2. Examples Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

２．１．評価方法
２．１．１．中間水の有無の測定
各実施例・比較例で得られた粒子および同重量の水を密閉型パンに封じたセルをリガク社製ＤＳＣ（商品名「Thermo Plus 2/DSC8230」）にセットし、−１００℃まで冷却した後、１０℃／分で昇温して、ＤＳＣ曲線を得た。ＤＳＣ曲線において−１０℃未満に発熱ピークが観測された場合、中間水を有するとした。 2.1. Evaluation method 2.1.1. Measurement of the presence or absence of intermediate water Set the cell obtained by sealing the particles obtained in each Example and Comparative Example and the same weight of water in a closed pan to a DSC manufactured by Rigaku (trade name “Thermo Plus 2 / DSC8230”), After cooling to −100 ° C., the temperature was raised at 10 ° C./min to obtain a DSC curve. When an exothermic peak was observed below −10 ° C. in the DSC curve, it was determined to have intermediate water.

２．１．２．ＣＬＥＩＡ（化学発光酵素免疫測定）によるシグナル
抗ＡＦＰ抗体を感作させた、後述する各実施例・比較例で得られた粒子の分散液１０μｌ（粒子５０μｇ相当）をテストチューブに取り、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）で１００ｎｇ／ｍＬに希釈したＡＦＰ抗原（日本バイオテスト社製）の標準検体５０μｌと混合し、３７℃で１０分間反応させた。磁気分離して粒子を分離し上清を除いた後、２次抗体としてアルカリフォスファターゼ（以下、「ＡＬＰ」という。）で標識した抗ＡＦＰ抗体（富士レビオ株式会社製、ルミパルスＡＦＰ−Ｎに付属の試薬を使用）４０μｌを添加し、３７℃で１０分間反応させた。次いで、磁気分離し上清を除いた後、ＰＢＳで３回洗浄を繰り返して得られた粒子を５０μｌの０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０に分散させ、新しいチューブに移し替えた。ＡＬＰの基質液（ルミパルス基質液：富士レビオ株式会社製）１００μｌを加え、３７℃で１０分間反応させた後、化学発光量を測定した。化学発光の測定には、ベルトールジャパン株式会社製の化学発光測定装置（商品名：Ｌｕｍａｔ ＬＢ９５０７）を用いた。 2.1.2. Signal by CLEIA (chemiluminescence enzyme immunoassay) 10 μl of a dispersion of particles (corresponding to 50 μg of particles) obtained by sensitizing anti-AFP antibody and obtained in each of Examples and Comparative Examples described later is taken in a test tube, and fetal bovine serum It was mixed with 50 μl of a standard sample of AFP antigen (manufactured by Nippon Biotest) diluted to 100 ng / mL with (FCS), and reacted at 37 ° C. for 10 minutes. After separating the particles by magnetic separation and removing the supernatant, an anti-AFP antibody labeled with alkaline phosphatase (hereinafter referred to as “ALP”) as a secondary antibody (manufactured by Fujirebio Inc., attached to Lumipulse AFP-N) Using reagent) 40 μl was added and allowed to react at 37 ° C. for 10 minutes. Next, after magnetic separation and removal of the supernatant, the particles obtained by repeating washing three times with PBS were dispersed in 50 μl of 0.01% Tween 20, and transferred to a new tube. After adding 100 μl of ALP substrate solution (Lumipulse substrate solution: manufactured by Fujirebio Inc.) and reacting at 37 ° C. for 10 minutes, the amount of chemiluminescence was measured. For the measurement of chemiluminescence, a chemiluminescence measuring device (trade name: Lumat LB9507) manufactured by Bertol Japan KK was used.

２．１．３．ＣＬＥＩＡによるノイズ
上記ＣＬＥＩＡによるシグナルの評価方法で、ウシ胎児血清（ＦＣＳ）で１００ｎｇ／ｍＬに希釈したＡＦＰ抗原（日本バイオテスト社製）の標準検体５０μｌの代わりに、ＡＦＰ抗原を含まないＦＣＳ５０μｌを用いた以外は、同様にして化学発光量を測定した。 2.1.3. Noise by CLEIA In the above signal evaluation method by CLEIA, instead of 50 μl of the standard specimen of AFP antigen (manufactured by Nippon Biotest) diluted to 100 ng / mL with fetal calf serum (FCS), 50 μl of FCS not containing AFP antigen is used. Except for the above, the amount of chemiluminescence was measured in the same manner.

２．２．実施例１
７５％ジ（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド溶液（日本油脂製「パーロイル３５５−７５（Ｓ）」）２ｇを１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液２０ｇに混合し、超音波分散機にて微細乳化した。これを粒径０．７７μｍのポリスチレン粒子１３ｇおよび水４１ｇの入ったリアクターに入れ、２５℃で１２時間攪拌した。別の容器でスチレン９６ｇおよびジビニルベンゼン４ｇを０．１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液４００ｇに乳化し、前記リアクターに入れ、４０℃で２時間攪拌した後、８０℃に昇温して８時間重合した。室温まで冷却した後、遠心分離により粒子のみ取り出したものをさらに水洗し、乾燥、粉砕した。得られた粒子を核粒子とする（核粒子の作製）。核粒子の数平均粒子径は１．５μｍであった。 2.2. Example 1
2 g of 75% di (3,5,5-trimethylhexanoyl) peroxide solution (“Perroyl 355-75 (S)” manufactured by NOF Corporation) was mixed with 20 g of 1% sodium dodecyl sulfate aqueous solution, and ultrasonic dispersion machine was used. Finely emulsified. This was put into a reactor containing 13 g of polystyrene particles having a particle size of 0.77 μm and 41 g of water, and stirred at 25 ° C. for 12 hours. In another container, 96 g of styrene and 4 g of divinylbenzene were emulsified in 400 g of a 0.1% sodium dodecyl sulfate aqueous solution, placed in the reactor, stirred at 40 ° C. for 2 hours, then heated to 80 ° C. and polymerized for 8 hours. After cooling to room temperature, the particles taken out by centrifugation were further washed with water, dried and pulverized. The obtained particles are used as core particles (production of core particles). The number average particle diameter of the core particles was 1.5 μm.

次に、油性磁性流体（商品名：「ＥＸＰシリーズ」，（株）フェローテック製）にアセトンを加えて粒子を析出沈殿させた後、これを乾燥することにより、疎水化処理された表面を有するフェライト系の磁性体微粒子（平均一次粒子径：０．０１μｍ）を得た。   Next, acetone is added to an oil-based magnetic fluid (trade name: “EXP series”, manufactured by Ferrotec Co., Ltd.) to precipitate and precipitate particles, which are then dried to have a surface that has been hydrophobized. Ferrite-based magnetic fine particles (average primary particle size: 0.01 μm) were obtained.

次いで、上記核粒子１５ｇおよび上記疎水化された磁性体微粒子１５ｇをミキサーでよく混合し、この混合物をハイブリダイゼーションシステムＮＨＳ−０型（奈良機械製作所（株）製）を使用して、羽根（撹拌翼）の周速度１００ｍ／秒（１６２００ｒｐｍ）で５分間処理し、磁性体微粒子からなる磁性体層を表面に有する母粒子（数平均粒子径：２．０μｍ）を得た（母粒子の作製）。   Next, 15 g of the core particles and 15 g of the hydrophobized magnetic fine particles are mixed well with a mixer, and this mixture is mixed with a blade (stirring) using a hybridization system NHS-0 type (manufactured by Nara Machinery Co., Ltd.). Was processed for 5 minutes at a peripheral speed of 100 m / sec (16200 rpm) of the wings) to obtain mother particles (number average particle size: 2.0 μm) having a magnetic layer made of magnetic fine particles on the surface (production of mother particles). .

次に、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．２５質量％およびノニオン性乳化剤（商品名：「エマルゲン１５０」，花王（株）製）０．２５質量％を含む水溶液３７５ｇを１Ｌセパラブルフラスコに投入し、次いで、前記磁性体層を有する母粒子１５ｇを投入し、ホモジナイザーで分散した後、６０℃に加熱した。ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム０．２５質量％およびノニオン性乳化剤（商品名：「エマルゲン１５０」，花王（株）製）０．２５質量％を含む水溶液７５ｇに、モノマー部としてメトキシエチルアクリレート１２ｇおよび２−メタクリロイロキシエチルコハク酸３ｇと、ジ（３，５，５−トリメチルヘキサノイル）パーオキサイド（日本油脂社製；パーロイル３５５）０．６ｇとを入れて超音波で分散させたプレエマルジョンを、６０℃にコントロールした前記５００ｍＬセパラブルフラスコに１時間３０分かけて滴下した。その後、７５℃に昇温した後さらに２時間重合を続けて、反応を完了させた。以上の工程により、コアである母粒子を覆う共重合体層（ポリマー）を形成した。磁気を用いて前記セパラブルフラスコ中の粒子を分離し、蒸留水を用いて繰り返し洗浄した。以上により、磁性粒子の分散液を得た。得られた磁性粒子を粒子（ｉ）とする。中間水の有無の測定により、この粒子（ｉ）は中間水を有することが確認され、かつ、粒径は２．８μｍであり、カルボキシル基含有量は１２μｍｏｌ／ｇであった。   Next, 375 g of an aqueous solution containing 0.25% by mass of sodium dodecylbenzenesulfonate and 0.25% by mass of a nonionic emulsifier (trade name: “Emulgen 150”, manufactured by Kao Corporation) was charged into a 1 L separable flask, Next, 15 g of mother particles having the magnetic layer were added, dispersed with a homogenizer, and heated to 60 ° C. To 75 g of an aqueous solution containing 0.25% by mass of sodium dodecylbenzenesulfonate and 0.25% by mass of a nonionic emulsifier (trade name: “Emulgen 150”, manufactured by Kao Corporation), 12 g of methoxyethyl acrylate and 2- A pre-emulsion in which 3 g of methacryloyloxyethyl succinic acid and 0.6 g of di (3,5,5-trimethylhexanoyl) peroxide (manufactured by NOF Corporation; Parroyl 355) were dispersed with ultrasonic waves was added to 60 The solution was added dropwise to the 500 mL separable flask controlled at 0 ° C. over 1 hour 30 minutes. Then, after heating up to 75 degreeC, superposition | polymerization was continued for further 2 hours, and reaction was completed. Through the above steps, a copolymer layer (polymer) covering the core particles as the core was formed. The particles in the separable flask were separated using magnetism and washed repeatedly using distilled water. Thus, a dispersion of magnetic particles was obtained. The obtained magnetic particles are defined as particles (i). Measurement of the presence or absence of intermediate water confirmed that the particles (i) had intermediate water, and had a particle size of 2.8 μm and a carboxyl group content of 12 μmol / g.

次に、この粒子（ｉ）１０ｍｇを分散させた固形分濃度１％の水分散体に、１−エチル−３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド塩酸塩（同仁化学社製）水溶液を添加して室温で２時間回転攪拌することにより、カルボキシル基を活性化した。次に、腫瘍マーカーであるヒトαフェトプロテイン（以下、「ＡＦＰ」という。）に対する抗体（以下、「抗ＡＦＰ抗体」という。コスモ・バイオ株式会社製）１００μｇを加え１８時間室温で反応した。反応後、粒子を磁気分離し、洗浄液（２５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７．４、０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０含有）で繰り返し洗浄した後、粒子濃度０．５％になるように洗浄液で希釈し、一次プローブとして抗ＡＦＰ抗体を結合したプローブ結合粒子を得た。このプローブ結合粒子を用いて、化学発光酵素免疫測定（ＣＬＥＩＡ）を実施した。その結果、この粒子（ｉ）のシグナル強度は１４３８０７（ＲＩＵ）、ノイズ強度は６８（ＲＩＵ）であった。   Next, an aqueous solution of 1-ethyl-3-dimethylaminopropylcarbodiimide hydrochloride (manufactured by Dojin Chemical Co., Ltd.) is added to an aqueous dispersion having a solid content concentration of 1% in which 10 mg of the particles (i) are dispersed, and 2 at room temperature. The carboxyl group was activated by stirring for a period of time. Next, 100 μg of an antibody (hereinafter referred to as “anti-AFP antibody” manufactured by Cosmo Bio Inc.) against human α-fetoprotein (hereinafter referred to as “AFP”), which is a tumor marker, was added and reacted at room temperature for 18 hours. After the reaction, the particles are magnetically separated, washed repeatedly with a cleaning solution (25 mmol / L Tris-HCl, pH 7.4, containing 0.01% Tween 20), and then diluted with a cleaning solution to a particle concentration of 0.5%. Probe-bound particles bound with an anti-AFP antibody as a primary probe were obtained. Using this probe-bound particle, chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA) was performed. As a result, the signal intensity of this particle (i) was 143807 (RIU), and the noise intensity was 68 (RIU).

２．３．実施例２
メトキシエチルアクリレートの代わりにテトラヒドロフルフリルアクリレートを用いた以外は、実施例１と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子（ｉｉ）とする。中間水の有無の測定により、この粒子（ｉｉ）は中間水を有することが確認され、かつ、粒径は２．８μｍであり、カルボキシル基含有量は１２μｍｏｌ／ｇであった。 2.3. Example 2
A dispersion of magnetic particles was obtained in the same manner as in Example 1 except that tetrahydrofurfuryl acrylate was used instead of methoxyethyl acrylate. The obtained particles are defined as particles (ii). Measurement of the presence or absence of intermediate water confirmed that the particles (ii) had intermediate water, and had a particle size of 2.8 μm and a carboxyl group content of 12 μmol / g.

次に、実施例１における粒子（ｉ）と同様にして、粒子（ｉｉ）について化学発光酵素免疫測定（ＣＬＥＩＡ）を実施した。その結果、粒子（ｉｉ）のシグナル強度は１５８６９８（ＲＩＵ）、ノイズ強度は７２（ＲＩＵ）であった。   Next, chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA) was performed on the particles (ii) in the same manner as the particles (i) in Example 1. As a result, the signal intensity of the particles (ii) was 158698 (RIU), and the noise intensity was 72 (RIU).

２．４．比較例１
メトキシエチルアクリレートの代わりにシクロヘキシルメタクリレートを用いた以外は、実施例１と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子（ｉ’）とする。中間水の有無の測定により、この粒子（ｉ’）は中間水を有さないことが確認され、かつ、粒径は２．９μｍであり、カルボキシル基含有量は１６μｍｏｌ／ｇであった。 2.4. Comparative Example 1
A dispersion of magnetic particles was obtained in the same manner as in Example 1 except that cyclohexyl methacrylate was used instead of methoxyethyl acrylate. The obtained particles are defined as particles (i ′). Measurement of the presence or absence of intermediate water confirmed that the particles (i ′) did not have intermediate water, and had a particle size of 2.9 μm and a carboxyl group content of 16 μmol / g.

次に、実施例１における粒子（ｉ）と同様にして、粒子（ｉ’）について化学発光酵素免疫測定（ＣＬＥＩＡ）を実施した。その結果、粒子（ｉ’）のシグナル強度は１５９８１１（ＲＩＵ）、ノイズ強度は２８４（ＲＩＵ）であった。   Next, chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA) was performed on the particles (i ′) in the same manner as the particles (i) in Example 1. As a result, the signal intensity of the particle (i ′) was 159811 (RIU), and the noise intensity was 284 (RIU).

２．５．比較例２
２−メタクリロイロキシエチルコハク酸の代わりにシクロヘキシルメタクリレートを用いた以外は、実施例１と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子（ｉｉ’）とする。中間水の有無の測定により、この粒子（ｉｉ’）は中間水を有することが確認され、かつ、粒径は２．８μｍであり、カルボキシル基含有量は０μｍｏｌ／ｇであった。 2.5. Comparative Example 2
A dispersion of magnetic particles was obtained in the same manner as in Example 1 except that cyclohexyl methacrylate was used instead of 2-methacryloyloxyethyl succinic acid. Let the obtained particle | grains be particle | grains (ii '). Measurement of the presence or absence of intermediate water confirmed that the particles (ii ′) had intermediate water, and had a particle size of 2.8 μm and a carboxyl group content of 0 μmol / g.

次に、実施例１における粒子（ｉ）と同様にして、粒子（ｉｉ’）について化学発光酵素免疫測定（ＣＬＥＩＡ）を実施した。その結果、粒子（ｉｉ’）のシグナル強度は４１１（ＲＩＵ）、ノイズ強度は８７（ＲＩＵ）であった。   Next, chemiluminescent enzyme immunoassay (CLEIA) was performed on the particles (ii ′) in the same manner as the particles (i) in Example 1. As a result, the signal intensity of the particles (ii ′) was 411 (RIU), and the noise intensity was 87 (RIU).

以上の結果から、実施例１、２で得られた粒子（ｉ）および（ｉｉ）は、自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有するため、中間水を有するポリマーを表面に有さない比較例１で得られた粒子（ｉ’）と比較してノイズが低いこと、ならびに、プローブとの化学結合に使用可能な官能基を表面に有していない比較例２で得られた粒子（ｉｉ’）と比較して、シグナルが高いことが理解できる。   From the above results, the particles (i) and (ii) obtained in Examples 1 and 2 have at least the surface a polymer having intermediate water in the presence of free water, and the polymer has chemical properties with the probe. Since it has a functional group that can be used for bonding, it has low noise compared to the particles (i ′) obtained in Comparative Example 1 that does not have a polymer having intermediate water on its surface, and chemical bonding with the probe It can be understood that the signal is high as compared with the particles (ii ′) obtained in Comparative Example 2 having no functional group usable on the surface.

Claims (5)

モノマー部に含まれる全モノマーのうち弱親水性（メタ）アクリレートが５０重量部以上である該モノマー部を重合して得られ、自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有する、磁性粒子。 It is obtained by polymerizing the monomer part in which the weakly hydrophilic (meth) acrylate is 50 parts by weight or more among all monomers contained in the monomer part, and has at least a polymer having intermediate water in the presence of free water on the surface, And the magnetic particle in which this polymer has a functional group which can be used for a chemical bond with a probe. 請求項１において、  In claim 1,
前記モノマー部は、前記官能基を有する共重合性モノマーを含む、磁性粒子。  The said monomer part is a magnetic particle containing the copolymerizable monomer which has the said functional group. 請求項１または２において、
前記弱親水性（メタ）アクリレートは、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、ジ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルアクリレート、トリ（エチレングリコール）メチルエーテルメタクリレート、トリ（エチレングリコール）エチルエーテルアクリレート、およびトリ（エチレングリコール）エチルエーテルメタクリレートから選ばれる少なくとも１種である、磁性粒子。 In claim 1 or 2 ,
The weakly hydrophilic (meth) acrylate is methoxyethyl acrylate, tetrahydrofurfuryl acrylate, di (ethylene glycol) methyl ether acrylate, di (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, di (ethylene glycol) ethyl ether acrylate, di (ethylene glycol) ) ethyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether acrylate, tri (ethylene glycol) methyl ether methacrylate, tri (ethylene glycol) ethyl ether acrylate, and at least one selected from tri (ethylene glycol) ethyl ether methacrylate, Magnetic particles. 請求項１ないし３のいずれかにおいて、
核粒子と、該核粒子の表面に設けられた超常磁性微粒子を含む磁性体層とを含む母粒子をさらに含み、
前記ポリマーは前記磁性体層を被覆する、磁性粒子。 In any of claims 1 to 3 ,
Further comprising a mother particle comprising a core particle and a magnetic layer containing superparamagnetic fine particles provided on the surface of the core particle,
The polymer is a magnetic particle that covers the magnetic layer. 請求項１ないし４のいずれかに記載の磁性粒子と、該磁性粒子に結合するプローブとを含む、プローブ結合粒子。 It claims 1 comprises a magnetic particle according to any one of 4, and a probe that binds to the magnetic particles, the probe-bonded particles.