JP4761068B2 - 磁性粒子およびプローブ結合粒子 - Google Patents
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Description
自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有する。
1.1.磁性粒子
本発明の一実施形態に係る磁性粒子は、少なくともその表面が自由水共存下で中間水を有するポリマーで形成されている。
本実施形態に係る磁性粒子の使用に当たってプローブを結合させる方法としては、物理吸着法または化学結合法を挙げることができるが、安定的な使用のためには、通常、プローブを磁性粒子表面の官能基と化学的に結合させる。この方法としては、例えば、粒子表面のカルボキシル基とプローブのアミノ基とを反応させる場合、カルボジイミド等の縮合剤を使用することができ、粒子表面のアミノ基とプローブのアミノ基とを反応させる場合、グルタルアルデヒドを使用することができる。
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらによって制限されるものではない。
2.1.1.中間水の有無の測定
各実施例・比較例で得られた粒子および同重量の水を密閉型パンに封じたセルをリガク社製DSC(商品名「Thermo Plus 2/DSC8230」)にセットし、−100℃まで冷却した後、10℃/分で昇温して、DSC曲線を得た。DSC曲線において−10℃未満に発熱ピークが観測された場合、中間水を有するとした。
抗AFP抗体を感作させた、後述する各実施例・比較例で得られた粒子の分散液10μl(粒子50μg相当)をテストチューブに取り、ウシ胎児血清(FCS)で100ng/mLに希釈したAFP抗原(日本バイオテスト社製)の標準検体50μlと混合し、37℃で10分間反応させた。磁気分離して粒子を分離し上清を除いた後、2次抗体としてアルカリフォスファターゼ(以下、「ALP」という。)で標識した抗AFP抗体(富士レビオ株式会社製、ルミパルスAFP−Nに付属の試薬を使用)40μlを添加し、37℃で10分間反応させた。次いで、磁気分離し上清を除いた後、PBSで3回洗浄を繰り返して得られた粒子を50μlの0.01%Tween20に分散させ、新しいチューブに移し替えた。ALPの基質液(ルミパルス基質液:富士レビオ株式会社製)100μlを加え、37℃で10分間反応させた後、化学発光量を測定した。化学発光の測定には、ベルトールジャパン株式会社製の化学発光測定装置(商品名:Lumat LB9507)を用いた。
上記CLEIAによるシグナルの評価方法で、ウシ胎児血清(FCS)で100ng/mLに希釈したAFP抗原(日本バイオテスト社製)の標準検体50μlの代わりに、AFP抗原を含まないFCS50μlを用いた以外は、同様にして化学発光量を測定した。
75%ジ(3,5,5−トリメチルヘキサノイル)パーオキサイド溶液(日本油脂製「パーロイル355−75(S)」)2gを1%ドデシル硫酸ナトリウム水溶液20gに混合し、超音波分散機にて微細乳化した。これを粒径0.77μmのポリスチレン粒子13gおよび水41gの入ったリアクターに入れ、25℃で12時間攪拌した。別の容器でスチレン96gおよびジビニルベンゼン4gを0.1%ドデシル硫酸ナトリウム水溶液400gに乳化し、前記リアクターに入れ、40℃で2時間攪拌した後、80℃に昇温して8時間重合した。室温まで冷却した後、遠心分離により粒子のみ取り出したものをさらに水洗し、乾燥、粉砕した。得られた粒子を核粒子とする(核粒子の作製)。核粒子の数平均粒子径は1.5μmであった。
メトキシエチルアクリレートの代わりにテトラヒドロフルフリルアクリレートを用いた以外は、実施例1と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子(ii)とする。中間水の有無の測定により、この粒子(ii)は中間水を有することが確認され、かつ、粒径は2.8μmであり、カルボキシル基含有量は12μmol/gであった。
メトキシエチルアクリレートの代わりにシクロヘキシルメタクリレートを用いた以外は、実施例1と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子(i’)とする。中間水の有無の測定により、この粒子(i’)は中間水を有さないことが確認され、かつ、粒径は2.9μmであり、カルボキシル基含有量は16μmol/gであった。
2−メタクリロイロキシエチルコハク酸の代わりにシクロヘキシルメタクリレートを用いた以外は、実施例1と同様にして、磁性粒子の分散液を得た。得られた粒子を粒子(ii’)とする。中間水の有無の測定により、この粒子(ii’)は中間水を有することが確認され、かつ、粒径は2.8μmであり、カルボキシル基含有量は0μmol/gであった。
Claims (5)
- モノマー部に含まれる全モノマーのうち弱親水性(メタ)アクリレートが50重量部以上である該モノマー部を重合して得られ、自由水共存下で中間水を有するポリマーを少なくとも表面に有し、かつ、該ポリマーがプローブとの化学結合に使用可能な官能基を有する、磁性粒子。
- 請求項1において、
前記モノマー部は、前記官能基を有する共重合性モノマーを含む、磁性粒子。 - 請求項1または2において、
前記弱親水性(メタ)アクリレートは、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート、ジ(エチレングリコール)メチルエーテルアクリレート、ジ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリレート、ジ(エチレングリコール)エチルエーテルアクリレート、ジ(エチレングリコール)エチルエーテルメタクリレート、トリ(エチレングリコール)メチルエーテルアクリレート、トリ(エチレングリコール)メチルエーテルメタクリレート、トリ(エチレングリコール)エチルエーテルアクリレート、およびトリ(エチレングリコール)エチルエーテルメタクリレートから選ばれる少なくとも1種である、磁性粒子。 - 請求項1ないし3のいずれかにおいて、
核粒子と、該核粒子の表面に設けられた超常磁性微粒子を含む磁性体層とを含む母粒子をさらに含み、
前記ポリマーは前記磁性体層を被覆する、磁性粒子。 - 請求項1ないし4のいずれかに記載の磁性粒子と、該磁性粒子に結合するプローブとを含む、プローブ結合粒子。
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