JP4690649B2 - 標的化された遺伝子発現阻害のための新規なオリゴリボヌクレオチド誘導体 - Google Patents
標的化された遺伝子発現阻害のための新規なオリゴリボヌクレオチド誘導体 Download PDFInfo
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Description
、続いてその断片が標的mRNAの配列特異的分解に用いられると推測される転写後プロセスである。
et al.(1994)Curr.Med.Chem1,176-191)。しかしながら、合成2′5′−Aは、それらが5′−リン酸または5′−三リン酸型に変換された場合にのみRNアーゼLを活性化する。続いて、5′−p−2′5′−A(pは、リン酸、二リン酸または三リン酸)により活性化されたRNアーゼLは、配列非特異的な方法で細胞の全てのRNAを分解する。加えて、アンチセンスオリゴヌクレオチドと5′−p−2′5′−A残基との結合体により、遺伝子発現を配列特異的に阻害することが可能であることが示された。しかしながら、この目的に関して、2′5′−A残基の5′末端は、オリゴヌクレオチドに結合するのではなく、リン酸、チオリン酸または三リン酸として存在することが必須である(Torrence et al.(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S. A.90,1300-4)。その上、標的RNAが認識するオリゴヌクレオチド部分(アンチセンス部分)は、一本鎖形態でなければならない。上述した理由のために、結果として遊離の5′−リン酸または三リン酸機能を有さない2′5′−A残基をそれらの3′末端に有するオリゴヌクレオチドは、これまで、遺伝子発現の阻害剤として説明されていない。一本鎖の5′−リン酸化5′−p−2′5′−Aアンチセンスオリゴヌクレオチド結合体による遺伝子発現の阻害は、アンチセンス原理のバリエーションであり、それゆえに、アンチセンス−オリゴヌクレオチドアプローチの制限にもさらされる。この点について、2′5′−A残基の2′または3′末端が結合形態で存在するように、2′5′−A残基はスペーサー(リンカー)を介してオリゴヌクレオチドの5′末端に付着する。RNA結合部分は、好ましくは、DNAを含む(Torence,Curr.Opin.Mol.Ther.(1999)1,307における図4〜6)。
式I:
5′−(N)x−(Z)n 式I
[式中、Nは、標的RNAに対して少なくとも部分的に相補的である天然に存在する、または天然に存在しないヌクレオチド、好ましくはリボヌクレオチドであり、
xは、独立して、10〜100、好ましくは15〜45、特に好ましくは16〜25であり、
nは、2〜20、好ましくは3〜10、特に好ましくは3〜6であり、
Zは、2′5′インターヌクレオシド結合を介して結合される天然に存在する、または天然に存在しないヌクレオチドである]
で示されるオリゴヌクレオチド誘導体を提供し、ただし、該オリゴヌクレオチド誘導体の相同標的RNAは以下の配列パターンを有する:
5′−(U)v−(N′)z−(U)w
5′−(U)v−(N′)z−UX
5′−UX−(N′)z−UX、および、
5′−(U)v−(N′)z
式中、vおよびwは、互いに独立して、2〜20、好ましくは2〜10、特に好ましくは2〜6であり、
zは15〜25、好ましくは16〜23、特に好ましくは19〜21であり、
Uはウリジンであり、Nは、アデノシン(A)、グアノシン(G)、シチジン(C)またはUであり、Xは、A、GまたはC、好ましくはAである。好ましい実施形態において、Nはリボヌクレオチドである。
5′−TTTTGAAGCGAAGGTTGTGGATCTG(配列番号1)
または、以下のRNA配列:
5′−UUUUGAAGCGAAGGUUGUGGAUCUG(配列番号2)
を含む場合、標的RNAは、以下の配列パターン:
5′−(U)v−(N)z−UX
(式中、vは4であり、zは19であり、XはGである)を有する。
るオリゴヌクレオチドである。特に好ましくは、1またはそれ以上のホスホジエステル結合がホスホロチオエート残基で置換された式Iで示されるオリゴヌクレオチドである。特に、いくつかのピリミジンヌクレオチドが配列中で互いに連続する場合、ホスホロチオエート残基は、好ましくは、3′末端、5′末端ならびに内部ピリミジンヌクレオチドCおよびUに導入される。
その上また、2′5′−オリゴアデニレートシンターゼの欠陥または異常を有する患者を治療するために式Iで示されるオリゴヌクレオチドを用いることも可能である。例えばCFS(慢性疲労症候群)の患者を治療することもできる。
3′a*a*aa−C*U*U*CGC*U*UC*CAA*CAC*C*UAGA*C
3′a*a*aaC*U*U*CU*CU*U*CAAC*CA*C*CGA*GA*C 配列番号
15
U、VおよびWは、互いに独立して、O、S、NHまたはCH2、好ましくはOまたは
Sであり、
R1は、互いに独立して、OH、SH、CH3もしくはBH3、好ましくはOHもしくは
SH、または生理学的に許容されるそれらの塩であり、
R2は、互いに独立して、OH、H、O−C1〜C12−アルキル、好ましくはOH(リボヌクレオチド)であり、ここでC1〜C12−アルキルは、好ましくはCH3またはCH3−
O−CH2CH2であり、
R3は、互いに独立して、OH、H、O−C1〜C12−アルキル、好ましくはOHまたはHであり、ここでC1〜C12−アルキルは、好ましくはCH3またはCH3−O−CH2CH2であり、
xは、独立して、10〜100、好ましくは15〜45、特に好ましくは16〜25であり、
nは、2〜20、好ましくは3〜10、特に好ましくは3〜6であり、
Aは、アデニンまたはアデニン誘導体であり、例えば8−ブロモアデニン、8−メチルアデニン、またはヒポキサンチンである。
ミスマッチとして下線で示した)。
その上、edg−1に対して向けられた以下のオリゴヌクレオチドが調製され、該オリゴヌクレオチドは、改善されたヌクレアーゼ安定性と、増加した阻害活性を有し、上記のedg−1配列から誘導された。
a)例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、NR1R1′ホスホロアミデート、ボランホスフェート、(C1〜C21)−O−アルキルホスフェート、[(C6〜C12)アリール−(C1−C21)−O−アルキル]ホスフェート、(C1〜C8)アルキルホス
ホネートおよび/または(C6〜C12)アリールホスホネート架橋で、リン酸ジエステル
架橋を、完全または部分的に置換すること、ここで、
R1およびR1′は、互いに独立して、水素、(C1〜C18)アルキル、(C6〜C20)アリール、(C6〜C14)アリール−(C1〜C8)アルキル、好ましくは水素、(C1〜C8
)アルキルおよび/またはメトキシエチル、特に好ましくは水素、(C1〜C4)アルキルおよび/またはメトキシエチルであり、または、
R1およびR1′は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、5〜6員環複素環(O、S、Nからなる群より選択された他のヘテロ原子をさらに含んでもよい)を形成する;
ホ」架橋で置換すること(例えば、Uhlmam,E.and Peyman,A.In“Methods in Molecular Biology”,Vol.20,“Prooocols for Oligonucleotides and Analogs”,S.Agrawal,Ed.,Humana Press,Totowa 199
3,Chapter16,355ffで説明された)、例えば、ホルムアセタール、3′−チオホルムアセタール、メチルヒドロキシルアミン、オキシム,メチレンジメチルヒドラゾ,ジメチレンスルホンおよび/またはシリル基で置換すること;
〜C6)アルケニルリボース、2′−[O−(C1〜C6)アルキル−O−(C1〜C6)ア
ルキル]リボース、2′−NH2−2′−デオキシリボース、β−D−キシロフラノース
、β−D−アラビノフラノース、α−アラビノフラノース、2,4−ジデオキシ−β−D−エリスロヘキソピラノース、立体構造的に制限された糖類似体(例えばLNA)(Locked Nucleic Acids;Singh et al.,Chem.Commun.4(1998)455;Singh et al.Chem.Commun.12(1998)1247)、および、炭素環(例えば、Froehler,J.Am.Chem.Soc.114(1992)8320で説明された)、および/または、開環した糖類似体(例えば、Vandendriessche et al.,Tetrahedron49(1993)7223で説明された)、および/または、ビシクロ糖類似体(例えば、M.Tarkov et al.,Helv.Chim.Acta76(1993)481で説明された)で、部分的にβ−D−リボース単位を置換すること。2′−修飾オリゴヌクレオチド類似体は、Manoharan,Biochim.Biophys.Acta(1999)117で詳細に説明され、立体構造的に制限されたオリゴヌクレオチド類似体は、Herdewijn,Biochim.Biopyhs.Acta(1999)167で詳細に説明される;
複素環式の塩基修飾は、例えば、Herdewijn,Antisense&Nucl.Acid Drug Dev.(2000)297に説明される。
CH(OH)−O−(C12〜C18)アルキルとの結合体である。このような分子は、5′および/または3′末端で、および/または、配列内で、例えば核酸塩基で結合させることができる。当業者既知のオリゴヌクレオチド結合体の例は、Manoharan(2001)Conjugated Oligonucleotides in Antisense technology.In:Crooke(Editor)Antisense technology.Marcel Dekker.New Yorkで説明される。
。
誘導体化は、前記オリゴヌクレオチドの細胞の摂取に有用である。
1)核の腫瘍性タンパク質、例えば、c−myc、N−myc、c−myb、c−fos、c−fos/jun、PCNA、p120、
2)細胞質/膜結合型腫瘍性タンパク質、例えば、EJ−ras、c−Ha−ras、N−ras、rrg、bcl−2、cdc−2、c−raf−1、c−mos、c−src、c−abl、c−ets、
3)細胞性受容体、例えば、EGF受容体、Her−2、c−erbA、VEGF受容体(KDR−1)、レチノイド受容体、タンパク質キナーゼ調節サブユニット、c−fms、Tie−2、c−raf−1キナーゼ、PKC−α、タンパク質キナーゼA(R1α)、
4)サイトカイン、成長因子、細胞外基質、例えば、CSF−1、IL−6、IL−1a、IL−1b、IL−2、IL−4、IL−6、IL−8、bFGF、VEGF、ミエロブラスチン、フィブロネクチン、
5)腫瘍抑制遺伝子の阻害剤、例えばMDM−2。
1)核のトランスアクチベータータンパク質およびサイクリン、例えば、c−myc、c−myb、c−fos、c−fos/jun、サイクリンおよびcdc2キナーゼ、
2)マイトジェンまたは成長因子、例えば、PDGF、bFGF、VEGF、EGF、
HB−EGFおよびTGF−β、
3)細胞性受容体、例えば、bFGF受容体、EGF受容体、および、PDGF受容体。
本発明はまた、例えば、β1−アドレナリン受容体またはEDGファミリーからのタンパク質(例えばEdg−1)の発現を阻害することにより、例えば心臓血管疾患を治療するためのオリゴヌクレオチドに関する。
本発明はまた、例えばPTP−1Bの発現を阻害することにより、例えば糖尿病を治療するためのオリゴヌクレオチドに関する。
1mg/kg〜約50mg/kg体重・1日である。
その上本発明は、オリゴヌクレオチドおよび/または生理学的に許容されるそれらの塩、加えて製薬上適切なキャリアーおよび/または添加物を含む医薬製剤に関する。
量%の治療上活性な化合物を含む。例えば、乾癬または白斑のような皮膚疾患の治療に関しては、例えば軟膏、ローションもしくはチンキ、乳濁液、または懸濁液の形態での局所適用が好ましい。該医薬製剤は、製薬上不活性な無機および/または有機キャリアーを用いて、それ自体既知の方法で製造される(例えばRemingtons Pharmaceutical Sciences,Mack Publ.Co.,Easton,PA.)。丸剤、錠剤、コーティング錠剤およびハードゼラチンカプセルの製造に関しては、例えばラクトース、コーンスターチおよび/またはそれらの誘導体、タルク、ステアリン酸および/またはそれらの塩などが用いることができる。ソフトゼラチンカプセルおよび/または坐剤のためのキャリアーの例は、油脂、ワックス、半固体および液体ポリオール、天然油および/または硬化油などである。液剤および/またはシロップの製造に適したキャリアーの例は、水、スクロース、転化糖、グルコース、ポリオールなどである。注射液の製造に適したキャリアーは、水、アルコール、グリセロール、ポリオール、植物油などである。マイクロカプセル、インプラントおよび/またはロッドに適したキャリアーは、グリコール酸と乳酸との混合ポリマーである。当業者既知のリポソーム製剤(N.Weiner,Drug Develop Ind Pharm15(1989)1523;”Liposome Dermatics,Springer Verlag 1992)、例えばHVJリポソーム(Hayashi,Gene Therapy3(1996)878)もまた適切である。皮膚への投与もまた、例えばイオノフォア法および/またはエレクトロポレーションを用いて可能である。加えて、リポフェクチン、およびその他のキャリアーシステム、例えば遺伝子治療で用いられるキャリアーシステムを用いることができる。特に適切なシステムは、優れた効率でオリゴヌクレオチドを真核細胞に導入するのに用いることができるシステムである。
用量は広い範囲で変えることができ、個々のケースにおいて、個々の状況に応じて調節するべきである。
a)3′aaaaaaCUUCGCUUCCAACACCUAGAC(小文字で示された塩基は2′5′インターヌクレオシド結合を有する)
ABI 394 DNAまたはExpediteシンセサイザー(Applied Biosystems,Weiterstadt,Germany)で合成を行った。製造元が推奨する合成サイクルを用いたが、ただしリボヌクレオシド−2′−O−ホスホロアミダイトに関しては、濃縮工程を2回行い(カップリング時間はそれぞれ400秒であった)、ヨウ素酸化工程の長さを30秒に増やした。用いられた固相は、糖の2′または3′位で5′−O−ジメトキシトリチル−N−6−ベンゾイルアデノシン(NSS−6101−10A,Chemgenes,Waltham,MA)を結合させた1000Åに調整された多孔質ガラス(CPG)支持体である。トリクロロ酢酸で開裂させて5′−O−ジメトキシトリチル基を除去した後、5′−O−ジメトキシトリチル−N−6−ベンゾイル−3′−O−tert−ブチルジメチルシリルアデノシン−2′−O−ホスホロアミダイト(ANP−5681,Chemgenes)で5回の濃縮により2′5′−結合オリゴヌクレオチド部分を合成した。これに続いて、対応する5′−O−ジメトキシトリチル−2′−O−tert−ブチルジメチルシリルヌクレオシド−3′−O−ホスホロアミダイト(ANP−5671〜ANP−5680,Chemgenes)で繰り返し濃縮することによって、3′5′−結合オリゴヌクレオチド部分を合成した。支持体からオリゴマーを分離し、リン酸基およびアミノ保護基脱保護するために、CPG支持体を、750μlの濃アンモニア/エタノール(3:1、v:v)で30℃で24時間振盪しながらインキュベートした。上清を支持体から分離し、次に、支持体を150μlの濃アンモニア/エタノール(3:1、v:v)で更に2回洗浄した。合わせた上清を減圧下で濃縮し、シリル保護基を除去するために、残留物を1200μlのトリエチルアミン×3HF(非常に毒性)中で振盪しながら30℃で24時間インキュベートした。これに続いて、700μlのn−ブタノールを加え、ドライアイス上で30分間混合物を冷却し、遠心分離した。ペレットをブタノールで更に2回洗浄した。加えて、塩化ナトリウム沈殿を次に行った。ゲル電気泳動において唯一の主要なバンドを示す112 OD(260)の粗生成物が得られた。生成物をさらにHPLCおよびエレクトロスプレーマススペクトロメトリー(ネガティブモード)で特徴付けた(計算値 8527.2,実測値 8527.5)。
実施例1のa)と同様にして合成を行い、5′−O−ジメトキシトリチル−N−6−ベンゾイル−3′−O−tert−ブチルジメチルシリルアデノシン−2′−O−ホスホロアミダイト(ANP−5681,Chemgenes)で3回の濃縮により2′5′−結合オリゴヌクレオチド部分を合成した。特定の酸化工程においてヨード液ではなくBeaucage試薬(RN−1535,Chemgenes,Waltham,MA)を用いることによって、ホスホロチオエート残基を導入した。ゲル電気泳動において唯一の主要なバンドを示す128 OD(260)の粗生成物が得られた。生成物をさらにHPLC
およびエレクトロスプレーマススペクトロメトリー(ネガティブモード)で特徴付けた(計算値 8061.6,実測値 8062.8)。
生物活性に関して試験するために、実施例1で説明したような以下のオリゴヌクレオチドを調製し、ルシフェラーゼ活性の阻害に関して試験した。
a)3′aaaaaaCUUCGCUUCCAACACCUAGAC
トランスフェクション:実験の前の日に、2×106細胞/mlを6ウェルプレートにプ
レーティングした。オリゴヌクレオチドを、100μlのSF 900II SFM(SF−900無血清昆虫細胞用培地II;Gibco BRL 10902−096)中に溶解した。トランスフェクションのために、10μlのリポフェクチン(1mg/ml;GibcoBRL)を100μlのSF 900II SFMと混合し、室温で15分間インキュベートした。これに続いて、リポフェクチンミックスと核酸とを共にピペッティングし、室温で15〜45分間インキュベートした。その間に、細胞を3mlの無血清培地で洗浄し、800μlのSF 900II SFMと核酸/リポフェクチン混合物とを連続的に細胞に加え、続いて、25℃で一晩インキュベートした。次の日、1mlの培地および血清(Gibco BRL 10122−166:最終濃度2%)を加える。
デュアル−ルシフェラーゼレポーター(DLR;プロメガE1960)アッセイシステム:( http://www.promega.com/catalog)。
S)再懸濁することにより、ルシフェラーゼ分析試薬II(LAR II)を調製した。St
op&GIo試薬の調製は、200μlのStop&Glo基質(溶液)を乾燥Stop&Glo基質を含むボトルに加え、ボルテクサーを用いて10秒間溶液を混合することによりなされた。1×Stop&Glo溶液を作製するために、20μlの50×Stop&Glo基質と、1mlのStop&Glo緩衝液を合わせる。これは、10回の分析に十分である。
入し、2〜3秒間上下にピペッティングすることにより混合した。ホタルルシフェラーゼ活性の照度測定の後、100μlのStop&Glo試薬を加え、溶液を混合し、続いて、ウミシイタケルシフェラーゼ活性を測定した。Fluoroskan Ascent FLルミノメーター(Thermo Labsystems,Frankfurt,Germany)を用いて発光を測定した。
ヒトの初期細胞における遺伝子発現の阻害に関して本発明のオリゴヌクレオチドを試験するために、前記オリゴヌクレオチドはまた、ヒト遺伝子または対応するRNAに対して向けられ、ヒト細胞(HUVEC、ヒト臍帯静脈内皮細胞)で試験された。
適切なオリゴヌクレオチドを合成した。最初の2つの配列はedg−1 RNAに相補
的であり、一方で、第三のオリゴヌクレオチドはミスマッチ塩基を有する。
トランスフェクション:実際のトランスフェクションの24時間前に、初期HUVEC(Jafee et al.,1973,J.Clin.Invest52,pp.27
45に従って単離された第二世代)を密度2.5×105細胞/ウェルでラットのコラーゲン−I(Biocoat,#354400,Becton Dickinson)で被覆した6ウェルプレートにプレーティングした。トランスフェクションのために、6μlのリポフェクチン(1mg/ml;GibcoBRL,#18292−011)を200μlの無血清Opti−MEM 1培地(GibcoBRL,31985−047)と混合し、
室温で15分間インキュベートした。パラレル反応において、10μM(→最終濃度0.
1(J.m)または100μM(→最終濃度1μM)のオリゴヌクレオチド溶液(PBS中、pH7.4)を無血清Opti−MEM 1培地で1:10の割合に希釈し、同量のプレインキュベートしたリポフェクチン溶液と混合した。室温で15分間インキュベートした後、前記混合物の量を無血清Opti−MEM 1培地で2mlに増やし、回収された細
胞をPBSで1回洗浄し、続いて、前記混合物と共に、37℃で、5%CO2および湿度
95%で4時間インキュベートした。その後、回収された細胞を再びPBSで洗浄し、続いて、血清含有EGM培地(CellSystems,#CC−3024+EGMサプリメント#CC−3124)で被覆し、さらに24または48時間インキュベートした。蛍光標識したオリゴヌクレオチドを用いた摂取の研究の場合において、細胞を4時間インキュベートし、続いて5%パラホルムアルデヒド(PBS中、pH7.4)で固定し、倍率200倍の倒立蛍光顕微鏡(Zeiss Axiovert135M)で、冷却したCCDカメラ(ORCA−1,Bfi optilas)を用いて、FITCフィルターを通して励起させて(励起:490nm,放出:510nm)直接撮影し、AQM2000ソフトウェア(Kinetic Imaging)で加工した。
向のオリゴリボヌクレオチド#2および#5は、発現を阻害しなかった。edg−1特異的オリゴリボヌクレオチド#3および#6で処理した後、チューブリンレベルではなくEDG−1タンパク質レベルのみが減少したことから、阻害は、標的遺伝子特異的であることが証明された。edg−1相同オリゴリボヌクレオチド#3および#6のみがedg−1発現を阻害したが、一方で、5個のヌクレオチドがedg−1配列とは異なるアンチセンス方向のオリゴリボヌクレオチド#8は、edg−1発現を阻害しなかったことから、阻害は、用いられたオリゴリボヌクレオチドに関して配列特異的でもあることが証明された。
Claims (24)
- 式I:
5′−(N)x−(Z)n 式I
[式中、Nは、標的RNAに対して相補的な天然に存在する、または天然に存在しないヌクレオチドであり、
xは、独立して、21〜100であり、
nは、2〜20であり、
Zは、2′5′インターヌクレオシド結合を介して結合した天然に存在する、または天然に存在しないヌクレオチドである]
で示され、遊離の5′−リン酸、5′−チオリン酸または5′−三リン酸残基を含まず、
ただし、その相同標的RNAは以下の配列パターン:
5′−(U)v−(N)z−(U)w
5′−(U)v−(N)z−UX
5′−UX−(N)z−UX、および、
5′−(U)v−(N)z、
(式中、vは、独立して、2〜20であり、
wは、独立して、2〜20であり、
zは、独立して、15〜25であり、
Uはウリジンであり、Nはアデノシン(A)、グアノシン(G)、シチジン(C)またはUであり、Xは、A、GまたはCである)
の1種を有する、
一本鎖オリゴヌクレオチド、またはその生理学的に許容される塩。 - xが21〜45である、請求項1に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- xが21〜25である、請求項2に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- nが2〜10である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- nが3〜6である、請求項4に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- Nがリボヌクレオチドである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- vが2〜10である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- vが3〜6である、請求項7に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- wが2〜10である、請求項6〜8のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- wが3〜6である、請求項9に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- zが16〜23である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- zが19〜21である、請求項11に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- Zがアデノシンまたは3′−デオキシアデノシンである、請求項1〜12のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- 1またはそれ以上の天然ホスホジエステル結合が、ヌクレアーゼ分解に対して安定な非天然のインターヌクレオチド結合で置換された、請求項1〜13のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- 1またはそれ以上の天然ホスホジエステル結合が、ホスホロチオエート結合で置換された、請求項1〜14のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- 複数の天然ホスホジエステル結合が、ホスホロチオエート結合で置換され、この改変は末端および内部ピリミジンヌクレオチドに位置する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の式Iで示されるオリゴヌクレオチド。
- 初めに、標的遺伝子に相補的なオリゴヌクレオチドを調製し、このオリゴヌクレオチドを生体外で細胞に導入し、この細胞をインキュベートし、次に、コントロール細胞中の対応するmRNAまたは対応する遺伝子産物の量を比較測定することにより、標的遺伝子の遺伝子発現阻害を測定する、請求項1〜16のいずれか一項に記載の、1またはそれ以上のオリゴヌクレオチドを用いて細胞での標的遺伝子の遺伝子発現を阻害する生体外方法。
- 2′5′−オリゴアデニレートシンターゼが、コントロール細胞に比べて低く発現されるか、または、不完全である細胞中で標的遺伝子の遺伝子発現を阻害する、請求項17に記載の生体外方法。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチド、ならびに、添加物および/またはキャリアー、ならびに、必要に応じて、医薬を製造または処方するための賦形剤を含む医薬。
- 腫瘍治療、感染症の治療または予防、ウイルス性疾患の治療または予防、炎症または喘
息の治療、あるいは心臓血管性疾患または代謝性疾患の治療のための、 請求項19に記載の医薬。 - 新規の治療用標的遺伝子を同定または確認するための、請求項1〜16のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
- 作物保護研究において、新規の標的遺伝子を同定または確認するための、請求項1〜16のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
- 初めに、オリゴヌクレオチドを溶液中または固相で、連続カップリングまたは一括したカップリングにより調製し、調製後に単離および精製する、請求項1〜16のいずれか一項に記載のオリゴヌクレオチドの調製方法。
- 請求項23に記載のオリゴヌクレオチド誘導体を調製し、必要に応じてさらなる添加物および/またはキャリアー、ならびに、必要に応じて賦形剤と混合する、医薬を調製する方法。
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