JP4575920B2

JP4575920B2 - 免疫抑制化合物および組成物

Info

Publication number: JP4575920B2
Application number: JP2006533219A
Authority: JP
Inventors: トーマス・エイチ・マーシルジェ; ナサニエル・エス・グレイ; ジャン・タオ; ウェンシュオ・ル; パン・シフェン
Original assignee: IRM LLC
Current assignee: IRM LLC
Priority date: 2003-05-19
Filing date: 2004-05-19
Publication date: 2010-11-04
Anticipated expiration: 2024-05-19
Also published as: CN1791592A; PL1638551T3; CN1791395B; CN1787817B; EP1638551A4; CN1816544B; JP2006528987A; CN1791395A; CY1112505T1; CA2524054C; US7060697B2; PT1638551E; US7462629B2; CN1791592B; BRPI0410454A; SI1638551T1; CN1787817A; US20050009786A1; ZA200508203B; US20050014724A1

Description

発明の詳細な説明

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願番号６０／４７１,９３１(２００３年５月１９日出願)の優先権の利益を主張する。これらの出願の全部の記載は、引用により、その全体として、かつすべての目的に関して、本出願に包含される。

発明の背景
技術分野
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害、特にＥＤＧ受容体介在シグナル伝達が関連する疾患の処置または予防に有用な免疫抑制化合物の新規クラスを提供する。

背景技術
ＥＤＧ受容体は、密接に関係した、脂質活性化Ｇ−タンパク質結合受容体のファミリーに属する。ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８(各々Ｓ１Ｐ１、Ｓ１Ｐ３、Ｓ１Ｐ２、Ｓ１Ｐ４、およびＳ１Ｐ５とも呼ばれる)は、スフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)に特異的な受容体である。ＥＤＧ２、ＥＤＧ４、およびＥＤＧ７(各々ＬＰＡ１、ＬＰＡ２、およびＬＰＡ３とも呼ばれる)は、リゾホスファチジン酸(lysophosphatidic)(ＬＰＡ)に特異的な受容体である。Ｓ１Ｐ受容体アイソタイプの中で、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３およびＥＤＧ−５は種々の組織で広範囲に発現されるが、一方ＥＤＧ−６の発現は主としてリンパ組織および血小板で、そしてＥＤＧ−８は中枢神経系で確認される。ＥＤＧ受容体はシグナル伝達を担い、細胞発育、増殖、維持、移動、分化、可塑性およびアポトーシスを含む細胞過程において重要な役割を演ずると考えられている。あるＥＤＧ受容体は、リンパ球相互作用が介在する疾患、例えば、移植拒絶反応、自己免疫性疾患、炎症性疾患、感染症および癌と関連する。ＥＤＧ受容体活性の変更が、これらの疾患の病態および／または総体症状に関与する。したがって、それ自体ＥＤＧ受容体の活性を変える分子が、このような疾患の処置における治療剤として有用である。

発明の概要
本発明は、式Ｉ：

〔式中、
Ａは−Ｃ(Ｏ)ＯＲ_５、−ＯＰ(Ｏ)(ＯＲ_５)_２、−Ｐ(Ｏ)(ＯＲ_５)_２、−Ｓ(Ｏ)_２ＯＲ_５、−Ｐ(Ｏ)(Ｒ_５)ＯＲ_５および１Ｈ−テトラゾール−５−イルから選択され；ここで各Ｒ_５は、独立して水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；
Ｘ_１およびＸ_２は、各々独立して結合またはＣ_１−６アルキレンから選択され；
Ｚは：

(式中、Ｚの左右のアスタリスクは式Ｉの−Ｃ(Ｒ_３)(Ｒ_４)−とＡの結合点を各々示し；Ｒ_６は水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；そしてＪ_１およびＪ_２は、独立してメチレンまたはＳ、ＯおよびＮＲ_５から選択されるヘテロ原子であり；ここでＲ_５は水素およびＣ_１−６アルキルから選択される)
から選択され；
Ｒ_１はＣ_６−１０アリールおよびＣ_２−９ヘテロアリールから選択され；ここでＲ_１の任意のアリールまたはヘテロアリールは、所望により、ハロ、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルから選択されるラジカルで置換されており；ここでＲ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望により、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_１の任意のアルキル基は、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_５−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここでＲ_５は水素またはＣ_１−６アルキルから選択され；
Ｒ_２はＣ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、Ｃ_３−１２シクロアルキルＣ_０−４アルキル、ハロ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択され；
Ｒ_３およびＲ_４は、独立して水素、Ｃ_１−６アルキル、ハロ、ヒドロキシ、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換Ｃ_１−６アルコキシから選択される。〕
の化合物ならびにそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；およびこのような化合物の薬学的に許容される塩および溶媒和物(例えば水和物)に関する。

本発明の第２の局面は、式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物、またはその薬学的に許容される塩を、１個またはそれ以上の適当な賦形剤と共に含む、医薬組成物である。

本発明の第３の局面は、動物における、ＥＤＧ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状を予防、阻害または軽減できるものである疾患を処置する方法であり、動物に治療的有効量の式Ｉの化合物またはそのＮ−オキシド誘導体、個々の異性体または異性体の混合物；またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法である。

本発明の第４の局面は、動物における、ＥＤＧ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状に関与するものである疾患の処置用医薬の製造における式Ｉの化合物の使用である。

本発明の第５の局面は、式Ｉの化合物およびそのＮ−オキシド誘導体、プロドラッグ誘導体、保護された誘導体、個々の異性体および異性体の混合物；およびその薬学的に許容される塩の製造法である。

好ましい態様の記載
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害の処置および／または予防に有用な化合物を提供する。また提供されるのは、このような疾患または障害を処置する方法である。

定義
本明細書中、特記しない限り：
基または他の基、例えばハロ−置換−アルキル、アルコキシ、アシル、アルキルチオ、アルキルスルホニルおよびアルキルスルフィニルの構造要素としての“アルキル”は、直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。基または他の基の構造要素としての“アルケニル”は、１個またはそれ以上の炭素−炭素二重結合を含み、かつ直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。すべての二重結合は、ｃｉｓ−またはｔｒａｎｓ−立体配置であり得る。基または他の基の構造要素としての“アルキニル”は、少なくとも１個のＣ≡Ｃ三重結合を含み、かつまた１個またはそれ以上のＣ＝Ｃ二重結合を含んでよく、かつ、可能である限り、直鎖または分枝鎖のいずれでもあり得る。単独または他の基の構造要素としてのシクロアルキル基は、３から８炭素原子、好ましくは３から６炭素原子を含んでよい。“アルキレン”および“アルケニレン”は、各々“アルキル”基および“アルケニル”基に由来する２価基である。本明細書中、Ｒ^１の任意のアルキル基は、所望により、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ^２０−および−Ｏ−(式中、Ｒ^２０は水素またはＣ_１−６アルキルである)から選択される群のメンバーで中断されていてよい。このような基は、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｓ(Ｏ)_２−ＣＨ_２−、−(ＣＨ_２)_２−ＮＲ^２０−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２−Ｏ−(ＣＨ_２)_２−などを含む。

“アリール”は、６個から１０個の環炭素原子を含む、単環式または縮合二環式芳香環集合体を意味する。例えば、Ｃ_６−１２アリールはフェニル、ビフェニルまたはナフチル、好ましくはフェニルであり得る。縮合二環式環は、部分飽和、例えば、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフタレンなどであり得る。“アリーレン”は、アリール基由来の２価基を意味する。例えば、本明細書で使用するアリーレンは、フェニレン、ビフェニレン、ナフチレンなどであり得る。

“ハロ”または“ハロゲン”は、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩ、好ましくはＦまたはＣｌを意味する。ハロ−置換アルキル基および化合物は、部分的にハロゲン化されまたは過ハロゲン化されていてよく、複数ハロゲン化の場合、ハロゲン置換基は同一または異なり得る。好ましい過ハロゲン化アルキル基は、例えばトリフルオロメチルまたはトリフルオロメトキシである。

“ヘテロアリール”は、特記しない限り、Ｎ、ＯまたはＳから選択される少なくとも１個のヘテロ原子部分が付加され、かつ、各環が５から６環原子からなる、本明細書で定義のアリールである。例えば、Ｃ_２ヘテロアリールは、オキサジアゾール、トリアゾールなどを含む。Ｃ_９ヘテロアリールはキノリン、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリンなどを含む。本明細書で使用するＣ_２−９ヘテロアリールはチエニル、ピリジニル、フラニル、イソオキサゾリル、ベンゾオキサゾリルまたはベンゾ[１,３]ジオキソリル、好ましくはチエニル、フラニルまたはピリジニルを含む。“ヘテロアリーレン”は、環集合体が２価ラジカルを含むときの、本明細書で定義のヘテロアリールを意味する。縮合二環式ヘテロアリール環系は部分的に飽和され、例えば、２,３−ジヒドロ−１Ｈ−イソインドール、１,２,３,４−テトラヒドロ−キノリンなどである。

本明細書で使用するＥＤＧ−１選択的化合物(薬剤またはモジュレーター)は、ＥＤＧ−３を超え、かつ、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個を超えてＥＤＧ−１に選択的である特異性を有する。本明細書で使用する他のＥＤＧ受容体(“非選択的受容体”)を超える１個のＥＤＧ受容体(“選択的受容体”)に対する選択性は、該化合物が、該選択的ＥＤＧ受容体(例えば、ＥＤＧ−１)が介在する活性の誘導に、非選択的Ｓ１Ｐ−特異的ＥＤＧ受容体に対するよりもより高い効果を有することを意味する。ＧＴＰ−γＳ結合アッセイで測定したとき(下記実施例に記載した通り)、ＥＤＧ−１選択的化合物は、典型的に、非選択的受容体(例えば、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６、およびＥＤＧ−８の１個またはそれ以上)に対するＥＣ５０(最大応答の５０％をもたらす濃度)よりも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍低い、選択的受容体(ＥＤＧ−１)に対するＥＣ５０を有する。

発明の詳細な説明
本発明は、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害の処置または予防に有用な化合物を提供する。一つの態様において、式Ｉの化合物に関して、Ｒ_１が所望によりハロ、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルで置換されているフェニル、ナフチル、フラニルまたはチエニルであり；ここでＲ_１の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、ハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から５個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ^１の任意のアルキル基は、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_５−および−Ｏ−から選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここでＲ_５は水素またはＣ_１−６アルキルである。

さらなる態様において、Ｒ_１が：

(式中、アスタリスクはＲ_１とＸ_２の結合点を示し；Ｒ_８はハロ、Ｃ_６−１０アリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_２−９ヘテロアリールＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルＣ_０−４アルキル、Ｃ_３−８ヘテロシクロアルキルＣ_０−４アルキルまたはＣ_１−６アルキルであり；ここでＲ_８の任意のアリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基またはヘテロシクロアルキル基は、所望によりハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_８の任意のアルキル基は、−Ｓ−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)_２−、−ＮＲ_５−および−Ｏ−メチレンから選択される原子または基で置換されたメチレンを有してよく；ここでＲ_５は水素またはＣ_１−６アルキルであり；そしてＲ_９はハロ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、ハロ−置換−Ｃ_１−６アルキルおよびハロ−置換−Ｃ_１−６アルコキシである)
から選択される。

他の態様において、ＡＡが−Ｃ(Ｏ)ＯＨであり；Ｚが：

(式中、Ｚの左右のアスタリスクは式Ｉの−Ｃ(Ｒ_３)(Ｒ_４)−とＡの結合点を各々示し；Ｒ_６は水素およびＣ_１−６アルキルから選択され；そしてＲ_３およびＲ_４は両方とも水素である)
から選択される。

他の態様において、Ｒ_２がメチル、エチル、シクロプロピル、クロロ、ブロモ、フルオロおよびメトキシから選択される。

他の態様において、Ｒ_１が：

(式中、Ｒ_８はハロ、フェニル、シクロヘキシル、チエニル、３,３−ジメチル−ブチル、ピリジニル、シクロペンチルおよびピペリジニルから選択され；ここでＲ_８は、所望により、トリフルオロメチル、メトキシ、フルオロ、トリフルオロメトキシおよびメチルから選択される１個から３個のラジカルで置換されていてよく；そしてＲ_９はトリフルオロメチル、フルオロ、メチル、クロロ、メトキシおよびエチルから選択される)
から選択される。

本発明の好ましい化合物は、１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、１−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−メチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(４−ブロモ−３−メチル−フェニルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、１−[４−(２−メチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、３−[４−(２'−エチル−２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(２'−エチル−２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメタンスルフィニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸および３−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸から選択される。

さらに、好ましい化合物はまた下記実施例および表１に示す。

本発明は、保護された形で存在するヒドロキシルまたはアミン基を有する化合物の形を提供する；これらはプロドラッグとして働く。プロドラッグは、投与後に、１つまたはそれ以上の生化学的変換を経由して活性薬剤形に変換される化合物である。生理学的条件下で容易に請求の化合物に変換される本発明の化合物の形は、請求の化合物のプロドラッグであり、本発明の範囲内である。プロドラッグの例は、ヒドロキシル基が酢酸エステルのような相対的に不安定なエステルにアシル化されている形、およびアミン基がグリシンもしくはセリンのようなＬ−アミノ酸のカルボン酸基でアシル化され、一般的な代謝酵素による加水分解を特に受けやすいアミド結合を形成している形を含む。

式Ｉの化合物は、遊離形または塩形、例えば無機または有機酸の付加塩で存在できる。ヒドロキシル基が存在するとき、これらの基はまた塩形、例えばアンモニウム塩またはリチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛もしくはマグネシウム、またはそれらの混合物のような金属との塩として存在できる。水和物または溶媒和物の形の式Ｉの化合物およびそれらの塩も本発明の一部である。

式Ｉの化合物が分子中に不斉中心を有するとき、種々の光学異性体が得られる。本発明はまたエナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオ異性体およびこれらの混合物も含む。さらに、式Ｉの化合物が幾何学異性体を含むとき、本発明はまたｃｉｓ−化合物、ｔｒａｎｓ−化合物およびそれらの混合物を包含する。同様の解釈が、上記のような不斉炭素原子または不飽和結合を示す出発物質に関しても適用される。

免疫調節状態を処置するための方法および組成物
遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物は、例えば、実施例５のインビトロおよびインビボ試験で示されるような、価値のある薬理学的特性、例えばリンパ球再循環調節特性を示し、したがって、治療に適用される。式Ｉの化合物は、好ましくは１×１０^−１１から１×１０^−５Ｍの範囲の、好ましくは５０nMより小さいＥＣ_５０を示す。本化合物は、１個またはそれ以上のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体、好ましくはＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１に選択性を示す。本発明のＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１への、および１個またはそれ以上のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体(例えば、ＥＤＧ−３／Ｓ１Ｐ−３、ＥＤＧ−５／Ｓ１Ｐ−２、ＥＤＧ−６／Ｓ１Ｐ−４、およびＥＤＧ−８／Ｓ１Ｐ−５)への化合物の結合をアッセイすることにより同定できる。ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的モジュレーターは、通常、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１受容体に１×１０^−１１から１×１０^−５Ｍの範囲の、好ましくは５０nMより小さい、より好ましくは５nMより小さいＥＣ５０を示す。それはまた１個またはそれ以上の他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体についてＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１のＥＣ５０よりも少なくとも５、１０、２５、５０、１００、５００、または１０００倍高いＥＣ５０を示す。故に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１調節化合物のいくつかは、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１について５nMより小さいＥＣ５０を示し、その１個またはそれ以上の他のＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体についてのＥＣ５０は、少なくとも１００nMまたはそれより高い。ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体に対する結合活性を測定する以外に、ＥＤＧ−１／Ｓ１Ｐ−１選択的薬剤はまたＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体が介在する細胞過程または活性を調節する薬剤の能力を試験することにより同定できる。

式Ｉの化合物は、したがって、リンパ球相互作用が介在する疾患または障害、例えば移植において、例えば、細胞、組織または臓器の同種−または異種移植の急性または慢性拒絶反応または移植片機能の遅発、移植片対宿主病、自己免疫性疾患、例えばリウマチ性関節炎、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型またはII型糖尿病およびその合併症、脈管炎、悪性貧血、シェーグレン症候群、ブドウ膜炎、乾癬、グレーブス眼症、円形脱毛症およびその他、アレルギー性疾患、例えばアレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎／結膜炎、アレルギー性接触性皮膚炎、所望により異常反応が根底にある炎症性疾患、例えば炎症性腸疾患、クローン病または潰瘍性大腸炎、内因性喘息、炎症性肺傷害、炎症性肝臓傷害、炎症性糸球体傷害、アテローム性動脈硬化症、骨関節症、刺激性接触性皮膚炎および別の湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、免疫介在障害の皮膚症状、炎症性眼疾患、角結膜炎、心筋炎または肝炎、虚血／再潅流傷害、例えば心筋梗塞、卒中、腸虚血、腎不全または出血性ショック、外傷性ショック、Ｔ細胞リンパ腫またはＴ細胞白血病、感染症、例えば毒素ショック(例えば超抗原誘発)、敗血症性ショック、成人呼吸窮迫症候群またはウイルス感染、例えばＡＩＤＳ、ウイルス性肝炎、慢性細菌感染、または老人性痴呆の処置および／または予防に有用である。細胞、組織または固形臓器移植の例は、例えば膵臓島、幹細胞、骨髄、角膜組織、神経組織、心臓、肺、複合心臓−肺、腎臓、肝臓、腸、膵臓、気管または食道を含む。上記使用に関して、必要な投与量はもちろん投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化するであろう。

さらに、式Ｉの化合物は癌化学療法、特に固形腫瘍、例えば乳癌の癌化学療法に、または抗血管形成薬剤として有用である。

必要な投与量は、もちろん、投与の形態、処置すべき特定の状態および所望の効果に依存して変化するであろう。一般に、十分な結果が、約０.０３から２.５mg／体重kgの全身一日投与量で得られることが示される。大型哺乳類、例えばヒトにおいて指示される一日投与量は、約０.５mgから約１００mgの範囲であり、簡便には、例えば、１日４回までの分割投与量でまたは徐放性形で投与する。経口投与のための適当な単位投与形は、約１から５０mgの活性成分を含む。

式Ｉの化合物は、任意の慣用の経路で、特に経腸的に、例えば、経口で、例えば錠剤またはカプセルの形で、または非経腸的に、例えば、注射溶液または懸濁液の形で、局所的に、例えばローション、ジェル、軟膏またはクリームの形で、または経鼻または坐薬形で投与できる。遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、少なくとも１個の薬学的に許容される担体または希釈剤と共に含む医薬組成物は、慣用法で、薬学的に許容される担体または希釈剤との混合により製造できる。

式Ｉの化合物は、例えば、上記の通りの、遊離形または薬学的に許容される塩形で投与できる。このような塩は慣用法で製造でき、遊離化合物と同程度の活性を示す。

前記によって、本発明はさらに下記を提供する：
１.１処置を必要とする対象における、例えば、上記の通りの、リンパ球が介在する障害または疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.２処置を必要とする対象における、例えば、上記の通りの、急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性または自己免疫性疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.３処置を必要とする対象における、無秩序な血管形成、例えばスフィンゴシン−１−ホスフェート(Ｓ１Ｐ)介在血管形成を阻害または制御する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

１.４処置を必要とする対象における、新規血管形成過程が介在するまたは無秩序な血管形成が関連する疾患を予防または処置する方法であり、該対象に、有効量の式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む、方法。

２. 医薬として、例えば、上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための、遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物。

３. 遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物を、薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む、例えば、上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物。

４. 上記１.１から１.４に示す方法のいずれかにおいて使用するための医薬組成物の製造において使用するための、式Ｉの化合物またはその薬学的に許容される塩。

式Ｉの化合物は、唯一の活性成分として、または、例えばアジュバントとして、他の薬剤と、例えば同種−もしくは異種移植片急性もしくは慢性拒絶反応または炎症性または自己免疫性障害の処置または予防のためには例えば免疫抑制剤もしくは免疫調節剤または他の抗炎症剤と、または化学療法剤、例えば悪性細胞抗増殖剤と併用して投与してよい。例えば式Ｉの化合物は、カルシニューリン阻害剤、例えばシクロスポリンＡまたはＦＫ５０６；ｍＴＯＲ阻害剤、例えばラパマイシン、４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシン、ＣＣＩ７７９、ＡＢＴ５７８またはＡＰ２３５７３；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えばＡＢＴ−２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；シクロホスファミド；アザチオプレン；メトトレキサート；レフルノミド；ミゾルビン；ミコフェノール酸；ミコフェノール酸モフェチル；１５−デオキシスペルグアリンまたはその免疫抑制性ホモログ、アナログまたは誘導体；免疫抑制性モノクローナル抗体、例えば白血球受容体、例えばＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６またはそれらのリガンドに対するモノクローナル抗体；他の免疫調節化合物、例えばＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外ドメイン少なくとも一部、例えば非ＣＴＬＡ４タンパク質配列に結合したＣＴＬＡ４またはその変異体の細胞外領域の少なくとも一部を有する組み換え結合分子、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えば、名称ＡＴＣＣ６８６２９)またはその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子阻害剤、例えばＬＦＡ−１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ−１または−３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−４アンタゴニストまたはＶＬＡ−４アンタゴニスト；または化学療法剤と併用して使用できる。

“化学療法剤”なる用語は、すべての化学療法剤を意味し、
ｉ. アロマターゼ阻害剤、
ii. 抗エストロゲン、抗アンドロゲン(とりわけ前立腺癌の場合)またはゴナドレリンアゴニスト、
iii. トポイソメラーゼＩ阻害剤またはトポイソメラーゼII阻害剤、
iv. 微小管活性化剤、アルキル化薬剤、抗新生物代謝拮抗剤またはプラチン化合物、
ｖ. タンパク質または脂質キナーゼ活性またはタンパク質または脂質ホスファターゼ活性をターゲッティング／減少させる化合物、さらなる抗血管形成化合物または細胞分化過程を誘発する化合物、
vi. ブラジキニン１受容体またはアンギオテンシンIIアンタゴニスト、
vii. シクロオキシゲナーゼ阻害剤、ビスホスホネート、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤、ヘパラナーゼ阻害剤(ヘパランスルフェート分解を防止)、例えばＰＩ−８８、生物学的応答修飾剤、好ましくはリンフォカインまたはインターフェロン、例えばインターフェロン□、ユビキチン化阻害剤、または抗アポトーシス経路を遮断する阻害剤、
viii.Ｒａｓ発癌性アイソフォーム、例えばＨ−Ｒａｓ、Ｋ−ＲａｓまたはＮ−Ｒａｓの阻害剤、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばＬ−７４４,８３２またはＤＫ８Ｇ５５７、
ix. テロメラーゼ阻害剤、例えばテロメスタチン、
ｘ. プロテアーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤、例えばベンガミドまたはその誘導体、またはプロテオソーム阻害剤、例えばＰＳ−３４１、および／または
xi. ｍＴＯＲ阻害剤
を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“アロマターゼ阻害剤”は、エストロゲン産生、すなわち基質アンドロステンジオンおよびテストステロンから各々エストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する化合物に関する。本用語は、ステロイド、とりわけアタメスタン、エキセメスタンおよびホルメスタンおよび、特に、非ステロイド、とりわけアミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールを含むが、これらに限定されない。アロマターゼ阻害剤である化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にホルモン受容体陽性腫瘍、例えば***腫瘍の処置に有用である。

本明細書で使用する“抗エストロゲン”なる用語は、エストロゲンの効果と、エストロゲン受容体レベルで拮抗する化合物に関する。本用語は、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよび塩酸ラロキシフェンを含むが、これらに限定されない。抗エストロゲンである化学療法剤を含む本発明の組み合わせは、特にエストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば***腫瘍の処置に有用である。

本明細書で使用する“抗アンドロゲン”なる用語は、アンドロゲンホルモンの生物学的効果を阻害できる任意の物質に関し、ビカルタミドを含むが、これに限定されない。

本明細書で使用する“ゴナドレリンアゴニスト”なる用語は、アバレリックス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“トポイソメラーゼＩ阻害剤”なる用語は、トポテカン、イリノテカン、９−ニトロカンプトテシンおよび巨大分子カンプトテシン・コンジュゲート・ＰＮＵ−１６６１４８(ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１)を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“トポイソメラーゼII阻害剤”なる用語は、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシンのようなアントラサイクリン、アントラキノンであるミトキサントロンおよびロソキサントロン、およびポドフィロトキシンであるエトポシドおよびテニポシドを含むが、これらに限定されない。

“微小管活性化剤”なる用語は、微小管安定化および微小管脱安定化剤に関し、タキサン、例えばパクリタキセルおよびドセタキセル、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、とりわけ硫酸ビンブラスチン、ビンクリスチン、とりわけ硫酸ビンクリスチン、およびビノレルビン、ジスコデルモライドおよびエポシロンおよびそれらの誘導体、例えばエポシロンＢまたはその誘導体を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“アルキル化剤”なる用語は、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファランまたはニトロソウレア(ＢＣＮＵまたはGliadel^ＴＭ)を含むが、これらに限定されない。

“抗新生物代謝拮抗剤”は、５−フルオロウラシル、カペシタビン、ゲムシタビン、シタラビン、フルダラビン、チオグアニン、メトトレキサートおよびエダトレキサートを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“プラチン化合物”なる用語は、カルボプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチンを含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“タンパク質または脂質キナーゼ活性をターゲッティング／減少させる化合物またはさらなる抗血管形成化合物”は、タンパク質チロシンキナーゼおよび／またはセリンおよび／またはスレオニンキナーゼ阻害剤または脂質キナーゼ阻害剤、例えば受容体チロシンキナーゼの上皮成長因子ファミリー(ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、モノ−またはヘテロダイマーとして)、受容体チロシンキナーゼの血管内皮細胞増殖因子ファミリー(ＶＥＧＦＲ)、血小板由来増殖因子受容体(ＰＤＧＦＲ)、繊維芽細胞増殖因子受容体(ＦＧＦＲ)、インシュリン様増殖因子受容体１(ＩＧＦ−１Ｒ)、Ｔｒｋ受容体チロシンキナーゼファミリー、Ａｘｌ受容体チロシンキナーゼファミリー、Ｒｅｔ受容体チロシンキナーゼ、Ｋｉｔ／ＳＣＦＲ受容体チロシンキナーゼ、ｃ−Ａｂｌファミリーのメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物(例えばＢＣＲ−Ａｂｌ)、タンパク質キナーゼＣ(ＰＫＣ)およびセリン／スレオニンキナーゼのＲａｆファミリーのメンバー、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫ、ＰＤＫまたはＰＩ(３)キナーゼファミリーのメンバー、またはＰＩ(３)−キナーゼ−関連キナーゼファミリーのメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)のメンバーの活性をターゲッティングし、減少させ、または阻害する化合物ならびに活性に関して他の、例えば、タンパク質または脂質キナーゼに無関係の機構を有する抗血管形成化合物を含むが、これらに限定されない。

ＶＥＧＦＲの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼを阻害し、ＶＥＧＦ受容体を阻害し、またはＶＥＧＦに結合する化合物、タンパク質または抗体であり、そして特にＷＯ９８／３５９５８に一般的にかつ具体的に記載の、例えば１−(４−クロロアニリノ)−４−(４−ピリジルメチル)フタラジンまたはその薬学的に許容される塩、例えばコハク酸塩、ＷＯ００／２７８２０に一般的にかつ具体的に記載の、例えばＮ−アリール(チオ)アントラニル酸アミド誘導体、例えば２−[(４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−メトキシ−５−(トリフルオロメチル)フェニル]ベンズアミドまたは２−[(１−オキシド−４−ピリジル)メチル]アミノ−Ｎ−[３−トリフルオロメチルフェニル]ベンズアミド、またはＷＯ００／０９４９５、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に一般的にかつ具体的に記載の化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体；M. Prewett et al in Cancer Research 59(1999) 5209-5218、F. Yuan et al in Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 93, pp. 14765-14770, Dec. 1996、Z. Zhu et al in Cancer Res. 58, 1998, 3209-3214、およびJ. Mordenti et al in Toxicologic Pathology, Vol. 27, no. 1, pp 14-21, 1999に記載のもの；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２記載のもの；M. S. O'Reilly et al, Cell 79, 1994, 315-328により記載のAngiostatin^ＴＭ；M. S. O'Reilly et al, Cell 88, 1997, 277-285により記載のEndostatin^ＴＭ；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；または抗ＶＥＧＦ抗体または抗ＶＥＧＦ受容体抗体、例えばＲｈｕＭａｂである。

抗体は、完全なモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全な抗体から形成された多特異性抗体、および所望の生物学的活性を示す限り、抗体フラグメントを意味する。

上皮成長因子受容体ファミリーの活性をターゲットとし、減少させまたは阻害する化合物は、とりわけ、ＥＧＦ受容体チロシンキナーゼファミリー、例えばＥＧＦ受容体、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３およびＥｒｂＢ４のメンバーを阻害するかまたはＥＧＦリガンドもしくはＥＧＦ関連リガンドと結合するか、または、ＥｒｂＢおよびＶＥＧＦ受容体キナーゼに二重の阻害効果を有する化合物、タンパク質または抗体、特に一般的にかつ具体的にＷＯ９７／０２２６６に記載されている、例えば実施例３９の化合物、またはＥＰ０５６４４０９、ＷＯ９９／０３８５４、ＥＰ０５２０７２２、ＥＰ０５６６２２６、ＥＰ０７８７７２２、ＥＰ０８３７０６３、ＵＳ５,７４７,４９８、ＷＯ９８／１０７６７、ＷＯ９７／３００３４、ＷＯ９７／４９６８８、ＷＯ９７／３８９８３に記載されている、とりわけ、ＷＯ９６／３０３４７(例えばＣＰ３５８７７４として既知の化合物)、ＷＯ９６／３３９８０(例えば化合物ＺＤ１８３９)およびＷＯ９５／０３２８３(例えば化合物ＺＭ１０５１８０)またはＰＣＴ／ＥＰ０２／０８７８０に記載の化合物、タンパク質またはモノクローナル抗体；例えばトラスツズマブ(Herpetin^Ｒ)、セツキシマブ、Iressa、ＯＳＩ−７７４、ＣＩ−１０３３、ＥＫＢ−５６９、ＧＷ−２０１６、Ｅ１.１、Ｅ２.４、Ｅ２.５、Ｅ６.２、Ｅ６.４、Ｅ２.１１、Ｅ６.３またはＥ７.６.３である。

ＰＤＧＦＲの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブである。

ｃ−ＡｂＩファミリーメンバーおよびそれらの遺伝子融合産物の活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、例えばＮ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ；ＰＤ１８０９７０；ＡＧ９５７；またはＮＳＣ６８０４１０である。

タンパク質キナーゼＣ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、ＳＲＣ、ＪＡＫ、ＦＡＫおよびＰＤＫファミリーメンバー、またはＰＩ(３)キナーゼまたはＰＩ(３)キナーゼ−関連ファミリーメンバー、および／またはサイクリン依存性キナーゼファミリー(ＣＤＫ)のメンバーの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、とりわけＥＰ０２９６１１０に記載のスタウロスポリン誘導体、例えばミドスタウリンである；さらなる化合物の例は、例えばＵＣＮ−０１、サフィンゴル(safingol)、ＢＡＹ４３−９００６、Bryostatin 1、Perifosine；Ilmofosine；RO 318220およびRO 320432；GO6976；Isis 3521；またはLY333531/LY379196を含む。

さらなる抗血管形成化合物は、例えばサリドマイド(THALOMID)およびTNP-470である。

タンパク質または脂質ホスファターゼの活性をターゲットとし、減少させ、または阻害する化合物は、例えばホスファターゼ１、ホスファターゼ２Ａ、ＰＴＥＮまたはＣＤＣ２５の阻害剤、例えばオカダ酸またはその誘導体である。

細胞分化過程を誘発する化合物は、例えばレチノイン酸、α−、γ−またはδ−トコフェロールまたはα−、γ−またはδ−トコトリエノールである。

本明細書で使用するシクロオキシゲナーゼ阻害剤なる用語は、例えばセレコキシブ(Celebrex^Ｒ)、ロフェコキシブ(Vioxx^Ｒ)、エトリコキシブ、バルデコキシブまたは５−アルキル−２−アリールアミノフェニル酢酸、例えば５−メチル−２−(２'−クロロ−６'−フルオロアニリノ)フェニル酢酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ヒストンデアセチラーゼ阻害剤”なる用語は、MS-27-275、SAHA、ピロキサミド、FR-901228またはバルプロ酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ビスホスホネート”なる用語は、エチドロン酸(etridonic)、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸およびゾレドロン酸を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤”なる用語は、コラーゲンペプチド模倣および非ペプチド模倣阻害剤、テトラサイクリン誘導体、例えばヒドロキサメートペプチド模倣物阻害剤であるバチマスタットおよびその経口生物利用可能アナログであるマリマスタット、プリノマスタット(prinomastat)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211またはAAJ996を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用する“ｍＴＯＲ阻害剤”なる用語は、ラパマイシン(シロリムス)またはその誘導体、例えば３２−デオキソラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２−デオキソ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−ラパマイシン、１６−ペント−２−イニルオキシ−３２(Ｓ)−ジヒドロ−４０−Ｏ−(２−ヒドロキシエチル)−ラパマイシンおよび、より好ましくは、４０−０−(２−ヒドロキシ−エチル)−ラパマイシンを含むが、これらに限定されない。ラパマイシン誘導体のさらなる例は、例えばＵＳＰ５,３６２,７１８に記載されるようなCCI779または４０−[３−ヒドロキシ−２−(ヒドロキシ−メチル)−２−メチルプロパノエート]−ラパマイシンまたはその薬学的に許容される塩、例えばＷＯ９９／１５５３０に記載されるようなABT578または４０−(テトラゾリル)−ラパマイシン、特に４０−エピ−(テトラゾリル)−ラパマイシン、または例えばＷＯ９８／０２４４１およびＷＯ０１／１４３８７に記載されるようなラパログ(rapalog)、例えばAP23573を含む。

式Ｉの化合物を、他の免疫抑制剤／免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤と併用して投与するとき、併用する免疫抑制性、免疫調節性、抗炎症性または化学療法化合物の投与量は、もちろん、用いる併用剤、例えばそれがステロイドかカルシニューリン阻害剤か、用いる具体的な薬剤、処置する状態などに依存して変化するであろう。

前記によって、本発明はなおさらに下記の局面を提供する：
５. 治療的有効非毒性量の式Ｉの化合物と、少なくとも一個の第２医薬物質、例えば上記の通りの、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を、例えば同時にまたは連続して併用投与することを含む、上記で定義の方法。

６. ａ)本明細書に記載の遊離形または薬学的に許容される塩形の式Ｉの化合物である第１薬剤、およびｂ)少なくとも１個の併用薬剤、例えば上記の通りの、例えば免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤または化学療法剤を含む、薬学的組み合わせ、例えばキット。キットはその投与のための指示書を含み得る。

本明細書で使用する“併用投与”または“組み合わせ投与”などの用語は、選択した治療剤を単独の患者に投与することを包含することを意味し、薬剤を必ずしも同じ投与経路でまたは同時に投与するものではない処置レジメンを含むことを意図する。

本明細書で使用する“医薬的組み合わせ”なる用語は、１個またはそれ以上の活性成分の混合または組み合わせにより得られる製品を意味し、活性成分の固定されたまたは固定されていない組み合わせの両方を含む。“固定された組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬剤を、両方とも患者に同時に一つの物または投与量の形で投与することを意味する。“固定されていない組み合わせ”なる用語は、活性成分、例えば式Ｉの化合物および併用薬剤が、両方とも患者に別々の物として、同時に、共に、または特別な時間制限なしに連続して投与することを意味し、このような投与が患者の体内で２個の化合物の治療的有効量を提供するものである。後者はまたカクテル療法、例えば、３個またはそれ以上の活性成分の投与にも適用される。

本発明の化合物の製造法
本発明はまた本発明の免疫調節化合物の製造法も含む。記載の反応において、反応性官能基、例えばヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオ基またはカルボキシ基を、これらが最終産物で望まれるとき、それらの望ましくない反応への参加を避けるために、保護する必要があり得る。慣用の保護基を標準的慣習にしたがって使用でき、例えば、T.W. Greene and P. G. M. Wuts in “Protective Groups in Organic Chemistry”, John Wiley and Sons, 1991を参照のこと。

式Ｉの化合物は、下記反応スキーム１の手順により製造できる：

(式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｘ_１、Ｘ_２、ＡおよびＺは、上記式Ｉについて定義の通りである)。式Ｉの化合物は、式２の化合物と式３の化合物を、適当な溶媒(例えばＤＣＭ、ＤＭＦなど)および適当な塩基(例えばＤＩＥＡ、ＮａＯＨなど)の存在下で反応させることにより製造できる。反応は約０℃から約１００℃で行い、完了に約４８時間かかり得る。

Ｒ_３が水素であるかまたはＣ_１−６アルキルであり、そしてＲ_４が水素である式Ｉの化合物は、下記反応スキーム２の手順により製造できる：

(式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｘ_１、Ｘ_２、ＡおよびＺは、上記式Ｉについて定義の通りである)。式Ｉの化合物は、式４の化合物と式３の化合物を、適当な溶媒(例えばＭｅＯＨなど)、適当な塩基(例えばＴＥＡなど)および適当な還元剤(ＮａＣＮＢＨ_３など)の存在下で反応させることにより製造できる。反応は約０℃から約１００℃で行い、完了に約４８時間かかり得る。

本発明の化合物の製造の付加的工程：
本発明の化合物は、薬学的に許容される酸付加塩として、遊離塩基の形の化合物と薬学的に許容される無機または有機酸を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の薬学的に許容される塩基付加塩は、遊離塩基の形の化合物と薬学的に許容される無機または有機塩基を反応させることにより製造できる。あるいは、本発明の化合物の塩形は、塩の出発物質または中間体の使用により製造できる。

本発明の化合物の遊離酸または遊離塩基形は、対応する塩基付加塩または酸付加塩形から各々製造できる。例えば酸付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離塩基に、適当な塩基(例えば、水酸化アンモニウム溶液、水酸化ナトリウムなど)での処理により変換できる。塩基付加塩形の本発明の化合物は、対応する遊離酸に、適当な酸(例えば、塩酸など)での処理により変換できる。

酸化されていない形の本発明の化合物を、本発明の化合物のＮ−オキシドから、還元剤(例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、リチウムボロハイドライド、水素化ホウ素ナトリウム、三塩化リン、三臭化物など)の適当な不活性有機溶媒(例えばアセトニトリル、エタノール、水性ジオキサンなど)中での、０から８０℃での処理により製造できる。

本発明の化合物のプロドラッグ誘導体は、当業者に一般的な方法により製造できる(例えば、さらなる詳細は、Saulnier et al., (1994), Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters, Vol. 4, p. 1985参照)。例えば、適切なプロドラッグを、非誘導体である本発明の化合物を、適当なカルバミル化剤(例えば、１,１−アシルオキシアルキルカルバノクロリデート、パラ−ニトロフェニルカーボネートなど)と反応させることにより製造できる。

本発明の化合物の保護された誘導体は、当業者に一般的な手段により製造できる。保護基の創成およびその除去に適用できる技術の詳細な記載は、T W. Greene, “Protecting Groups in Organic Chemistry”, 3^rd edition, John Wiley and Sons, Inc., 1999に見ることができる。

本発明の化合物は、溶媒和物(例えば、水和物)として、簡便に製造でき、または、本発明の方法中に形成され得る。本発明の化合物の水和物は、ジオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノールのような有機溶媒を使用した水性／有機溶媒混合物からの再結晶により簡便に製造できる。

本発明の化合物は、該化合物のラセミ混合物と、光学活性分解剤を反応させ、ジアステレオ異性体化合物のペアを形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収することにより、個々の立体異性体として製造できる。エナンチオマーの分離は、本発明の化合物の共有結合的ジアステレオマー誘導体を使用して行うことができるが、分離できる複合体(例えば、結晶ジアステレオマー塩)が好ましい。ジアステレオマーは異なる物理特性(例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など)を有し、これらの差異を利用して容易に分離できる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィーにより、または好ましくは溶解度の差に基づいた分離／分解法により分離できる。光学活性エナンチオマーを、次いで、解離剤と共に、ラセミ化をもたらさない任意の慣用的手段により回収する。ラセミ混合物からの化合物の立体異性体の分離に適用できる技術のより詳細な記載は、Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, “Enantiomers, Racemates and Resolutions”, John Wiley and Sons, Inc., 1981に見ることができる。

要約すると、式Ｉの化合物は、下記を含む方法により製造できる：
(ａ)上記反応スキーム１または２；そして
(ｂ)所望により本発明の化合物を薬学的に許容される塩に変換する；
(ｃ)所望により塩の形の本発明の化合物を、非塩形に変換する；
(ｄ)所望により非酸化形の本発明の化合物を薬学的に許容されるＮ−オキシドに変換する；
(ｅ)所望によりＮ−オキシド形の本発明の化合物をその非酸化形に変換する；
(ｆ)所望により本発明の化合物の個々の異性体を異性体の混合物から分離する；
(ｇ)所望により非誘導体である本発明の化合物を薬学的に許容されるプロドラッグ誘導体に変換する；そして
(ｈ)所望により本発明の化合物のプロドラッグ誘導体をその非誘導体形に変換する。

出発物質の製造を特に記載していない限り、該化合物は既知であるか、または、当分野で既知の方法に準じて、または、下記実施例に記載の通り製造できる。

当業者は、上記の変換は本発明の化合物の製造の代表であるのみであり、他の既知の方法を同様に使用できることを認識しよう。

実施例
下記実施例は代表的化合物の製造の詳細な記載を提供し、本発明を説明するために提供するが、限定するものではない。

実施例１
１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸

４−ブロモ−３−(トリフルオロメチル(methy))アニリン(３６０mg、１.５０mmol、１当量)のＤＭＦ(５mL)溶液に、フェニルボロン酸(２７４mg、２.２５mmol、１.５当量)、Ｋ_２ＣＯ_３(６２１mg、４.５mmol、３当量)、およびテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(０)(１７３mg、０.１５mmol、０.１当量)を添加する。混合物をＮ_２(ｇ)５分パージし、１２０℃で２０時間加熱する。室温に冷却後、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ_２Ｏ、続いて飽和水性ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣を勾配シリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサンから３：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)で精製し、２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルアミンを得る。[MS: (ES⁺) 238.1 (M+1)⁺]。

２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルアミン(１７５mg、０.７３７７mmol、１当量)をＣＨ_３ＯＨ(０.７５mL)、Ｈ_２Ｏ(０.７５mL)、および濃水性ＨＣｌ(０.４mL)の混合物に溶解する。この溶液を０℃に溶解し、Ｈ_２Ｏ(０.３０mL)に溶解したＮａＮＯ_２(７１mg、１.０３３mmol、１.４当量)の溶液を１時間にわたりゆっくり添加し、反応温度を０℃に維持する。この添加が完了後、反応混合物を６５℃に予め加温したＯ−エチル−キサントゲン酸カリウム塩(２３７mg、１.４７５mmol、２当量)のＨ_２Ｏ(０.７０mL)溶液に、急激に添加する。この反応混合物を６５℃で１５分撹拌する。室温に冷却後、反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ_２Ｏ、続いて飽和水性ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(９：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)で精製し、ジチオ炭酸Ｏ−エチルエステルＳ−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)エステルを得る。

ジチオ炭酸Ｏ−エチルエステルＳ−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イル)エステル(１２８mg、０.３７３８mmol)のＥｔＯＨ(５mL)溶液に、水性ＮａＯＨ(１Ｎ、５mL)を添加する。混合物を６５℃で３時間加熱する。室温に冷却後、１ＮＨＣｌ(水性)を、反応物のｐＨが約ｐＨ＝５に調節されるまで添加する。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ_２Ｏ、続いて飽和水性ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、得られた粗２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−チオール生成物(６４mg、０.２５１９mmol)をＥｔＯＨ(５mL)に溶解する。ＮａＢＨ_４(１９mg、０.５０３９mmol、２当量)をこの溶液に添加する。得られた混合物を室温で２５分撹拌し、この時点でメチル−４−(ブロモメチル)ベンゾエート(５８mg、０.２５１９mmol、１当量)のＤＭＦ(１.５mL)溶液をこの反応に加える。混合物を室温でさらに３０分撹拌する。ＥｔＯＨを真空下で除去する。得られたＤＭＦ溶液をＥｔＯＡｃで希釈し、Ｈ_２Ｏ、続いて飽和水性ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(３：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)で精製し、４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−安息香酸メチルエステルを得る。[MS: (ES⁺)425.1 (M+23)⁺]。

−７８℃に冷却した４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−安息香酸メチルエステル(８３mg、０.２０６２mmol、１当量)の無水トルエン(５mL)溶液に、ＤＩＢＡＬ−Ｈ(トルエン中１Ｍ、０.４１mL、０.４１mmol、２当量)を添加する。混合物を−７８℃で３０分撹拌する。反応を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの添加によりクエンチし、その後、反応混合物を室温に温める。反応物をＥｔＯＡｃで希釈し、１ＮＨＣｌ(水性)、Ｈ_２Ｏ、および飽和水性ＮａＣｌで洗浄する。有機溶液をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(１：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)で精製し、[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−フェニル]−メタノールを得る。[MS: (ES⁺)397.1 (M+23)⁺]。

[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−フェニル]−メタノール(１６２mg、０.４３２７mmol、１当量)の無水ＤＣＭ(５mL)溶液に、ＰＰｈ_３(１４８mg、０.５６２５mmol、１.３当量)を添加する。混合物を室温で５分撹拌し、その時点で、反応を０℃に冷却する。反応混合物に、０℃で、ＣＢｒ_４(１８７mg、０.５６２５mmol、１.３当量)の無水ＤＣＭ(２mL)溶液を添加する。反応物を室温にゆっくり温め、１２時間撹拌する。反応混合物を直接シリカゲルクロマトグラフィー(６：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃ)にかけ、４−(４−ブロモメチル−ベンジルスルファニル)−２−トリフルオロメチル−ビフェニルを得る。

４−(４−ブロモメチル−ベンジルスルファニル)−２−トリフルオロメチル−ビフェニル(１８５mg、０.４２３０mmol、１当量)の無水ＤＣＭ(７mL)溶液に、アゼチジン−３−カルボン酸メチルエステル(ＨＣｌ塩、９６mg、０.６３４５mmol、１.５当量)およびＤＩＥＡ(０.７４mL、４.２３０mmol、１０当量)を添加する。混合物を室温で３時間撹拌する。反応混合物を直接シリカゲルクロマトグラフィー(５：１ヘキサン／ＥｔＯＡｃから１：２ヘキサン／ＥｔＯＡｃの勾配)にかけ、１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸メチルエステルを得る。

１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸メチルエステル(１２９mg、０.２７３６mmol、１当量)の、ＭｅＯＨ(５mL)およびＨ_２Ｏ(０.５mL)の混合物中の溶液に、ＬｉＯＨ−Ｈ_２Ｏ(２３mg、０.５４７２mmol、２当量)を添加する。混合物を室温で３時間撹拌する。濃縮後、粗生成物を分取ＲＰＬＣ−ＭＳで精製し、１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸を得る：¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.61 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.46-7.39 (m, 6H), 7.29 (d, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.35 (s, 2H), 4.31 (d, 4H), 3.73-3.61 (m, 1H); MS (ES⁺): (458.1, M+1)⁺。

実施例２
３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸

３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを、上記に準じて、４−(４−ブロモメチル−ベンジルスルファニル)−２−トリフルオロメチル−ビフェニルおよび３−アミノ−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの反応により合成する。

３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル(２４mg、０.０４７８mmol、１当量)のＤＣＭ(２mL)溶液に、トリエチルシラン(０.０３８mL、０.２３９２mmol、５当量)、続いてＴＦＡ(２mL)を添加する。混合物を室温で２時間撹拌する。濃縮後、粗生成物を分取ＲＰＬＣ−ＭＳで精製して、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸を得る：¹H NMR (CD₃OD, 400 MHz) δ 7.66 (s, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.55-7.38 (m, 7H), 7.28-7.21 (m, 3H), 4.33 (s, 2H), 4.18 (s, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.72 (t, 2H); MS (ES⁺): (446.1, M+1)⁺。

実施例３
１−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸

工程１：中間体の合成：４−ブロモメチル−１−シクロヘキシル−２−トリフルオロメチル−ベンゼン
４−クロロ−３−トリフルオロメチル−ベンズアルデヒド(２.１ｇ、１０mmol)のメタノール(３０mL)溶液に、０℃でＮａＢＨ_４(４００mg、１０.６mmol)を添加する。２時間後、反応をＨ_２Ｏ(２０mL)、続く水性ＨＣｌ(１Ｎ、１０mL)のゆっくりした添加によりクエンチする。混合物をＥｔＯＡｃ(３×２０mL)で抽出する。合わせた有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル)−メタノールを、次段階に直接さらに精製せずに使用する。

粗(４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル)−メタノールのＤＭＦ(無水、４０mL)溶液に、０℃でＮａＨ(６００mg、１５mmol)を添加する。３０分撹拌後、４−メトキシベンジルブロミド(２.２１ｇ、１１mmol)をシリンジを介して滴下する。室温で３時間撹拌後、反応物を氷および飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの混合物に注ぐことによりクエンチする。混合物をＥｔＯＡｃ(３×３０mL)で抽出し、合わせた有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製し、１−クロロ−４−(４−メトキシ−ベンジルオキシメチル)−２−トリフルオロメチル−ベンゼンを無色油状物として得る。

１−クロロ−４−(４−メトキシ−ベンジルオキシメチル)−２−トリフルオロメチル−ベンゼン(１.５ｇ、４.５mmol)およびシクロヘキシル亜鉛ブロミドＴＨＦ溶液(０.５Ｍ、２７mL)の混合物のＮＭＰ(３０mL)溶液に、ビス(トリ−ｔ−ブチルホスフィン)パラジウム(０)(１１５mg、０.２２５mmol)を添加する。混合物をＮ_２で５分パージし、続いて１２０℃で１２時間、Ｎ_２下加熱する。室温に冷却後、反応物をＨ_２Ｏ(１００mL)および水性ＨＣｌ(１Ｎ、２０mL)の添加によりクエンチする。混合物をＥｔＯＡｃ(３×４０mL)で抽出する。合わせた有機相を飽和水性ＮａＨＣＯ_３、飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、およびＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製し、１−シクロヘキシル−４−(４−メトキシ−ベンジルオキシメチル)−２−トリフルオロメチル−ベンゼンを無色油状物として得る。

得られた１−シクロヘキシル−４−(４−メトキシ−ベンジルオキシメチル)−２−トリフルオロメチル−ベンゼンをＴＦＡおよびＤＣＭの混合物(８mL、１：１ｖ／ｖ)に溶解する。室温で２時間撹拌後、すべての揮発性物質を蒸発させ、得られた残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３で洗浄する。有機層を分離し、飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中２０％酢酸エチル)で精製し、(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−フェニル)−メタノールを無色油状物として得る。

(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−フェニル)−メタノール(３００mg、１.１６mmol)およびＰＰｈ_３(４６０mg、１.７４mmol)のＤＣＭ(５mL)溶液に、０℃でＤＣＭ(２mL)に溶解したＣＢｒ_４(５８０mg、１.７４mmol)を添加する。反応物を０℃で１時間撹拌し、続いて濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製し、４−ブロモメチル−１−シクロヘキシル−２−トリフルオロメチル−ベンゼンを白色固体として得る。

工程２：１−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸の合成
Dean-Stark装置を備えた丸底フラスコ中、４−メチルチオベンズアルデヒド(５ｇ、３２.８mmol)、プロパンジオール(２.７５ｇ、３６.１mmol)、およびトルエンスルホン酸(５５０mg、３.２８mmol)のトルエン(３００mL、無水)溶液を、Ｎ_２下、加熱還流する。５時間後、反応混合物を室温に冷却し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３(３×４０mL)で洗浄する。有機相を濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(１ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製して、２−(４−メチルスルファニル−フェニル)−[１,３]ジオキサンを黄色油状物として得る。

２−(４−メチルスルファニル−フェニル)−[１,３]ジオキサン(２ｇ、９.５mmol)のＤＣＭ(５０mL)溶液に、０℃でｍ−ＣＰＢＡ(２.４６ｇ、１０.５mmol)を添加する。混合物を０℃で１時間撹拌し、その後Ｃａ(ＯＨ)_２(７７０mg、１０.５mmol)を添加する。反応物をさらに３０分撹拌し、次いで反応混合物をＤＣＭで希釈し、セライトを通して濾過する。濾液を回収し、濃縮して２−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−[１,３]ジオキサンを白色固体として得る。

２−(４−メタンスルフィニル−フェニル)−[１,３]ジオキサン(４００mg、１.７６mmol)をアセトニトリル(２０mL)に溶解する。２,６−ルチジン(０.６４mL、５.５mmol)を添加し、溶液を−１０℃に冷却する。ＴＦＡＡ(０.７５mL、５.３mmol)をシリンジを介して滴下する。ｒ反応物を１時間、−１０から０℃で撹拌する。すべての揮発性物質を蒸発させ、その間反応混合物を０℃に維持する。０℃に予め冷却したＭｅＯＨおよびトリエチルアミン(５０mL、１：１ｖ／ｖ)の混合物を添加する。得られた混合物を温め、室温で３０分撹拌する。すべての揮発性物質を蒸発させる。得られた残渣をジエチルエーテルに溶解し、飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮して、粗４−[１,３]ジオキサン−２−イル−ベンゼンチオールを黄色油状物として得て、それをさらに精製することなく直ぐに次段階に使用する。

粗４−[１,３]ジオキサン−２−イル−ベンゼンチオール(０.９mmol)をＤＭＦ(１５mL、無水)に溶解する。溶液を０℃に冷却し、続いてＮａＨ(７６mg、１.８mmol)を添加する。３０分撹拌後、上記で調製したＤＭＦ(２mL)に溶解した４−ブロモメチル−１−シクロヘキシル−２−トリフルオロメチル−ベンゼン(０.８mmol)をシリンジを介して滴下する。混合物を１時間撹拌し、次いで氷および飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの混合物に注ぐ。水性相をジエチルエーテル(３×３０mL)で抽出する。合わせた有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中１０％酢酸エチル)で精製し、２−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−フェニル]−[１,３]ジオキサンを白色固体として得る。

２−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−フェニル]−[１,３]ジオキサン(９０mg、０.２mmol)のＴＨＦ(１０mL)溶液に、水性ＨＣｌ(２Ｎ、０.７mL)を添加する。溶液を室温で４時間撹拌する。溶液をジエチルエーテル(３０mL)で希釈し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３(３×１０mL)で洗浄する。有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、部分的に濃縮し、続いてＭｅＯＨ(１０mL)で希釈する。得られた溶液にトリエチルアミン(０.５mL)およびアゼチジン−３−カルボン酸(４６mmol、０.４mmol)を添加する。得られた混合物を５０℃で３０分撹拌する。反応物を室温に冷却し、ＮａＣＮＢＨ_３(６３mg、１mmol)を添加する。得られた混合物を３０分撹拌し、続いて濃縮乾固する。粗生成物を分取ＲＰＬＣ−ＭＳで精製し、１−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸を無色油状物として得る。¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.55-7.54 (m, 2H), 7.52-7.35 (m, 5H), 4.39 (s, 2H), 4.35 (m, 4H), 4.17 (s, 2H), 3.68 (tt, 1H), 2.90 (tt, 1H), 1.87-1.75(m, 5H), 1.72-1.48 (m, 5H); MS (ES⁺): (464.2, M+1)⁺。

実施例４
１−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸

工程１：中間体の合成：４−ブロモメチル−２−エチル−ビフェニル
４−アミノ−３−エチルベンゾニトリル(４ｇ、２７.４mmol)およびＣｕＢｒ_２(９.２ｇ、４１.１mmol)の混合物のアセトニトリル(１５０mL)溶液に、亜硝酸アミル(５.５mL、４１.１mmol)を滴下する。添加が完了後、混合物を６０℃で４時間加熱する。室温に冷却後、反応混合物を部分的に濃縮する。ジエチルエーテルを添加し、混合物を飽和水性ＮＨ_４Ｃｌで洗浄する。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、４−ブロモ−３−エチルベンゾニトリルを、明褐色油状物として得る。

４−ブロモ−３−エチルベンゾニトリル(１ｇ、４.７６mmol)、フェニルボロン酸(１.１６ｇ、９.５mmol)、Ｋ_２ＣＯ_３(１.９７ｇ、１４.３mmol)、およびＰｄ(ＰＰｈ_３)_４(５４３mg、０.４８mmol)の混合物のＤＭＦ(無水、１５mL)溶液を、密封試験管中、１２０℃で１２時間加熱する。室温に冷却後、反応混合物を氷および飽和水性ＮＨ_４Ｃｌの混合物に注ぐ。混合物をＥｔＯＡｃ(３×３０mL)で抽出する。合わせた有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮する。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製し、２−エチル−ビフェニル−４−カルボニトリルを無色油状物として得る。

２−エチル−ビフェニル−４−カルボニトリル(０.９５ｇ、４.５８mmol)のエタノール(５０mL)溶液に、固体ＫＯＨ(２.５６ｇ、４５.８mmol)を添加する。得られた混合物を還流温度で１２時間加熱する。室温に冷却後、溶媒を減圧下で蒸発乾固する。Ｈ_２Ｏ(１００mL)を添加し、水性ＨＣｌ(２Ｎ)をｐＨが約ｐＨ＝１に調節されるまでゆっくり添加する。混合物をＥｔＯＡｃ(３×５０mL)で抽出する。合わせた有機層を飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮する。得られた粗２−エチル−ビフェニル−４−カルボン酸をメタノール(２０mL)に溶解する。濃水性ＨＣｌ(５mL)を添加し、混合物を４時間加熱還流する。室温に冷却後、反応混合物を減圧下で濃縮する。得られた残渣をジエチルエーテルに溶解し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３(３×１０mL)で洗浄する。有機層を分離し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、粗２−エチル−ビフェニル−４−カルボン酸メチルエステルをＴＨＦ(５mL)に溶解し、ＬＡＨ(２００mg、５.２mmol)の混合物のＴＨＦ(１５mL、無水)溶液に０℃で滴下する。１時間後、反応をＨ_２Ｏのゆっくりした添加、続く水性ＨＣｌ(１Ｎ、２０mL)の添加によりクエンチする。混合物をＥｔＯＡｃ(３×４０mL)で抽出する。合わせた有機層を飽和水性ＮａＨＣＯ_３、飽和水性ＮａＣｌで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させる。濃縮後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中２０％ＥｔＯＡｃ)で精製し、(２−エチル−ビフェニル−４−イル)−メタノールを無色油状物として得る。

(２−エチル−ビフェニル−４−イル)−メタノール(７８０mg、３.６７mmol)およびＰＰｈ_３(１.４４ｇ、５.５mmol)の混合物のＤＣＭ(１５mL)溶液に、０℃でＣＢｒ_４(１.８２ｇ、５.５mmol)のＤＣＭ(２mL)溶液を添加する。反応物を０℃で１時間撹拌し、続いて濃縮する。得られた残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(ヘキサン中５％ＥｔＯＡｃ)で精製し、４−ブロモメチル−２−エチル−ビフェニルを無色油状物として得る。

工程２：１−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸の合成
上記の工程中の４−ブロモメチル−１−シクロヘキシル−２−トリフルオロメチル−ベンゼンを４−ブロモメチル−２−エチル−ビフェニルに変えて、１−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸を得る：¹H NMR (400 MHz, CD₃OD) δ 7.44-7.23 (m, 11H), 7.12(s 1H), 4.50 (s, 2H), 4.39-4.33 (m, 5H), 4.27 (s, 2H), 3.68 (tt, 1H), 2.54 (q 2H), 1.03 (t, 3H); MS (ES⁺): (418.2, M+1)⁺。

上記実施例の方法を繰り返し、適当な出発物質を使用して、下記の式Ｉの化合物を合成できる(表１)。

実施例５
式Ｉの化合物は生物学的活性を示す
Ａ. インビトロ：ヒトＥＤＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞から調製した膜へのＧＴＰ[γ− ^３５Ｓ]の結合を測定するＧＰＣＲ活性化アッセイ
ＥＤＧ−１(Ｓ１Ｐ_１)ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイ：均質化膜を、ヒトＥＤＧ−１Ｎ−末端ｃ−ｍｙｃタグを安定に発現するＣＨＯ細胞クローンから調製する。細胞を２個の８５０cm^２ローラーボトル中の懸濁液で、３日または４日増殖させ、その後収集する。細胞を遠沈させ、冷ＰＢＳで洗浄し、＜２０mlの緩衝液Ａ(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１０mM ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡの完全プロテアーゼ阻害剤カクテル[１錠／２５ml])に再懸濁する。細胞懸濁液を氷上で、Polytronホモジナイザーを使用して、３００００rpmで各１５秒の３インターバルで均質化する。ホモジネートを最初に２０００rpmで卓上式低速遠心器で１０分遠心する。上清を、細胞ストレーナーを通した後、次いで、５０,０００×ｇで２５分、４℃で遠心する。ペレットを緩衝液Ｂ(１５％グリセロール、２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、０.１mM ＥＤＴＡ、無ＥＤＴＡの完全プロテアーゼ阻害剤カクテル[１錠／１０ml])に再懸濁する。調製物のタンパク質濃度をＢＣＡタンパク質アッセイキット(Pierce)を使用して、ＢＳＡを標準として用いて決定する。膜をアリコートに分け、−８０℃で凍結保存する。

１０mMから０.０１nMの範囲の試験化合物をＤＭＳＯ中に調製する。Ｓ１Ｐを４％ＢＳＡ溶液に、ポジティブコントロールとして希釈する。所望の量の膜調製物を氷冷アッセイ緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１００mM ＮａＣｌ、１０mM ＭｇＣｌ_２、０.１％無脂肪酸ＢＳＡ、５μM ＧＤＰ)で希釈し、十分ボルテックス処理する。２μlまたはそれより少ない化合物を丸底９６−ウェルポリスチレンアッセイプレートの各ウェルに分配し、続いて１００μlの希釈した膜(３−１０μg／ウェル)を添加し、ホットＧＴＰγＳを添加するまで氷上に維持する。[^３５Ｓ]−ＧＴＰγＳを、冷アッセイ緩衝液で１：１０００(ｖ／ｖ)に希釈し、１００μlを各ウェルに添加する。反応を室温で９０分行い、その後、膜をPerkin-Elmer Unifilter(登録商標)GF/B-96フィルタープレートに、Packard Filtermate Harvesterを使用して収集する。数回洗浄緩衝液(２０mM ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７.４、１００mM ＮａＣｌ、１０mM ＭｇＣｌ_２)で洗浄し、９５％エタノールで濯いだ後、フィルターを３７℃オーブンで３０分で乾燥させる。MicroScint-20を添加し、プレートをTopCountでのシンチレーションカウントのために密封する。ＥＣ５０値を、ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合曲線(生データ)のGraphPad Prismの用量応答曲線適合ツールでの適合により得る。６または１２の異なる濃度を使用して、濃度応答曲線を産生する(濃度当たり３データ点を使用)。

ＥＤＧ−３、−５、−６および−８ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイを、ＥＤＧ−１ＧＴＰ[γ−^３５Ｓ]結合アッセイに準じた方法を使用して、ｃ−末端ｃ−ｍｙｃタグ付加または非タグ付加受容体を安定に発現するＣＨＯ細胞由来の膜を使用して行う。各膜調製物について、力価測定実験を最初にＳ１Ｐコントロールで行い、アッセイウェル当たりに添加すべき膜の最適量を決定する。本発明の化合物を上記アッセイで試験し、ＥＤＧ−１受容体に選択性を示すことが観察された。例えば、化合物９は、上記アッセイで０.８２nMのＥＣ_５０を示し、ＥＤＧ−１に対して、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、ＥＤＧ−６およびＥＤＧ−８を含む他の受容体の１個またはそれ以上と比較して、少なくとも１０００倍選択的である。

Ｂ. インビトロ：ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイ
本発明の化合物を、ＥＤＧ−１、ＥＤＧ−３、ＥＤＧ−５、およびＥＤＧ−６に対するアゴニスト活性について、ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイで試験する。簡単に言うと、ＥＤＧ受容体を発現するＣＨＯ細胞を、５％ＦＢＳと５００μg／mlのＧ４１８を含むＦ−１２Ｋ培地(ＡＴＣＣ)に維持する。アッセイ前に、細胞を３８４黒色透明底プレートに、１０,０００細胞／ウェル／２５μlの密度で、１％ＦＢＳ含有Ｆ−１２Ｋの培地に播く。二日目に、細胞を３回(各２５μl)洗浄緩衝液で洗浄する。約２５μlの色素を各ウェルに添加し、１時間、３７℃および５％ＣＯ_２でインキュベートする。細胞を次いで４回洗浄緩衝液(各２５μl)で洗浄する。カルシウム流動を、２５μlのＳＥＱ２８７１溶液を各細胞のウェルに添加後に測定する。同じアッセイを、異なるＥＤＧ受容体を発現する細胞で行う。ＦＬＩＰＲカルシウム流動アッセイにおける力価を、３分インターバルにわたり測定し、ＥＤＧ−１活性化に相対的な、最大ピーク高パーセンテージ応答として定量する。

Ｃ. インビボ：血液リンパ球枯渇のためのスクリーニングアッセイおよび心臓作用の評価
循環しているリンパ球の測定：化合物をＤＭＳＯに溶解し、４％ＤＭＳＯ(ｖ／ｖ、最終濃度)の最終濃度を得るために希釈し、次いで、一定用量のＴｗｅｅｎ８０２５％／Ｈ_２Ｏ、ｖ／ｖで希釈する。Ｔｗｅｅｎ８０２５％／Ｈ_２Ｏ(２００μl)、４％ＤＭＳＯ、およびＦＴＹ７２０(１０μg)を各々ネガティブおよびポジティブコントロールとして包含させる。ラット(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)に２５０−３００μLの化合物溶液を経口で、短いイソフルラン麻酔下に胃管栄養法により投与する。

血液を、眼窩後洞(retro-orbital sinus)から薬剤投与６および２４時間後に短いイソフルラン麻酔下に採る。全血サンプルを血液学的分析に付す。末梢リンパ球計数を自動アナライザーを使用して決定する。末梢血リンパ球の分画をフルオロクローム−接合特異的抗体により染色し、蛍光活性化細胞分別機(Facscalibur)を使用して分析する。スクリーニングした各化合物のリンパ球枯渇活性を評価するために２匹のラットを使用する。結果はＥＤ_５０であり、これは、５０％の血液リンパ球枯渇を示すのに必要な有効投与量として定義する。本発明の化合物を上記アッセイにしたがい試験し、好ましくは１mg／kgより小さいＥＤ_５０、より好ましくは０.５mg／kgより小さいＥＤ_５０を示すことが判明した。例えば、化合物９は、＜０.１mg／kgのＥＤ_５０を示す。

心臓作用の評価：化合物の心機能に対する作用を、AnonyMOUSE ECGスクリーニングシステムを使用してモニターする。心電図を、有意識ラット(Ｃ５７ｂｌ／６雄、６−１０週齢)で、化合物の投与前後に測定する。次いで、ＥＣＧシグナルを、e-MOUSEソフトウエアを使用して処理し評価する。２００μl 水、１５％ＤＭＳＯにさらに希釈した９０μgの化合物をＩＰで注射する。各化合物の心臓作用を評価するために４匹のマウスを使用する。

Ｄ. インビボ：抗血管形成活性
(ｉ)スフィンゴシン−１−ホスフェート(５μM／チャンバー)または(ii)ヒトＶＥＧＦ(１μg／チャンバー)の０.５mlの０.８％ｗ／ｖ寒天(ヘパリン、２０Ｕ／ml含有)溶液を含む、多孔性チャンバーをマウスの横腹に皮下にインプラントする。Ｓ１ＰまたはＶＥＧＦは、チャンバー周囲の血管組織の増殖を誘導する。この応答は用量依存性であり、組織の重量および血液含量の測定により定量できる。ラットに、チャンバーのインプラントの前４−６時間に開始して、１日１回、式Ｉの化合物を経口または静脈内投与し、４日間続ける。動物を最後の投与２４時間後に血管組織の測定のために殺す。チャンバー周囲の血管組織の重量および血液含量を測定する。式Ｉの化合物で処置した動物は、媒体単独で処置した動物と比較して、血管組織の重量および／または血液含量の減少を示した。式Ｉの化合物は、約０.３から約３mg／kgの投与量で投与したとき、抗血管形成である。

Ｅ. インビトロ：抗腫瘍活性
乳癌から元々単離したマウス乳癌細胞系、例えばＪｙｇＭＣ(Ａ)を使用する。工程前に、新鮮培地に播くために、細胞数を５×１０^５に調節する。細胞を、２.５mMのチミジン含有、ＦＣＳ非含有新鮮培地で、１２時間インキュベートし、ＰＢＳで２回洗浄し、続いて１０％ＦＣＳ含有新鮮培地を添加し、さらに１２時間インキュベートする。その後、細胞を２.５mMのチミジン含有、ＦＣＳ非含有新鮮培地で１２時間インキュベートする。細胞をブロックから解放するために、細胞を２回ＰＢＳ洗浄し、１０％ＦＣＳ含有新鮮培に再び播く。同調後、細胞を種々の濃度の式Ｉの化合物の存在下または非存在下、３、６、９、１２、１８または２４時間インキュベートする。細胞を０.２％ＥＤＴＡで処理後収集し、氷冷７０％エタノール溶液で固定し、２５０μg／mlのＲＮａｓｅＡ(タイプ１−Ａ：Sigma Chem. Co.)で、３７℃で３０分加水分解し、１０mg／mlのヨウ化プロピジウムで２０分染色する。インキュベーション期間の後、細胞数を、CoulterカウンターおよびＳＲＢ比色アッセイの両方で測定する。これらの条件下、式Ｉの化合物は、腫瘍細胞の増殖を、１０^−１２から１０^−６Ｍの範囲の濃度で阻害する。

本明細書に記載の実施例および態様は、説明の目的のためのみであり、それに鑑みた種々の修飾および改変が、当業者には示唆され、本出願の精神および理解の範囲内および添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれる。本明細書で引用したすべての文献、特許および特許出願は、引用によりすべての目的で本明細書に包含させる。

Claims

遊離形または薬学的に許容される塩形の、式Ｉ’：

［式中、
Ａは−Ｃ(Ｏ)ＯＲ_５ (ここでＲ _５は水素またはＣ_１−６アルキルである)であり；
Ｘ_１およびＸ_２は各々独立して結合またはＣ_１−６アルキレンであり；
Ｚは

(式中、左と右のアスタリスク(＊)はそれぞれＡとの結合点および−Ｃ(Ｒ _３ )(Ｒ _４ )−との結合点を示し、Ｒ_６は水素である)
から選択され；
Ｒ_１はＣ_６−１０アリールであり、このアリールは所望によりハロ、Ｃ _１−６アルキル、ハロ置換Ｃ _１−６アルキル、Ｃ _３−８シクロアルキルＣ _０−４アルキルおよびＣ _６−１０アリールＣ _０−４アルキル(この「アリール」は所望によりＣ _１−６アルキルで置換されていてもよい)から選択される基で置換されていてもよく；そして
Ｒ_３およびＲ_４は水素である。］
で示される化合物。
１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、１−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−メチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(４−ブロモ−３−メチル−フェニルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、１−[４−(２−メチル−ビフェニル−４−イルスルファニルメチル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(４−シクロヘキシル−３−トリフルオロメチル−ベンジルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、３−[４−(２'−エチル−２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸、１−[４−(２'−エチル−２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジル]−アゼチジン−３−カルボン酸、３−[４−(２−トリフルオロメチル−ビフェニル−４−イルメタンスルフィニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸および３−[４−(２−エチル−ビフェニル−４−イルメチルスルファニル)−ベンジルアミノ]−プロピオン酸から選択される、請求項１記載の化合物。
治療的有効量の請求項１記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤と共に含む、医薬組成物。
ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体介在シグナル伝達の変更が、病態および／または総体症状を予防、阻害または軽減できる疾患を処置するための、請求項１記載の化合物を有効成分とする、医薬。
リンパ球が介在する障害または疾患を予防または処置する、急性もしくは慢性移植拒絶反応またはＴ細胞介在炎症性または自己免疫性疾患を予防または処置する、無秩序な血管形成を阻害または制御する、または新規血管形成過程が介在するまたは無秩序な血管形成が関連する疾患を予防または処置するための、請求項１記載の化合物を有効成分とする、医薬。
動物における、ＥＤＧ／Ｓ１Ｐ受容体介在シグナル伝達の変更が、その疾患の病態および／または総体症状に関与する疾患の処置用医薬の製造における、請求項１記載の化合物の使用。