JP3994120B1 - 低アレルゲン化ローヤルゼリーの製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】アレルギー性が低減されたローヤルゼリーの製造方法であって、生ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用を有するアルカリ性ペプチダーゼで処理することを特徴とする、方法。
【選択図】図1
Description
1. アレルギー性が低減されたローヤルゼリーの製造方法であって、生ローヤルゼリーをエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用を有するアルカリ性ペプチダーゼで処理することを特徴とする、方法。
2. 前記処理をアルカリ性条件下で行うことを特徴とする、項1に記載の方法。
3. 前記アルカリ性ペプチダーゼが、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)産生ペプチダーゼである、項1または2に記載の方法。
本発明による生RJの酵素処理は、一段階酵素反応で実施できるので、低アレルゲン化効果および操作の簡便性の面から好ましい。エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼの両方の作用によるアルカリ性ペプチダーゼは、十分なエンドペプチダーゼ作用を有することが好ましい。
ペプチダーゼ処理の時間は、使用酵素の種類、反応温度、pH等の反応条件に依存し、特に限定されない。
実施例1
生RJ200gを500mlビーカーに量りとり、イオン交換水100mlを加えて均一になるまで攪拌してRJ希釈液を調製した。2N NaOH水溶液を加えてRJ希釈液のpHを8.7〜8.9に調整した。次に、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するアクチナーゼAS(科研製薬)2gをイオン交換水20mlに溶かした溶液をRJ希釈液に加え、さらにイオン交換水を、イオン交換水の全量が200mlになるように加えた。反応混合物をプロペラで撹拌しながら50℃(恒温水槽)で4時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を80℃に上げて酵素を失活させた後、水冷した。
生RJ3gを50ml三角フラスコに量りとり、イオン交換水1mlを加えて均一になるまで攪拌してRJ希釈液を調製した。10N NaOH水溶液を加えてRJ希釈液のpHを7.8〜8.0に調整した。次に、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するプロテアーゼP(天野エンザイム) 30 mgをRJ希釈液に加え、さらにイオン交換水を、イオン交換水の全量が3mlになるように加えた。反応混合物を、恒温水槽で振とうしながら40℃にて16時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を80℃に上げて酵素を失活させた後、水冷した。
酵素として、プロテアーゼPに代えて、エンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用の両方を有するプロテアーゼA(天野エンザイム)を使用した以外は、実施例2と同様にして、RJ酵素分解物を得た。
生RJ200gを500mlビーカーに量りとり、イオン交換水100mlを加えて均一になるまで攪拌してRJ希釈液を調製した。2N NaOH水溶液を加えてRJ希釈液のpHを8.7〜8.9に調整した。次に、エンドペプチダーゼであるプロテアーゼN(天野エンザイム) 3.4 gとβ−マンノシダーゼ(新日本化学工業社製スミチームACH) 60 mgをイオン交換水20mlに溶かした溶液をRJ希釈液に加え、さらにイオン交換水を、イオン交換水の全量が200mlになるように加えた。反応混合物をプロペラで撹拌しながら50℃(恒温水槽)で4時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を80℃に上げて酵素を失活させた後、水冷し、RJ酵素分解物を得た。
生RJ 5 gを100 mL三角フラスコに量りとり、イオン交換水5 mLとモルシンF(キッコーマン)50 mgを加えて均一になるまで攪拌してRJ希釈液を調製した。反応混合物をスターラーで撹拌しながら40 ℃(恒温水槽)で16時間および24時間反応させて、加水分解を行った。恒温水槽の温度を80℃に上げて酵素を失活させた後、水冷した。
モルシンFをFA-107-1(三共ライフテック)にした以外は、上記と同様の方法で酵素処理を行った。
<I>生ローヤルゼリーのペプチダーゼ処理物の抗原タンパク消失の確認
実施例1〜3で得られた分解物について、イムノブロットを行い、抗原タンパク質の消失を確認した。各サンプルを3×サンプルバッファー(187.5 mM トリス塩酸pH 6.8, 6% SDS, 75%グリセロール, 0.03%ブロモフェノールブルー, 1.5M 2-メルカプトエタノール)にて3倍希釈し、95℃にて5分間加熱した。その後、15%アクリルアミドゲルを用いてSDS-PAGEを行なった。分子量マーカーとしてSDS-PAGE Standards, Low Range(BIO RAD社)を用いた。ゲル上に展開したタンパク質を、セミドライ式ブロッティング装置にてPVDFメンブレン(BIO RAD社)に転写し、ブロッキングバッファー (2% スキムミルク, 10mM トリス塩酸pH 7.5, 100mM 塩化ナトリウム, 0.05% トゥイーン20) に浸して室温で1時間振とうした。その後、メンブレンを、ブロッキングバッファーにて希釈した患者血清に浸し、4℃に一晩静置した。更にブロッキングバッファーにて希釈した抗ヒトIgE抗体(KPL社)に浸して37℃に1時間静置した。最後に、ECL plus キット (Amersham LIFE SCIENCE社)を用いて、付属のプロトコールに従い調製した発光液にメンブレンを浸して、ECL Mini-Camera (Amersham LIFE SCIENCE社)にかけて検出した。
<II>生ローヤルゼリーの酸性プロテアーゼ処理物およびアルカリ性プロテアーゼ処理物のイムノブロット>
比較例2, 3および実施例1で得たRJ酵素分解物についてイムノブロットを上記<I>に従い行った。
結果を表1に示す。
表1の結果から、酸性プロテアーゼにより生ローヤルゼリーを処理すると、抗アレルゲン化することはできないことが明らかになった。
<ヒスタミン遊離試験>
未処理RJ、実施例1、比較例で得たRJ酵素分解物、アレルゲンmix(陽性コントロール)、抗IgEレセプター抗体(陽性コントロール)について、CAST法(cellular antigen stimulation test)によって、遊離するヒスタミン量を測定した。
アレルゲンmix:カモガヤ、ホロハウシノケグサ、ホソムギ、オオアワガエリ、ナガハグサ、シラゲガヤ、ライムギ、シラカンバ、ハシバミ、ヨモギ、ヘラオオバコ、アルテルナリア、ヤケヒョウダニ、コナヒョダニ、ノコジョウヒ、イヌジョウヒ、卵白、ミルク、タラ、ピーナッツ、大豆。
結果を表2及び図1に示す。
<生RJとRJエタノール沈殿物のデセン酸量の比較>
RJのエタノール沈殿物は、生RJ 100gに、90 %エタノールを300 mL加えた後、室温で約1時間攪拌し、12,000×gで30 min遠心分離してから凍結乾燥して調製した。
<酵素処理RJの抗うつ作用評価>
未処理RJおよび実施例1で得たRJ酵素分解物についての抗うつ効果を確認するために、マウスの恐怖条件付誘発無動時間を測定した。
方法
フェアードコンディション計測装置(Acti Metrics社)にてマウスに電気刺激負荷を行なった後、試験検体を7日間投与した。投与後、再びフェアードコンディション計測装置の中に入れ、電気刺激無しの条件で4分間の無動時間を測定した。結果を表4及び図2に示す。
<酵素処理RJによるACE阻害>
実施例1および比較例で得たRJ酵素分解物について、ACE阻害作用を測定した。
○ 試薬の調製
ホウ酸緩衝液(pH8.3):200 mM ホウ酸(H3BO3)、50 mM 四ホウ酸ナトリウム(Na2B4O7)
基質溶解液:200 mM ホウ酸(H3BO3)、50 mM 四ホウ酸ナトリウム(Na2B4O7)、1 M 塩化ナトリウム(NaCl)
基質溶液:Bz-Gly-His-Leu・H2O(ペプチド研究所)を基質溶解液に溶解して12.5 mMとした。
酵素溶液:ウサギ肺由来のアンジオテンシン変換酵素(Sigma)をホウ酸緩衝液に溶解して25 mU/mLとした。
○ 実験操作
試料溶液25 μL に酵素溶液を50 μL加えて撹拌し、37 ℃にて5分間静置した。更に基質溶液を50 μL 加えて撹拌し、37 ℃にて1時間静置した。この液に0.5 N 塩酸溶液を125 μL 加えて撹拌し、反応を停止させたものを試験液とした。一方、試料溶液25 μL 、酵素溶液50 μL、 0.5 N 塩酸溶液125 μLを混合して37 ℃に5分間静置した後、基質溶液を50 μL 加えて撹拌し、37 ℃にて1時間静置したものをブランク液とした。その後、試験液およびブランク液に酢酸エチルをそれぞれ750 μLずつ加え、ボルテックスを用いて15秒間激しく撹拌した後、遠心分離(室温、2,000 rpmにて10分間)し、上層(酢酸エチル層)をそれぞれ250 μL ずつ分取した。減圧加熱乾燥法により酢酸エチルを完全に除去した後、析出物を1 M塩化ナトリウム溶液500 μLに溶解した。別に、試料溶液の代わりに精製水を用いて同様に操作した液を対照液とした。これらの液につき、紫外可視吸光光度測定法にて波長228 nm における吸光度を測定した。
・ ACE阻害率の算出
As:試料溶液の吸光度
Abc:試料溶液の代わりに水を加えて操作した液のブランク液の吸光度
Abs:試料溶液のブランク液の吸光度
結果を表5及び図3に示す。
Claims (2)
- アレルギー性が低減されたローヤルゼリーの製造方法であって、生ローヤルゼリーを、ストレプトマイセス・グリセウスまたはアスペルギルス・オリゼー由来のエンドペプチダーゼ作用とエキソペプチダーゼ作用を有するアルカリ性ペプチダーゼを用い、pH 7.8〜9、40〜50℃の反応条件で処理することを特徴とする、方法。
- 前記アルカリ性ペプチダーゼが、ストレプトマイセス・グリセウス(Streptomyces griseus)産生ペプチダーゼである、請求項1に記載の方法。
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Families Citing this family (6)
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JP2016113411A (ja) * | 2014-12-16 | 2016-06-23 | 株式会社山田養蜂場本社 | 胸痛改善剤 |
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JP2016113414A (ja) * | 2014-12-16 | 2016-06-23 | 株式会社山田養蜂場本社 | 焦燥感改善剤 |
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