JP3458900B2 - 抗ウイルス性脂質−ヌクレオシド結合体、それを用いた医薬およびリポソーム - Google Patents

抗ウイルス性脂質−ヌクレオシド結合体、それを用いた医薬およびリポソーム

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 この発明は、一般的には、抗ウィルス性ヌクレオシド
類縁体の脂質誘導体を使用する、ウィルスの感染の治療
に関するものである。より特定的には、この発明は、脂
質および特に修飾された抗ウィルス性類縁体のリン脂質
誘導体に関し、それは、リポソームの構造内に統合する
ことができ、それによってより安定したリポソーム複合
体を形成し、それはより少ない毒性で標的細胞に、より
大量の薬物を運ぶことができる。
ここに参照される刊行物および他の参照材料は、それ
を引用することによりここに援用され、かつ便宜上この
明細書の終りに添付された文献目録に載せられる。
近年、ウィルスの感染を治療するためのヌクレオシド
類縁体の使用に非常に関心が寄せられている。ヌクレオ
シドは、ピリミジンまたはプリン塩基からなり、それは
リボース、環構造を有する五炭糖、に結合される。抗ウ
ィルス性ヌクレオシド類縁体は、天然のヌクレオシドに
非常に類似し、かつ新しいDNAまたはRNAの合成を妨げる
ことによりウィルスの機能を抑制するようにつくられ
る。ヌクレオシドは、DNAまたはRNAに酵素で組立てられ
る。
DNA合成の間に、遊離ヌクレオシド三リン酸（３つの
リン酸基が付加されたヌクレオシド）は、成長するDNA
鎖の末端と反応する。反応は、入来するヌクレオシド三
リン酸上の５′の位置におけるリン酸基と成長するDNA
鎖の末端上の糖環の３′の位置における水酸基との結合
を含む。他の２つのリン酸基は、反応の間に遊離させら
れ、それによって結果としてDNA鎖へのヌクレオチドの
付加を生ずる。
ヌクレオシド類縁体は、それらがウィルスのDNA合成
に関与できるように、天然由来のヌクレオシドに十分に
模倣された化合物である。しかしながら、抗ウィルス性
ヌクレオシド類縁体は、化学的構造における戦略的に置
かれた差異を有し、それは、逆転写酵素のようなウィル
スの酵素を抑制するか、またはそれはひとたび類縁体が
成長するDNA鎖に付加されればさらなるDNA合成を妨げ
る。
ジデオキシヌクレオシドは、通常リボースの第２およ
び第３の位置に存在する水酸基が欠失した抗ウィルス化
合物である。ジデオキシヌクレオシドが成長するDNA鎖
に組入れられるときには、それのリボース基上の３−OH
基の欠如は、他のヌクレオチドを付加することを不可能
にし、かつ鎖は終結される。ジデオキシヌクレオシド
は、特に、ウィルスの複製がウィルスの逆転写酵素によ
るウィルスのRNAのDNAへの転写を必要とする、レトロウ
ィルスの感染を治療することにおいて有用である。他の
ヌクレオシド類縁体は、デオキシヌクレオシドおよびリ
ボースまたは他のペントースの断片だけが塩基分子に接
続されたヌクレオシド類縁体を含む。
後天性免疫不全症候群（AIDS）は、ヒト免疫不全ウィ
ルス（HIV）により引き起こされる。HIVは、CD4＋ヘル
パーリンパ球、CD4＋単球およびマクロファージならび
にある他のCD4＋細胞タイプのような、CD4（T4）表面抗
原を持つ細胞に感染する。CD4＋リンパ球のHIV感染は、
細胞溶解およびAIDSの免疫不全に寄与する細胞の死を結
果として生じさせるが、CD4＋単球およびマクロファー
ジは、ウィルスにより大きく害されないかもしれない。
これらの細胞におけるウィルスの複製は、より長期に引
延ばされかつリンパ球におけるよりもより少なく細胞障
害性であることがわかり、かつ結果として、単球及びマ
クロファージがHIV感染の重要な受け皿として代わりに
働く。HIV抗体の存在について試験で陰性であることが
確かめられたAIDS患者においてさえも、マクロファージ
がHIV感染の受け皿として働いているであろうことが最
近発見されてきた。ジデオキシヌクレオシドが延命効果
を示し、さらにAIDSに伴う致命的な感染症の発生率を減
少させるとはいえ、AIDSの効果的な治療剤は存在しな
い。
リッチマン（Richman）氏らによる（１）により示さ
れるように、ある単球誘導されたマクロファージは、HI
V株により感染されたときには、ジデオキシシチジン、
アジドチミジンおよび生体外での他のジデオキシヌクレ
オシドによる治療に抵抗性であることがわかっている。
この抵抗性は、部分的にはジデオキシヌクレオシドキナ
ーゼの低いレベルに起因するであろう。その結果、AZ
T、ddCまたはddAをリン酸化する能力は減少させられ
る。明らかに、HIVまたは他のウィルスにより感染され
たマクロファージ、およびウィルスに感染された他の細
胞に大量の有効な抗ウィルス性化合物を運ぶより有効な
方法を有することが有用である。また、それらの潜在能
を増加させるだけでなくそれらの効能を引き延ばす、抗
ウィルス性化合物を運ぶより有効な方法を有することが
有用である。
AZTのようなジデオキシヌクレオシド類縁体は、AIDS
を治療するための現在最もよく知られた効力ある薬であ
るが、最近のヒトの試みにおいて、重大な毒性が注目さ
れ、それは、貧血（24％）および顆粒球（16％）（２、
３）により明らかにされた。したがって、AZTおよび他
のジデオキシヌクレオシドを、これらの薬の毒性の副作
用が減少されるような態様において投与するための手段
を提供することが望ましい。さらに、単球／マクロファ
ージへの、この細胞群におけるウィルスの感染に抗した
薬の効能を向上させるため、ジデオキシヌクレオシドの
選択的な目標攻撃を付与することが望ましい。これを行
なうための１つの方法は、マクロファージによるリポソ
ームの取込みを利用することである。
1965年に、アレックス・バンガム（Alex Bangham）
氏およびその協力者は、ホスファチジルコリンの乾燥フ
ィルムが、水和による閉じられた２分子の小葉状液胞を
自発的に形成したことを発見した（４）。結局は、これ
らの構造は、リポソームとして知られるようになった。
リポソームのための多数の使用が、薬物において提案
されている。これらの使用のいくつかは、標的器官に治
療剤を運ぶためのキャリアとしてである。薬剤は、リポ
ソーム形成のプロセスの間にカプセル化され、かつリポ
ソームが細胞表面膜の脂質と融合するときに生体内に遊
離させられる。リポソームは、標的器官に、より高い濃
度の治療剤を運ぶ手段を与える。さらに、リポソームの
放出は、治療剤をリポソームの取込み部位に集中させる
ので、それは有毒な副作用を減少させる。
たとえば、ブラック（Black）氏およびワトソン（Wat
son）氏（５）およびアルビング（Alving）氏ら（６）
により独立して示されるように、リポソームのアンチモ
ン剤は、リーシュマニア症（Leishmaniasis）を治療す
ることにおいて単独の薬剤より数百倍有効である。リポ
ソームに取込まれたアンホテリシンＢは、全身性の真菌
疾患（７）により免疫抑制された患者を治療することに
おいて単独の薬剤より有効であることが明らかである。
リポソームのカプセル化のための他の使用は、ドキソル
ビシン毒性（８）の制限およびアミノグリコシド毒性
（９）の減少を含む。
先に述べられたように、今、マクロファージは、HIV
感染（10、11）の重要な受け皿であると考えられる。ま
た、マクロファージは、リポソームの取込み（12、13）
の主要な部位である。したがって、AIDSおよび他のウィ
ルスの感染を治療することにおける抗ウィルス性ヌクレ
オシド類縁体の有効性を向上させるためにリポソームを
利用することが望ましいであろう。
治療に対して抵抗性となっているAIDS感染された細胞
へ、リン酸化されたジデオキシヌクレオシドを運ぶため
のリポソームの使用は、低いジデオキシヌクレオシドキ
ナーゼの水準を高めるために提案されている。
ヨードデオキシウリジン（IUDR）、アシロビア（AC
V）およびリバビリンのようなヌクレオシド類縁体を、A
IDS以外の疾患を治療するためにリポソームに取込むこ
ともまた企図されている。しかしながら、これらの企図
は完全に満足なものではなく、なぜならばこれらの相対
的に小さい水溶性のヌクレオシド類縁体は、リポソーム
からすぐに漏れがちであり（14、15）、目標攻撃の有効
性が減少されることを結果として生ずるからである。他
の欠点は、血清の存在下でリポソームから漏れる傾向、
リポソームの組成および安定性における困難性、リポソ
ームへの負荷の程度が低いこと、およびリポソームの細
胞の取込みの後で酸性ヒドロラーゼに露出されたときの
リポソームのジデオキシヌクレオシドリン酸の加水分解
を含む。
アラビノフラノシルシトシン（ara−Ｃ）およびアラ
ビノフラノシルアデニン（ara−Ａ）のようなヌクレオ
シド類縁体を、リン脂質により、種々のタイプのがん
（16）に治療におけるそれらの化学治療剤として、異化
安定性を向上させるために結合することもまた企図され
ている。結果として生ずる薬剤は、取込まれないヌクレ
オシド類縁体に勝って減少された毒性および増加された
安定性を示した。しかしながら、結果として生ずる薬剤
は、乏しい細胞の取込み（16）および乏しい薬剤吸収
（17）を示した。
リポソームに取込まれたヌクレオシド類縁体をウィル
スの感染を治療するためにより有効に使用するために、
リポソームおよびヌクレオシド類縁体の間の結合の安定
性を増加させることが望ましい。
これらの抗ウィルス性リポソームの有効性をさらに向
上させるために、感染された細胞または感染の部位をリ
ポソームに攻撃させることが望ましいであろう。リポソ
ームの放出におけるより大きい特異性は、モノクローナ
ル抗体または他のリガンドをリポソームに取込むことに
より得られるだろう。そのようなリガンドは、リポソー
ムに、リガンドを結合することができるリポソームの取
込みの部位を目標攻撃させるであろう。免疫リポソーム
を形成するための抗体のリポソームへの取込みのための
２つの異なった方策が述べられており、それは、パルミ
トイル抗体の合成を含むユアング（Huang）氏および協
力者のもの（18）およびチオール化された抗体のリポソ
ームを取込まれたホスファチジルエタノールアミン（P
E）への結合を含むルサーマン（Leserman）氏らのもの
（19）である。
ここに開示された方法は、AIDSおよび他のレトロウィ
ルス性疾患の治療において使用されるジデオキシヌクレ
オシドに適用されるだけでなく、単純ヘルペスウィルス
（HSV）、ヒトヘルペスウィルス６、サイトメガロウィ
ルス（CMV）、Ｂ型肝炎ウィルス、エプスタイン−バー
ルウィルス（EBV）および水痘ウィルス（VZV）のような
他のウィルスにより引起こされる疾患の治療における抗
ウィルス性ヌクレオシドの使用にも適用される。したが
って、用語「ヌクレオシド類縁体」は、ここにおいて、
ウィルスの逆転写酵素の抑制を含む、種々のステップに
おけるウィルスの複製を抑制できる、またはそこではそ
れらは鎖終結機能を示し、ウィルスのDNAまたはRNAに取
込むことができる、化合物を示すために使用される。
発明の概要 この発明は、HIV（AIDS）、単純ヘルペスウィルス（H
SV）、ヒトヘルペスウィルス６、サイトメガロウィルス
（CMV）、Ｂ型肝炎ウィルス、エプスタイン−バールウ
ィルス（EBV）および水痘ウィルス（VZV）を含む、ウィ
ルスの感染を治療することにおける使用のための化合物
および組成物を提供する。組成物は、医薬的に受容可能
のキャリアに加えて、抗ウィルス性ヌクレオシド類縁体
を少なくとも１つの脂質種に化学的に結合することによ
り調製される親油性の抗ウィルス化合物を含んでもよ
い。抗ウィルス性ヌクレオシド類縁体は、一リン酸、二
リン酸または三リン酸の基を介して脂質に結合されても
よい。この発明は、さらに、抗ウィルス剤の改良された
供給のために、そのような抗ウィルス剤の脂質誘導体を
リポソームに取込むための方法を提供する。リポソーム
は、相対的に球状の二重層を含み、それは、完全にまた
は部分的に、上述の抗ウィルス剤の脂質誘導体からな
る。リポソームは、また、薬理学的に不活性な脂質を含
んでもよい。さらに、リポソームは、ウィルス結合部位
へのモノクローナル抗体（CD4のような）のような、リ
ガンドまたは他の結合蛋白質を含んでもよい。そのよう
なリガンドは、抗ウィルス剤の供給部位における付加的
な特異性を与える。この発明は、そのようなリガンドの
抗ウィルス性リポソームへの取込みのための方法を提供
する。
したがって、この発明により、抗ウィルス特性を有す
る化合物が提供され、それは、 プリンまたはピリミジンまたはそれらの類縁体からな
る塩基部分およびペントース残基からなる糖部分を有
し、少なくとも１つの前記部分が天然由来でないヌクレ
オシド成分であるヌクレオシド類縁体と、 前記ペントース残基に結合された脂質部とからなる。
ただし、前記ペントース残基がアラビノフラノースで
ありかつ前記塩基部分がシトシンまたはアデニンである
とき、当該化合物はリポソームの形態である。
１つの好ましい実施例においては、上記化合物は、ホ
スファチジルジデオキシヌクレオシドまたはジデオキシ
ヌクレオシド二リン酸グリセリドである。他のものにお
いては、脂質種は、グルセロール−リン酸の少なくとも
１つのアシルエステル、エーテルまたはビニルエーテル
の基を含んでもよい。少なくとも１つのアシルエステ
ル、エーテルまたはビニルエーテルの基を有するホスフ
ァチジン酸は、また、好ましい脂質種として働いてもよ
い。
他の実施例においては、ヌクレオシド類縁体は、β−
Ｎ−グリコシル結合を介して、２′または３′炭素の少
なくとも１つがなく、しかし５′炭素を保持するペント
ース残基に結合されるプリンまたはピリミジンであり、
かつリン酸基は、５′炭素（すなわち、完全なペントー
ス部における５′炭素であるであろうもの）に結合され
る。この発明の他の実施例においては、脂質種は、Ｎ−
アシルスフィンゴシンである。
いくつかの好ましい実施例においては、たとえばエス
テル、エーテルまたはビニルエーテルのような、いかな
る結合の脂質種のアシルまたはアルキル基も、２ないし
24の炭素原子を含む。１つの変形においては、アシルま
たはアルキル基の少なくとも１つは飽和される。他のも
のにおいては、アシルまたはアルキル基の少なくとも１
つは、６個までの二重結合を有する。さらに他の実施例
においては、アシルまたはアルキル基は、エステルまた
はアルキル結合により、ヌクレオシドの５′−水酸基に
直接に付加されてもよい。
さらに他のものにおいては、脂質部位はグリセリドで
あり、かつグリセリドは、同一であるかまたは異なって
いる２つのアシル基を有する。この発明のさらに他の実
施例においては、脂質種は、脂肪アルコール残基であ
り、それは、エステル結合を介してリン酸結合基に結合
される。化合物は、有利に、１つないし３つのリン酸基
および少なくとも１つの脂肪アルコールエステルを有し
てもよく、かつ構造が同一であるかまたは異なった、２
つまたは３つ以上の脂肪アルコール残基を有してもよ
い。これらの脂肪アルコールは、好ましくは、化合物の
末端リン酸基に結合される。
さらに、この発明は、上記化合物に加えて、さらにホ
スファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジルイノシトールおよびスフィンゴミエ
リンからなる群から選択されたリン脂質をリポソームが
備える、組成物を含む。
この発明の１つの実施例においては、抗ウィルス剤の
割合は、リポソームの重量の0.01ないし100パーセント
である。
他の実施例においては、リポソームは、さらに、脂質
基質に結合されたリガンドを含む。リガンドは、ウィル
ス抗原に対するモノクローナル抗体のような抗体であっ
てもよい。ウィルス抗原は、HIVのgp41またはgp110であ
るか、または任意の他の適当なウィルス抗原であること
が可能である。１つの実施例においては、リガンドは、
CD4受容体タンパク質またはCD4タンパク質それ自体であ
る。代替的には、リガンドは、CD4に対する抗体またはC
D4を結合するタンパク質もしくは他の物質である。
この発明は、また、ウィルスおよびレトロウィルスの
感染の治療に使用するための組成物を意図し、それは、
少なくとも部分的に親油性抗ウィルス剤から形成された
リポソームを含み、その薬剤は、塩基、およびヌクレオ
シド類縁体のペントース残基の５′水酸基に、一リン
酸、二リン酸または三リン酸の結合基を介してヌクレオ
シド類縁体に付加された少なくとも１つの脂質種ととも
にペントース残基を有するヌクレオシド類縁体、ならび
にそのための医薬的に認められるキャリアを備えてい
る。
したがって、抗ウィルス性の特性を有する化合物が提
供され、それは、置換または非置換プリンまたはピリミ
ジンからなる塩基部分およびペントース残基からなる糖
部分を有する抗ウィルス性ヌクレオシド類縁体と、ペン
トース残基に結合された脂質部とからなる。ただし、ペ
ントース残基がリボースでありかつ塩基部分がシトシン
であり、またペントース残基がアラビノフラノースであ
りかつ塩基部分がシトシンまたはアデニンであるとき、
当該化合物はリポソームの形態である。１つの実施例に
おいては、ヌクレオシド類縁体は、プリン、ピリミジン
またはそれの誘導体である窒素を含む塩基であり、かつ
ペントース残基は、リボースの２′,3′−ジデオキシ、
２′,3′−ジデヒドロ、アジドもしくはハロ誘導体また
はリボースの非環式で水酸化された断片である。したが
って、ペントース残基は、２′,3′−ジデオキシリボー
スであり、かつヌクレオシド類縁体は、２′,3′−ジデ
オキシシチジン、２′,3′−ジデオキシシチミジン、
２′,3′−ジデオキシグアノシン、２′,3′−ジデオキ
シアデノシン、２′,3′−ジデオキシイノシンまたは2,
6ジアミノプリン、２′,3′−ジデオキシリボシドであ
ってもよい。
他の実施例においては、ペントース残基は２′,3′−
ジデヒドロリボースであり、かつヌクレオシドは、
２′,3′−ジデヒドロチミジン、２′,3′−ジデヒドロ
シチジン炭素環式または２′,3′−ジデヒドログアノシ
ンである。
さらに他の実施例においては、ペントース残基はリボー
スのアジド誘導体であり、かつヌクレオシドは、３′−
アジド−３′−デオキシチミジン、３′−アジド−３′
−デオキシグアノシンまたは2,6−ジアミノプリン−３
−アジド−２′,3′ジデオキシリボシドである。
この発明のさらに他の実施例においては、ペントース
残基は、リボースのハロ誘導体であり、かつヌクレオシ
ドは、３′−フルオロ−３′−デオキシチミジン、３′
−フルオロ−２′,3′−ジデオキシグアノシン、２′,
3′−ジデオキシ−２′−フルオロ−ara−アデノシンま
たは2,6−ジアミノプリン−３′−フルオロ−２′,3′
−ジデオキシリボシドである。この発明は、また、たと
えば２−クロロ−デオキシアデノシンのような、プリン
またはピリミジン環のハロ誘導体を含む。代替的には、
ペントース残基は、リボースの非環式で水酸化された断
片であり、かつ、ヌクレオシドは、９−（4,−ヒドロキ
シ−１′,2′−ブタジエニル）アデニン、３−（4,−ヒ
ドロキシ−１′,2′−ブタジエニル）シトシン、９−
（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンまたはホス
ホメトキシジアミノプリンである。
この発明の他の局面に従って、ヌクレオシド類縁体
は、アシクロビア、ガンシクロビア、１−（２′−デオ
キシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノシ
ル）−５−ヨードシトシン（FIAC）または１（２′−デ
オキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−アラビノフラノ
シル）−５−ヨードウラシル（FIAU）である。
前述の化合物のすべてにおいて、一リン酸、二リン酸
または三リン酸の結合基が、ペントース残基の５′部位
と脂質種の間に与えられてもよい。代替的には、２つの
官能基を含み、官能基の間に０ないし10の炭素原子を有
する脂肪族の架橋があってもよく、架橋は、脂質とペン
トース残基を結合する。この発明のさらに他の実施例に
おいては、脂質種は、脂肪酸、モノアシルグリセロー
ル、ジアシルグリセロールまたはリン脂質である。リン
脂質は、糖または多価アルコールを含む頭部の基を有し
てもよい。リン酸の特定的な例は、ビス（ジアシルグリ
セロ）−リン酸およびジホスファチジルグリセロールを
含む。脂質種の他の例は、D,L−2,3−ジアシルオキシプ
ロピル−（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニ
ウム基を含む。
この発明の他の局面に従って、脂質種は、１から４ま
での脂肪酸部を含み、各部は、２ないし24の炭素原子を
含む。有利に、脂質種の少なくとも１つの脂肪酸部は不
飽和で、しかも１から６個の二重結合を有する。
これらの化合物に特定的な例は、３−ホスホノメトキ
シエチル−2,6−ジアミノプリン、1,2−ジアシルグリセ
ロホスホ−５′−（２′,3′−ジデオキシ）チミジンを
含む。
化学式 （Ｌ）ｍ−（Ｗ）ｎ−Ａ−Ｑ−Ｚ を有する特定の化合物が与えられ、そこではＺはヌクレ
オシド類縁体の塩基部分であり、Ｑはペントース残基で
あり、ＡはＯ、ＣまたはＳであり、Ｗはリン酸であり、
ｎ＝０ないし３であり、かつＬは脂質部であり、そこに
おいてｍ＝１ないし５であり、かつｎ＝０である各Ｌが
Ａに直接結合される場合を除いては各ＬはＷに直接に結
合される。
また、化学式 を有する化合物が含まれ、そこにおいてＺはヌクレオシ
ド類縁体の置換もしくは非置換のプリンまたはピリミジ
ン基であり、 Ｑはペントース残基であり、 Ｗはリン酸であり、ＡはＯ、ＣまたはＳであり、L1は
（CH2−CHOH−CH2）であり、かつＬは脂質部である。
この発明の１つの実施例において、前述の化学式を参
照して、各Ｌはそれぞれ独立してＲおよび以下からなる
群から選択され、 そこにおいてＲ、R1およびR2はそれぞれ独立してC2ない
しC24の脂肪族基であり、かつＲ、R1およびR2はそれぞ
れ独立して０ないし６個の不飽和部位を有し、かつ構造 CH3−（CH2）ａ−（CH＝CH−CH2）ｂ−（CH2）ｃ−Ｙ を有し、そこにおいてａおよびｃの和は１ないし23であ
り、かつｂは０ないし６であり、かつＹはＣ（Ｏ）Ｏ
−、Ｃ−Ｏ−、Ｃ＝Ｃ−Ｏ−、Ｃ（Ｏ）Ｓ−、Ｃ−Ｓ−
またはＣ＝Ｃ−Ｓ−である。
前述の化合物の１つの実施例においては、ペントース
残基は、プリンの９位またはピリミジンの１位に付加さ
れた、リボース、ジデオキシリボース、ジデヒドロリボ
ースまたはアジドもしくはハロ置換リボースを含む。
この発明は、また、抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質
誘導体を合成するための方法を提供し、それは、リボー
ス水酸基を有する抗ウィルス性ヌクレオシドを、リン脂
質により、結合試薬の存在下で反応させるステップを含
み、それによってヌクレオシドはリボースの水酸基の位
置でリン酸結合によりリン脂質に結合される。１つの好
ましい実施例においては、リン脂質はジアシルリン酸で
ある。他のものにおいては、リン脂質はホスファチジン
酸またはセラミドである。またここには、抗ウィルス性
ヌクレオシドの脂質誘導体を合成する方法が提供され、
それは、抗ウィルス性ヌクレオシド一リン酸を反応試薬
HLにより反応させるステップを含み、そこにおいてＬ
は、リン酸結合を介して酸をヌクレオシドに結合するた
めにヌクレオシドPO4−Ｌをホスファチジン酸と反応さ
せてヌクレオシドPO4−Ｌを形成するための遊離基を表
わす。方法の１つの変形において、ヌクレオシド一リン
酸は、AZT5′−一リン酸である。
この発明によって提供されたさらに他の方法は、ヌク
レオシド類縁体のグリセリド誘導体を合成する方法であ
り、それは、塩基性触媒の存在下でモノグリセリドまた
はジグリセリドと抗ウィルス性ヌクレオシド一リン酸を
結合試薬を用いて結合するステップを含む。１つの実施
例においては、グリセリドはｌ−Ｏ−ステアロイルグリ
セロールであり、かつヌクレオシドはAZT一リン酸であ
る。
また、この発明の一部は、哺乳動物におけるウィルス
およびレトロウィルスの感染を治療することにおける使
用のためのリポソームの懸濁物を調製するための方法で
あり、それは、ヌクレオシドのペントース残基の５′位
において一リン酸、二リン酸または三リン酸の結合基を
介してヌクレオシド類縁体に付加された少なくとも１つ
の脂質種を含む親油性の抗ウィルス剤を与えるステップ
と、混合物を形成するために親油性の抗ウィルス剤およ
び薬理学的に受容可能の水性溶剤を配合するステップ
と、親油性の抗ウィルス剤からリポソームを形成するス
テップとを含む。リポソームは、たとえば、超音波処
理、押出し成形またはミクロ流動化により形成されても
よい。１つの好ましい実施例においては、配合するステ
ップは、さらに、薬理学的に不活性の親油性の脂質を配
合に含むステップを含む。この不活性の脂質は、たとえ
ば、ホスファチジルエタノールアミン、スフィンゴリピ
ド、ステロールまたはグリセロホスファチドであり得
る。方法は、また、免疫リポソームを生成するためにチ
オ−抗体によりリポソームを処理するステップまたは部
分的にリガンドからなる親油性の脂質を配合に含むステ
ップを含んでもよい。したがって、リポソームは、脂質
サブストレートに結合されたリガンドを含んでもよい。
加えて、この発明は、治療の投与量の抗ウィルス剤を
哺乳動物に供給するために十分な量のここに述べられた
抗ウィルス性ヌクレオシド類縁体を投与することによ
り、ヒトのような、哺乳動物におけるレトロウィルスの
およびウィルスの感染を治療するための方法を含む。好
ましい実施例においてその方法は、レトロウィルスが従
来の形態の抗ウィルス剤により治療に抵抗性となってい
る、哺乳動物におけるレトロウィルスのおよびウィルス
の感染を治療するために使用される。この発明は、ま
た、AZTに対して発達した抵抗性またはAZTに対して減少
された感度を有するHIVの株を有する患者の治療のため
の方法を含み、それは、そのような患者に、この発明の
化合物を有効な、レトロウィルスを抑制する投与量にお
いて投与するステップを含む。また、この発明に含まれ
るのは、哺乳動物におけるウィルスの感染を治療するた
めの方法であり、それは、有効な量のここに述べられた
化合物を哺乳動物に投与するステップを含む。感染は、
単純疱疹感染であってもよく、かつ化合物はホスファチ
ジルアシクロビアであってもよい。代替的には、ウィル
スは、HIVレトロウィルスであってもよく、かつ化合物
は５′−パルミトイルAZTであってもよい。この方法
は、レトロウィルスはヌクレオシド類縁体に対する抵抗
性を発達させているHIV株に対しての使用を含む。
またここに開示されるのは、哺乳動物におけるヌクレ
オシド類縁体の抗ウィルス性効果をより持続させるため
の方法であって、それは、ここに開示されたヌクレオシ
ド−脂質誘導体の形態でヌクレオシド類縁体を哺乳動物
に投与するステップを含む。また開示されるのは、ここ
に開示された脂質誘導体化合物の形態において類縁体を
投与することを介して、ヌクレオシド類縁体に対するレ
トロウィルスの抵抗性を避けるかまたは克服するための
方法である。
この発明は、ヒトのウィルスの感染の治療のための薬
剤の調製におけるこの発明の化合物および組成物の使用
を含む。この発明の組成物は、この発明の化合物および
医薬的に受容可能のキャリアを含んでもよい。この発明
の組成物は、この発明の化合物および少なくとも１つの
他の抗ウィルス性化合物を含んでもよい。
抗レトロウィルスおよび抗ウィルスの薬剤のリポソー
ムでの配達（デリバリー）は、リポソームを容易に取込
むマクロファージおよび単球細胞へのより高い量の投与
を結果として生ずる。この発明の独特の利点は、抗ウィ
ルス性ヌクレオシドの脂質誘導体は、水性の区画よりも
リポソームのリン脂質層に主として組込まれることであ
る。このことにより、ヌクレオシドの水溶性リン酸エス
テルが使用されるときの場合よりも多くの量の抗ウィル
ス性類縁体がリポソームに取込まれるようになる。リポ
ソームへの抗ウィルス誘導体の完全な取込みが得られ、
したがって、薬剤対脂質の割合および組成物の有効性の
双方が改良される。さらに、貯留の間にリポソームから
の抗ウィルス性脂質類縁体の漏れはないであろう。最終
的には、これらの化合物を使用するリポソームの治療
は、大量の抗ウィルス性化合物を、感染されたマクロフ
ァージおよび単球細胞に供給するようになる。部位特異
的リガンドを含むリポソームの化合物による治療は、さ
らにより大量の抗ウィルス性化合物をより特異的に供給
するようになる。
この発明の他の新しい利点は、下に開示された各分類
の抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質誘導体が、細胞の代
謝によって抗ウィルス性のリン酸化されたかまたはリン
酸化されないヌクレオシドを直接生じさせると考えられ
ることである。
この発明のさらなる利点は、新しい脂質誘導体は細胞
に組込まれ、薬剤が除去された後で48時間までまたは48
時間を超えて、より引延ばされた時間、細胞を保護する
ことである。
この発明のこれらおよびその他の利点ならびに特徴
は、以下の説明および添付の請求の範囲からより十分に
明らかになるであろう。
図面の簡単な説明 第１図ないし第５図は、生体外で投与されたこの発明
の化合物量の関数としてHIV感染された細胞によるp24生
成をプロットしたグラフである。
発明の詳細な説明 この発明は、リポソームの脂質二重層に組込むことが
できるヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を含む。これら
の誘導体は、構成細胞の代謝過程によりヌクレオシド類
縁体に変換され、かつ生体内および生体外で抗ウィルス
性効果を有する。
ヌクレオシド類縁体の適当な脂質誘導体は、ホスファ
チジルヌクレオシド、ヌクレオシド二リン酸、ジアシル
グリセロール、ヌクレオシドアシルリン酸およびセラミ
ドホスホヌクレオシドを含む。１から５個のアシル基を
含むことができるアシルリン酸を除いて、これらの化合
物の脂質誘導体は、リポソームの脂質二重層にヌクレオ
シドを留めるために１つまたは２つの疎水性アシル基を
与える。この発明は、また、付加的なアシル基およびさ
らにヌクレオシド類縁体をより強くひき留めることがで
きる脂質誘導体を含む。ひき留める力の増加は、より大
きい極性のヌクレオシド類縁体をリポソームの処方にお
いて利用することを可能にする。したがって、リポソー
ムの治療における使用のためのこのタイプの付加的なヌ
クレオシド構造が開示される。また、そこにおいて脂質
基が、リン酸結合を介してよりも直接にヌクレオシドに
付加される、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体が開示さ
れる。
学名命名法 この発明の脂質誘導体は、厄介な用語によって初めて
正確に規定することができる、複合構造からなる。明快
さのために、脂質およびヌクレオシド成分ならびにそれ
らの結合の記述は、当該技術分野において知られてい
る、通常使用される慣用名によるであろう。たとえば、
よく知られた薬剤、３′−アジド−３′−デオキシチミ
ジンは、しばしばAZTと呼ばれるであろう。同様に、1,2
ジアシルグリセロール−３−リン酸部を含むAZTの誘導
体は、しばしばホスファチジルAZTまたはpAZTと呼ばれ
るであろう。ジデオキシチミジンまたはジデオキシシチ
ジンの同様の誘導体は、同様に、ホスファチジルddTま
たはpddTならびにホスファチジルddCおよびpddCと呼ば
れるであろう。ハロゲン化されたヌクレオシドの誘導体
は、たとえば、ホスファチジル−３′BrddTと呼ばれる
であろう。
この発明のヌクレオシド類縁体は、ウィルスの感染の
ために治療されるべき種において天然由来でない任意の
ヌクレオシドであり得る。それは、天然由来のリボース
基の類縁体に付加された天然由来のプリンまたはピリミ
ジン塩基を含んでもよい。同様に、それは、天然由来の
ヌクレオシドに存在するリボースまたはデオキシリボー
ス基に付加されたプリンまたはピリミジン塩基の類縁体
を含んでもよい。代替的には、ヌクレオシド類縁体の塩
基およびリボース部の双方は、天然に見つけられるもの
の類縁体であってよい。ヌクレオシド類縁体は、また、
リボースでない糖部に付加された通常の塩基または塩基
類縁体のどちらかを含んでもよい。
プリンまたはピリミジン塩基およびリボース基の双方
の類縁体は、そこに新しい置換基が付加されることによ
り、天然由来の置換基がそこから省かれることにより、
または通常存在する原子が他のものにより置換えられる
ことにより、対応する天然由来の部分と異なる。置換に
より形成された類縁体の例は、2,6−ジアミノプリンお
よび３′−アジド−３′デオキシリボース、欠失により
６−オキシプリンまたはジデヒドロリボース、置換えに
より８−アザグアニンである。
ヌクレオシド類縁体は、また、たとえばピリミジンの
１位より３位において窒素を介したような、天然由来で
ない結合においてペントース部に付加されたプリンまた
はピリミジン塩基を含んでもよい。
一般的には、この発明のリポソームを調製することに
おいて使用されるヌクレオシド類縁体は、リボースまた
はリボース残基および／または誘導体のような、ペント
ースに付加された、プリンまたはピリミジン塩基、たと
えば、アデニン、グアニン、シトシンまたはチミンまた
はそれの類縁体を有するであろう。付加は、プリンの９
位における窒素を介して、かつピリミジンの１位におけ
る窒素を介してである。これらの窒素は、β−Ｎ−グリ
コシル結合により、ペントース残基の炭素１に結合され
る。
ペントース残基は、完全なペントースまたはジオキシ
−またはジデオキシペントースのような類縁体であって
もよい。加えて、ペントース残基は、ヒドロキシル化さ
れた２−プロポキシメチル残基またはヒドロキシル化さ
れたエトキシメチル残基のような、ペントースの断片で
あり得る。これらの構造を有する特定のヌクレオシド残
基は、アシクロビアおよびガンシクロビアを含む。ま
た、ペントースはたとえば、デオキシリボース３′位に
（BCH−189）、炭素原子の代わりに酸素または硫黄の置
換を有してもよい。
リン酸基は、通常この発明の化合物におけるペントー
スの５′炭素に結合されるが、そこにおいてリン酸基が
ペントースの３′水酸基に付加される化合物は、もしそ
れらが抗ウィルス性活性を所有すればこの発明の範囲内
にある。脂質がペントース基に直接に結合されるところ
では、それらの結合は、また、３′または好ましくは
５′ペントース炭素を介して行うことができる。
完全なペントースではないペントース残基を有する化
合物においては、リン酸基は、もしペントースが完全で
あれば５′炭素であるであろう炭素に結合されることを
認識することが重要である。これらのペントース断片に
おいては、２′および／または３′炭素は消失していて
もよいが、それにもかかわらず、それらはこの発明の手
段内のヌクレオシド誘導体であると考慮され、かつそこ
にリン酸基が結合される炭素原子は、使用の継続性の目
的のために、５′炭素としてここに一般的に参照される
であろう。
抗ウィルス性活性を有するヌクレオシド類縁体の任意
の脂質誘導体は、この発明の範囲内である。抗ウィルス
性活性は、脂質−ヌクレオシド複合体の任意の成分に、
すなわち、ヌクレオシド塩基類縁体に、リボース類縁体
に、またはリポソームのための他のペントースの置換
に、あってもよい。それは、また、そこにおいて、たと
えば、弱い抗ウィルス性の類縁体またはわずかなもしく
は潜在的なウィルス活性を所有するものがそれのヌクレ
オシドの脂質誘導体への取込みに従ってより効力が発揮
するようになる、全体としての複合体にあってもよい。
そのような活性を有すると知られているヌクレオシド
は、３′−アジド−２′、３′−ジデオキシピリミジン
ヌクレオシド、たとえば、AZT、AZT−Ｐ−AZT、AZT−Ｐ
−ddA、AZT−Ｐ−ddI、AzddClU、AzddMeC、AzddMeC N4
−OH、AzddMeC N4Me、AZT−Ｐ−CyE−ddA、AzddEtU（C
S−85）、AzddU（CS−87）、AzddC（CS−91）、AzddF
C、AzddBrUおよびAzddIUを含むクラスのメンバーであ
り、このクラスは、３′−ハロピリミジンジデオキシヌ
クレオシド、たとえば３−FddClU、３−FddU、３−Fdd
T、３−FddBrUおよび３−FddEtUを含み、このクラス
は、２′,3′−ジデヒドロ−２′,3′−ジデオキシヌク
レオシド（D4ヌクレオシド）、たとえば、D4T、D4C、D4
MeCおよびD4Aを含み、このクラスは、２′,3′−非置換
ジデオキシピリミジンヌクレオシド、たとえば、５−Ｆ
−ddC、ddCおよびddTを含み、このクラスは、２′,3′
−非置換ジデオキシプリンヌクレオシド、たとえば、dd
A、ddDAPR（ジアミノプリン）、ddG、ddIおよびddMeA
（N6メチル）を含み、かつこのクラスは、糖置換された
ジデオキシプリンヌクレオシド、たとえば、３−N3ddDA
PR、３−N3ddG、３−FddDAPR、３−FddG、３−FddaraA
および３−FddAを含み、そこにおいてMeはメチルであ
り、Etはエチルであり、かつCyEtはシアノエチルであ
る。
下に述べられるように、他の適当なヌクレオチド類縁
体は、アシクロビアまたはガンシクロビア（DHPG）、ま
たは他の類縁体のような抗ウィルス剤であってもよい。
好ましいジデオキシ誘導体は、３′−アジド−３′−ジ
デオキシチミジン（アジドチミジンまたはAZT）、２′,
3′−ジデオキシチミジン（ddT）、２′,3′−ジデオキ
シシチジン（ddC）、２′,3′−ジデオキシアデノシン
（ddA）および２′,3′−ジデオキシグアノシン（ddG）
を含む、AIDSの治療において使用されるものである。AZ
T、ddTおよびddCは、現在最も好ましい類縁体である。
カルボビア、炭素環の２′,3′−ジデヒドログアノシン
と同様にジデヒドロピリミジンもまた好ましい。デオキ
シグアノシン（AZG）およびピリミジンの３′−アジド
誘導体、デオキシウリジンならびにデオキシチミジンお
よびデオキシグアノシンの３′−フルオロ誘導体は同様
に好ましい。２′,3′−ジアミノプリンの中では、
２′,3′−デオキシリボシドおよびそれの３′−フルオ
ロおよび３′−アジド誘導体が好ましい。また、２−ク
ロロ−デオキシアデノシンが好ましい。
非環式糖誘導体の中では、９−（4,−ヒドロキシ−
１′,2′，ブタジエニル）アデニン（アデナレン）およ
びそれのシトシン等価物が好ましい。プリンまたはジア
ミノプリン塩基を有する好ましい非環式誘導体は、９−
（２−ホスホニルメトキシエチル）アデニンおよびホス
ホノメトキシエチルデオキシジアミノプリン（PMEDAD
P）である。
２′−フルオロ−ara−ddAのような、これらのヌクレ
オシドの立体異性体は、有利であるかもしれず、それ
は、それらの抗ウィルス性活性を引延ばす、グリコシド
結合の酸−触媒された加水分解へのそれらの抵抗性のた
めである。そのような場合においては、それらは好まし
い。
ヘルペス、サイトメガロウィルスおよびＢ型肝炎の感
染を治療するために、アシクロビア、ガンシクロビア、
１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−Ｄ−
アラビノフラノシル）−５−ヨードシトシン（FIAC）ま
たは１−（２′−デオキシ−２′−フルオロ−１−β−
Ｄ−アラビノフラノシル）−５−ヨードウラシル（FIA
U）の脂質誘導体を利用してもよい。
脂質は、好ましくは、リン酸結合を介してヌクレオシ
ド類縁体に付加される。ヌクレオシド類縁体と脂質の間
のリン酸結合を含む脂質誘導体は、リン脂質、リン酸化
されたヌクレオシド類縁体、または双方から調製されて
もよい。適当なリン脂質は、ホスホグリセリド、スフィ
ンゴリピドまたはアシルリン酸を含む。
そこにおいて脂質がモノ−、ジ−またはトリホスフェ
ート基のいずれかを介して結合される。ヌクレオシド類
縁体の脂質誘導体は、リン酸化されたヌクレオシド類縁
体から調製されてもよい。リン酸化されたヌクレオシド
類縁体は知られている。ジデオキシヌクレオシド類縁体
は、トーチェン（Toorhen）氏およびトーパル（Topal）
氏のオキシ塩化リン法（20）のような従来の方法に従っ
てリン酸化される。好ましい修飾された類縁体は、５′
−一リン酸である。AZT、ddCおよび他のジデオキシヌク
レオシドは５′−水酸基のみを有するので、リン酸化の
間に５′−一リン酸のみが形成され、しかしながら、そ
こにおいて３′水酸基が存在する他の類縁体において
は、３′−一リン酸が形成できる。抗ウィルス性ヌクレ
オシドの二リン酸および三リン酸誘導体もまた使用され
てもよい。
脂質部の脂肪族基は、好ましくは、２ないし24の炭素
原子の鎖の長さを有し、かつ０ないし６の二重結合を有
する。脂肪族基は、アシル、エーテルまたはビニルエー
テル結合により、グリセロール部に付加されてもよい。
合成方法 この発明の脂質ヌクレオチド化合物は、図のフロー図
において示されかつ例１ないし７において特定的に説明
されるように、下に述べられるすべての脂質およびすべ
ての抗ウィルス性ヌクレオシドに適用できる一般的な方
法に従って合成することができる。
脂肪酸、アルコール、グリセリドおよびリン脂質を含
む脂質は、市販者（アバンティ・ポーラ・リピッズ・イ
ンコーポレーテッド（Avanti Polar Lipids In
c.）、ペルハム、アラバマ（Pelham、Alabama35124））
から購入されてもよく、または公知の方法に従って合成
されてもよい。抗ウィルス性ヌクレオシド類縁体は、ア
ルドリッチ、ミルウォーキー、ウィスコンシン（Aldric
h,Milwaukee,Wisconsin）からまたはシグマ、セント・
ルイス、ミズーリ（Sigma,St.Louis,Missouri）から入
手可能である。
痕跡量の水のすべては、結合反応が進行するために、
反応物から除去されることが重要である。したがって、
脂質は、第１に、真空下での溶媒蒸発または真空オーブ
ン中においてP2O5下のどちらかで冷凍乾燥される。ま
た、反応は、たとえばアルゴンのような不活性ガスの下
で実施される。
この発明の化合物は、リン脂質をヌクレオシド類縁体
に結合するかまたはリン脂質をヌクレオシド類縁体一リ
ン酸または二リン酸に結合する、合成方法に従って形成
することができ、そこにおいてリン酸基は、ヌクレオシ
ドのリボース基上で、３′または好ましくは５′の位置
に置かれる。
第１級長鎖脂肪酸もしくはアルコール、モノグリセリ
ドまたはジグリセリド、セラミドならびに下に述べられ
る他の脂質種を含むヌクレオシドに結合するために適当
な脂質は、たとえばブラウン氏の方法（32）に従ってフ
ェニルホスホロジクロリダートを使用して、適当な試薬
による処理により、例６におけるようなオキシ塩化リン
による処理により、または他の公知のホスホリル化法に
より、リン酸化されてもよい。
第１タイプの合成においては、たとえば、ホスファチ
ジン酸のようなリン脂質は、選択されたヌクレオシド類
縁体に３′または５′ヒドロキシルのどちらかにおいて
結合され、それは、室温において、塩基性触媒、たとえ
ば、無水ピリジンがあるところで、たとえば、2,4,6−
トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリドのよう
な、結合試薬によって行なわれる。また、ジシクロヘキ
シルカルボジイミドのような他の結合試薬を使用するこ
とができる。
脂質誘導体は、また、ホスファチジン酸を抗ウィルス
性ヌクレオシド一リン酸に、ピロリン酸結合を介して結
合することにより合成されてもよい。この方法において
は、ヌクレオシド一リン酸または二リン酸は、アグラノ
フ（Agranoff）氏およびスオミ（Suomi）氏の方法（2
1）に従って、かつ、AZTの誘導体を調製するために、例
４に例示されたように、かつ、ddAの誘導体のために、
例６のように、末端リン酸基に付加された、脱離基、た
とえばモルホリンを有する誘導体に変換される。ホスフ
ァチジン酸とヌクレオシドリン酸モルホリダートの結合
は、室温における無水ピリジンのような塩基性触媒を用
いた２つの反応試薬の乾燥混合物の処理において起こ
る。
反応は、薄層クロマトグラフィ（TLC）と適当な溶剤
を使用して追跡される。TLCにより測定された結果、反
応が完全であるときには、生成物は、有機溶剤により抽
出され、かつ脂質分離のために適当な保持体、たとえ
ば、珪酸の上のクロマトグラフィーにより精製される。
反応性アミノ基を有するアデニンまたはシチジンを含
む生成物の合成は、無水酢酸による処理により、結合反
応の前にこれらの基を酢酸エステルで保護することによ
り、促進されてもよく、最終精製物のクロマトグラフィ
ーの後で、アミノ基は、水酸化アンモニウムを使用して
保護を解かれる（例３）。
脂質誘導体 最も有効であろう化合物は、材料を安定した方法でリ
ポソームの二重層または他の高分子の配列に組込むこと
ができるために十分な脂質部分を有するであろう。
この発明の範囲内のヌクレオシド類縁体のいくつかの
好ましい脂質誘導体は、４つの一般的な分類に入る。
1. 抗ウィルス性ホスファチジルヌクレオシド これらの抗ウィルス脂質化合物の構造は、以下に示さ
れ、 そこでＮは、AZT、ddC、ddA、ddIまたはアシクロビルも
しくはガンシクロビルのような他の抗ウィルス性ヌクレ
オシドのような「鎖末端」ジデオキシヌクレオシドであ
り、Ａはカルコゲン（Ｏ、ＣまたはＳ）であり、かつ、
同一であるかまたは異なったR1およびR2は、C1ないしC
24の脂肪基であり、０ないし６個の不飽和部位を有し、
かつ、好ましくは、構造 CH3−（CH2）ａ−（CH＝CH−CH2）ｂ−（CH2）ｃ−Ｙ を有し、そこでは、ａおよびｃの和は１ないし23であ
り、かつｂは０ないし６であり、かつそこにおいてＹ
は、Ｃ（Ｏ）O-、Ｃ−O-、Ｃ＝Ｃ−O-、Ｃ（Ｏ）Ｓ−、
Ｃ−Ｓ−、Ｃ＝Ｃ−Ｓ−であり、アシルエステル、エー
テルまたはビニルエーテル結合を、それぞれに、脂肪族
基とグリセロール部の間に形成する。したがって、これ
らのアシルエステル結合における脂肪族基は、ラウリ
ン、ミリスチン、パルミチン、ステアリン、アラキジン
およびリグノセリンのような天然由来の飽和脂肪酸と、
天然由来の不飽和脂肪酸、パルミトレイン酸、オレイン
酸、リノール酸、リノレイン酸およびアラキドン酸を含
む。好ましい実施例は、モノエステルまたはジエステル
または１−エーテル、２−アシルエステルホスファチジ
ル誘導体を含む。他の実施例においては、脂肪族基は、
同一の炭素数の分枝鎖であり得、かつ一級または二級ア
ルカノールまたはアルコキシ基、シクロプロパン基なら
びに内部エーテル結合を含む。
この化合物の分類は、たとえば、例１における1,2−
ジミリストイルグリセロホスホ−５′−（３′−アジド
−３′−デオキシ）チミジンの調製のために述べられた
ように、ピリジン中でジアシルホスファチジン酸と抗ウ
ィルス性ヌクレオシド類縁体の反応から調製されてもよ
い。
リポソームの取込みの上で、化合物は、細胞に存在す
るホスホリパーゼによる代謝を受けると考えられる。た
とえば、ヌクレオシドのジアシルホスファチジル誘導体
の特定的な場合には、ホスホリパーゼＣは、下に示され
るように、ジアシルグリセロールとヌクレオシド一リン
酸を与えるように作用する。
代替的には、同一のホスファチジルヌクレオシドは、ホ
スホリパーゼＡにより加水分解され、かつリソホスホリ
パーゼの後、ホスホジエステラーゼが続き、下に示され
る順序に従ってグリセロールおよびヌクレオシド一リン
酸が生成され得る。
2. 抗ウィルス性ヌクレオシド二リン酸ジグリセリド この分類の化合物の化学構造は、下に示され、 そこではＮ、ＡおよびR1およびR2は、上に述べられたと
おりである。
ヌクレオシド二リン酸ジグリセリドは知られている。
抗ウィルス性ヌクレオシド二リン酸ジクリセリドは、プ
ロッティ（Prottey）氏およびホーソン（Hawthorne）氏
により修飾されたように（22）、アグラノフ氏およびス
オミ氏の方法（21）により、ホスファチジン酸および抗
ウィルス性ヌクレオシドモノホスホモルホリダートから
調製されてもよい。このタイプの合成は、例４におい
て、AZT5′−二リン酸ジパルミトイルグリセロールのた
めに与えられている。
細胞へのリポソームの放出において、この分類の化合
物は、いくつものタイプの反応に加わり、なぜならば、
下に示されるように、それは、CDP−ジグリセリドの類
縁体、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピンお
よびホスファチジルイノシトールの生合成における重要
な天然由来の中間体であるからである。
これらの反応のすべては、ヌクレオシド一リン酸およ
び新しいリン脂質を形成する。プーシュイス（Poorthui
s）氏およびホステトラー（Hostetler）氏（23）が先
に、種々のヌクレオシドがこれらの反応においてCDP−
ジグリセリドと置換でき、それは、UDP−ジグリセリ
ド、ADP−ジクリセリドおよびGDP−ジグリセリド（23）
を含むことを示したことに注目することが重要である。
重要には、ター・シュゲット（Ter Scheggett）氏ら
（24）は、デオキシCDP−ジグリセリドを合成し、か
つ、それは、また、ホスファチジルグリセロールおよび
カルジオリピンのミトコンドリアの合成においてCDP−
ジグリセリドを置換することができることがわかり、そ
れによって標的細胞における抗ウィルス性ヌクレオシド
リン酸を発生するためにこれらの新しい化合物を使用す
る可能性を示唆した。
CDP−ジグリセリドヒドロラーゼは、下に示されるよ
うに、他の重要な代謝変換を触媒し、それは、ヌクレオ
シド一リン酸およびホスファチジン酸を増加させる。
この経路は、第１に、リッテンハウス（Rittenhous
e）氏ら（25）により、哺乳動物の組織において述べら
れた。ピロホスファターゼであるこの酵素は、ジデオキ
シヌクレオシド二リン酸ジグリセリドをヌクレオシド一
リン酸とホスファチジン酸に開裂させることが予期さ
れ、そこにおいてヌクレオシド一リン酸が標的細胞にお
いて形成されることができる第２の態様をもたらす。
3. 抗ウィルス性ヌクレオシドアシルリン酸 リポソームによって脂質化合物を細胞に導入するため
の他の方法は、ヌクレオシド一リン酸、二リン酸または
三リン酸のアシルエステルを合成することである。この
合成は、ジヘキサデシルホスホ−５′−ジデオキシシチ
ジンの合成のために、例５における方法に従って実施さ
れてもよい。
ジアシルホスホヌクレオシドの構造は、下に示され、 そこにおいて、Ｎ、Ａ、R1およびR2は、先に規定された
とおりである。原則として、リン酸の１つまたは２つ以
上の酸部はエステル化されてもよく、かつリン酸と脂肪
アルコール置換の多くの他の組み合わせが可能である。
たとえば、ヌクレオシド一リン酸は、１つまたは２つの
脂肪族エステルを有することができ、ヌクレオシド二リ
ン酸は１つないし３つの脂肪族エステルを有することが
でき、ヌクレオシド三リン酸は１つないし４つの脂肪族
エステルを有することができる。ヌクレオシドは、「鎖
末端」ジデオキシヌクレオシドまたは他の抗ウィルス性
ヌクレオシドであり得る。
細胞は種々のエステラーゼを含むので、このクラスの
化合物は、リン酸化されたヌクレオシドに加水分解さ
れ、ヒトの単球およびマクロファージにおけるジデオキ
シヌクレオシドキナーゼの欠失を迂回し、かつそれによ
って抗ウィルス性活性を回復することが予期される。
4. セラミド抗ウィルス性ホスホヌクレオシド 抗ウィルス性ヌクレオシドリン酸は、また、下に示さ
れた一般的な構造を有するセラミド抗ウィルス性ヌクレ
オシドリン酸のリポソームによる配達の後、細胞におい
て発生することができ、 そこではCERは、構造 を有するＮ−アシルスフィンゴシンであり、そこにおい
てＲは先に規定されたとおり、または等価なスフィンゴ
シンの脂質−置換誘導体であり、かつＮは「鎖末端」抗
レトロウィルスヌクレオシドまたは先に規定されたよう
な抗ウィルス性ヌクレオシドである。このクラスの組成
物は、リポソームの処方ならびにAIDSおよび他のウィル
ス性疾患の治療において有用であり、なぜならば、それ
は、細胞におけるスフィンゴミエリナーゼまたはホスホ
ジエステラーゼにより作用させることができ、ヌクレオ
シド一リン酸量を上昇させるからである。上に示された
化合物に加えて、セラミド二リン酸ジデオキシヌクレオ
シドがまた合成されることができ、それは、細胞のピロ
ホスファターゼにより分解されてヌクレオシド一リン酸
およびセラミドリン酸を与えることができる。
セラミド抗ウィルス性ヌクレオシドリン酸は、出発原
料の適当な変更により、抗ウィルス性ヌクレオシド二リ
ン酸ジグリセリドを調製するための方法と同様の方法に
おいて調製されてもよい。
5. 抗ウィルス性ヌクレオシドの他の脂質誘導体 リポソーム内のヌクレオシド類縁体の脂質誘導体のな
おさらに大きな安定性を達成するための１つの方策は、
脂質−ヌクレオシド構造と二重層の間の脂質−脂質相互
作用を増加させることによる。したがって、好ましい実
施例においては、４つまでの親油基を有するヌクレオシ
ド類縁体の脂質誘導体が合成されてもよい。これらの１
つのクラスは、ジホスファチジルグリセロール誘導体を
含み、それは、一般的な構造 を有する。このクラスにおいて、ヌクレオシドは、抗ウ
ィルス性ヌクレオシドのデオキシリボース、リボースま
たはジデオキシリボース部の５′−OHへのホスホジエス
テル結合により、１つまたは両方のリン酸へ付加され
る。アシクロビアまたはガンシクロビアのような、非環
式ヌクレオシドの場合には、結合は、リボース、デオキ
シリボースまたはジデオキシリボースの５′−位のそれ
と同等のOH基に対してなされるであろう。各分子に１つ
または２つのヌクレオシドを付加してもよい。例４にお
けるように、ヌクレオシドリン酸は、また、リン酸結合
により付加されてもよい。
脂質成分がふやされた他のクラスの誘導体は、ビス
（ジアシルグリセロ）ホスホヌクレオシドを含み、それ
は、一般構造 を有する。R1-4は、先に規定されたようにそれぞれ独立
したＲである２つ、３つまたは４つの脂肪族基であって
もよく、前記基は、アシルエステル、エーテルまたはビ
ニルエーテル結合されている。この化合物は、例３の方
法によりつくられてもよい。
以下の構造 を有するこの化合物の二リン酸変形物は、例４の方法に
従って、ヌクレオシドモノホスホモルホリダートをビス
（ジアシルグリセロ）リン酸のホスホエステル残基に結
合することによりつくられてもよい。この化合物は、細
胞において、CDP−ジグリセリドヒドロラーゼ（ピロホ
スファターゼ）により、細胞中でAZT−Ｐに代謝される
であろう。これらの２タイプの化合物は、優れた代謝的
および物理的性質を与えるだろう。
他の適当なヌクレオシドの脂質誘導体は、新しい脂質
を使用して合成されてもよい。たとえば、抗ウィルス性
および抗レトロウィルス性ヌクレオシドのリン脂質誘導
体を合成することが望ましく、それは、脂質組成物を取
込む標的細胞による代謝の代替経路上で効力のある抗ウ
ィルス剤を生じさせる。以下のタイプの化合物からつく
られた誘導体に対して、より従来のリン脂質誘導体のそ
れと別の細胞の代謝が予期されてもよく、なぜならば、
これらは、窒素を含む基により通常の脂質基から除去さ
れるリン酸基を有するからである。これらの脂質の構造
は、四級アンモニウム誘導体を特徴とする。
次の化合物が示される。
D,L,−2,3−ジステアロイルオキシプロピル（ジメチ
ル）−β−ヒドロキシエチルアンモニウム酢酸は、第１
に、ロゼンタル（Rosenthal）氏およびゲイヤー（Geye
r）氏により、1960年に合成され（35）、かつカルビオ
ケム、ラジョラ、カリフォルニア92039（Calbiochem,La
Jolla,California 92039）から入手可能である。そ
れは、例１または７に述べられるように、トリイソプロ
ピルベンゼンスルホニルクロリド（TIBSC）を使用し
て、AZT−リン酸または任意の他の抗ウィルス性ヌクレ
オシドリン酸を結合するために働くことができる。
代替的には、AZTは、TIBSCを使用して、POCl3により
調製されたホスホリル化されたアンモニウム脂質に結合
されてもよい。好ましい構造が下に示されるものは、ホ
スホリル化された化合物I,D,L,−2,3−ジアシルオキシ
プロピル（ジメチル）−β−ヒドロキシエチルアンモニ
ウム酢酸のAZT誘導体であり、そこでは、R1およびR
2は、先に規定されたような脂肪族基である。
さらに、ロゼンタル氏およびゲイヤー氏の化合物Ｉ
は、彼らが彼らの論文において述べるようにホスホリル
化されてもよい（35）。Ｉのリン酸エステルを調製する
ために、トーチェン氏およびトーパル氏のオキシ塩化リ
ン法（20）を使用してもよい。次いで、アグラノフ氏お
よびスオミ氏により報告されるように（21）、またプロ
ッティ氏およびホーソン氏により1967年に修飾されたよ
うに（22）、ヌクレオシドリン酸のモルホリダート誘導
体を使用して、このホスホリル化された種に、任意の抗
ウィルス性または抗レトロウィルス性ヌクレオシドを結
合してもよい。結果として生ずるＩのヌクレオシド二リ
ン酸誘導体は、感染された細胞にリポソームで供給され
た抗ウィルス剤としての標準的な特性を有するであろ
う。好ましいヌクレオシドは、AZT、ddA、ddC、ddI、ア
シクロビアおよびガンシクロビアを含むが、それらに制
限されない。化合物ＩのAZT二リン酸誘導体は、下に示
される。
上の先の区分１ないし５において述べられた任意の脂
質誘導体において、ヌクレオシドは、任意の抗ウィルス
性ヌクレオシドであってよく、R1-2（ビス（ジアシルグ
リセロ）種のためのR3-4と同様に）は、２ないし24の炭
素原子を有する、飽和または不飽和脂肪酸であってもよ
い。ポリ不飽和、ヒドロキシ、分枝鎖およびシクロプロ
パン脂肪酸は、また可能である。グリセロール部の立体
化学は、sn−１またはsn−３ホスホエステル結合または
それのラセミ混合物を含むことができる。必要に応じ
て、１または２、（また、ビス（ジアシルグリセロ）種
のために３または４）のアシルエステル基またはアルキ
ルエーテルもしくはビニルエーテル基があってもよい。
種々の他のリン脂質がヌクレオシドに結合されてもよ
く、それは、ホスファチジルグリセロール、ホスファチ
ジルイノシトールまたは任意の他のリン脂質を含むがそ
れに制限されず、そこにおいて、頭部の基は、イノシト
ールのような天然のポリヒドロキシアルコールか、また
はそれが天然か合成物かを問わない、糖のような、炭化
水素または他のポリヒドロキシアルコールにより置換さ
れているものかのどちらかにおいて結合可能な水酸基を
含む。この場合には、ヌクレオシドリン酸は、エステル
化により、アルコールまたは炭水化物の１つまたは２つ
以上の水酸基に付加されるであろう。他の糖脂質は、ま
た、そこにヌクレオチドのリン酸基が糖脂質水酸基への
エステル化によって付加されるリガンドとして働いても
よい。適当な疎水性を有する、天然または合成のどちら
かの、選択されたセレブロシドまたはガングリオシドの
ような、他の糖脂質は、リン脂質であろうとなかろう
と、また、有利に使用することができる。これらは、炭
水化物水酸基の同様のエステル化により、ヌクレオシド
に結合することができる。
さらに、抗ウィルス性ヌクレオシドは、ホスファチジ
ルイノシトール一−、二−および三リン酸のリン酸基
に、または、天然か合成のどちらかの、リン脂質もしく
は糖脂質のリン酸−置換炭水化物部分に、結合されても
よい。
ホスファチジルセリンは、ヌクレオシドリボース基の
５′−水酸基とともにそのカルボキシル基のエステル化
により、直接に、ヌクレオシド類縁体に結合されてもよ
い。極性の頭部の基におけるカルボキシル基を含む、ホ
スファチジルセリンに構造で類似している合成のリン脂
質は、類似の方法において結合されてもよい。
エーテルまたはビニルエーテル結合により付加された
アルキル鎖を有するリン脂質は、また、この発明に従っ
てヌクレオシド誘導体を調製するために使用されてもよ
い。この目的のための適当なリン脂質は、天然由来のア
セタールホスファチドまたはプラスマローゲンを含み、
それは、不飽和ビニルエーテル結合に存在する長鎖脂肪
酸基を含む。代替的には、１−Ｏ−アルキルグリセロー
ルまたは２−Ｏ−アルキルグリセロールの類縁体は、合
成により調製され、かつ例７において述べられるように
選択されたヌクレオチドに結合されてもよい。グリセロ
−３−ホスホ−５′−アジドチミジンの誘導体が好まし
く、かつAZT一リン酸を、グリセロールの１位において
２ないし24の炭素鎖長のアルキル基を有するｌ−Ｏ−ア
ルキル−グリセロールの種々の類縁体と縮合させること
により調製されてもよい。ｌ−Ｏ−アルキル基は、２な
いし24の炭素原子の鎖の長さを有する、飽和、不飽和脂
肪族基からなってもよい。ｌ−Ｏ−アルキルグリセロー
ル残基は、セラミ体であるかまたは立体特異性であって
もよい。この化合物は、脂肪酸の塩化物または無水物に
よりアシル化され、ｌ−Ｏ−アルキル,2−アシル−グリ
セロ−３−ホスホ−５′アジドチミジンの合成を結果と
して生じてもよい。同様に、大過剰のアジドチミジン一
リン酸を使用して、ｌ−Ｏ−アルキル,2,3−ビス（ホス
ホ−５′−３′−アジド、３′−デオキシチミジン）グ
リセロール類縁体が合成されてもよい。これらの誘導体
は、一般的な構造 を有する。
そこで、R1は、不飽和または飽和アルキル鎖であり、
それは、エーテルまたはビニルエーテル結合における長
さにおいて１ないし23炭素原子である。R2は、OHまたは
２ないし24炭素原子の飽和または不飽和脂肪酸エステル
である。また、R2においてエーテルまたはビニルエーテ
ル結合が可能である。もしR2がエーテル結合されたアル
キル鎖であれば、グリセロールの１位における基もまた
OHであってもよい。Ｎは、５′ホスホジエステル結合に
おいて結合された任意の抗ウィルス性ヌクレオシドであ
り、かつＡはカルコゲン（Ｏ、ＣまたはＳ）である。
ホスホリル化された抗ウィルス性ヌクレオシド（ヌク
レオチド）は、この発明の好ましい実施例であるけれど
も、もし細胞の代謝のプロセスを介して抗ウィルス効果
を達成するために感染された細胞にヌクレオシドリン酸
を与えることが必要でなければ、ヌクレオシド類縁体の
リンを含まない脂質誘導体を利用することが可能であ
る。このタイプの化合物のいくつかの例は、例13の合成
方法のように、ヌクレオシドの5'−水酸基へ直接結合し
た、アルキル結合に存在するかまたはエステル化された
脂肪酸を有することができる。
代替的には、たとえば、どちらかの端部にカルボキシ
ル基および中心に０ないし10のCH2基を有する「スペー
サ」分子を、抗ウィルス性ヌクレオシドの５′−水酸基
にエステル化することができる。「スペーサ」の他のカ
ルボキシル基は、ジアシルグリセロールまたは利用可能
な水酸基を有する任意の他の脂質の遊離した水酸基にエ
ステル化されてもよい。端部に適当な官能基を有する他
の結合（「スペーサ」）基は、また、当該技術分野にお
いてよく知られている化学的方法により、ジグリセリド
または他の適当な脂質基をヌクレオシドに結合するため
に使用されてもよい。
抗ウィルス性ヌクレオシドの脂質誘導体を含むリポソー
ムの調製 合成の後で、ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体は、リ
ポソーム、または他の適当なキャリアに取込まれる。取
込みは、超音波処理、押し出し成形またはミクロ流動化
のような、よく知られたリポソーム調製法に従って実施
することができる。リポソーム調製の適当な通常の方法
は、バンガム（Bangham）氏ら（４）、オルソン（Olso
n）氏ら（26）、スゾカ（Szoka）氏およびプラハジャポ
ーロス（Papahadjapoulos）氏（27）、メイヒュー（May
hew）氏ら（28）、キム（Kim）氏ら（29）、メイヤー
（Mayer）氏ら（30）およびフクナガ（Fukunaga）氏ら
（31）により開示されたものを含むが、それらに制限さ
れない。
リポソームは、単独のヌクレオシド類縁体の脂質誘導
体から、または、ホスファチジルコリン、ホスファチジ
ルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、ス
フィンゴミエリン、ホスファチジルセリンまたはホスフ
ァチジルイノシトールのような、卵、植物または動物の
ような天然の源からのリン脂質を含む任意の通常の合成
または天然のリン脂質リポソーム材料との組み合わせに
おいてつくることができる。さらに使用されてもよい合
成リン脂質は、ジミリストイルホスファチジルコリン、
ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホ
スファチジルコリンおよびジステアロイルホスファチジ
ルコリンならびにそれらに対応する合成のホスファチジ
ルエタノールアミンおよびホスファチジルグリセロール
を含むが、それらに制限されない。コレステロールまた
は他のステロール、コレステロールヘミスクシネート、
グリコリピド、セレブロシド、脂肪酸、ガングリオシ
ド、スフィンゴリピド、1,2−ビス（オレオイルオキ
シ）−３−（トリメチルアミノ）プロパン（DOTAP）、
Ｎ−［１−（2,3−ジオレオイル）プロピル］−N,N,N−
トリエチルアンモニウム（クロリド）（DOTMA）、D,L,
−2,3−ジステアロイルオキシプロピル（ジメチル）−
β−ヒドロキシエチルアンモニウム（アセテート）、グ
ルコサイコシンまたはサイコシンのような、他の添加物
も、通常知られているように、添加されることができ
る。必要に応じて、リポソームにおいて使用されるリン
脂質および添加物の相対的な量は、変化されてもよい。
好ましい範囲は、約80ないし95モルパーセントのリン脂
質および５ないし20モルパーセントのサイコシンと他の
添加物である。コレステロール、コレステロールヘミス
クシネート、脂肪酸またはDOTAPは、０から50モルパー
セントの範囲の量において使用されてもよい。リポソー
ムの脂質層に取込まれた抗ウィルス性ヌクレオシド類縁
体の量は、約0.01から約100モルパーセントの範囲でそ
れらの脂質の濃度とともに変化させることができる。
活性化合物を取込むための通常の方法を使用すれば、
溶液に存在する物質の約20ないし50％を取込む。したが
って、活性化合物の約50ないし80％は浪費される。対照
的に、ヌクレオシド類縁体が脂質に組み込まれる場合、
実質的にヌクレオシド類縁体のすべてはリポソームに組
み込まれ、かつ実質的に活性化合物は浪費されない。
上記処方によるリポソームは、標的のために特定のモ
ノクローナル抗体または他のリガンドの組込みにより、
それらの意図された標的に対してなおさらに特異的につ
くられてもよい。たとえば、CD4（T4）受容体へのモノ
クローナル抗体は、レサーマン氏らの方法（19）によ
り、リポソーム内に組込まれたホスファチジルエタノー
ルアミン（PE）への結合により、リポソーム内に組込ま
れてもよい。先に述べられたように、HIVは、CD4（T4）
受容体を持つそれらの細胞に感染するであろう。したが
って、このCD4を標的とする免疫リポソームの使用は、
抗ウィルス性化合物を、HIVが感染するであろう部位に
集中させる。他のCD4認識タンパク質の置換は、同一の
結果を達成するであろう。他方では、モノクローナル抗
体のgp110またはgp41（HIVウィルス被覆タンパク質）へ
の置換は、抗ウィルス性免疫リポソームを一般に活性な
HIV感染および複製の部位に集中させるであろう。単純
ヘルペスウィルスまたはシトメガロウィルスのような、
他のウィルスへのモノクローナル抗体は、活性化合物
を、これらのウィルスの感染の部位に集中させるであろ
う。
脂質誘導体の治療的使用 リポソームに組み込まれたリン酸化されたヌクレオシ
ド類縁体は、リポソームを投与するために使用される任
意の公知の方法により患者に投与される。リポソーム
は、静脈中に、腹腔内に、筋肉に、または皮下に緩衝水
性溶液として投与することができる。任意の医薬的に受
容可能の水性緩衝液または他の賦形剤は、それがリポソ
ーム構造または脂質ヌクレオシド類縁体の活性を破壊し
ない限り利用することができる。１つの適当な水性緩衝
液は、約7.4のpHを有する5mMのリン酸ナトリウムを含む
150mMのNaClまたは他の生理的緩衝塩溶液である。
ヒトを含む、哺乳動物のための投与量は、感染の程度
および重さならびに投与された化合物の活性に依存して
変化する。ヌクレオシド類縁体のための投与量水準は、
よく確立されている。ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体
の投与量水準は、約0.001mg/キログラムないし1000mg/
キログラムが患者に日常的に投与され、かつより好まし
くは約0.05mg/キログラムから約100mg/キログラムであ
る様にされるべきであろう。
この発明は、リポソームに取込まれた上記抗ウィルス
性ヌクレオシド誘導体を、これらの化合物をマクロファ
ージ、単球、およびリポソーム組成を取込む他の任意の
細胞に、向けるために利用する。リガンドは、また、リ
ポソームの特異性をさらに集中させるために組み込まれ
てもよい。
述べられた誘導体は、すでに提出の同時係属出願にお
いて述べられた水溶性ジデオキシヌクレオシドリン酸に
勝っていくつもの独特のおよび新しい利点を有する。
第１に、それらはより有効に処方することができる。
ヌクレオシド類縁体の脂質誘導体を含むリポソームは、
脂質に対しずっと高い割合の薬剤を有し、なぜならばそ
れらは、水性の中心区分におかれる代わりにリポソーム
の壁内に取込まれるからである。第２に、上に述べられ
た親油性のジデオキシヌクレオシド誘導体を含むリポソ
ームは、貯蔵の間に漏れず、改良された生成物の安定性
を与える。さらに、これらの組成物は、凍結乾燥され、
室温において乾燥貯蔵され、使用のために再構成され、
向上したシェルフライフを与える。それらは、また、活
性化合物の大きな浪費なしに抗ウィルス性化合物のリポ
ソーム組成物への有効な取込みを可能にする。
それらは、また、治療上の利点を与える。リポソーム
に取込まれた薬剤の安定性は、より大きい割合で投与さ
れた抗ウィルス性ヌクレオシドが意図された標的に達す
ることを引起こし、また、通常細胞により取込まれる量
は最小限であり、そのためヌクレオシドの毒性の副作用
を減少させる。ヌクレオシドの毒性の副作用は、ヌクレ
オシドが含有されるリポソーム中に、感染の活性部位ま
たは潜在的部位に特異的に結合するリガンドを組み込む
ことによって、リポソームに目標を定めさせることによ
り、減少させることができる。
さらに、上述した化合物は、細胞のさらなる代謝にお
いてリン酸化されたジデオキシヌクレオシドまたは他の
抗ウィルス性ヌクレオシドを生じさせるような新しい態
様で構成される。これは、単球およびマクロファージま
たは遊離した抗ウィルス性化合物の効果に対して抵抗性
であると知られている他の細胞におけるそれらの抗レト
ロウィルス（抗ウィルス）効果を改良する。さらに、リ
ンパ球とともに予めインキュベートされた化合物は、薬
剤が除去された後で48時間までおよび48時間を超過して
HIV感染からの完全な保護をもたらす一方、ヌクレオシ
ド単独では、除去後24時間で保護をもたらさない。最終
的に、脂質化合物は、抗レトロウィルス性ヌクレオシド
類縁体単独に対して抵抗性のウィルス株に起因するHIV
感染を治療することにおいて有用であると予期される。
抗ウィルス剤の脂質誘導体は、脂質のない薬剤に比べ
て引延ばされた抗ウィルス性効果を有し、したがって、
それらはリポソームに組み込まれないときにさえ薬剤と
しての治療的利点を与える。抗ウィルス性ヌクレオシド
類縁体の非リポソームの脂質誘導体は、皮膚もしくは粘
膜に、またはからだの内部に塗布されてもよく、それ
は、たとえば、口内に、気管内に、または他に、肺の経
路により、腸内に、直腸内に、鼻内に、膣内に、舌に、
静脈内に、動脈内に、筋肉に、腹腔内に、皮膚内に、ま
たは皮下に適用されてもよい。この医薬の調製は、単独
の活性剤を含むことができるか、またはさらなる医薬的
に価値のある物質を含むことができる。それらは、さら
に、医薬的に受容可能のキャリアを含むことができる。
抗ウィルスヌクレオシドの脂質誘導体を含む医薬の調
製物は、通常の溶解および凍結乾燥プロセスにより、約
0.1％ないし100％、好ましくは約１％ないし50％の有効
成分を含むように製造される。それらは、心地よくまた
は快適に使用するために、有効な補助剤、賦形剤、希釈
剤、香料または香味料と一緒に、軟こう、膏薬、錠剤、
カプセル、パウダまたはスプレーとして調製することが
できる。
経口摂取のための処方は、錠剤、カプセル、ピル、粉
にされた有効成分のアンプルまたは油性もしくは水性懸
濁液もしくは溶液の形態である。錠剤または他の非液体
経口組成物は、医薬的組成物の製造のために当該技術分
野において知られている、受容可能の補助剤を含んでも
よく、それは、ラクトースまたは炭酸カルシウムのよう
な増量剤、ゼラチンまたはスターチのような結合剤およ
び調製物に嗜好性を与えるための甘味料、着香料、色素
または保存料からなる群から選択された１つまたは２つ
以上の成分を含む。さらに、そのような経口調製物は、
腸管における分解および吸収をさらに遅らせるために、
公知の技術により被覆されてもよい。
水性懸濁液は、薬理学的に受容可能の補助剤と混合し
た有効成分を含んでもよく、それは、メチルセルロース
のような懸濁剤およびレシチンまたは長鎖脂肪アルコー
ルのような湿潤剤を含む。前記水性懸濁液は、工業標準
に従って、防腐剤、着色剤、着香料および甘味料を含ん
でもよい。
全身および局所的投与のための調製物は、医薬的に適
当な補助剤でのエアゾルスプレー、ローションゲル、お
よび軟こうを含み、それは、低級脂肪族アルコール、グ
リセロールのようなポリグリコール、ポリエチリングリ
コール、脂肪酸のエステル、油および脂肪ならびにシリ
コーンを含んでもよい。調製物は、さらに、アスコルビ
ン酸またはトコフェロールのような抗酸化剤およびｐ−
ヒドロキシ安息香酸エステルのような防腐剤を含んでも
よい。
非経口の調製物は、特に無菌または滅菌された生成物
を含む。活性化合物および任意の公知の注射可能のキャ
リアを含む、注射可能の組成物が与えられてもよい。こ
れらは、浸透圧を調製するための塩を含んでもよい。
脂質誘導体の治療的に有効な量は、活性抗ウィルス性
ヌクレオシドの奨励される投与量の参照により決定さ
れ、それは、任意の特定の場合における適当な投与量の
選択において、患者の体重、一般的な健康、代謝、年齢
および薬剤への反応に影響を与える他の要因が考慮され
なければならないことを念頭に置いてである。非経口の
投与量は、適当には、経口投与量より低いオーダであろ
う。
この発明のより完全な理解は、以下の例示的な例を参
照して得ることができるが、それらが発明を不当に制限
することは意図されていない。
例１ 1,2−ジミリストイルグリセロホスホ−５′−（３′−
アジド−３′−デオキシ）チミジン，一ナトリウム塩 ジミリトイルホスファチジン酸（DMPA−Ｈ）の調製 分液漏斗（500ml）において、ジミリストイルホスフ
ァチジン酸二ナトリウム塩（1g.、1.57mmol）は、第１
にクロロホルム：メタノール中に溶解され（250ml、体
積で2:1）、かつよく混合される。蒸留水（50ml）が溶
液に添加され、かつpHは濃塩酸を添加することにより、
１に調整された。溶液はよく混合され、かつクロロホル
ム層は収集された。クロロホルム層は、一度メタノー
ル：水（体積で1:1、80ml）で洗浄され、かつ30℃にお
いて減圧下で蒸発させられて白い泡としてジミリストイ
ルホスファチジン酸（DMPA−Ｈ）を生成した。シクロヘ
キサン（10ml）が添加され、かつ溶液は乾燥するように
凍結乾燥され、白い粉（850mg）を得、それは次いで−2
0℃において貯蔵された。結合反応の１日前に、DMPA−
Ｈ（250mg、0.42mmol）は、丸底（50ml）フラスコにお
いてシクロヘキサン（10ml）に溶解されかつ溶剤は室温
において減圧下で蒸発させられた。このプロセスはさら
に４回繰り返され、かつDMPA−Ｈは、さらに真空オーブ
ンにおいて室温で一夜P2O5の下で乾燥され、かつ−20℃
において貯蔵された。
結合反応 アルゴン下で、乾燥DMPA−Ｈ（250mg、0.42mmol）を
含む50mlの丸底フラスコに、シグマ・ケミカル（Sigma
Chemical）、セントルイス（St.Louis）、ミズーリ
（Missouri）の乾燥３′−アジド−３′−デオキシチミ
ジン（AZT）（85mg,0.31mmol,真空下でP2O5を介して一
夜乾燥させられた）および2,4,6−トリイソプロピルベ
ンゼンスルホニルクロリド（315mg,1.04mmol）が添加さ
れ、かつ無水ピリジン（2ml）がシリンジを介して透明
溶液を得るために添加された。反応混合物は、室温にお
いて、18時間かく拌された（反応は、薄層クロマトグラ
フィーにより追跡された）。水（1ml）が過剰の触媒を
破壊するために粗生成物に添加され、かつ溶剤は減圧下
で蒸発させられて黄色ガムを生成し、それは、次いで少
量のメタノール：クロロホルム（体積で1:9）に再溶解
され、かつシリカゲルのカラム（45g、キーゼルゲル（K
ieselgel）60、西ドイツ）に与えられる。カラムは、ク
ロロホルム中８％メタノールにより溶出された。前流
（廃棄された）の後、AZTは回収され、かつ次いでジミ
リストイルホスファチジル−３′−アジド−３′−デオ
キシチミジン（DMPA−AZT）が得られた。生成物を含む
画分は混合され、かつ溶剤は減圧下で蒸発させられた。
シクロヘキサン（5ml）が残渣に添加され、かつ混合物
は真空下でP2P5において乾燥するまで凍結乾燥されて、
精製DMPA−AZT（270mg、0.29mmol、95％）を得た。
一ナトリウム塩への変換 クロロホルム：メタノール（30ml、体積で2:1）にお
いて再溶解された乾燥DMPA−AZTには、蒸留水（6ml）が
添加され、よく混合され、かつ水層のpHは、１に調整さ
れた。クロロホルム層は収集され、かつ10mlのメタノー
ル：水（1:1）が添加されかつよく混合された。水層のp
Hは、メタノール製NaOH（0.1N Ｎ）により6.8に調整さ
れ、よく混合されかつ水層はpH6.8に維持された。混合
されたクロロホルム、メタノールおよび水の混合物は、
減圧下において蒸発させられ、ジミリストイルホスファ
チジル３′−アジド−３′デオキシチミジン一ナトリウ
ム塩を生じた。残渣はクロロホルム：メタノール（2m
l、体積で2:1）において再溶解され、かつアセトンがDM
PA−AZT一ナトリウム塩を沈殿させるために添加され、
それは、さらに、シクロヘキサン（5ml）から乾燥させ
られて、白い粉（220mg、0.26mmol、AZTに対して78％の
収率）を生じた。融点は230℃であり、シリカゲルＧ薄
層プレート上のRf値は0.32（クロロホルム：メタノー
ル：水：アンモニア、80:20:1:1）、Rf 0.58（クロロ
ホルム：メタノール：水：アンモニア 70:30:3:2）、R
f 0.31（クロロホルム：メタノール：水 65:25:4）、
UV吸収極大266nm（＜10,800）、C41N5O11P1H72・1H2Oの
ための元素分析の計算値:C,57.24;H.8.44;P:3.61;測定
値:C56.80;H.8.83;P:3.52.MS,m/e864.60（Ｍ＋）。
プロトン:NMR（CDCL3）δ0.88（6H,bt,J＝6.9Hz,アシル
CH3）,1.26（4OH,s,アシルCH2）,1.60（4H,bs,βアシル
CH2）,1.94（3H,s,チミンCH3）,2.31（4H,m,αアシルCH
2）,2.39（2H,m,リボース２′Ｈ）,3.38（2H,bd,J＝12.
6Hz,リボース５′Ｈ）,3.78（2H,m,sn−3CH2グリセロー
ル）,4.00（1H,dd,J1＝12Hz,J2＝6Hz,sn−１ CH2グリ
セロール）,4.18（1H,dd,J1＝12Hz,J2＝6Hz,sn−1CH2グ
リセロール）,4.07（1H,m,リボース３′Ｈ）,4.41（1H,
m,リボース４′Ｈ）,5.24（1H,m,sn2CHグリセロール）,
7.62（1H,s,チミン6H）,6.21（1H,t,J＝6Hz,リボース
１′Ｈ）。AZTに対するホスファチジン酸のピーク面積
比は１である。
例２ 1,2−ジミリストイルグリセロホスホ−５′−（３′デ
オキシ）チミジン一ナトリウム塩 シグマ・ケミカル、セントルイス、ミズーリから３′
−デオキシチミジンが得られた。この類縁体の脂質誘導
体は、例１において上に述べられた同一の方法を利用し
て合成された。融点235℃、シリカゲルＧ上のRf0.25
（クロロホルム／メタノール／水／アンモニア 80:20:
1:1）;0.57（クロロホルム：メタノール：アンモニア：
水 70:30:3:2）;0.24（クロロホルム：メタノール：水
64:25:4）;UV吸収極大269nm（＜8,400）；分析:C41N2
O11P1H72Na1・1H2Oの計算値:C,58.53;H,8.87;P,3.69;測
定値:C,56.75;H,9.33;P,3.58 MS,m/e823.00（Ｍ＋）。
プロトンNMR:（CDCL3）δ0.91（6H,bt,J＝6.8Hz,アシル
CH3）,1.23（4H,bs,アシルCH2）,1.26（4H,bs,アシルCH
2）,1.28（32H,bs,アシルCH2）,1.62（4H,m,βアシルCH
2）,1.97（3H,s,チミンCH3）,2.05（2H,M,リボース２′
Ｈ）,2.35（4H,m,αアシルCH2）,3.39（2H,bs,リボース
５′Ｈ）,3.90（2H,m,sn−1CH2グリセロール）,4.16（1
H,m,sn−1CH2グリセロール）,4.24（1H,m,sn−1CH2グリ
セロール）,4.38（1H,m,リボース４′Ｈ）,5.23（1H,m,
sn−２グリセロール）,6.10（1H,bt,リボース１′Ｈ）,
7.68（1H,s,チミン6H）。２′３′−ジデオキシチミジ
ンに対するホスファチジン酸のピーク面積比は１であ
る。
例３ 1,2−ジミリストイルグリセロホスホ−５′−（２′,
3′−ジデオキシ）シチジン ４−アセチル−２′３′−ジデオキシシチジンの調製 無水エタノール（35ml、第１にLindyタイプの4xモレ
キュラシーブにより乾燥させられ、かつマグネシウム片
にさらして２回蒸留される）における2',3'−ジデオキ
シシチジン（DDC）のかく拌された還流溶液に、無水酢
酸（0.4ml,5.4mmol）が添加された。３時間の還流期間
の工程の間に、さらに30分置きに４回無水酢酸0.4ml部
が、添加された。反応は、薄層クロマトグラフィ（シリ
カゲルF254、コダック・クロマグラム（Kodak Chromag
ram）、クロロホルム中10％のメタノールにより展開さ
せられた）で追跡された。最終的な添加の後、溶液は、
さらに１時間の間還流された。反応混合物は、冷却さ
れ、かつ溶剤は減圧下で蒸発させられた。残渣は、クロ
ロホルム中８％のメタノール（5ml）に再溶解され、か
つシリカゲルカラム（2.2cm×30cm、キーゼルゲル（Kie
selgel）60、70−230メッシュ、EMサイエンス、45g）上
で分画された。カラムは、クロロホルム中８％のメタノ
ールが流され、80％収率で精製４−アセチル−２′３′
−ジデオキシシチジン（DDC−OAC）を得た。
結合反応 結合反応の１日前に、DMPA−Ｈ（前のように調製され
た、250mg、0.42mmol）が丸底フラスコ（50ml）におい
てシクロヘキサンに溶解され、かつ溶剤は室温で減圧下
で蒸発させられた。このプロセスは、さらに４回繰り返
され、かつDMPA−Ｈは、さらに、真空オーブンにおい
て、室温で、一夜P2O5の下で乾燥させられた。アルゴン
の下で、乾燥DMPA−Ｈを含む50ml容丸底フラスコには、
乾燥（DDC−OAC）（85mg、0.33mmol、真空下で一夜P2O5
の下で乾燥させられた）および2,4,6−トリイソプロピ
ルベンゼンスルホニルクロリド（315mg、1.04mmol）お
よび無水ピリジン（2ml）が、シリンジを介して、透明
溶液を得るために添加された。反応混合物は、室温で、
18時間かく拌された。（反応は、薄層クロマトグラフィ
により追跡された）。水（1ml）は、過剰の触媒を破壊
するために添加された。溶剤は、減圧下で蒸発させら
れ、黄色ガムを生じ、それは、クロロホルム中の少量の
メタノール（体積で1:9）に再溶解させられ、かつシリ
カゲル（45g、キーゼルゲル60、EMサイエンス）のカラ
ムに供された。カラムには、サンプルが溶出の間に浮か
ぶことを防ぐために、少量の砂（500mg）が上に載せら
れた。カラムには、クロロホルム中８％のメタノール
（1.5L）が流された。前流（廃棄された）の後、次い
で、ジミリストイルホスファチジル−５′−（２′３′
−ジデオキシ）シチジン（DMPA−DDC）が得られた。生
成物を含む画分は、混合され、かつ溶剤は、減圧下で蒸
発させられた。残渣は、さらに、シクロヘキサンを用い
て乾燥させられ、精製DMPA−DDC−OAC（70％の収率にお
いて210mg、0.21mmol）を得た。Rf0.40（シリカゲルG
F、20×20cm、アナルテク（Analtech）、体積で、クロ
ロホルム：メタノール：水：アンモニア 80:20:1:1） 9N NH40Hを用いる脱保護 DDC−OAC−DMPA（40mg、0.04mmol）が、クロロホル
ム：メタノール（1:1、2ml）に溶解され、かつすぐに9N
NH4OH（10滴）が添加された。溶液は、室温において1
5分間攪拌され、かつ次いで氷酢酸によりpH7に迅速に中
和された。中和された溶液は、減圧下で、一夜乾燥さ
れ、ジミリストイルホスファチジル５′（２′３′−ジ
デオキシ）シチジン（DMPA−DDC、35mg、0.037mmol）を
生成した。融点:240℃においてDMPA−ddCが分解され
た。シリカゲルGFプレートの上の薄層クロマトグラフィ
の上で、Rf値は0.11（クロロホルム：メタノール：水：
アンモニア 80:20:1:1）;0.38（クロロホルムメタノー
ル：アンモニア：水 70:30:3:2）;0.15（クロロホル
ム：メタノール：水 65:25:49）;UV吸収極大273nm（＜
5,800） NMR:（CDCL3）δ0.86（6H,bt,アシルCH3）,1.24（4OH,b
s,アシルCH2）,1.57（4H,m,βアシルCH2）,2.28（4H,m,
αアシルCH2）,3.36（2H,m,リボース５′Ｈ）,3.94（2
H,bs,sn−3CH2グリセロール）,4.19（1H,m,sn−1CH2グ
リセロール）,4.29（1H,m,sn−1CH2グリセロール）,4.4
0（1H,bs,リボース４′Ｈ）,5.19（1H,m,sn−2CHグリセ
ロール）,5.89（1H,m,チミジン５−Ｈ）,7.44（1H,bs,
チミンNH3）,7.94（1H,bs,チミンNH2）。ホスファチジ
ン酸の２′３′−ジデオキシシチジンに対するピーク面
積比は１である。
例４ （３′アジド−３′デオキシ）チミジン−５′−二リン
酸−sn−３−（1,2−ジパルミトイル）グリセロールの
合成 AZT−一リン酸モルホリダートの合成 この化合物は、アグラノフおよびスオミの方法（21）
に従って合成された。AZT−一リン酸は、水に溶液をDow
ex 50W（50×２−200,100−200メッシュ，シグマ・ケ
ミカルズ（Sigma Chemicals）、セントルイス（St.Lou
is）、MO）のカラムを介して通過させることにより、酸
の形に変換された。3ml水中の117mgのAZT−一リン酸
（0.3ミリモル）溶液は、二首丸底フラスコに移され
た。3mlのｔ−ブタノールおよび0.106mlの新しく蒸留し
たモルホリン（1.20ミリモル）が添加され、かつ混合物
は、90℃において油浴におかれた。4.5mlのｔ−ブタノ
ールにおけるジシクロヘキシルカルボジイミド249mg,1.
20ミリモル）４当量が適下された。反応は、展開溶剤と
してクロロホルロ／メタノール／酢酸／水（体積で50/2
5/3/7）を用いるシリカゲル60,F254,プレート上の薄層
クロマトグラフィによりモニタされた。反応は、３時間
後に完全であることが認められた。混合物は、冷却さ
れ、かつ4.5mlの水の添加の後、15mlのジエチルエーテ
ルにより４回抽出された。水層は、乾燥するように蒸発
させられ、かつ真空においてP2O5の下で乾燥させられ
た。生成物は、得られ（199mg、100％収率）、かつさら
なる精製なしにホスファチジン酸に結合するために使用
された。
ジパルミトイルホスファチジン酸へのAZT−一リン酸モ
ルホリダートの結合 ジパルミトイルホスファチジン酸，二ナトリウム塩
は、0.1NHC1を水相として使用したブライ（Bligh）氏お
よびダイヤ（Dyer）氏の方法（34）により、クロロホル
ムから材料を抽出することにより、遊離酸に変換され
た。クロロホルム層は、真空において乾燥するように蒸
発させられ、ホスファチジン酸（196mg、0.3ミリモル）
は、クロロホルムに再溶解され、かつ、AZT−一リン酸
モルホリダートを含む容器に移された。クロロホルムが
真空においてロータリーエバポレータを使用して除去さ
れた後で、混合物は、ベンゼンの添加および蒸発により
乾燥させられ、かつ最終的に真空においてP2O5下で乾燥
させられた。反応は、30mlの無水ピリジンの添加により
始められ、かつ透明な混合物は室温においてかく拌され
た。反応は、展開溶剤としてクロロホルム／メタノール
／アンモニア／水（体積で70/38/8/2）を用いて、上に
述べられたように薄層クロマトグラフィによりモニタさ
れた。ホスファチジン酸、AZT−一リン酸モルホリダー
トおよびAZT−二リン酸ジパルミトイルグリセロールのR
fは、それぞれ、0.11、0.50および0.30である。
70時間後、ピリジンが蒸発させられ、かつ生成物は、
15mlの水、30mlのメタノール、22mlのクロロホルムおよ
びpHを4.0に調整するための十分な1Nギ酸の添加の後、
クロロホルム中に抽出された。２回の抽出の後、混合さ
れたクロロホルム層は、乾燥するまで蒸発させられ、残
渣は、クロロホルム／メタノール／アンモニア／水,70/
38/8/2において溶解され、かつ生成物は、１メートルの
水に等しい空気圧を与えながら、この溶剤においてシリ
カゲルカラムクロマトグラフィにより精製された。完全
に純粋でない画分は、さらに、溶出液として水／メタノ
ール（体積で8/2）およびメタノールを使用した逆相カ
ラム上のHPLCにより精製された。所望の生成物を含む画
分は、乾燥するまで蒸発させられ、132mgの白い固体（4
4％収率）を与え、それは、薄層クロマトグラフィによ
り単一のスポットを与え、クロロホルム／メタノール／
アンモニア／水,70/38/8/2（Rf0.35）およびクロロホル
ム／メタノール／水,65/35/4（Rf0.54）でシリカゲルＧ
プレートに展開された。
500MHz NMR（CDCl3）δ0.88（3H,t,J＝6.93Hz,sn−２
−アシルCH3）,0.92（3H,t,J＝7.48Hz,sn−１−アシル
鎖CH3）,1.25（48H,s,CH2アシル鎖）,1.55（4H,bs,βCH
2アシル鎖）,1.83（3H,s,CH3チミン）,2.25（2H,t,J＝
6.97Hz,2H,アルファCH2sn−２−アシル鎖）,2.27（2H,
t,J＝7.79Hz,αCH2sn−１−アシル鎖）,2.44（4H,bs,
2′および５′Ｈリボース）,3.78（1H,dd,J＝1.68,5.51
Hz,3′Ｈリボース）,3.95（2H,bs,sn−3CH2グリセロー
ル）,4.07（1H,bs,He/Hasn−1CH2グリセロール）,4.13
（1H,bs,1H,sn−2CHグリセロール）,4.36（1H,bs,Ha/He
sn−1CH2グリセロール）,5.21（1H,bs,sn−2CHグリセロ
ール）,5.66（1H,bs,1′Ｈリボース）,7.14（1H,d,J＝
6.25Hz,6Hチミン）。適当な共鳴から演繹されたアシル
鎖：グリセロール：リボース：チミンの比は、2.12:0.9
3:0.98:1.00になった。IR（KBr.disk）は、同定可能な
バンドとして2105（アジド）、1745（Ｃ＝Ｏエステル）
および1705（ｃ＝Ｏチミン）を示した。
例５ 抗ウィルス性ヌクレオシドジアリルリン酸の合成 ジヘキサデシルホスホ−５′−ジデオキシシチジン
は、例１において述べられた方法に従って合成され、た
だし、反応物はジデオキシシチジンおよびジヘキサデシ
ル水素リン酸である。出発原料ジヘキサデシル水素リン
酸は、第１にデー・エイ・ブラウン（D.A.Brown）氏ら
により報告されたように（32）ヘキサデカン−１−オー
ルおよびフェニルホスホロジクロリダートから合成され
る。
例６ ジデオキシアデノシン二リン酸セラミド抗ウィルス性ホ
スホヌクレオシドの合成 ジデオキシアデノシン一リン酸モルホリダートがジデ
オキシシチジン一リン酸モルホリダートと置換されるこ
とを除いて、例２の方法が繰り返される。セラミドリン
酸は、セラミドへのオキシ塩化リンの作用により調製さ
れる。セラミドリン酸は、ジミリストイルホスファチジ
ン酸の代わりに用いられる。類似の結果が得られる。
例７ １−０−ステアロイルグリセロ−rac−３−ホスホ−
５′−（３′−デオキシ,3,−アジド）チミジン 乾燥１−０−ステアロイル−rac−３−グリセロール
（バチル（batyl）アルコール,250mg）,3′−アジド−
３′デオキシチミジン一リン酸ナトリウム塩（0.725g
m）および2,4,6,−トリイソプロピルベンゼンスルホニ
ルクロリド（TPS,1.219gm）は、乾燥ピリジン中に混合
され、かつ窒素下で一夜かく拌された。クロロホルム
（50ml）が、添加され、かつ反応混合物は、冷0.2N HC
1および0.2N重炭酸ナトリウムで２回洗われた。有機相
は、真空において、ロータリーエバポレータにより除去
され、かつ生成物は、20mlのクロロホルム／アセトン
（体積で12:8）から−20℃において結晶化された。化合
物の最終精製は、クロロホルム／メタノール／濃アンモ
ニア／水（体積で70/30/1/1）により展開されたシリカ
ゲルＧの500ミクロンの層を使用して、分取薄層クロマ
トグラフィにより行なわれた。
先の合成においては、プロトンNMRスペクトルは、ゼ
ネラル・エレクトリック（General Electric）のQE−3
00スペクトルメータにより得られ、それは、テトラメチ
ルシランを内部標準として使用した（記号:s＝シングレ
ット,d＝ダブレット,t＝トリプレット,q＝カルテット,d
d＝ダブルダブレット,b＝ブロード）。UVスペクトル
は、シマヅ（Shimadzu）のUV−160,スペクトロホトメー
タに記録された。速い原子衝撃質量分析は、マススペク
トロメトリサービスラボラトリ（Mass Spectrometry
Service Laboratory）、ミネソタ大学（University o
f Minnesota）により測定された。原子分析は、ガルブ
レイスラボラトリーズ、ノクビール、TN（Galbraith L
abratories,Knoxville,TN.）およびシュワルツコフミク
ロアナリティカルラボラトリ、N.Y（Schawarzkopf Mic
roanalytical Laboratory,N.Y.）により測定された。
融点は、フィッシャ−ジョーンズ（Fisher−Johns）融
点測定器により得られた。カラムクロマトグラフィは、
Merckシリカゲル60（70−230メッシュ）上で実施され
た。Rf値は、HPTLCメルク、キーゼルゲル60プリコート
プレート10×10cmにより得られた。無水ピリジン,2,4,6
−トリイソプロピルベンゼンスルホニルクロリド（TP
S）および３′−アジド−３′−デオキシチミジン（AZ
T）は、アルドリッチ（Aldrich）から購入された。ジミ
リストイルホスファチジン酸二ナトリウム塩は、アバン
ティ（Avanti）から購入され、バチルアルコールは、シ
グマ・ケミカル、セントルイス、ミズーリから得られ
た。
例８ 抗ウィルス性リポヌクレオシドを含むリポソームの調製 6.42マイクロモルのジオレオイルホスファチジルコリ
ン、3.85マイクロモルのコレステロール、1.28マイクロ
モルのジオレオイルホスファチジルグリセロールおよび
1.28マイクロモルのジミリストイルホスファチジル−ア
ジドチミジンが、無菌の2.0mlガラスバイヤルに混合さ
れ、かつ溶剤はロータリーエバポレータにおいて真空下
で除去された。いくつかの実験においては、ジミリスト
イルホスファチジルアジドチミジンは、ジミリストイル
ホスファチジルジデオキシチミジン、ジミリストイルホ
スファチジルジデオキシシチジンまたはアジドチミジン
二リン酸ミリストイルグリセロールのいずれかにより置
換され、対照のリポソームは、抗ウィルス性リポヌクレ
オシドを省略することにより調製された。乾燥フィルム
は、溶剤の痕跡を除去するために、室温において一夜高
真空の下に置かれた。脂質フィルムは、30℃で、等張の
デキストロースを含む0.3mlの無菌の10mM酢酸ナトリウ
ム緩衝液により水和された。10分間断続的にかく拌さ
れ、90ないし120分間の出力制御設定＃９におけるカッ
プホルンジェネレータ（431B）を有するヒートシステム
ウルトラソニックス超音波発生器を使用する超音波処理
をひき続いて行い、サンプルは清澄にされた。この超音
波処理は、滅菌されたRPMI綏衡液により希釈され、かつ
示された濃度において組織培養器に添加された。
例９ 抗ウィルス性脂質含有リポソームへのCD4に対するモノ
クローナル抗体の結合 39:39:20:2のモル比で、例１の方法によって得られた
ジミリストイルホスファチジル−AZT、ジミリストイル
ホスファチジルコリン、コレステロールおよびジミリス
トイルホスファチジルエタノールアミンの脂質混合物20
0mgは、100ml丸底フラスコにおいて薄膜を形成するため
にロータリーエバポレータを使用し真空状態で乾燥され
た。1mlの滅菌リン酸緩衝塩水が添加され、かつ混合物
は20分間20℃でゆっくりと振られ、次に10回の30秒サイ
クルのかき混ぜが続きマルチラメラリポソームを形成し
た。懸濁液は200nmの孔直径を有する２つの積み重ねら
れたヌクレオポアポリカーボネートフィルタを通して５
サイクルの押し出し成形に供され、均一のリポソーム群
を生じた。超音波処理、逆相エバポレーション、および
フレンチプレスまたはミクロフリュイダイザ（ミクロフ
リュイディクス、ニュートン、マサチューセッツ）の使
用のような他の方法が用いられてもよい。CD4抗原に対
する１ないし2mgのOKT4aモノクローナル抗体は0.08mM
Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロ
ピオン酸（SPDP）と共にインキュベートすることによっ
てチオール化される。未反応のSPDPはセファデックスG2
5を介するゲル過により除去される。流出するDTP−タ
ンパク質は20分間pH4.5で0.1M 酢酸塩緩衝塩において
0.05M ジチオスレイトールで還元され、還元チオール
化抗体を生じる。
５マイクロモルのリン脂質に相当する例５の方法によ
り得られたリポソームは、0.20mlの等張MES/HEPES緩衝
液、pH6.7においてチオール化された抗体で室温で一夜
インキュベートされる。結果として生じる免疫リポソー
ムはヒース（Heath）他（33）の不連続メトリジミド（m
etrizimide）勾配法によって精製され、かつ200nmフィ
ルタを通すことにより滅菌される。
例10 脂質ヌクレオシド接合体による組織培養細胞におけるHI
V複製の阻害 A.方法 ヒトＴ細胞のウィルス感染： ヒトＴリンパ芽球細胞系、CCRG−CEM（以下CEMと称
す）は、100U/mlペニシリンＧ、100ug/mlストレプトマ
イシン、2mMグルタミンおよび10％ウシ胎児血清を含むR
PMI1640培地（ヘイクロン研究所、ローガン、ユタ（Hyc
lone Laboratories,Logan,Utah））において培養され
た。細胞は１％ポリブレンを含む培地において37℃で60
分間１組織培養50％感染量（TCID50）／細胞の感染多重
度でLAV−１株（L.モンタニエ（Montagnier）、パリ、
フランス）で感染された。CEM細胞は６×104細胞/mlで
の懸濁において感染され、遠心分離および再懸濁によっ
て３回洗浄され、かつそれからリポソーム抗レトロウィ
ルス性リポヌクレオチド剤を含む培地の添加の前に、６
×106細胞／ウェルで96ウェルプレートに分配された。
HIV p24検定によって測定される抗ウィルス活性： 抗ウィルス活性は、異なった濃度の薬剤にさらされた
感染された細胞のセルフリー培養培地においてHIV p24
（gag）抗原の生産の阻害によって３日後に検定された;
p24抗原は製造者の説明書に従ってELISA（アボット研究
所（Abbott Laboratories）、シカゴ、イリノイ）によ
って測定された。データは２つの測定値の平均であっ
て、かつ薬剤の不在においてインキュベートされた対照
（コントロール）に対する百分率として表わされる。
B.実験 H533−1:第１図 示された濃度において、ジミリストイルホスファチジ
ルアジドチミジン（LN1）、ジミリストイルホスファチ
ジルジデオキシチミジン（LN2）またはアジドチミジン
二リン酸ジミリストイルグリセロール（LN4）のいずれ
か10モル％を含むリポソームは生体外でのCEM（野生の
タイプ）細胞でのHIV複製を阻害する能力に対して検査
された。これらの抗レトロウィルス性リポヌクレオチド
の３つのすべてはHIV p24生産を阻害した;50％（E.D.5
0）ウィルス生産を低減するのに必要とされる薬剤の量
は以下のとおりである： ホスファチジルアジドチミジン（LN1） 2uM ホスファチジルジデオキシチミジン（LN2） 30uM AZT 二リン酸ジミリストイルグリセロール（LN4） 8uM このことは、抗レトロウィルス性ヌクレオチドの脂質
誘導体はCEM細胞に入ることができ、かつ予期されるよ
うに活性ヌクレオシドに変換されることができるという
ことを示す。抗レトロウィルス性ヌクレオチドを含まな
かった対照リポソーム（CONT）はCEM細胞によるp24生産
に影響を及ぼさなかった。
C.実験 H747−1a:第２図 リポソームにおけるジミリストイルホスファチジルア
ジドチミジン（LN1）は、フリーのアジドチミジン（N
1）と比較された。0.1uMより下の低い濃度では、フリー
のAZTはリポヌクレオチドより効果的であった。２から1
70uMの範囲に及ぶ濃度において、ホスファチジルAZTリ
ポソームはフリーのAZTより効果的であった。方法にお
いて示されたように不活性脂質だけしか含まない対照リ
ポソーム（CONT）はp24を低減するのに効果的でなかっ
た。
D.実験 H747−1b:第３図 ジデオキシチミジン（N2）はHIV p24生産の弱い阻害
剤である。驚くべきことに、ホスファチジルジデオキシ
チミジン（LN2）はフリーのヌクレオシドよりいくらか
より効果的である。図から見られ得るように、ホスファ
チジルジデオキシチミジンでよりもわずかに多いフリー
のddTがp24生産を低減するのに必要とされる。匹敵する
総リン脂質濃度での対照リポソーム（CONT）は効果がな
い。
E.実験 H637−1b:第４図 この実験では、CEM細胞は、チミジンキナーゼ酵素（C
EM tk−）を欠如する（デニス カーソン（Dennis Ca
rson）博士、スクリップスクリニック（Scripps Clini
c）、サンディエゴ、カリフォルニアによって与えられ
る）変異細胞で置換えられた。これらの細胞はチミジン
誘導体をホスホリル化することができず、かつAZTはそ
れゆえ不活性である、なぜならばそれはHIV p24複製を
阻害するのに必要とされる活性三リン酸誘導体に変換さ
れることができないからである。図に示されるように、
AZT（N1）は広範囲の濃度（0.2から100uM）にわたってp
24生産に完全に影響を及ぼさない。しかしながら、ホス
ファチジルAZT（LN1）とホスファチジルddT（LN2）との
両方はp24生産を低減することができ、これらの化合物
が、ほかの細胞の酵素によって三リン酸にさらに活性化
され得るヌクレオシド−一リン酸へ、細胞において代謝
されるということを証明する。このデータは、ヌクレオ
シド一リン酸への直接代謝を予測する特許において略述
された原理の証明を提供する。
F.実験 H805−1:第５図 この実験では、ジミリストイルホスファチジル−ジデ
オキシシチジン（LN3）およびジミリストイルジデオキ
シチミジン（LN2）が生体外でCEM（野生のタイプ）細胞
におけるフリーのAZT（N2）およびジデオキシシチジン
（N3）の効果と比較された。ホスファチジルddCは最も
効力のあるリポヌクレオチド（ED501.1uM）であり、か
つホスファチジルddTは前述のようにあまり活性ではな
かった（ED5020uM）。添加された抗レトロウィルス性ヌ
クレオチドを有さないフリーのリポソーム（CONT）は不
活性であった。
G.実験 I276: この実験において、上述のように準備されたリポソー
ムにおけるジミリストイルホスファチジルアジドチミジ
ン（LN1）での予備的インキュベーションによって与え
られる抗ウィルス性の保持はフリーのアジドチミジン
（N1）のそれと比較された。CEM（野生のタイプ）細胞
は、7.14μＭのフリーのAZT（N1）またはホスファチジ
ルAZT（LN1）のどちらか一方を含むRPMI培地において標
準状態の下で３日間予備的にインキュベーションされ
た。細胞はそれからPBSで２回洗浄され、かつ新しいRPM
I培地が添加された。細胞各グループはそれから３つの
バッチに分けられた。１つのバッチは上述のようにHIV
で即座に感染された；結合していないHIVを洗浄した
後、サンプルは３日間培地のみでインキュベートするこ
とを許容された。２つのほかのバッチは24または48時間
の間培地のみでインキュベートすることを許容され、存
在する任意の細胞内の抗ウィルス性剤が使い尽くされる
のを許容した。それから、それらはHIVで感染され、洗
浄され、かつ新しいRPMI培地が添加された。３日間のさ
らなるインキュベーションの後、すべてのバッチの上清
はp24タンパク質の存在が検査された。
対照細胞:CEM細胞は予備的インキュベーションなしに
HIV感染にさらされた；薬剤は示されるようにHIV感染に
続いて添加され、かつ細胞は３日間インキュベートされ
た。
予めインキュベートされた細胞:CEM細胞は、AZT（N
1）またはホスファチジルAZT（LN1）を含む培地で３日
間予めインキュベートされた;3日後細胞は洗浄され、HI
V感染にさらされ、薬剤なしの培地の添加が続いた。３
日間のさらなるインキュベーションの後、p24は測定さ
れた。
結果： p24:ng/ml CEM対照：予備的インキュベーションなし ３日インキュベーション後 HIV感染のみ 204;207 HIV＋7.14μＭアジドチミジン（N1） 64;69 HIV＋7.14μＭホスファチジルAZT（LN1） 16;16 ３日間のプレインキュベーション後、薬剤を除去した
のち通常の培地における48時間のインキュベーションを
行なった結果、ホスファチジルAZTは、p24生産の低減に
よって評価されるように、HIV複製に対する十分な防御
をもたらした。しかしながら、AZTの予備的インキュベ
ーションは薬剤の除去の後24および48時間においてHIV
感染から細胞を保護できなかった。
H.実験 J45: この実験において、例７の化合物（１−０−ステアロ
イルグリセロ−rac−３−ホスホ−５′−（３′−デオ
キシ,3′−アジド）チミジン）は、例８に示されるよう
な10モル％のリポヌクレオチドを含むリポソームに組み
込まれた。この材料はRPMI培地で所望の濃度まで希釈さ
れ、かつこの例で先に述べられたようにLAV−１で感染
されていた、ロッキーマウテンナショナル研究所（the
Rocky Mountain National Laboratories）（ハミ
ルトン、モンタナ）のブルース チェスブロ（Bruce C
hesbro）博士から得られたHT4−6C細胞（CD4＋HeLa細
胞）に添加された。37℃で３日間のインキュベーション
の後、細胞はPBSで洗浄され、固定され、かつクリスタ
ルバイオレットで染色され、かつプラークが数えられ
た。結果は以下に示すとおりである。
データは、１−０−ステアロイル−rac−３−ホスホ
−５′−（３′−デオキシ,3′アジド）チミジンが、LA
V−１で感染されたHT4−6C細胞においてHIVプラーク形
成を抑制するのに効果的であるということを示す。50％
抑制を生じるために必要とされる濃度はおよそ0.35マイ
クロモルである。
例11 HIV対分離株：抗ウィルス感度I.C.50,μM;HT4−6Cプラ
ーク低減検定 方法:HT4−6C細胞（CD4＋HeLa細胞）はブルース チ
ェセブロ博士、ロッキーマウンテンナショナル研究所、
ハミルトン、MT）から得られ、かつ例10で述べられたHI
V分離株で感染された。３日間のインキュベーションの
後、細胞は洗浄され、固定され、かつクリスタルバイオ
レットで染色され、かつプラークが数えられた。HIVの
臨床サンプルはAZT治療の前（プレ）およびAZT治療の後
６から12ヶ月（ポスト）で分離された（リッチマン、D.
D.、ラーダ、B.、およびダービ、G.、発行のために提出
された原稿、1989）。HT4−6Cプラーク減少検定を使用
して、１対の臨床上の分離株の感度がAZT、ホスファチ
ジルAZTまたはホスファチジルddTのいずれかを使用し測
定された。
省略形:pAZT,ホスファチジルアジドチミジン pddt,ホスファチジルジデオキシチミジン ポストAZT治療、すべての５分離株はAZTへの感度の著
しい減少を示した。このことはpAZTおよびpddTでは起こ
るのが観察されず、ポスト−AZT分離株は、新規のリン
脂質誘導体の形態で与えられる抗レトロウィルス性ヌク
レオシドに対する感度のそれらの通常のレベルを保つと
いうことを示した。
例12 ホスファチジルアシクロビアの合成および単純ヘルペス
ウィルス感染されたWI−38細胞における効能 ジミリストイルホスファチジル酸（二ナトリウム塩）
はアバンティポーラリピッド（Avanti Polar Lipid
s）、バービンガム、ALから得られ、かつ例１で上述さ
れたように遊離酸（DMA−Ｈ）に変換された。アシクロ
グアノシン（アシクロビア、ZoviraxR）はシグマケミカ
ル（Sigma Chemical Co.）、セントルイス、MOから得
られ、かつ73mg（0.32mmol）は真空オーブンにおいて五
酸化リンを介し夜通し乾燥された。250mgのDMPA−Ｈ
（0.42mmol）は50ml丸底フラスコに添加され、かつ真空
オーブンにおいて五酸化リンを介し夜通し乾燥された。
乾燥アルゴンの下で、73mgのアシクログアノシン、315m
g（1.04mmol）のトリイソプロピルベンゼンスルホニル
クロリド（アルドリッチ、ミルウォーキー、WI）および
2mlの乾燥ピリジン（アルドリッチ、ミルウォーキー、W
I）が丸底フラスコに添加された。反応混合物は18時間
室温でかき混ぜられ、続いて1mlの蒸留水が添加され
た。
溶剤は真空で蒸発させられ、イエローガムを生じ、そ
れは少量のクロロホルム／メタノール（9/1）で再溶解
され、かつシリカゲルのカラムに与えられた（45gm:Kie
selge160、EMサイエンス、チェリーヒル、JN）。カラム
はクロロホルム中８％メタノール（500ml）、クロロホ
ルム中10％メタノール（250ml）、続いてクロロホルム
中15％メタノール（1.5L）で溶出された。1.5リットル
の先溶出物が排除された後、ジミリストイルホスファチ
ジルアシクログアノシン（pACV）が得られた。３つのフ
ラクションが収集され、かつ分析された：フラクション
１（200ml、130mg pACV）は純粋のpACVを含んだ；フラ
クション２（200ml、150mg）およびフラクション３（20
0ml、50mg）はpACVおよび不純物として少量の出発材料
を含んだ。フラクション１は真空で濃縮され、かつ残渣
には5mlのシクロヘキサンが添加された；溶液は凍結さ
れ、かつ五酸化リンの下で凍結乾燥され純粋のホスファ
チジルアシクログアノシン（80mg、0.1mmol）を生じ
た。
精製された化合物は、クロロホルム／メタノール／水
／アンモニア（体積で70/30/1）で展開されたK6Gシリカ
ゲルプレート（ワットマン（Whatman）インターナショ
ナル、メイドストーン、英国）に与えられるとき、0.29
のRfで単一スポットを与えた。UV吸収は256nmで極大で
あった（CHCL3において吸光係数＝8.4×103）。リン含
有率は3.30％（理論上3.89％）であって、かつ融点は24
5℃であった。HPLC分析において、ホスファチジルアシ
クログアノシンは、0.5ml/minの流出速度で１−プロパ
ノール/0.25mMリン酸カリウム／ヘキサン／エタノール
／酢酸（体積で245/179/31/50/0.5）の移動相で溶出さ
れたとき、11分の保持時間で単一のピークを与えた（Sp
heri−5;ブラウンリー研究所（Brownlee Labs）、応用
バイオシステム、サンタクララ、CA）。
細胞培養 Wi−38細胞はアメリカンタイプカルチァコレクション
（ロックビル、メリーランド 20852）から得られ、か
つ10％ウシ胎児血清（FCS）でダルベコの（Dulbecco'
S）最小必須培地（DMEM）で培養された。細胞は密集す
るまで250cm2のビンにおいて培養された。
ウィルス 単純ヘルペスウィルス（HSV）タイプ１（HSV−１）お
よびタイプ２（HSV−２）はアメリカンタイプカルチァ
コレクションから得られた。両方のウィルス株はWi−38
細胞で準備された；ストックウィルスが１回の凍結およ
び解凍によって採集され、かつ細胞破片が低速遠心分離
（2000rpm）によって清澄にされたとき、広範な細胞変
性効果（CPD）が観察された。ウィルスを含む上清液は
小さなバイアルに分割され、かつ８℃で蓄えられた。HS
V−１とHSV−２との両方の株は実験で使用される前にWi
−38細胞において力価測定された。
単純ヘルペスウィルスプラーク低減検定 プラーク低減検定はホスファチジルアシクロビアまた
はフリーのACVの抗ウィルス性効果を測定するために使
用された。Wi−38細胞は５分間0.25％トリプシンでトリ
プシン化された。細胞は残りのトリプシンを除去するた
めに採集され、かつ遠心分離され、かつ細胞ペレットは
10％FCSでDMEMにおいて再懸濁された。Wi−38細胞は１
時間の間96ウェルプレート（５×10細胞／ウェル）に置
かれた。感染された細胞はそれからホスファチジルアシ
クロビアまたはACVで処理された。抗ウィルス性薬剤は
貯蔵溶液で準備され、それらはそれから0.5％メチルセ
ルロースを含むDMEMにおいて２％FBSで２倍希釈され
た。100μｌの各希釈された抗ウィルス性薬剤はHSV感染
された細胞の各ウェルに添加された。
対照および薬剤処理された細胞培養物は24時間の間５
％二酸化炭素で37℃インキュベータにおいてインキュベ
ーションされた。HSV感染された細胞（抗ウィルス性薬
剤なしの対照）が読取り可能な数のプラークを示したと
き、プレート全体はメタノールで固定され、かつ10分間
１％のクリスタルバイオレットで染色された。染料は水
道水で濯がれ、かつプレートは乾燥され、かつプラーク
が数えられた。ACVまたはホスファチジルアシクロビア
の抗ウィルス性効果は以下の例で示されるようにプラー
ク低減の測定により定められた。
結果:WI−38細胞におけるHSV−１によるプラーク形成
へのアシクロビアおよびホスファチジルアシクロビアの
効果 上に示されるデータは、ホスファチジルアシクロビア
がHSV−１感染されたWi−38細胞において効果的である
ということを示す。50％抑制を生じる濃度はアシクロビ
アに対し2uM対0.4uMである。同様の結果は感染されたWi
−38細胞においてHSV−２で得られた。
例13 ５′−パルミトイル（３′−デオキシ−３′−アジド）
チミジンの合成 0.5グラムのAZT（1.87mmol）は、10mlの乾燥クロロホ
ルムおよび2mlの乾燥ピリジンにおいて溶解された。5ml
の乾燥クロロホルムで溶解された0.78グラム（2.8mmo
l）のパルミトイルクロリド（アルドリッチケミカル
ズ、ミルウォーキー WI）は４℃で20分の期間にわたっ
てゆっくりと添加され、かつ反応混合物はかく拌で室温
まで温まるようにされた。20時間の後、反応は8mlの蒸
留水の添加で停止され、かつ38mlのクロロホルム／メタ
ノール/0.5N HCl（体積で1/2/0.8）が添加された。相
は10mlのクロロホルムおよび8mlの0.5N HClの添加によ
り分けられた。必要とされる化合物を含む有機相は0.5N
重炭酸ナトリウムでさらに洗浄された。下のクロロホル
ム相は無水硫酸ナトリウムで乾燥され、かつ真空の下で
蒸発させられた。化合物は−20℃でクロロホルム／アセ
トンから結晶化された。さらなる精製は珪酸カラムクロ
マトグラフィによって得られ、かつ145mgの精製５′−
パルミトイル（３′−アジド,3′−デオキシ）チミジン
が得られた（収率15.3％）。元素分析：理論値Ｃ 61.5
9、Ｈ 8.5、Ｎ 13.8およびＯ 15.8;実測値Ｃ 60.7
4、Ｈ 8.6、Ｎ 13.5およびＯ 17.9。シリカゲルＧ薄
層クロマトグラフィプレート上のRf:0.92（クロロホル
ム／メタノール／アンモニア／水、70/30/1/1）;0.83
（ヘキサン／エチルエーテル／酢酸、80/20/1）および
0.86（クロロホルム／アセトン、94/6）、m.p.77−80
℃、UVmax 265。
HIV感染されたHT4−6C細胞におけるパルミトイルAZT
の効能 パルミトイルAZTは例８で述べられたようにリポソー
ムに組み込まれ、かつ例10および11で述べられたように
LAV−１感染されたHT4−6C細胞でインキュベートされ
た。0.8uMパルミトイルAZTは25％プラーク形成を抑制し
た（処理されない対照において134プラーク対176）。
以上のことからほかのヌクレオシド類縁体およびその
リン脂質誘導体は同様の結果を得るために例において代
わりに用いられ得るということが明らかであるはずであ
る。AZT−一リン酸またはほかの抗ウィルス性ヌクレオ
シドリン酸もまたリポソームの水性区分に含まれてもよ
い。脂質抗ウィルス性ヌクレオシドのモルパーセントは
総脂質混合物の0.1から100％で変化してもよい。さら
に、抗ウィルスヌクレオシド脂質の混合物はウィルスに
よる病気の治療のためのリポソームを構成する際に使用
されてもよい。さらに、この発明は任意の特定の抗ウィ
ルス性ヌクレオシド類縁体の使用に制限されず、むし
ろ、この発明の有益な結果はこれらの材料の脂質誘導体
からのリポソームの形成からもたらされるということが
強調されるべきである。このように、抗ウィルス性ヌク
レオシドが現在知られているか、またはそれが将来知ら
れるようになるかにかかわらず、そこから現在熟考され
る脂質誘導体を形成する方法は、当業者には明らかにな
るであろうように、確立された化学技術に基づき、かつ
リポソームへのそれらの組み込みは前述の開示によって
広く可能となる。この合成は、この発明の実施において
使用するために本質的にすべてのヌクレオシド類縁体か
らの化合物の形成に広く適用可能であるということが再
び強調されるべきである。
したがって、この発明はその精神または本質的な特徴
から逸脱することなくほかの特定の形態において実施さ
れてもよい。説明された実施例はすべての点において例
示するものとしてのみ考えられるべきで、かつ制限する
ものではなく、したがって、この発明の範囲は前述の説
明によってよりむしろ添付の請求の範囲によって示され
る。請求の範囲の法律上有効な均等の意味および範囲の
中に収まるすべての変更はそれらの範囲で包含されるべ
きである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｈ 19/10 Ｃ０７Ｈ 19/10 (31)優先権主張番号 ３７３，０８８ (32)優先日 平成１年６月28日(1989．6．28) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (72)発明者 クマール，ラージュ アメリカ合衆国、92129 カリフォルニ ア州 サン・ディエゴ ソートゥース・ ウェイ、9338 (72)発明者 ストゥミラー，ルイス・エム アメリカ合衆国、92067 カルフォルニ ア州 ランチョー・サンタ・フェ、ビ ア・ポサダ・デル・ノーテ、6146 (56)参考文献 特開 昭61−263996（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−107936（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−257925（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−280500（ＪＰ，Ａ) 米国特許4291024（ＵＳ，Ａ) 米国特許4471113（ＵＳ，Ａ) 英国公開4283394（ＧＢ，Ａ) Ｘｉｅ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（1995）Ａ ｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．28 ｐ113 〜120 Ｋｏｒｂａ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐ ａｔｏｌｏｇｙ Ｎｏ．５，Ｖｏｌ 23 Ｐ958〜968（1996) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07H 19/10,19/20 - 19/207 A61K 31/495 - 31/522 A61K 31/7052 - 31/706 A61P 31/18 ＣＡＳ

Claims (4)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ａ）炭素１および２が、オキシエーテル、
    チオエーテルまたはエステル結合を介して、２〜24の炭
    素および０〜６の不飽和部位を有する脂肪族炭化水素に
    結合されており、かつホスホ基が１〜３のホスフェート
    部分である、グリセロリン脂質と、 ｂ）（3'−アジド−3'−デオキシ）チミジン（AZT）、
    ９−［（２−ヒドロキシエトキシ）メチル］グアニン
    （アシクロビア）、2',3'−ジデオキシチミジン（dd
    T）、９−［（1,3−ジヒドロキシ−２−プロポキシ）メ
    チル］グアニン（ガンシクロビア）、2',3'−ジデオキ
    シシチジン（ddC）、2',3'−ジデヒドロ−2',3'−ジデ
    オキシチミジン（4dT）、2',3'−ジデオキシイノシン
    （ddI）および2',3'−ジデオキシ−3'−チアシチジン
    （3TC）からなるグループから選択されたヌクレオシド
    類縁体とからなる、脂質−ヌクレオシド結合体。
  2. 【請求項２】前記グリセロリン脂質が、炭素１および２
    においてエステル結合を有し、かつ炭素３において１つ
    または２つのホスフェート基を有し、かつ前記ヌクレオ
    シド類縁体がAZT、ddT、アシクロビアまたはガンシクロ
    ビアである、請求項１に記載の脂質−ヌクレオシド結合
    体。
  3. 【請求項３】請求項１または２に記載の脂質−ヌクレオ
    シド結合体を有効成分とする、ウィルス感染を治療する
    ための医薬。
  4. 【請求項４】少なくとも一部分請求項１に記載の脂質−
    ヌクレオシド結合体から形成されるリポソーム。
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