JP3428356B2 - 生理活性物質及びその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アガリクスブラゼ
イの菌糸体や子実体などから得られる生理活性物質およ
び、この生理活性物質を得るための製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】アガリクスブラゼイ（Ａｇａｒｉｃｕｓ
ｂｌａｚｅｉ）は、ブラジル原産の担子菌類キノコ
で、ガンやその他の成人病に対して優れた効果のあるこ
とが知られている。近年、このキノコの人工培養方法も
開発されているが、栽培方法が難しいため、需要の拡大
に供給が追いついていないのが現状である。

【０００３】一方、アガリクスブラゼイに関する医学的
および栄養学的研究は比較的盛んであり、このキノコに
含有される主要な有効成分は多糖の一種であるβ−グル
カンであることが報告されている。このβ−グルカン
は、免疫賦活能力が高く、免疫細胞（ＮＫ細胞等）を活
性化してガン細胞を攻撃し、ガンを殺滅させることが知
られている。β−グルカンは、アガリクスブラゼイに限
らず、シイタケ、マツタケ、マイタケ等のキノコ類でも
知られ、シイタケから抽出したレンチナンやカワラタケ
から抽出したクレスチンは、既に抗ガン剤として製薬化
されているが、現在までの幾つかの研究では、アガリク
スブラゼイが最も抗ガン作用のあるキノコとされてい
る。

【０００４】従来、アガリクスブラゼイからβ−グルカ
ン等の有効多糖を抽出する方法が提案されているが（例
えば、特開平１−６７１９５号参照）、アガリクスブラ
ゼイに含まれるβ−グルカン等がきわめて少ないことか
ら、所定量の抽出量を得るためには大量のアガリクスブ
ラゼイを必要とするといった問題があった。また、酵素
剤を利用してアガリクスブラゼイの菌体からエキス成分
を抽出する方法として、特開平５−２６８９０５号が知
られている。この方法は、アガリクスブラゼイの菌体に
エンド−１,４−β−グルカナーゼ、キシラナーゼおよ
びエンド−１,３−β−グルカナーゼを含有する酵素剤
を作用させて、マツタケ様の風味を保持した抽出エキス
液を得るものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上述し
たエキス成分の抽出方法では、β−グルカナーゼを含む
酵素剤を利用しているために、アガリクスブラゼイの菌
体中に含まれるβ−グルカンあるいは菌体処理の途中で
得られたβ−グルカンがさらに分解してセルビオースや
グルコースができてしまうといった問題があった。

【０００６】そこで、本発明は、アガリクスブラゼイの
菌糸体や子実体、あるいは菌糸体を培養した後の廃液か
らβ−グルカン等の有効多糖を多量に含む生理活性物質
を得ることを目的としている。特に、ヘミセルラーゼを
酵素剤として利用することでアガリクスブラゼイの構造
糖であるヘミセルロースを分解してβ−グルカンを多量
に含む活性多糖を得、アガリクスブラゼイからβ−グル
カンの収率を向上させるものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明の請求項１
に係る生理活性物質は、アガリクスブラゼイの菌糸体、
子実体、又は菌糸体を培養した後の廃液のいずれかを、
ヘミセルラーゼによる酵素剤で分解処理することによっ
て得られるβ−グルカンを含有することを特徴としてい
る。

【０００８】また、本発明の請求項２に係る生理活性物
質の製造方法は、アガリクスブラゼイの菌糸体、子実
体、又は菌糸体を培養した後の廃液のいずれかにヘミセ
ルラーゼによる酵素剤を作用させて分解処理することを
特徴とする。

【０００９】本発明における生理活性物質は、β−Ｄ−
グルカン等の低分子の活性多糖を多量に含有するもの
で、それ以外にも核酸等の有効成分を含むものである。
活性多糖の分子量は約２００万〜５０万程度であり、こ
のように低分子化することで、体内での消化吸収が一段
と高まり、免疫賦活効果を期待できることになる。アガ
リクスブラゼイの菌糸体は、液体培養および固体培養の
いずれによっても得ることができる。また、アガリクス
ブラゼイの子実体にはもちろんのこと菌糸体を培養した
後の廃液にもβ−グルカンなどが含まれることから、こ
れらから生理活性物質を得ることができる。

【００１０】本発明に用いられる酵素剤の主体はへミセ
ルラーゼである。本発明のヘミセルラーゼは、トリコデ
ルマ・ビリデ ＪＡＭ４０３３、トリコデルマ・ハルジ
アナム ＪＡＭ４０３１、アスペルギルス・タマリ Ｊ
ＡＭ４００７及びアスペルギルス・ニガー ＪＡＭ４０
１２のそれぞれを培養することによって得られた酵素群
（例えば、マンナーゼ、アラビノシダーゼ、キシロビア
ーゼなど）や、一般に市販されている酵素剤（例えば、
シグマ社製のヘミセルラーゼ）を利用することもでき
る。へミセルラーゼを単独で使用することもできるが、
他にペクチナーゼを混合して使用することで酵素処理の
段階的反応がスムーズに移行する。

【００１１】菌糸体を酵素処理したときのβ−グルカン
の分解生成過程を図１の概念図で説明すると、菌糸体
は、β−グルカンのほか、キシランやマンナン、アラビ
ナン等が結合して長鎖繊維を構成している。これにヘミ
セルラーゼ又はペクチナーゼを混合した酵素を作用させ
ると、ヘミセルロースが段階的に加水分解して結合鎖が
切れ、高分子多糖を経て活性多糖（β−Ｄ−グルカン）
が得られる。

【００１２】菌糸体に対する酵素剤の添加割合は０．０
１〜０．５重量％、望ましくは０．１重量％前後であ
る。また、酵素処理液のｐＨは、３．０〜８．５、望ま
しくはｐＨ４．５前後である。酵素処理の温度は２５〜
６０℃、望ましくは約４５℃である。さらに、酵素処理
時間は２０〜１２０分、望ましくは約６０分程度であ
る。

【００１３】酵素処理による反応がある程度まで進行し
たら、処理液を加熱して酵素反応を止める。通常、８０
〜１００℃で約１０分間加熱して酵素を失活させる。酵
素反応の停止によって、アガリクスブラゼイ由来のβ−
グルカンを多量に含む活性多糖の原料が完成する。さら
に、これを濃縮、乾燥することで本発明の生理活性物質
を得る。乾燥法は凍結乾燥が望ましいが、有効成分が比
較的熱にも強いことからスプレードライによる乾燥も可
能である。本発明生理活性物質は、主成分であるβ−グ
ルカンの他にα−グルカン、β−ガラクトグルカン、タ
ンパク質グルカン等を含有する。

【００１４】

【発明の実施の形態】以下に、上記アガリクスブラゼイ
から得られる菌糸体等の培養方法およびこれを酵素処理
する場合の実施の形態を説明する。

【００１５】アガリクスブラゼイの菌糸体は、固体培養
または液体培養のいずれの方法でも得ることができ、ま
たアガリクスブラゼイの子実体は、本発明者が既に特許
出願している栽培方法などによって得ることができる
（特願平７−３２４６１７号公報参照）。アガリクスブ
ラゼイの菌糸体を固体培養によって得る方法としては、
例えば、麦粒を主体とした固体培地、又はＭＹＡ（麦芽
エキス２％、酵母エキス１％、寒天２％）培地を滅菌
し、アガリクスブラゼイの種菌を無菌操作によって接種
し、２５度で３０日間培養することで菌糸体が得られ
る。

【００１６】一方、アガリクスブラゼイの菌糸体を液体
培養によって得る方法としては、例えばＳＭＹ培地を用
いた方法がある。このＳＭＹ培地の組成例を表１に示
す。液体培養は一般的な好気性菌の培養方法に準ずる。
培養条件例を表２に通す。元菌はアガリクスブラゼイか
ら分離した菌株を用いる。元菌はスラント又は冷凍保存
しておく。保存株をスラント等に継代しておこした後、
液体培養に移す。通常、５００ミリリットルの三角コル
ベンに２００ミリリットルの液体培地を入れ、２５度で
振盪培養した場合、２週間で培養が完了する。出来上が
った菌糸は無数の球状になり、液体部分は完全に澄んで
いる。必要な量に応じてスケールを変えていく。大型タ
ンクでも培養可能である。

【００１７】

【表１】アガリクスブラゼイ菌糸体のＳＭＹ培地の組成
例 ブドウ糖 ２％ 麦芽エキス ２％ 酵母エキス ２％ ｐＨ 6.5

【００１８】

【表２】アガリクスブラゼイ菌糸体の培養条件の例 ジヤーファーメンターの場合 培養温度 ２５度 通気量 １：１（Ｖ／Ｖ） 培養期間 ３週間

【００１９】出来上がった菌糸体と培養液を分離し菌糸
体を回収する．分離する方法としては、メッシュによる
ロ過または遠心分離で行う。回収した菌糸体は粗く破砕
する。破砕するのは次の工程の酵素反応を容易にするた
めである。

【００２０】回収した菌糸体はヘミセルラーゼを主体と
する酵素剤によって酵素処理を行なう。この発明におけ
る最も特徴的な工程であり、へミセルラーゼを単独で、
もしくはへミセルラーゼにペクチナーゼを混合して使用
する。酵素反応条件は使用する酵素に最も適した条件が
選ばれるが、その一例を表３に示す。反応時間は通常１
時間程度である。

【００２１】

【表３】 アガリクス菌糸体の酵素処理条件 使用酵素 へミセルラーゼ：ペクチナーゼ ２：１ ｐＨ ４．５ 温度 ４５度 反応時間 １時間 酵素液濃度 ０．１％ 酵素液：菌糸体（Ｖ：Ｖ） ２：１

【００２２】ある程度まで反応が進行したら酵素反応を
止める。通常、摂氏７０度まで昇温して酵素を失活させ
る。酵素反応の停止によって、アガリクスブラゼイ由来
の活性多糖の原料が完成する。しかし、このままではへ
ミセルラーゼ以外の酵素反応が進んだり、他の微生物の
汚染による腐敗の心配があるので、酵素処理後に濃縮、
乾燥して試料を得た。乾燥法としては凍結乾燥が望まし
い。しかし、有効成分が比較的熱にも強いことからスプ
レードライによる乾燥でも可能である。

【００２３】次に、アガリクスブラゼイの子実体を酵素
処理法について説明する。子実体も菌糸体の一種なの
で、基本的には上述した菌糸体の酵素処理法に準じ、特
別な処理方法はない。子実体は生のものでも乾燥品でも
よい。生の子実体は２倍量の水を加え、そのままミキサ
ーで破砕してから酵素処理する。乾燥子実体は２０倍量
（Ｗ／Ｗ）の水で１０分程度煎じた後ミキサーで破砕
し、煎じ液と共に酵素処理する。酵素液は、終濃度で
０．１％になるよう調整する。

【００２４】次に、上記試料を用いて行った臨床例の結
果を示す。 臨床例１ 北海道の女性（２０才）は子宮ガンと診断され、平成７
年７月２４日の血液検査では血液成分（赤血球、血色
素、へマトクリット、ＬＹＭ等）の降下がみられた。そ
の後、平成７年９月２０日には白血球数の減少が見られ
（４２００から３４００に減少）、更に平成７年１１月
１３日には２９００、平成８年１月初旬には白血球数が
４００まで落ち込み、ＭＣＶの上昇がみられた。そこ
で、その直後から本発明の生理活性物質を服用したとこ
ろ、翌平成８年２月の血液検査では白血球数がほぼ正常
値を示し、その後の検査でも正常値を維持している。白
血球数の変化を図２に示す。

【００２５】臨床例２ 東京の女性（５１才）は、平成８年２月２７日の血液検
査で中性脂肪とＡＬＴが平常値を越えていたが、その直
後に本発明の生理活性物質を服用したところ約１か月後
の３月２８日には検査結果が大幅に改善され、さらに６
月１５日の検査ではほぼ正常値まで改善することができ
た。その結果を表４に示す。

【００２６】

【表４】

【００２７】臨床例３ 山梨の男性（５４才）は、平成５年７月１日の血液検査
では総体的に悪い数値（例えば中性脂肪９５０、ヘモグ
ロビンＡ１Ｃ９．５、血糖値２３３）を示していたが、
平成８年５月から本発明の生理活性物質を服用したとこ
ろ平成８年７月５日の血液検査では既に改善され、更に
平成８年１２月１７日の血液検査ではほぼ正常値まで改
善した。その結果を表５に示す。

【００２８】

【表５】

【００２９】臨床例４ ４５才の女性は、肝臓ガンで平成９年ｌ月３日より入
院、抗ガン剤と併用して本発明の生理活性物質を服用し
たところ、抗ガン剤による副作用も減退し、抗ガン剤効
果が顕著に現れた。抗ガン剤との併用も有効と思われ
る。

【００３０】臨床例５ ２２才の女性は、子宮ガンと診断された。妊娠中にガン
細胞が発見されたので、すぐに本発明の生理活性物質を
投与した。約３か月後、母子ともに出産することができ
た。

【００３１】臨床例６ ２０才の男性は脳腫瘍と診断され、言語に障害がみられ
る程重傷であったが、本発明の生理活性物質を投与した
ところ，４か月後の平成９年１月１０日には退院できる
までに回復した。

【００３２】臨床例７ その他、土佐清水病院では現在１００例ほどを臨床試験
中であるが、概して有効とみられる。詳細は６月頃発表
される。

【００３３】次にＮＫ活性についての臨床例を説明す
る。白血球の中にはＢ細胞、Ｔ細胞、マクロファージと
共に、ＮＫ細胞（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ ｃｅ
ｌｌ）が存在する。このＮＫ細胞はガン細胞を直接攻撃
することが知られている。この活性がＮＫ活性である。
ＮＫ活性は、試験管内でガン細胞を３時間で殺滅する割
合（％）で示し、例えばＮＫ活性が５５とは、１００個
あったガン細胞のうち５５個が３時間で殺滅されること
を意味する。数値が大きいほどＮＫ活性が高く、通常は
健康人で５５〜７５、ガン患者では２０〜４０程度であ
る。ＮＫ活性が５５以上であれば、ガン細胞の増殖をＮ
Ｋ細胞による攻撃が上回って、ガンが抑制あるいは縮小
する可能性が高い。従って、ＮＫ活性は５５以上を維持
する必要があるが、現代社会における生活習慣では５０
を下回ることは珍しくない。

【００３４】ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験（試験管内試験） Ａ，Ｂ，Ｃ３名の血液からＮＫ細胞を分離し、試験管内
で本発明の生理活性物質を作用させて１６時間放置した
後にＮＫ活性を測定した。その結果を、ＮＫ細胞に本発
明の生理活性物質を作用させないでＮＫ活性を測定した
場合との比較で図２に示した。なお、ＮＫ細胞濃度によ
る影響を避けるために、ＮＫ細胞とガン細胞の濃度は３
段階で試験し、平均値で示した。

【００３５】ｉｎ ｖｉｖｏ試験（生体内試験） Ｄ,Ｅ２名に本発明の生理活性物質を１日当たり約５０
ｍｇ、１週間に亘って飲用させたのち、血液からＮＫ細
胞を採取してＮＫ活性を測定した。ＮＫ活性の測定は、
上記と同様の方法で行った。その結果を、本発明の生理
活性物質を飲用する前のＮＫ活性の測定値と比較した場
合を図３に示した。

【００３６】

【発明の効果】以上説明したように、本発明に係る生理
活性物質及びその製造方法によれば、アガリクスブラゼ
イの菌糸体、子実体又は菌糸体を培養した後の廃液のい
ずれかを、ヘミセルラーゼによる酵素剤で分解処理する
ことで、β−グルカンを多量に含有する活性多糖の収率
を上げることができた。また、活性多糖の濃度が高めら
れることから、本発明の生理活性物質を体内に取り込ん
だときの消化吸収が飛躍的に向上し、また速効性もあっ
てガンその他の成人病に対して優れた免疫賦活効果を発
揮する。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明に係る生理活性物質の分解生成過程を示
す概念図である。

【図２】本発明における生理活性物質を使用した時の白
血球の増加を示す図である。

【図３】ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験におけるＮＫ活性の測定
図である。

【図４】ｉｎ ｖｉｖｏ試験におけるＮＫ活性の測定図
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ (72)発明者 森尾 恒久 東京都中央区京橋１−19−８ アサヒビ ール薬品株式会社内 (56)参考文献 特開 平５−268905（ＪＰ，Ａ) 特開 昭52−79014（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12P 19/00 - 19/64 A23L 1/28 A61K 35/84 A61K 31/715 - 31/716 ＢＩＯＳＩＳ／ＭＥＤＬＩＮＥ／ＷＰＩＤ Ｓ（ＳＴＮ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アガリクスブラゼイの菌糸体、子実体、
   又は菌糸体を培養した後の廃液のいずれかを、ヘミセル
   ラーゼによる酵素剤で分解処理することによって得られ
   るβ−グルカンを含有する生理活性物質。
2. 【請求項２】 アガリクスブラゼイの菌糸体、子実体、
   又は菌糸体を培養した後の廃液のいずれかにヘミセルラ
   ーゼによる酵素剤を作用させて分解処理することを特徴
   とするβ−グルカンを含有する生理活性物質の製造方
   法。