JP3292580B2 - 新規酒類酵母及びその用途 - Google Patents

新規酒類酵母及びその用途

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隆之 井上
直孝 黒瀬
正裕 内田
敏則 宮部
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宝ホールディングス株式会社
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Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、ミコナゾール及び/又
はエコナゾールに耐性を示す酒類酵母及び該酵母を用い
た香気の豊かな酒類の製造方法に関する。更に詳細に
は、本発明は、香気成分のうち酢酸イソアミルを多く生
成する酒類酵母を、多くの酒類酵母細胞の中から容易に
選択する方法に関し、更には選択した酒類酵母を用い
て、香気の豊かな酒類を製造する方法に関する。
【0002】
【従来の技術】酒類、特に清酒の製造において、フルー
ティな吟醸香成分の含量の高い清酒を製造するには、低
精白米を使用し、15℃前後で発酵させる普通酒仕込で
は困難である。従来、吟醸香に富んだ清酒を得るために
は高度精白米を使用し、低温発酵を行ってきた。しかし
ながら、この方法では時間とコストがかかる。現状で
は、低精白米の加圧蒸しやリパーゼ処理等が行われるよ
うになったが、低精白米の普通酒仕込から吟醸香に富ん
だ清酒を製造することは、困難であることより、酵母の
育種という観点からの技術開発に依存する方向が進めら
れ、これまでに、5′,5′,5′−トリフルオロ−
D,L−ロイシン耐性を用いる方法(特開昭62−66
69号)、4−アザ−DL−ロイシン耐性を用いる方法
(特開平1−257423号)、及び固形色素平板培地
上で異なる色調を示す株を選択する方法(特開平2−1
3368号)が公開されている。しかしながら、吟醸香
を構成する成分を、その他の成分と官能的にバランスを
保った形で高生成する酵母は少なく、そういった酵母の
育種が待たれていた。また、焼酎の製造においても、香
りの良い焼酎を製造するためには、同様の問題点を有し
ていた。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】香気成分の豊かな吟醸
酒の場合、原料コストが高く、また製造日数も長くかか
ることから、安定に大量の吟醸酒を製造することは困難
であった。また、低精白米を用いる普通酒仕込では、吟
醸香に富んだ清酒を製造することは更に困難であった。
【0004】本発明の目的は、前記の従来技術の問題点
を解決すべく、普通酒仕込で吟醸香の高い、あるいは新
規な吟醸香を有する酒類を製造することにあり、そのた
めの特に酢酸イソアミルの生成能の高い新規酒類酵母菌
を提供すること、及び該酵母を用いて低精白米から、安
定にかつ大量に、吟醸香の豊かな酒類を製造する方法を
提供することにある。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第1の発明は、ミコナゾール及び/又はエコナゾ
ールに耐性の酒類酵母であって、酢酸イソアミルの生成
能が、親株の1.2〜1.8倍、及びイソアミルアルコ
ールの生成能が、親株と同等であり、かつ、酢酸イソア
ミルのイソアミルアルコールに対する含量比が5%以上
であることを特徴とする酒類酵母変異株に関し、第2の
発明は、本発明の第1の発明の当該酵母を用いることを
特徴とする香気成分の豊かな酒類の製造方法に関し、第
3の発明は、酒類酵母を変異処理し、ミコナゾール及び
/又はエコナゾールを含む選択培地に生育する酒類酵母
を選択し、第1の発明の酒類酵母変異株を採取すること
を特徴とする、第1の発明の酒類酵母変異株の取得方法
に関する。
【0006】ミコナゾール、エコナゾールは酵母細胞膜
の構築や機能に重要な役割を果たすリン脂質、中でも不
飽和脂肪酸残基に特異的に作用し、膜障害を引き起こす
ことが知られている〔永井 進編、酵母研究における方
法論−基礎と応用、第234頁、1982年1月20
日、(株)学会出版センター発行〕。本発明者らは、こ
のようなミコナゾール、エコナゾールの膜リン脂質親和
性に着目し、ミコナゾール及び/又はエコナゾールに対
して耐性を示す酵母は、細胞膜のリン脂質の不飽和度を
含めて構造が変化し、その結果、酢酸エステルの生成量
や香気成分の膜透過性が変化するのではないかと考え
た。
【0007】本発明者らは、清酒用泡なし酵母、日本醸
造協会901号(以下、K−901と略述する)株の変
異処理株を、ミコナゾール及び/又はエコナゾールを含
む最少培地で生育させ、当該培地で生育できる株を分離
し、清酒小仕込試験を重ねて清酒の官能試験、機器分析
により、酢酸イソアミルの高生産株が選別できることを
見出し、本発明を完成した。
【0008】本発明における酢酸イソアミル高生産株と
は、リンゴ酸及び/又はクエン酸の高生産株をも含む
が、生成する酢酸イソアミルの基質であるイソアミルア
ルコールの生産量は親株と同等であることを特徴として
いる。
【0009】本件明細書に記載の酒類とは、清酒及び焼
酎の2つを総括した意味の用語である。それ故、本件明
細書において、酒類酵母とは、清酒酵母及び焼酎酵母を
総括した酵母を意味する。
【0010】ここに得られるミコナゾール及び/又はエ
コナゾール耐性株は、清酒酵母、焼酎酵母のいずれで
も、酢酸イソアミルを多く生成するので、これらの酵母
を用いて清酒、焼酎を製造すれば、香気の豊かな製品を
製造することができる。更に、これらの酵母を用いて芳
香性の香気液を製造することも可能である。
【0011】清酒、焼酎の製造方法は特に限定するもの
ではなく、一般的な方法に従って製造することができ
る。
【0012】以下にその分離方法の1例を示す。 (酵母の変異処理方法)K−901株の酢酸イソアミル
高生産株を取得するために、以下の工程で変異処理を行
った。K−901株をYPD液体培地(酵母エキス1w
/v%、ポリペプトン2w/v%、グルコース2w/v
%)5mlで30℃にて一夜振とう培養した。遠心分離
で菌体を集菌した後、0.2Mリン酸バッファー(pH
8.0)で洗浄した。洗浄菌体を4.6mlの0.2M
リン酸バッファー(pH8.0)で懸濁し、40w/v
%グルコース溶液を0.25ml添加してよくかくはん
した後、0.15mlの3w/v%エチルメタンスルホ
ネート(EMS)水溶液を添加し、30℃にて1時間穏
やかに振とうした。その0.2mlを9.8mlの6w
/v%チオ硫酸ナトリウム溶液に加えて、室温で10〜
15分維持し、そのうちの0.2mlを19.8mlの
滅菌水に添加し、0.1mlずつ、5μg/mlのミコ
ナゾール及び/又はエコナゾールを含有するSD培地
〔イーストニトロゲンベース(アミノ酸不含)0.67
w/v%、グルコース2w/v%〕の平板寒天培地10
枚に塗布し、30℃で3日間培養した。ミコナゾールを
含む選択培地で生育してきた株(MIC17)、及びエ
コナゾールを含む選択培地で生育してきた株(ECO1
1、ECO22)をミコナゾール及び/又はエコナゾー
ル耐性株として選択した。
【0013】(酢酸イソアミル生成の高い菌株の選択方
法)酒類酵母の酢酸イソアミル及びイソアミルアルコール生
成能は、下記の清酒小仕込試験によって容易に判定する
ことができるので、ミコナゾール及び/又はエコナゾー
ル耐性変異株を該小仕込試験に供することにより、本発
明の変異株を確定した。すなわち、 ミコナゾール及び/
又はエコナゾール耐性変異株(MIC17、ECO1
1、ECO22)について、表1に示す仕込配合で清酒
の小仕込試験を行った。
【0014】
【表1】
【0015】掛米は精米歩合75%(w/w)のα米
〔セブンライス工業(株)製〕を使用した。麹米は、精
米歩合72%(w/w)の白米を用いて製造した。酵母
は5ml中に1×109 個含むものを添加した。発酵温
度は15℃一定で行った。留後13日目の醪のろ液につ
いて、ガスクロマトグラフィーで酢酸イソアミルの定量
を行った結果、いずれのミコナゾール及び/又はエコナ
ゾール耐性変異株も親株(K−901株)の1.2〜
1.8倍の酢酸イソアミルを生成することを認めた。以
上の酢酸イソアミル高生産という形質は、当該変異株が
K−901株とは異なる新規酵母菌であることを示すも
のである。
【0016】上記のように、本発明による菌株{変異
株:MIC17、ECO11、ECO22}は、K−9
01株の変異株であるが、その菌学的性質を以下に示
す。 (菌学的性質) 1.形態学的性質 YPD培地で30℃、2日間培養した後、顕微鏡で観察
した。 a)形:卵円形 b)大きさ:長さ4.7〜7.9μm、幅3.8〜5.
5μm 2.胞子形成:有り 胞子形成用培地(酢酸カリウム2w/v%、グルコース
0.05w/v%、寒天2w/v%)で30℃、5日間
培養し、顕微鏡で観察した。 3.増殖の形態:出芽 4.生化学的観察 a)糖の発酵性 ウイッカーハムの炭素化合物同化試験用培地(ディフコ
社製)をダーラム管入り試験管に分注して、当該3菌株
を接種し、30℃で7日間培養して、その炭酸ガス発生
の有無を観察した。 グルコース (+) ガラクトース (+) スクロース (+) マルトース (+) ラクトース (−) メリビオース (−) ラフィノース(+) b)糖の資化性 ウイッカーハムの炭素化合物同化試験用培地(ディフコ
社製)を用いて、オキザノグラフ法により、30℃、1
4日後の生育を観察した。 グルコース (+) ガラクトース (+) スクロース (+) マルトース (+) ラクトース (−) c)硝酸塩の同化性:(−) 硝酸塩は硝酸カリウムとし、ウイッカーハムの炭素化合
物同化試験用培地(ディフコ社製)を用いて、オキザノ
グラフ法により生育を観察した。 d)TTC染色性:赤 e)β−アラニン培地、35℃での生育:(+) 5.高泡の形成 清酒の小仕込を行った結果、いずれの変異株も高泡の形
成は観察されなかった。 以上、形態学的、生化学的結果は、本発明酵母3菌株が
サッカロミセス・セレビシエに属する酵母菌であること
を示すものである。また、清酒の小仕込試験において、
高泡の形成が認められないことから、当該3株菌はK−
901株の変異株であることを示すものである。
【0017】かくして、本発明により、K−901株を
変異させた後、ミコナゾール及び/又はエコナゾールを
含む培地で選択することによって、酢酸イソアミルを高
生成する、普通酒仕込に使用可能な香気高生成酵母が提
供された。代表的な菌株であるMIC17株及びECO
11株は、それぞれ Saccharomyces cerevisiae MIC
17、 Saccharomyces cerevisiae ECO11と表示
し、工業技術院生命工学工業技術研究所に、FERM
P−14024、及びFERM P−14015として
寄託してある。本発明の清酒、焼酎の酒類の製造方法
は、これらの酒類酵母菌株を用いることを特徴とし、醸
造方法は特に限定するものではない。
【0018】
【実施例】次に、本発明菌を用いた酒類製造の具体例を
挙げて、本発明を更に具体的に説明するが、本発明はこ
れらの実施例に限定されない。
【0019】実施例1 ミコナゾール及び/又はエコナゾール耐性変異株3株に
ついて、表1に示す仕込配合で清酒の製造を行った。掛
米は精米歩合75%(w/w)のα米〔セブンライス工
業(株)製〕を使用した。麹は、精米歩合72%(w/
w)の白米を用いて製造した。酵母は5ml中に1×1
9 個含むものを添加した。発酵温度は15℃一定で行
った。対照株として親株のK−901株を加えた。上槽
液の分析結果を表2に示す。
【0020】
【表2】
【0021】官能検査は3点法(1:良、2:普通、
3:悪)で行い、パネラー10名の平均値で表した。
【0022】この結果、MIC17株とECO22株
は、清酒の香気成分の中で、特に吟醸香に大きく寄与す
るとされている酢酸イソアミルを親株の約1.6〜1.
8倍、またさわやかな酸味を呈するクエン酸又はリンゴ
酸を親株よりやや多く生産し、官能的にもバナナ様のフ
ルーティな香りとすっきりした味が強く認められた。
【0023】また、ECO11株は、酢酸イソアミルを
親株の1.2〜1.3倍生産し、またコハク酸を多く生
産しており、官能的にも華やかな香りとさわやかな酸味
が認められた。
【0024】実施例2 ミコナゾール及び/又はエコナゾール耐性変異株のう
ち、MIC17株とECO22株の2株について、表3
に示す仕込配合で焼酎の製造を行った。対照株として米
焼酎用によく用いられるK−701株を使用した。
【0025】
【表3】
【0026】掛米は精米歩合70%(w/w)の低品位
米を使用した。麹米は、精米歩合72%(w/w)の白
米を用いて製造した。酵母は5ml中に2×108 個含
むものを添加した。酵素剤はスピターゼM〔ナガセ生化
学工業(株)製〕を使用した。発酵温度は20℃一定で
行った。留後14日目の醪を減圧度−700mmHgで
減圧蒸留し、留出アルコール分20v/v%までの垂口
をアルコール25.0v/v%に割水したものを分析し
た。その結果を表4に示す。
【0027】
【表4】
【0028】官能検査は3点法(1:良、2:普通、
3:悪)で行い、パネラー10名の平均値で表した。
【0029】この結果、MIC17株及びECO22株
を用いて製造した米焼酎は、吟醸香である酢酸イソアミ
ル含量が対照のK−701株に比べて多く、官能的にも
バナナ様のフルーティな香が強く認められた新しいタイ
プの焼酎となった。
【0030】以上の結果は、MIC17株、ECO11
株、及びECO22株が、K−901株にない性質をも
つ、すなわち香気エステルを多く生成する新規な酵母菌
であることを示すものである。
【0031】
【発明の効果】本発明による酵母の選択法を用いて得ら
れるミコナゾール及び/又はエコナゾール耐性酵母を使
用することにより、高精白米、低温長期仕込の吟醸仕込
を行わなくとも、普通酒仕込あるいは低価格米による焼
酎仕込において酢酸イソアミルを主とする香気エステル
の豊かな、芳香性に富んだ清酒、焼酎の製造が、低コス
トで、しかも短期間で安定して行うことが可能となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 FI C12R 1:865) C12R 1:865) (72)発明者 宮部 敏則 滋賀県大津市瀬田3丁目4番1号 寳酒 造株式会社中央研究所内 (56)参考文献 特開 昭62−6669(JP,A) 特開 平3−7579(JP,A) 特開 平1−257423(JP,A) 特開 平4−91782(JP,A) 野白喜久雄,外4名,醸造の辞典,株 式会社朝倉書店,第1刷(1988年11月10 日),p.25−27 Chemotherapy(1994), Vol.40,No.4,p.245−251 (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C12N 1/00 - 1/38 C12G 1/00 - 3/14 C12C 11/02 JICSTファイル(JOIS) BIOSIS/MEDLINE/WPID S(STN)

Claims (3)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 ミコナゾール及び/又はエコナゾールに
    耐性の酒類酵母であって、酢酸イソアミルの生成能が、
    親株の1.2〜1.8倍、及びイソアミルアルコールの
    生成能が、親株と同等であり、かつ、酢酸イソアミルの
    イソアミルアルコールに対する含量比が5%以上である
    ことを特徴とする酒類酵母変異株。
  2. 【請求項2】 請求項1に記載の酒類酵母を用いること
    を特徴とする、酒類の製造方法。
  3. 【請求項3】 酒類酵母細胞を変異処理し、ミコナゾー
    ル及び/又はエコナゾールを含む選択培地に生育する酵
    母を選択し、請求項1記載の酒類酵母変異株を採取する
    ことを特徴とする、請求項1記載の酒類酵母変異株の取
    得方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Chemotherapy(1994),Vol.40,No.4,p.245−251
野白喜久雄,外4名,醸造の辞典,株式会社朝倉書店,第1刷(1988年11月10日),p.25−27

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