JP3157631B2 - 1-alkynyl-2-nitroimidazole derivative and hypoxic cell radiosensitizer containing the same - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は癌放射線治療において放
射線に対して抵抗を示す低酸素性細胞を再酸素化し放射
線治療の奏効率を向上させ、かつ癌の再発を防止する低
酸素性細胞放射線増感剤に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to hypoxic cell radiation which reoxygenates hypoxic cells exhibiting resistance to radiation in cancer radiotherapy to improve the response rate of radiotherapy and prevent cancer recurrence. It relates to a sensitizer.

【０００２】[0002]

【従来の技術】癌組織内にある低酸素性細胞は、癌放射
線治療において放射線に対して抵抗性を示し、治療の奏
効率を下げる大きな要因であるとともに、癌再発の重要
な原因である。これに対し、高圧酸素療法などにより低
酸素細胞の再酸素化が図られてきたが、充分に再酸素化
できなかった。2. Description of the Related Art Hypoxic cells in cancer tissues are resistant to radiation in cancer radiotherapy, are a major factor in reducing the response rate of therapy, and are an important cause of cancer recurrence. On the other hand, reoxygenation of hypoxic cells has been attempted by hyperbaric oxygen therapy or the like, but reoxygenation could not be sufficiently performed.

【０００３】近年、電子親和性の高い２−ニトロイミダ
ゾール誘導体に低酸素細胞の放射線に対する感受性を増
大させる作用（低酸素性細胞放射線増感作用）があるこ
とが見出された（特開平１−１１０６７５号公報）。そ
のうち、マイソナイダゾール〔１−（２−ニトロ−１−
イミダゾリル）−３−メトキシ−２−プロパノール〕
は、特にその作用が強く、広く臨床試験が行なわれた
が、蓄積による神経毒性の発現により開発が中断され
た。In recent years, it has been found that a 2-nitroimidazole derivative having a high electron affinity has an effect of increasing the sensitivity of hypoxic cells to radiation (hypoxic cell radiosensitizing effect) (Japanese Patent Laid-Open Publication No. Hei. No. 110675). Among them, mysonidazole [1- (2-nitro-1-
Imidazolyl) -3-methoxy-2-propanol]
Has a particularly strong effect and has been widely studied in clinical trials, but its development has been suspended due to the development of neurotoxicity due to accumulation.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、蓄積性がなく、安全性の高い、優れた低酸素性細胞
放射線増感剤を提供することにある。SUMMARY OF THE INVENTION Accordingly, an object of the present invention is to provide an excellent hypoxic cell radiosensitizer having no accumulation property and high safety.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは数
多くの２−ニトロイミダゾール誘導体を合成し、低酸素
性細胞放射線増感作用、毒性及び代謝速度等を指標とし
てスクリーニングしてきたところ、脂肪族三重結合を有
する２−ニトロイミダゾール誘導体が、代謝率が高いた
め蓄積性がなく、毒性も低く、かつ低酸素性細胞放射線
増感作用が強く、さらに低酸素性細胞中で放射線に対し
て防護的に働くとされている非蛋白性チオール類を著し
く抑制する作用を併せ持つことを見出し、本発明を完成
するに至った。The present inventors have synthesized a large number of 2-nitroimidazole derivatives and screened them using hypoxic cell radiosensitization, toxicity, metabolic rate and the like as indices. 2-nitroimidazole derivative having an aromatic triple bond has high metabolic rate, no accumulation, low toxicity, strong hypoxic cell radiosensitizing effect, and protection against radiation in hypoxic cells The present inventors have found that they also have an action of remarkably suppressing non-protein thiols which are considered to work in an effective manner, and have completed the present invention.

【０００６】すなわち、本発明は次の一般式（１）That is, the present invention provides the following general formula (1)

【０００７】[0007]

【化２】 Embedded image

【０００８】〔式中、Ｒは水素原子、アシル基、アルキ
ル基、アルケニル基、アルキニル基、アラルキル基又は
アリール基を示す〕で表わされる１−アルキニル−２−
ニトロイミダゾール誘導体を提供するものである。Wherein R represents a hydrogen atom, an acyl group, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aralkyl group or an aryl group.
The present invention provides a nitroimidazole derivative.

【０００９】また、本発明は当該１−アルキニル−２−
ニトロイミダゾール誘導体（１）を有効成分とする低酸
素性細胞放射線増感剤を提供するものである。The present invention also relates to the 1-alkynyl-2-
An object of the present invention is to provide a hypoxic cell radiosensitizer containing a nitroimidazole derivative (1) as an active ingredient.

【００１０】本発明化合物を表わす一般式（１）中、Ｒ
で示されるアシル基としては芳香族アシル基、飽和又は
不飽和の脂肪族アシル基のいずれも挙げられるが、脂肪
族アシル基、さらに炭素数１〜１８の直鎖又は分岐鎖の
飽和脂肪族アシル基、特に炭素数１〜８の飽和脂肪族ア
シル基が好ましい。その具体例としては、ホルミル基、
アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、バレリル
基、カプリル基等が挙げられる。アルキル基としては炭
素数１〜８の直鎖又は分岐鎖のアルキル基が挙げられ、
その具体例としてはメチル基、エチル基、ｎ−プロピル
基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔ
−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基、ｎ−オ
クチル基等が挙げられる。アルケニル基としては、炭素
数２〜８の直鎖又は分岐鎖のアルケニル基が挙げられ、
その具体例としてはビニル基、アリル基、ブテニル基等
が挙げられる。アルキニル基としては炭素数２〜８の直
鎖又は分岐鎖のアルキニル基が挙げられ、その具体例と
してはプロパルギル基等が挙げられる。アラルキル基と
してはベンジル基、フェネチル基等が挙げられ、アリー
ル基としてはフェニル基、トリル基、ナフチル基等が挙
げられる。In the general formula (1) representing the compound of the present invention,
Examples of the acyl group represented by an aromatic acyl group, a saturated or unsaturated aliphatic acyl group, include an aliphatic acyl group, and a linear or branched saturated aliphatic acyl having 1 to 18 carbon atoms. Groups, especially saturated aliphatic acyl groups having 1 to 8 carbon atoms, are preferred. Specific examples include a formyl group,
Examples include an acetyl group, a propionyl group, a butyryl group, a valeryl group, and a capryl group. Examples of the alkyl group include a linear or branched alkyl group having 1 to 8 carbon atoms,
Specific examples include methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, t
-Butyl group, n-pentyl group, n-hexyl group, n-octyl group and the like. Examples of the alkenyl group include a linear or branched alkenyl group having 2 to 8 carbon atoms,
Specific examples thereof include a vinyl group, an allyl group, and a butenyl group. Examples of the alkynyl group include linear or branched alkynyl groups having 2 to 8 carbon atoms, and specific examples thereof include a propargyl group. Examples of the aralkyl group include a benzyl group and a phenethyl group, and examples of the aryl group include a phenyl group, a tolyl group, and a naphthyl group.

【００１１】本発明化合物（１）の代表例としては以下
の化合物を挙げることができる。１−（４−アセトキシ
ブタン−２−イン−１−イル）−２−ニトロイミダゾー
ル、１−（４−ヒドロキシブタン−２−イン−１−イ
ル）−２−ニトロイミダゾール、１−（４−アリルオキ
シブタン−２−イン−１−イル）−２−ニトロイミダゾ
ール、１−（４−メトキシブタン−２−イン−１−イ
ル）−２−ニトロイミダゾール、１−（４−フェノキシ
ブタン−２−イン−１−イル）−２−ニトロイミダゾー
ル、２−ニトロ−１−（４−プロパノイルオキシブタン
−２−イン−１−イル）イミダゾール、２−ニトロ−１
−（４−プロパルギルオキシブタン−２−イン−１−イ
ル）イミダゾール、１−（４−ベンジルオキシ−２−イ
ン−１−イル）−２−ニトロイミダゾール。Representative examples of the compound (1) of the present invention include the following compounds. 1- (4-acetoxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole, 1- (4-hydroxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole, 1- (4-allyl Oxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole, 1- (4-methoxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole, 1- (4-phenoxybutan-2-yne) -1-yl) -2-nitroimidazole, 2-nitro-1- (4-propanoyloxybutan-2-yn-1-yl) imidazole, 2-nitro-1
-(4-propargyloxybutan-2-yn-1-yl) imidazole, 1- (4-benzyloxy-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole.

【００１２】本発明化合物（１）は、例えば次の反応式
に従って製造される。The compound (1) of the present invention is produced, for example, according to the following reaction formula.

【００１３】[0013]

【化３】 Embedded image

【００１４】〔式中、Ｒ¹ はアシル基、アルキル基、ア
ルケニル基、アルキニル基、アラルキル基又はアリール
基を示し、Ｘはハロゲン原子又はアルコキシカルボニル
オキシ基を示す〕[In the formula, R ¹ represents an acyl group, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aralkyl group or an aryl group, and X represents a halogen atom or an alkoxycarbonyloxy group.]

【００１５】すなわち、２−ブタン−１，４−ジオール
（２）に酸無水物、酸ハライド、ハロゲン化物等（３）
を反応させてモノアルコール体（４）を得、これに塩化
チオニルを反応させてクロル体（５）となし、当該クロ
ル体に２−ニトロイミダゾールを反応させることにより
化合物（１Ａ）が製造される。That is, 2-butane-1,4-diol (2) is added to acid anhydride, acid halide, halide, etc. (3)
To give the monoalcohol compound (4), which is reacted with thionyl chloride to form the chlorinated compound (5), and the chlorinated compound is reacted with 2-nitroimidazole to produce the compound (1A). .

【００１６】モノアルコール体（４）を得る反応は、２
−ブタン−１，４−ジオールに酸無水物、酸ハライド等
のアシル化剤を反応させる場合には通常のエステル合成
法に従って行なえばよい。また、２−ブタン−１，４−
ジオールにアルキルハライド等のハロゲン化物を反応さ
せる場合には、水素化ナトリウム等の強塩基の存在下に
行なう。また、モノアルコール体（４）と塩化チオニル
を反応させるには、通常氷冷下から室温下で数分〜数時
間攪拌すればよい。また、クロル体（５）と２−ニトロ
イミダゾールの反応は、トリエチルアミン、等の塩基の
存在下、氷冷下から還流下で１〜２０時間攪拌すればよ
い。The reaction for obtaining the monoalcohol compound (4) is carried out by 2
In the case of reacting -butane-1,4-diol with an acylating agent such as an acid anhydride or an acid halide, the reaction may be carried out according to a usual ester synthesis method. Also, 2-butane-1,4-
When reacting a diol with a halide such as an alkyl halide, the reaction is carried out in the presence of a strong base such as sodium hydride. In addition, in order to react the monoalcohol compound (4) with thionyl chloride, the mixture may be usually stirred under ice cooling to room temperature for several minutes to several hours. The reaction between the chlorinated compound (5) and 2-nitroimidazole may be carried out under ice-cooling to reflux for 1 to 20 hours in the presence of a base such as triethylamine.

【００１７】また、Ｒが水素原子である本発明化合物
（１）は、Ｒ¹ がアシル基である化合物（１Ａ）を常
法、例えばメタノール性水酸化カリウム等を用いて脱ア
シル化すればよい。The compound (1) of the present invention in which R is a hydrogen atom may be obtained by deacylating the compound (1A) in which R ¹ is an acyl group by a conventional method, for example, using methanolic potassium hydroxide or the like. .

【００１８】上記反応は、すべての工程を連続して行な
うことも、またそれぞれ中間体を単離しつつ行なっても
よい。また、反応混合物からの目的物の単離は、シリカ
ゲルカラムクロマトグラフィー、再結晶などにより容易
に行なうことができる。In the above reaction, all the steps may be carried out continuously or while each intermediate is isolated. Further, isolation of the target compound from the reaction mixture can be easily performed by silica gel column chromatography, recrystallization, or the like.

【００１９】かくして得られる本発明化合物（１）は、
後記実施例に示すように優れた低酸素性細胞放射線増感
作用を有し、かつ毒性が弱く、代謝速度が高く蓄積性が
なく安全性も高いため低酸素性放射線増感剤として有用
である。The compound (1) of the present invention thus obtained is
As shown in Examples below, it has an excellent hypoxic cell radiosensitizing effect, and has low toxicity, high metabolic rate, no accumulation and high safety, so it is useful as a hypoxic radiosensitizer. .

【００２０】本発明化合物（１）を低酸素性細胞放射線
増感剤として使用する場合、その投与量は患者の年令、
体重、性別、投与方法、体調、症状等により異なるが成
人１人１日あたり、経口投与の場合３０mg〜３０００m
g、非経口投与の場合１０mg〜２０００mgが適当であ
る。When the compound (1) of the present invention is used as a hypoxic cell radiosensitizer, the dose of the compound is determined by the age of the patient,
Depending on body weight, gender, administration method, physical condition, symptoms, etc., 30 mg-3000 m per adult per day for oral administration
g, 10 mg to 2000 mg is suitable for parenteral administration.

【００２１】本発明化合物（１）は通常の方法で錠剤、
顆粒剤、散剤、カプセル剤、懸濁剤、注射剤、坐剤等の
種々の剤形とすることができる。固形製剤を製造するに
は、化合物（１）に賦形剤、更に必要に応じて結合剤、
崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、増量剤、被覆
剤、糖衣剤などを加えた後、常法にのっとり錠剤、顆粒
剤、散剤、カプセル剤、坐剤とすることが好ましい。注
射剤を調製する場合は化合物（１）を注射用生理食塩水
などの水性担体にあらかじめ溶解分散、乳化等するか、
又は、注射用の粉末にして用事に溶解等すればよい。注
射剤の投与方法としては静脈内投与、動脈内投与、門脈
内投与、腹腔内投与、皮下投与、病巣内直接投与等が挙
げられる。The compound (1) of the present invention can be prepared in the form of tablets,
Various dosage forms such as granules, powders, capsules, suspensions, injections, suppositories and the like can be made. To produce a solid preparation, compound (1) is mixed with an excipient and, if necessary, a binder,
After adding a disintegrating agent, a lubricant, a coloring agent, a flavoring agent, a bulking agent, a coating agent, a sugar coating, and the like, it is preferable to prepare tablets, granules, powders, capsules, and suppositories in a usual manner. When preparing an injection, the compound (1) may be previously dissolved, dispersed, emulsified, or the like in an aqueous carrier such as physiological saline for injection,
Alternatively, it may be made into powder for injection and dissolved for business purposes. Examples of the method for administering the injection include intravenous administration, intraarterial administration, intraportal administration, intraperitoneal administration, subcutaneous administration, and direct intralesional administration.

【００２２】[0022]

【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではな
い。Next, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

【００２３】実施例１ １−（４−アセトキシブタン−２−イン−１−イル）−
２−ニトロイミダゾール〔化合物１〕の合成：２−ブタ
ン−１，４−ジオール８．６ｇを５０mlのピリジンに溶
解し、氷冷下１０．０ｇの無水酢酸を滴下し、室温で３
時間攪拌した。反応物を減圧濃縮後、シリカゲルカラム
クロマトグラフィーで（溶出溶媒、ベンゼン：酢酸エチ
ル＝３：２）精製して８．１ｇの４−アセトキシ−２−
ブチン−１−オールを得た。これを３００mlのクロロホ
ルムに溶解し、氷冷下塩化チオニル１２．０ｇを加え、
氷冷下３時間攪拌し、減圧濃縮した。これを５０mlのジ
メチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解し、５．６ｇの２
−ニトロイミダゾールと１０mlのトリエチルアミンを５
０mlのＤＭＦに溶した中へ加え、１２時間攪拌した。反
応物を減圧濃縮後クロロホルム１００mlで抽出し、炭酸
水素ナトリウム飽和水溶液５０mlで３回洗い、飽和塩化
ナトリウム液５０mlで１回洗い、無水硫酸ナトリウムで
乾燥後減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（溶出溶媒、ベンゼン：酢酸エチル＝３：７）で精製
し、０．８７ｇの１−（４−アセトキシブタン−２−イ
ン−１−イル）−２−ニトロイミダゾールを粘稠な液体
として得た。Example 1 1- (4-acetoxybutan-2-yn-1-yl)-
Synthesis of 2-nitroimidazole [compound 1]: 8.6 g of 2-butane-1,4-diol was dissolved in 50 ml of pyridine, and 10.0 g of acetic anhydride was added dropwise under ice-cooling.
Stirred for hours. The reaction product was concentrated under reduced pressure, and purified by silica gel column chromatography (elution solvent, benzene: ethyl acetate = 3: 2) to give 8.1 g of 4-acetoxy-2-acetate.
Butin-1-ol was obtained. This was dissolved in 300 ml of chloroform, and 12.0 g of thionyl chloride was added under ice cooling.
The mixture was stirred for 3 hours under ice cooling and concentrated under reduced pressure. This was dissolved in 50 ml of dimethylformamide (DMF), and 5.6 g of 2
Nitroimidazole and 10 ml of triethylamine in 5
It was added to a solution dissolved in 0 ml of DMF and stirred for 12 hours. The reaction mixture was concentrated under reduced pressure, extracted with 100 ml of chloroform, washed three times with 50 ml of a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, washed once with 50 ml of a saturated sodium chloride solution, dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure, and silica gel column chromatography (elution solvent). Benzene: ethyl acetate = 3: 7) to obtain 0.87 g of 1- (4-acetoxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole as a viscous liquid.

【００２４】 NMR δppm(CDCl₃)：2.18(s,3H), 4.36-4.43(m,2H), 6.2
0-6.26(m,1H), 7.13(s,1H),7.30(s,1H), 7.88-7.92(m,1
H) Mass：224(M+H)NMR δ ppm (CDCl ₃ ): 2.18 (s, 3H), 4.36-4.43 (m, 2H), 6.2
0-6.26 (m, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.88-7.92 (m, 1
H) Mass: 224 (M + H)

【００２５】実施例２ １−（４−ヒドロキシブタン−２−イン−１−イル）−
２−ニトロイミダゾール〔化合物２〕の合成：０．７ｇ
の１−（４−アセトキシブタン−２−イン−１−イル）
−２−ニトロイミダゾールを１００mlのメタノールに溶
解し、２０mlのトリエチルアミンと２０mlの水を加え７
２時間室温で攪拌した。反応物を減圧濃縮したのち、分
取クロマトグラフィー（カラム：ＯＤＳ，溶出溶媒：１
０％アセトニトリル水溶液）で精製した。粗結晶をイソ
プロピルアルコールから再結晶し０．２６ｇの１−（４
−ヒドロキシブタン−２−イン−１−イル）−２−ニト
ロイミダゾールを得た。Example 2 1- (4-Hydroxybutan-2-yn-1-yl)-
Synthesis of 2-nitroimidazole [compound 2]: 0.7 g
1- (4-acetoxybutan-2-yn-1-yl)
Dissolve 2-nitroimidazole in 100 ml of methanol, add 20 ml of triethylamine and 20 ml of water and add
Stirred at room temperature for 2 hours. After concentrating the reaction product under reduced pressure, preparative chromatography (column: ODS, elution solvent: 1)
(0% acetonitrile aqueous solution). The crude crystals were recrystallized from isopropyl alcohol to obtain 0.26 g of 1- (4
-Hydroxybutan-2-yn-1-yl) -2-nitroimidazole was obtained.

【００２６】 NMR δppm(CDCl₃)：1.51(s,1H), 4.34-4.39(m,2H), 6.2
0-6.26(m,1H), 7.12(s,1H),7.29(s,1H), 7.88-7.92(m,1
H) Mass：182(M+H) 元素分析：H 3.96％, C 46.14％, N 22.95％NMR δ ppm (CDCl ₃ ): 1.51 (s, 1H), 4.34-4.39 (m, 2H), 6.2
0-6.26 (m, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.88-7.92 (m, 1
H) Mass: 182 (M + H) Elemental analysis: H 3.96%, C 46.14%, N 22.95%

【００２７】実施例３ 急性毒性：ＩＣＲマウス（♂，５週令，体重２０〜２５
ｇ）を用い急性毒性試験を行なった。被験物質は０．１
％ＣＭＣに溶解もしくは分散させ、１００mg／mlの濃度
に調整した。投与経路は腹腔内投与とした。観察は投与
後、１４日まで行なった。結果を表１に示す。Example 3 Acute toxicity: ICR mouse (♂, 5 weeks old, body weight 20-25)
g) was used to conduct an acute toxicity test. Test substance is 0.1
% CMC was dissolved or dispersed, and adjusted to a concentration of 100 mg / ml. The administration route was intraperitoneal. Observations were made up to 14 days after administration. Table 1 shows the results.

【００２８】[0028]

【表１】 [Table 1]

【００２９】実施例４ 代謝試験：ＩＣＲマウス（♂，５週令，体重２０〜２５
ｇ）を用いて代謝速度についてマイソナイダゾールとの
比較を行なった。２００mg／kgの割合で腹腔内投与し、
８時間後採血及び脳の摘出を行ない、血清中及び脳中の
化合物の残存量を測定した。測定はＨＰＬＣを用いて行
なった。ＨＰＬＣ条件は（カラム：ＯＤＳ、４．６×１
５０mm，カラム温度：４０℃，注入量：１０μｌ，流
速：１ml／min，溶出溶媒：１０％アセトニトリル水溶
液，検知：紫外３２０nm）で、絶対検量線法により定量
した。血清は４倍量のメタノールを加え抽出、脱蛋白
後、上清をサンプルとし、脳は１０倍量のメタノール中
でホモジナイズ後上清をサンプルとした。残存量の測定
結果を表２に示す。表２から明らかに化合物２は、マイ
ソナイダゾールよりも血清中残存量、脳中残存量ともに
著しく低いことがわかった。従って本発明化合物は、神
経組織への蓄積が少なく、神経毒性発現がないことがわ
かる。Example 4 Metabolism test: ICR mouse (♂, 5 weeks old, body weight 20 to 25)
g) was used to compare the metabolic rate with mysonidazole. Administered intraperitoneally at a rate of 200 mg / kg,
Eight hours later, blood was collected and the brain was removed, and the remaining amount of the compound in serum and brain was measured. The measurement was performed using HPLC. HPLC conditions were (column: ODS, 4.6 × 1
(50 mm, column temperature: 40 ° C., injection volume: 10 μl, flow rate: 1 ml / min, elution solvent: 10% acetonitrile aqueous solution, detection: ultraviolet 320 nm), and quantification was performed by the absolute calibration curve method. Serum was extracted with 4 volumes of methanol and extracted and deproteinized, and the supernatant was used as a sample. Brain was homogenized in 10 volumes of methanol and the supernatant was used as a sample. Table 2 shows the measurement results of the remaining amount. It is apparent from Table 2 that Compound 2 has significantly lower residual amounts in serum and brain than mysonidazole. Therefore, it can be seen that the compound of the present invention has little accumulation in nerve tissue and has no neurotoxicity.

【００３０】[0030]

【表２】 [Table 2]

【００３１】実施例５ 低酸素性細胞放射線増感効果：チャイニーズ・ハムスタ
ーＶ７９肺線維芽細胞を腫瘍細胞として用い放射線増感
効果を検討した。すなわち、最終濃度が１mMになる様に
被験化合物を加えた。４×１０⁵個／mlの濃度のＶ７９
細胞のＭＥＭ懸濁液を５％ＣＯ₂含有のＮ₂ガス気流下、
室温で１時間軽く振とうして低酸素性細胞懸濁液を得
た。これに対してγ線照射を行ない、コロニー形成法に
より、放射線量−生存率曲線を求めた。この放射線量−
生存率曲線より被験化合物無添加時の低酸素性細胞の生
存率を１％下げさせる放射線量を被験化合物添加時の低
酸素性細胞の生存率を１％下げさせる放射線量で除した
値を求めて増感率とした。その結果、表３に示すように
本発明化合物はマイソナイダゾールに比べて著しく高い
増感率を示した。Example 5 Hypoxic Cell Radiosensitizing Effect: The radiosensitizing effect was examined using Chinese hamster V79 lung fibroblasts as tumor cells. That is, the test compound was added so that the final concentration was 1 mM. V79 at a concentration of 4 × 10 ⁵ cells / ml
The MEM suspension of cells was placed under a stream of N ₂ gas containing 5% CO ₂ ,
Shake gently for 1 hour at room temperature to obtain a hypoxic cell suspension. This was irradiated with γ rays, and a radiation dose-survival rate curve was determined by a colony forming method. This radiation dose-
From the survival rate curve, a value obtained by dividing the radiation dose that reduces the viability of hypoxic cells by 1% when the test compound is not added by the radiation dose that reduces the viability of hypoxic cells by 1% when the test compound is added is determined. Sensitization rate. As a result, as shown in Table 3, the compound of the present invention showed a significantly higher sensitization rate than mysonidazole.

【００３２】[0032]

【表３】 [Table 3]

【００３３】実施例６ 非蛋白チオール（ＮＰＳＨ）に対する作用：すなわちＥ
ＭＴ−６細胞（２．８×１０⁷〜５．５×１０⁷）に５mM
の被験化合物を溶解したＨａｎｋｓ液を加え、細胞浮遊
液を作成した。これを５％ＣＯ₂含有窒素気流中、３７
℃９０分間培養した後、被験化合物の溶けているＨａｎ
ｋｓ液をとり除き、氷冷蒸留水２ml、氷冷１５％−スル
ホサリチル酸水溶液１mlを加え、９０分間氷水中に放置
した後遠心分離し、上澄をメンブランフィルター（０．
２２μｍ）でろ過し、検液とした。検液０．８mlを取
り、０．４Ｍ−トリス緩衝液（pH８．９）１．６ml、
２．５mM−ジチオ−ビス（２−ニトロ安息香酸）メタノ
ール溶液（用事調整）０．１mlを加えてよく攪拌した
後、４１２nmで吸光度を測定し細胞内ＮＰＳＨを測定し
コントロールとの比（％）でＮＰＳＨ低減効果を検討し
た。その結果、表４に示すように本発明化合物はマイソ
ナイダゾールに比べて著しく強いＮＰＳＨ低減作用を示
した。Example 6 Action on non-protein thiol (NPSH):
5 mM in MT-6 cells (2.8 × 10 ^{7 to} 5.5 × 10 ⁷ )
A Hanks solution in which the test compound was dissolved was added to prepare a cell suspension. In a nitrogen stream containing 5% CO ₂ ,
After culturing at 90 ° C. for 90 minutes, Han in which the test compound is dissolved
The ks solution was removed, 2 ml of ice-cold distilled water and 1 ml of ice-cold 15% -sulfosalicylic acid aqueous solution were added, and the mixture was allowed to stand in ice water for 90 minutes, followed by centrifugation.
(22 μm) to give a test solution. Take 0.8 ml of the test solution, 1.6 ml of 0.4 M Tris buffer (pH 8.9),
After 0.1 ml of a 2.5 mM methanol solution of dithio-bis (2-nitrobenzoic acid) (prepared for use) was added and stirred well, absorbance was measured at 412 nm to measure intracellular NPSH, and the ratio to the control (%). Examined the effect of reducing NPSH. As a result, as shown in Table 4, the compound of the present invention showed a remarkably strong NPSH reduction effect as compared with mysonidazole.

【００３４】[0034]

【表４】 [Table 4]

【００３５】[0035]

【発明の効果】本発明化合物（１）は低酸素性細胞に対
して優れた放射線増感作用を示し、かつ放射線に対して
防護作用を持つ細胞内非蛋白チオールを著しく低減化
し、さらに加えてマイソナイダゾールに比して蓄積性も
非常に低く、蓄積神経毒性も低いため、放射線治療にお
いて放射性に対して強い抵抗を示す癌の治療に有用であ
るので数１０万人にのぼる癌患者の放射線治療に極めて
有意義である。The compound (1) of the present invention has an excellent radiosensitizing effect on hypoxic cells and significantly reduces intracellular non-protein thiols having a protective effect against radiation. It has very low accumulation and low neurotoxicity compared to mysonidazole, so it is useful in the treatment of cancers that show strong resistance to radioactivity in radiation therapy. Very meaningful for treatment.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平６−16647（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−193979（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−12763（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−110675（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07D 233/91 A61K 31/4164 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (56) References JP-A-6-16647 (JP, A) JP-A-2-193979 (JP, A) JP-A-62-12763 (JP, A) JP-A-61-1647 110675 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁷ , DB name) C07D 233/91 A61K 31/4164 CA (STN) REGISTRY (STN)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 〔式中、Ｒは水素原子、アシル基、アルキル基、アルケ
ニル基、アルキニル基、アラルキル基又はアリール基を
示す〕で表わされる１−アルキニル−２−ニトロイミダ
ゾール誘導体。1. A compound of the general formula (1) [In the formula, R represents a hydrogen atom, an acyl group, an alkyl group, an alkenyl group, an alkynyl group, an aralkyl group or an aryl group.] A 1-alkynyl-2-nitroimidazole derivative represented by the following formula: 【請求項２】 請求項１記載の１−アルキニル−２−ニ
トロイミダゾール誘導体を有効成分とする低酸素性細胞
放射線増感剤。2. A hypoxic cell radiosensitizer comprising the 1-alkynyl-2-nitroimidazole derivative according to claim 1 as an active ingredient.