JP3118175B2 - ５−アミノレブリン酸生産菌及びその選抜方法 - Google Patents
５−アミノレブリン酸生産菌及びその選抜方法Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、除草剤、殺虫剤、
植物成長調節剤として有用な５−アミノレブリン酸を高
濃度で蓄積可能な微生物及びその選抜方法に関するもの
である。
植物成長調節剤として有用な５−アミノレブリン酸を高
濃度で蓄積可能な微生物及びその選抜方法に関するもの
である。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】５−ア
ミノレブリン酸は、広く生物圏に存在し、生体中でテト
ラピロール化合物の前駆体として重要な役割を果たして
いる化合物である。さらに、５−アミノレブリン酸は、
除草作用、殺虫作用、植物成長調節作用、植物の光合成
増強作用等を示し、しかも人畜に対して毒性を示さず、
分解性が高いため環境への残留性もないことから除草
剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植物の光合成増強剤とし
て有用であることが報告されている（特開昭６１−５０
２８１４号、特開平２−１３８２０１号公報等）。
ミノレブリン酸は、広く生物圏に存在し、生体中でテト
ラピロール化合物の前駆体として重要な役割を果たして
いる化合物である。さらに、５−アミノレブリン酸は、
除草作用、殺虫作用、植物成長調節作用、植物の光合成
増強作用等を示し、しかも人畜に対して毒性を示さず、
分解性が高いため環境への残留性もないことから除草
剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植物の光合成増強剤とし
て有用であることが報告されている（特開昭６１−５０
２８１４号、特開平２−１３８２０１号公報等）。
【０００３】しかし、５−アミノレブリン酸は、生産コ
ストが高いため、除草剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植
物の光合成増強剤として使用するには実用性に欠ける
（CHEMICAL WEEK/OCTOBER, 29,1984）。このような現状
において、多くの化学合成法が提案されている（例え
ば、特開平２−７６８４１号公報）が、未だ十分実用的
とは言えない。一方、ロドバクテリウム属、プロピオニ
バクテリウム属、メタノバクテリウム属、メタノサルシ
ナ属等に属する微生物を用いた５−アミノレブリン酸の
製造方法が提案されている。このうち、プロピオニバク
テリウム属、メタノバクテリウム属、メタノサルシナ属
に属する微生物を用いる方法では、生産性が非常に低
く、満足できるものではない（特開平５−１８４３７６
号公報）が、紅色非硫黄細菌に属するロドバクテリウム
属が高い５−アミノレブリン酸蓄積を示すことが知られ
ている。
ストが高いため、除草剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植
物の光合成増強剤として使用するには実用性に欠ける
（CHEMICAL WEEK/OCTOBER, 29,1984）。このような現状
において、多くの化学合成法が提案されている（例え
ば、特開平２−７６８４１号公報）が、未だ十分実用的
とは言えない。一方、ロドバクテリウム属、プロピオニ
バクテリウム属、メタノバクテリウム属、メタノサルシ
ナ属等に属する微生物を用いた５−アミノレブリン酸の
製造方法が提案されている。このうち、プロピオニバク
テリウム属、メタノバクテリウム属、メタノサルシナ属
に属する微生物を用いる方法では、生産性が非常に低
く、満足できるものではない（特開平５−１８４３７６
号公報）が、紅色非硫黄細菌に属するロドバクテリウム
属が高い５−アミノレブリン酸蓄積を示すことが知られ
ている。
【０００４】しかしながら、ロドバクテリウム属を用い
た場合、光照射下、炭素源及び窒素源等を含有する従属
栄養下で増殖させることが５−アミノレブリン酸や光合
成色素の生産性向上の点から好ましいが、光を照射する
とコストアップとなり、また、安価なグルコース等の糖
類を用いると極端に生産性が低下する等の問題点があ
る。そこで、さらに５−アミノレブリン酸生産性の高い
微生物が望まれている。
た場合、光照射下、炭素源及び窒素源等を含有する従属
栄養下で増殖させることが５−アミノレブリン酸や光合
成色素の生産性向上の点から好ましいが、光を照射する
とコストアップとなり、また、安価なグルコース等の糖
類を用いると極端に生産性が低下する等の問題点があ
る。そこで、さらに５−アミノレブリン酸生産性の高い
微生物が望まれている。
【０００５】また、この目的のために、菌株をＮＴＧ
（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン）処理等により変異させたある種の変異株が、光照射
なしで５−アミノレブリン酸を生産することが知られて
いるが、これらの変異株では変異による副次的な効果に
より、菌体の生育度が減少する場合があり、５−ＡＬＡ
の生産速度を高めるための改善が望まれている。
（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン）処理等により変異させたある種の変異株が、光照射
なしで５−アミノレブリン酸を生産することが知られて
いるが、これらの変異株では変異による副次的な効果に
より、菌体の生育度が減少する場合があり、５−ＡＬＡ
の生産速度を高めるための改善が望まれている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】かかる実情において、本
発明者らは鋭意検討を行なった結果、光照射下で増殖す
る微生物のうち、光非照射下においてもなお光合成色素
の生成を示す微生物の中から著量の５−アミノレブリン
酸を蓄積する微生物を見出し、本発明を完成するに至っ
た。
発明者らは鋭意検討を行なった結果、光照射下で増殖す
る微生物のうち、光非照射下においてもなお光合成色素
の生成を示す微生物の中から著量の５−アミノレブリン
酸を蓄積する微生物を見出し、本発明を完成するに至っ
た。
【０００７】すなわち、本発明は、光非照射かつ好気培
養条件下において光合成色素生産能を有し、生じたコロ
ニーの周縁部にまで光合成色素が広がることを特徴とす
る、ロドバクター・セファロイデス ＣＲ−００２と命
名され、ＦＥＲＭ Ｐ−１５３１２として寄託された５
−アミノレブリン酸生産菌を提供するものである。ま
た、本発明は、光照射下で増殖する微生物から、光非照
射下における光合成色素生産能を指標とし、生じたコロ
ニーの周縁部にまで光合成色素が広がったものを選抜す
ることを特徴とする５−アミノレブリン酸生産菌の選抜
方法を提供するものである。
養条件下において光合成色素生産能を有し、生じたコロ
ニーの周縁部にまで光合成色素が広がることを特徴とす
る、ロドバクター・セファロイデス ＣＲ−００２と命
名され、ＦＥＲＭ Ｐ−１５３１２として寄託された５
−アミノレブリン酸生産菌を提供するものである。ま
た、本発明は、光照射下で増殖する微生物から、光非照
射下における光合成色素生産能を指標とし、生じたコロ
ニーの周縁部にまで光合成色素が広がったものを選抜す
ることを特徴とする５−アミノレブリン酸生産菌の選抜
方法を提供するものである。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明の５−アミノレブリン酸生
産菌（以下、「本発明微生物」という）は、ロドバクタ
ー属に属し、光非照射下において光合成色素生産能があ
れば、その起源は特に制限されない。光非照射下として
は、光照射を行なわない状態であれば特に制限されない
が、光を遮った暗所下であることが好ましい。
産菌（以下、「本発明微生物」という）は、ロドバクタ
ー属に属し、光非照射下において光合成色素生産能があ
れば、その起源は特に制限されない。光非照射下として
は、光照射を行なわない状態であれば特に制限されない
が、光を遮った暗所下であることが好ましい。
【０００９】また、本発明微生物が光非照射下に光合成
色素を生産する条件は、栄養培地上、すなわち従属栄養
下であることが望ましい。この従属栄養下としては、本
発明微生物が生育しうる栄養条件下であれば特に制限さ
れないが、グルコース等の糖類やエタノール等のアルコ
ール類、酢酸等の安価な有機酸類を炭素源とする栄養培
地での培養とすることが培地コストを抑制することから
好ましい。
色素を生産する条件は、栄養培地上、すなわち従属栄養
下であることが望ましい。この従属栄養下としては、本
発明微生物が生育しうる栄養条件下であれば特に制限さ
れないが、グルコース等の糖類やエタノール等のアルコ
ール類、酢酸等の安価な有機酸類を炭素源とする栄養培
地での培養とすることが培地コストを抑制することから
好ましい。
【００１０】本発明微生物は、例えば光照射下で増殖す
る微生物から、光非照射下における光合成色素生産能を
指標として微生物を選抜し、これが５−アミノレブリン
酸生産能力があるか否かをもってスクリーニングするこ
とにより分離することができる。
る微生物から、光非照射下における光合成色素生産能を
指標として微生物を選抜し、これが５−アミノレブリン
酸生産能力があるか否かをもってスクリーニングするこ
とにより分離することができる。
【００１１】ここで光照射下における増殖は、前記の糖
類、アルコール類又は有機酸類を炭素源とする栄養培地
で行なうのが好ましい。従って、光照射下における培地
と光非照射下における培地は特に変更する必要はない。
類、アルコール類又は有機酸類を炭素源とする栄養培地
で行なうのが好ましい。従って、光照射下における培地
と光非照射下における培地は特に変更する必要はない。
【００１２】光非照射下における光合成色素生産能の有
無の確認は、光非照射下、好ましくは暗所で栄養培地で
微生物を培養し、コロニー色が赤色を呈し、その着色が
コロニーの周縁部にまで広がっているか否かで行なうの
が好ましい。また、５−アミノレブリン酸生産能力の有
無の確認は、光非照射下、好ましくは暗所でグリシン及
びレブリン酸を含む栄養培地で微生物を培養し、培養液
中に５−アミノレブリン酸が生成しているか否かを判定
すればよい。
無の確認は、光非照射下、好ましくは暗所で栄養培地で
微生物を培養し、コロニー色が赤色を呈し、その着色が
コロニーの周縁部にまで広がっているか否かで行なうの
が好ましい。また、５−アミノレブリン酸生産能力の有
無の確認は、光非照射下、好ましくは暗所でグリシン及
びレブリン酸を含む栄養培地で微生物を培養し、培養液
中に５−アミノレブリン酸が生成しているか否かを判定
すればよい。
【００１３】当該分離方法の詳細を以下に例示する。 （工程１）予め滅菌した液体培地に土壌又は湖沼から採
取された微生物含有試料を接種して、約１００〜１０，
０００ルクス、好ましくは２００〜５，０００ルクスの
光照射下で静置培養する。当該液体培地には、一般的な
培地成分を使用することができる。すなわち、炭素源と
しては、例えばグルコース、アラビノース、キシロー
ス、マンノース、フラクトース、蔗糖、麦芽糖、乳糖等
の糖類；エタノール等のアルコール類；酢酸等の有機酸
等が挙げられる。また、窒素源としては硝酸塩、アンモ
ニウム塩、酵母エキス、ポリペプトン等が挙げられる。
また、その他、リン酸、Ｍｇ2+、Ｃａ2+、Ｍｎ2+、Ｎａ
+、Ｋ+等の無機塩等も適宜添加することもできる。培養
温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃であり、
pHは５．０〜８．０、好ましくは６．０〜７．５であ
る。当該静置培養において、培地が濁ったら同条件の培
地に植え継ぎ、同様の操作を適宜繰り返すことが好まし
い。
取された微生物含有試料を接種して、約１００〜１０，
０００ルクス、好ましくは２００〜５，０００ルクスの
光照射下で静置培養する。当該液体培地には、一般的な
培地成分を使用することができる。すなわち、炭素源と
しては、例えばグルコース、アラビノース、キシロー
ス、マンノース、フラクトース、蔗糖、麦芽糖、乳糖等
の糖類；エタノール等のアルコール類；酢酸等の有機酸
等が挙げられる。また、窒素源としては硝酸塩、アンモ
ニウム塩、酵母エキス、ポリペプトン等が挙げられる。
また、その他、リン酸、Ｍｇ2+、Ｃａ2+、Ｍｎ2+、Ｎａ
+、Ｋ+等の無機塩等も適宜添加することもできる。培養
温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５℃であり、
pHは５．０〜８．０、好ましくは６．０〜７．５であ
る。当該静置培養において、培地が濁ったら同条件の培
地に植え継ぎ、同様の操作を適宜繰り返すことが好まし
い。
【００１４】（工程２）工程１を数回繰り返した後、培
養液を適当に希釈し、これを工程１で用いたのと同様の
培地成分を含む平板培地に塗布し、光非照射下、好まし
くは暗所にて培養する。培養温度は、工程１と同様であ
り、培養期間は１〜２０日とするのが好ましい。生じた
コロニーのうち、コロニー色が光合成色素による赤色を
有し、かつ光合成色素がコロニーの周縁部にまで広がっ
たものを指標として選別する。
養液を適当に希釈し、これを工程１で用いたのと同様の
培地成分を含む平板培地に塗布し、光非照射下、好まし
くは暗所にて培養する。培養温度は、工程１と同様であ
り、培養期間は１〜２０日とするのが好ましい。生じた
コロニーのうち、コロニー色が光合成色素による赤色を
有し、かつ光合成色素がコロニーの周縁部にまで広がっ
たものを指標として選別する。
【００１５】（工程３）次に、これを工程１で用いたの
と同様の液体培地に接種して、光非照射下、好ましくは
暗所にて振とう培養を行なう。培地が濁ったら、平板培
地に再び塗布し、これを同様に暗所にて培養する。本工
程で生じたコロニーのうち、コロニー色が光合成色素に
よる赤色を有し、かつ光合成色素がコロニーの周縁部に
まで広がったものを指標として選別する。同様の操作を
適宜繰り返すことが好ましい。
と同様の液体培地に接種して、光非照射下、好ましくは
暗所にて振とう培養を行なう。培地が濁ったら、平板培
地に再び塗布し、これを同様に暗所にて培養する。本工
程で生じたコロニーのうち、コロニー色が光合成色素に
よる赤色を有し、かつ光合成色素がコロニーの周縁部に
まで広がったものを指標として選別する。同様の操作を
適宜繰り返すことが好ましい。
【００１６】（工程４）上記の操作で分離した菌株を前
記工程１で用いたのと同様の液体培地に接種して、培養
温度２０〜４０℃で１〜２０日、光非照射下、好ましく
は暗所にて培養する。次に、グリシン５〜２００mM及び
レブリン酸０．０１〜１００mMを培地に添加し、光非照
射下、好ましくは暗所にて約２４時間、振とう培養を行
なう。かかる培養で用いる培養器としては、特に制限さ
れず、試験管、フラスコ、マイクロタイタープレート等
が挙げられる。また、５−アミノレブリン酸の生成確認
は、得られた培養液を遠心分離等で分離後、上清を適当
な分析手法、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、赤外線吸収
スペクトル（ＩＲ）等を用いて分析すればよく、また、
５−アミノレブリン酸の生成量の測定は、比色法又は高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法等を適宜用い
ることができる。
記工程１で用いたのと同様の液体培地に接種して、培養
温度２０〜４０℃で１〜２０日、光非照射下、好ましく
は暗所にて培養する。次に、グリシン５〜２００mM及び
レブリン酸０．０１〜１００mMを培地に添加し、光非照
射下、好ましくは暗所にて約２４時間、振とう培養を行
なう。かかる培養で用いる培養器としては、特に制限さ
れず、試験管、フラスコ、マイクロタイタープレート等
が挙げられる。また、５−アミノレブリン酸の生成確認
は、得られた培養液を遠心分離等で分離後、上清を適当
な分析手法、例えば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）、ガスクロマトグラフィー（ＧＣ）、赤外線吸収
スペクトル（ＩＲ）等を用いて分析すればよく、また、
５−アミノレブリン酸の生成量の測定は、比色法又は高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）法等を適宜用い
ることができる。
【００１７】上記操作で、５−アミノレブリン酸の生成
が観察された菌株を選抜すればよい。
が観察された菌株を選抜すればよい。
【００１８】上記選抜方法で得られた菌株は、グルコー
ス等の糖類、エタノール等のアルコール類又は酢酸等の
有機酸を炭素源として含有する培地においても光非照射
下において著量の５−アミノレブリン酸を生産する微生
物である。このような微生物として工業技術院生命工学
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５３１２として寄託
されているロドバクター・セファロイデス ＣＲ−００
２株を例示することができ、かかる菌株は、次に示すよ
うな性質を示す。
ス等の糖類、エタノール等のアルコール類又は酢酸等の
有機酸を炭素源として含有する培地においても光非照射
下において著量の５−アミノレブリン酸を生産する微生
物である。このような微生物として工業技術院生命工学
工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５３１２として寄託
されているロドバクター・セファロイデス ＣＲ−００
２株を例示することができ、かかる菌株は、次に示すよ
うな性質を示す。
【００１９】
【表１】 （ａ）形態的性質 （１）細胞の形及び大きさ ；桿菌０．５〜０．８×１．０〜１．５ （２）運動性の有無 ；有り（小） （３）胞子の有無 ；無し （ｂ）培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養 ；良好な生育、円形、光沢のある濃赤色 （２）肉汁液体培養 ；凝集 （ｃ）生理的性質 （１）グラム染色性 ；陰性 （２）キノンのタイプ ；０〜１０ （３）ＤＮＡのＧＣ含量 ；６８（モル％） （４）色素の生成 クロロフィル ；有り、バクテリオクロロフィルａ カロチノイド ；有り、スフェロイデン、スフェロイデノン （５）硝酸塩の還元 ；有り （６）脱窒反応 ；有り （７）無機窒素源の利用 硝酸塩 ；＋ アンモニウム塩 ；＋ （８）生育の範囲 pH ；５．０〜９．０ 温度 ；５〜３５℃ （９）カタラーゼ ；＋ （10) 好気的生育 ；有り 各種炭素源の利用 酢酸 ；＋ 乳酸 ；＋ ギ酸 ；− 酪酸 ；− 吉草酸 ；− プロピオン酸 ；− クエン酸 ；微弱 フマル酸 ；＋ リンゴ酸 ；＋ コハク酸 ；＋ エタノール ；＋ グリセロール ；微弱 マンニトール ；＋ グルコース ；＋ フラクトース ；＋ （11）光依存の嫌気生育（光従属型光合成） ；有り 各種炭素源の利用 酢酸 ；＋ 乳酸 ；＋ ギ酸 ；− 酪酸 ；− 吉草酸 ；− プロピオン酸 ；− クエン酸 ；− フマル酸 ；＋ リンゴ酸 ；＋ コハク酸 ；＋ エタノール ；＋ グリセロール ；＋ マンニトール ；＋ グルコース ；＋ フラクトース ；＋
【００２０】以上の菌学的性質について、バージェイズ
マニュアル オブ システマティック バクテリオロ
ジー（Bargey's manual of Systematic Bacteriology）
に基づき検索を行なったところ、本菌株は、ロドバクタ
ー・セファロイデスであると同定された。
マニュアル オブ システマティック バクテリオロ
ジー（Bargey's manual of Systematic Bacteriology）
に基づき検索を行なったところ、本菌株は、ロドバクタ
ー・セファロイデスであると同定された。
【００２１】本発明微生物を培養する培地としては、通
常、これらの微生物が生育し得る培地であれば良く、炭
素源としては、グルコース、フラクトース等の糖類や、
酢酸、リンゴ酸などの有機酸類、エタノール、グリセロ
ール等のアルコール類が用いられる。窒素源としては、
硝酸ナトリウム、硫化アンモニウム、硫化ナトリウム等
の無機塩類や、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、尿素
等の有機化合物を用いることができる。これらの他に、
必要に応じて、無機塩類、金属塩、ビタミン等を添加す
ることもできる。さらに、本発明微生物を用いて５−ア
ミノレブリン酸を製造するには、上記の様な培地で２０
〜４０℃の温度で１〜２０日培養し、次に、当該培養液
にグリシン５〜２００mM及びレブリン酸０．０１〜１０
０mMを添加してさらに培養を続けるだけでよい。このと
き炭素源としてグルコース、エタノール、酢酸、窒素源
として硝酸ナトリウム、硫化アンモニウム、硫化ナトリ
ウム等の無機塩類や、酵母エキス、ペプトン、肉エキ
ス、尿素等の天然物を１種類以上添加しても良く、これ
らの添加により、５−アミノレブリン酸の生産性が低下
することはない。
常、これらの微生物が生育し得る培地であれば良く、炭
素源としては、グルコース、フラクトース等の糖類や、
酢酸、リンゴ酸などの有機酸類、エタノール、グリセロ
ール等のアルコール類が用いられる。窒素源としては、
硝酸ナトリウム、硫化アンモニウム、硫化ナトリウム等
の無機塩類や、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、尿素
等の有機化合物を用いることができる。これらの他に、
必要に応じて、無機塩類、金属塩、ビタミン等を添加す
ることもできる。さらに、本発明微生物を用いて５−ア
ミノレブリン酸を製造するには、上記の様な培地で２０
〜４０℃の温度で１〜２０日培養し、次に、当該培養液
にグリシン５〜２００mM及びレブリン酸０．０１〜１０
０mMを添加してさらに培養を続けるだけでよい。このと
き炭素源としてグルコース、エタノール、酢酸、窒素源
として硝酸ナトリウム、硫化アンモニウム、硫化ナトリ
ウム等の無機塩類や、酵母エキス、ペプトン、肉エキ
ス、尿素等の天然物を１種類以上添加しても良く、これ
らの添加により、５−アミノレブリン酸の生産性が低下
することはない。
【００２２】
【発明の効果】本発明の微生物を用いれば、５−アミノ
レブリン酸の生産性が著しく向上する。
レブリン酸の生産性が著しく向上する。
【００２３】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
るが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではな
い。
【００２４】実施例１ 表２に示す組成の液体培地（pH６．８）を試験管２００
本に調製した。これに１００の土壌サンプル、１００の
湖水サンプルをそれぞれ接種して、約５０００ルクスの
光を照射し、３０℃で静置培養した。培養７日後、培地
が濁ったので、同条件の培地に植え継いだ。本操作を３
度繰り返した。次に、上記培養液を適当に希釈し、表２
に示す組成の平板培地に塗布し、これを暗所、３０℃に
て培養した。培養７日後、生じたコロニーを上記と同様
に調製した平板培地にピックアップし、さらに暗所、３
０℃で１４日間培養した。十分に生育したコロニーの
内、コロニー色が光合成色素の赤色を呈し、かつ光合成
色素がコロニーの周縁部にまで広がったもの１０株をピ
ックアップした。
本に調製した。これに１００の土壌サンプル、１００の
湖水サンプルをそれぞれ接種して、約５０００ルクスの
光を照射し、３０℃で静置培養した。培養７日後、培地
が濁ったので、同条件の培地に植え継いだ。本操作を３
度繰り返した。次に、上記培養液を適当に希釈し、表２
に示す組成の平板培地に塗布し、これを暗所、３０℃に
て培養した。培養７日後、生じたコロニーを上記と同様
に調製した平板培地にピックアップし、さらに暗所、３
０℃で１４日間培養した。十分に生育したコロニーの
内、コロニー色が光合成色素の赤色を呈し、かつ光合成
色素がコロニーの周縁部にまで広がったもの１０株をピ
ックアップした。
【００２５】上記のような操作で分離した菌株をそれぞ
れ５００ml容の振とうフラスコに調製した表２に示す組
成の液体培地２００mlに接種して、暗所、３０℃にて４
８時間振とう培養後、グリシン３０mM、レブリン酸３０
mMを添加した。これを暗所、３０℃にて振とう培養し、
２４時間後に５−アミノレブリン酸の生成量を測定し
た。５−アミノレブリン酸の生成量は、ＨＰＬＣ（高速
液体クロマトグラフィー）法（岡山ら、CLINICAL CHEMI
STRY Vol. 36, No. 8, 1494頁,1990）によって測定し
た。
れ５００ml容の振とうフラスコに調製した表２に示す組
成の液体培地２００mlに接種して、暗所、３０℃にて４
８時間振とう培養後、グリシン３０mM、レブリン酸３０
mMを添加した。これを暗所、３０℃にて振とう培養し、
２４時間後に５−アミノレブリン酸の生成量を測定し
た。５−アミノレブリン酸の生成量は、ＨＰＬＣ（高速
液体クロマトグラフィー）法（岡山ら、CLINICAL CHEMI
STRY Vol. 36, No. 8, 1494頁,1990）によって測定し
た。
【００２６】上記操作で５−アミノレブリン酸の生成が
観察された菌株３株を得、それぞれＣＲ−００２、ＣＲ
−００３、ＣＲ−００４と名付けた。かかる３株は、す
べて表１に示すような菌学的性質を示した。上記と同様
にして測定した５−アミノレブリン酸生産量を表３に示
した。
観察された菌株３株を得、それぞれＣＲ−００２、ＣＲ
−００３、ＣＲ−００４と名付けた。かかる３株は、す
べて表１に示すような菌学的性質を示した。上記と同様
にして測定した５−アミノレブリン酸生産量を表３に示
した。
【００２７】
【表２】 グルコース ９．０ｇ Ｌ−グルタミン酸Ｎａ ３．８ｇ ＮａＨ2ＰＯ4・２Ｈ2Ｏ １．０７ｇ Ｎａ2ＨＰＯ4・１２Ｈ2Ｏ １．１３ｇ （ＮＨ4）2ＰＯ4 ０．８ｇ ＭｇＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．２ｇ ＣａＣｌ2 ５３mg ＭｎＳＯ4・４Ｈ2Ｏ １．２mg 酵母エキス ２．０ｇ ニコチン酸 １．０mg チアミン塩酸 １．０mg ビオチン ０．０１mg 水 １０００ml
【００２８】
【表３】
【００２９】実施例２（５−アミノレブリン酸の生産） ５００ml容振とうフラスコに表２に示す組成の培地２０
０mlを調製し、これを１２１℃で１５分間滅菌し、放冷
した。次に、上記培地を１０ml分注し、１２１℃で１５
分間滅菌した２１mmφの試験管内に、実施例１で得られ
たＣＲ−００２株を導入し、光非照射下、３０℃の温度
で４８時間培養した。この培養液を上記振とうフラスコ
に全量植菌し、光非照射下、３０℃の温度で４８時間振
とう培養した後、遠心分離により菌体を集めた。集めた
菌体を１２１℃で１５分間滅菌し、放冷した３０mMグリ
シン、３０mMレブリン酸及び表２の組成を有する培地に
湿菌体が０．５ｇ／１０mlになるように再懸濁し、暗
所、３０℃にて２４時間振とう培養し、５−アミノレブ
リン酸の生成量を測定した。５−アミノレブリン酸の生
成量は、前述のＨＰＬＣ法によって測定した。上記と同
様の試験を３度繰り返し行なった。結果を表４に示す。
０mlを調製し、これを１２１℃で１５分間滅菌し、放冷
した。次に、上記培地を１０ml分注し、１２１℃で１５
分間滅菌した２１mmφの試験管内に、実施例１で得られ
たＣＲ−００２株を導入し、光非照射下、３０℃の温度
で４８時間培養した。この培養液を上記振とうフラスコ
に全量植菌し、光非照射下、３０℃の温度で４８時間振
とう培養した後、遠心分離により菌体を集めた。集めた
菌体を１２１℃で１５分間滅菌し、放冷した３０mMグリ
シン、３０mMレブリン酸及び表２の組成を有する培地に
湿菌体が０．５ｇ／１０mlになるように再懸濁し、暗
所、３０℃にて２４時間振とう培養し、５−アミノレブ
リン酸の生成量を測定した。５−アミノレブリン酸の生
成量は、前述のＨＰＬＣ法によって測定した。上記と同
様の試験を３度繰り返し行なった。結果を表４に示す。
【００３０】比較例１〜３ 使用する菌株をロドバクター・セファロイデス ＡＴＣ
Ｃ１７０２３（比較例１）、ロドバクター・セファロイ
デス ＡＴＣＣ２１４５５（比較例２）、ロドバクター
・セファロイデス ＡＴＣＣ２１２８６（比較例３）と
する以外は、上記実施例２と同様の方法に従った。結果
を表４に示す。
Ｃ１７０２３（比較例１）、ロドバクター・セファロイ
デス ＡＴＣＣ２１４５５（比較例２）、ロドバクター
・セファロイデス ＡＴＣＣ２１２８６（比較例３）と
する以外は、上記実施例２と同様の方法に従った。結果
を表４に示す。
【００３１】
【表４】
【００３２】表４から、本発明微生物（ＣＲ−００２
株）は、公知の同種の菌株に比べ、著量の５−アミノレ
ブリン酸を蓄積できる。
株）は、公知の同種の菌株に比べ、著量の５−アミノレ
ブリン酸を蓄積できる。
【００３３】実施例３、比較例４〜６ 培地成分のグルコース９ｇの代わりに酢酸ナトリウム２
０mMとする以外は上記実施例２と同様の方法に従った。
結果を表５に示す。
０mMとする以外は上記実施例２と同様の方法に従った。
結果を表５に示す。
【００３４】
【表５】
【００３５】実施例４ ５００ml容振とうフラスコに表２に示す組成の培地２０
０mlを調製し、これを１２１℃、１５分間滅菌し、放冷
した。次に上記培地を１０ml分注し、１２１℃で１５分
間滅菌した２１mmφの試験管にＣＲ−００２、ＣＲ−３
８６（ＦＥＲＭ−１３１５９）、ＣＲ−４５０（ＦＥＲ
Ｍ−１４０８５）をそれぞれ植菌し、光非照射下、３０
℃の温度で４８時間振とう培養した。この培養液を上記
振とうフラスコに全量植菌し、光非照射下、３０℃の温
度で４８時間振とう培養した後、遠心集菌し菌体の湿重
量を測定した。結果を表６に示す。なお、ＣＲ−３８６
及びＣＲ−４５０はＣＲ−００２と同属の光合成細菌を
ＮＴＧ変異処理して得られた変異株である。
０mlを調製し、これを１２１℃、１５分間滅菌し、放冷
した。次に上記培地を１０ml分注し、１２１℃で１５分
間滅菌した２１mmφの試験管にＣＲ−００２、ＣＲ−３
８６（ＦＥＲＭ−１３１５９）、ＣＲ−４５０（ＦＥＲ
Ｍ−１４０８５）をそれぞれ植菌し、光非照射下、３０
℃の温度で４８時間振とう培養した。この培養液を上記
振とうフラスコに全量植菌し、光非照射下、３０℃の温
度で４８時間振とう培養した後、遠心集菌し菌体の湿重
量を測定した。結果を表６に示す。なお、ＣＲ−３８６
及びＣＲ−４５０はＣＲ−００２と同属の光合成細菌を
ＮＴＧ変異処理して得られた変異株である。
【００３６】
【表６】
【００３７】表６から明らかなように、ＣＲ−００２で
は、光合成細菌変異株に比べて生育度が高く有用である
ことがわかる。
は、光合成細菌変異株に比べて生育度が高く有用である
ことがわかる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:01） (56)参考文献 特開 平７−246088（ＪＰ，Ａ) 特開 平６−169758（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−276989（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 1/20 C12N 1/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (2)
- 【請求項１】 光非照射かつ好気培養条件下において光
合成色素生産能を有し、生じたコロニーの周縁部にまで
光合成色素が広がることを特徴とする、ロドバクター・
セファロイデス ＣＲ−００２と命名され、ＦＥＲＭ
Ｐ−１５３１２として寄託された５−アミノレブリン酸
生産菌。 - 【請求項２】 光照射下で増殖する微生物から、光非照
射下における光合成色素生産能を指標とし、生じたコロ
ニーの周縁部にまで光合成色素が広がったものを選抜す
ることを特徴とする請求項１記載の生産菌の選抜方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07335252A JP3118175B2 (ja) | 1995-12-22 | 1995-12-22 | ５−アミノレブリン酸生産菌及びその選抜方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP07335252A JP3118175B2 (ja) | 1995-12-22 | 1995-12-22 | ５−アミノレブリン酸生産菌及びその選抜方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09173054A JPH09173054A (ja) | 1997-07-08 |
| JP3118175B2 true JP3118175B2 (ja) | 2000-12-18 |
Family
ID=18286448
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP07335252A Expired - Fee Related JP3118175B2 (ja) | 1995-12-22 | 1995-12-22 | ５−アミノレブリン酸生産菌及びその選抜方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3118175B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116818958B (zh) * | 2023-08-24 | 2023-11-21 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种发酵液中5-氨基乙酰丙酸和甘氨酸含量的测定方法 |
-
1995
- 1995-12-22 JP JP07335252A patent/JP3118175B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09173054A (ja) | 1997-07-08 |
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