JP2991395B2 - ５−アミノレブリン酸生産微生物および５−アミノレブリン酸の製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、５−アミノレブリン酸
を高濃度で蓄積することのできる微生物と、この微生物
を培養して５−アミノレブリン酸を高収率で製造する方
法とに関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】５−
アミノレブリン酸は、テトラピロール化合物の前駆体と
して広く生物圏に存在し、生体中で重要な役割を果たし
ている化合物である。５−アミノレブリン酸は、除草
剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植物の光合成増強剤とし
て優れた効果を示し、しかも人畜に対して毒性を示さ
ず、分解性が高いため環境への残留性もないなどの優れ
た性質を示す天然化合物である（特開昭６１−５０２８
１４号、特開平２−１３８２０１号公報など参照）。

【０００３】しかし、５−アミノレブリン酸は、生産コ
ストが高く、除草剤、殺虫剤、植物成長調節剤、植物の
光合成増強剤として使用するには実用性に欠ける（Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ Ｗｅｅｋ／Ｏｃｔｏｂｅｒ，２９，１９
８４）。このような現状において、多くの化学合成法が
検討されている（例えば、特開平２−１１１７４７号公
報参照）が、未だ十分な方法が開発されていない。

【０００４】一方、光合成細菌などの微生物を用いた５
−アミノレブリン酸の製造方法も検討されている（特開
平２−９２２９３号、同３−１７２１９１号公報など参
照）が、これまでの方法では、生産量が低く、必ずしも
満足できるものではない。

【０００５】また、微生物に５−アミノレブリン酸を生
産させる際に良く用いられる方法として、（微生物によ
り生産される５−アミノレブリン酸が、生体系中におい
て５−アミノレブリン酸デヒドラターゼにより代謝され
るのを防ぐべく、）５−アミノレブリンデヒドラターゼ
阻害剤（例えば、レブリン酸など）を添加する方法があ
る。しかし、これまで用いられてきた方法では、生産さ
れる５−アミノレブリン酸の１０〜１００倍以上の阻害
剤の添加が必要である。このような５−アミノレブリン
酸デヒドラターゼ阻害剤の大量使用は、微生物の生育や
機能をも著しく阻害する他に、生産コストの高騰や、精
製分離の困難などの多くの問題を招来する。

【０００６】また、光合成細菌を用いて５−アミノレブ
リン酸を生産させるためには、通常、嫌気条件下におい
て培養時に十分に光を照射する必要がある。これは、５
−アミノレブリン酸合成酵素が光によって誘導されるか
らであるが、同時に５−アミノレブリン酸デヒドラター
ゼも強く誘導されてしまうため、上記のように５−アミ
ノレブリン酸デヒドラターゼ阻害剤を大量に添加する必
要が生じるのみならず、光照射による大量培養は、培養
工学上、実用化にはなお多くの困難な問題を招来するこ
とが予想される。

【０００７】本発明は、以上の諸点を考慮し、低濃度の
５−アミノレブリン酸阻害剤を添加するのみで、実用的
な濃度で５−アミノレブリン酸を生産することのできる
５−アミノレブリン酸生産微生物と、この微生物の培養
期間中の一部または全部を好気的に行うことで、光照射
時間を大幅に減少させることのできる５−アミノレブリ
ン酸の製造方法とを提案することを目的とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために研究を重ねた結果、（１）光合成細
菌またはその変異株を変異処理させたものの中に、５−
アミノレブリン酸に対するミカエリス定数の増加した５
−アミノレブリン酸デヒドラターゼ変異酵素を有する菌
株が存在すること、（２）この菌株を使用すれば、５−
アミノレブリン酸の製造に要する５−アミノレブリン酸
デヒドラターゼ阻害剤（例えば、レブリン酸など）を、
大幅に減少させることができること、（３）しかも、こ
の菌株を使用する場合、５−アミノレブリン酸デヒドラ
ターゼを、特異的、かつ十分に抑制することができるた
め、好気培養においても、これまで達成することのでき
なかった著量の５−アミノレブリン酸を蓄積することが
できること、を確認して、本発明を完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明は、 （１）ロドバクターセファロイデス Ｒｈｏｄｏｂａｃ
ｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）に属し、５−アミノ
レブリン酸に対するミカエリス定数が野生株を１とした
とき、１．２〜１００に増大した５−アミノレブリン酸
デヒドラターゼ変異酵素を有し、かつ （２）工業技術院微生物工業研究所に微工研菌寄第１３
１５９号として寄託されていることを特徴とする５−ア
ミノレブリン酸生産微生物と、 （３）上記の微生物を用いることを特徴とする５−アミ
ノレブリン酸の製造方法とに関する。

【００１０】以下、本発明の５−アミノレブリン酸生産
微生物および５−アミノレブリン酸の製造方法の詳細を
説明する。先ず、本発明の５−アミノレブリン酸生産微
生物は、光合成細菌であるロドバクターセファロイデス
（Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）
あるいはその変異株を親株とし、これを変異処理して得
られるものであって、５−アミノレブリン酸に対するミ
カエリス定数が増大した５−アミノレブリン酸デヒドラ
ターゼ変異酵素を有するものである。このような性質を
有する本発明の５−アミノレブリン酸生産微生物の分離
方法の詳細を、以下に例示する。

【００１１】上記の親株が増殖し得る培地成分を含む液
体培地を試験管に調製し、滅菌した後、親株を接種し、
光照射下において静置培養する。増殖した菌体を緩衝液
で洗浄した後、変異操作を行う。この変異操作として
は、通常の変異手法を用いることができる。例えば、紫
外線，電離放射線などの物理的変異原を寒天培地上の親
株に照射したり、エチルメタンスルフォネート（ＥＭ
Ｓ）、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニ
ジン（ＮＴＧ）、エチルニトロソ尿素（ＥＮＵ）などの
アルキル化剤やブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵｒ
ｄ）などの塩基アナログなどの化学的変異原を添加した
緩衝液中で親株を培養する方法を用いることができる。

【００１２】上記のような変異手法によって処理した菌
を、さらに緩衝液で洗浄し、寒天培地などに撒き、培養
する。なお、この培養により生育した変異株の中から、
上記の性質を示す菌株を選択するには、以下のような工
程にて行う。 １．これらの変異株を、実施例で使用した培地２のよう
な培地で増殖させ、菌体を集菌後、適当な緩衝液で洗浄
して、緩衝液中で細胞を破砕し、遠心分離して未破砕の
細胞を取り除く。 ２．上記の１の工程で得られた無細胞抽出液を用いて、
５−アミノレブリン酸デヒドラターゼ反応液（後述の実
施例１参照）を用いて酵素反応を行う。 ３．上記の２の反応を、基質である５−アミノレブリン
酸濃度を適当に変化させた条件で行い、各濃度おにける
反応速度を求める。 この反応速度の測定方法は、反応速度が求められれば、
どのような方法でもよいが、例えば、エイリッヒの比色
定量法（Ｊ．Ｂｉｏｌ，Ｃｈｅｍ．，２１９，４３５，
（１９５６）参照）でポルフォビリノーゲン生成量、Ｓ
ＡＴＴＯの方法（Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉ
ｎｏｌ．，２７，４３９，（１９８１）参照）により総
ポリフィリン量を求め、数１に示す式により反応速度を
算出すればよい。

【００１３】

【数１】

【００１４】このようにして求められた反応速度と、５
−アミノレブリン酸濃度とからミカエリス定数を求め
る。その方法は、幾つも知られているが、例えば、酵素
反応速度の逆数と５−アミノレブリン酸濃度の逆数をプ
ロットする、いわゆるリンネバー−バークプロット
（「酵素反応機構」：田伏岩夫訳、東京大学出版会、な
ど参照）により求められる回帰直線と基質濃度軸の交点
からミカエリス定数を求める。この方法は、リンネバー
−バークの方法（上記の「酵素反応機構」など参照）と
して一般的に用いられるミカエリス定数の算出法であ
り、求められたミカエリス定数（Ｋｍ値）は、酵素の基
本的性質のうち酵素と基質（本発明では、５−アミノレ
ブリン酸）との親和性を評価するのに用いることがで
き、一般に、Ｋｍの増加は、親和性の減少とみなすこと
ができる。

【００１５】４．上記の３と同様の条件より求めた野性
株の５−アミノレブリン酸デヒドラターゼのミカエリス
定数と比較し、増大しているものを選択すればよい。具
体的には、測定条件にもよるが、野性株のミカエリス定
数を１としたとき、約１．２〜１００とする。ただし、
この酵素のミカエリス定数が余りに大きくなった菌株
は、この酵素反応により得られるポルフォビリノーゲン
などが生成しないか、あるいは不足するなどの理由で、
生育が悪くなることがあるため、約１．５〜１０のミカ
エリス定数をもつ菌株が好ましいと推測される。なお、
ミカエリス定数が大きくなったために生育阻害がかかっ
てしまう場合でも、ポルフォビリノーゲンなどの栄養源
を培地中に添加することでその阻害が解除されるよう場
合は、この限りでない。

【００１６】以上の分離・変異操作によって得られる菌
株の例であるＣＲ−３８６は、親株であるロドバクター
・セファロイデスとほぼ同じ菌学的性質を有し、かつ５
−アミノレブリン酸に対するミカエリス定数が増大した
５−アミノレブリン酸デヒドラターゼ変異酵素を有す
る。また、本菌株は、好気条件で培養することにより、
光照射の必要がなくなるため、培養工学上有利である。
このＣＲ−３８６は、工業技術院微生物工業研究所に、
微工研菌寄第１３１５９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１３１５
９）として寄託されている。

【００１７】また、本発明の製造方法に用いられる微生
物としては、光合成細菌であるロドバクターセファロイ
デスの野生株あるいはその変異株を親株として得られる
変異株のうち、５−アミノレブリン酸に対するミカエリ
ス定数が増大した５−アミノレブリン酸デヒドラターゼ
変異酵素を有する菌株であればいかなる菌株でもよい。

【００１８】なお、生産培養を、好気条件や複合培地で
行う場合に用いる菌株には、変異に用いる親株として５
−アミノレブリン酸合成酵素の酸素分圧や複合培地成分
による抑制が外れた菌株を用い、これを変異処理し、上
記の１〜４の工程により選択したものを用いることが好
ましい。このような性質を示す親株としては、工業技術
院微生物工業研究所に、微工研菌寄第１２５４２号とし
て寄託されているＣＲ−２８６株を例示することができ
る。

【００１９】以下、５−アミノレブリン酸の製造方法を
説明する。先ず、培地としては、上記の分離・変異操作
に用いる培地に、酵母エキス，乾燥酵母，ペプトン，肉
エキス，麦芽エキス，コーンスティープリカー，カザミ
ノ酸などの天然成分を添加した複合培地を使用する。培
養条件は、前述の分離・変異操作の条件と同様である。
ただし、この場合、約０．５〜５０ｋｌｕｘの光照射嫌
気条件が望ましい。また、培養液のｐＨは、５〜１０の
範囲内で、ＨＣｌ水溶液またはＮａＯＨ水溶液を用いて
一定のｐＨ値に保つことにより、より高濃度の５−アミ
ノレブリン酸を生成することができる。

【００２０】さらに、培養中に５−アミノレブリン酸の
プレカーサであるグリシンとコハク酸を添加すると、よ
り高濃度の５−アミノレブリン酸を生成することができ
るが、培養と同時にグリシンとコハク酸を添加すると、
菌株の増殖速度が遅くなるため、ある程度増殖した時点
で添加することが好ましい。菌の生育が対数増殖期中期
を過ぎた後に、添加するとなおよい。添加量は、グリシ
ンとコハク酸のいずれの場合も、余り少なすぎると添加
効果がなく、逆に余り多すぎても菌体の生育が阻害され
るため、培地全体に対し、約１０〜８０ｍｍｏｌ／ｌ、
特に約１５〜４５ｍｍｏｌ／ｌの範囲内とすることが好
ましい。添加方法は、一度に全量添加してもよいが、連
続的にまたは断続的に添加してもよい。

【００２１】また、このとき、５−アミノレブリン酸デ
ヒドラターゼの阻害物質を添加することもできる。例え
ば、この阻害物質としてレブリン酸を使用する場合、レ
ブリン酸の添加方法は、菌株の培養開始時（あるいはグ
リシンとコハク酸の添加時）から一定の間隔で少量（同
量）ずつ添加してもよいし、培養開始時（あるいはグリ
シンとコハク酸の添加時）に全量添加しておいてもよ
い。菌の生育が対数増殖期中期を過ぎた後に、添加する
となおよい。

【００２２】以上のようにして得られる培養液または反
応液中の５−アミノレブリン酸は、常法により精製する
ことができる。例えば、溶剤抽出などの方法によって回
収することができ、このときカラムクロマトグラフィな
どの公知の精製方法を適宜併用することもできる。

【００２３】

【作用】本発明で提供する、５−アミノレブリン酸に対
するミカエリス定数の増加した５−アミノレブリン酸デ
ヒドラターゼ変異酵素を有する光合成細菌は、該菌が生
産する５−アミノレブリン酸を、その２分子を縮合させ
てポルフォビリノーゲンに転化する活性が著しく低下し
ている。このため、本発明の製造方法によれば、５−ア
ミノレブリン酸デヒドラターゼ阻害剤を、細菌自身の生
育、活性を抑制しない範囲内で添加するのみでよい。こ
の結果、５−アミノレブリン酸生産微生物の生育が良好
となり、５−アミノレブリン酸の生産量も非常に大きい
ものとなる。

【００２４】

【実施例】

実施例１ 表１に示す光合成細菌用の最小培地であるグルタメート
・マレート培地（培地１）の培地成分に２ｇの酵母エキ
スを加え、蒸留水１リットル（以下、「Ｌ」と記し、ｍ
ｌを「ｍＬ」と記す）に溶かして培地２を調製した。

【００２５】

【表１】

【００２６】上記の培地２の１０ｍＬを２１ｍｍφの試
験管に分注して、１２１℃で１５分間滅菌し、冷却し
た。これにＣＲ−２８６株の一白金耳を植菌後、５ｋｌ
ｕｘの光照射下の嫌気条件下で４８時間静置培養した。
別の２１ｍｍφの試験管に培地２を１０ｍＬ分注し、上
記と同様にして滅菌した。これに、上記の培養液０．５
ｍＬを植え継ぎ、好気条件下、３０℃，２５０ｒｐｍで
８時間往復振とう培養した。この培養液を、洗浄のた
め、１５０００ｒｐｍにて３０秒間遠心分離し、その上
清を捨て、遠心分離前と同量のトリス・マレイン酸緩衝
液（ｐＨ６．０）に懸濁させた。この洗浄操作を、さら
に２度繰り返した。

【００２７】この後、再び１５，０００ｒｐｍにて３０
秒間遠心分離し、その上清を捨て、１００μｇ／ｍＬの
ＮＴＧを含むトリス・マレイン酸緩衝液（ｐＨ６．０）
に懸濁させ、好気条件下、３０℃で８０分間静置培養し
た。このようにして変異処理した菌を、上記と同様の方
法で３回洗浄した後、滅菌した培地２の試験管に植え継
ぎ、好気条件下、３０℃，２５０ｒｐｍで２日間往復振
とう培養した。培地２に寒天１５ｇ／Ｌを添加し、１２
１℃で１５分間滅菌して調製した寒天プレートに、上記
の培養液を希釈して塗布し、好気条件下、３０℃で４日
間培養した。これにより、約１０，０００株のコロニー
を得た。

【００２８】次に、１Ｌ容ル式瓶に培地２を調製した。
これを１２１℃で１５分間滅菌し、冷却した。上記のよ
うにＣＲ−２８６株をＮＴＧで変異処理して得られた菌
株を、１０ｍＬの培地２を分注し上記と同様にして滅菌
した２１ｍｍφの試験管にて、５ｋｌｕｘの光照射下の
嫌気条件下で、４８時間静置培養した。培養後のものを
上記のル式瓶に植菌し、５ｋｌｕｘの光照射下の嫌気条
件下、３０℃で静置培養した。４８時間後、遠心分離に
より集菌して、トリス−塩酸緩衝液（４０ｍＭ，ｐＨ
８．１）で洗浄後、超音波破砕装置にて破砕し、１０，
０００ｒｐｍで遠心分離して得られた上清を、５−アミ
ノレブリン酸デヒドラターゼ粗酵素液とした。

【００２９】トリス−塩酸緩衝液（４０ｍＭ，ｐＨ８．
１）の１ｍＬ中に、ＫＣｌ３３ｍＭと、ＭｇＣｌ２６．
５ｍＭとを含み、さらに上記の粗酵素液を蛋白量換算で
１．０ｍｇ／ｍＬとなるような量で含む酵素反応液（５
−アミノレブリン酸デヒドラターゼ反応液）を調製し、
これに５−アミノレブリン酸を各種の濃度で含有するよ
うに加え、３７℃でインキュベートした。６０分後、５
ｖｏｌ％トリクロロ酢酸を２ｍＬ加えて反応を停止させ
た。これを、３５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上
清を１ｍＬ採り、エイリッヒの比色定量法によりポルフ
ォビリノーゲンの生成量（ａ）を調べた。さらに、別の
上清１ｍＬを採り、ＳＡＴＴＯの方法により総ポルフィ
リンの量（ｂ）を調べた。これらの量ａ，ｂから、前述
の数１の式によってポルフォビリノーゲン生成速度を求
めた。

【００３０】そして、上記の酵素反応液に加えられる５
−アミノレブリン酸濃度の逆数と、それぞれの反応速度
の逆数をプロットして回帰直線を求め、この回帰直線と
５−アミノレブリン酸濃度の逆数軸との交点よりミカエ
リス定数を求めた。求めたＫｍ値を表２に示す。

【００３１】比較例１ 用いる菌株をロドバクター・セファロイデスＣＲ−２８
６株とする以外は、実施例１と同様の処理を行い、求め
たＫｍ値を表２に示す。

【００３２】比較例２ 用いる菌株をロドバクター・セファロイデスＩＦＯ１２
２０３株とする以外は、実施例１と同様の処理を行い、
求めたＫｍ値を表２に示す。

【００３３】実施例２ ＣＲ−２８６の変異株の中から選ばれたＣＲ−３８６株
を、実施例１と同様に培養し、粗酵素液を調製し、幾つ
かの一定の５−アミノレブリン酸濃度の酵素反応液に対
してレブリン酸を各種濃度で添加した。これ以外は、実
施例１と同様にして酵素反応を行い、酵素反応速度を求
めた。この酵素反応速度の逆数とレブリン酸濃度をプロ
ットし、各５−アミノレブリン酸濃度について回帰直線
を求めた。それぞれの回帰直線は、一点で交わり、交点
のレブリン酸濃度軸の値から阻害物質定数（Ｋｉ値）を
求めた。この方法は、ディクソンの方法（上記の「酵素
反応機構」など参照）として知られている阻害物質の効
果を調べる一般的な方法であり、求められたＫｉ値は、
酵素と阻害物質の親和性を表している。一般的に、Ｋｉ
値がＫｍ値に比べて小さいほど、阻害剤の効果は大きく
なる。求めたＫｉ値は、表２に併せて示す。

【００３４】比較例３ 用いる菌株をロドバクター・セファロイデスＣＲ−２８
６株とする以外は、実施例２と同様の処理を行い、Ｋｉ
値を求めた。求めたＫｉ値は、表２に併せて示す。

【００３５】比較例４ 用いる菌株をロドバクター・セファロイデスＩＦＯ１２
２０３株とする以外は、実施例２と同様の処理を行い、
Ｋｉ値を求めた。求めたＫｉ値は、表２に併せて示す。

【００３６】

【表２】

【００３７】表２から明らかなように、ＣＲ−２８６の
変異株の中から、Ｋｍ値が親株（ＣＲ−２８６（比較例
１））に比べて増大している株を発見することができた
（実施例１参照）。この新たな変異株を、ＣＲ−３８６
株と命名し（微工研菌寄第１３１５９号）、以下の５−
アミノレブリン酸の製造例に供した。また、ＣＲ−３８
６は、５−アミノレブリン酸デヒドラターゼのレブリン
酸に対するＫｉ値が親株（ＣＲ−２８６（比較例３））
に比べて殆ど変化しておらず、５−アミノレブリン酸に
対する親和性のみが特異的に変化した株であることが判
り、この株のレブリン酸の阻害効果は、親株に比べて非
常に大きくなっていることがわかる（実施例２参照）。

【００３８】実施例３ 培地１に酵母エキス１０ｇ／Ｌとなるように加え、これ
を２１ｍｍφの試験管２本に、１０ｍＬづつを分注し、
１２１℃で１５分間滅菌し、冷却した。これにＣＲ−３
８６株を−白金耳植菌し、３０℃、５ｋｌｕｘの光照射
下の嫌気条件下で静置培養した。４８時間後、グリシン
とコハク酸をそれぞれ３０ｍＭと、レブリン酸を上記の
試験管の１本には５ｍＭを、別の１本には３０ｍＭをそ
れぞれ加え、さらに３０℃、５ｋｌｕｘの光照射下の嫌
気条件下で静置培養し、レブリン酸添加後、２４時間後
および４８時間後に生成した５−アミノレブリン酸をエ
ーリッヒ法により比色定量した。結果を表３に示す。

【００３９】比較例５ 使用した菌株をＣＲ−２８６株とする以外は、実施例３
と同様にして５−アミノレブリン酸を製造し、定量し
た。結果を表３に示す。

【００４０】比較例６ 使用した菌株をロドバクター・セファロイデスＩＦＯ１
２２０３とする以外は、実施例３と同様にして５−アミ
ノレブリン酸を製造し、定量した。結果を表３に示す。

【００４１】

【表３】

【００４２】表３から明らかなように、ＣＲ−３８６株
は、低濃度のレブリン酸の添加で、５−アミノレブリン
酸を著量に蓄積することがわかる。

【００４３】実施例４ ２Ｌの培地１に２０ｇの酵母エキスを加えた培地３を調
製し、５Ｌ容坂口フラスコに１Ｌづつ分注し、１２１℃
で１５分間滅菌し、室温に冷却した。培地２の１０ｍＬ
を分注し、上記と同様にして滅菌した２本の２１ｍｍφ
の試験管にて、４８時間、５ｋｌｕｘの光照射下で培養
したＣＲ−３８６株を、上記坂口フラスコに植菌した。
これを、好気条件下、３０℃、１００ｒｐｍで４８時間
振とう培養し、無菌的に遠心分離して集菌した後、１Ｌ
の培地３を含む１Ｌ容ル式瓶に無菌的に移して懸濁させ
た。これに、グリシンとコハク酸をそれぞれ６０ｍＭ
と、レブリン酸を３０ｍＭ加え、３０℃、５ｋｌｕｘの
光照射下の嫌気条件下で静置培養し、９６時間後に生成
した５−アミノレブリン酸をエーリッヒ法により比色定
量した結果、１．６ｇ／Ｌの５−アミノレブリン酸が生
産されていることが確認された。

【００４４】実施例５ 表４に示した組成の培地１Ｌを、内容量２Ｌの醗酵槽に
入れ、１２１℃で１５分間滅菌し、室温に冷却した。

【００４５】

【表４】

【００４６】上記の醗酵槽に、予め培地４を２００ｍＬ
入れた１Ｌ容の坂口フラスコで好気条件下で振とう培養
して増殖させたＣＲ−３８６を植菌し、好気条件下、３
０℃、１５０ｒｐｍ、０．１ｖ／ｖ／ｍで培養した。培
養期間中、１Ｎ水酸化ナトリウムおよび１Ｎ硫酸で、ｐ
Ｈを６．５から７．０の間に保持した。４８時間後、グ
リシンとコハク酸をそれぞれ３０ｍＭと、レブリン酸を
１５ｍＭを添加し、さらに酵母エキス１０ｇを無菌的に
添加して、上記と同じ条件で培養を続けた。レブリン酸
を添加してから４８時間後に生成した５−アミノレブリ
ン酸をエーリッヒ法により比色定量した結果、０．７５
ｇ／Ｌの５−アミノレブリン酸が生産されていることが
確認された。

【００４７】以上の実施例３，４，５から明らかなよう
に、培養期間の一部または全部を好気培養とした場合、
あるいは嫌気条件下でも光照射を行う場合、いずれの条
件においても、本発明の微生物ＣＲ−３８６株によれ
ば、５−アミノレブリン酸を高濃度で生産することがわ
かる。

【００４８】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明の５−アミ
ノレブリン酸に対するミカエリス定数の増加した５−ア
ミノレブリン酸デヒドラターゼ変異酵素を有する光合成
細菌を用いれば、５−アミノレブリン酸を高生産させる
ために添加する５−アミノレブリン酸デヒドラターゼ阻
害剤を、細菌の生育を妨げない範囲内のみの添加で充分
であることが、はじめて可能になった。したがって、本
発明によれば、５−アミノレブリン酸生産微生物の生育
が良好になり、この結果として５−アミノレブリン酸の
製造量も大幅に向上する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 堀田 康司 埼玉県幸手市権現堂1134−２ 株式会社 コスモ総合研究所 研究開発センター内 (56)参考文献 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔ ｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．13，Ｎｏ．８ （1991）ｐ．589−594 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C12N 1/20 C12P 13/00

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ロドバクターセファロイデス（Ｒｈｏｄ
   ｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ）に属し、５
   −アミノレブリン酸に対するミカエリス定数が野生株を
   １としたとき、１．２〜１００に増大した５−アミノレ
   ブリン酸デヒドラターゼ変異酵素を有することを特徴と
   する５−アミノレブリン酸生産微生物。
2. 【請求項２】 工業技術院微生物工業研究所に微工研菌
   寄第１３１５９号として寄託されていることを特徴とす
   る請求項１記載の５−アミノレブリン酸生産微生物。
3. 【請求項３】 請求項１，２に記載の微生物を用いるこ
   とを特徴とする５−アミノレブリン酸の製造方法。