JP3098332B2 - 異性体上純粋なイソソルビド−２−および−５−モノエステルの酵素的製造法並びにイソソルビド−２−および−５−ニトレートへのそれらの変換 - Google Patents
異性体上純粋なイソソルビド−２−および−５−モノエステルの酵素的製造法並びにイソソルビド−２−および−５−ニトレートへのそれらの変換Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は一般式Ｉ
【０００２】
【化７】
【０００３】（式中、Ｒは水素および置換またはハゲロ
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
る鏡像体上純粋であり、しかも異性体上純粋な化合物、
並びに一般式II
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
る鏡像体上純粋であり、しかも異性体上純粋な化合物、
並びに一般式II
【０００４】
【化８】
【０００５】（式中、Ｒは水素および置換またはハゲロ
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
る異性体上純粋な化合物生成のための酵素的製造法に関
する。この方法では、式III
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
る異性体上純粋な化合物生成のための酵素的製造法に関
する。この方法では、式III
【０００６】
【化９】
【０００７】を有するイソソルビド（1,4:3,6-ジアンヒ
ドロ-D- ソルビトール）が位置選択的酵素的エステル化
により一般式Ｉを有する異性体上純粋な化合物に選択的
に変換される。また、一般式IV
ドロ-D- ソルビトール）が位置選択的酵素的エステル化
により一般式Ｉを有する異性体上純粋な化合物に選択的
に変換される。また、一般式IV
【０００８】
【化１０】
【０００９】（式中、Ｒは水素および置換またはハゲロ
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
るイソソルビドのジエステルが酵素的加水分解またはア
ルコール分解により一般式IIを有する異性体上純粋な化
合物に選択的に変換される。実際にこの方法で定量的に
得られる一般式ＩおよびIIを有する異性体上純粋な化合
物は、異性体上純粋であるだけでなく鏡像体上純粋な製
薬物質、式Ｖのイソソルビド-2- ニトレートおよび式VI
のイソソルビド-5- ニトレートの製造のための出発物質
である。
ン化されていてもよいC1〜C17 アルキルを表す）を有す
るイソソルビドのジエステルが酵素的加水分解またはア
ルコール分解により一般式IIを有する異性体上純粋な化
合物に選択的に変換される。実際にこの方法で定量的に
得られる一般式ＩおよびIIを有する異性体上純粋な化合
物は、異性体上純粋であるだけでなく鏡像体上純粋な製
薬物質、式Ｖのイソソルビド-2- ニトレートおよび式VI
のイソソルビド-5- ニトレートの製造のための出発物質
である。
【００１０】
【化１１】
【００１１】このために、一般式Ｉを有する化合物が最
初にニトロ化され、その後アシル残基が開裂されて除か
れる。この方法では、式Ｖのイソソルビド-2- ニトレー
トが得られる。一般式IIを有する化合物から出発して、
式VIのイソソルビド-2- ニトレートが同様の方法で得ら
れる。式Ｖおよび式VIの両方の化合物は冠疾患、例え
ば、狭心症の治療に重要な治療薬である。
初にニトロ化され、その後アシル残基が開裂されて除か
れる。この方法では、式Ｖのイソソルビド-2- ニトレー
トが得られる。一般式IIを有する化合物から出発して、
式VIのイソソルビド-2- ニトレートが同様の方法で得ら
れる。式Ｖおよび式VIの両方の化合物は冠疾患、例え
ば、狭心症の治療に重要な治療薬である。
【００１２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】有機ニ
トレート、例えば、イソソルビド-2,5- ジニトレート(I
SD) は長年にわたって冠疾患、例えば、狭心症の治療に
使用されていた。生物中のこれらの化合物の代謝の研究
に於いて、イソソルビド-2- モノニトレートおよびイソ
ソルビド-5- モノニトレートはISD と同様の作用を有し
［例えば、R.L.Wendt,J.Pharmacol.Exp.Ther.180, 732
(1971)］、それによりモノニトレートの投与はISD より
も治療上の利点を有することが確立された。これらの化
合物の特別顕著な特徴はそれらの高い生物学的利用能お
よび長い半減期である。
トレート、例えば、イソソルビド-2,5- ジニトレート(I
SD) は長年にわたって冠疾患、例えば、狭心症の治療に
使用されていた。生物中のこれらの化合物の代謝の研究
に於いて、イソソルビド-2- モノニトレートおよびイソ
ソルビド-5- モノニトレートはISD と同様の作用を有し
［例えば、R.L.Wendt,J.Pharmacol.Exp.Ther.180, 732
(1971)］、それによりモノニトレートの投与はISD より
も治療上の利点を有することが確立された。これらの化
合物の特別顕著な特徴はそれらの高い生物学的利用能お
よび長い半減期である。
【００１３】現在に至るまで、イソソルビド-2- ニトレ
ートおよびイソソルビド-5- ニトレートの実用上の応用
に対する障害は、これらの化合物の複雑で、しかも殆ど
選択的ではない合成であった。これらの化合物の製造が
一連の刊行物および特許に記載されている［I.G.Czizma
dia,L.D.Hayward,Photochem.Photobiol.4, 657(1965);
M.Anteunisら,Org.Magnetic Resonance 3, 363(1971);
D.L.Hayward ら,Can.J.Chem.45, 2191(1967);DE275193
4;US特許4065488 号］。
ートおよびイソソルビド-5- ニトレートの実用上の応用
に対する障害は、これらの化合物の複雑で、しかも殆ど
選択的ではない合成であった。これらの化合物の製造が
一連の刊行物および特許に記載されている［I.G.Czizma
dia,L.D.Hayward,Photochem.Photobiol.4, 657(1965);
M.Anteunisら,Org.Magnetic Resonance 3, 363(1971);
D.L.Hayward ら,Can.J.Chem.45, 2191(1967);DE275193
4;US特許4065488 号］。
【００１４】複雑な分離法、例えば、クロマトグラフィ
ー、抽出、再結晶、誘導体化等を用いないで異性体上純
粋なイソソルビド-2- ニトレートまたはイソソルビド-5
- ニトレートを製造することは、これらの記載された方
法のいずれでも不可能である。このような精製工程は常
に収率のかなりの損失と関連し、これがこれらの製薬物
質を経済的に製造することを不可能にする。
ー、抽出、再結晶、誘導体化等を用いないで異性体上純
粋なイソソルビド-2- ニトレートまたはイソソルビド-5
- ニトレートを製造することは、これらの記載された方
法のいずれでも不可能である。このような精製工程は常
に収率のかなりの損失と関連し、これがこれらの製薬物
質を経済的に製造することを不可能にする。
【００１５】イソソルビド-2- ニトレートの製造の更に
選択的な方法がDOS 2903983 に記載されている。この方
法では、イソマンニドが最初に酸トラップの存在下でト
リフルオロメチルメタンスルホン酸ハライドにより、ま
たはトリフルオロメタン−無水スルホン酸で変換され
る。このようにして優先的に得られるイソマンニド-2-
トリフルオロメタンスルホン酸エステルとアルカリ、ア
ルカリ土類または有機ニトレートの反応は、環系のC(2)
炭素に於ける立体配置の反転により所望のイソソルビド
-2- ニトレートを生じる。
選択的な方法がDOS 2903983 に記載されている。この方
法では、イソマンニドが最初に酸トラップの存在下でト
リフルオロメチルメタンスルホン酸ハライドにより、ま
たはトリフルオロメタン−無水スルホン酸で変換され
る。このようにして優先的に得られるイソマンニド-2-
トリフルオロメタンスルホン酸エステルとアルカリ、ア
ルカリ土類または有機ニトレートの反応は、環系のC(2)
炭素に於ける立体配置の反転により所望のイソソルビド
-2- ニトレートを生じる。
【００１６】技術上の応用に於ける問題は比較的不十分
な収率である。技術上の応用に対する別の障害は、比較
的高価な試薬およびイソマンニドを調製することの困難
なことである。しかしながら、上記の反転が最初に安息
香酸または安息香酸の塩で行われ、その後、ニトロ化
し、次にDOS 2903927 に従ってエステル基を開裂して除
く場合に、イソソルビド-5- ニトレートが得られる。再
度、高価なイソマンニドが使用される。
な収率である。技術上の応用に対する別の障害は、比較
的高価な試薬およびイソマンニドを調製することの困難
なことである。しかしながら、上記の反転が最初に安息
香酸または安息香酸の塩で行われ、その後、ニトロ化
し、次にDOS 2903927 に従ってエステル基を開裂して除
く場合に、イソソルビド-5- ニトレートが得られる。再
度、高価なイソマンニドが使用される。
【００１７】イソソルビドで出発してイソソルビド-2-
ニトレートを調製する別の方法がDE3124410A1 に記載さ
れている［また、P.Stoss ら,Synthesis1987,174を参照
のこと］。この方法では、無水カルボン酸による５位の
イソソルビドの位置選択的アシル化が四酢酸鉛の如き金
属触媒の別の使用により達成され、一方、無触媒反応は
好ましくはイソソルビド-2- エステルをもたらす。この
ようにして得られた生成物は続いてニトロ化され、そし
てエステル基がエステル交換により開裂して除かれてイ
ソソルビド-2- ニトレートまたはイソソルビド-5- ニト
レートを生成する。
ニトレートを調製する別の方法がDE3124410A1 に記載さ
れている［また、P.Stoss ら,Synthesis1987,174を参照
のこと］。この方法では、無水カルボン酸による５位の
イソソルビドの位置選択的アシル化が四酢酸鉛の如き金
属触媒の別の使用により達成され、一方、無触媒反応は
好ましくはイソソルビド-2- エステルをもたらす。この
ようにして得られた生成物は続いてニトロ化され、そし
てエステル基がエステル交換により開裂して除かれてイ
ソソルビド-2- ニトレートまたはイソソルビド-5- ニト
レートを生成する。
【００１８】この方法の欠点は、治療に使用される化合
物の合成に於ける毒性金属塩の使用であることがわかっ
た。これらの反応は位置選択的であるが、位置特異的で
はない。また、所望のアシル化生成物の方向への反応条
件の調節は決して容易なことではないようである。酵素
的方法は、イソソルビド-5- ニトレートまたはイソソル
ビド-2- ニトレートの合成の主要化合物である異性体上
純粋なイソソルビド-2- モノエステルまたはイソソルビ
ド-5- モノエステルの製造に関して未だ記載されていな
い。
物の合成に於ける毒性金属塩の使用であることがわかっ
た。これらの反応は位置選択的であるが、位置特異的で
はない。また、所望のアシル化生成物の方向への反応条
件の調節は決して容易なことではないようである。酵素
的方法は、イソソルビド-5- ニトレートまたはイソソル
ビド-2- ニトレートの合成の主要化合物である異性体上
純粋なイソソルビド-2- モノエステルまたはイソソルビ
ド-5- モノエステルの製造に関して未だ記載されていな
い。
【００１９】要するに、イソソルビド-2- ニトレートお
よびイソソルビド-5- ニトレートの製造に関して従来知
られている全ての方法は、方法の点で重大な欠陥または
経済上の欠点を有することが確認されている。簡単且つ
安価に行うことができる一般式ＩおよびIIを有するイソ
ソルビド-5-モノエステルおよびイソソルビド-2- モノ
エステルの製造に関して、高度に選択的な方法が必要と
される。加えて、それは、簡単且つ安価で入手し得るイ
ソソルビドから出発して、一般式ＩおよびIIを有する両
化合物が高収率で選択的且つ異性体上純粋に得ることが
でき、そして複雑な精製工程を避けることができる方法
であるべきである。また、これは、簡単且つ安価な方法
で異性体上純粋な製薬物質、イソソルビド-2- ニトレー
トおよびイソソルビド-5- ニトレートの製造を可能にす
る。
よびイソソルビド-5- ニトレートの製造に関して従来知
られている全ての方法は、方法の点で重大な欠陥または
経済上の欠点を有することが確認されている。簡単且つ
安価に行うことができる一般式ＩおよびIIを有するイソ
ソルビド-5-モノエステルおよびイソソルビド-2- モノ
エステルの製造に関して、高度に選択的な方法が必要と
される。加えて、それは、簡単且つ安価で入手し得るイ
ソソルビドから出発して、一般式ＩおよびIIを有する両
化合物が高収率で選択的且つ異性体上純粋に得ることが
でき、そして複雑な精製工程を避けることができる方法
であるべきである。また、これは、簡単且つ安価な方法
で異性体上純粋な製薬物質、イソソルビド-2- ニトレー
トおよびイソソルビド-5- ニトレートの製造を可能にす
る。
【００２０】
【課題を解決するための手段】本発明は、(a) イソソル
ビド-5- モノエステル(I) がイソソルビド(III) の酵素
的エステル化により選択的に、異性体上純粋に、且つ高
収率で得られ、そしてイソソルビド-2- モノエステル(I
I)がイソソルビド-2,5- ジエステルの酵素的加水分解ま
たはアルコール分解により選択的に、異性体上純粋に、
且つ高収率で得られる（これらの化合物は(b) イソソル
ビド-2- ニトレート(V) およびイソソルビド-5- ニトレ
ート(VI)に化学的に変換し得る）このような方法を記載
する。
ビド-5- モノエステル(I) がイソソルビド(III) の酵素
的エステル化により選択的に、異性体上純粋に、且つ高
収率で得られ、そしてイソソルビド-2- モノエステル(I
I)がイソソルビド-2,5- ジエステルの酵素的加水分解ま
たはアルコール分解により選択的に、異性体上純粋に、
且つ高収率で得られる（これらの化合物は(b) イソソル
ビド-2- ニトレート(V) およびイソソルビド-5- ニトレ
ート(VI)に化学的に変換し得る）このような方法を記載
する。
【００２１】本発明は請求項１〜９および以下に詳しく
記載される。過去数年、酵素はそれらの高度に選択的な
性質のために有機合成で魅力的な試薬であることが次第
に実証されてきた。これは、鏡像選択的加水分解または
エステル化による鏡像体上純粋なヒドロキシ化合物の製
造にしばしば使用されていたヒドロラーゼ（エステラー
ゼ、リパーゼ、プロテアーゼ）に特に当てはまる。
記載される。過去数年、酵素はそれらの高度に選択的な
性質のために有機合成で魅力的な試薬であることが次第
に実証されてきた。これは、鏡像選択的加水分解または
エステル化による鏡像体上純粋なヒドロキシ化合物の製
造にしばしば使用されていたヒドロラーゼ（エステラー
ゼ、リパーゼ、プロテアーゼ）に特に当てはまる。
【００２２】驚くことに、このようなエステルヒドロラ
ーゼはまた既に鏡像体上純粋なイソソルビド(III) 中の
2-ヒドロキシ基と5-ヒドロキシ基の位置選択的分別に格
別に適し、こうしてまた、異性体上純粋なイソソルビド
-5- モノエステル(I) またはイソソルビド-2- モノエス
テル(II)の選択的製造を可能にすることが今、見出され
た。
ーゼはまた既に鏡像体上純粋なイソソルビド(III) 中の
2-ヒドロキシ基と5-ヒドロキシ基の位置選択的分別に格
別に適し、こうしてまた、異性体上純粋なイソソルビド
-5- モノエステル(I) またはイソソルビド-2- モノエス
テル(II)の選択的製造を可能にすることが今、見出され
た。
【００２３】市販されているイソソルビドだけでなく、
それから無水酢酸によるアシル化により容易に、定量的
に、しかも安価に得ることができるイソソルビド-2,5-
ジアセテート(IV,R=CH3)が、以下に記載される反応の唯
一の出発物質として利用できる。原則として、全てのイ
ソソルビド-2,5- ジエステルが下記の加水分解およびア
ルコール分解の出発物質として適する。ジアセテート
が、コストの理由からだけでなく、それから生成される
化合物の低分子量のために使用されることが好ましい。
全ての場合、エステル基は一時的な保護基であり、これ
らはニトレートの製造のために再度開裂して除かれる必
要がある。
それから無水酢酸によるアシル化により容易に、定量的
に、しかも安価に得ることができるイソソルビド-2,5-
ジアセテート(IV,R=CH3)が、以下に記載される反応の唯
一の出発物質として利用できる。原則として、全てのイ
ソソルビド-2,5- ジエステルが下記の加水分解およびア
ルコール分解の出発物質として適する。ジアセテート
が、コストの理由からだけでなく、それから生成される
化合物の低分子量のために使用されることが好ましい。
全ての場合、エステル基は一時的な保護基であり、これ
らはニトレートの製造のために再度開裂して除かれる必
要がある。
【００２４】イソソルビド-2,5- ジアセテート(IV,R=CH
3)［2,5-ジ-O- アセチル,1,4:3,6-ジアンヒドロ-D- ソ
ルビトール］の酵素的加水分解はpH７のリン酸塩水溶液
中でヒドロラーゼの存在下で行われる。酵素的加水分解
中に、pH値はかなり低下し、そして自動滴定装置（また
はぜん動ポンプ）による１モルの水酸化ナトリウム溶液
の連続添加によりpH７で一定に保たれる。
3)［2,5-ジ-O- アセチル,1,4:3,6-ジアンヒドロ-D- ソ
ルビトール］の酵素的加水分解はpH７のリン酸塩水溶液
中でヒドロラーゼの存在下で行われる。酵素的加水分解
中に、pH値はかなり低下し、そして自動滴定装置（また
はぜん動ポンプ）による１モルの水酸化ナトリウム溶液
の連続添加によりpH７で一定に保たれる。
【００２５】使用されるジアセテートは固体であるの
で、この二相反応は記載されたように進行するが、非常
に遅く進行する。反応媒体への少量のTHF の添加は驚く
ことに反応のかなりの加速をもたらすことがわかった。
酵素的変換は極めて高い選択性で進行し、唯一、加水分
解されるのはC(5)位のアセテート基である。このように
して、異性体上純粋なイソソルビド-2- アセテート(II,
R=CH3)が実際に定量的な収率（＞90％単離）で得られる
（図１を参照のこと）。
で、この二相反応は記載されたように進行するが、非常
に遅く進行する。反応媒体への少量のTHF の添加は驚く
ことに反応のかなりの加速をもたらすことがわかった。
酵素的変換は極めて高い選択性で進行し、唯一、加水分
解されるのはC(5)位のアセテート基である。このように
して、異性体上純粋なイソソルビド-2- アセテート(II,
R=CH3)が実際に定量的な収率（＞90％単離）で得られる
（図１を参照のこと）。
【００２６】原則として、全てのヒドロラーゼは、それ
らが高選択性を有することを条件として、酵素的加水分
解を行うのに適する。シュードモナス株またはムコル・
ミエヘイ(Mucor miehei)株からの市販のリパーゼが好ま
しく、それにより、シュードモナス・フルオレセンス(P
seudomonas fluorescens) からの市販のリパーゼ(Amano
Pharmaceuticals Co.,Boehringer Mannheim) が特に適
することがわかった。
らが高選択性を有することを条件として、酵素的加水分
解を行うのに適する。シュードモナス株またはムコル・
ミエヘイ(Mucor miehei)株からの市販のリパーゼが好ま
しく、それにより、シュードモナス・フルオレセンス(P
seudomonas fluorescens) からの市販のリパーゼ(Amano
Pharmaceuticals Co.,Boehringer Mannheim) が特に適
することがわかった。
【００２７】酵素の必要量は生体触媒の加水分解活性に
依存する。それぞれの場合の基質と酵素の最良の比は実
験の特別の反応条件下で実験により決定される必要があ
る。できるだけ高い空間時間収率を得るように努められ
るべきである。反応はpH５〜９で行われる。pH６〜８が
好ましく、pH７が特に好ましい。このような反応は、1:
10〜10:1の比の固体または液体の基質と水性緩衝液から
なる二相系中で通常行われる。1:10〜1:2 の比が特に好
ましい。
依存する。それぞれの場合の基質と酵素の最良の比は実
験の特別の反応条件下で実験により決定される必要があ
る。できるだけ高い空間時間収率を得るように努められ
るべきである。反応はpH５〜９で行われる。pH６〜８が
好ましく、pH７が特に好ましい。このような反応は、1:
10〜10:1の比の固体または液体の基質と水性緩衝液から
なる二相系中で通常行われる。1:10〜1:2 の比が特に好
ましい。
【００２８】このような加水分解は、一定のpH値の維持
を容易にするために、緩衝液の存在下で通常行われる。
しかしながら、緩衝液は、その方法をうまく行うための
必須の前提条件ではない。また、酵素的加水分解は低い
塩含量の水溶液中で行うことができる。また、pHはその
他の塩基、例えば、アンモニアを使用することにより一
定に保つことができる。
を容易にするために、緩衝液の存在下で通常行われる。
しかしながら、緩衝液は、その方法をうまく行うための
必須の前提条件ではない。また、酵素的加水分解は低い
塩含量の水溶液中で行うことができる。また、pHはその
他の塩基、例えば、アンモニアを使用することにより一
定に保つことができる。
【００２９】上記のように、補助溶媒（例えば、THF 、
アセトン等）の添加は、その方法の成功に必須であるこ
とがわかった。このような酵素的加水分解は通常０〜70
℃の温度で行われる。それらを酵素の最適温度（これは
通常30〜60℃であるが、約65℃の最高温度以下で良好で
ある）で行うことが特に好ましい。しかしながら、その
反応はまた室温で行われてもよい。この範囲はしばしば
便宜上の理由で実験室で選ばれる。
アセトン等）の添加は、その方法の成功に必須であるこ
とがわかった。このような酵素的加水分解は通常０〜70
℃の温度で行われる。それらを酵素の最適温度（これは
通常30〜60℃であるが、約65℃の最高温度以下で良好で
ある）で行うことが特に好ましい。しかしながら、その
反応はまた室温で行われてもよい。この範囲はしばしば
便宜上の理由で実験室で選ばれる。
【００３０】原則として、C-1 〜C-18の鎖長を有する脂
肪酸残基を含む全てのイソソルビド-2,5- ジエステル
が、その方法を行うのに適する。全ての場合、それらは
勿論使用される生体触媒の天然基質である。上記のよう
に、ジアセテートが実用上および経済上の理由から好ん
で使用された。選択的な酵素的加水分解で唯一生成され
るイソソルビド-2- アセテート(II,R=CH3)が簡単な抽出
により反応混合物から単離され、溶媒を除去した後に、
純粋な形態で結晶化する。
肪酸残基を含む全てのイソソルビド-2,5- ジエステル
が、その方法を行うのに適する。全ての場合、それらは
勿論使用される生体触媒の天然基質である。上記のよう
に、ジアセテートが実用上および経済上の理由から好ん
で使用された。選択的な酵素的加水分解で唯一生成され
るイソソルビド-2- アセテート(II,R=CH3)が簡単な抽出
により反応混合物から単離され、溶媒を除去した後に、
純粋な形態で結晶化する。
【００３１】酵素的加水分解の別法として、同じ変換が
また酵素的アルコール分解により行うことができる。こ
の方法では、水性の二相系が均一な有機反応媒体により
置換される。水に代えて、アルコールが求核性反応成分
として使用される。これに関して、イソソルビド-2,5-
ジアセテート(IV,R=CH3)がアセトンに溶解され、過剰の
n-ヘプタノールが添加され、そしてエステル基が完全に
開裂して除かれるまで混合物が攪拌される。
また酵素的アルコール分解により行うことができる。こ
の方法では、水性の二相系が均一な有機反応媒体により
置換される。水に代えて、アルコールが求核性反応成分
として使用される。これに関して、イソソルビド-2,5-
ジアセテート(IV,R=CH3)がアセトンに溶解され、過剰の
n-ヘプタノールが添加され、そしてエステル基が完全に
開裂して除かれるまで混合物が攪拌される。
【００３２】再度、開裂して除かれるのは唯一C(5)のエ
ステル基であり、この方法ではイソソルビド-2- アセテ
ートが実際に定量的に得られる。使用される酵素、選択
される反応条件および出発物質として使用されるイソソ
ルビド-2,5- ジエステルに関する上記の説明が同様に当
てはまる。原則として、全ての有機溶媒は、使用される
ヒドロラーゼがそれらの中で未だ充分な活性を有するこ
とを条件として、反応媒体として適する。これは、好ま
しくは基質と酵素の最適の比と同様にして実験により特
別の反応条件下で決定される必要がある。
ステル基であり、この方法ではイソソルビド-2- アセテ
ートが実際に定量的に得られる。使用される酵素、選択
される反応条件および出発物質として使用されるイソソ
ルビド-2,5- ジエステルに関する上記の説明が同様に当
てはまる。原則として、全ての有機溶媒は、使用される
ヒドロラーゼがそれらの中で未だ充分な活性を有するこ
とを条件として、反応媒体として適する。これは、好ま
しくは基質と酵素の最適の比と同様にして実験により特
別の反応条件下で決定される必要がある。
【００３３】原則として、このような酵素的アルコール
分解を行うのに適した求核性を有する全てのアルコール
が好適である。実用上の理由のため、特に生成物を簡単
な方法で単離し、処理するために、そのエステル（例え
ば、ヘプチルアセテート）が蒸留により容易に分離し得
るアルコールが選ばれることが好ましい。イソソルビド
-2,5- ジエステルの上記の加水分解およびアルコール分
解の別法として、イソソルビド(III) を酵素でエステル
化することがまた可能であり、更にこれは同じ高い選択
性を有する。これに関して、イソソルビドがアセトンに
溶解され、再度、それがアシルドナーとして酢酸ビニル
を使用してヒドロラーゼの存在下でアシル化される。酵
素的エステル化は再度極めて高い選択性で進行し、そし
てイソソルビドの５位に対して特異的である。この方法
では、イソソルビド-5- アセテート(I,R=CH3) が実際に
定量的な反応で得られる（図２を参照のこと）。
分解を行うのに適した求核性を有する全てのアルコール
が好適である。実用上の理由のため、特に生成物を簡単
な方法で単離し、処理するために、そのエステル（例え
ば、ヘプチルアセテート）が蒸留により容易に分離し得
るアルコールが選ばれることが好ましい。イソソルビド
-2,5- ジエステルの上記の加水分解およびアルコール分
解の別法として、イソソルビド(III) を酵素でエステル
化することがまた可能であり、更にこれは同じ高い選択
性を有する。これに関して、イソソルビドがアセトンに
溶解され、再度、それがアシルドナーとして酢酸ビニル
を使用してヒドロラーゼの存在下でアシル化される。酵
素的エステル化は再度極めて高い選択性で進行し、そし
てイソソルビドの５位に対して特異的である。この方法
では、イソソルビド-5- アセテート(I,R=CH3) が実際に
定量的な反応で得られる（図２を参照のこと）。
【００３４】原則として、全ての有機溶媒は、それらが
それ自体で例えばアルコールのようにエステル化し得な
いことを条件として、反応媒体として適する。それらの
適性は特定の反応条件下で実験により決定されることが
好ましい。原則として、全てのアシルドナー（カルボン
酸、カルボン酸エステル、無水カルボン酸、グリセリ
ド、アルケニルエステル等）が、このような酵素的エス
テル化を行うのに適する。ビニルエステルが好ましい。
何となれば、これらは、酵素的エステル化が、不可逆ア
シル移動がある条件下で行われることを可能にするから
である。この反応で放出されるビニルアルコールは自然
に互変異性化して反応平衡から不可逆的に除去されるこ
とになるガス状アセトアルデヒドを生成する。C1〜C18
の脂肪酸鎖長を有する全てのビニルエステルが原則とし
てこれに適する。安価なアシルドナーとして酢酸ビニル
が特に好ましい。
それ自体で例えばアルコールのようにエステル化し得な
いことを条件として、反応媒体として適する。それらの
適性は特定の反応条件下で実験により決定されることが
好ましい。原則として、全てのアシルドナー（カルボン
酸、カルボン酸エステル、無水カルボン酸、グリセリ
ド、アルケニルエステル等）が、このような酵素的エス
テル化を行うのに適する。ビニルエステルが好ましい。
何となれば、これらは、酵素的エステル化が、不可逆ア
シル移動がある条件下で行われることを可能にするから
である。この反応で放出されるビニルアルコールは自然
に互変異性化して反応平衡から不可逆的に除去されるこ
とになるガス状アセトアルデヒドを生成する。C1〜C18
の脂肪酸鎖長を有する全てのビニルエステルが原則とし
てこれに適する。安価なアシルドナーとして酢酸ビニル
が特に好ましい。
【００３５】原則として、全てのヒドロラーゼは、それ
らが必要とされる高選択性を有することを条件として、
酵素的エステル化を行うのに適する。再度、シュードモ
ナス・フルオレセンス株からの市販のリパーゼ(Amano P
harmaceuticals Co.,Boehringer Mannheim) が好まし
い。また、そのエステル化は、その他のヒドロラーゼ、
例えば、ムコル・ミエヘイからのリパーゼで可能であ
る。再度、それは高度に選択的であることがわかった
が、その反応は非常に遅く、変換が不完全のままであ
り、したがって生成物を単離するための分離法を必要と
する。
らが必要とされる高選択性を有することを条件として、
酵素的エステル化を行うのに適する。再度、シュードモ
ナス・フルオレセンス株からの市販のリパーゼ(Amano P
harmaceuticals Co.,Boehringer Mannheim) が好まし
い。また、そのエステル化は、その他のヒドロラーゼ、
例えば、ムコル・ミエヘイからのリパーゼで可能であ
る。再度、それは高度に選択的であることがわかった
が、その反応は非常に遅く、変換が不完全のままであ
り、したがって生成物を単離するための分離法を必要と
する。
【００３６】極めて高い選択性、両方の立体異性体の相
補的生成および上記の方法に於ける反応に関する簡単な
操作の結果として、その方法成功の技術的適用のための
全ての必須要件が満たされる。こうして、両方の異性
体、イソソルビド-5- アセテート(I,R=CH3) およびイソ
ソルビド-2- アセテート(II,R=CH3) が、複雑な精製工
程を用いないで、しかも実際に定量的に異性体上純粋な
形態で選択的に得ることができる。それ故、それらは、
相当するイソソルビド-2- ニトレート(V) およびイソソ
ルビド-5- ニトレート(VI)への変換のための出発物質と
しても利用できる。
補的生成および上記の方法に於ける反応に関する簡単な
操作の結果として、その方法成功の技術的適用のための
全ての必須要件が満たされる。こうして、両方の異性
体、イソソルビド-5- アセテート(I,R=CH3) およびイソ
ソルビド-2- アセテート(II,R=CH3) が、複雑な精製工
程を用いないで、しかも実際に定量的に異性体上純粋な
形態で選択的に得ることができる。それ故、それらは、
相当するイソソルビド-2- ニトレート(V) およびイソソ
ルビド-5- ニトレート(VI)への変換のための出発物質と
しても利用できる。
【００３７】これに関して、イソソルビド-2- アセテー
トは、例えば、最初に氷酢酸または無水酢酸中で硝酸で
ニトロ化され、続いてアセテート基がメタノール中で炭
酸カリウムで開裂されて除かれる。この方法では、イソ
ソルビド-5- ニトレートが異性体上純粋な形態で優れた
収率で得られる（図１）。イソソルビド-5- アセテート
は同様にしてイソソルビド-2- ニトレートに変換し得る
（図２）。全ての合成された生成物の性質が表１に要約
される。
トは、例えば、最初に氷酢酸または無水酢酸中で硝酸で
ニトロ化され、続いてアセテート基がメタノール中で炭
酸カリウムで開裂されて除かれる。この方法では、イソ
ソルビド-5- ニトレートが異性体上純粋な形態で優れた
収率で得られる（図１）。イソソルビド-5- アセテート
は同様にしてイソソルビド-2- ニトレートに変換し得る
（図２）。全ての合成された生成物の性質が表１に要約
される。
【００３８】酵素的反応工程の驚く程に高い選択性は製
薬上重要なこれらの化合物を調製するための極めて簡単
な方法（これは商用規模で容易に適用し得る）をもたら
した。本発明を下記の実施例で更に説明する。 表１： イソソルビド-2- アセテート：無色の結晶性物質；融点
75〜76℃； TLC(ジエチルエーテル）：Ｒf =0.28 ；［α］D 20=+7
7.1°(c=1.12 、酢酸エチル） イソソルビド-5- アセテート：無色の粘着性の液体 TLC(ジエチルエーテル）：Ｒf =0.30 ；［α］D 20=+11
7.9 °(c=1.36 、酢酸エチル） イソソルビド-2- ニトレート：無色の結晶性物質；融点
52〜53℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.11 イソソルビド-5- ニトレート：無色の結晶性物質；融点
88℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.10 ； ［α］D 20=+181 °(c=0.99 、酢酸エチル） 2-O-アセチル- イソソルビド-5- ニトレート：無色の結
晶性物質；融点95〜96℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.36 ； ［α］D 20=+163 °(c=1.00 、酢酸エチル） 5-O-アセチル- イソソルビド-2- ニトレート：無色の高
度に粘着性の液体 TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.38 ；
薬上重要なこれらの化合物を調製するための極めて簡単
な方法（これは商用規模で容易に適用し得る）をもたら
した。本発明を下記の実施例で更に説明する。 表１： イソソルビド-2- アセテート：無色の結晶性物質；融点
75〜76℃； TLC(ジエチルエーテル）：Ｒf =0.28 ；［α］D 20=+7
7.1°(c=1.12 、酢酸エチル） イソソルビド-5- アセテート：無色の粘着性の液体 TLC(ジエチルエーテル）：Ｒf =0.30 ；［α］D 20=+11
7.9 °(c=1.36 、酢酸エチル） イソソルビド-2- ニトレート：無色の結晶性物質；融点
52〜53℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.11 イソソルビド-5- ニトレート：無色の結晶性物質；融点
88℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.10 ； ［α］D 20=+181 °(c=0.99 、酢酸エチル） 2-O-アセチル- イソソルビド-5- ニトレート：無色の結
晶性物質；融点95〜96℃； TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.36 ； ［α］D 20=+163 °(c=1.00 、酢酸エチル） 5-O-アセチル- イソソルビド-2- ニトレート：無色の高
度に粘着性の液体 TLC(ヘキサン：ジエチルエーテル1:1 ）：Ｒf =0.38 ；
【００３９】
【実施例】 イソソルビド-2- アセテート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-2- アセテート］ 実施例１：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.64g(11.5
ミリモル）をリン酸塩緩衝液20ml、pH7.0 に懸濁し、そ
してシュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(S
AMII,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加する。その
pH値を、オートビュレットを使用して１モルの水酸化ナ
トリウム溶液の添加により一定に保つ。１モルの水酸化
ナトリウム溶液10.95 mlが消費された後(40 時間後）、
調製物を24時間にわたって酢酸エチルで連続的に抽出す
る。有機相をMgSO4 で乾燥し、そして溶媒を除去する。
粗生成物をジエチルエーテル中でカラムクロマトグラフ
ィー（シリカゲル60）により分離する。
- ソルビトール-2- アセテート］ 実施例１：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.64g(11.5
ミリモル）をリン酸塩緩衝液20ml、pH7.0 に懸濁し、そ
してシュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(S
AMII,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加する。その
pH値を、オートビュレットを使用して１モルの水酸化ナ
トリウム溶液の添加により一定に保つ。１モルの水酸化
ナトリウム溶液10.95 mlが消費された後(40 時間後）、
調製物を24時間にわたって酢酸エチルで連続的に抽出す
る。有機相をMgSO4 で乾燥し、そして溶媒を除去する。
粗生成物をジエチルエーテル中でカラムクロマトグラフ
ィー（シリカゲル60）により分離する。
【００４０】収量：イソソルビド494mg(3.38ミリモル)
(29％) 無色の結晶性物質 融点61〜62℃ イソソルビド-2- アセテート180mg(0.96ミリモル)(８
％) 無色の結晶性物質 融点70〜71℃ イソソルビド-2,5- ジアセテート1070mg(4.65 ミリモ
ル)(40％) 無色の高度に粘着性の液体 実施例２：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.30g(10ミ
リモル）を無水THF5mlとリン酸塩緩衝液20ml、pH7.0 に
溶解し、そしてシュードモナス・フルオレセンスからの
リパーゼ(SAMII,Amano Pharmaceuticals) 400mg を添加
し、そして１モルの水酸化ナトリウム溶液10.03 mlが消
費された後(48 時間後）、それを実施例１に従って処理
する。
(29％) 無色の結晶性物質 融点61〜62℃ イソソルビド-2- アセテート180mg(0.96ミリモル)(８
％) 無色の結晶性物質 融点70〜71℃ イソソルビド-2,5- ジアセテート1070mg(4.65 ミリモ
ル)(40％) 無色の高度に粘着性の液体 実施例２：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.30g(10ミ
リモル）を無水THF5mlとリン酸塩緩衝液20ml、pH7.0 に
溶解し、そしてシュードモナス・フルオレセンスからの
リパーゼ(SAMII,Amano Pharmaceuticals) 400mg を添加
し、そして１モルの水酸化ナトリウム溶液10.03 mlが消
費された後(48 時間後）、それを実施例１に従って処理
する。
【００４１】収量：イソソルビド-2- アセテート1.60g
(8.50ミリモル)(85％) 無色の結晶性物質 融点72〜73℃ 実施例３：イソソルビド-2,5- ジアセテート6.91g(30ミ
リモル）を無水THF15ml 、リン酸塩緩衝液60ml、pH7.0
に溶解し、そしてシュードモナス・フルオレセンスから
のリパーゼ(SAMII,Amano Pharmaceuticals) 500mg を添
加し、そして１モルの水酸化ナトリウム溶液29.07 mlが
消費された後(24 時間後）、それを実施例１に従って処
理する。
(8.50ミリモル)(85％) 無色の結晶性物質 融点72〜73℃ 実施例３：イソソルビド-2,5- ジアセテート6.91g(30ミ
リモル）を無水THF15ml 、リン酸塩緩衝液60ml、pH7.0
に溶解し、そしてシュードモナス・フルオレセンスから
のリパーゼ(SAMII,Amano Pharmaceuticals) 500mg を添
加し、そして１モルの水酸化ナトリウム溶液29.07 mlが
消費された後(24 時間後）、それを実施例１に従って処
理する。
【００４２】収量：イソソルビド-2- アセテート5.00g
(26.7ミリモル)(89％) 無色の結晶性物質 融点75〜76℃ 実施例４：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.30g(10ミ
リモル）をアセトン15ml、n-ヘプタノール5 mlに溶解
し、シュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(S
AMII,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加し、そして
それを室温で攪拌する。12日後に、酵素を濾過により除
去し、それをアセトンで充分洗浄し、溶媒並びに過剰の
n-ヘプタノールおよび生成したヘプチルアセテートを蒸
留により除去する。
(26.7ミリモル)(89％) 無色の結晶性物質 融点75〜76℃ 実施例４：イソソルビド-2,5- ジアセテート2.30g(10ミ
リモル）をアセトン15ml、n-ヘプタノール5 mlに溶解
し、シュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(S
AMII,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加し、そして
それを室温で攪拌する。12日後に、酵素を濾過により除
去し、それをアセトンで充分洗浄し、溶媒並びに過剰の
n-ヘプタノールおよび生成したヘプチルアセテートを蒸
留により除去する。
【００４３】収量：イソソルビド-2- アセテート1.71g
(9.09ミリモル)(91％) 無色の結晶性物質 融点75〜76℃ イソソルビド-5- アセテート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-5- アセテート］ 実施例５：イソソルビド1.46g(10ミリモル）をアセトン
20ml、酢酸ビニル2.77ml(30 ミリモル) に溶解し、そし
てシュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(SAM
II,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加し、そしてそ
れを室温で攪拌する。３日後に、酵素を濾過により除去
し、それをアセトンで充分洗浄し、そして溶媒を除去す
る。粗生成物をバルブチューブで蒸留する。
(9.09ミリモル)(91％) 無色の結晶性物質 融点75〜76℃ イソソルビド-5- アセテート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-5- アセテート］ 実施例５：イソソルビド1.46g(10ミリモル）をアセトン
20ml、酢酸ビニル2.77ml(30 ミリモル) に溶解し、そし
てシュードモナス・フルオレセンスからのリパーゼ(SAM
II,Amano Pharmaceuticals) 200mg を添加し、そしてそ
れを室温で攪拌する。３日後に、酵素を濾過により除去
し、それをアセトンで充分洗浄し、そして溶媒を除去す
る。粗生成物をバルブチューブで蒸留する。
【００４４】収量：イソソルビド-5- アセテート1.70g
(9.03ミリモル)(90％) 無色の粘着性の液体 沸点125 ℃/0.08 ミリバール 実施例６：イソソルビド14.61g(100ミリモル）をアセト
ン150ml 、酢酸ビニル22ml(300ミリモル) に溶解し、そ
してリパーゼSAMII500mgを添加し、そしてそれを室温で
６日間攪拌する。続いて、酵素を濾過により除去し、そ
れをアセトンで充分洗浄し、溶媒を除去し、そして粗生
成物を高真空中で蒸留する。
(9.03ミリモル)(90％) 無色の粘着性の液体 沸点125 ℃/0.08 ミリバール 実施例６：イソソルビド14.61g(100ミリモル）をアセト
ン150ml 、酢酸ビニル22ml(300ミリモル) に溶解し、そ
してリパーゼSAMII500mgを添加し、そしてそれを室温で
６日間攪拌する。続いて、酵素を濾過により除去し、そ
れをアセトンで充分洗浄し、溶媒を除去し、そして粗生
成物を高真空中で蒸留する。
【００４５】収量：イソソルビド-5- アセテート16.90g
(89.9 ミリモル)(90％) 無色の粘着性の液体 沸点130 ℃/0.09 ミリバール イソソルビド-2- ニトレート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-2- ニトレート］ 実施例７：65％の硝酸0.2 mlを０℃で無水酢酸0.8 mlと
混合し、そしてジクロロメタン0.2 mlとイソソルビド-5
- アセテート330mg(1.75ミリモル) の溶液をこの温度で
滴下して添加する。それを室温で更に20分間攪拌し、ジ
クロロメタン0.4 mlと水１mlを添加し、そして相を分離
する。有機相を希薄なアンモニア溶液で、それが中性に
なるまで抽出し、それをMgSO4 で乾燥し、そして溶媒を
除去する。
(89.9 ミリモル)(90％) 無色の粘着性の液体 沸点130 ℃/0.09 ミリバール イソソルビド-2- ニトレート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-2- ニトレート］ 実施例７：65％の硝酸0.2 mlを０℃で無水酢酸0.8 mlと
混合し、そしてジクロロメタン0.2 mlとイソソルビド-5
- アセテート330mg(1.75ミリモル) の溶液をこの温度で
滴下して添加する。それを室温で更に20分間攪拌し、ジ
クロロメタン0.4 mlと水１mlを添加し、そして相を分離
する。有機相を希薄なアンモニア溶液で、それが中性に
なるまで抽出し、それをMgSO4 で乾燥し、そして溶媒を
除去する。
【００４６】収量：5-O-アセチル- イソソルビド-2- ニ
トレート400mg(1.7 ミリモル)(98 ％) 無色の高度に粘着性の液体 5-O-アセチル- イソソルビド-2- ニトレート400mg(1.7
ミリモル) をメタノール10mlおよび炭酸カリウム50mgに
添加し、そしてその混合物を室温で12時間攪拌する。続
いて溶媒を除去し、残渣を水２mlに吸収させ、そして毎
回10mlの酢酸エチルで４回抽出する。溶媒を、合わせた
有機相から除去し、そして残渣を高真空中で乾燥する。
トレート400mg(1.7 ミリモル)(98 ％) 無色の高度に粘着性の液体 5-O-アセチル- イソソルビド-2- ニトレート400mg(1.7
ミリモル) をメタノール10mlおよび炭酸カリウム50mgに
添加し、そしてその混合物を室温で12時間攪拌する。続
いて溶媒を除去し、残渣を水２mlに吸収させ、そして毎
回10mlの酢酸エチルで４回抽出する。溶媒を、合わせた
有機相から除去し、そして残渣を高真空中で乾燥する。
【００４７】収量：イソソルビド-2- ニトレート300mg
(1.56ミリモル) (89 ％) 無色の結晶性物質 融点52〜53℃ イソソルビド-5- ニトレート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-5- ニトレート］ 実施例８：65％の硝酸1.4 mlを０℃で無水酢酸5.5 mlと
混合し、そしてジクロロメタン1.4 mlとイソソルビド-2
- アセテート2.6g(13.8 ミリモル) の溶液をこの温度で
滴下して添加する。それを室温で更に20分間攪拌し、ジ
クロロメタン2.8 mlと水6.9ml を添加し、そして相を分
離する。有機相を希薄なアンモニア溶液で、それが中性
になるまで抽出し、それをMgSO4 で乾燥し、そして溶媒
を除去する。
(1.56ミリモル) (89 ％) 無色の結晶性物質 融点52〜53℃ イソソルビド-5- ニトレート［1,4:3,6-ジアンヒドロ-D
- ソルビトール-5- ニトレート］ 実施例８：65％の硝酸1.4 mlを０℃で無水酢酸5.5 mlと
混合し、そしてジクロロメタン1.4 mlとイソソルビド-2
- アセテート2.6g(13.8 ミリモル) の溶液をこの温度で
滴下して添加する。それを室温で更に20分間攪拌し、ジ
クロロメタン2.8 mlと水6.9ml を添加し、そして相を分
離する。有機相を希薄なアンモニア溶液で、それが中性
になるまで抽出し、それをMgSO4 で乾燥し、そして溶媒
を除去する。
【００４８】収量：2-O-アセチル- イソソルビド-5- ニ
トレート2.73g(11.7ミリモル)(85 ％) 無色の結晶性物質 融点95〜96℃ 2-O-アセチル- イソソルビド-5- ニトレート800mg(3.4
ミリモル) をメタノール20mlおよび炭酸カリウム100mg
に添加し、そしてその混合物を室温で14時間攪拌する。
続いて溶媒を除去し、残渣を水20mlに吸収させ、そして
毎回20mlの酢酸エチルで６回抽出する。溶媒を、合わせ
た有機相から除去し、そして残渣を高真空中で乾燥す
る。
トレート2.73g(11.7ミリモル)(85 ％) 無色の結晶性物質 融点95〜96℃ 2-O-アセチル- イソソルビド-5- ニトレート800mg(3.4
ミリモル) をメタノール20mlおよび炭酸カリウム100mg
に添加し、そしてその混合物を室温で14時間攪拌する。
続いて溶媒を除去し、残渣を水20mlに吸収させ、そして
毎回20mlの酢酸エチルで６回抽出する。溶媒を、合わせ
た有機相から除去し、そして残渣を高真空中で乾燥す
る。
【００４９】収量：イソソルビド-5- ニトレート590mg
(3.1 ミリモル) (91 ％) 無色の結晶性物質 融点88℃
(3.1 ミリモル) (91 ％) 無色の結晶性物質 融点88℃
【図１】イソソルビド-5- ニトレート(VI)の化学酵素的
製造を示す。
製造を示す。
【図２】イソソルビド-2- ニトレート(V) の化学酵素的
製造を示す。
製造を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12P 17/18 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (9)
- 【請求項１】 一般式IV 【化１】 を有するイソソルビド-2,5- ジエステルをpH範囲５〜９
でヒドロラーゼと反応させることを特徴とする一般式II 【化２】 （各式中、Ｒは水素およびC1〜C17 アルキル並びにハロ
ゲン化アルキルである）を有する異性体上純粋なイソソ
ルビド-2- モノエステルの製造法。 - 【請求項２】 イソソルビド-2,5- ジアセテート(IV;R=
CH３)を基質として使用する請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 シュードモナス・フルオレセンスからの
リパーゼをヒドロラーゼとして使用する請求項１〜２に
記載の方法。 - 【請求項４】 有機溶媒に溶解した一般式IVを有するイ
ソソルビド-2,5- ジエステルをアルコールの存在下でヒ
ドロラーゼとインキュベートすることを特徴とする一般
式IIを有する異性体上純粋なイソソルビド-2- モノエス
テルの製造法。 - 【請求項５】 シュードモナス・フルオレセンスからの
リパーゼをヒドロラーゼとして使用する請求項４に記載
の方法。 - 【請求項６】 一般式III 【化３】 を有する有機溶媒に溶解したイソソルビドをヒドロラー
ゼの存在下でアシル供与体と反応させることを特徴とす
る一般式Ｉ 【化４】 （式中、Ｒは水素およびC1〜C17 アルキル並びにハロゲ
ン化アルキルである）を有する異性体上純粋なイソソル
ビド-5- モノエステルの製造法。 - 【請求項７】 シュードモナス・フルオレセンスからの
リパーゼをヒドロラーゼとして使用する請求項６に記載
の方法。 - 【請求項８】 請求項１に記載の方法により、一般式II
を有する異性体上純粋なイソソルビド-2-モノエステル
を製造し、該イソソルビド-2- モノエステルをニトロ化
し、続いてそのエステル基を加水分解により除去し、こ
うして異性体上純粋なイソソルビド-5- ニトレートを単
離することを特徴とする式VI 【化５】 を有するイソソルビド-5- ニトレートの製造法。 - 【請求項９】 請求項６に記載の方法により、一般式Ｉ
を有する異性体上純粋なイソソルビド-5- モノエステル
を製造し、該イソソルビド-5- モノエステルをニトロ化
し、続いてそのエステル基を加水分解により除去し、こ
うして異性体上純粋なイソソルビド-2- ニトレートを単
離することを特徴とする式Ｖ 【化６】 を有する異性体上純粋なイソソルビド-2- ニトレートの
製造法。
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