JP3073309B2

JP3073309B2 - シアル酸結合５−デアザフラビン系化合物

Info

Publication number: JP3073309B2
Application number: JP04102150A
Authority: JP
Inventors: 義弘池内; 栄記出家; 文郎米田
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 1992-03-27
Filing date: 1992-03-27
Publication date: 2000-08-07
Anticipated expiration: 2015-08-07
Also published as: JPH05271271A

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、制癌あるいは抗ウィル
ス活性を有する5-デアザフラビン類と、シアル酸類がＯ
−グリコシド結合した、新規な化合物に関する。

【０００２】

【従来の技術と問題点】制癌作用を持つ化合物としては
現在までに、多くの物質が開発されている。例えば、代
謝拮抗剤、抗生物質、放射性元素、ホルモン剤、アルキ
ル化剤など様々な構造を持つ化合物が提案されている。
また、昨今では、ＡＩＤＳを引き起こすＨＩＶウィルス
に対する有効な治療薬の開発も急務とされ、ＡＺＴなど
数種の化合物が提案され、それなりの効果をあげてい
る。しかしながら、これらの化合物は、癌細胞あるいは
ウィルス感染細胞に対し有効にダメージを与えるもの
の、正常細胞にも多かれ少なかれ、損傷を与えてしまう
ため、毒性、副作用が強いという欠点を有している。こ
のため、毒性の低い制癌剤の開発がこの分野で強く望ま
れている。

【０００３】ところで、フラビン化合物は、ビタミンＢ
₂として知られるリボフラビンやフラビンアデニンジヌ
クレオチド（ＦＡＤ）等に含まれ、生体内で補酵素とし
て、基質の脱水素、電子伝達などの重要な機能を担って
いる。このフラビン誘導体と細胞の老化や癌との関わり
が近年注目を浴びており、制癌作用を持つ化合物も提案
されている。この制癌作用を更に増強する目的で、フラ
ビンの５位の窒素原子を炭素原子で置き換えた5-デアザ
フラビン誘導体を合成する試みもなされており、そのう
ちいくつかのものは、強い制癌活性、並びに抗ＨＩＶ活
性を有することが報告されている。しかしながら、これ
らの物質においても、生体適合性に問題があり、治療薬
として用いた場合には正常細胞への毒性、副作用が懸念
される。

【０００４】

【問題を解決する手段】本発明者は、かかる状況に鑑
み、制癌活性あるいは抗ＨＩＶウィルス活性を持つ5-デ
アザフラビン誘導体で、アルキルアルコール基を持つ化
合物とシアル酸がＯ−グリコシド結合した化合物を設計
した。シアル酸は、糖蛋白質や糖脂質で知られる複合糖
質の糖鎖の末端に含まれる酸性糖で、その多彩な生理機
能のため、近年益々その重要性を増してきている。シア
ル酸の骨格は、5-Ｎ−アセチル、または5-Ｎ−グリコリ
ルノイラミン酸であって、この他に、水酸基の幾つかが
Ｏ−アセチル化されたものも存在し、現在、シアル酸と
は、これら誘導体の総称と理解されている。この他に、
近年サケ科の授精卵から発見された、ノイラミン酸の、
５位のアミノ基が水酸基に変換された化合物（ＫＤＮ）
は、シアリダーゼによる加水分解を受けづらいという性
質があるが、これもシアル酸類の一種とみなされること
がある。

【０００５】シアル酸の多彩な機能には、例えば、糖鎖
を持つ化合物（複合糖質）の血中半減期の制御が挙げら
れる。すなわち、複合糖質の糖鎖にシアル酸が結合する
ことにより、その化合物の血中半減期が飛躍的に延長さ
れ、また、逆にシアル酸が糖鎖から切り出されると、そ
の化合物は速やかに血中から排除される。この性質が、
シアル酸を含む複合糖質を細胞表面にもつ細胞（例えば
リンパ球や赤血球など）の半減期をも制御していると考
えられている。また、シアル酸は、多彩なマスキング効
果も有する。すなわち、化合物にシアル酸が付与される
ことで、その物質はリンパ球や種々のレクチン等からマ
スクされて異物として認識され難くなり、結果的に、抗
原性や、毒性が回避されるのである。この他にも、シア
ル酸には、ウィルスのレセプター活性や、タンパク質へ
の、プロテアーゼ抵抗性の付与等まだまだ多くの生理機
能がある。

【０００６】以上述べたようなシアル酸の生理機能を考
慮すると、本発明者が設計した化合物は、5-デアザフラ
ビンのみの化合物に比べて以下の点で、優れている。 5-デアザフラビン類の親水性が高まる。シアル酸は
糖質の特徴として多くの水酸基をもつ他、有機酸として
はかなり強いカルボン酸（ｐＫａ＝２．７）も有するの
で、親水性が向上する。血中半減期が向上する。前述のように、シアル酸が
導入されることで血中半減期が向上するので、１回の投
与量が非常に少なくでき、血中に長期間滞留するため、
正常でない細胞すなわち癌細胞や感染細胞にのみ選択毒
性が期待できる。そのうえ、前述のマスキング効果によ
り、抗原性や異物反応がマスクされ、副作用が抑えられ
る。さらに、5-デアザフラビンに長鎖アルキル基な
どの非極性基を導入しておけば、シアル酸と5-デアザフ
ラビン残基が表面に露出したリポソームを作成すること
が出来、この形で投与することで更に有効な治療が行え
る。

【０００７】以上の設計図に基づき、鋭意研究を重ねた
結果、すでに報告のある、制癌活性または抗ＨＩＶウィ
ルス活性を有する5-デアザフラビン類の骨格に、アルキ
ルアルコール基を導入した化合物の合成を行い、既知の
方法によってシアル酸の水酸基をアセチル基で保護し、
さらに還元末端をハロゲンで活性化して調製した化合物
とカップリングを行うことによって、効率よく目的の化
合物を合成できることを見いだして、本発明を完成し
た。

【０００８】すなわち本発明は一般式ＩまたはIIで表さ
れる新規なシアル酸結合5-デアザフラビン系化合物に関
わる。

【０００９】

【化６】

【化７】

【００１０】式中Ｒは、Ｎ−アセチル（ＣＨ₃ＣＯＮＨ
- 、ＡｃＮとも表記する）基、Ｎ−グリコリル（ＨＯＣ
Ｈ₂ＣＯＮＨ- 、ＧｃＮとも表記する）基、または水酸
基を表し、ｄＦｌは、下記一般式、III 、IV、またはＶ
で表される5-デアザフラビン化合物である。すなわち、
本発明の化合物は、制癌作用あるいは抗ウィルス作用を
有する5-デアザフラビン類とシアル酸とが、α- あるい
はβ- Ｏ-グリコシド結合した化合物であり、また、逆
に5-デアザフラビン側からみると、5-デアザフラビンの
基本骨格を形成するピリミジン環、ピリジン環、及びベ
ンゼン環のいずれかにシアル酸が結合した化合物であ
る。

【００１１】

【化８】

【化９】

【化１０】

【００１２】式中Ｒ₁は、水素原子、アルキル基、ハロ
ゲン置換アルキル基、フェニル置換アルキル基またはフ
ェニル基を表す。このうち、フェニル置換アルキル基と
は、例えば、ベンジル基などを指す。Ｒ2 は、水素原
子、アルキルアミノ基、フェニル置換アルキルアミノ
基、ヒドロキシ置換アルキルアミノ基、ハロゲン置換ア
ルキル基、アルコキシ基、ピリジル基、フェニル基、ハ
ロゲン原子もしくはトリフルオロメチル基、ニトロ基、
低級アルコキシ基のうちの一つで置換されたフェニル基
を表す。

【００１３】Ｒ₃は、水素原子、ニトロ基、シアノ基、
アルキル基、低級アルコキシ基、フェニル置換低級アル
コキシ基、低級アルキルアミノ基、フェニル置換低級ア
ルキルアミノ基または低級アルキルスルフォニル基を表
す。Ｙは、メチレン基またはアルキルアミノ基〔例えば
-ＮＨ-(ＣＨ₂) _n- や- Ｎ（ＣＨ₃) -(ＣＨ₂) _n-]
などである。Ｘは、セレン原子、硫黄原子、酸素原子、
または基＝Ｎ−Ｒ₄を表す。ここで、Ｒ₄とは、アルキ
ル基、シクロアルキル基、フェニル置換低級アルキル
基、フェニル基、ハロゲン原子、もしくは低級アルコキ
シ基のうちの一つで置換されたフェニル基、低級アルキ
ルジ置換フェニル基、ナフチル基、低級アルキルジ置換
アミノナフチル基を表す。ここでＮは、２〜６の整数を
表す。

【００１４】一方、一般式Ｉ及びIIのシアル酸に関して
は、Ｒ₀がアセチル基のもの、（Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸：ＮＡＮＡ）、グリコリル基のもの（Ｎ−グリコリ
ルノイラミン酸：ＮＧＮＡ）、水酸基のもの（ＫＤＮ）
を用いる。シアル酸の中ではＮＡＮＡが最も著名で、通
常はヒト正常細胞からはＮＡＮＡのみが検出される。し
かしながら、細胞が癌化するに伴ってＮＧＮＡを含む糖
鎖が検出されて来ることが知られている。この意味で、
ＮＧＮＡを含む化合物の合成は、癌細胞の糖鎖合成酵素
系を標的にできる可能性がある。また、ＫＤＮは、シア
ル酸のグリコシド結合を切断する酵素であるシアリダー
ゼに抵抗する物質として知られており、ＫＤＮを結合さ
せることで、ＮＡＮＡよりもさらに血中半減期が延びる
ことが考えられる。また、天然の糖鎖では、シアル酸は
すべてα- 結合体として見いだされ、シアリダーゼもα
- 結合体しか切断しないことが知られている。よって、
β- 結合体も血中半減期を延長するために有効であると
考えられる。

【００１５】一般式Ｉ及びIIで表される本発明化合物の
具体例を表１〜表４に示す。

【００１６】

【表１】

【表２】

【表３】

【表４】

【００１７】注）Ｒ₃及びＹの置換基の前の数字は、各
置換基の5-デアザフラビン環上の位置をあらわす。例え
ば、6-ＮＯ₂は、5-デアザフラビン環上の7位に置換され
ているニトロ基を表す。次に、本発明のシアル酸結合5-
デアザフラビン系化合物の合成方法について説明する。（１）5-デアザフラビン類の合成。アルコール性水酸基を持った5-デアザフラビン化合物
は、特に制限されないが、例えば以下の製法のいずれか
で製造する事が出来る。製法に関してはこの他にも様々
な方法がある。

【００１８】製法Ａ 6-Ｎ- 置換- アミノウラシル(1) は、常法により6-クロ
ロウラシルと第一アミンとの縮合によって製造する。
(1) と適当なｏ- ハロゲノベンズアルデヒド(2) をジメ
チルホルムアミド(MF)中で3 〜24時間時間加熱還流す
る。反応液を必要ならば減圧濃縮し、析出した結晶ない
しは残渣を再結晶して、対応する、5-デアザフラビン誘
導体(1) を得る。この際、Ｒ₁または、Ｒ₄として、ア
ルキルアルコール (-(CH₂ )_n-OH)基を持つ原料を用い
ると、それぞれ、3 位または10位にアルキルアルコール
基を有する5-デアザフラビンが合成できる。同様に、Ｒ
₃として、ｏ- 位、ｍ- 位、ｐ- 位にアルキルアルコー
ル基を持つｏ- ハロゲノベンズアルデヒド(2) を用いる
と、ｏ- 位では9 位、ｍ- 位では6位または8 位、ｐ-
位では7 位にアルキルアルコール基を持つ5-デアザフラ
ビンが合成できる。アルキルアルコールの水酸基を、例
えばベンジル（bzl)基やベンジルオキシカルボニル
（Ｚ）基で保護したまま合成を行い、接触還元などで保
護基を除去し、最後に過酸化水素や、ジエチルアゾジカ
ルボキシレート（ＤＡＤ）などで酸化を行って、目的物
を得る場合もある。

【００１９】

【化１１】

【００２０】製法Ａ’ 製法Ａによって得られる3-無置換（Ｒ₁＝Ｈ）の5-デア
ザフラビン及び、これと等モルの、Ｘ-(ＣＨ₂) _nＯＨ
（Ｘ：ハロゲン）などの、ハロゲノアルキルアルコール
を、炭酸カリウム存在下ＤＭＦ中で加熱することで、3
位にアルキルアルコール基を有する5-デアザフラビン誘
導体が合成できる。

【００２１】製法Ｂ製法Ａによって得られる、6、7、8、9 位のいずれかに脱離
基（例えば -ＯＣＨ₃、ハロゲンなど）を有する5-デア
ザフラビン及び、これと等モルの、アルキルアルコール
基を持つ強い求核剤、〔例えばヒドロキシアルキルアミ
ン（Ｈ₂Ｎ-(ＣＨ₂) _n- ＯＨ）など〕を炭酸カリウム
存在下ＤＭＦ中で加熱することで、対応する位置にアル
キルアルコール基を有する5-デアザフラビン誘導体が合
成出来る。

【００２２】

【化１２】

【００２３】製法Ｃ 6-アニリノウラシル誘導体(6) とアルデヒド類(7) とを
溶融し、またはＤＭＦ中で長時間加熱還流して、対応す
る5-デアザフラビン誘導体(8) を得る。Ｒ₁、Ｒ₃、Ｒ
₄のうちどれかは、アルキルアルコール基を有するもの
とする。

【００２４】

【化１３】

【００２５】製法Ｄテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）あるいはＤＭＦ中で水素
化ナトリウム（ＮａＨ）によって置換チオフェノールあ
るいは置換セレノフェノール(9) をナトリウム塩にして
おき、3-Ｎ−置換-6- クロロウラシルを加えて加熱還流
することにより、6-アリールチオ（またはセレノ）ウラ
シル(10)を得る。次いで、(10)をビルスマイヤー試薬
（ＤＭＦ＋ＰＯＣｌ₃) で処理し、対応する6-アリール
チオ（またはセレノ)-5-ホルミルウラシル(11)を得る。
(11)をポリリン酸（ＰＰＡ）中で加熱し、10- チア（ま
たはセレナ)-5-デアザフラビン類(12)を得る。Ｒ₁また
はＲ₃にアルキルアルコール基を持たせておくか、また
は、製法Ａ’や製法Ｃのようにあとからアルキルアルコ
ール基を導入しても良い。

【００２６】

【化１４】

【００２７】製法Ｄ’ 炭酸カリウムの存在下で置換フェノールを3-Ｎ−置換-6
- クロロウラシルと共に加熱還流して、6-フェノキシウ
ラシル(13)を得る。以後は製法Ｄと同様にして、10- オ
キサ-5- デアザフラビン類を得る。

【００２８】(2) シアル酸原料のシアル酸に関しては、ＮＡＮＡは最近は大量に入
手可能である。ＮＧＮＡは、牛脳や牛初乳から生成でき
る。ＫＤＮは、マンノースとピルビン酸を基質として用
い、シアル酸アルドラーゼの逆反応によって合成するこ
とができる。 (3) 5-デアザフラビン類とシアル酸との反応シアル酸は常法に従い、カルボン酸をメチルエステル
で、水酸基をアセチル基で保護し、還元末端をハロゲン
で活性化する。ここで、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭
素のいずれかである。幾通りかの方法があるが、代表的
なものを製法Ｅに挙げる。こうして得られるシアル酸の
保護体を、以後アセチルハロゲノシアル酸と呼ぶ。

【００２９】

【化１５】

【００３０】5-デアザフラビンとシアル酸のカップリン
グは、通常行われるKoenigs-Knorr 反応によって行う。
すなわち、アセチルハロゲノシアル酸と5-デアザフラビ
ンの等モルを、有機溶媒に溶解あるいは懸濁し、適当量
のモレキュラーシーブズを加え、10〜15分間窒素置換を
行った後、1 〜3 倍量の触媒を加えて、遮光下10〜30時
間撹拌する。触媒等不溶部を濾別した後、溶媒を留去
し、シリカゲルカラムクロマトによって、原料、α- 結
合体、β- 結合体及び副生成物を分離する。有機溶媒と
しては特に限定されないが、たとえば、ＴＨＦやジオキ
サン、塩化メチレン、四塩化炭素、ＤＭＦ等が挙げられ
る。触媒も特に限定されないが、通常使用される銀塩や
水銀塩が有効である。一例を挙げると、炭酸銀、サリチ
ル酸銀、トリフルオロメチルスルフォン酸銀などであ
る。

【００３１】Koenigs-Knorr 反応は、ＳＮ−１型反応で
あるため、原理的にα- 結合体とβ- 結合体が両方生成
する（化１６参照）。また、シアル酸の場合はこの他
に、Ｃ３位のプロトンがβ脱離して、二重結合を生じる
ものもある（ｅｎｅ体；化１６）。よって、反応後は、
原料、α- 結合体、β- 結合体とｅｎｅ体を分離する必
要があるが、本発明者は、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにおいて、適当な溶媒系を用いることで、これ
らが効率よく分離できることを見いだした。この溶媒系
は、例えば、クロロホルム／メタノール系や、ベンゼン
／ヘキサン系、トルエン／エタノール系等である。

【００３２】

【化１６】

【００３３】5-デアザフラビンとのカップリング終了後
の、シアル酸の脱保護は、常法によって行う。すなわ
ち、保護体をメタノール／１Ｎ- ＮａＯＨ混液（3:1 か
ら10:1位）中室温で 2〜24時間撹拌し、陽イオン交換樹
脂で中和の後、溶媒を留去し、必要ならばシリカゲルカ
ラムクロマトグラフィー（例えばクロロホルム／メタノ
ール系などで溶出する）を実施した後結晶化を行う。化
合物によっては、結晶化しないものも多い。また、シア
ル酸のα- グリコシド結合は、酸性下で比較的不安定で
あるため、化合物の安定化のために、シアル酸残基のカ
ルボン酸をナトリウム塩のままで調製する事も多い。こ
の場合は非常に結晶化し難くなるので、純度を確認した
後凍結乾燥する。

【００３４】以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳し
く説明する。もちろん本発明は以下の例で制限されるも
のではない。

【００３５】

【実施例】

実施例１2−クロロ−4,7,8,9-テトラ- Ｏ- アセチル−Ｎ−アセ
チルノイラミン酸メチルエステル（アセチルクロロ−Ｎ
ＡＮＡ；製法Ｅ）ＮＡＮＡ（0.1 mol)をピリジン／無水酢酸混合液（５：
１）中４℃で24時間撹拌して水酸基をアセチル化する。
反応液から溶媒を留去した後残渣をベンゼンに溶かし、
ジアゾメタンのジエチルエーテル溶液を適下し、カルボ
ン酸をメチルエステルにする。溶媒を留去した後、残渣
を塩化アセチルに溶解し４℃で24時間撹拌の後反応液を
減圧濃縮する。エーテル／ヘキサン／石油エーテル系で
再結晶を行い、アセチルクロロ−ＮＡＮＡを得た（収率
95％）。

【００３６】実施例２3-フェニル-10-(3- ヒドロキシプロピル-)-5- デアザフ
ラビン（製法Ａ） 3-フェニル-6-(3-ヒドロキシプロピル-)アミノウラシル
(10 mmol) 及びo-ブロモベンズアルデヒド（11mmol）を
ＤＭＦ中100 ℃で20時間加熱した後反応液を減圧濃縮
し、析出した結晶をＤＭＦ中から再結晶して、3-フェニ
ル-10-(3-ヒドロキシプロピル-)-5- デアザフラビン
（中間体１）を得た（収率95％) 。

【００３７】実施例３3-フェニル-10-（3-Ｎ- アセチルノイラミニルプロピル
-)-5- デアザフラビン（化合物１）中間体１（5 mmol）とアセチルクロロ−ＮＡＮＡ（5 mm
ol）を塩化メチレンに溶解し、モレキュラーシーブズを
加え、15分間窒素置換を行った後、トリフルオロメチル
スルフォン酸銀（6 mmol）を加えて、遮光下15時間撹拌
した。触媒等不溶部を濾別した後、溶媒を留去し、シリ
カゲルカラムクロマト（クロロホルム／メタノール系：
以後ＣＭ系と呼ぶ）によって、原料、α- 結合体、β-
結合体及びｅｎｅ体を分離した。このα- 及びβ- 結合
体をメタノール／１Ｎ- ＮａＯＨ系(5:1) 中室温で20時
間撹拌し、反応液をダウケミカル社製Ｄｏｗｅｘ５０
（Ｈ型）で中和した後減圧濃縮し、水／エーテル系から
再結晶して、化合物１を得た（以下α- 及びβ- 結合体
をそれぞれ１α、１βのように呼ぶ）。中間体１からの
化合物１の反応収率（１α＋１β）は７５％、α：β：
ｅｎｅ体の生成比は１：１．２：０．５であった。融点： α体 276-282℃ β体 258-265℃ 元素分析値（％）：Ｃ₃₁Ｈ₃₄Ｏ₁₁Ｎ₄ ＣＨＮ計算値５８．２９５．３７８．７８実測値 α体５８．３４５．３４８．７０ β体５８．２８５．３９８．７５

【００３８】実施例４3-（2-ヒドロキシエチル-)-6- ニトロ-10-ラウリル-5-
デアザフラビン（製法Ａ’ ） 6-ラウリルアミノウラシル(20 mmol) 及び2-ブロモ-2-
ニトロベンズアルデヒド（20 mol）をＤＭＦ中100 ℃で
18時間加熱した後反応液を減圧濃縮し、析出した結晶を
ＤＭＦ中から再結晶して、6-ニトロ-10-ラウリル-5- デ
アザフラビン（中間体２）を得た（収率93％）。中間体
２（10 mmol)及びエチレンブロモヒドリン（12 mmol)を
ＤＭＦに溶解し、炭酸カリウム（50 mmol)存在下100 ℃
で5 時間撹拌した後反応液を減圧濃縮し、析出した結晶
をＤＭＦから再結晶して3-(2- ヒドロキシエチル-)-6-
ニトロ-10-ラウリル-5- デアザフラビン（中間体３）を
得た（収率97％）。

【００３９】実施例５3-（2-Ｎ−アセチルノイラミニルエチル-)-6- ニトロ-1
0-ラウリル-5- デアザフラビン（化合物８）中間体３（5 mmol）とアセチルクロロ−ＮＡＮＡ（5 mm
ol）を塩化メチレンに溶解し、モレキュラーシーブズを
加え、15分間窒素置換を行った後、トリフルオロメチル
スルフォン酸銀（6 mmol）を加えて、遮光下15時間撹拌
した。触媒等不溶部を濾別した後、溶媒を留去し、シリ
カゲルカラムクロマト（ＣＭ系）によって、原料、α-
結合体、β- 結合体及びｅｎｅ体を分離した。このα-
及びβ- 結合体をメタノール／１Ｎ- ＮａＯＨ系(5:1)
中室温で20時間撹拌し、反応液をダウケミカル社製Ｄｏ
ｗｅｘ５０（Ｈ型）で中和した後減圧濃縮し、水／エー
テル系から再結晶して、化合物８α、８βを得た。中間
体３からの化合物８の反応収率（８α＋８β）は７６
％、α：β：ｅｎｅ体の生成比は１：１：０．３であっ
た。融点： α体 276-282℃ β体 275-283℃ 元素分析値（％）：Ｃ₃₆Ｈ₅₁Ｏ₁₃Ｎ₅ ＣＨＮ計算値５６．７４６．７５９．２０実測値 α体５６．５９６．６９９．２８ β体５６．６９６．７６９．２５

【００４０】実施例６3-メチル-8-(2-ヒドロキシエチル）メチルアミノ-10-ラ
ウリル -5-デアザフラビン（製法Ｂ）製法Ａで合成した、3-メチル-8- フルオロ-10-ラウリル
-5- デアザフラビン（20mmol）及び、2-ヒドロキシメチ
ルアミン(12 mmol) をＤＭＦ中110 ℃で１時間加熱した
後反応液を減圧濃縮し、析出した結晶をＤＭＦから再結
晶して3-メチル-8-(2-ヒドロキシエチル）メチルアミノ
-10-ラウリル-5- デアザフラビン（中間体４）を得た
（97％）。

【００４１】実施例７3-メチル-8-(2-Ｎ−アセチルノイラミニルエチル）メチ
ルアミノ-10-ラウリル-5- デアザフラビン（化合物１
１）中間体４（5 mmol）とアセチルクロロ−ＮＡＮＡ（5 mm
ol）を塩化メチレンに溶解し、モレキュラーシーブズを
加え、10分間窒素置換を行った後、トリフルオロメチル
スルフォン酸銀（6 mmol）を加えて、遮光下18時間撹拌
する。触媒等不溶部を濾別した後、溶媒を留去し、シリ
カゲルカラムクロマト（ＣＭ系）によって、原料、α-
結合体、β- 結合体及びｅｎｅ体を分離した。このα-
及びβ- 結合体をメタノール／１Ｎ- ＮａＯＨ系(5:1)
中室温で20時間撹拌し、反応液をダウケミカル社製Ｄｏ
ｗｅｘ５０（Ｈ型）で中和した後減圧濃縮し、水／エー
テル系から再結晶して、化合物１１を得た（以下α- 及
びβ- 結合体をそれぞれ１１α、１１βのように呼
ぶ）。中間体４からの化合物１１の反応収率（１１α＋
１１β）は７８％、α：β：ｅｎｅ体の生成比は1 : 1.
1 : 0.5 であった。融点： α体 276-282℃ β体 235-240℃ 元素分析値（％）：Ｃ₃₈Ｈ₅₇Ｏ₁₁Ｎ₅ ＣＨＮ計算値６０．０８７．５１９．２２実測値 α体６０．０３７．４９９．２１ β体５９．９９７．５５９．２３

【００４２】実施例８3-(2- ヒドロキシエチル-)-7- t-ブチル-10-セレナ-5-
デアザフラビン（製法Ｄ）ＴＨＦ中でp-第三ブチルセ
レノフェノールナトリウム塩（20 mmol)に6-クロロウラ
シル（22 mmol)を滴下し、28時間加熱還流後反応液を減
圧濃縮し、残渣を氷水に注入後酢酸エチルで抽出する。
シリカゲルカラムクロマト（ＣＭ系）を実施して、6-(p
-t- ブチルフェニルセレノウラシルを得た。次いで、こ
れをＤＭＦ／ＰＯＣｌ₃(5：１）中60℃で加熱し、残渣
を氷水に注入後酢酸エチルで抽出した。シリカゲルカラ
ムクロマト（ＣＭ系）を実施して、6-（4-t-ブチルセレ
ノ）-5- ホルミルウラシルを得た。これをポリ燐酸中 1
00℃で加熱して、3-（2-ヒドロキシエチル-)-7- t-ブチ
ル-10-セレナ-5- デアザフラビン（中間体５）を得た
（収率64％）。中間体５（10 mmol)及びエチレンブロモ
ヒドリン（12 mmol)をＤＭＦに溶解し、炭酸カリウム
（50 mmol)存在下100 ℃で5 時間撹拌した後反応液を減
圧濃縮し、析出した結晶をクロロホルムから再結晶して
3- (2-ヒドロキシエチル)-7-t- ブチル-10-ラウリル-5-
デアザフラビン（中間体６）を得た（収率94％）。

【００４３】実施例９3- (2-Ｎ−アセチルノイラミニルエチル-)-7- t-ブチル
-10-セレナ-5- デアザフラビン（化合物１５）中間体６（5 mmol）とアセチルクロロ−ＮＡＮＡ（5 mm
ol）を塩化メチレンに溶解し、モレキュラーシーブズを
加え、15分間窒素置換を行った後、トリフルオロメチル
スルフォン酸銀（6 mmol）を加えて、遮光下21時間撹拌
した。触媒等不溶部を濾別した後、溶媒を留去し、シリ
カゲルカラムクロマト（ＣＭ系）によって、原料、α-
結合体、β- 結合体及びｅｎｅ体を分離した。このα-
及びβ- 結合体をメタノール／１Ｎ- ＮａＯＨ系(5:1)
中室温で20時間撹拌し、反応液をダウケミカル社製Ｄｏ
ｗｅｘ５０（Ｈ型）で中和した後減圧濃縮し、水／エー
テル系から再結晶して、化合物１５α、１５βを得た。
中間体６からの化合物１５の反応収率（１５α＋１５
β）は７２％、α：β：ｅｎｅ体の生成比は１：１．
１：０．３であった。融点： α体 246-259℃ β体 248-258℃ 元素分析値（％）：Ｃ₂₈Ｈ₃₅Ｏ₁₁Ｎ₃ＳｅＣＨＮ計算値５０．３１５．２４６．２９実測値 α体５０．３９５．１９６．３１ β体５０．３３５．２０６．２７

【００４４】前記表１〜表４に記載した本発明化合物
で、実施例２〜実施例９で触れなかった化合物について
も同様にして相当する出発物質から、それぞれの製法に
よって合成した。このようにして得られた本発明化合物
の物性を表５に示す。

【００４５】

【表５】

【００４６】注１）収率とは、原料の5-デアザフラビン
からのα体＋β体の収率である。注２）Ｃ−５（δ値）とはＮＭＲ分析における5-デアザ
フラビン残基のの５位の炭素に結合しているプロトンの
δ値（重水中）を表す。注３）Ｃ−３'(eq)(δ値）とはＮＭＲ分析におけるシア
ル酸残基のＣ−３’位のエクァトリアルプロトンのδ値
（重水中）を表す。同アクシャルのプロトンはアルキル
基と重なることが多く、同定不可能であった。注４）表中ｄ）は分解点を表す。

【００４７】本発明の化合物は、種々の癌細胞に対して
抗腫瘍活性を示し、また、シアル酸が結合することで、
水に対する溶解度の上昇や、血中半減期の延長、毒性の
回避など生体適合性が増大しているので、結果として、
元々抗腫瘍活性を持つ5-デアザフラビンに比べて、更に
制癌剤としての有用性が上昇している。以下の実験結果
により、本発明の優れた点を説明する。

【００４８】実験１溶解度試験本発明の化合物と、カップリング前の5-デアザフラビン
との、水に対する溶解度を比較した。結果を表６に示
す。なお、以下の実験では、シアル酸とカップリングす
る前の5-デアザフラビン化合物には、表１〜４に示した
化合物番号にセロをつけてあらわすことにする。たとえ
ば、前述の実施例の中間体１，３，４，６は、それぞれ
１−０，８−０，１１−０，１５−０とあらわす。化合
物１〜１５は、全てナトリウム塩とし、中性域での溶解
度を測定した。表６の結果から、本発明の化合物は、水
への溶解度が格段に上昇していることがわかる。以後の
実験では、本発明化合物はすべてナトリウム塩として使
用した。

【００４９】

【表６】

【００５０】実験２各種培養腫瘍細胞のin vitroでの増殖に及ぼす影響被検化合物及び10⁴個のマウス白血病細胞（L 1210/C)
またはヒト口腔表皮癌細胞(KB)を含む培養液を96穴プレ
ートの各穴に 200μl になるように加え、5 ％ＣＯ₂−
95％空気下37℃で72時間培養した。培養後MTT[3-(4,4-
ジメチル- チアゾール-2- イル)-2,5-ジフェニルテトラ
ゾリウムブロマイド] 溶液(2mg/ml)を25μl ずつ各穴に
添加し、同条件下で更に４時間培養した。培養液を除去
した後、150 μl のＤＭＳＯを各穴に加えて形成したＭ
ＴＴ−フォルマザンを溶解し、マイクロプレートリーダ
ーによって 540nmにおける吸光度を測定し、細胞数の指
標とした。次式によって抑制率を算出し、50％制御する
被検化合物の濃度（ＩＣ₅₀) を求めた。得られたＩＣ₅₀値（μｌ／ml) を表７にまとめた。

【００５１】

【表７】

【００５２】表７から明らかなように、本発明化合物
は、各種培養腫瘍細胞に対し、元来優れた増殖抑制作用
を持つ5-デアザフラビン化合物よりも更に優れた増殖抑
制効果を示し、制癌剤として非常に有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07H 15/04,15/26 A61K 31/7072 A61P 35/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】一般式ＩまたはIIで表されるシアル酸結
合5-デアザフラビン系化合物【化１】【化２】（式中Ｒ₀は、Ｎ−アセチル（ＣＨ₃ＣＯＮＨ-)基、Ｎ
−グリコリル（ＨＯＣＨ₂ＣＯＮＨ-)基、または水酸基
を表し、ｄＦｌは、次の一般式、III 、IV、またはＶで
表される5-デアザフラビン化合物である。）【化３】【化４】【化５】（式中Ｒ₁は、水素原子、アルキル基、ハロゲン置換ア
ルキル基、フェニル置換アルキル基またはフェニル基を
表し、Ｒ₂は、水素原子、アルキルアミノ基、フェニル
置換アルキルアミノ基、ヒドロキシ置換アルキルアミノ
基、ハロゲン置換アルキル基、アルコキシ基、ピリジル
基、フェニル基、ハロゲン原子もしくはトリフルオロメ
チル基、ニトロ基、低級アルコキシ基のうちの一つで置
換されたフェニル基を表し、Ｒ₃は、水素原子、ニトロ
基、シアノ基、アルキル基、低級アルコキシ基、フェニ
ル置換低級アルコキシ基、低級アルキルアミノ基、フェ
ニル置換低級アルキルアミノ基または低級アルキルスル
フォニル基を表し、Ｙは、メチレン基またはアルキルア
ミノ基を表し、Ｘは、セレン原子、硫黄原子、酸素原
子、または基＝Ｎ−Ｒ₄を表す。ここで、Ｒ₄とは、ア
ルキル基、シクロアルキル基、フェニル置換低級アルキ
ル基、フェニル基、ハロゲン原子、もしくは低級アルコ
キシ基のうちの一つで置換されたフェニル基、低級アル
キルジ置換フェニル基、ナフチル基、低級アルキルジ置
換アミノナフチル基を表し、ｎは２〜６の整数を表
す。）
【請求項２】一般式Ｉ及びIIにおいてＲ₀がＮ−アセ
チル基で且つ、ｄＦｌが一般式III で表される、特許請
求の範囲第１項に記載の化合物。（式中Ｒ₁はフェニル
基、Ｒ₂は水素原子を表し、Ｒ₃は水素原子、ニトロ基
または第３ブチル基を表す。）
【請求項３】一般式Ｉ及びIIにおいてＲ₀がＮ−アセ
チル基で且つ、ｄＦｌが一般式IVで表される、特許請求
の範囲第１項に記載の化合物。（式中Ｒ₂は水素原子ま
たはトリフルオロメチルフェニル基を表し、Ｒ₃は水素
原子またはニトロ基を表し、Ｘは、基＝Ｎ−Ｒ₄を表
し、Ｒ₄はアルキル基を表す。）
【請求項４】一般式Ｉ及びIIにおいてＲ₀がＮ−アセ
チル基で且つ、ｄＦｌが一般式Ｖで表される、特許請求
の範囲第１項に記載の化合物。（式中Ｒ₁はメチル基を
表し、Ｒ₂及びＲ₃は水素原子を表し、Ｘは、基＝Ｎ−
Ｒ₄を表し、Ｒ₄はアルキル基を表す。Ｙはメチレン
基、第２アミノ基または第３アミノ基を表す。）
【請求項５】一般式Ｉ及びIIにおいてＲ₀がＮ−アセ
チル基で且つ、ｄＦｌが一般式III で表される、特許請
求の範囲第１項に記載の化合物。（式中Ｒ₂は水素原子
を表し、Ｒ₃は水素原子または第３ブチル基を表し、Ｘ
は、硫黄原子またはセレン原子を表す。）