JP2844350B2 - Manufacturing methods for substances produced by microorganisms - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は微生物が生産する物質の製造法、更に詳しく
は２種以上の微生物の混合培養により培養物中の夾雑物
含量を低減せしめ、目的物質を収率よく製造する方法に
関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial application] The present invention relates to a method for producing a substance produced by a microorganism, more specifically, to reduce the content of contaminants in a culture by a mixed culture of two or more microorganisms. The present invention relates to a method for producing a substance in a high yield.

〔従来の技術〕[Conventional technology]

従来、微生物を培養することによって該微生物が生産
する物質（以下、「培養生産物」という）を製造する方
法が数多く報告され、実用化されている。ところで、当
該培養物中には、目的とする物質以外にも多くの夾雑物
が含まれている。これらの夾雑物は通常使用菌体のほか
に、核酸、タンパク質などからなり、これらは使用菌体
から副産物として生産されたり、溶菌によって生じたり
する。培養生成物を培養物から採取する場合、通常これ
らの夾雑物を除去する必要があり、かかる夾雑物除去工
程は一般に後処理工程と呼ばれている。後処理工程は、
通常予備分画（粗分画）と精密分画の２つの単位操作よ
りなっている〔バイオ分離工学ハンドブック,p30,サイ
エンスフォーラム,1988年〕。このうち予備分画は、後
に行なわれる精密分画に大きな影響を与えるため極めて
重要である。すなわち、予備分画による夾雑物の除去率
が置きいほど、精密分画（膜分離、クロマトグラフィー
など）の負担が軽減され、収率が向上する。BACKGROUND ART Conventionally, many methods for producing a substance produced by a microorganism by culturing the microorganism (hereinafter, referred to as a “culture product”) have been reported and put into practical use. Incidentally, the culture contains many contaminants other than the target substance. These contaminants usually consist of nucleic acids, proteins, etc., in addition to the cells used, and these are produced as by-products from the cells used or produced by lysis. When a culture product is collected from a culture, it is usually necessary to remove these contaminants, and such a contaminant removal step is generally called a post-treatment step. The post-processing step is
It usually consists of two unit operations, pre-fractionation (coarse fractionation) and precision fractionation [Bioseparation Engineering Handbook, p30, Science Forum, 1988]. Of these, the prefractionation is extremely important because it has a significant effect on the precision fractionation performed later. That is, as the removal rate of contaminants by the pre-fractionation increases, the burden of precision fractionation (membrane separation, chromatography, etc.) is reduced, and the yield is improved.

この予備分画としては主に遠心分離や濾過が用いられ
ているが、特に製品の純度を低下させ、あるいは分離精
製効率を下げる核酸、タンパク質等については、次のよ
うな方法の組み合わせにより除去率を高める試みがなさ
れている。例えば、ストレプトマイシン硫酸塩や塩化マ
ンガンなどによる核酸沈澱法、ヌクレアーゼによる核酸
分解法、硫安やリン酸塩などの用いたタンパク質や菌体
の沈澱法などである〔生物化学工学第２版,p376,学会出
版センター,1973年〕。Centrifugation and filtration are mainly used as the pre-fractionation. Particularly, nucleic acids, proteins, etc., which lower the purity of the product or lower the efficiency of separation and purification, are removed by a combination of the following methods. Attempts have been made to increase For example, a nucleic acid precipitation method using streptomycin sulfate or manganese chloride, a nucleic acid decomposition method using nuclease, a protein or bacteria precipitation method using ammonium sulfate or phosphate, etc. [Biochemical Engineering Second Edition, p376, Publishing Center, 1973].

〔発明が解決しようとする課題〕[Problems to be solved by the invention]

しかしながら、これらの予備分画に組み合わされる上
記の処理法は工業化の上で次のような問題点を含んでい
る。例えば、硫安などを用いた場合には排水処理の負荷
が増す、ストレプトマイシン硫酸塩などの凝集剤やヌク
レアーゼの場合には、工業的生産におけるコストが増加
する等である。一般に後処理工程にかけるコストは製品
全体の中でおおきな比重を占め、特に市場価格が低い製
品の場合、コストの問題が重要である〔バイオ分離工学
ハンドブック,p28,サイエンスフォーラム,1988年〕。However, the above-mentioned processing methods combined with these prefractionations have the following problems in industrialization. For example, when ammonium sulfate or the like is used, the load of wastewater treatment increases, and when a flocculant such as streptomycin sulfate or a nuclease is used, the cost in industrial production increases. In general, the cost of the post-treatment process accounts for a large proportion of the entire product, and the cost problem is important especially for products with low market prices (Bioseparation Engineering Handbook, p28, Science Forum, 1988).

従って、培養物の後処理工程で排水処理などの負荷を
増大させず、後処理を効率よく、低費用で行なうという
とが、当該技術分野において大きな課題となっていた。Therefore, it has been a major problem in the technical field that the post-treatment is performed efficiently and at low cost without increasing the load such as wastewater treatment in the post-treatment process of the culture.

〔課題を解決するための手段〕[Means for solving the problem]

かかる実情において本発明者らは上記課題を解決すべ
く鋭意研究をしてきたところ、培養工程において核酸及
びタンパク質を分解又は低減する酵素を生産する下記の
微生物を、セルラーゼ又はアミラーゼを生産する微生物
と一緒に混合培養すれば、培養工程に続く後処理工程で
目的物質が高収率で取得できることを見出し本発明を完
成した。Under these circumstances, the present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and found that the following microorganisms that produce enzymes that degrade or reduce nucleic acids and proteins in the culture step are combined with microorganisms that produce cellulase or amylase. It has been found that the target substance can be obtained in a high yield in the post-treatment step following the culture step if the mixed culture is carried out in the following manner.

すなわち本発明はバチルス属に属するセルラーゼ生産
菌又はアミラーゼ生産菌（以下、「主微生物」という）
と、バチルス・セレウス（IFO 3003）、バチルス・セレ
ウス・サブスピーシーズ・マイコイデス（IFO 3015）、
バチルス・マイコイデス（AHU 1360）、バチルス・ズブ
チルス（AHU 1033）及びバチルス・マイコイデス（AHU
1034）から選ばれる核酸・タンパク質分解酵素生産菌
（以下、「副微生物」という）とを混合培養することを
特徴とするセルラーゼ又はアミラーゼの製造法を提供す
るものである。That is, the present invention provides a cellulase-producing bacterium or an amylase-producing bacterium belonging to the genus Bacillus (hereinafter, referred to as "main microorganism").
And Bacillus cereus (IFO 3003), Bacillus cereus subspecies mycoides (IFO 3015),
Bacillus mycoides (AHU 1360), Bacillus subtilis (AHU 1033) and Bacillus mycoides (AHU)
1034). A process for producing cellulase or amylase, comprising mixing and culturing a nucleic acid / protease producing bacterium (hereinafter referred to as “sub-microorganism”) selected from 1034).

本発明に用いる副微生物は、培養工程において核酸、
タンパク質等の夾雑物を分解又は低減させる酵素を生産
する微生物であって、主微生物の生育とその培養生産物
の生産を阻害せず、また主微生物によって生育阻害をう
けず、核酸分解酵素、タンパク分解酵素などの夾雑物を
分解する酵素を生産する微生物である。The sub-microorganism used in the present invention is a nucleic acid,
A microorganism that produces an enzyme that decomposes or reduces impurities such as proteins, and does not inhibit the growth of the main microorganism and the production of the culture product, and is not inhibited from growing by the main microorganism. Microorganisms that produce enzymes that degrade contaminants such as decomposing enzymes.

主微生物の代表的な例としてセルラーゼ生産菌のバチ
ルス・エスピー・KSM635（微工研菌寄第533号）、アミ
ラーゼ生産菌のバチルス・アルカロフィラス（ATCC2159
1）を示すことができる。Representative examples of the main microorganisms include Bacillus sp. KSM635 (Cellulase-producing bacterium No. 533), Bacillus alcalophilus (ATCC2159), an amylase-producing bacterium.
1) can be shown.

本発明を実施するには、上記主微生物と副微生物とを
混合培養し、該培養物より通常の手段により培養生産物
を採取することにより行なわれる。The present invention is carried out by mixing and culturing the above-mentioned main microorganisms and sub-microorganisms, and collecting a culture product from the culture by ordinary means.

混合培養は、主微生物と副微生物の両者が増殖し得る
方法であれば特に制限されないが、適当な培地に主微
生物と副微生物の両者を添加して培養する方法、主微
生物を培養している培地中に、副微生物又は予め培養し
た副微生物培養液を添加して培養する方法、および副
微生物を培養している培地中に、主微生物又は予め培養
した主微生物培養液を添加して培養する方法が挙げられ
る。就中、の混合培養方法が好ましい。主微生物と副
微生物との混合割合は、主微生物及び副微生物の組み合
せによって異なるが、培養終了時において主微生物が充
分に増殖して培養生産物を生産し、かつ副微生物が夾雑
物を分解する酵素を充分に生産し得る量に調整すること
が望ましく、一般には培養終了時において副微生物の菌
数が主微生物のそれより少なく、特に1/100以下である
ことが好ましい。The mixed culture is not particularly limited as long as both the main microorganisms and the sub-microorganisms can proliferate, but a method of adding both the main microorganisms and the sub-microorganisms to an appropriate medium and culturing the same, and culturing the main microorganisms In a medium, a method of adding and culturing a sub-microorganism or a pre-cultured sub-microorganism culture solution, and culturing by adding a main microorganism or a pre-cultured main microorganism culture solution to a medium in which the sub-microorganism is cultured Method. In particular, the mixed culture method is preferred. The mixing ratio of the main microorganism and the sub-microorganism varies depending on the combination of the main microorganism and the sub-microorganism, but at the end of the culture, the main microorganism proliferates sufficiently to produce a culture product, and the sub-microorganism decomposes contaminants. It is desirable to adjust the amount so that the enzyme can be produced sufficiently. In general, it is preferable that the number of sub-microorganisms is smaller than that of the main micro-organism at the end of culturing, particularly preferably 1/100 or less.

主微生物又は副微生物を単独で培養する場合の培養条
件は、それぞれの微生物の増殖に合致した条件を選択す
ればよい。また両微生物混合後の培養条件は、培養生産
物の生産性だけでなく、副微生物の増殖速度、分解酵素
の生産速度等を考慮して決定される。As the culture conditions for culturing the main microorganism or the sub-microorganism alone, conditions suitable for the growth of each microorganism may be selected. The culture conditions after mixing both microorganisms are determined in consideration of not only the productivity of the culture product, but also the growth rate of sub-microorganisms, the production rate of degrading enzymes, and the like.

培養終了後は、通常の方法により培養生産物を採取す
ることができる。本発明方法においては、主微生物単独
で培養したときに比べ、タンパク質、核酸等の夾雑物の
含量が少ないため、特殊な夾雑物除去手段は必要ない。After completion of the culture, a culture product can be collected by a usual method. In the method of the present invention, since the content of impurities such as proteins and nucleic acids is smaller than when the main microorganism is cultured alone, a special means for removing impurities is not required.

〔発明の効果〕〔The invention's effect〕

本発明によれば、培養物中の夾雑物含量が少ないた
め、後処理が容易であり、相対的にセルラーゼ又はアミ
ラーゼの収率が向上し、結果としてセルラーゼ又はアミ
ラーゼの製造コストの低減化が可能となった。According to the present invention, since the content of contaminants in the culture is small, post-treatment is easy, the yield of cellulase or amylase is relatively improved, and as a result, the production cost of cellulase or amylase can be reduced. It became.

〔実施例〕〔Example〕

次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発
明はこれらにより何ら制限されるものではない。Next, the present invention will be described in detail with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

（１）以下に実施例において、用いた副微生物から核酸
分解酵素、タンパク質分解酵素が生産されていること
は、それぞれの検出用プレートを用いて確認を行なっ
た。検出用プレートの組成を以下に示す。(1) In the following examples, the production of nucleases and proteases from the used sub-microorganisms was confirmed using the respective detection plates. The composition of the detection plate is shown below.

核酸分解酵素検出用プレート （重量％） トリプトン 1.5 ソイペプトン 0.5 塩化ナトリウム 0.5 デオキシリボ核酸 0.2 トルイジンブルー 0.01 寒 天 1.5 タンパク質分解酵素検出用プレート （重量％） ニュートリエントブロス スキムミルク 2.0 （２）以下の実施例において、主微生物、副微生物を保
存しているスラントは、それぞれ以下に示す培地Ａ〜Ｃ
に寒天を添加して作ったものである。Nucleolytic enzyme detection plate (% by weight) Tryptone 1.5 Soypeptone 0.5 Sodium chloride 0.5 Deoxyribonucleic acid 0.2 Toluidine blue 0.01 Agar 1.5 Proteolytic enzyme detection plate (% by weight) Nutrient broth skim milk 2.0 (2) In the following examples, The slants storing the main microorganism and the sub-microorganism are the following mediums A to C, respectively.
It is made by adding agar to the product.

（３）以下の実施例において、％は重量％を示す。(3) In the following examples,% indicates% by weight.

実施例１ （１）主微生物としてセルラーゼ生産菌バチルス・エス
ピーKSM635（微工研菌寄第533号）を用いた。スラント
から１白金耳を下記（培地Ａ）に示すシード培地50ml
（坂口フラスコ）に植菌し、34℃で24時間振とう培養を
行なった。得られた培養液5mlをメイン培地50ml（坂口
フラスコ）に植菌し、34℃で振とう培養を行なった。Example 1 (1) A cellulase-producing bacterium, Bacillus sp. One platinum loop from the slant is 50 ml of seed medium shown below (medium A)
(Sakaguchi flask) and cultured with shaking at 34 ° C. for 24 hours. 5 ml of the obtained culture was inoculated into 50 ml of a main medium (Sakaguchi flask) and cultured at 34 ° C with shaking.

培地Ａ ポリペプトン 2.0 ％ イーストエキストラクト 0.1 ％ リン酸水素二ナトリウム 0.1 ％ CMC 1.0 ％ 炭酸ナトリウム^＊） 0.75％ ^＊） 炭酸ナトリウムは別滅菌 （２）副微生物として核酸分解酵素とタンパク質分解酵
素を生産するバチルス・ズブチルス（AHU 1033）を用
いた。スラントより次に示す培地B,30ml（坂口フラス
コ）に植菌し、30℃で24時間培養した。Medium A Polypeptone 2.0% Yeast extract 0.1% Disodium hydrogen phosphate 0.1% CMC 1.0% Sodium carbonate ^*) 0.75% ^*) Sodium carbonate is sterilized separately (2) Bacillus which produces nucleolytic enzymes and proteolytic enzymes as secondary microorganisms -Subtilis (AHU 1033) was used. The slant was inoculated into the following medium B, 30 ml (Sakaguchi flask), and cultured at 30 ° C. for 24 hours.

培地Ｂ ニュートリエントブロスグルコース 1.0 ％ イーストエキストラクト 1.0 ％ （３）得られた副微生物の培養液を前記で得たセルラー
ゼ生産菌の培養液（培養開始後10時間目）に、0.005ml
（0.01％）と0.5ml（１％）を各々植菌し、34℃でさら
に38時間振とう培養を行なった。Medium B Nutrient broth glucose 1.0% Yeast extract 1.0% (3) 0.005 ml of the obtained culture of the sub-microorganism was added to the culture of the cellulase producing bacterium (10 hours after the start of culture).
(0.01%) and 0.5 ml (1%) were inoculated respectively, and shaking culture was further performed at 34 ° C. for 38 hours.

培養終了後、培養液のセルラーゼ活性、夾雑物含量お
よび分画難易の判定のためメンブランフィルターを用い
該透過流束を測定した。After completion of the culture, the permeation flux was measured using a membrane filter to determine the cellulase activity, contaminant content, and difficulty of fractionation of the culture solution.

（ａ）セルラーゼ活性 セルラーゼ生産菌から生産されたアルカリセルラーゼ
ＫのCMCアーゼ活性は以下のように測定した。CMC（2.5
％）0.2ml、0.5Mグリシン緩衝液（pH9.0）0.1ml、及び
脱イオン水0.1mlからなる基質溶液に酵素液0.1mlを加
え、40℃、20分間反応した。反応後、3,5−ジニトロサ
リチル酸（3,5−dinitrosalicylic Acid（DNS））法に
て還元糖の定量を行なった。すなわち、反応液0.5mlにD
NS試薬1mlを加え、５分間100℃で加熱発色させ、冷却
後、4.5mlの脱イオン水を加えて希釈した。これを波長5
35nmで比色定量し、相対活性として示した。(A) Cellulase activity The CMCase activity of alkaline cellulase K produced from a cellulase-producing bacterium was measured as follows. CMC (2.5
%), 0.1 ml of an enzyme solution was added to a substrate solution consisting of 0.2 ml of 0.5 M glycine buffer (pH 9.0) and 0.1 ml of deionized water, and reacted at 40 ° C. for 20 minutes. After the reaction, reducing sugars were quantified by 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method. That is, D
1 ml of NS reagent was added, and color was developed by heating at 100 ° C. for 5 minutes. After cooling, 4.5 ml of deionized water was added for dilution. Wavelength 5
It was colorimetrically determined at 35 nm and expressed as relative activity.

（ｂ）夾雑物含量 夾雑物は培養液を遠心分離（3000rpm、20min.）に付
し、得られた上清画分を高速液体クロマトグラフィーに
て調べた。高分子量（M.W.100万以上）の画分を夾雑物
画分とした。その際、使用したカラムはTSKgel GW4000S
WXL、溶出緩衝液は0.2Mリン酸緩衝液、pH7.2を用い、検
出はUV（260nm）で行なった。夾雑物はDNAを標準物質と
して用い、相対量によって表した。(B) Contaminant content For the contaminants, the culture solution was subjected to centrifugation (3000 rpm, 20 min.), And the obtained supernatant fraction was examined by high performance liquid chromatography. The high molecular weight (MW 1,000,000 or more) fraction was used as the contaminant fraction. The column used was TSKgel GW4000S
WXL and 0.2 M phosphate buffer, pH 7.2 were used as elution buffers, and detection was performed with UV (260 nm). The contaminants were represented by relative amounts using DNA as a standard.

（ｃ）透過流束 夾雑物が後処理工程に負荷をかける事例として0.2μ
ｍの精密濾過膜（オレフィン系ポリマー、1.33cm²）を
用いて透過流束を調べ（2.0kg/cm²、10ml）、相対値に
よって表した。(C) Permeation flux As an example where impurities impose a load on the post-treatment process,
Using a microfiltration membrane (olefin-based polymer, 1.33 cm ² ), the permeation flux was examined (2.0 kg / cm ² , 10 ml) and expressed as a relative value.

得られた結果を表１に示す。 Table 1 shows the obtained results.

実施例２ 実施例１において副微生物として核酸分解酵素、タン
パク質分解酵素を生産するバチルス・セレウス（IFO 30
03）を用い、他は全て実施例１と同じ条件で培養を行な
った。得られた結果を表２に示す。 Example 2 In Example 1, Bacillus cereus (IFO 30) producing nucleases and proteases as sub-microorganisms was used.
03), and culturing was performed under the same conditions as in Example 1 except for the above. Table 2 shows the obtained results.

実施例３ 実施例１において副微生物として核酸分解酵素、タン
パク質分解酵素を生産するバチルス・セレウス・サブス
ピーシズ・マイコイデス（IFO 3015）を用い、他は全の
実施例１と同じ条件で培養を行なった。得られた結果を
表３に示す。 Example 3 In Example 1, culturing was carried out under the same conditions as in Example 1 except that Bacillus cereus subspecies mycoides (IFO 3015), which produces a nuclease and a proteolytic enzyme, was used as a sub-microorganism. Table 3 shows the obtained results.

実施例４ 実施例１において副微生物として核酸分解酵素、タン
パク質分解酵素を生産するバチルス・マイコイデス（AH
U 1360）を用い、他は全の実施例１と同じ条件で培養を
行なった。得られた結果を表４に示す。 Example 4 In Example 1, Bacillus mycoides (AH) which produces nucleases and proteases as sub-microorganisms
U1360), and culturing was carried out under the same conditions as in Example 1 except for the above. Table 4 shows the obtained results.

実施例５ （１）主微生物としてアミラーゼ生産菌として、バチル
ス・アルカロフィラス（ATCC 21591）を用いた。スラン
トから１白金耳を下記に示す培地（Ｃ）、30ml（坂口フ
ラスコ）に植菌し、30℃で24時間培養を行なった。得ら
れた培養液1mlをさらに同培地30ml（坂口フラスコ）に
植菌し、34℃で振とう培養を行なった。 Example 5 (1) Bacillus alcalophilus (ATCC 21591) was used as an amylase-producing bacterium as a main microorganism. One platinum loop was inoculated from the slant into 30 ml (Sakaguchi flask) of the following medium (C) and cultured at 30 ° C. for 24 hours. 1 ml of the obtained culture solution was further inoculated into 30 ml of the same medium (Sakaguchi flask) and cultured at 34 ° C with shaking.

培地Ｃ ペプトン 1.0 ％ イーストエキストラクト 1.0 ％ リン酸水素二カリウム 0.1 ％ 硫酸マグネシウム 0.02％ 可溶性デンプン 1.0 ％ 炭酸ナトリウム^＊］（無水） 1.0 ％ グルコース^＊］ 1.0 ％ フラクトース^＊］ 1.5 ％ ^＊］ グルコース、フラクトースと炭酸ナトリウムは別滅
菌 （２）副微生物として核酸分解酵素とタンパク質分解酵
素を生産するバチルス・マイコイデス（AHU 1034）を
用いた。スラントから培地Ｂ、30ml（坂口フラスコ）に
植菌し、30℃で24時間培養した。得られた異種微生物の
培養液を前記で得たアミラーゼ生産菌の培養液（培養開
始後、10時間目）に0.3ml（１％）植菌し、34℃で38時
間培養した。Medium C Peptone 1.0% Yeast extract 1.0% Dipotassium hydrogen phosphate 0.1% Magnesium sulfate 0.02% Soluble starch 1.0% Sodium carbonate ^*] (anhydrous) 1.0% Glucose ^*] 1.0% Fructose ^*] 1.5% ^{*] With} glucose and fructose Separate sterilization of sodium carbonate (2) Bacillus mycoides (AHU 1034) which produces nucleases and proteolytic enzymes was used as secondary microorganisms. 30 ml of medium B (Sakaguchi flask) was inoculated from the slant and cultured at 30 ° C. for 24 hours. 0.3 ml (1%) of the obtained culture solution of the heterologous microorganism was inoculated into the culture solution of the amylase-producing bacterium (10 hours after the start of the culture) and cultured at 34 ° C. for 38 hours.

培養終了後、培養液のアミラーゼ活性、夾雑物含量お
よびメンブランフィルター透過流測を測定した。After the completion of the culture, the amylase activity, contaminant content and permeation of a membrane filter in the culture solution were measured.

（ａ）アミラーゼ活性 アミラーゼ生産菌から生産されたアミラーゼの活性は
以下のように測定した。可溶性デンプン（2.5％）0.2m
l、0.5Mグリシン緩衝液（pH9.0）0.1ml、及び脱イオン
水0.1mlからなる基質溶液に酵素液0.1mlを加え、40℃、
20分間反応した。反応後、3,5−ジニトロサリチル酸
（3,5−dinitrosalicylic Acid（DNS））法にて還元糖
の定量を行なった。すなわち、反応液0.5mlにDNS試薬1m
lを加え、５分間100℃で加熱発色させ、冷却後、4.5ml
の脱イオン水を加えて希釈した。これを波長535nmで比
色定量し、相対活性によって表した。(A) Amylase activity The activity of amylase produced from an amylase-producing bacterium was measured as follows. Soluble starch (2.5%) 0.2m
l, 0.1 ml of enzyme solution was added to a substrate solution consisting of 0.1 ml of 0.5 M glycine buffer (pH 9.0) and 0.1 ml of deionized water, and the mixture was heated at 40 ° C.
Reacted for 20 minutes. After the reaction, reducing sugars were quantified by 3,5-dinitrosalicylic acid (DNS) method. That is, 1 ml of DNS reagent is added to 0.5 ml of the reaction solution.
l, add color by heating at 100 ° C for 5 minutes,
Was added and diluted. This was colorimetrically determined at a wavelength of 535 nm and represented by relative activity.

夾雑物含量及び透過流束は実施例１と同様にして測定
した。得られた結果を表５に示す。The contaminant content and permeate flux were measured as in Example 1. Table 5 shows the obtained results.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:085） (72)発明者 佐藤 朋一 茨城県鹿島郡波崎町土合本町１丁目8762 ―23 (56)参考文献 特開 昭62−44172（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C12N 9/00 - 9/99 C12P 1/00 - 1/06──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI C12R 1: 085) (72) Inventor Tomokazu Sato 1-8762 Doi Honcho, Hazaki-cho, Kashima-gun, Ibaraki Pref. 62-44172 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁶ , DB name) C12N 9/00-9/99 C12P 1/00-1/06

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】バチルス属に属するセルラーゼ生産菌又は
アミラーゼ生産菌と、バチルス・セレウス（IFO 300
3）、バチルス・セレウス・サブスピーシーズ・マイコ
イデス（IFO 3015）、バチルス・マイコイデス（AHU 13
60）、バチルス・ズブチルス（AHU 1033）及びバチルス
・マイコイデス（AHU 1034）から選ばれる核酸・タンパ
ク質分解酵素生産菌とを混合培養することを特徴とする
セルラーゼ又はアミラーゼの製造法。1. A cellulase-producing or amylase-producing bacterium belonging to the genus Bacillus and Bacillus cereus (IFO 300).
3), Bacillus cereus subspecies mycoides (IFO 3015), Bacillus mycoides (AHU 13)
60), a method for producing cellulase or amylase, comprising co-cultivating a nuclease / protease producing bacterium selected from Bacillus subtilis (AHU 1033) and Bacillus mycoides (AHU 1034).