JP2836218B2 - アデノシンデアミナーゼ分別定量用試薬 - Google Patents
アデノシンデアミナーゼ分別定量用試薬Info
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、体液例えば血清中のアデノシンデアミナー
ゼアイソザイムを簡便に分別定量する試薬に関する。
ゼアイソザイムを簡便に分別定量する試薬に関する。
（従来の技術） アデノシンデアミナーゼ（ADA）は、核酸代謝に関与
し、アデノシンを脱アミノ化してイノシンとアンモニア
を生成する酵素である。この酵素は、各種悪性腫瘍、肝
疾患、炎症性疾患、細胞性免疫疾患などにおいて、その
臨床的異議が重要視されているが、遺伝的に異なる２種
のアイソザイム（ADA1とADA2）が存在し、近来そのアイ
ソザイムレベルで検査した時の個々のアイソザイムレベ
ルの高低と各種疾患との関連性が注目されるようになっ
てきた。例えば、倉田ら（臨床病理 32巻875頁 198
4）は、血清中のADAをセファデックスＧ−200を用いた
ゲル濾過法により分析し、アイソザイムと病態との関係
を検討し、アイソザイム測定の有用性を示唆している。
し、アデノシンを脱アミノ化してイノシンとアンモニア
を生成する酵素である。この酵素は、各種悪性腫瘍、肝
疾患、炎症性疾患、細胞性免疫疾患などにおいて、その
臨床的異議が重要視されているが、遺伝的に異なる２種
のアイソザイム（ADA1とADA2）が存在し、近来そのアイ
ソザイムレベルで検査した時の個々のアイソザイムレベ
ルの高低と各種疾患との関連性が注目されるようになっ
てきた。例えば、倉田ら（臨床病理 32巻875頁 198
4）は、血清中のADAをセファデックスＧ−200を用いた
ゲル濾過法により分析し、アイソザイムと病態との関係
を検討し、アイソザイム測定の有用性を示唆している。
又、最近では後天性免疫不全症候群（AIDS）、成人Ｔ
細胞白血病（ATL）の患者血清中におけるアイソザイム
測定の有用性も注視されている。
細胞白血病（ATL）の患者血清中におけるアイソザイム
測定の有用性も注視されている。
既存のADAアイソザイム測定方法としては、大別する
と次の４種の方法が知られている。
と次の４種の方法が知られている。
カラムクロマトグラフィーによる分別法 電気泳動による分別法 基質親和性の差による分別法 阻害剤使用による分別法 以上の方法のうちの方法ではアイソザイムを個別
的に分離し、各フラクションの活性を測定するので精密
ではあるが操作が繁雑であり、時間とコストがかかるの
で自動分析用には不適である。又、の方法では各アイ
ソザイムの基質親和性（ミカエリス定数）が、著しく異
なることに着目しており、簡便に測定できる方法である
が、ADA活性値の算出法において、基質濃度の差による
活性値の差を活性比として表し方程式をたてて算出しな
ければならず、手間がかかる。
的に分離し、各フラクションの活性を測定するので精密
ではあるが操作が繁雑であり、時間とコストがかかるの
で自動分析用には不適である。又、の方法では各アイ
ソザイムの基質親和性（ミカエリス定数）が、著しく異
なることに着目しており、簡便に測定できる方法である
が、ADA活性値の算出法において、基質濃度の差による
活性値の差を活性比として表し方程式をたてて算出しな
ければならず、手間がかかる。
の阻害剤を使用する方法（特開平１−202297号公報
参照）では、ADA1の阻害剤エリスロ−９−（２−ヒドロ
キシ−３−ノニル）アデニンを用いて全ADA活性値
（ａ）から該阻害剤を用いた時のADA活性値（ｂ）を控
除して、ADA1の値（ａ−ｂ）及びADA2（ｂ）を求めてい
るが、その際の定量法としては、以下の方法があげられ
ている。
参照）では、ADA1の阻害剤エリスロ−９−（２−ヒドロ
キシ−３−ノニル）アデニンを用いて全ADA活性値
（ａ）から該阻害剤を用いた時のADA活性値（ｂ）を控
除して、ADA1の値（ａ−ｂ）及びADA2（ｂ）を求めてい
るが、その際の定量法としては、以下の方法があげられ
ている。
（イ）グルタミン酸脱水素酵素（GLDH）−還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド（NADH）法 （ロ）GLDH−還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チドりん酸（NADPH）法 （ハ）キサンチンオキシダーゼ（YOD）−プリンヌクレ
オチドホスホリラーゼ（PNP）法 （イ）（ロ）の方法では、ADAの作用によって生成さ
れたアンモニアを測定する方法であるが、これは体液中
の内因性アンモニアの影響を大きくうけるために精度、
正確性において問題があり、ADA分別定量を正確におこ
なえなかった。（ハ）の方法では、ADAにより生成され
たイノシンをPNPによりキサンチンにしてテトラゾリウ
ム塩（ホルマザン色素）の存在下、XODを作用させ生じ
たホルマザンの吸光度を測定する方法であるが、測定感
度が低く、更に難溶性ホルマザン色素を使用する為、器
具や測定ラインへの色素沈着の問題があり、（イ）
（ロ）の方法と同様にADA分別定量を正確に行えなかっ
た。
ンアミドアデニンジヌクレオチド（NADH）法 （ロ）GLDH−還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオ
チドりん酸（NADPH）法 （ハ）キサンチンオキシダーゼ（YOD）−プリンヌクレ
オチドホスホリラーゼ（PNP）法 （イ）（ロ）の方法では、ADAの作用によって生成さ
れたアンモニアを測定する方法であるが、これは体液中
の内因性アンモニアの影響を大きくうけるために精度、
正確性において問題があり、ADA分別定量を正確におこ
なえなかった。（ハ）の方法では、ADAにより生成され
たイノシンをPNPによりキサンチンにしてテトラゾリウ
ム塩（ホルマザン色素）の存在下、XODを作用させ生じ
たホルマザンの吸光度を測定する方法であるが、測定感
度が低く、更に難溶性ホルマザン色素を使用する為、器
具や測定ラインへの色素沈着の問題があり、（イ）
（ロ）の方法と同様にADA分別定量を正確に行えなかっ
た。
（発明が解決しようとする課題） 本発明の目的は、ADAアイソザイム活性を測定する方
法において、簡便な測定かつ平易な算出方法で更に内因
性アンモニアの影響、測定感度不足及び測定ライン等へ
の色素沈着の問題を解決し、阻害剤を用いた高感度発色
系を用いることにより、新規でかつ正確性の高いADA分
別定量用試薬を提供することにある。
法において、簡便な測定かつ平易な算出方法で更に内因
性アンモニアの影響、測定感度不足及び測定ライン等へ
の色素沈着の問題を解決し、阻害剤を用いた高感度発色
系を用いることにより、新規でかつ正確性の高いADA分
別定量用試薬を提供することにある。
（課題を解決するための手段） 本発明は、（ａ）アデノシン、（ｂ）プリンヌクレオ
チドホスホリラーゼ（以下PNPと略する）、（ｃ）リン
酸またはリン酸塩、（ｄ）キサンチンオキシダーゼ（以
下XODと略する）、（ｅ）ペルオキシダーゼ（以下PODと
略する）、（ｆ）水素供与体、（ｇ）アニリン誘導体お
よび（ｈ）エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニ
ル）アデニン（以下EHNAと略する）、コフォルマイシン
およびデオキシコフォルマイシンからなる群から選ばれ
た少なくとも一種の化合物を含むことを特徴とするアデ
ノシンデアミナーゼ分別定量用試薬である。
チドホスホリラーゼ（以下PNPと略する）、（ｃ）リン
酸またはリン酸塩、（ｄ）キサンチンオキシダーゼ（以
下XODと略する）、（ｅ）ペルオキシダーゼ（以下PODと
略する）、（ｆ）水素供与体、（ｇ）アニリン誘導体お
よび（ｈ）エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニ
ル）アデニン（以下EHNAと略する）、コフォルマイシン
およびデオキシコフォルマイシンからなる群から選ばれ
た少なくとも一種の化合物を含むことを特徴とするアデ
ノシンデアミナーゼ分別定量用試薬である。
本発明のアデノシンデアミナーゼ分別定量用試薬は、
アデノシン、PNP、リン酸またはリン酸塩、XOD、POD、
水素供与体およびアニリン誘導体からなる全ADAを定量
する試薬に、ADA1の阻害剤としてEHNA、コフォルマイシ
ンおよびデオキシコフォルマイシンからなる群から選ば
れた少なくとも一種の化合物を添加したものである。
アデノシン、PNP、リン酸またはリン酸塩、XOD、POD、
水素供与体およびアニリン誘導体からなる全ADAを定量
する試薬に、ADA1の阻害剤としてEHNA、コフォルマイシ
ンおよびデオキシコフォルマイシンからなる群から選ば
れた少なくとも一種の化合物を添加したものである。
したがって、前記の全ADAを定量する試薬によって、
全ADA活性値（ａ）を測定しておき、次に本発明の試薬
によってADA2の活性値（ｂ）を測定すれば、ADA1の活性
値は（ａ−ｂ）によって、算出できるので、ADA1とADA2
を分別定量することができる。
全ADA活性値（ａ）を測定しておき、次に本発明の試薬
によってADA2の活性値（ｂ）を測定すれば、ADA1の活性
値は（ａ−ｂ）によって、算出できるので、ADA1とADA2
を分別定量することができる。
本発明に用いる阻害剤（EHNA、コフォルマイシンおよ
びデオキシコフォルマイシンからなる群から選ばれた少
なくとも一種）の量は、反応液中0.05mM〜0.5mMが好ま
しい。
びデオキシコフォルマイシンからなる群から選ばれた少
なくとも一種）の量は、反応液中0.05mM〜0.5mMが好ま
しい。
本発明に用いるアデノシンの量は反応液中５〜22mMと
なる量が好ましい。
なる量が好ましい。
本発明に用いるPNPは微生物由来のものなどがある。
本発明の試薬中、PNPの量は反応液中0.1−30μ/mlとな
る量が好ましい。
本発明の試薬中、PNPの量は反応液中0.1−30μ/mlとな
る量が好ましい。
本発明に用いるXODはミルク由来のもの、微生物由来
のものなどがあり、たとえば牛ミルク由来のXODが挙げ
られる。本発明の試薬中、XODの量は反応液中0.01−1.0
μ/mlとなる量が好ましい。
のものなどがあり、たとえば牛ミルク由来のXODが挙げ
られる。本発明の試薬中、XODの量は反応液中0.01−1.0
μ/mlとなる量が好ましい。
本発明に使用するペルオキシダーゼは植物由来のも
の、微生物由来のものなどがあり、たとえば西洋ワサビ
由来のものを挙げることができる。本発明の試薬中POD
の量は反応液中0.01−50μ/mlとなる量が好ましい。
の、微生物由来のものなどがあり、たとえば西洋ワサビ
由来のものを挙げることができる。本発明の試薬中POD
の量は反応液中0.01−50μ/mlとなる量が好ましい。
本発明に用いる水素供与体は、過酸化水素、ペルオキ
シダーゼ、アニリン誘導体との反応に際し、水素を供与
する化合物であればよく、例えば４−アミノアンチピリ
ン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリン−ヒドラゾン誘
導体などがある。本発明の試薬中、水素供与体の量は反
応液中0.1〜10mMとなる量であれば良い。
シダーゼ、アニリン誘導体との反応に際し、水素を供与
する化合物であればよく、例えば４−アミノアンチピリ
ン、３−メチル−２−ベンゾチアゾリン−ヒドラゾン誘
導体などがある。本発明の試薬中、水素供与体の量は反
応液中0.1〜10mMとなる量であれば良い。
本発明に使用するアニリン誘導体としては、アニリ
ン、N,N−ジメチルアニリン、N,N−ジエチルアニリン、
N,N−ジエチル−ｍ−トルイジン、N,N−ジメチル−ｍ−
アンシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチル フェニ
ル）−Ｎ′−アセチル エチレンジアミン、Ｎ−エチル
−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）−ｍ−トルイジン、Ｎ
−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルオプロピ
ル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピ
ル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル
−3,5−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−3,5−ジメトキシ
アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ス
ルホプロピル）−ｍ−アニシジン等がある。
ン、N,N−ジメチルアニリン、N,N−ジエチルアニリン、
N,N−ジエチル−ｍ−トルイジン、N,N−ジメチル−ｍ−
アンシジン、Ｎ−エチル−Ｎ−（３−メチル フェニ
ル）−Ｎ′−アセチル エチレンジアミン、Ｎ−エチル
−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）−ｍ−トルイジン、Ｎ
−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルオプロピ
ル）−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピ
ル−ｍ−トルイジン、Ｎ−エチル−Ｎ−スルホプロピル
−3,5−ジメトキシアニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−
ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−3,5−ジメトキシ
アニリン、Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−ス
ルホプロピル）−ｍ−アニシジン等がある。
本発明の試薬中、アニリン誘導体の量は反応液中0.1
−50mMとなる量が好ましい。
−50mMとなる量が好ましい。
本発明の試薬は通常、pH6−８の緩衝液とともに使用
する。
する。
本発明の試薬の液性の調整に用いる緩衝液はアデノシ
ンデアミナーゼの活性測定域で緩衝能を示すものであれ
ば特に制限されない。たとえばリン酸緩衝液、グッド緩
衝液、トリス緩衝液等が挙げられる。
ンデアミナーゼの活性測定域で緩衝能を示すものであれ
ば特に制限されない。たとえばリン酸緩衝液、グッド緩
衝液、トリス緩衝液等が挙げられる。
本発明の試薬には必要により、スーパーオキサイドジ
スムターゼ（以下SODと略する）、アスコルピン酸オキ
シダーゼ（以下ASOと略する）またはカタラーゼを添加
しても良い。
スムターゼ（以下SODと略する）、アスコルピン酸オキ
シダーゼ（以下ASOと略する）またはカタラーゼを添加
しても良い。
本発明の試薬には酵素反応または呈色反応を円滑に行
わせるために、他の化合物を添加しても良い。このよう
な化合物として、たとえば安定化剤、界面活性剤、賦活
性等が挙げられる。
わせるために、他の化合物を添加しても良い。このよう
な化合物として、たとえば安定化剤、界面活性剤、賦活
性等が挙げられる。
本発明の試薬は以下の測定反応を利用する。
本発明は上記式から明らかなように、アデノシンから
アデノシンデアミナーゼ２により生成したノイシンに、
PNP、リン酸またはリン酸塩を作用させ、生成するヒポ
キサンチンにXODを作用させて過酸化水素とキサンチン
を生成させる。生じたキサンチンにさらにXODを作用さ
せて過酸化水素と尿酸に分解させ、ヒポキサンチンによ
り生じた過酸化水素との総量をペルオキシダーゼ、水素
供与体およびアニリン誘導体を用いてキノン色素を測定
する。キノン色素の測定は通常、540〜650nmの波長の吸
光度測定を行う。
アデノシンデアミナーゼ２により生成したノイシンに、
PNP、リン酸またはリン酸塩を作用させ、生成するヒポ
キサンチンにXODを作用させて過酸化水素とキサンチン
を生成させる。生じたキサンチンにさらにXODを作用さ
せて過酸化水素と尿酸に分解させ、ヒポキサンチンによ
り生じた過酸化水素との総量をペルオキシダーゼ、水素
供与体およびアニリン誘導体を用いてキノン色素を測定
する。キノン色素の測定は通常、540〜650nmの波長の吸
光度測定を行う。
本発明の試薬には、試料に全測定試薬を１度に加えて
反応させる１ステップ法、試料に試薬を２回に分けて加
えて反応を行う２ステップ法に使用する。特にPNP、XO
D、POD、ADA1阻害剤および必要によりSODを含む試薬を
第１試薬とし、アデノシン、水素供与体、アニリン誘導
体を含む試薬を第２試薬とする２ステップ法が好まし
い。２ステップ法では、第１ステップにおいて試料中に
存在する若干量のキサンチン、ヒポキサンチンおよびア
スコルビン酸等をPNP、XODまたカタラーゼ、ASOでもっ
て前処理をおこない、試料中のキサンチン、ヒポキサン
チン、アスコルビン酸の影響を回避することが出来る。
第２ステップでは基質のアデノシンを含む試薬が用いら
れて、アデノシンデアミナーゼの酵素反応と呈色反応が
同時に行われる。レート法ではこの呈色反応の単位時間
当りの呈色の増加を測定する。また、測定感度の向上の
ためSODを添加することが好ましい。
反応させる１ステップ法、試料に試薬を２回に分けて加
えて反応を行う２ステップ法に使用する。特にPNP、XO
D、POD、ADA1阻害剤および必要によりSODを含む試薬を
第１試薬とし、アデノシン、水素供与体、アニリン誘導
体を含む試薬を第２試薬とする２ステップ法が好まし
い。２ステップ法では、第１ステップにおいて試料中に
存在する若干量のキサンチン、ヒポキサンチンおよびア
スコルビン酸等をPNP、XODまたカタラーゼ、ASOでもっ
て前処理をおこない、試料中のキサンチン、ヒポキサン
チン、アスコルビン酸の影響を回避することが出来る。
第２ステップでは基質のアデノシンを含む試薬が用いら
れて、アデノシンデアミナーゼの酵素反応と呈色反応が
同時に行われる。レート法ではこの呈色反応の単位時間
当りの呈色の増加を測定する。また、測定感度の向上の
ためSODを添加することが好ましい。
本発明に使用により使用するSODは動物由来のもの、
微生物由来のものがあり、たとえば牛血清由来のものを
挙げることができる。本発明の試薬中、SODの量は反応
液中２−1000μ/mlとなる量であれば良い。本発明に必
要により使用するASOは諸物由来のものなどがあり、例
えばキュウリ由来のものを挙げることができる。
微生物由来のものがあり、たとえば牛血清由来のものを
挙げることができる。本発明の試薬中、SODの量は反応
液中２−1000μ/mlとなる量であれば良い。本発明に必
要により使用するASOは諸物由来のものなどがあり、例
えばキュウリ由来のものを挙げることができる。
（実施例） 以下、本発明を実施例により詳細に説明する。
実施例１ 下記組成を用いて、下記方法により、血清３種の吸光
度変化を測定した。結果を第１表に示す。
度変化を測定した。結果を第１表に示す。
組成Ａ（全ADA測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 組成Ｂ（本発明のADA2測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM EHNA 0.4mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 測定法 試料50μに上記第１試液1.5ml及び第２試液1.5mlを
添加し、第２試液分注後３〜５分後の１分当りの吸光度
変化を、試薬ブランクを対照として、37℃波長550nmで
測定した。
ル）−ｍ−トルイジン2mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 組成Ｂ（本発明のADA2測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM EHNA 0.4mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 測定法 試料50μに上記第１試液1.5ml及び第２試液1.5mlを
添加し、第２試液分注後３〜５分後の１分当りの吸光度
変化を、試薬ブランクを対照として、37℃波長550nmで
測定した。
（各血清につきｎ＝５測定） 実施例２ 下記組成を用いて、実施例１と同様の方法により、血
清３種の吸光度変化を測定した。結果を第１表に示す。
清３種の吸光度変化を測定した。結果を第１表に示す。
組成Ｃ（全ADA測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM SOD 200U/ml 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 組成Ｄ（本発明のADA2測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM SOD 200U/ml EHNA 0.4mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 比較例 下記組成を用いて、下記方法により血清３種の吸光度
変化を測定した。結果を第１表に示す。
ル）−ｍ−トルイジン2mM SOD 200U/ml 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 組成Ｄ（本発明のADA2測定用試薬） 第１試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） PNP 6U/ml XOD 0.15U/ml POD 20U/ml Ｎ−エチル−Ｎ（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピ
ル）−ｍ−トルイジン2mM SOD 200U/ml EHNA 0.4mM 第２試液 0.25Mリン酸緩衝液（pH6.5） アデノシン20mM ４−アミノアンチピリン1mM 比較例 下記組成を用いて、下記方法により血清３種の吸光度
変化を測定した。結果を第１表に示す。
組成ａ（全ADA測定用試薬） トリス緩衝液 50mM アデノシン 6mM α−ケトグルタル酸 1.3mM NADPH 0.26mM GLDH 50U/ml 組成ｂ（ADA2測定用試薬） トリス緩衝液 50mM アデノシン 6mM α−ケトグルタル酸 1.3mM NADPH 0.26mM GLDH 50U/ml EHNA 0.1mM 測定法 試料20μ、試液3mlを加え、試液分注後３〜５分の
１分間当りの吸光度変化を、試薬ブランクを対照にして
37℃、波長540nmで測定した。
１分間当りの吸光度変化を、試薬ブランクを対照にして
37℃、波長540nmで測定した。
第１表に示した結果から、本発明の試薬は比較例に比
べて吸光度変化が大きく、すなち感度が高く、また、バ
ラツキが少なく、正確な測定ができていることがわか
る。また、本発明の試薬は、ADA1阻害率（ADA2/全ADA×
100）が、比較例とほぼ同じであり、本測定系を用いて
も、従来どおり問題なく、分別定量がおこなわれている
ことがわかる。
べて吸光度変化が大きく、すなち感度が高く、また、バ
ラツキが少なく、正確な測定ができていることがわか
る。また、本発明の試薬は、ADA1阻害率（ADA2/全ADA×
100）が、比較例とほぼ同じであり、本測定系を用いて
も、従来どおり問題なく、分別定量がおこなわれている
ことがわかる。
（発明の効果） 本発明のADA分別定量用試薬を用いた測定方法は従来
法に比べて感度が著しく向上する。特に、アンモニアに
GLDHとNADPHを加えてADAを測定する方法に比べて、約３
倍の感度を有する。本発明ではアンモニアを中間体とし
ないため内因性のアンモニアや乳酸脱水素酵素等の共存
物質の影響をうけず、精度の高い測定を行うことができ
る。又、XOD−PNP法と比較しても、本発明の試薬を用い
る方法は酵素反応により生成した過酸化水素をペルオキ
シダーゼ、水素供与体、アニリン誘導体により測定する
方法であるから、ホルマザン色素を使用しないので色素
沈着の問題がなく、測定感度も高く、精度や正確性に優
れている。
法に比べて感度が著しく向上する。特に、アンモニアに
GLDHとNADPHを加えてADAを測定する方法に比べて、約３
倍の感度を有する。本発明ではアンモニアを中間体とし
ないため内因性のアンモニアや乳酸脱水素酵素等の共存
物質の影響をうけず、精度の高い測定を行うことができ
る。又、XOD−PNP法と比較しても、本発明の試薬を用い
る方法は酵素反応により生成した過酸化水素をペルオキ
シダーゼ、水素供与体、アニリン誘導体により測定する
方法であるから、ホルマザン色素を使用しないので色素
沈着の問題がなく、測定感度も高く、精度や正確性に優
れている。
Claims (1)
- 【請求項１】（ａ）アデノシン、（ｂ）プリンヌクレオ
チドホスホリラーゼ、（ｃ）リン酸またはリン酸塩、
（ｄ）サキンチンオキシダーゼ、（ｅ）ペルオキシダー
ゼ、（ｆ）水素供与体、（ｇ）アニリン誘導体および
（ｈ）エリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）
アデニン、コフォルマイシンおよびデオキシコフォルマ
イシンからなる群から選ばれた少なくとも一種の化合物
を含むことを特徴とするアデノシンデアミナーゼ分別定
量用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20707290A JP2836218B2 (ja) | 1990-08-03 | 1990-08-03 | アデノシンデアミナーゼ分別定量用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20707290A JP2836218B2 (ja) | 1990-08-03 | 1990-08-03 | アデノシンデアミナーゼ分別定量用試薬 |
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| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0491796A JPH0491796A (ja) | 1992-03-25 |
| JP2836218B2 true JP2836218B2 (ja) | 1998-12-14 |
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Family Applications (1)
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| Country | Link |
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| JP (1) | JP2836218B2 (ja) |
-
1990
- 1990-08-03 JP JP20707290A patent/JP2836218B2/ja not_active Expired - Fee Related
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|---|---|
| JPH0491796A (ja) | 1992-03-25 |
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