JP2552047B2 - 悪性腫瘍の検査方法 - Google Patents
悪性腫瘍の検査方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、一般に悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子
又は癌関連遺伝子をタンパク質発現生成物に対する癌患
者自身の免疫反応の利用を介した悪性腫瘍の検査、モニ
ター及び治療に関する。
又は癌関連遺伝子をタンパク質発現生成物に対する癌患
者自身の免疫反応の利用を介した悪性腫瘍の検査、モニ
ター及び治療に関する。
発明の背景 莫大な費用及び人材の投資もかかわらず、癌は死の主
なる原因であり続けている。悪性腫瘍の一般的な特徴は
無秩序な細胞増殖である。癌細胞は正常な表現難から自
立増殖可能な悪性腫瘍表現型への形質転換プロセスを受
けたものと考えられる。体細胞遺伝子の突然変異は、正
常細胞から悪性腫瘍細胞への形質転換をもたらす一般的
な一次現象と考えられる。この突然変異遺伝子によって
コードされる悪性腫瘍表現型の特徴は細胞***を際に形
質転換細胞の子孫へと受け継がれる。形質転換に関与す
る種々の遺伝子を癌遺伝子と称する。癌遺伝子は本来癌
ウイルスの遺伝子物質の成分として同定されていた。ヒ
ト染色体に相同性の遺伝子を一般に癌遺伝子又は癌原遺
伝子と称する。
なる原因であり続けている。悪性腫瘍の一般的な特徴は
無秩序な細胞増殖である。癌細胞は正常な表現難から自
立増殖可能な悪性腫瘍表現型への形質転換プロセスを受
けたものと考えられる。体細胞遺伝子の突然変異は、正
常細胞から悪性腫瘍細胞への形質転換をもたらす一般的
な一次現象と考えられる。この突然変異遺伝子によって
コードされる悪性腫瘍表現型の特徴は細胞***を際に形
質転換細胞の子孫へと受け継がれる。形質転換に関与す
る種々の遺伝子を癌遺伝子と称する。癌遺伝子は本来癌
ウイルスの遺伝子物質の成分として同定されていた。ヒ
ト染色体に相同性の遺伝子を一般に癌遺伝子又は癌原遺
伝子と称する。
癌遺伝子に関するリサーチは、悪性腫瘍細胞を作動さ
せ、且つ形質転換に重要又は関連する少なくとも40種の
癌遺伝子を同定している。癌遺伝子はその遺伝子生成物
（例えばこの癌遺伝子によって発現されたタンパク質）
の推定の機能又は位置に基づいて種々のグループに分類
されている。
せ、且つ形質転換に重要又は関連する少なくとも40種の
癌遺伝子を同定している。癌遺伝子はその遺伝子生成物
（例えばこの癌遺伝子によって発現されたタンパク質）
の推定の機能又は位置に基づいて種々のグループに分類
されている。
癌原遺伝子は正常な細胞の生理現象の一定の局面に不
可欠であると考えられている。ある癌原遺伝子は本質的
に正常な遺伝子生成物の増大した又は抑えられた発現に
由来する多数のメカニズムを介して、細胞性癌遺伝子へ
と活性化されうるものと考えられている。例えばmyc遺
伝子の種は一定のヒトリンパ腫及び癌腫の発生及び／又
は進行に関連し、そのトランスフォーミング活性化は多
数のメカニズムの結果である。他方、その他の癌原遺伝
子は該遺伝子のコード配列における突然変異を含む多数
のメカニズムを介してトランスフォーミング細胞性癌遺
伝子へ活性化されるものと考えらえている。これはタン
パク質のアミノ酸配列における−もしくは複数の相違の
結果としての変異した一次構造及び生物化学特性を有す
る遺伝子生成物をもたらす。例えば、最も一般的な型の
ヒト悪性腫瘍の原因であるras遺伝子は単一のコドン変
化の結果活性化される。
可欠であると考えられている。ある癌原遺伝子は本質的
に正常な遺伝子生成物の増大した又は抑えられた発現に
由来する多数のメカニズムを介して、細胞性癌遺伝子へ
と活性化されうるものと考えられている。例えばmyc遺
伝子の種は一定のヒトリンパ腫及び癌腫の発生及び／又
は進行に関連し、そのトランスフォーミング活性化は多
数のメカニズムの結果である。他方、その他の癌原遺伝
子は該遺伝子のコード配列における突然変異を含む多数
のメカニズムを介してトランスフォーミング細胞性癌遺
伝子へ活性化されるものと考えらえている。これはタン
パク質のアミノ酸配列における−もしくは複数の相違の
結果としての変異した一次構造及び生物化学特性を有す
る遺伝子生成物をもたらす。例えば、最も一般的な型の
ヒト悪性腫瘍の原因であるras遺伝子は単一のコドン変
化の結果活性化される。
癌の治療方法の開発のための研究は一般に正常細胞と
悪性腫瘍細胞との特徴の相違の利用に注目している。突
然変異された、転移（トランスロケーション）された又
は過剰発現された癌原遺伝子及びこのような遺伝子の生
成物は、正常細胞と悪性腫瘍細胞との間で、潜在的な同
定可能な特徴的相違を示す。この同定できる相違は診断
アッセイ又は治療方法の開発に利用されている。
悪性腫瘍細胞との特徴の相違の利用に注目している。突
然変異された、転移（トランスロケーション）された又
は過剰発現された癌原遺伝子及びこのような遺伝子の生
成物は、正常細胞と悪性腫瘍細胞との間で、潜在的な同
定可能な特徴的相違を示す。この同定できる相違は診断
アッセイ又は治療方法の開発に利用されている。
診断アッセイを開発する手法は、固有の又は異常な癌
遺伝子生成物に対して特異的な抗体を利用して、組織又
は体液中における癌遺伝子の発現生成物を定量するよう
に試まれてきた。一般に、異種移植（xenogenic）抗体
は異常に発現する癌原遺伝子生成物に対して作られる。
異常癌遺伝子生成物の検出に基づく診断アッセイの開発
における問題は以下の要因を含んでいる：（１）異常生
成物に対する高い特異性、親和性及び選択性を有する抗
体の欠如；（２）微量の異常癌遺伝子生成物しか腫瘍細
胞から放出されないことがあること；（３）癌遺伝子生
成物は腫瘍細胞より断続的にしか放出されないことがあ
ること；（４）癌遺伝子生成物は抗体によって体液から
排除されるか又は免疫複合体へと形成されうることがあ
ること；及び（５）遊離抗原は迅速に清浄化又は分解さ
れうることである。
遺伝子生成物に対して特異的な抗体を利用して、組織又
は体液中における癌遺伝子の発現生成物を定量するよう
に試まれてきた。一般に、異種移植（xenogenic）抗体
は異常に発現する癌原遺伝子生成物に対して作られる。
異常癌遺伝子生成物の検出に基づく診断アッセイの開発
における問題は以下の要因を含んでいる：（１）異常生
成物に対する高い特異性、親和性及び選択性を有する抗
体の欠如；（２）微量の異常癌遺伝子生成物しか腫瘍細
胞から放出されないことがあること；（３）癌遺伝子生
成物は腫瘍細胞より断続的にしか放出されないことがあ
ること；（４）癌遺伝子生成物は抗体によって体液から
排除されるか又は免疫複合体へと形成されうることがあ
ること；及び（５）遊離抗原は迅速に清浄化又は分解さ
れうることである。
癌の診断及び治療への現在の手法における困難さに原
因して、当業界において改善された方法及び組成物の要
望が存在している。本発明はこの要望を満足せしめ、そ
して更に他の関連の利点を提供する。
因して、当業界において改善された方法及び組成物の要
望が存在している。本発明はこの要望を満足せしめ、そ
して更に他の関連の利点を提供する。
発明の概要 簡潔に述べると、本発明は活性化癌遺伝子又は癌関連
遺伝子が悪性腫瘍にかかわる温血動物における悪性腫瘍
の検出のための種々の方法を提供する。該方法は悪性腫
瘍が予測される場合に一回限りにて利用されるか、悪性
腫瘍を有する危険性の高い固体をモニターするために周
期的に利用されうる。ある態様において、該方法は以下
の段階を含んで成る：（ａ）温血動物から単離せしめた
Ｔ細胞を、悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子の少なくとも１種類のタンパク質発現生成物と
インキュベートせしめ；そして（ｂ）該Ｔ細胞の増殖の
有無を検出することによって、該悪性腫瘍の有無を調べ
る。他の態様において、該方法は以下の段階を含んで成
る：（ａ）悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子のタンパク質発現生成物に対して特異的な抗体
を含むと予測される体液を、該悪性腫瘍に関連する活性
化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種類のタン
パク質発現生成物と接触され；（ｂ）該体液を免疫複合
体が形成できる条件及び十分な時間にわたってインキュ
ベートせしめ；そして（ｃ）該タンパク質発現生成物と
該タンパク質発現生成物に対して特異的な体液中の抗体
とで形成される１もしくは複数種の免疫複合体の有無を
検出することにより、該悪性腫瘍の有無を調べる。
遺伝子が悪性腫瘍にかかわる温血動物における悪性腫瘍
の検出のための種々の方法を提供する。該方法は悪性腫
瘍が予測される場合に一回限りにて利用されるか、悪性
腫瘍を有する危険性の高い固体をモニターするために周
期的に利用されうる。ある態様において、該方法は以下
の段階を含んで成る：（ａ）温血動物から単離せしめた
Ｔ細胞を、悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子の少なくとも１種類のタンパク質発現生成物と
インキュベートせしめ；そして（ｂ）該Ｔ細胞の増殖の
有無を検出することによって、該悪性腫瘍の有無を調べ
る。他の態様において、該方法は以下の段階を含んで成
る：（ａ）悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子のタンパク質発現生成物に対して特異的な抗体
を含むと予測される体液を、該悪性腫瘍に関連する活性
化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種類のタン
パク質発現生成物と接触され；（ｂ）該体液を免疫複合
体が形成できる条件及び十分な時間にわたってインキュ
ベートせしめ；そして（ｃ）該タンパク質発現生成物と
該タンパク質発現生成物に対して特異的な体液中の抗体
とで形成される１もしくは複数種の免疫複合体の有無を
検出することにより、該悪性腫瘍の有無を調べる。
他の知見において、本発明は活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する温血動物における癌治療
の効果をモニターするための方法を提供しうる。ある態
様において、該方法は以下の段階を含んで成る：（ａ）
治療開始前に温血動物から採取した第１体液試料を、悪
性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少
なくとも１種類のタンパク質発現生成物と接触させ；
（ｂ）該体液を免疫複合体が形成できる条件及び十分な
時間にわたってインキュベートせしめ；（ｃ）該タンパ
ク質発現生成物と該タンパク質発現生成物に対して特異
的な体液中の抗体とで形成される免疫複合体を検出し；
（ｄ）治療の開始した後の該動物から採取した第２体液
試料に基づいて段階（ａ），（ｂ）及び（ｃ）を繰り返
し；そして（ｅ）該第１と第２体液試料において検出さ
れる免疫複合体の数を比較し、これによって該動物にお
ける該治療の効果をモニターする。
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する温血動物における癌治療
の効果をモニターするための方法を提供しうる。ある態
様において、該方法は以下の段階を含んで成る：（ａ）
治療開始前に温血動物から採取した第１体液試料を、悪
性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少
なくとも１種類のタンパク質発現生成物と接触させ；
（ｂ）該体液を免疫複合体が形成できる条件及び十分な
時間にわたってインキュベートせしめ；（ｃ）該タンパ
ク質発現生成物と該タンパク質発現生成物に対して特異
的な体液中の抗体とで形成される免疫複合体を検出し；
（ｄ）治療の開始した後の該動物から採取した第２体液
試料に基づいて段階（ａ），（ｂ）及び（ｃ）を繰り返
し；そして（ｅ）該第１と第２体液試料において検出さ
れる免疫複合体の数を比較し、これによって該動物にお
ける該治療の効果をモニターする。
本発明は活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子が悪性腫瘍
に関連する温血動物における悪性腫瘍の治療のために方
法にも向けられている。ある態様において、該方法は以
下の段階を含んで成る：（ａ）温血動物からＴ細胞を単
離し、（ｂ）該Ｔ細胞を悪性腫瘍に関連する活性化癌遺
伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタンパク質発
現生成物の存在下においてインキュベートせしめて該Ｔ
細胞を増殖させ；そして（ｃ）温血動物に有効量のこの
増殖させたＴ細胞を投与せしめる。他の態様において、
該方法は以下の段階を含んで成る：（ａ）温血動物から
Ｔ細胞を単離し、（ｂ）該Ｔ細胞を悪性腫瘍に関連する
活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタ
ンパク質発現生成物の存在下においてインキュベートせ
しめて該Ｔ細胞を増殖させ；（ｃ）該タンパク質発現生
成物の存在下において増殖する１もしくは複数の種類の
細胞をクローン化させ；そして（ｄ）温血動物に有効量
のこのクローン化Ｔ細胞を投与せしめる。第三の態様に
おいて、該方法は動物を悪性腫瘍に関連する活性化癌遺
伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタンパク質発
現生成物によって免疫することを含んで成る。
に関連する温血動物における悪性腫瘍の治療のために方
法にも向けられている。ある態様において、該方法は以
下の段階を含んで成る：（ａ）温血動物からＴ細胞を単
離し、（ｂ）該Ｔ細胞を悪性腫瘍に関連する活性化癌遺
伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタンパク質発
現生成物の存在下においてインキュベートせしめて該Ｔ
細胞を増殖させ；そして（ｃ）温血動物に有効量のこの
増殖させたＴ細胞を投与せしめる。他の態様において、
該方法は以下の段階を含んで成る：（ａ）温血動物から
Ｔ細胞を単離し、（ｂ）該Ｔ細胞を悪性腫瘍に関連する
活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタ
ンパク質発現生成物の存在下においてインキュベートせ
しめて該Ｔ細胞を増殖させ；（ｃ）該タンパク質発現生
成物の存在下において増殖する１もしくは複数の種類の
細胞をクローン化させ；そして（ｄ）温血動物に有効量
のこのクローン化Ｔ細胞を投与せしめる。第三の態様に
おいて、該方法は動物を悪性腫瘍に関連する活性化癌遺
伝子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種のタンパク質発
現生成物によって免疫することを含んで成る。
関連する見地において、本発明は抗癌治療組成物であ
って、悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連遺
伝子の少なくとも１種のタンパク質発現生成物の存在下
において増殖せしめたＴ細胞を、生理学的に受け入れら
れている担体又は希釈剤と組合せて含んで成る組成物を
提供する。このようなＴ細胞は温血動物における悪性腫
瘍の処理のための医薬品の製造において有用である。
って、悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連遺
伝子の少なくとも１種のタンパク質発現生成物の存在下
において増殖せしめたＴ細胞を、生理学的に受け入れら
れている担体又は希釈剤と組合せて含んで成る組成物を
提供する。このようなＴ細胞は温血動物における悪性腫
瘍の処理のための医薬品の製造において有用である。
図面の簡単な説明 図１は、点変異rasペプチドに対する特異的なＴ細胞
応答が、生体内において０日目に、ネズミras−p21（ア
ミノ酸５〜16）と類似に作製した、12個のアミノ酸の長
さであるが、位置12（即ち、ras−p21にとっては位置12
であるが、該ペプチドにとっては位置８）にて正常に見
い出せるグリシンをアルギニンで置き換えたプペチド50
μｇを感作せしめることによって発生させることができ
ることを示すグラフ図である。このペプチドをras p5
−16〔R12〕又はras−R12と称する。マウスをras−R12
ペプチドとアジュバント、又はアジュバント単独で免疫
した。10日後、流出するリンパ腺を集め、そしてこのリ
ンパ球をras−R12ペプチドによってインビトロで刺激せ
しめるか、又は特定のコントロールとしての、位置12に
てアルギニンをセリン、システインもしくはグリシンで
置き換えたそれぞれras−S12,ras−C12及びras−G12と
称する類似のペプチドによってインビトロで刺激せしめ
た。４日後、培養物を下記の例１に詳細の通り、〔3H〕
−チミジンで８時間パルスにかけた。結果は△CPMとし
て表わした。
応答が、生体内において０日目に、ネズミras−p21（ア
ミノ酸５〜16）と類似に作製した、12個のアミノ酸の長
さであるが、位置12（即ち、ras−p21にとっては位置12
であるが、該ペプチドにとっては位置８）にて正常に見
い出せるグリシンをアルギニンで置き換えたプペチド50
μｇを感作せしめることによって発生させることができ
ることを示すグラフ図である。このペプチドをras p5
−16〔R12〕又はras−R12と称する。マウスをras−R12
ペプチドとアジュバント、又はアジュバント単独で免疫
した。10日後、流出するリンパ腺を集め、そしてこのリ
ンパ球をras−R12ペプチドによってインビトロで刺激せ
しめるか、又は特定のコントロールとしての、位置12に
てアルギニンをセリン、システインもしくはグリシンで
置き換えたそれぞれras−S12,ras−C12及びras−G12と
称する類似のペプチドによってインビトロで刺激せしめ
た。４日後、培養物を下記の例１に詳細の通り、〔3H〕
−チミジンで８時間パルスにかけた。結果は△CPMとし
て表わした。
図２は、試験管内で、ras−ペプチドによる断続的な
刺激に応答させて長期間増殖させたras−ペプチド特異
性Ｔ細胞が特異的な機能を保持することを示す。ras−R
12ペプチド（上記の図１に定義の通り）で感作せしめた
C57BL/6マウスの腸間膜リンパ膜由来のＴ細胞を、抗原
提供細胞としての照射B6脾臓細胞（3000rad）に基づくr
as−R12ペプチド（５μg/ml）による断続的な刺激に応
答して試験管内で長期間培養した。このＴ細胞系の特異
性を85日目に、段階濃度の種々のrasペプチド又は複数
の潜在免疫原ペプチドを含むトリプシン処理のOVA（TOV
A）によって刺激することによって試験した。データー
は１分当りに取り込まれる3HTdRのカウント数（c.p.m）
で表わした。
刺激に応答させて長期間増殖させたras−ペプチド特異
性Ｔ細胞が特異的な機能を保持することを示す。ras−R
12ペプチド（上記の図１に定義の通り）で感作せしめた
C57BL/6マウスの腸間膜リンパ膜由来のＴ細胞を、抗原
提供細胞としての照射B6脾臓細胞（3000rad）に基づくr
as−R12ペプチド（５μg/ml）による断続的な刺激に応
答して試験管内で長期間培養した。このＴ細胞系の特異
性を85日目に、段階濃度の種々のrasペプチド又は複数
の潜在免疫原ペプチドを含むトリプシン処理のOVA（TOV
A）によって刺激することによって試験した。データー
は１分当りに取り込まれる3HTdRのカウント数（c.p.m）
で表わした。
図３は、rasペプチドに特異的なＴ細胞が同じ残基置
換を含む完全ras p21タンパク質に特異的に応答性であ
ることを示す。p5−17〔R12〕と称するこのペプチドは1
3個のアミノ酸残基より成り、そしてこれはネズミras−
p21（アミノ酸５〜17）と類似に作製したが、但しras−
p21の位置21にて通常見い出せるグリシン（ａ）がアル
ギニン（Ｒ）で置換されている。Arg−12rasペプチドに
特異的なクローン化B6T細胞を照射B6脾臓細胞及びp5−1
7〔R12〕又は位置12にて表示のアミノ酸を有するras p
21タンパク質〔１μg/ml〕のいづれかと培養した。増殖
応答を４日後に測定した（図１に詳細の通り）。データ
ーは組込まれた3HTdRのc.p.m.の三重測定値の平均で表
わした。標準偏差はc.p.mの＜10％であった。
換を含む完全ras p21タンパク質に特異的に応答性であ
ることを示す。p5−17〔R12〕と称するこのペプチドは1
3個のアミノ酸残基より成り、そしてこれはネズミras−
p21（アミノ酸５〜17）と類似に作製したが、但しras−
p21の位置21にて通常見い出せるグリシン（ａ）がアル
ギニン（Ｒ）で置換されている。Arg−12rasペプチドに
特異的なクローン化B6T細胞を照射B6脾臓細胞及びp5−1
7〔R12〕又は位置12にて表示のアミノ酸を有するras p
21タンパク質〔１μg/ml〕のいづれかと培養した。増殖
応答を４日後に測定した（図１に詳細の通り）。データ
ーは組込まれた3HTdRのc.p.m.の三重測定値の平均で表
わした。標準偏差はc.p.mの＜10％であった。
図４は、特異的なＴ細胞応答が、生体内において、ネ
ズミrasp−21（アミノ酸54−56）に類似するがras−p21
の位置61にて通常見い出せるグルタミン（Ｑ）をロイシ
ン（Ｌ）で置き換えて作製した13個のアミノ酸の長さの
ペプチドによって感作せしめることによって発生させる
ことができることを示す。このペプチドをp54−66〔L6
1〕又は〔L61〕と称する。CH3/HeNマウスを２週間の間
隔で、Ribiアジュバンド単独又はp54−66〔L61〕rasペ
プチド（100μｇ）に乳化せしめたアジュバントによっ
て２回皮下的に免疫した。最後の免疫の２週間後、アジ
ュバンド単独（白棒）又はアジュバントとp54−66〔L6
1〕rasペプチド（黒棒）を注射したマウス由来の脾臓を
回収し、そして表示のp54−66rasペプチド（100μg/m
l）に対する増殖応答について試験管内で試験した。位
置61にてグルタミンがリジン（Ｋ）に置換されたペプチ
ド〔K61〕と称する。データーは組込まれた3HTdRのc.p.
mの三重測定値の平均と±S.D.で表わした。
ズミrasp−21（アミノ酸54−56）に類似するがras−p21
の位置61にて通常見い出せるグルタミン（Ｑ）をロイシ
ン（Ｌ）で置き換えて作製した13個のアミノ酸の長さの
ペプチドによって感作せしめることによって発生させる
ことができることを示す。このペプチドをp54−66〔L6
1〕又は〔L61〕と称する。CH3/HeNマウスを２週間の間
隔で、Ribiアジュバンド単独又はp54−66〔L61〕rasペ
プチド（100μｇ）に乳化せしめたアジュバントによっ
て２回皮下的に免疫した。最後の免疫の２週間後、アジ
ュバンド単独（白棒）又はアジュバントとp54−66〔L6
1〕rasペプチド（黒棒）を注射したマウス由来の脾臓を
回収し、そして表示のp54−66rasペプチド（100μg/m
l）に対する増殖応答について試験管内で試験した。位
置61にてグルタミンがリジン（Ｋ）に置換されたペプチ
ド〔K61〕と称する。データーは組込まれた3HTdRのc.p.
mの三重測定値の平均と±S.D.で表わした。
図５は、完全ras p21〔L61〕タンパク質がrasペプチ
ド誘発Ｔ細胞系によって特異的に認識されることを示す
図である。特異的なＴ細胞系及びクローンを以降の例２
に詳細の通りに作りそして維持した。rasペプチドp54−
66〔L61〕に特異的な反応性を示すＴ細胞系（パネル
Ａ）及びrasペプチドp5−17〔R12〕に特異的な反応性を
示すＴ細胞クローン（パネルＢ）を、（ａ）抗原なし
で、（ｂ）感作用rasペプチドで、又は（ｃ）完全ras
p21〔L61〕タンパク質で刺激せしめた。このras ｐ−5
4−66〔L61〕特異的Ｔ細胞系はC3H由来であり、そしてr
as p5−17〔R12〕特異的Ｔ細胞クローンはB6由来であ
った。増殖アッセイは抗原提供細胞としての同系照射脾
臓細胞によって行った（図１に示す通り）。刺激用ペプ
チド及びタンパク質は５μg/mlの濃度で利用した。この
ras p21〔L61〕タンパク質はE.コリ（E.coli）HB101に
おいて、原核発現性プラスミドpHR−L9を用いて生産
し、そしてDEAE−SephacelとSephadexの連続カラムクロ
マトグラフィーによって精製した。データーは組込まれ
た3HTdRのc.p.m.の平均値と±S.Dで表わした。
ド誘発Ｔ細胞系によって特異的に認識されることを示す
図である。特異的なＴ細胞系及びクローンを以降の例２
に詳細の通りに作りそして維持した。rasペプチドp54−
66〔L61〕に特異的な反応性を示すＴ細胞系（パネル
Ａ）及びrasペプチドp5−17〔R12〕に特異的な反応性を
示すＴ細胞クローン（パネルＢ）を、（ａ）抗原なし
で、（ｂ）感作用rasペプチドで、又は（ｃ）完全ras
p21〔L61〕タンパク質で刺激せしめた。このras ｐ−5
4−66〔L61〕特異的Ｔ細胞系はC3H由来であり、そしてr
as p5−17〔R12〕特異的Ｔ細胞クローンはB6由来であ
った。増殖アッセイは抗原提供細胞としての同系照射脾
臓細胞によって行った（図１に示す通り）。刺激用ペプ
チド及びタンパク質は５μg/mlの濃度で利用した。この
ras p21〔L61〕タンパク質はE.コリ（E.coli）HB101に
おいて、原核発現性プラスミドpHR−L9を用いて生産
し、そしてDEAE−SephacelとSephadexの連続カラムクロ
マトグラフィーによって精製した。データーは組込まれ
た3HTdRのc.p.m.の平均値と±S.Dで表わした。
発明の詳細な説明 本発明を記載する前に、その理解に役立つために本明
細書に用いる一定の定義を記載する。
細書に用いる一定の定義を記載する。
活性化癌遺伝子−本明細書では、活性化された癌原遺
伝子であって、正常な癌原遺伝子によって発現されるタ
ンパク質生成物のアミノ酸配列以外のアミノ酸配列を有
するタンパク質生成物の発現をもたらすものを称する。
伝子であって、正常な癌原遺伝子によって発現されるタ
ンパク質生成物のアミノ酸配列以外のアミノ酸配列を有
するタンパク質生成物の発現をもたらすものを称する。
癌関連遺伝子−本明細書では、悪性腫瘍表現型の発現
又は維持に関連する任意の変異した遺伝子（癌遺伝子以
外）に関する。このような変異遺伝子の例にはp53腫瘍
サプレッサー遺伝子の突然変異体が含まれる。
又は維持に関連する任意の変異した遺伝子（癌遺伝子以
外）に関する。このような変異遺伝子の例にはp53腫瘍
サプレッサー遺伝子の突然変異体が含まれる。
タンパク質発現生成物−本明細書では、タンパク質、
ポリペプチド及びペプチドを含み；そして完全分子、そ
のフラグメント、又はその機能的な同等物であってよ
く；そして遺伝子操作されていてもよい。
ポリペプチド及びペプチドを含み；そして完全分子、そ
のフラグメント、又はその機能的な同等物であってよ
く；そして遺伝子操作されていてもよい。
Ｔ細胞の増殖−本明細書では、Ｔ細胞の増殖及び増殖
をもたらすＴ細胞の刺激、即ち、有糸***をもたらす現
象の開始及び有糸***そのものを含んでいる。Ｔ細胞の
増殖を検出する方法は以下に詳細してある。
をもたらすＴ細胞の刺激、即ち、有糸***をもたらす現
象の開始及び有糸***そのものを含んでいる。Ｔ細胞の
増殖を検出する方法は以下に詳細してある。
前記した通り、本発明は活性化癌遺伝子又は癌関連遺
伝子が悪性腫瘍に関連する温血動物における悪性腫瘍を
診断する、モニターする、及び治療するための方法並び
に組成物に関する。本発明が開示するには、活性化癌遺
伝子及び癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物は胸腺依
存性リンパ球（以降「Ｔ細胞」）によって認識されるこ
とができ、従って、このようなタンパク質発現生成物を
発現する悪性腫瘍の診断及び処置のために自発性免疫応
答を利用することができる。
伝子が悪性腫瘍に関連する温血動物における悪性腫瘍を
診断する、モニターする、及び治療するための方法並び
に組成物に関する。本発明が開示するには、活性化癌遺
伝子及び癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物は胸腺依
存性リンパ球（以降「Ｔ細胞」）によって認識されるこ
とができ、従って、このようなタンパク質発現生成物を
発現する悪性腫瘍の診断及び処置のために自発性免疫応
答を利用することができる。
癌原遺伝子の活性化は、悪性腫瘍表現型への系質転換
及び発現に関与するか又はそれをもたらす。突然変異又
は染色体転移（遺伝子転移）のようなメカニズムによる
活性化は、変異した一次構造を有する遺伝子生成物、即
ち、癌原遺伝子によって発現される正常タンパク質と比
較して１もしくは複数のアミノ酸が異なっているタンパ
ク質発現生成物を生じせしめる。突然変異のメカニズム
はヌクレオチドの点突然変異、組換え、欠失及び挿入を
含む。突然変異を介する癌原遺伝子の活性化の例はras
及びneu癌原遺伝子の活性化が含まれる。染色体転移は
例えば慢性骨髄性白血病に関連する融合タンパク質をも
たらす。同様に、癌関連遺伝子は変異したアミノ酸配列
を有する異常なタンパク質生成物を発現する。例えば、
p53腫瘍サップレッサー遺伝子の突然変異はアミノ酸の
置換をもたらす。
及び発現に関与するか又はそれをもたらす。突然変異又
は染色体転移（遺伝子転移）のようなメカニズムによる
活性化は、変異した一次構造を有する遺伝子生成物、即
ち、癌原遺伝子によって発現される正常タンパク質と比
較して１もしくは複数のアミノ酸が異なっているタンパ
ク質発現生成物を生じせしめる。突然変異のメカニズム
はヌクレオチドの点突然変異、組換え、欠失及び挿入を
含む。突然変異を介する癌原遺伝子の活性化の例はras
及びneu癌原遺伝子の活性化が含まれる。染色体転移は
例えば慢性骨髄性白血病に関連する融合タンパク質をも
たらす。同様に、癌関連遺伝子は変異したアミノ酸配列
を有する異常なタンパク質生成物を発現する。例えば、
p53腫瘍サップレッサー遺伝子の突然変異はアミノ酸の
置換をもたらす。
本発明において開示の通り、活性化癌遺伝子及び癌関
連遺伝子によって発現される、変異した一次構造を有す
るタンパク質生成物はＴ細胞によって認識される。この
ような異常タンパク質発現生成物は細胞内で「変化」す
る。即ち、タンパク質が合成され、機能し、その後分解
し、そして新しく合成される分子で置き代わられる周期
を経る。分解したタンパク質に由来するペプチドフラグ
メントは主要組織適合性複合体（MHC）抗原に結合す
る。細胞表層上のMHC抗原に結合している異常ペプチド
が見い出せること、及び宿主Ｔ細胞によって異常ペプチ
ドと自己MHC抗原との組合せが認識されることにより、
悪性腫瘍相棒はＴ細胞の免疫原であろう。Ｔ細胞レセプ
ターの鋭敏な特異性は、単独のアミノ酸残基により相違
するタンパク質のフラグメント間の区別を個々のＴ細胞
ができるようにする。
連遺伝子によって発現される、変異した一次構造を有す
るタンパク質生成物はＴ細胞によって認識される。この
ような異常タンパク質発現生成物は細胞内で「変化」す
る。即ち、タンパク質が合成され、機能し、その後分解
し、そして新しく合成される分子で置き代わられる周期
を経る。分解したタンパク質に由来するペプチドフラグ
メントは主要組織適合性複合体（MHC）抗原に結合す
る。細胞表層上のMHC抗原に結合している異常ペプチド
が見い出せること、及び宿主Ｔ細胞によって異常ペプチ
ドと自己MHC抗原との組合せが認識されることにより、
悪性腫瘍相棒はＴ細胞の免疫原であろう。Ｔ細胞レセプ
ターの鋭敏な特異性は、単独のアミノ酸残基により相違
するタンパク質のフラグメント間の区別を個々のＴ細胞
ができるようにする。
異常ペプチドに対する免疫応答の際、ペプチド−MHC
複合体への高い親和結合性を有するＴ細胞レセプターを
示すＴ細胞はこのペプチド−MHC複合体と結合し、従っ
て活性化されて増殖を誘発せしめる。異常ペプチドとの
第１の接触において、少量の免疫Ｔ細胞が増殖してエフ
ェクターＴ細胞及び記憶Ｔ細胞へと分化するであろう。
この第１の免疫応答は生体内では生ずるが、試験管内で
は検出されない。記憶Ｔ細胞による同一の抗原とのその
後の接触はより迅速且つより強い免疫応答をもたらすで
あろう。この第２応答は生体内でも試験管内でも起きう
る。試験管内応答は、抗原に再暴露せしめたＴ細胞集団
の増殖の程度を調べることによって容易に測定できる。
特定の抗原に応答性のＴ細胞集団の増殖は抗原に対する
第一の暴露又は感作の指標と考えられる。
複合体への高い親和結合性を有するＴ細胞レセプターを
示すＴ細胞はこのペプチド−MHC複合体と結合し、従っ
て活性化されて増殖を誘発せしめる。異常ペプチドとの
第１の接触において、少量の免疫Ｔ細胞が増殖してエフ
ェクターＴ細胞及び記憶Ｔ細胞へと分化するであろう。
この第１の免疫応答は生体内では生ずるが、試験管内で
は検出されない。記憶Ｔ細胞による同一の抗原とのその
後の接触はより迅速且つより強い免疫応答をもたらすで
あろう。この第２応答は生体内でも試験管内でも起きう
る。試験管内応答は、抗原に再暴露せしめたＴ細胞集団
の増殖の程度を調べることによって容易に測定できる。
特定の抗原に応答性のＴ細胞集団の増殖は抗原に対する
第一の暴露又は感作の指標と考えられる。
本発明のある見地において、活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する悪性腫瘍が検出されう
る。活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子により発現される
異常タンパク質に対する応答が一度発生したら、該タン
パク質が検査時に体内に存在しようが存在していないが
関係なく、免疫後長期間存続し且つ長期間検出されう
る。ある態様において、温血動物、例えばヒトの活性化
癌遺伝子又は癌関連遺伝子への一次暴露はＴ細胞増殖応
答の有無を検査することによって検出できる。より詳し
くは、常用の技術によって固体から単離したＴ細胞を活
性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物
とインキュベートせしめる。癌遺伝子の例には、ras,sr
c,abl,fgr,rel,yes,fes,net,mos,raf,erbB,erbA,fms,ne
u,ros,kit,sea,sis,myc,myb,fos,ski,jun及びetsが含ま
れる。他方、複数の種類のタクパク質発現生成物がＴ細
胞試料によって検査できる。もしあるタンパク質が他の
タンパク質発現生成物を妨害するなら、小分けした個々
のＴ細胞試料をこのような１種のタンパク質発現生成物
のみとインキュベートすることが所望されうる。
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する悪性腫瘍が検出されう
る。活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子により発現される
異常タンパク質に対する応答が一度発生したら、該タン
パク質が検査時に体内に存在しようが存在していないが
関係なく、免疫後長期間存続し且つ長期間検出されう
る。ある態様において、温血動物、例えばヒトの活性化
癌遺伝子又は癌関連遺伝子への一次暴露はＴ細胞増殖応
答の有無を検査することによって検出できる。より詳し
くは、常用の技術によって固体から単離したＴ細胞を活
性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物
とインキュベートせしめる。癌遺伝子の例には、ras,sr
c,abl,fgr,rel,yes,fes,net,mos,raf,erbB,erbA,fms,ne
u,ros,kit,sea,sis,myc,myb,fos,ski,jun及びetsが含ま
れる。他方、複数の種類のタクパク質発現生成物がＴ細
胞試料によって検査できる。もしあるタンパク質が他の
タンパク質発現生成物を妨害するなら、小分けした個々
のＴ細胞試料をこのような１種のタンパク質発現生成物
のみとインキュベートすることが所望されうる。
Ｔ細胞の増殖の検出は種々の既知の技術によって成し
遂げられる。例えば、Ｔ細胞増殖はDNA合成のレートを
測定することによって検出できる。増殖するように刺激
されたＴ細胞は高められたレートのDNA合成を示す。DNA
合成のレートを測定するための典型的な方法は例えばＴ
細胞をトリチウム化チミジン、即ち新しく合成されるDN
Aに組込まれるヌクレオシド先駆体とパルス標識培養す
ることである。組込まれるトリチウム化チミジンの量は
液体シンチレーション光度計を用いて測定できる。Ｔ細
胞増殖を検出するためのその他の方法は、インターロイ
キン−２（IL−２）生産性、Ca2+流出又は色素、例えば
３−（4,5−ジメチルチアゾール−２−イル）−2,5−ジ
フェニル−テトラゾリウムの取込みの増大を測定するこ
とが含まれる。
遂げられる。例えば、Ｔ細胞増殖はDNA合成のレートを
測定することによって検出できる。増殖するように刺激
されたＴ細胞は高められたレートのDNA合成を示す。DNA
合成のレートを測定するための典型的な方法は例えばＴ
細胞をトリチウム化チミジン、即ち新しく合成されるDN
Aに組込まれるヌクレオシド先駆体とパルス標識培養す
ることである。組込まれるトリチウム化チミジンの量は
液体シンチレーション光度計を用いて測定できる。Ｔ細
胞増殖を検出するためのその他の方法は、インターロイ
キン−２（IL−２）生産性、Ca2+流出又は色素、例えば
３−（4,5−ジメチルチアゾール−２−イル）−2,5−ジ
フェニル−テトラゾリウムの取込みの増大を測定するこ
とが含まれる。
Ｔ細胞を免疫化できるタンパク質生成物を発現する活
性化癌遺伝子の代表令はras癌遺伝子である。Ras癌原遺
伝子は高い率で保存される種類の包括的にｐ「21」と称
される21kdのタンパク質（長さ189個のアミノ酸）をコ
ードする遺伝子である。p21タンパク質は細胞膜の内側
に結合し、グアノシンヌクレオチドと一体化し、そして
固有のGTPase活性を有する。p21タンパク質は細胞増殖
及び分化を調節する重要な仲介シグナルタンパク質とし
て考えられている。Ras癌遺伝子はまずトランスフォー
ミングハービーとカーステン（Harvey and Kirsten）
ネズミ肉腫レトロウイルスにおける遺伝子物質として検
出される。動物において、発癌物質は非常に特異的且つ
予想できる突然変異を、通常はp21分子の固有GTPase活
性に損傷を与え、そしてトランスフォーミング活性を授
けるようなコドン12,13,59及び／又は61を包含する突然
変異を誘発する。ヒトゲノムはＫ−ras,H−ras及びＮ−
rasとして知られるウイルスras癌遺伝子の少なくとも３
種のras癌原遺伝子類似体を含み、これらは３種の別々
のヒト染色体上にある。この３種のうちの１種のras癌
原遺伝子の突然変異は、膵臓腺癌、甲状腺濾泡状癌、結
腸腺癌、セミノーマ、肺腺癌、肝臓腺癌、黒色腫、骨髄
性白血病及び骨髄腫を含む種々の悪性疾患において一般
に生ずる。本発明の開示は、この３種のras遺伝子のう
ちのいづれもの発現タンパク質生成物が一度突然変異さ
れたら単一のアミノ酸置換によって自発性Ｔ細胞によっ
て認識されうることを示す。
性化癌遺伝子の代表令はras癌遺伝子である。Ras癌原遺
伝子は高い率で保存される種類の包括的にｐ「21」と称
される21kdのタンパク質（長さ189個のアミノ酸）をコ
ードする遺伝子である。p21タンパク質は細胞膜の内側
に結合し、グアノシンヌクレオチドと一体化し、そして
固有のGTPase活性を有する。p21タンパク質は細胞増殖
及び分化を調節する重要な仲介シグナルタンパク質とし
て考えられている。Ras癌遺伝子はまずトランスフォー
ミングハービーとカーステン（Harvey and Kirsten）
ネズミ肉腫レトロウイルスにおける遺伝子物質として検
出される。動物において、発癌物質は非常に特異的且つ
予想できる突然変異を、通常はp21分子の固有GTPase活
性に損傷を与え、そしてトランスフォーミング活性を授
けるようなコドン12,13,59及び／又は61を包含する突然
変異を誘発する。ヒトゲノムはＫ−ras,H−ras及びＮ−
rasとして知られるウイルスras癌遺伝子の少なくとも３
種のras癌原遺伝子類似体を含み、これらは３種の別々
のヒト染色体上にある。この３種のうちの１種のras癌
原遺伝子の突然変異は、膵臓腺癌、甲状腺濾泡状癌、結
腸腺癌、セミノーマ、肺腺癌、肝臓腺癌、黒色腫、骨髄
性白血病及び骨髄腫を含む種々の悪性疾患において一般
に生ずる。本発明の開示は、この３種のras遺伝子のう
ちのいづれもの発現タンパク質生成物が一度突然変異さ
れたら単一のアミノ酸置換によって自発性Ｔ細胞によっ
て認識されうることを示す。
例えば本発明において、p21の残基５−16,5−17又は
４−14由来のアミノ酸配列に相当する12個又は13個のア
ミノ酸残基より成るペプチドを、正常グリシン（Gly−1
2又はＧ−12と称す）、又はアルギニン（Arg−12又はＲ
−12と称す）、又はセリン（Ser−12又はＳ−12と称
す）のいづれかを含むように作製する。C57BL/6マウス
をArg−12ペプチドの単独投与によって免疫する。免疫
化マウス由来のリンパ球をその後試験管内で上記のペプ
チドに対する増大応答について試験し、そして図１に示
す通り、それらはArg−12ペプチドに対して特異的に応
答して増殖するのがGly−12,Cys−12又はSer−12ペプチ
ドに対しては応答性でないことが見い出せた。更に、Ar
g−12ペプチドによって免疫したマウス由来のリンパ球
は、同一のアミノ酸置換を含む完全p21タンパク質（Onc
ogene Science,Inc.,Mahasset,New York）による刺激に
特異的に応答して増殖することが示された（図３）。
４−14由来のアミノ酸配列に相当する12個又は13個のア
ミノ酸残基より成るペプチドを、正常グリシン（Gly−1
2又はＧ−12と称す）、又はアルギニン（Arg−12又はＲ
−12と称す）、又はセリン（Ser−12又はＳ−12と称
す）のいづれかを含むように作製する。C57BL/6マウス
をArg−12ペプチドの単独投与によって免疫する。免疫
化マウス由来のリンパ球をその後試験管内で上記のペプ
チドに対する増大応答について試験し、そして図１に示
す通り、それらはArg−12ペプチドに対して特異的に応
答して増殖するのがGly−12,Cys−12又はSer−12ペプチ
ドに対しては応答性でないことが見い出せた。更に、Ar
g−12ペプチドによって免疫したマウス由来のリンパ球
は、同一のアミノ酸置換を含む完全p21タンパク質（Onc
ogene Science,Inc.,Mahasset,New York）による刺激に
特異的に応答して増殖することが示された（図３）。
本発明において適切な他の例のペプチドはras p54−
66〔L61〕である。このペプチドはp21の残基54−66から
のアミノ酸配列に相当する13個のアミノ酸残基より成
り、但し位置61にて通常見い出せるグルタミン（Ｑ）が
ロイシン（Ｌ）に置換されている。p54−66〔L61〕によ
って免疫したマウス由来のリンパ球は図４において示す
通り、試験管内で、Gln−61又はLsy−61ペプチドに対し
てではなく、Leu−61ペプチドに対して特異的に応答し
て増殖することが見い出せた。更に、Leu−61ペプチド
により免疫したマウス由来のリンパ球は同一のアミノ酸
置換を含む完全p21タンパク質による刺激に特異的に応
答して増殖することが見い出せた。
66〔L61〕である。このペプチドはp21の残基54−66から
のアミノ酸配列に相当する13個のアミノ酸残基より成
り、但し位置61にて通常見い出せるグルタミン（Ｑ）が
ロイシン（Ｌ）に置換されている。p54−66〔L61〕によ
って免疫したマウス由来のリンパ球は図４において示す
通り、試験管内で、Gln−61又はLsy−61ペプチドに対し
てではなく、Leu−61ペプチドに対して特異的に応答し
て増殖することが見い出せた。更に、Leu−61ペプチド
により免疫したマウス由来のリンパ球は同一のアミノ酸
置換を含む完全p21タンパク質による刺激に特異的に応
答して増殖することが見い出せた。
同様に、p21以外のタンパク質（又はそれを基礎とす
るペプチドもしくはその誘導体）は種々の既知の技術に
よって単離又は製作されうる。当業者に理解されている
通り、Ｔ細胞応答の誘発を促進させるためにペプチド全
体の長さ又は天然のフランキング領域の長さを長くする
ことが所望されうる。前記した通り、ras以外の活性化
癌遺伝子又は癌関連遺伝子（即ち、正常な癌原遺伝子又
は正常遺伝子により発現されるタンパク質のアミノ酸配
列と異なるものを有するもの）のタンパク質発現生成物
は本明書詳細の方法において用いるのに適している。
るペプチドもしくはその誘導体）は種々の既知の技術に
よって単離又は製作されうる。当業者に理解されている
通り、Ｔ細胞応答の誘発を促進させるためにペプチド全
体の長さ又は天然のフランキング領域の長さを長くする
ことが所望されうる。前記した通り、ras以外の活性化
癌遺伝子又は癌関連遺伝子（即ち、正常な癌原遺伝子又
は正常遺伝子により発現されるタンパク質のアミノ酸配
列と異なるものを有するもの）のタンパク質発現生成物
は本明書詳細の方法において用いるのに適している。
治療目的のため、活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子の
１もしくは複数種のタンパク質発現生成物の存在下にお
いて増殖するＴ細胞を試験管内又は生体体において増加
させることができる。試験管内でのこのようなＴ細胞の
増殖は種々の方法において成し遂げることができる。例
えば、Ｔ細胞を１もしくは複数種のタンパク質発現生成
物に再暴露せしめてよい。増殖を誘発せしめるために該
タンパク質へのＴ細胞の暴露の反復が所望されうる。図
２に示す通り、タンパク質発現生成物に特異的なＴ細胞
は試験管内で、免疫用ペプチドによる断続的刺激に応答
して特異性を保持しながら大量の数へと増殖することが
できる。
１もしくは複数種のタンパク質発現生成物の存在下にお
いて増殖するＴ細胞を試験管内又は生体体において増加
させることができる。試験管内でのこのようなＴ細胞の
増殖は種々の方法において成し遂げることができる。例
えば、Ｔ細胞を１もしくは複数種のタンパク質発現生成
物に再暴露せしめてよい。増殖を誘発せしめるために該
タンパク質へのＴ細胞の暴露の反復が所望されうる。図
２に示す通り、タンパク質発現生成物に特異的なＴ細胞
は試験管内で、免疫用ペプチドによる断続的刺激に応答
して特異性を保持しながら大量の数へと増殖することが
できる。
他方、タンパク質発現の存在下において増殖するしも
しくは複数種のＴ細胞をクローニングによって増やすこ
ともできる。細胞をクローニングする方法は当業界によ
く知られている。例えば、Ｔ細胞計を試験管内で樹立
し、そして限界希釈によってクローン化せしめることが
できる。応答性Ｔ細胞を感作せしめた患者の末梢血液よ
り密度勾配遠心、次いてヒツジ赤血球ロゼッティングに
よって精製し、そして照射せしめた自己充填（filler）
細胞の存在下において正常抗原によって刺激せしめるこ
とにより培養物において樹立させる。CD4＋Ｔ細胞系を
作るため、関連のアミノ酸置換を有する完全ras p21タ
ンパク質を抗原刺激剤として用い、そしてエプスタイン
−バーウイルスによる感染によって不朽化せしめた自己
末梢血液リンパ球（PBL）又はリンパ芽球細胞系（LCL）
を抗原提供細胞として用いた。CD8＋Ｔ細胞系を作るた
め、関連の突然変異ras p21タンパク質を生産する発現
ベクターによってトランスフェクトした自己抗原−提供
細胞を刺激細胞として用いた。抗原刺激に次いて樹立Ｔ
細胞系を、96穴平底プレートにおいて、１ウェル当り0.
5個の細胞の頻度にて刺激化Ｔ細胞を、１×106個の照射
せしめたBL又はLCL細胞及び組換インターロイキン２（r
IL2）（50U/ml）と一緒に培養し、２〜４日間クローン
化させた。樹立したクローナル増殖を有するウェルが培
養してから約２〜３週間後に同定され、そしてこれを自
己抗原−提供細胞の存在下において適当な抗原によって
再刺激せしめ、次いで抗原刺激の２〜３日後に低投与量
のrIL2（10U/ml）の添加によって増殖せしめた。Ｔ細胞
クローンを約２週間ごとに抗原及びrIL2による周期的再
刺激によって24穴プレートの中で維持せしめた。
しくは複数種のＴ細胞をクローニングによって増やすこ
ともできる。細胞をクローニングする方法は当業界によ
く知られている。例えば、Ｔ細胞計を試験管内で樹立
し、そして限界希釈によってクローン化せしめることが
できる。応答性Ｔ細胞を感作せしめた患者の末梢血液よ
り密度勾配遠心、次いてヒツジ赤血球ロゼッティングに
よって精製し、そして照射せしめた自己充填（filler）
細胞の存在下において正常抗原によって刺激せしめるこ
とにより培養物において樹立させる。CD4＋Ｔ細胞系を
作るため、関連のアミノ酸置換を有する完全ras p21タ
ンパク質を抗原刺激剤として用い、そしてエプスタイン
−バーウイルスによる感染によって不朽化せしめた自己
末梢血液リンパ球（PBL）又はリンパ芽球細胞系（LCL）
を抗原提供細胞として用いた。CD8＋Ｔ細胞系を作るた
め、関連の突然変異ras p21タンパク質を生産する発現
ベクターによってトランスフェクトした自己抗原−提供
細胞を刺激細胞として用いた。抗原刺激に次いて樹立Ｔ
細胞系を、96穴平底プレートにおいて、１ウェル当り0.
5個の細胞の頻度にて刺激化Ｔ細胞を、１×106個の照射
せしめたBL又はLCL細胞及び組換インターロイキン２（r
IL2）（50U/ml）と一緒に培養し、２〜４日間クローン
化させた。樹立したクローナル増殖を有するウェルが培
養してから約２〜３週間後に同定され、そしてこれを自
己抗原−提供細胞の存在下において適当な抗原によって
再刺激せしめ、次いで抗原刺激の２〜３日後に低投与量
のrIL2（10U/ml）の添加によって増殖せしめた。Ｔ細胞
クローンを約２週間ごとに抗原及びrIL2による周期的再
刺激によって24穴プレートの中で維持せしめた。
個々のＴ細胞をどのようにして試験管内で増殖せしめ
るかにかかわらず、このＴ細胞を腫瘍に対する治療的攻
撃のために固体に投与せしめることができる。従って、
患者自身のＴ細胞（自己Ｔ細胞）が特異的な腫瘍の治療
を仲介するための試薬として利用できる。典型的には、
約１×109〜１×1011個のＴ細胞/M2が静脈内又は腔内、
例えば胸膜もしくは腹膜腔内において、又は切除せしめ
た腫瘍の床に投与されるであろう。当業界者に明らかな
通り、投与の回数及び頻度は患者の応答に依存するであ
ろう。Ｔ細胞のための適切な担体又は希釈剤は生理食塩
水又は血清を含む。この組成物は除菌状態において調製
すべきことが当業者には理解されるであろう。
るかにかかわらず、このＴ細胞を腫瘍に対する治療的攻
撃のために固体に投与せしめることができる。従って、
患者自身のＴ細胞（自己Ｔ細胞）が特異的な腫瘍の治療
を仲介するための試薬として利用できる。典型的には、
約１×109〜１×1011個のＴ細胞/M2が静脈内又は腔内、
例えば胸膜もしくは腹膜腔内において、又は切除せしめ
た腫瘍の床に投与されるであろう。当業界者に明らかな
通り、投与の回数及び頻度は患者の応答に依存するであ
ろう。Ｔ細胞のための適切な担体又は希釈剤は生理食塩
水又は血清を含む。この組成物は除菌状態において調製
すべきことが当業者には理解されるであろう。
Ｔ細胞は生体内でも増殖できうる。例えば、活性化癌
遺伝子又は癌関連遺伝子の１もしくは複数種のタンパク
質発現生成物による個体の免疫化は、腫瘍への治療的攻
撃のために必要とされるＴ細胞の数の連続増殖を誘発せ
しめることができる。該タンパク質発現生成物を繰り返
し投与することが所望されうる。
遺伝子又は癌関連遺伝子の１もしくは複数種のタンパク
質発現生成物による個体の免疫化は、腫瘍への治療的攻
撃のために必要とされるＴ細胞の数の連続増殖を誘発せ
しめることができる。該タンパク質発現生成物を繰り返
し投与することが所望されうる。
本発明は更に、活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子のタ
ンパク質発現生成物がＴ細胞に対して免疫原となること
の他に、これらのタンパク質を認識することができる抗
体を作るようにＢ−細胞を刺激せしめることを開示す
る。このような抗体の検出は、活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する悪性腫瘍の診断のための
他の方法を提供する。１もしくは複数種のタンパク質発
現生成物に対する抗体の特異性（即ち、約107リットル
／モル以上の結合親和性を示す）が、血清及び腹水を含
む種々の体液において見い出せうる。タンパク質発現生
成物と該タンパク質に特異的な抗体とで形成される１も
しくは複数種の免疫複合体の検出は種々の既知の技術、
例えば放射性イムノアッセイ（RIA）及び酵素結合免疫
収着アッセイ（ELISA）によって成し遂げられる。
ンパク質発現生成物がＴ細胞に対して免疫原となること
の他に、これらのタンパク質を認識することができる抗
体を作るようにＢ−細胞を刺激せしめることを開示す
る。このような抗体の検出は、活性化癌遺伝子又は癌関
連遺伝子が悪性腫瘍に関連する悪性腫瘍の診断のための
他の方法を提供する。１もしくは複数種のタンパク質発
現生成物に対する抗体の特異性（即ち、約107リットル
／モル以上の結合親和性を示す）が、血清及び腹水を含
む種々の体液において見い出せうる。タンパク質発現生
成物と該タンパク質に特異的な抗体とで形成される１も
しくは複数種の免疫複合体の検出は種々の既知の技術、
例えば放射性イムノアッセイ（RIA）及び酵素結合免疫
収着アッセイ（ELISA）によって成し遂げられる。
適正なイムノアッセイにはDavidら（米国特許、第4,3
76,110号）の二重モノクローナル抗体サンドイッチアッ
セイ法；モノクローナル−ポリクローナル抗体サンドイ
ッチアッセイ（Wideらの、KirkhamとHunter編、Radioim
munoassay Methods,E and S.Livingstone,E dinburgh,1
970）;Gordonら（米国特許第4,452,901号）の「ウェス
タンプロット」法；標識リガンドの免疫沈殿（Brown
ら、J.Biol.Chem. 255:4980−4983,1980）；例えばRaine
sとRoss（J.Biol.Chem. 257:5154−5160,1982）に詳細の
酵素結合免疫収着アッセイ；蛍光色素の利用を含む免疫
細胞化学法（Brookら、Clin.Exp.lmmunol．39:477,198
0）；及び活性の中和化〔Bowen−Popeら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA 81:2396−2400（1984）〕が挙げられ、これ
らは全て本明細書に参考文献として組入れらている。上
記のイムノアッセイの他に、多数のその他のイムノアッ
セイが有用であり、米国特許の第3,817,827号；第3,85
0,752号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533
号；第3,996,345号；第4,034,074号；及び第4,098,876
号に詳細のものが含まれ、これらは全て本明細書に参考
文献として組入れている。
76,110号）の二重モノクローナル抗体サンドイッチアッ
セイ法；モノクローナル−ポリクローナル抗体サンドイ
ッチアッセイ（Wideらの、KirkhamとHunter編、Radioim
munoassay Methods,E and S.Livingstone,E dinburgh,1
970）;Gordonら（米国特許第4,452,901号）の「ウェス
タンプロット」法；標識リガンドの免疫沈殿（Brown
ら、J.Biol.Chem. 255:4980−4983,1980）；例えばRaine
sとRoss（J.Biol.Chem. 257:5154−5160,1982）に詳細の
酵素結合免疫収着アッセイ；蛍光色素の利用を含む免疫
細胞化学法（Brookら、Clin.Exp.lmmunol．39:477,198
0）；及び活性の中和化〔Bowen−Popeら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA 81:2396−2400（1984）〕が挙げられ、これ
らは全て本明細書に参考文献として組入れらている。上
記のイムノアッセイの他に、多数のその他のイムノアッ
セイが有用であり、米国特許の第3,817,827号；第3,85
0,752号；第3,901,654号；第3,935,074号；第3,984,533
号；第3,996,345号；第4,034,074号；及び第4,098,876
号に詳細のものが含まれ、これらは全て本明細書に参考
文献として組入れている。
検出目的のために、該タンパク質発現生成物（「抗
原」）は標識又は未標識のいづれかでありうる。未標識
の場合、該抗原は凝集アッセイにおける利用が見い出せ
る。更に、未標識抗原は免疫複合体と反応性である標識
分子との組合せ、又は該タンパク質発現生成物に対して
特異的な抗体と反応性である標識抗体（第２抗体）、例
えばイムノグロブリンに対して特異的な抗体との組合せ
において利用されうる。他方、該抗原を直接標識せしめ
てもよい。それらが標識されている場合、このリポータ
ー基にはラジオアイソトープ、蛍光物質、酵素、ルミネ
ッサー又は色素粒子が含まれることができる。このよう
な及びその他の標識物質は当業界によく知られ、そして
例えば以下の米国特許；第3,766,162号；第3,791,932
号；第3,817,837号；第3,996,345号；及び第4,233,402
号に詳細されている。
原」）は標識又は未標識のいづれかでありうる。未標識
の場合、該抗原は凝集アッセイにおける利用が見い出せ
る。更に、未標識抗原は免疫複合体と反応性である標識
分子との組合せ、又は該タンパク質発現生成物に対して
特異的な抗体と反応性である標識抗体（第２抗体）、例
えばイムノグロブリンに対して特異的な抗体との組合せ
において利用されうる。他方、該抗原を直接標識せしめ
てもよい。それらが標識されている場合、このリポータ
ー基にはラジオアイソトープ、蛍光物質、酵素、ルミネ
ッサー又は色素粒子が含まれることができる。このよう
な及びその他の標識物質は当業界によく知られ、そして
例えば以下の米国特許；第3,766,162号；第3,791,932
号；第3,817,837号；第3,996,345号；及び第4,233,402
号に詳細されている。
ELISAアッセイにおいて、典型的には抗原をマイクロ
タイターウェルの表面に吸着させる。この表面上に残っ
ているタンパク質結合性部位を次に適当な試薬、例えば
牛血清アルブミン（BSA）、熱不活性化正常ヤギ血清（N
GS）、又はBLOTTO（脱脂粉乳の緩衝液；防腐剤、塩類及
び発泡防止剤も含む）によってブロックする。次にこの
ウェルを特定の抗体を含むと予想される試料とインキュ
ベートする。この試料は源液のまま、又はより通常に
は、少量（0.1−5.0重量％）のタンパク質を含む緩衝
液、例えばBSA,NGSもしくはBLOTTOで通常希釈して適用
されうる。特異的な結合が起こるよう十分な時間にわた
ってインキュベートさせた後、このウェルを洗浄して未
結合タンパク質を除去し、次いでリポーター基によって
標識した抗−種特異的イムノグロブリン抗体とインキュ
ベートする、該リポーター基は、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ、ベーターカラクトシダーゼ、アルカリ性ホスフ
ァターゼ及びグルコースオキシダーゼを含む種々の酵素
から選ぶことができる。十分な時間にわたって特異的な
結合を起こさせ、次いでこのウェルを再び洗浄して未結
合コンジュゲートを除去し、そしてこの酵素のための基
質を加える。色調が現れるようにさせ、そしてこのウェ
ルの内容物の吸光度を目視又は装置によって測定する。
タイターウェルの表面に吸着させる。この表面上に残っ
ているタンパク質結合性部位を次に適当な試薬、例えば
牛血清アルブミン（BSA）、熱不活性化正常ヤギ血清（N
GS）、又はBLOTTO（脱脂粉乳の緩衝液；防腐剤、塩類及
び発泡防止剤も含む）によってブロックする。次にこの
ウェルを特定の抗体を含むと予想される試料とインキュ
ベートする。この試料は源液のまま、又はより通常に
は、少量（0.1−5.0重量％）のタンパク質を含む緩衝
液、例えばBSA,NGSもしくはBLOTTOで通常希釈して適用
されうる。特異的な結合が起こるよう十分な時間にわた
ってインキュベートさせた後、このウェルを洗浄して未
結合タンパク質を除去し、次いでリポーター基によって
標識した抗−種特異的イムノグロブリン抗体とインキュ
ベートする、該リポーター基は、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼ、ベーターカラクトシダーゼ、アルカリ性ホスフ
ァターゼ及びグルコースオキシダーゼを含む種々の酵素
から選ぶことができる。十分な時間にわたって特異的な
結合を起こさせ、次いでこのウェルを再び洗浄して未結
合コンジュゲートを除去し、そしてこの酵素のための基
質を加える。色調が現れるようにさせ、そしてこのウェ
ルの内容物の吸光度を目視又は装置によって測定する。
本発明の１つの好ましい態様において、リポーター基
を該タンパク質発現生成物に結合させる。免疫複合体を
検出する工程は実質的に全ての未結合タンパク質発現生
成物を除去し、次いでこのリポーター基の有無を検出す
ることを含む。
を該タンパク質発現生成物に結合させる。免疫複合体を
検出する工程は実質的に全ての未結合タンパク質発現生
成物を除去し、次いでこのリポーター基の有無を検出す
ることを含む。
他の好ましい態様において、リポーター基を、タンパ
ク質発現生成物に特異的に抗体に結合できる第２抗体に
結合させる。免疫複合体を検出する工程は、（ａ）実質
的に全ての未結合抗体を除去し、（ｂ）第２抗体を加
え、（ｃ）実質的に全ての未結合第２抗体を除去し、そ
の後（ｄ）該リポーター基の有無を検出すること、を含
む。該タンパク質発現生成物に特異的な抗体がヒトに由
来する場合、この第２抗体は抗−ヒト抗体である。
ク質発現生成物に特異的に抗体に結合できる第２抗体に
結合させる。免疫複合体を検出する工程は、（ａ）実質
的に全ての未結合抗体を除去し、（ｂ）第２抗体を加
え、（ｃ）実質的に全ての未結合第２抗体を除去し、そ
の後（ｄ）該リポーター基の有無を検出すること、を含
む。該タンパク質発現生成物に特異的な抗体がヒトに由
来する場合、この第２抗体は抗−ヒト抗体である。
免疫複合体を検出するための第３の好ましい態様にお
いて、リポーター基を免疫複合体に結合することができ
る分子と結合させる。この工程は、（ａ）該分子を加
え、（ｂ）実質的に全ての未結合分子を除去し、その後
（ｃ）該リポーター基の有無を検出することを含む。該
免疫複合体に結合することができる分子の例はプロテイ
ンＡである。
いて、リポーター基を免疫複合体に結合することができ
る分子と結合させる。この工程は、（ａ）該分子を加
え、（ｂ）実質的に全ての未結合分子を除去し、その後
（ｃ）該リポーター基の有無を検出することを含む。該
免疫複合体に結合することができる分子の例はプロテイ
ンＡである。
当業者に明らかな通り、免疫複合体を検出するための
種々の方法が本発明において利用されうる。任意の方法
における利用に適するリポーター基にはラジオアイソト
ープ、蛍光物質、酵素、ルミネッサー及び色素粒子が含
まれる。
種々の方法が本発明において利用されうる。任意の方法
における利用に適するリポーター基にはラジオアイソト
ープ、蛍光物質、酵素、ルミネッサー及び色素粒子が含
まれる。
本発明に関連する態様において、活性化癌遺伝子又は
癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物と、該タンパク質
に特異的な体液中の抗体とで形成される免疫複合体の検
出は、癌治療の効果をモニターするために用いられう
る。治療の開始の前後での個体から採取した体液の試料
は前記した方法によって免疫複合体に関して分析されう
る。簡単に述べると、再試料中において検出される免疫
複合体の数を比較する。第２試料（治療開始後）中の免
疫複合体の数の第１試料（治療開始前）中の免疫複合体
の数に対する実質的な変化は有効な治療を反映する。
癌関連遺伝子のタンパク質発現生成物と、該タンパク質
に特異的な体液中の抗体とで形成される免疫複合体の検
出は、癌治療の効果をモニターするために用いられう
る。治療の開始の前後での個体から採取した体液の試料
は前記した方法によって免疫複合体に関して分析されう
る。簡単に述べると、再試料中において検出される免疫
複合体の数を比較する。第２試料（治療開始後）中の免
疫複合体の数の第１試料（治療開始前）中の免疫複合体
の数に対する実質的な変化は有効な治療を反映する。
以下の実施例を例示であって限定ではない目的で提供
する。
する。
実施例 例１ 突然変異Ras癌遺伝子生成物に対する特異的クラス−II
制限化Ｔ細胞応答の誘発 A.免疫化 C57BL/6及びB6.C−Ｈ−2bm12マウス（Jackson Labora
tories,Bar Harbor,Me.）を合成ペプチド（アミノ酸配
列KLVVVGARGVGK;Microbiological Associates,Bethesd
a,Md.）であってグリシン（Ｇ）をアルギニン（Ｒ）に
置換した残基12をコードする突然変異ras癌原遺伝子のp
21タンパク質生成物の残基５〜12に相当するペプチドで
感染せしめた。このペプチドは1mg/mlにて蒸留水に可溶
化し、完全フロイントアジュバント（sigmaCo.,St.Loui
s,Mo.）に1:1の割合で乳化させ、次いで25ゲージ針を用
いて尾の底部に皮下注射した。他方、ペプチドRibi MP
L＋TDM＋CWSアジュバントRibi Immunochem.Res.,Hamil
ton,Mt.）に乳化せしめ、そして両後四半部に皮下注射
した。注射した該ペプチドの総量はマウス当り50μｇと
した。７日後、この動物を殺し、そして流出する大動脈
のまわり及び鼡径部のリンパ腺を取り出した。ペトリ皿
の中で緩衝食塩水に懸濁したリンパ腺を18ゲージ針で引
き裂いた。追い出したリンパ球を集め、そして緩衝食塩
水で洗い、次いで増殖アッセイにおいて利用するために
培養培地にml当たり１×106個の細胞にて懸濁した。
制限化Ｔ細胞応答の誘発 A.免疫化 C57BL/6及びB6.C−Ｈ−2bm12マウス（Jackson Labora
tories,Bar Harbor,Me.）を合成ペプチド（アミノ酸配
列KLVVVGARGVGK;Microbiological Associates,Bethesd
a,Md.）であってグリシン（Ｇ）をアルギニン（Ｒ）に
置換した残基12をコードする突然変異ras癌原遺伝子のp
21タンパク質生成物の残基５〜12に相当するペプチドで
感染せしめた。このペプチドは1mg/mlにて蒸留水に可溶
化し、完全フロイントアジュバント（sigmaCo.,St.Loui
s,Mo.）に1:1の割合で乳化させ、次いで25ゲージ針を用
いて尾の底部に皮下注射した。他方、ペプチドRibi MP
L＋TDM＋CWSアジュバントRibi Immunochem.Res.,Hamil
ton,Mt.）に乳化せしめ、そして両後四半部に皮下注射
した。注射した該ペプチドの総量はマウス当り50μｇと
した。７日後、この動物を殺し、そして流出する大動脈
のまわり及び鼡径部のリンパ腺を取り出した。ペトリ皿
の中で緩衝食塩水に懸濁したリンパ腺を18ゲージ針で引
き裂いた。追い出したリンパ球を集め、そして緩衝食塩
水で洗い、次いで増殖アッセイにおいて利用するために
培養培地にml当たり１×106個の細胞にて懸濁した。
B.増殖アッセイ 免疫マウスより得たリンパ球を培養培地（10％の仔牛
血清、2mMのＬ−グルタミン、100U/mlのストレプトマイ
シン、100U/mlのペニシリン及び2.5×10-5Mの２−メル
カプトエタノールの添加したRPMI1640ギブコ（Gibco）
より成る）に懸濁し、そして96穴平底マイクロタイタ−
フレート（Costar Co.,Cambridge,Mass）に１×105細
胞／ウェルにて培養した3000radsで照射せしめた同系脾
臓細胞を、ウェル当り２×105個の細胞にて加え、抗原
提供細胞として働かせた。免疫用ペプチド及び標示のコ
ントロールペプチド（50μg/ml）を３個のウェルに加え
た（最終容量200μl/ウェル）。このプレートを５％のC
O2を含む多湿空気中で37℃にて72時間インキュベート
し、次いでウェル当り１μCiのトリチウム化チミジン
（3H−TdR;20Ci/mmol;NEN Products,Boston,Ma.）によ
って６時間パルスにかけた。個々のウエルからのリンパ
球をマルチチャンネルハーベスターを用いて濾紙ディス
クに集め、次いで独立の計測管中のシンチレーション液
に移し入れた。Backman液体シンチレーション光度系を
用いてβ励起を測定した。図１に示すデーターは３回の
測定の平均を示している。
血清、2mMのＬ−グルタミン、100U/mlのストレプトマイ
シン、100U/mlのペニシリン及び2.5×10-5Mの２−メル
カプトエタノールの添加したRPMI1640ギブコ（Gibco）
より成る）に懸濁し、そして96穴平底マイクロタイタ−
フレート（Costar Co.,Cambridge,Mass）に１×105細
胞／ウェルにて培養した3000radsで照射せしめた同系脾
臓細胞を、ウェル当り２×105個の細胞にて加え、抗原
提供細胞として働かせた。免疫用ペプチド及び標示のコ
ントロールペプチド（50μg/ml）を３個のウェルに加え
た（最終容量200μl/ウェル）。このプレートを５％のC
O2を含む多湿空気中で37℃にて72時間インキュベート
し、次いでウェル当り１μCiのトリチウム化チミジン
（3H−TdR;20Ci/mmol;NEN Products,Boston,Ma.）によ
って６時間パルスにかけた。個々のウエルからのリンパ
球をマルチチャンネルハーベスターを用いて濾紙ディス
クに集め、次いで独立の計測管中のシンチレーション液
に移し入れた。Backman液体シンチレーション光度系を
用いてβ励起を測定した。図１に示すデーターは３回の
測定の平均を示している。
例２ 突然変異Ras癌原遺伝子のタンパク質生成物に対する特
異性を有するＴ細胞系及びクローンの作製 前記した免疫マウスの流出するリンパ腺由来のリンパ
球を24−ウェル培養プレート（Costar Co.）に（ウェ
ル当り４×106個の細胞）、照射同系脾臓細胞（10,000r
ads;2×106個の細胞／ウェル）及び免疫用ペプチド（５
μg/ウェル）と一緒に、最終容量2ml（培養培地）とな
るようにして培養した。プレートを５日間（37℃,5％CO
2）で培養し、そしてレプリケートプレート上に1:2に分
けた。10日後、５×105個の培養リンパ球を４×106個の
照射同系脾臓細胞及び５μg/mlのペプチドと培養するこ
とによって再刺激せしめた。３日後、個々のウェルを10
ユニットのインターロイキン−２（ヒト組換え体;Hoffm
an−LaRoche）を含む２〜４個のウェルの培養培地の中
に再分配せしめ、細胞増殖を促進せしめた。系を抗原、
次いでIL−２で前記の通り、３〜４週ごとに再刺激せし
めた。
異性を有するＴ細胞系及びクローンの作製 前記した免疫マウスの流出するリンパ腺由来のリンパ
球を24−ウェル培養プレート（Costar Co.）に（ウェ
ル当り４×106個の細胞）、照射同系脾臓細胞（10,000r
ads;2×106個の細胞／ウェル）及び免疫用ペプチド（５
μg/ウェル）と一緒に、最終容量2ml（培養培地）とな
るようにして培養した。プレートを５日間（37℃,5％CO
2）で培養し、そしてレプリケートプレート上に1:2に分
けた。10日後、５×105個の培養リンパ球を４×106個の
照射同系脾臓細胞及び５μg/mlのペプチドと培養するこ
とによって再刺激せしめた。３日後、個々のウェルを10
ユニットのインターロイキン−２（ヒト組換え体;Hoffm
an−LaRoche）を含む２〜４個のウェルの培養培地の中
に再分配せしめ、細胞増殖を促進せしめた。系を抗原、
次いでIL−２で前記の通り、３〜４週ごとに再刺激せし
めた。
試験管内で抗原によって２回刺激した免疫リンパ球
を、培養を開始してから13日目（Ag再刺激の３日後）に
て、96穴平底プレート中にウェル当り0.5個の細胞の頻
度にて免疫Ｔ細胞を、照射同系脾臓細胞（１×106個の
細胞／ウェル）及び50U/mlのインターロイキン−２と一
緒に培養した。クローナル増殖を有するウェルを増殖さ
せ、そして免疫特異性について試験した（図２に示
す）。特異的なＴ細胞クローンを、Ｔ細胞系に関して詳
細の通りに維持した。
を、培養を開始してから13日目（Ag再刺激の３日後）に
て、96穴平底プレート中にウェル当り0.5個の細胞の頻
度にて免疫Ｔ細胞を、照射同系脾臓細胞（１×106個の
細胞／ウェル）及び50U/mlのインターロイキン−２と一
緒に培養した。クローナル増殖を有するウェルを増殖さ
せ、そして免疫特異性について試験した（図２に示
す）。特異的なＴ細胞クローンを、Ｔ細胞系に関して詳
細の通りに維持した。
本発明の特定の態様を例示の目的で本明細書に記載し
たが、以上からの種々の改良は本発明の範囲を逸脱する
ことがないことが理解されるであろう。
たが、以上からの種々の改良は本発明の範囲を逸脱する
ことがないことが理解されるであろう。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ピース，デビッド ジェイ. アメリカ合衆国，ワシントン 98103, シアトル，アパートメント 201 ノー ス ナインティセカンド ストリート 1124 (56)参考文献 特開 平２−3697（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−103573（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−108157（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−501518（ＪＰ，Ａ) 実開 昭61−500068（ＪＰ，Ｕ)
Claims (11)
- 【請求項１】活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子が悪性腫
瘍に関連する温血動物における該悪性腫瘍の検査のため
の方法であって、以下の段階： （ａ）温血動物より単離せしめたＴ細胞を、該悪性腫瘍
に関連する活性化癌遺伝子又は該関連遺伝子の少なくと
も１種類のタンパク質発現生成物とインキュベートせし
め；そして （ｂ）該Ｔ細胞の増殖の有無を検出して、該悪性腫瘍の
有無を検査することを含んで成る方法。 - 【請求項２】前記の検出の段階が前記Ｔ細胞のDNA合成
のレートを測定することを含んで成る、請求の範囲１に
記載の方法。 - 【請求項３】活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子が悪性腫
瘍に関連する温血動物における該悪性腫瘍の検査のため
の方法であって、以下の段階： （ａ）該悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連
遺伝子のタンパク質発現生成物に特異的な抗体を含むと
予測される体液を、該悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝
子又は癌関連遺伝子の少なくとも１種類のタンパク質発
現生成物と接触せしめ； （ｂ）該体液を、免疫複合体が形成できるための条件及
び十分な時間にわたってインキュベートせしめ； （ｃ）該タンパク質発現生成物と該タンパク質発現生成
物に特異的な該体液中の抗体とで形成される１もしくは
複数の種類の免疫複合体の有無を検出して該悪性腫瘍の
有無を検査することを含んで成る方法。 - 【請求項４】活性化癌遺伝子又は癌関連遺伝子が悪性腫
瘍に関連する該悪性腫瘍を有する温血動物における癌の
検査のための方法であって、以下の段階： （ａ）治療開始前に該温血動物から採取した第１体液試
料を、悪性腫瘍に関連する活性化癌遺伝子又は癌関連遺
伝子の少なくとも１種類のタンパク質発現生成物と接触
せしめ； （ｂ）該体液を、免疫複合体が形成できるための条件及
び十分な時間にわたってインキュベートせしめ； （ｃ）該タンパク質発現生成物と該タンパク質発現生成
物に特異的な該体液中の抗体とで形成される免疫複合体
を検出し； （ｄ）治療の開始後に該動物から採取した第２体液試料
に基づいて（ａ），（ｂ）及び（ｃ）の段階を繰り返
し；そして （ｅ）該第１と第２体液試料において検出される免疫複
合体の数を比較することを含んで成る方法。 - 【請求項５】前記の抗体に結合することができる第２抗
体にリポーター基を結合させ、そしてここで前記の検出
の段階が（ａ）実質的に全ての未結合抗体を除去し、
（ｂ）該第２抗体を加え、（ｃ）実質的に全ての未結合
該第２抗体を除去し、そして（ｄ）該リポーター基の有
無を検出することを含んで成る、請求の範囲３又は４の
いづれかに記載の方法。 - 【請求項６】前記の第２抗体が抗ヒト抗体である請求の
範囲５に記載の方法。 - 【請求項７】前記の免疫複合体に結合することができる
分子にリポーター基を結合させ、そしてここで前記の検
出の段階が（ａ）該分子を加え、（ｂ）実質的に全ての
未結合該分子を除去し、そして（ｄ）該リポーター基の
有無を検出することを含んで成る請求の範囲３又は４記
載の方法。 - 【請求項８】前記の免疫複合体に結合することができる
分子がプロテインＡである、請求の範囲７に記載の方
法。 - 【請求項９】前記のタンパク質発現生成物にリポーター
基を結合させ、そしてここで前記の検出の段階が実質的
に全ての未結合該タンパク質発現生成物を除去して、そ
の後該リポーター基の有無を検出することを含んで成る
請求の範囲３又は４記載の方法。 - 【請求項１０】前記のリポーター基が、ラジオアイソト
ープ、蛍光物質、酵素、ルミネッサー、及び色素粒子よ
り有る群から選ばれる、請求の範囲5,7又は９のいづれ
かに記載の方法。 - 【請求項１１】前記の活性化癌遺伝子のタンパク質発現
生成物が、ras,src,abl,fgr,rel,yes,fes,net,mos,raf,
erbB,erbA,fms,neu,ros,kit,sea,sis,myc,myb,fos,ski,
jun及びetsより成る群から選ばれる癌遺伝子によってコ
ードされるタンパク質である、請求の範囲１〜10のいづ
れかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US47064590A | 1990-01-26 | 1990-01-26 | |
| US470645 | 1990-01-26 | ||
| US470,645 | 1990-01-26 |
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| JP8043483A Division JPH08275774A (ja) | 1990-01-26 | 1996-02-29 | 悪性腫瘍の処置のための組成物 |
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|---|---|
| JPH05503996A JPH05503996A (ja) | 1993-06-24 |
| JP2552047B2 true JP2552047B2 (ja) | 1996-11-06 |
Family
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Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3504130A Expired - Fee Related JP2552047B2 (ja) | 1990-01-26 | 1991-01-24 | 悪性腫瘍の検査方法 |
| JP8043483A Pending JPH08275774A (ja) | 1990-01-26 | 1996-02-29 | 悪性腫瘍の処置のための組成物 |
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8043483A Pending JPH08275774A (ja) | 1990-01-26 | 1996-02-29 | 悪性腫瘍の処置のための組成物 |
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| EP (2) | EP0617124B1 (ja) |
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| AT (2) | ATE120860T1 (ja) |
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| DE (2) | DE69108716T2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| CA2011099A1 (en) * | 1989-04-19 | 1990-10-19 | Stephen C. Wardlaw | Determination of lymphocyte reactivity to specific antigens in blood |
| JP2552047B2 (ja) * | 1990-01-26 | 1996-11-06 | ワシントン リサーチ ファウンデーション | 悪性腫瘍の検査方法 |
| GB9103974D0 (en) * | 1991-02-26 | 1991-04-10 | Norsk Hydro As | Therapeutically useful peptides or peptide fragments |
| EP0612353B1 (en) * | 1991-09-16 | 1999-03-31 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Detection method for c-raf-1 genes |
| US5512473A (en) * | 1993-01-29 | 1996-04-30 | Brent; Roger | Max-interacting proteins and related molecules and methods |
| US6953573B1 (en) * | 1993-03-17 | 2005-10-11 | University Of Washington | Compounds for eliciting or enhancing immune reactivity to HER-2/neu protein for prevention or treatment of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated |
| US5869445A (en) * | 1993-03-17 | 1999-02-09 | University Of Washington | Methods for eliciting or enhancing reactivity to HER-2/neu protein |
| US5801005A (en) * | 1993-03-17 | 1998-09-01 | University Of Washington | Immune reactivity to HER-2/neu protein for diagnosis of malignancies in which the HER-2/neu oncogene is associated |
| US5419900A (en) | 1993-05-19 | 1995-05-30 | The United States Of America As Represented By The Department Of Of Health And Human Services | Immunologic enhancement with intermittent interleukin-2 therapy |
| US6156316A (en) * | 1995-05-08 | 2000-12-05 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Oncogene fusion protein peptide vaccines |
| US6942862B2 (en) * | 1996-04-01 | 2005-09-13 | University Of Washington | Methods and compositions to generate immunity in humans against self tumor antigens by immunization with homologous foreign proteins |
| WO1998021585A1 (en) | 1996-11-15 | 1998-05-22 | Cornell Research Foundation, Inc. | Activated ras interaction assay |
| DE19736691A1 (de) * | 1997-08-22 | 1999-02-25 | Michael Prof Dr Med Giesing | Verfahren zur Charakterisierung und Identifizierung disseminierter und metastasierter Krebszellen |
| US6551780B1 (en) * | 2000-03-31 | 2003-04-22 | The Regents Of University Of California | Detection of gene mutations or amplifications in melanocytic neoplasms |
| AU6620300A (en) * | 1999-08-03 | 2001-02-19 | Ohio State University, The | Polypeptides and polynucleotides for enhancing immune reactivity to her-2 protein |
| RU2271216C2 (ru) * | 1999-12-22 | 2006-03-10 | Дзе Скриппс Рисерч Инститьют | Модуляторы ангиогенеза и проницаемости сосудов |
| GB0007088D0 (en) * | 2000-03-23 | 2000-05-17 | Torsana A S | Detection of immunological memory determining the position of loci of pathologyand therapeutic t-cell conjugates |
| US6772026B2 (en) | 2000-04-05 | 2004-08-03 | Therics, Inc. | System and method for rapidly customizing design, manufacture and/or selection of biomedical devices |
| US20030119079A1 (en) * | 2001-09-19 | 2003-06-26 | The Regents Of The University Of Michigan | Detection and treatment of cancers of the breast |
| US20040076978A1 (en) * | 2001-11-14 | 2004-04-22 | Catherine Verfaillie | Method to identify genes associated with chronic myelogenous leukemia |
| JP4758342B2 (ja) * | 2003-06-03 | 2011-08-24 | キャンティマー インコーポレイテッド | 相変化センサー |
| US8067175B2 (en) | 2005-02-11 | 2011-11-29 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Methods and compositions for detecting a drug resistant EGFR mutant |
| JP5222134B2 (ja) | 2005-06-15 | 2013-06-26 | ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション | Ｈｅｒ−２ペプチド |
| ES2539830T3 (es) * | 2006-01-20 | 2015-07-06 | Cell Signaling Technology, Inc. | ROS quinasa mutante y de translocación en el carcinoma pulmonar no microcítico humano |
| US8383799B2 (en) | 2006-01-20 | 2013-02-26 | Cell Signaling Technology, Inc. | Translocation and mutant ROS kinase in human non-small cell lung carcinoma |
| US9732131B2 (en) | 2006-02-27 | 2017-08-15 | Calviri, Inc. | Identification and use of novopeptides for the treatment of cancer |
| WO2007101227A2 (en) * | 2006-02-27 | 2007-09-07 | Arizona Board Of Regents For And On Behalf Of Arizona State University | Identification and use of novopeptides for the treatment of cancer |
| US8171270B2 (en) * | 2006-12-29 | 2012-05-01 | Intel Corporation | Asynchronous control transfer |
| US20100234283A1 (en) | 2009-02-04 | 2010-09-16 | The Ohio State University Research Foundation | Immunogenic epitopes, peptidomimetics, and anti-peptide antibodies, and methods of their use |
| CA3065325A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | A method to create personalized cancer vaccines |
| WO2019055618A1 (en) | 2017-09-15 | 2019-03-21 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | METHODS OF CLASSIFYING RESPONSES TO ANTICANCER IMMUNOTHERAPY |
| EP4038222A4 (en) | 2019-10-02 | 2023-10-18 | Arizona Board of Regents on behalf of Arizona State University | METHODS AND COMPOSITIONS FOR IDENTIFYING NEOANTIGENS FOR USE IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF CANCER |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4411990A (en) * | 1979-06-13 | 1983-10-25 | University Patents, Inc. | Primary bioassay of human tumor stem cells |
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4643968A (en) * | 1981-01-29 | 1987-02-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for determining metabolism and growth of cells under various conditions |
| CA1219232A (en) * | 1983-08-17 | 1987-03-17 | Richard A. Lerner | Polypeptide-induced monoclonal receptors to protein ligands |
| JPS62103573A (ja) * | 1985-08-21 | 1987-05-14 | オンコジ−ン・サイエンス・インコ−ポレ−テツド | Ｒａｓがコ−ドしているタンパク質の検出用イムノアツセイ |
| JPH076982B2 (ja) * | 1985-11-06 | 1995-01-30 | 株式会社ニチレイ | 抗 体 |
| JP2726264B2 (ja) * | 1986-05-06 | 1998-03-11 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | Ｎ‐ｍｙｃタンパク質のためのアッセイ及び抗体 |
| US4820631A (en) * | 1986-07-30 | 1989-04-11 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Deletion mutants and monoclonal antibodies against ras proteins |
| US4861589A (en) * | 1987-03-23 | 1989-08-29 | Trustees Of Boston University | Method for therapeutically treating abnormal cells expressing a major histocompatibility complex class II antigen using cytolytic inducer T4 cells |
| US4957859A (en) * | 1988-02-16 | 1990-09-18 | Hoffmann-La Roche Inc. | Antibodies for transforming ras protein |
| DK0474727T3 (da) * | 1989-05-19 | 1998-01-12 | Genentech Inc | HER2 ekstracellulært domæne |
| JP2552047B2 (ja) * | 1990-01-26 | 1996-11-06 | ワシントン リサーチ ファウンデーション | 悪性腫瘍の検査方法 |
-
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