JP2513660B2 - 加水分解酵素検知用組成物 - Google Patents
加水分解酵素検知用組成物Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、液体中の加水分解酵素（hydrolyzing enzy
me）の検知用および分析用、特に生物学的液体中のアミ
ラーゼの臨床分析用の改良された組成物および要素に関
する。
me）の検知用および分析用、特に生物学的液体中のアミ
ラーゼの臨床分析用の改良された組成物および要素に関
する。
加水分解酵素例えばアミラーゼの検知および分析用と
して各種の技術が使用されている。１つの有用な技術
は、検知可能材料例えば着色材料または染料材料を結合
して有するデンプンを含む湿式化学分析技術である。そ
の分析は米国特許3,694,318号明細書に記載されてい
る。その分析では、染色化デンプン（予め形成した染料
または染色形成体を化学的に結合させて有するデンプ
ン）を液体媒質中に溶解または懸濁させる。続いて、試
験すべき試料をその液体媒質中に加えると、試験試料中
に存在するアミラーゼがデンプンを加水分解し、染料の
放出が起きる。次に、加水分解されなかったデンプンを
除去して分離し、存在するアミラーゼ量は、放出された
染料量の関数として決定する。
して各種の技術が使用されている。１つの有用な技術
は、検知可能材料例えば着色材料または染料材料を結合
して有するデンプンを含む湿式化学分析技術である。そ
の分析は米国特許3,694,318号明細書に記載されてい
る。その分析では、染色化デンプン（予め形成した染料
または染色形成体を化学的に結合させて有するデンプ
ン）を液体媒質中に溶解または懸濁させる。続いて、試
験すべき試料をその液体媒質中に加えると、試験試料中
に存在するアミラーゼがデンプンを加水分解し、染料の
放出が起きる。次に、加水分解されなかったデンプンを
除去して分離し、存在するアミラーゼ量は、放出された
染料量の関数として決定する。
この染色化デンプン分析は、米国特許第4,144,306号
明細書にも記載されているように、乾式試験要素中に導
入された。その特許明細書の要素は、（ｉ）検知可能材
料例えば染料を結合して有する非拡散性デンプンを含有
する試薬層と（ii）検知可能材料を受け取るようにした
記録層とを含んでなる。供試液体試料を試薬層に与える
と、試料中のアミラーゼがデンプンを加水分解し、染料
を結合して有する低分子量多糖類単位に分解する。その
分子量が非拡散性デンプンの分子量よりも小さくなるの
で、染料含有低分子量多糖類単位は記録層に拡散し、そ
こで色素形成量すなわち試料中のアミラーゼ量を決定す
ることができる。
明細書にも記載されているように、乾式試験要素中に導
入された。その特許明細書の要素は、（ｉ）検知可能材
料例えば染料を結合して有する非拡散性デンプンを含有
する試薬層と（ii）検知可能材料を受け取るようにした
記録層とを含んでなる。供試液体試料を試薬層に与える
と、試料中のアミラーゼがデンプンを加水分解し、染料
を結合して有する低分子量多糖類単位に分解する。その
分子量が非拡散性デンプンの分子量よりも小さくなるの
で、染料含有低分子量多糖類単位は記録層に拡散し、そ
こで色素形成量すなわち試料中のアミラーゼ量を決定す
ることができる。
加水分解酵素検出用の多糖類系組成物を含有する前記
の要素のように、加水分解酵素例えばアミラーゼの分析
用の乾式試験要素は、それらが使い易く、そして迅速で
信頼性の高い結果が得られるので非常に成功した。しか
しながら、その試験要素を周囲条件（以下、「雰囲気」
条件と記す）下で１週間以上の期間に亘って保存する
と、新しく調製した要素または冷蔵庫で貯蔵した要素と
比較して、酵素濃度を過剰に予測する傾向がある。本発
明は、雰囲気条件下で貯蔵された要素における酵素濃度
の過剰予測（overprediction）の問題を処理するもので
ある。
の要素のように、加水分解酵素例えばアミラーゼの分析
用の乾式試験要素は、それらが使い易く、そして迅速で
信頼性の高い結果が得られるので非常に成功した。しか
しながら、その試験要素を周囲条件（以下、「雰囲気」
条件と記す）下で１週間以上の期間に亘って保存する
と、新しく調製した要素または冷蔵庫で貯蔵した要素と
比較して、酵素濃度を過剰に予測する傾向がある。本発
明は、雰囲気条件下で貯蔵された要素における酵素濃度
の過剰予測（overprediction）の問題を処理するもので
ある。
染色化デンプンのように多糖類を使用する多糖類系分
析における酵素濃度の過剰予測の問題は、イオン化可能
水素少なくとも１個を有するメチレン基をカルボニル２
個の間にもつ1,3-ジオンを安定剤として検知用組成物中
に含有させることによって解決される。
析における酵素濃度の過剰予測の問題は、イオン化可能
水素少なくとも１個を有するメチレン基をカルボニル２
個の間にもつ1,3-ジオンを安定剤として検知用組成物中
に含有させることによって解決される。
本発明の組成物は乾式試験要素中に配合するのが有利
である。特に好ましい試験要素は、試薬領域と記録（re
gistration）領域とからなる。この要素は、非拡散性多
糖類と前記の1,3-ジオンとを含む。前記のジオンと多糖
類とを要素中の別別の領域または層の中に存在させるこ
とができるが、それらを試薬領域または層中に一緒にす
ることが好ましい。その試薬領域または層は拡散領域ま
たは層であると考えることができる。非拡散性多糖類は
供試加水分解酵素の存在下で相互作用により、その非拡
散性多糖類に付着されていた検知可能材料を含む拡散性
材料を提供する。前記要素の記録領域は、この拡散性材
料を受容するようになっている。
である。特に好ましい試験要素は、試薬領域と記録（re
gistration）領域とからなる。この要素は、非拡散性多
糖類と前記の1,3-ジオンとを含む。前記のジオンと多糖
類とを要素中の別別の領域または層の中に存在させるこ
とができるが、それらを試薬領域または層中に一緒にす
ることが好ましい。その試薬領域または層は拡散領域ま
たは層であると考えることができる。非拡散性多糖類は
供試加水分解酵素の存在下で相互作用により、その非拡
散性多糖類に付着されていた検知可能材料を含む拡散性
材料を提供する。前記要素の記録領域は、この拡散性材
料を受容するようになっている。
加水分解酵素検知用として有用な多糖類はデンプンで
ある。このようなデンプンは当業界で周知であり、各種
の起源例えばポテト、トウモロコシ、タピオカ、小麦、
稲、スイートポテトからのデンプンまたは他の起源から
得ることができる。水溶性デンプンおよび水不溶性デン
プンの両者を使用することができる。本発明の乾式試験
要素中で使用する場合には、その多糖類は前記要素中で
非拡散性となるのに充分に多い分子量をもつべきであ
る。
ある。このようなデンプンは当業界で周知であり、各種
の起源例えばポテト、トウモロコシ、タピオカ、小麦、
稲、スイートポテトからのデンプンまたは他の起源から
得ることができる。水溶性デンプンおよび水不溶性デン
プンの両者を使用することができる。本発明の乾式試験
要素中で使用する場合には、その多糖類は前記要素中で
非拡散性となるのに充分に多い分子量をもつべきであ
る。
加水分解酵素検知用として有用な検知可能材料は多数
の周知の検知可能材料例えば放射性材料および着色材料
例えば有色染料（chromogenic dye）または螢光染料で
あることができる。有用な検知可能材料は米国特許第4,
144,306号明細書に記載されている。好ましい染料は、
着色染料例えばDrimarine Red Z2B（ニュージャージー
州ハノーバーのSandoz社から市販）および前記米国特許
第4,144,306号明細書に記載の各種のハロゲン化シアヌ
ル染料である。多糖類例えばデンプンに前記の検知可能
材料を付着させる技術は当業界において周知である。そ
のような技術は米国特許第3,579,322号および第3,694,3
18号各明細書に記載されている。
の周知の検知可能材料例えば放射性材料および着色材料
例えば有色染料（chromogenic dye）または螢光染料で
あることができる。有用な検知可能材料は米国特許第4,
144,306号明細書に記載されている。好ましい染料は、
着色染料例えばDrimarine Red Z2B（ニュージャージー
州ハノーバーのSandoz社から市販）および前記米国特許
第4,144,306号明細書に記載の各種のハロゲン化シアヌ
ル染料である。多糖類例えばデンプンに前記の検知可能
材料を付着させる技術は当業界において周知である。そ
のような技術は米国特許第3,579,322号および第3,694,3
18号各明細書に記載されている。
本発明の組成物は、イオン化可能水素少なくとも１個
をもつメチレン基をカルボニル２個の間に有する前記1,
3-ジオンを安定剤として含有する。これらの1,3-ジオン
としては、β‐ジケトン、β‐ケトエステル、β‐ケト
アルデヒドおよびβ‐ジアルデヒドが含まれる。前記の
1,3-ジオンの例としては、 ジメドン（5,5-ジメチル‐1,3-シクロヘキサンジオ
ン）、 1-ベンゾイルアセトン、 1-フェニル‐2,4-ペンタンジオン、 1-（2-フリル）‐1,3-ブタンジオン が含まれる。
をもつメチレン基をカルボニル２個の間に有する前記1,
3-ジオンを安定剤として含有する。これらの1,3-ジオン
としては、β‐ジケトン、β‐ケトエステル、β‐ケト
アルデヒドおよびβ‐ジアルデヒドが含まれる。前記の
1,3-ジオンの例としては、 ジメドン（5,5-ジメチル‐1,3-シクロヘキサンジオ
ン）、 1-ベンゾイルアセトン、 1-フェニル‐2,4-ペンタンジオン、 1-（2-フリル）‐1,3-ブタンジオン が含まれる。
本発明において有用な1,3-ジオンの好ましい群は式 （式中、Ｈ′はイオン化可能水素であり、ＲはＨ、アル
キル、アリールまたは‐CO-R3であり、R1およびR2は各
々独立にＨ、アルキル、アリール、‐OR4もしくは複素
環式環であるかまたは一緒になって５員もしくは６員の
炭素環式環を完成するのに必要な原子であり、R3はＨ、
アルキルまたはアリールであり、そしてR4はアルキルま
たはアリールである） の構造をもつ。
キル、アリールまたは‐CO-R3であり、R1およびR2は各
々独立にＨ、アルキル、アリール、‐OR4もしくは複素
環式環であるかまたは一緒になって５員もしくは６員の
炭素環式環を完成するのに必要な原子であり、R3はＨ、
アルキルまたはアリールであり、そしてR4はアルキルま
たはアリールである） の構造をもつ。
1,3-ジオンのpKaが約９以下である場合に、Ｈ′で表
される水素は一般にイオン化可能である。当業界におい
て周知であるとおり、Ｈ′担持炭素原子に隣接する容易
に水和可能なカルボニルまたはＨ′の周りの立体障害の
高水準のような或る条件によってＨ′のイオン化度を変
えることができる。
される水素は一般にイオン化可能である。当業界におい
て周知であるとおり、Ｈ′担持炭素原子に隣接する容易
に水和可能なカルボニルまたはＨ′の周りの立体障害の
高水準のような或る条件によってＨ′のイオン化度を変
えることができる。
Ｒ、R1、R2、R3およびR4は、Ｈ′で表される水素がイ
オン化可能である限り、置換または非置換の任意のアル
キルまたはアリールであることができる。アルキル基は
好ましくは炭素原子１〜６個をもち、例えばメチル基、
エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基等で
ある。有用なアリール基の例としてはフェニル基、トリ
ル基、メトキシフェニル基等が含まれる。
オン化可能である限り、置換または非置換の任意のアル
キルまたはアリールであることができる。アルキル基は
好ましくは炭素原子１〜６個をもち、例えばメチル基、
エチル基、プロピル基、ブチル基、イソプロピル基等で
ある。有用なアリール基の例としてはフェニル基、トリ
ル基、メトキシフェニル基等が含まれる。
R1とR2は、それぞれ、Ｈ′で表される水素がイオン化
可能である限り、任意の置換または非置換の複素環式基
であることができる。好ましい複素環式基は、４〜７個
の環原子を有するもの、例えばフリル基、ピリジル基、
チエニル基、ピロリル基、チイル基、その他である。
可能である限り、任意の置換または非置換の複素環式基
であることができる。好ましい複素環式基は、４〜７個
の環原子を有するもの、例えばフリル基、ピリジル基、
チエニル基、ピロリル基、チイル基、その他である。
R1とR2は一緒になって核中に炭素原子５個または６個
をもつ炭素環式環を完成するのに必要な原子を表わすこ
ともできる。炭素環式環の例としてはシクロペンタン、
シクロヘキサン、シクロペンテン、シクロヘキセン等が
含まれる。
をもつ炭素環式環を完成するのに必要な原子を表わすこ
ともできる。炭素環式環の例としてはシクロペンタン、
シクロヘキサン、シクロペンテン、シクロヘキセン等が
含まれる。
Ｒ、R1、R2、R3およびR4で表される前記の基はすべ
て、Ｈ′で表される水素がイオン化可能である限り、置
換されていないかまたは例えばアルキル基（例えばメチ
ル基、エチル基、ブチル基、ヘキシル基等）、アリール
基（例えばフェニル基、トリル基、メトキシフェニル
基、ヘキサデシルオキシフェニル基、ナフチル基等）、
シアノ基およびカルバルコキシ基（例えばカルボメトキ
シ基、カルボエトキシ基、カルボブトキシ基等）等の基
によって置換されていることができる。
て、Ｈ′で表される水素がイオン化可能である限り、置
換されていないかまたは例えばアルキル基（例えばメチ
ル基、エチル基、ブチル基、ヘキシル基等）、アリール
基（例えばフェニル基、トリル基、メトキシフェニル
基、ヘキサデシルオキシフェニル基、ナフチル基等）、
シアノ基およびカルバルコキシ基（例えばカルボメトキ
シ基、カルボエトキシ基、カルボブトキシ基等）等の基
によって置換されていることができる。
本発明で有用な1,3-ジオンの特に好ましい群は、構造
式 〔式中、R5およびR8は各々水素；アルキル（例えばメチ
ル，エチル，ブチル等）；アリール（例えばフェニル、
トリル、ナフチル等）；シアノ；およびカルボアルコキ
シ（例えばカルボメトキシ、カルボエトキシ等）からな
る群から選んだ基であり、そしてR6およびR7は各々水
素、アルキル（例えばメチル、エチル、ブチル、アミル
等）、およびアリール（例えばフェニル、メトキシフェ
ニル、エトキシフェニル、ヘキサデシルオキシフェニ
ル、トリル、ナフチル等）からなる群から選ばれる〕 で表される炭素環式1,3-ジオンである。
式 〔式中、R5およびR8は各々水素；アルキル（例えばメチ
ル，エチル，ブチル等）；アリール（例えばフェニル、
トリル、ナフチル等）；シアノ；およびカルボアルコキ
シ（例えばカルボメトキシ、カルボエトキシ等）からな
る群から選んだ基であり、そしてR6およびR7は各々水
素、アルキル（例えばメチル、エチル、ブチル、アミル
等）、およびアリール（例えばフェニル、メトキシフェ
ニル、エトキシフェニル、ヘキサデシルオキシフェニ
ル、トリル、ナフチル等）からなる群から選ばれる〕 で表される炭素環式1,3-ジオンである。
本発明で有用な炭素環式1,3-ジオンの例としては以下
のものが含まれる。
のものが含まれる。
（１）5,5-ジメチルシクロヘキサン‐1,3-ジオン （２）5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-ジオン （３）5-（p-メトキシフェニル）シクロヘキサン‐1,3-
ジオン （４）4-シアノ‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-ジオ
ン （５）5-（o-デシルオキシフェニル）シクロヘキサン‐
1,3-ジオン （６）5-（o-ヘキサデシルオキシフェニル）シクロヘキ
サン‐1,3-ジオン （７）シクロヘキサン‐1,3-ジオン （８）4,6-ジカルボエトキシ‐5-メチルシクロヘキサン
‐1,3-ジオン （９）4,6-ジメチル‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-
ジオン （10）4,6-ジシアノ‐5,5-ジメチルシクロヘキサン‐1,
3-ジオン （11）4-フェニル‐5,5-ジエチルシクロヘキサン‐1,3-
ジオン （12）5-メチル‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-ジオ
ン （13）シクロペンテン‐1,3-ジオン （14）4,4-ジメチルシクロペンタン‐1,3-ジオン 炭素環式1,3-ジオンおよびそれらの調製のその他の説
明は米国特許第3,447,926号明細書に記載がある。
ジオン （４）4-シアノ‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-ジオ
ン （５）5-（o-デシルオキシフェニル）シクロヘキサン‐
1,3-ジオン （６）5-（o-ヘキサデシルオキシフェニル）シクロヘキ
サン‐1,3-ジオン （７）シクロヘキサン‐1,3-ジオン （８）4,6-ジカルボエトキシ‐5-メチルシクロヘキサン
‐1,3-ジオン （９）4,6-ジメチル‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-
ジオン （10）4,6-ジシアノ‐5,5-ジメチルシクロヘキサン‐1,
3-ジオン （11）4-フェニル‐5,5-ジエチルシクロヘキサン‐1,3-
ジオン （12）5-メチル‐5-フェニルシクロヘキサン‐1,3-ジオ
ン （13）シクロペンテン‐1,3-ジオン （14）4,4-ジメチルシクロペンタン‐1,3-ジオン 炭素環式1,3-ジオンおよびそれらの調製のその他の説
明は米国特許第3,447,926号明細書に記載がある。
検知可能材料を付着して有する多糖類および1,3-ジオ
ンは、酵素濃度の過剰予測に関して本発明の有利な減少
を提供する任意の比率で組合せることができる。少量の
1,3-ジオンでも若干の効果が発生するので、そのような
少量を含む組成物は本発明の範囲内に含まれる。具体的
な望ましい濃度は、特定の使用する多糖類および1,3-ジ
オンに依存し、既知の酵素濃度をもつ試料でその試料を
試験することによって容易に決定することができる。1,
3-ジオンの好ましい濃度は多糖類100重量部に対してジ
オン１〜40重量部の範囲である。本発明の特に好ましい
1,3-ジオンはジメドン（すなわち5,5-ジメチル‐1,3-シ
クロヘキサンジオン）である。ジメドンの好ましい濃度
は多糖類100重量部に対してジメドン２〜20重量部の範
囲である。
ンは、酵素濃度の過剰予測に関して本発明の有利な減少
を提供する任意の比率で組合せることができる。少量の
1,3-ジオンでも若干の効果が発生するので、そのような
少量を含む組成物は本発明の範囲内に含まれる。具体的
な望ましい濃度は、特定の使用する多糖類および1,3-ジ
オンに依存し、既知の酵素濃度をもつ試料でその試料を
試験することによって容易に決定することができる。1,
3-ジオンの好ましい濃度は多糖類100重量部に対してジ
オン１〜40重量部の範囲である。本発明の特に好ましい
1,3-ジオンはジメドン（すなわち5,5-ジメチル‐1,3-シ
クロヘキサンジオン）である。ジメドンの好ましい濃度
は多糖類100重量部に対してジメドン２〜20重量部の範
囲である。
本発明の組成物は、前記の多糖類および1,3-ジオンの
他にバインダー、不活性粒子状材料および緩衝剤と一緒
に使用することができる。バインダーは前記米国特許第
4,144,306号明細書に記載の試薬担体のいずれであって
もよいが、特に好ましいバインダーの群は等方性多孔性
ポリマー例えばブラッシュト・ポリマーである。各種の
微孔質フィルターは（または部分的に）ブラッシュト・
ポリマー組成物例えばMillipore社の各種膜フィルター
であり、それらは特許文献例えば米国特許第2,783,894
号および第2,772,322号各明細書に記載されている。ブ
ラッシュト・ポリマーの多孔度は、本発明の非拡散性多
糖類がそれを通過して拡散しないが、前記の拡散性材料
が拡散するものである。
他にバインダー、不活性粒子状材料および緩衝剤と一緒
に使用することができる。バインダーは前記米国特許第
4,144,306号明細書に記載の試薬担体のいずれであって
もよいが、特に好ましいバインダーの群は等方性多孔性
ポリマー例えばブラッシュト・ポリマーである。各種の
微孔質フィルターは（または部分的に）ブラッシュト・
ポリマー組成物例えばMillipore社の各種膜フィルター
であり、それらは特許文献例えば米国特許第2,783,894
号および第2,772,322号各明細書に記載されている。ブ
ラッシュト・ポリマーの多孔度は、本発明の非拡散性多
糖類がそれを通過して拡散しないが、前記の拡散性材料
が拡散するものである。
本発明の不活性粒子状材料は、任意の材料例えば顔
料、珪藻土または微結晶コロイド状材料例えば微結晶セ
ルロースであることができる。特に好ましい不活性粒子
状材料は、光反射性顔料例えば硫酸バリウム、二酸化チ
タン、酸化亜鉛および酸化鉛である。その粒度は、ブラ
ッシュト・ポリマーの多孔度と適合させるように選択す
る。組成物中に含有させる顔料の量は大幅に変化し、一
般にはバインダーの重量を基準として５〜2,000％であ
る。
料、珪藻土または微結晶コロイド状材料例えば微結晶セ
ルロースであることができる。特に好ましい不活性粒子
状材料は、光反射性顔料例えば硫酸バリウム、二酸化チ
タン、酸化亜鉛および酸化鉛である。その粒度は、ブラ
ッシュト・ポリマーの多孔度と適合させるように選択す
る。組成物中に含有させる顔料の量は大幅に変化し、一
般にはバインダーの重量を基準として５〜2,000％であ
る。
加水分解酵素例えばアミラーゼの染色化デンプン分析
においては、pHを適当な範囲に維持するために緩衝剤を
使用するのが好ましい。好ましい緩衝剤はpHを６〜８の
範囲に維持するものである。前記の緩衝剤としては、ト
リエタノールアミンおよびリン酸２水素ナトリウムが含
まれる。他の適当な緩衝剤は当業界において周知であ
る。具体的な代表的緩衝剤組成物の部分的な列挙が、Go
od、Biochemistry,5,p.467（1966）に記載されている。
においては、pHを適当な範囲に維持するために緩衝剤を
使用するのが好ましい。好ましい緩衝剤はpHを６〜８の
範囲に維持するものである。前記の緩衝剤としては、ト
リエタノールアミンおよびリン酸２水素ナトリウムが含
まれる。他の適当な緩衝剤は当業界において周知であ
る。具体的な代表的緩衝剤組成物の部分的な列挙が、Go
od、Biochemistry,5,p.467（1966）に記載されている。
本発明の組成物は、有利には、１個もしくはそれ以上
の試薬領域および記録領域を有している試薬要素におい
て使用することができる。この要素は、また、試薬領域
と記録領域の間に１個もしくはそれ以上の緩衝剤領域を
有していてもよい。前記の要素は自己支持的であること
もできるが、支持体上にあるのが好ましい。添付図面に
おいて、第１図は本発明の試薬要素を示しており、それ
は支持体（２）、記録層（６）および試薬層（10）をも
っている。第２図は、支持体（14）、記録層（18）、緩
衝剤層（22）および試薬層（26）をもつ本発明の試薬要
素を示す。
の試薬領域および記録領域を有している試薬要素におい
て使用することができる。この要素は、また、試薬領域
と記録領域の間に１個もしくはそれ以上の緩衝剤領域を
有していてもよい。前記の要素は自己支持的であること
もできるが、支持体上にあるのが好ましい。添付図面に
おいて、第１図は本発明の試薬要素を示しており、それ
は支持体（２）、記録層（６）および試薬層（10）をも
っている。第２図は、支持体（14）、記録層（18）、緩
衝剤層（22）および試薬層（26）をもつ本発明の試薬要
素を示す。
前記の試薬領域は前記の多糖類および1,3-ジオンを含
んでなり、好ましくは透過性および多孔質である。透過
度（多孔度からもたらされる透過度を含む）は、各種の
担体、マトリクスまたはバインダー、例えば前記米国特
許第4,144,306号明細書に記載の多孔質非繊維質材料ま
たは繊維質材料の存在によって達成することができる。
本発明の好ましい透過性バインダーは、前記の群のブラ
ッシュト・ポリマーである。不活性粒子状材料例えば微
結晶セルロースを分散させて含むポリマーバインダーも
多孔質担体として有用である。光反射の目的に、顔料粒
子を試薬領域中に配合することができる。
んでなり、好ましくは透過性および多孔質である。透過
度（多孔度からもたらされる透過度を含む）は、各種の
担体、マトリクスまたはバインダー、例えば前記米国特
許第4,144,306号明細書に記載の多孔質非繊維質材料ま
たは繊維質材料の存在によって達成することができる。
本発明の好ましい透過性バインダーは、前記の群のブラ
ッシュト・ポリマーである。不活性粒子状材料例えば微
結晶セルロースを分散させて含むポリマーバインダーも
多孔質担体として有用である。光反射の目的に、顔料粒
子を試薬領域中に配合することができる。
前記の記録領域は前記米国特許第4,144,306号明細書
に記載されている。
に記載されている。
有用な要素は、臨床分析技術で周知の他の領域を含む
ことができる。それらの他の領域としては、拡散領域、
輻射封鎖領域（反射領域を含む）、フィルター領域、下
塗り層等が含まれる。これらの領域の組成および要素中
での位置は当業界において公知であり、米国特許第3,99
2,158号および前記米国特許第4,144,306号各明細書に記
載されている。
ことができる。それらの他の領域としては、拡散領域、
輻射封鎖領域（反射領域を含む）、フィルター領域、下
塗り層等が含まれる。これらの領域の組成および要素中
での位置は当業界において公知であり、米国特許第3,99
2,158号および前記米国特許第4,144,306号各明細書に記
載されている。
本発明で有用な多層要素は当業界において周知の各種
のラミネート技術またはコーチング技術、例えばハンド
・コーチング、ブレード・コーチング、ビーズ・コーチ
ング、またはディプ・コーチングによって調製すること
ができる。コーチング技術およびラミネート技術並びに
支持体材料については前記米国特許第4,144,306号明細
書に記載がある。
のラミネート技術またはコーチング技術、例えばハンド
・コーチング、ブレード・コーチング、ビーズ・コーチ
ング、またはディプ・コーチングによって調製すること
ができる。コーチング技術およびラミネート技術並びに
支持体材料については前記米国特許第4,144,306号明細
書に記載がある。
以下、実施例によって本発明を更に具体的に説明す
る。
る。
実施例１ 本発明に従って、第２図に示す配置をもつアミラーゼ
分析用要素をポリエチレンテレフタレート支持体上に調
製した。更に、前記の要素は、試薬層と記録層との間
に、0.540g/m2で被覆したポリビニルピロリドンの下塗
り層をもっていた。試薬層は以下の被覆量で被覆した。
分析用要素をポリエチレンテレフタレート支持体上に調
製した。更に、前記の要素は、試薬層と記録層との間
に、0.540g/m2で被覆したポリビニルピロリドンの下塗
り層をもっていた。試薬層は以下の被覆量で被覆した。
BaSO4粒子 83.6g/m2 ブラッシュト・酢酸セルロース 6.7g/m2 （40％アセチル化） ポリウレタンエラストマー 1.3g/m2 （Estane Resin 5715） Triton X-405界面活性剤 2.5g/m2 アミロペクチン染色デンプン 2.5g/m2 ジメドン 0.1g/m2 緩衝剤層は以下の被覆量で被覆した。
ゼラチン 2.7g/m2 Triton X-405界面活性剤 0.1g/m2 トリエタノールアミン 2.1g/m2 H3PO4 0.7g/m2 記録層は以下の被覆量で被覆した。
ゼラチン 1.9g/m2 Triton X-405界面活性剤 0.1g/m2 ポリ（スチレン‐コ‐N-ビニルベンジル 0.9g/m2 ‐N,N-ジメチル‐ベンジルアンモニウムク ロライド‐コ‐ジビニルベンゼン） NaH2PO4 0.2g/m2 比較用として、記録層中にジメドンが存在しないこと
以外は前記要素と同じ要素を調製した。
以外は前記要素と同じ要素を調製した。
両方の要素調製物（ジメドンを含むものおよび含まな
いもの）の試料を各種の条件下で各種の期間〔22℃／相
対湿度（RH）80％で１週間、22℃/RH80％で３週間、０゜
F/RH50％で３週間、および22℃/RH80％で６週間〕エー
ジング（老化）させた。既知のアミラーゼ濃度を含む血
清系対照溶液を使用して、前記の老化要素および新鮮な
要素を試験した。この比較試験の結果を第３図および第
４図に示す。第３図はジメドンを含まない本発明の範囲
外の要素の結果を示し、第４図はジメドンを含む本発明
の要素の結果を示す。第３図および第４図のグラフは、
新鮮な要素、22℃/80％RHで１週間老化させた要素、22
℃/80％RHで３週間老化させた要素、−18℃/50％RHで３
週間老化させた要素および22℃/80％RHで６週間老化さ
せた要素に関して、試験液体中のアミラーゼの実際の濃
度の関数として、記録層に放出される染料の速度を示す
ものである。第３図に示すとおり、ジメドンを含有しな
い本発明の範囲外の要素は、第４図の本発明の要素と比
較して、22℃/80％RHで老化させた後のアミラーゼの濃
度を過剰予測する。有意に大きな傾向を示す。本発明の
要素の改良された性能を第５図にも示す。第５図はアミ
ラーゼ濃度104U/l、184U/lおよび735U/lにおける偏差％
（要素が、実際のアミラーゼ濃度を過剰予測または過小
予測する百分率）を示す棒グラフである。第５図は、本
発明の要素（ジメドンを含有するもの）では試料中のア
ミラーゼ濃度を過剰予測する傾向が有意に減少すること
を示している。
いもの）の試料を各種の条件下で各種の期間〔22℃／相
対湿度（RH）80％で１週間、22℃/RH80％で３週間、０゜
F/RH50％で３週間、および22℃/RH80％で６週間〕エー
ジング（老化）させた。既知のアミラーゼ濃度を含む血
清系対照溶液を使用して、前記の老化要素および新鮮な
要素を試験した。この比較試験の結果を第３図および第
４図に示す。第３図はジメドンを含まない本発明の範囲
外の要素の結果を示し、第４図はジメドンを含む本発明
の要素の結果を示す。第３図および第４図のグラフは、
新鮮な要素、22℃/80％RHで１週間老化させた要素、22
℃/80％RHで３週間老化させた要素、−18℃/50％RHで３
週間老化させた要素および22℃/80％RHで６週間老化さ
せた要素に関して、試験液体中のアミラーゼの実際の濃
度の関数として、記録層に放出される染料の速度を示す
ものである。第３図に示すとおり、ジメドンを含有しな
い本発明の範囲外の要素は、第４図の本発明の要素と比
較して、22℃/80％RHで老化させた後のアミラーゼの濃
度を過剰予測する。有意に大きな傾向を示す。本発明の
要素の改良された性能を第５図にも示す。第５図はアミ
ラーゼ濃度104U/l、184U/lおよび735U/lにおける偏差％
（要素が、実際のアミラーゼ濃度を過剰予測または過小
予測する百分率）を示す棒グラフである。第５図は、本
発明の要素（ジメドンを含有するもの）では試料中のア
ミラーゼ濃度を過剰予測する傾向が有意に減少すること
を示している。
ジメドンの代りに第１表に示す成分を使用して、実施
例１と同様に本発明による要素を調製した。
例１と同様に本発明による要素を調製した。
試薬層中にジオンを含有しない対照と共に前記の要素
を22℃/80％RHで16日間保存し、アミラーゼ濃度44U/lお
よび746U/lの溶液で試験を行った。各要素の偏差％（実
施例１で定義したもの）を第２表に示す。
を22℃/80％RHで16日間保存し、アミラーゼ濃度44U/lお
よび746U/lの溶液で試験を行った。各要素の偏差％（実
施例１で定義したもの）を第２表に示す。
第２表 実施例 44U/lでの偏差％ 746U/lでの偏差％ 対照 164 3.9 ２ −2 −1 ３ −0.5 −6 ４ −8 −2.4 ５ 11.7 −0.6 第２表の結果は、本発明の範囲外の対照用要素と比較
して、本発明の要素により、アミラーゼ濃度の過剰予測
の傾向が大幅に減少することを示している。
して、本発明の要素により、アミラーゼ濃度の過剰予測
の傾向が大幅に減少することを示している。
加水分解酵素検知用の前記組成物は正確な分析結果を
提供する。更に、前記の組成物は、乾式試験要素中に配
合して雰囲気条件下で１週間以上保存した場合でも正確
な結果をもたらし、従って、雰囲気条件下で保存した場
合における酵素濃度の過剰予測の問題が回避される。
提供する。更に、前記の組成物は、乾式試験要素中に配
合して雰囲気条件下で１週間以上保存した場合でも正確
な結果をもたらし、従って、雰囲気条件下で保存した場
合における酵素濃度の過剰予測の問題が回避される。
第１図は支持体上に試薬層と記録層とを含んでなる本発
明の要素の説明図である。 第２図は、支持体上に試薬層と緩衝剤層と記録層とを含
んでなる本発明の要素の説明図である。 第３図および第４図は雰囲気条件下で貯蔵後の酵素濃度
の過剰予測が本発明の要素では減少する傾向があること
を示すグラフであって、第３図は本発明の範囲外の要素
が酵素濃度を過剰予測する傾向を示し、そして第４図は
本発明の要素では酵素濃度の過剰予測の傾向が減少する
ことを示している。 第５図は２週間の保存でジメドンが偏差に与える効果を
示す棒グラフであって、本発明の要素では酵素濃度の過
剰予測の傾向が減少することを示している。 2,14…支持体;6,18…記録層;10,20…試薬層;22…緩衝剤
層
明の要素の説明図である。 第２図は、支持体上に試薬層と緩衝剤層と記録層とを含
んでなる本発明の要素の説明図である。 第３図および第４図は雰囲気条件下で貯蔵後の酵素濃度
の過剰予測が本発明の要素では減少する傾向があること
を示すグラフであって、第３図は本発明の範囲外の要素
が酵素濃度を過剰予測する傾向を示し、そして第４図は
本発明の要素では酵素濃度の過剰予測の傾向が減少する
ことを示している。 第５図は２週間の保存でジメドンが偏差に与える効果を
示す棒グラフであって、本発明の要素では酵素濃度の過
剰予測の傾向が減少することを示している。 2,14…支持体;6,18…記録層;10,20…試薬層;22…緩衝剤
層
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ブルック ピー．シュレゲル アメリカ合衆国，ニューヨーク 14424, カナダイグア，ブレイス ロード 2254 (72)発明者 ドロアース エル．ハンバート アメリカ合衆国，ニューヨーク 14616, ロチェスター，アイリーン クリックル 35
Claims (1)
- 【請求項１】1,3-ジオンの２個のカルボニルの間に、イ
オン化可能水素少なくとも１個を含むメチレン基を有す
る1,3-ジオンを、安定剤として有する多糖類を含んでな
る、加水分解酵素検知用組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/819,667 US4782018A (en) | 1986-01-17 | 1986-01-17 | Detection of hydrolyzing enzymes |
| US819667 | 1986-01-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62224298A JPS62224298A (ja) | 1987-10-02 |
| JP2513660B2 true JP2513660B2 (ja) | 1996-07-03 |
Family
ID=25228727
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62006275A Expired - Lifetime JP2513660B2 (ja) | 1986-01-17 | 1987-01-16 | 加水分解酵素検知用組成物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4782018A (ja) |
| EP (1) | EP0229721B1 (ja) |
| JP (1) | JP2513660B2 (ja) |
| CA (1) | CA1294194C (ja) |
| DE (1) | DE3773002D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014521065A (ja) * | 2011-06-29 | 2014-08-25 | セリム リサーチ コーポレイション | インジケータ装置 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02163637A (ja) * | 1988-12-16 | 1990-06-22 | Fuji Photo Film Co Ltd | 液体化学分析装置 |
| JP2576910B2 (ja) * | 1990-04-13 | 1997-01-29 | 富士写真フイルム株式会社 | 免疫分析要素および免疫分析方法 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3447926A (en) * | 1965-01-22 | 1969-06-03 | Eastman Kodak Co | Color photographic silver halide elements containing 4-substituted urazoles and/or cycloalkane-1,3-diones |
| US3694318A (en) * | 1968-08-19 | 1972-09-26 | Bernard Klein | Substrate and method for alpha-amylase assay |
| US3983005A (en) * | 1974-03-25 | 1976-09-28 | Eastman Kodak Company | Integral element for the analysis of cholesterol |
| CA1095819A (en) * | 1977-01-14 | 1981-02-17 | Eastman Kodak Company | Element for analysis of liquids |
| AT362526B (de) * | 1977-09-13 | 1981-05-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha- -amylase |
| US4478944A (en) * | 1982-11-24 | 1984-10-23 | Eastman Kodak Company | Analytical element containing a barrier zone and process employing same |
| US4672029A (en) * | 1984-12-06 | 1987-06-09 | Eastman Kodak Company | Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes |
-
1986
- 1986-01-17 US US06/819,667 patent/US4782018A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-19 CA CA000525849A patent/CA1294194C/en not_active Expired - Fee Related
-
1987
- 1987-01-15 EP EP87300316A patent/EP0229721B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-01-15 DE DE8787300316T patent/DE3773002D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-01-16 JP JP62006275A patent/JP2513660B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014521065A (ja) * | 2011-06-29 | 2014-08-25 | セリム リサーチ コーポレイション | インジケータ装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0229721A2 (en) | 1987-07-22 |
| EP0229721B1 (en) | 1991-09-18 |
| EP0229721A3 (en) | 1988-09-07 |
| US4782018A (en) | 1988-11-01 |
| CA1294194C (en) | 1992-01-14 |
| DE3773002D1 (de) | 1991-10-24 |
| JPS62224298A (ja) | 1987-10-02 |
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Legal Events
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