JPH025897A - γ−グルタミルトランスペプチダーゼ活性測定用多層分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分：ｉｆ１ 本発明は、液体試料中のｒ−グルタミルトランスペプチ
ダーゼ（ｙ−ＧＴＰと略記する）活性を測定するための
多層分析素子に関する。

更に詳しくは、本発明は水性液体試料の分析、特に体液
を試料とする臨床検査に有用なｒ−ＧＴＰ活性測定用多
層分析素子に関する。

〔従来の技術」 臨床検査において、人の血清中の１−ＧＴＰの活性を測
定することは極めて有用である。ｒ−ＧＴＰの上昇は、
多種の閉塞性黄だん、肝癌、アルコール性肝障害などに
見られ、アルカリホスファターゼなどのいわゆる胆道系
酵素や各種の逸脱酵素とは異なった臨床内意ａｒｋつも
のとして注目されている。

１−ＧＴＰの測定には各種の合成基質が用いられている
が、発色試薬の不要なｒ−グルタミル−ｐ−ニトロアニ
リドが一般的でｌ）、更に溶解性の潰れたγ−グルタミ
ルー６−カルボキシー４−ニトロアニリドは、工ＦＯＯ
の標準法に用いられている。

７−ＧＴＰ測定用多層分析素子としては、例えば、公開
技報８巻−４８公技番号８３−１２９３６に開示されて
いる。

〔発明が解決しようとする課題」 しかし、こｎらの多層分析素子を用いてｒ−ＧＴＰの活
ｆｆ：を測定する場合、定量感度という点では、まだ充
分満足できるものとは言い難く、更なる改善が望まれて
いる。また、試料液中に共存するｔ＝５能性のあるヘモ
グロビン等の分光吸収領域と重複する干渉物質の影＃を
受けやすいという欠点を有している。

本発明の目的は、定量感度が改良され、かつ保存安定性
に潰れ、ヘモグロビンの干渉の除去されたｙ−ＧＴＰ活
性測定用多層分析素子を提供することにある。

〔課題を解決するための手段〕

本発明を概説すれば、本発明はｙ−ａ’ｒｐ活性測定用
多層分析素子に関する発明であって、試薬層及びその上
方に多孔性展開層を有する多ノー分析素子において、ｙ
−ＧＴＰの基質を上記多孔性展開層に含有し、グリシル
グリシン金上記試薬層に含有していることを特徴とする
。

本発明の前記目的でるる定量感度の改良及び優れた保存
安定性は、試薬層及びその上方に多孔性展開層を有する
多層分析素子において、γ−ＧＴＰの基質を上記多孔性
展開層に含有し、グリシルグリシンを上記試薬層に含有
するｒ−ＧＴＰ活性測定用多層分析素子によって達成さ
れた。

また、ヘモグロビンの干渉の除去は、上記多層分析素子
にチオ尿素を含有させることにより達成できた。

以下、本発明を具体的に説明する。

本発明の分析素子における液体不浸透性の光透過性支持
体（以下、本発明に係る支持体と略す）は、液体不浸透
性で、かつ光透過性であればそのｍ類を問わないが、例
えば酢酸セルロース翫ポリエチレンテレフタレート、ポ
リカーボネート又はポリスチレンのような種々の重合体
材料がこの使用目的に適する。更には上記重合体材料の
みならず、ガラスのごとき無機材料も同様に用いること
が可Ｆ１ｓである。本発明に係る支持体の厚さは任意で
あるが、好ましくは５０〜２５０μｍである。また、本
発明に係る支持体の観測側の一側面は、その目的に応じ
て任意に加工することが可能である。更に試薬層を積層
する側の支持体面に、場合によっては光透過性の下塗り
層を使用して試薬と支持体との接着性を改良することが
できる。

本発明に係る多孔性展開層は、（１）一定容量の流体試
料を単位面積当シ試薬層に均一に配布する機能を有する
ものである。その上、更に、特公昭５！１−２１６７７
号公報に記載された性能、すなわち（２）流体試料中の
分析反応を阻害する物質又は要因を除去する機能及び／
又は１３３分光光度分析を行うときに支持体を経て透過
する測定光を反射するバックグランド作用を行う機能を
有するものであれば好ましい。

したがって、本発明に係る多孔性展開層は、上記（１）
の機能のみを有する層、（１）に加えて（２）及び／又
は＜３３の機能を併せて有する層のいずれかとすること
ができ、あるいは（１）　ｋ包含する膜数の機能を適宜
分離し、各機能ごとに別の層を使用することも可能であ
る。更に（１１、（２）及び（３）の機能のうち、２つ
の機能を有する層と、残りの１つの機能を有する層を組
付せて使用することもできる。例えば、前述の特公昭５
３−２１６７７号公報に記載された二酸化チタン及び二
酢酸セルロースから成るプラッシュポリマーと呼称され
る非繊維多孔質媒体の展開層、特開昭５５−１６４５５
６号公報に記載された親水化処理した織物の展開層、特
開昭５７−９４６５８号、同５７−１２５８４７号、同
５７−１９７４６６号及び同５Ｂ−７０１６１号６公報
等に記載された繊維構造展開層、特開昭５８−９０１６
７号公報に記載された粒子結合体構造展開層が挙げられ
る。特に、上記穢維構造展開Ｉ―及び粒子結合体構造展
開層は、血球部分も速やかに移送することがｏｌ能な素
材として特に有用である。本発明の分析素子における展
開ノーの膜厚は、その空隙率によって決定されるべきで
ろるが、好ましくは約１００〜６００μｍ、更に好まし
くは約１５０〜４００μｍである。また、空隙率は好ま
しくは約２０〜８５％である。

上記多孔性展開層には、基質、酸化型酵素、電子伝達剤
等の試薬を含有させることもできる。

また池の付加的な硝加剤として、例えば保恒剤、界面活
性剤等、種々の添加剤も所望に応じて添加することがで
きる。

特に界面活性剤は、流体試料を本発明の素子に適用した
際の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性）、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の列としては、飼えば２．５−ジ−
ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−オ
クチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−インノ
ニルフェノキシポリエチレングリコール等のアル中ルｌ
ｆｆＭフェノールのポリアルキレングリコール誘導体、
高級脂肪酸のポリアルキレングリコールエステル系、ン
ルビタンエステル、ポリグリセリンエステル等の多価ア
ルコール部分エステル系、ポリオキシエチレンンルビタ
ンエステル等のエステルニーデル系などが挙げられる。

これらの界面活性剤は流体試料の試薬層への浸透速度を
調整し、同時に好ましからざる「クロマトグラフィ現象
」発生ｒ制御する効果を有する。

上記界面活性剤は広範に選択嘔れた址を用いることがｎ
］能であるが、通常は１０１１９／ｍ”〜１００１７ｍ
”　　好ましくは１００　ｍ９７ｍ２〜５０２／ｍ２用
いることができる。

本発明の分析素子は必要に応じて、例えば米国特許！ｘ
９９２，１５８号明細曹記械の反射ｌ―、下値９層、米
国特許４．０４２．５５５号明細書記載の放射線ブロッ
キング層、米国特許４．０６６゜４０３号明細書記載の
バリヤー層、米国！特許４゜１（Ｓ＆０９５号明細書記
載のマイグレーション阻止層、特開昭５５−９０８５９
号公報記載のスカベンジャー層、及び米国特許４，１１
０，０７９号明細書記載の破壊性ボッド状部材等を任意
に組合せて本発明の目的に合せた任意の構成とすること
ができる。

本発明に係る第１の試薬層を形成するためのバインダー
としてはゼラテ／、７タル化ゼラチン等のゼラチン誘導
体、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセ
ルロースナトリウム塩等の水溶液性セルロース誘導体、
ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリア
クリル了ミド、ポリメタクリルアミド、ポリ（モノ又は
ジアルキル置換）アクリルアミド、ポリ（モノ又はジア
ルキル置換）メタクリルアミド及びこれらの水溶性共重
合体等が挙げられる。好ましくは、ポリビニルピロリド
ン及びその誘導体が用いらｎる。

上記試薬層には、付加的な添加剤として、例えば保恒剤
、界面活性剤等種々の添加剤を所望に応じて添加するこ
とができる。

特に界面活性剤は、は血性の向上あるいは本発明に係る
反応の促進等に有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性）、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の列としては、例えば２．５−ジ−
ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−オ
クチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−インノ
ニルフェノキシポリエチレングリコール等のアルキル置
換フェノールのポリアルキレングリコール誘導体、高級
脂肪酸のポリアルキレングリコールエステル系、ンルビ
タンエステル、ポリグリセリンエステル等の多価アルコ
ール部分エステル系、ポリオキシエチレンンルビタンエ
ステル等のエステルエーテル系などが挙げら才りる。

これらの界面活性剤を上記第１の試薬ｌ−及び第２の試
薬層に含有させる盆は、通常は１０’９／　ｍ　”〜２
０９７ｍ”　　好ましくは１０Ｑ　Ｉｌｆ　／　ｍス〜
１０？／ｍスである。

本発明に用いられる緩衝剤としては、向えばトリス緩４
剤（トリスヒドロキシメチルアミノメタン及び塩酸トリ
スヒドロキシメチルアミノメタンの組合せ）、グツドの
緩衝剤、ホウ酸塩緩衝剤等が好ましく用いられることが
できる。

本発明に係る７−ＧＴＰ活性測定用基材としては、ｒ−
グルタミル−ｐ−ニトロアニリドや特公昭５４−７７８
１号公報記載のｒ−グルタミル−５−カルボキシ−４−
ニトロアニリド等が挙げられる。

これらの分析素子の種々の１ｍは、本発明に係る支持体
上に所望の構成に従い、従来写真工業において公知のス
ライドホッパ塗布法、押出し塗布法、浸漬値商法等を適
宜選択して用い、順次積層することで任意の厚みの層を
塗設することができる。

本発明の分析素子を用いて、流体試料中の特定成分の量
ヲ、本発明に係る支持体側から反射スペクトロホトメト
リーによシ初速度法又は反応終点法に匠って測定するこ
とかでさる。このようにして得られた測定値は、あらか
じめ作成しておいた検量線に当てはめることで特定成分
のｔｔ−決定することができる。

本発明の分析素子に適用される流体試料の濾は任意に定
めることができるが、好ましくは約５μｔから約５０μ
ｔでｌ）、更に好ましくは５μｔから２０μｔである。

通常１０μｔの流体試料を適用するのが好ましい。

本発明の分析素子は全血液、血清及び血漿のいずれの分
析にも不都合なく用いることができるヶ更には尿、リン
パ液、髄液等の他の体液も不都合なく用いられる。全血
液を用いる場合には、必要に応じて検出のための放射線
が血球によシ妨害を受けるのを避けるために、前述の放
射線ブロッキング層又は他の反射ノーヲ設けることがで
きる。

本発明の分析素子に用いられる分析反応は、その目的に
より任意に定めることができるが、例えば１尿化学の分
野に有用であ夛、特に生物学的液体試料、すなわち血液
又は尿中の成分の分析に用いられる。

［実施汐り］ 以下、実施列を挙げて、本発明を更に具体的に説明する
が、本発明はこれら実施列に限定されない。

実施列１ 透明な下塗シ済み厚さ約１８０μｍのポリエチレンテレ
フタレート支持体上に下記に示した組成で塗布を行った
。３ 表−１ 上記試薬層上に展開１ｍ　＆設け、表−１に示すように
本発明の分析素子１〜３及び比較分析素子＋１１、（２
）？作成した。

上記本発明の分析素子−１〜３及び比較分析素子−（１
）、（２）に対して５８Ｕ／Ｌ、９８Ｕ／Ｌ、２４６０
／ＩＩのγ−ＧＴＰ活性を有するヒト血清を１０μを点
着した後、５７℃でインキュベーションし、点着後５５
分後及び７分後の反射濃度ｆ　４０５　ｎｍのフィルタ
ーを用いて測定し、この反射濃度差を求め、表−２の結
果を得た。

表−２ 反射＠反差ｆｔｎ出した後、即日の検ｊｔ巌に当てはめ
活性値に変換した後、変動率を出した。その結果を表−
３に示す。

表−５ 表−２の結果から明らかなように、本発明の分析素子−
１〜５は比較分析素子−（１）、（２）に比してγ−Ｇ
ＴＰＯ活性の差に対し、良好な反射嬢度差を示し、識別
能すなわち定量感度が高いことが判る。

実施列２ 上記本発明の分析素子−１，２及び比較分析素子−（１
）を４０℃７日間保存した後、３８Ｕ／Ｌ及び９８Ｕ／
ＩＩのγ−ＧＴＰ活性を有するヒト血清を滴下し、実施
列１と同様な操作を行い、以上、表−６から明らかなよ
うに、本発明の分析素子−１，２は比較分析素子−（１
）に比べ、良好な保存安定性ヲ有していることが判る。

実施例５ 上記本発明の分析素子−１及び５に対して、ヘモグロビ
ン１００Ｉ＋ｖＺｄｔを共存物質として含有するγ−Ｇ
ＴＰ活性が５８Ｕ／Ｌ、９８Ｕ／ＩＪ、２４１ＳＵ／１
１のヒト血清１０μｔを点着した後、３７℃でインキュ
ベートした後、五５分後及び７分後の反射濃度ｔ−４０
５ｎｍ　のフィルターを用いて測定し、あらかじめ作成
し九検貸線によシアーＧ　ＴＰ活性値に変換した結果５
ｒ：表−４に示す。

表−４ られる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、試薬層及びその上方に多孔性展開層を有する多層分
   析素子において、γ−グルタミルトランスペプチダーゼ
   の基質を上記多孔性展開層に含有し、グリシルグリシン
   を上記試薬層に含有していることを特徴とするγ−グル
   タミルトランスペプチダーゼ活性測定用多層分析素子。 ２、請求項１記載の分析素子において、チオ尿素を含有
   していることを特徴とする多層分析素子。 ３、該チオ尿素は、該多孔性展開層に含有されている請
   求項２記載の多層分析素子。