JP2024508746A - ４－１ｂｂおよびｏｘ４０結合タンパク質を含む組成物および使用方法 - Google Patents

Abstract

本開示は、４－１ＢＢおよびＯＸ４０に結合する二重特異性抗体およびその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。このような組成物を使用して、がんなどの障害を治療するための方法も提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本国際出願は、２０２１年２月１７日に出願された米国仮出願第６３／１５０，４７５号の優先権を主張するものであり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

電子的に提出された配列表への参照
電子的に提出された配列表の内容（名称：４８９７＿００６００００＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ；サイズ：１８，０３０バイト；および作成日：２０２２年２月１６日）は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

技術分野
本開示は、４－１ＢＢおよびＯＸ４０に特異的に結合する二重特異性抗体およびその抗原結合断片を含む医薬組成物に関する。この組成物は、固形腫瘍がんなどの障害の治療に有用である。このような組成物を使用して、がんなどの障害を治療するための方法も提供される。

４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）およびＯＸ４０は、ＴＮＦ受容体（ＴＮＦＲ）ファミリーのメンバーである（Ｂｒｅｍｅｒ，ＩＳＲＮ Ｏｎｃｏｌ．：３７１８５４（２０１３））。これらの受容体は、ナイーブＴ細胞またはＮＫ細胞には構成的に存在しない：その発現は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介したＴ細胞の刺激、またはＮＫ細胞内の他の刺激によって引き起こされる。４－１ＢＢは、主にＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞内で上方制御され、ＯＸ４０は、主にＣＤ４ Ｔ細胞上で上方制御される。これらの受容体の機能は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞に共刺激シグナルを提供することである。これらの受容体の活性化は、４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）またはＯＸ４０リガンド（ＯＸ４０Ｌ）三量体との相互作用による三量体化によって自然に引き起こされ、シグナル伝達および特定の細胞機能の開始につながる。４－１ＢＢは、ＩＦＮ－γ、グランザイム、および抗アポトーシス遺伝子の発現の増加を通じて、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞のエフェクター機能を増強し、これにより、多くのより優れたエフェクターＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞が生成される。ＯＸ４０は、ＩＬ－２を産生する能力およびメモリーＣＤ４ Ｔ細胞のクローン拡大能力を増強することにより、ＣＤ４ Ｔ細胞のエフェクター機能を増強する。

４－１ＢＢおよびＯＸ４０は、多くの場合、腫瘍浸潤リンパ球上で発現し、それらの発現は、腫瘍特異的Ｔ細胞を同定するために使用されている。ヒト固形腫瘍には、多くの場合、リンパ球、ほとんどがＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞が浸潤している。腫瘍浸潤リンパ球の蓄積は、多くの場合、様々な悪性腫瘍に罹患した患者の生存率の改善と関連している。（Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２：ｅ２７１８４（２０１３）；Ｍｏｎｔｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｔｒａｎｓｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：ｅ７０（２０１６））。

様々な誘導腫瘍モデルおよび自然発生腫瘍モデルにおける前臨床結果は、アゴニスト抗体で４－１ＢＢを標的にすることが、腫瘍の除去および持続的な抗腫瘍免疫をもたらし得ることを示唆している。ウレルマブおよびウトミルマブは、アゴニスト抗４－１ＢＢモノクローナル抗体であり、固形腫瘍の治療を含む適応症について臨床試験が進行している。初期に有効性の兆候が確認されたにもかかわらず、ウレルマブの臨床開発は、１ｍｇ／ｋｇを超える用量での炎症性肝毒性によって妨げられている。ウトミルマブは、ウレルマブほど効力は強くないが、ウレルマブと比較して、改善された安全性プロファイルを有する（Ｃｈｅｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１３１：３９－５７（２０１８））。ウレルマブで観察されるような肝毒性または他の全身性損傷を引き起こさない、４－１ＢＢを標的とする有効な治療薬が必要とされている。

ＯＸ４０アゴニストは、腫瘍へのＴ細胞浸潤を増加させることが報告されている。また、ＯＸ４０シグナル伝達は、Ｔｒｅｇを介した抗腫瘍免疫応答の抑制を防ぐことができる。４Ｔ－１乳癌、Ｂ１６黒色腫、ルイス肺がん、およびいくつかの化学的誘導肉腫などのいくつかの前臨床マウスがんモデルでは、ＯＸ４０アゴニストの注射により、治療的応答が結果的に得られている。（Ｏｈｓｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５９：３８３８－３８４８（１９９７）；Ｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８３：２１８５－２１９５（１９９６）；Ｍａｘｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６４：１０７－１１２（２０００）；Ｇｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ３３（８）：７９８－８０９（２０１０））。

場合によっては、研究者らは、アゴニズムを誘導するために、４－１ＢＢもしくはＯＸ４０に対する複数（＞２）の結合ドメイン、または複数のＯＸ４０Ｌおよび４－１ＢＢＬ細胞外ドメインの融合を含むタンパク質構築物を生成した。他の例では、４－１ＢＢまたはＯＸ４０に対する結合ドメイン（複数可）および腫瘍特異的抗原に対する結合ドメイン（複数可）を含む二重特異性タンパク質が存在する。腫瘍抗原結合を介した結合およびクラスター化は、４－１ＢＢおよびＯＸ４０のクラスター化およびシグナル伝達を誘導する。しかし、これらの構築物はいずれも、腫瘍浸潤リンパ球、すなわちＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４ Ｔ＋細胞、およびＮＫ細胞の機能を刺激すること、およびエフェクター細胞のオフターゲット活性化（すなわち、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩｂへの結合による活性化）を最小限にするまたはまったく行わずにそうすることとは期待されていない。

したがって、腫瘍浸潤リンパ球の活性を選択的に強化する（循環リンパ球への効果は最小限であるかまたは全くない）治療選択肢、例えば、４－１ＢＢおよびＯＸ４０の両方に結合して刺激する二重特異性抗体を含む医薬組成物が必要である。

本開示のいくつかの態様は、（ａ）４－１ＢＢおよびＯＸ４０を特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭの安定性促進緩衝液；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭの安定化アミノ酸；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖの糖；および（ｅ）約０．０１％～約０．０３％の界面活性剤を含む医薬組成物を提供する。

本開示のいくつかの態様では、安定性促進緩衝液は、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、およびグルタミン酸塩からなる群から選択される。いくつかの態様では、安定性促進緩衝液は、組成物中に、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、または約１５ｍＭの量で存在する。いくつかの態様では、安定性促進緩衝液は、グルタミン酸塩である。いくつかの態様では、グルタミン酸塩は、組成物中に、約５ｍＭの濃度で存在する。

本開示のいくつかの態様では、安定化アミノ酸は、アルギニン、メチオニン、ロイシン、およびグリシンからなる群から選択される。いくつかの態様では、安定化アミノ酸は、組成物中に、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様では、安定化アミノ酸は、ロイシンである。いくつかの態様では、ロイシンは、組成物中に、約４０ｍＭの濃度で存在する。

本開示のいくつかの態様では、糖は、スクロース、トレハロース、およびソルビトールからなる群から選択される。いくつかの態様では、糖は、組成物中に、約２％ｗ／ｖ～約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、糖は、組成物中に、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、または約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、糖は、スクロースである。いくつかの態様では、スクロースは、組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。

本開示のいくつかの態様では、医薬組成物は、界面活性剤をさらに含む。いくつかの態様では、界面活性剤は、組成物中に、約０．０１％ｗ／ｖ～約０．０３％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、界面活性剤は、ポリソルベート－８０である。いくつかの態様では、ポリソルベート－８０は、組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。

本開示のいくつかの態様では、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７の範囲にある。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、約４．５である。

本開示のいくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約１０ｍｇ／ｍＬ～５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

本開示のいくつかの態様では、医薬組成物は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含まない。

本開示のいくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９０％を超える純度を有する。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約１０ｍＭグルタミン酸塩；（ｃ）約４０ｍＭロイシン；（ｄ）約３％ｗ／ｖスクロース；および（ｅ）約０．０２％ポリソルベート－８０を含み；ここで、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７である。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、（ａ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩；（ｃ）４０ｍＭロイシン；（ｄ）３％ｗ／ｖスクロース；および（ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０を含み；ここで、組成物のｐＨは、４．５である。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含み、ここで、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含み；（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。

いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み；（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、ここで、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み、（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。

いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、（ａ）１０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；（ｉｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン；および配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；または（ｉｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭグルタミン酸塩と；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭロイシンと；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖスクロースと；（ｅ）約０．０１％～約０．０３％ポリソルベート－８０と、を含み；ここで、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７である。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、（ａ）１０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって；（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３：配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；を含む、抗体またはその抗原結合断片と；（ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩と；（ｃ）４０ｍＭロイシンと；（ｄ）３％ｗ／ｖスクロースと；（ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０と、を含み、ここで、組成物のｐＨは、４．５である。

いくつかの態様では、医薬組成物は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメインと、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＯＸ４０抗原結合ドメインと、を含む。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、液体である。

本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインおよびヒトＯＸ４０結合ドメインは、同じポリペプチド上にある。いくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒトＯＸ４０結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒトＯＸ４０結合ドメインのＣ末端にある。

本明細書で提供される医薬組成物のいくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域を含む。態様において、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１の免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの態様では、抗体は、ＣＨ１ドメインを含まない。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａ、ならびにＧ２３６の欠失を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。

いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間、および／または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間にリンカーを含む。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間のリンカー、および／または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間のリンカーは、１０～３０アミノ酸、１５～３０アミノ酸、または２０～３０アミノ酸を含む。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間のリンカー、または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間のリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含み、式中、ｎ＝１～５（配列番号２１）、任意によりｎ＝１である。いくつかの態様では、抗体は、２つのポリペプチドの二量体を含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、第１のｓｃＦｖ、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２のｓｃＦｖを含み、ここで、（ａ）第１のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含むか、または（ｂ）第１のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、二量体は、ホモ二量体である。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、－２０℃で保存することができる。いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、－２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、および約７ヶ月後にｐＨに有意な変化を有しない。いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、－２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後に高分子量含有率（％ＨＭＷ）に有意な変化を有しない。いくつかの態様では、－２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後の％ＨＭＷの変化は、５％未満である。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、１、２、または３回の凍結／解凍サイクル後に％ＨＭＷの有意な変化を有しない。いくつかの態様では、１、２、または３回の凍結／解凍サイクル後の％ＨＭＷの変化は、５％未満である。いくつかの態様では、％ＨＭＷは、サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定される。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定した場合、－２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後、凝集体形成に有意な変化を有しない。

また、本明細書では、有効量の本明細書に開示される医薬組成物を対象に投与することを含む、対象におけるがんを治療する方法も提供される。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍がんである。いくつかの態様では、がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である。いくつかの態様では、がんは、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、胃癌、大腸／腸癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肝癌、脳癌、または血液癌からなる群から選択される。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。いくつかの態様では、対象は、腫瘍浸潤リンパ球上に４－１ＢＢおよびＯＸ４０を発現する。

本開示のいくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、がんの治療に使用するためのものである。いくつかの態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、固形腫瘍がんの治療に使用するためのものである。いくつかの態様では、固形腫瘍がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である。いくつかの態様では、がんは、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、大腸／腸癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肝癌、脳癌、または血液癌からなる群から選択される。

異なるタンパク質製剤におけるＦＸＸ０１１０２のＴ_ａｇｇ分析を示す。（実施例２を参照のこと）。 異なるタンパク質製剤におけるＦＸＸ０１１０２のＴ_ａｇｇ分析を示す。（実施例２を参照のこと）。 １００ｍＭ塩化ナトリウムを有するまたは有しない、１０ｍＭグルタミン酸塩、８％ｗ／ｖスクロース、０．０２％ｗ／ｖポリソルベート－８０中１０ｍｇ／ｍＬで製剤化されたＦＸＸ０１１０２に対して行われたＢ_２２分析の結果を示す。（実施例３を参照のこと）。 １０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ４．５中で製剤化された１０ｍｇ／ｍＬ ＦＸＸ０１１０２に対するアルギニン、メチオニン、およびグリシンの影響を比較するＢ_２２分析の結果を示す。（実施例４を参照のこと）。 １０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ４．５中で製剤化されたＦＸＸ０１１０２に対するロイシンの影響を決定するためのＢ_２２実験の結果を示す。（実施例４を参照のこと）。 ２５ｍＭ ＭｇＳＯ_４、リジンまたはロイシンを添加したまたは添加しなかった、１０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ４．５中で製剤化された１０ｍｇ／ｍＬ ＦＸＸ０１１０２のＴ_ａｇｇプロットの比較を示す（実施例５を参照のこと）。

本開示の理解を容易にするために、いくつかの用語および語句を以下に定義する。
Ｉ．用語
本明細書で使用する場合、用語「４－１ＢＢ」は、これらに限定されないが、天然の４－１ＢＢポリペプチドおよび４－１ＢＢポリペプチドのアイソフォームなどの哺乳動物の４－１ＢＢポリペプチドを指す。「４－１ＢＢ」は、完全長の未プロセシング４－１ＢＢポリペプチド、ならびに細胞内でのプロセシングの結果生じる４－１ＢＢポリペプチドの形態を包含する。本明細書で使用される場合、用語「ＣＤ１３７」は、用語「４－１ＢＢ」と交換可能であると理解されるものとする。本明細書で使用される場合、用語「ヒト４－１ＢＢ」は、配列番号１のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、用語「カニクイザル４－１ＢＢ」は、配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「４－１ＢＢポリヌクレオチド」、「４－１ＢＢヌクレオチド」、または「４－１ＢＢ核酸」は、４－１ＢＢをコードするポリヌクレオチドを指す。

本明細書で使用する場合、「ＯＸ４０」という用語は、これらに限定されないが、天然ＯＸ４０ポリペプチドおよびＯＸ４０ポリペプチドのアイソフォームなど、哺乳動物ＯＸ４０ポリペプチドを指す。「ＯＸ４０」は、完全長の未プロセシングのＯＸ４０ポリペプチド、ならびに細胞内でのプロセシングから生じるＯＸ４０のポリペプチド形態を包含する。本明細書で使用される場合、用語「ヒトＯＸ４０」は、配列番号３のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。本明細書で使用される場合、用語「カニクイザルＯＸ４０」は、配列番号４のアミノ酸配列を含むポリペプチドを指す。「ＯＸ４０ポリヌクレオチド」、「ＯＸ４０ヌクレオチド」、または「ＯＸ４０核酸」は、ＯＸ４０をコードするポリヌクレオチドを指す。

本明細書で使用される場合、「腫瘍浸潤リンパ球」または「ＴＩＬ」という用語は、腫瘍細胞に直接対抗するおよび／または腫瘍細胞を取り囲むリンパ球を指す。腫瘍浸潤リンパ球は、典型的には、非循環リンパ球であり、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、およびＮＫ細胞が挙げられる。腫瘍浸潤リンパ球は、ＯＸ４０および４－１ＢＢを発現できる。

本明細書で使用される場合、用語「抗体（複数可）」は、専門用語であり、本明細書では互換的に使用することができ、抗原を特異的に結合する少なくとも１つの抗原結合部位を有する分子または分子の複合体を指す。

抗体としては、例えば、モノクローナル抗体、組換えにより生産された抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、再表面化した抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖モノマー、抗体重鎖モノマー、抗体軽鎖二量体、抗体重鎖二量体、抗体軽鎖－抗体重鎖ペア、イントラボディ、ヘテロコンジュゲート抗体、単一ドメイン抗体、一価抗体、一本鎖抗体または単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗抗Ｉｄ抗体）、二重特異性抗体、および多重特異性抗体を挙げることができる。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体は、ポリクローナル抗体集団を指す。抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、またはＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａまたはＩｇＧ_２ｂ）であり得る。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２もしくはＩｇＧ_４）もしくはサブクラスである。特定の態様では、抗体は、ヒト化モノクローナル抗体である。別の特定の態様では、抗体は、ヒトモノクローナル抗体、例えば免疫グロブリンである。いくつかの態様では、本明細書に記載される抗体は、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、またはＩｇＧ_４抗体である。

「二重特異性」抗体は、２つの異なる抗原に結合する２つの異なる抗原結合部位（Ｆｃ領域を除く）を有する抗体である。二重特異性抗体としては、例えば、組換えにより産生された抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、再表面化抗体、キメラ抗体、免疫グロブリン、合成抗体、２つの重鎖分子および２つの軽鎖分子を含む四量体抗体、抗体軽鎖モノマー、ヘテロコンジュゲート体抗体、連結一本鎖抗体または連結一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、ラクダ化抗体、アフィボディ、連結Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、化学連結Ｆｖ、およびジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）を挙げることができる。二重特異性抗体は、免疫グロブリン分子の任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＹ）、任意のクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、またはＩｇＡ_２）、または任意のサブクラス（例えば、ＩｇＧ_２ａまたはＩｇＧ_２ｂ）であり得る。いくつかの態様では、本明細書に記載される二重特異性抗体は、ＩｇＧ抗体、またはそのクラス（例えば、ヒトＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２もしくはＩｇＧ_４）もしくはサブクラスである。いくつかの態様では、本明細書に記載される二重特異性抗体は、２つのポリペプチド、任意により同一のポリペプチドを含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端の順で、第１のｓｃＦｖ抗原結合ドメイン、リンカー（任意により、リンカーは、ヒンジ領域である）、免疫グロブリン定常領域、および第２のｓｃＦｖ抗原結合ドメインを含む。この特定のタイプの抗体は、ＡＤＡＰＴＩＲ（商標）技術によって例示される。例示的な分子は、本開示全体においてＦＸＸ０１１０２と呼ばれる。二重特異性抗体は、例えば、各標的に対して一価（例えば、一方のアームが一方の抗原を標的とし、他方のアームが第二の抗原を標的とするＩｇＧ分子）、または各標的に対して二価（例えば、二重可変ドメイン抗体、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ、または二量体を含むＡＤＡＰＴＩＲ（商標）抗体（二量体の各ポリペプチドは、２つの異なる抗原結合ドメインを含む）であり得る。

本明細書で使用される場合、用語「抗原結合ドメイン」、「抗原結合領域」、「抗原結合部位」、および同様の用語は、「抗体分子に抗原に対する特異性を付与するアミノ酸残基を含む抗体分子の部分（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））を指す。抗原結合領域は、げっ歯類（例えば、マウス、ラット、またはハムスター）およびヒトなどの任意の動物種に由来し得る。４－１ＢＢに結合する抗原結合ドメインは、本明細書では例えば「４－１ＢＢ結合ドメイン」と呼ぶことができる。ＯＸ４０に結合する抗原結合ドメインは、本明細書では例えば「ＯＸ４０結合ドメイン」と呼ぶことができる。本明細書で使用される場合、「ヒト４－１ＢＢ結合ドメイン」または「ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメイン」は、ヒト４－１ＢＢに特異的に結合するが、非ヒト４－１ＢＢ（例えば、マウス、げっ歯類、または非ヒト霊長類４－１ＢＢ）にも結合し得る抗原結合ドメインを指す。

同様に、「ヒトＯＸ４０結合ドメイン」または「ヒトＯＸ４０抗原結合ドメイン」は、ヒトＯＸ４０に特異的に結合する抗原結合ドメインを指す。

本明細書で使用される「４－１ＢＢ／ＯＸ４０抗体」、「抗４－１ＢＢ／ＯＸ４０抗体」または「４－１ＢＢｘＯＸ４０抗体」という用語は、４－１ＢＢ（例えば、ヒト４－１ＢＢ）に結合する抗原結合ドメインおよびＯＸ４０（例えば、ヒトＯＸ４０）に結合する抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を指す。

「モノクローナル」抗体は、単一の抗原決定基またはエピトープの高度に特異的な認識および結合に関与する均質な抗体集団を指す。これは、典型的には、異なる抗原決定基に対して向けられる異なる抗体を含むポリクローナル抗体とは対照的である。「モノクローナル」抗体という用語は、無傷の免疫グロブリン分子および全長免疫グロブリン分子の両方、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）、抗体部分を含む融合タンパク質、および抗原認識部位を含む任意の他の修飾免疫グロブリン分子を包含する。さらに、「モノクローナル」抗体とは、これらに限定されないが、ハイブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、およびトランスジェニック動物などによる任意の数の方法で作製された抗体を指す。

用語「キメラ」抗体は、アミノ酸配列が２つ以上の種に由来する抗体を指す。典型的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は、望ましい特異性、親和性、および能力を有する１種の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギなど）に由来する抗体の可変領域に対応するが、定常領域は、その種における免疫応答の誘発を回避するために、別の種（通常はヒト）に由来する抗体の配列と相同である。

「ヒト化」抗体という用語は、最小限の非ヒト（例えばマウス）配列を含む非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を指す。典型的には、ヒト化抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ハムスター）のＣＤＲの残基で置き換えられた（「ＣＤＲ移植」）ヒト免疫グロブリンである（Ｊｏｎｅｓｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２－５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３－３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４－１５３６（１９８８））。

場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、所望の特異性、親和性、および能力を有する非ヒト種由来の抗体中の対応する残基で置き換えられる。そのヒト化抗体を、Ｆｖフレームワーク領域でのおよび／または置き換えられた非ヒト残基内でのさらなる残基の置換によってさらに修飾し、抗体の特異性、親和性、および／または能力を改善し、最適化することができる。一般に、ヒト化抗体は、非ヒト免疫グロブリンに対応するＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてを含む、少なくとも１つ、典型的には２つまたは３つの可変ドメインのすべてを実質的に含むが、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンのコンセンサス配列のＦＲ領域である。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部を含むこともできる。ヒト化抗体を生成するために使用される方法の例は、米国特許第５，２２５，５３９号；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，９１（３）：９６９－９７３（１９９４）、およびＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１０）：８９５－９０４（１９９６）に記載されている。

「ヒト」抗体という用語は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座に由来するアミノ酸配列を有する抗体を意味し、そのような抗体は、当技術分野で知られている任意の技術を使用して作製される。

可変領域は、典型的には、抗体の一部、一般に、軽鎖または重鎖の一部、典型的には、成熟重鎖中のアミノ末端約１１０～１２５アミノ酸および成熟軽鎖中のアミノ末端約９０～１１５アミノ酸を指し、これは、抗体間で配列が大きく異なり、特定の抗原に対する特定の抗体の結合および特異性に使用される。配列の可変性は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域に集中しているが、可変ドメイン内のより高度に保存された領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。いかなる特定の機構または理論にも束縛されるものではないが、軽鎖および重鎖のＣＤＲは、主に、抗体と抗原との相互作用および特異性に関与すると考えられている。いくつかの態様では、可変領域は、ヒト可変領域である。いくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。特定の態様では、可変領域は、霊長類（例えば、非ヒト霊長類）可変領域である。いくつかの態様では、可変領域は、げっ歯類またはマウスのＣＤＲおよび霊長類（例えば、非ヒト霊長類）のフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。

用語「ＶＨ」および「ＶＨドメイン」は、抗体の重鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

用語「ＶＬ」および「ＶＬドメイン」は、抗体の軽鎖可変領域を指すために互換的に使用される。

「Ｋａｂａｔナンバリング」という用語および類似の用語は、当技術分野で認識されており、抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖可変領域内のアミノ酸残基に番号を付けるシステムを指す。いくつかの態様では、抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って決定され得る（例えば、Ｋａｂａｔ ＥＡ＆Ｗｕ ＴＴ（１９７１）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ １９０：３８２－３９１ ａｎｄ Ｋａｂａｔ ＥＡ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２を参照のこと）。Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用することにより、抗体重鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置３１～３５（これには、任意により、３５の後に１つまたは２つの追加のアミノ酸を含むことができる（Ｋａｂａｔナンバリングスキームでは３５Ａおよび３５Ｂと呼ばれる）（ＣＤＲ１））、アミノ酸位置５０～６５（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸位置９５～１０２（ＣＤＲ３）に存在する。

Ｋａｂａｔナンバリングシステムを使用することにより、抗体軽鎖分子内のＣＤＲは、典型的には、アミノ酸位置２４～３４（ＣＤＲ１）、アミノ酸位置５０～５６（ＣＤＲ２）、およびアミノ酸位置８９～９７（ＣＤＲ３）に存在する。特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔナンバリングスキームに従って決定されている。

Ｃｈｏｔｈｉａは、代わりに、構造ループの位置に言及する（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））。Ｋａｂａｔナンバリング規則を使用して番号付けした場合のＣｈｏｔｈｉａＣＤＲ－Ｈ１ループの終端は、ループの長さに応じて、Ｈ３２とＨ３４との間で変化する（これは、Ｋａｂａｔのナンバリングスキームでは、挿入がＨ３５ＡおよびＨ３５Ｂに置かれるためである；３５Ａまたは３５Ｂのいずれも存在しない場合、ループは３２で終端する；３５Ａのみが存在する場合、ループは３３で終端する；３５Ａおよび３５Ｂの両方が存在する場合、ループは３４で終端する）。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに従って決定されている。

ＡｂＭ超可変領域は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造ループとの間の妥協を表し、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアによって使用される。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、ＡｂＭナンバリングスキームに従って決定されている。

ＩＭＧＴのナンバリング規則は、Ｂｒｏｃｈｅｔ，Ｘ，ｅｔ ａｌ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３６：Ｗ５０３－５０８（２００８）に記載されている。特定の実施形態では、本明細書に記載される抗体のＣＤＲは、ＩＭＧＴナンバリング規則に従って決定されている。本明細書で使用される場合、別段の定めがない限り、免疫グロブリン分子の可変領域内のアミノ酸残基の位置は、ＩＭＧＴのナンバリング規則に従って番号付けされる。

本明細書で使用される場合、「定常領域」または「定常ドメイン」という用語は、交換可能であり、当該技術分野において共通の意味を有する。定常領域は、抗体部分、例えば、抗原への抗体の結合には直接関与しないが、Ｆｃ受容体との相互作用などの様々なエフェクター機能を呈することができる軽鎖および／または重鎖のカルボキシル末端部分である。免疫グロブリン分子の定常領域は、一般に、免疫グロブリン可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する。免疫グロブリン「定常領域」または「定常ドメイン」は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメイン、またはこれらのドメインのサブセット、例えばＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含み得る。本明細書で提供されるいくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ１ドメインを含まない。本明細書で提供されるいくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ヒンジを含まない。本明細書で提供されるいくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。

「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」は、細胞上の抗体受容体および補体のＣ１ｑ成分への結合を担うソース抗体の部分に対応する、またはそれに由来するポリペプチド配列を指す。Ｆｃは、「結晶断片」の略で、タンパク質結晶を容易に形成する抗体の断片を指す。タンパク質分解消化によって最初に記述された個別のタンパク質断片は、免疫グロブリンタンパク質の全体的な一般構造を定義することができる。「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」は、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、および任意によりヒンジの全部または一部を含む。「Ｆｃ領域」または「Ｆｃドメイン」は、単一のポリペプチドまたは２つのジスルフィド結合ポリペプチドを指し得る。免疫グロブリンの構造および機能の概説については、Ｐｕｔｎａｍ，Ｔｈｅ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｖｏｌ．Ｖ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，１９８７），ｐｐ．４９－ １４０；およびＰａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１：１６９－２１７，１９９４を参照されたい。本明細書で使用される場合、Ｆｃという用語には、天然に存在する配列のバリアントが含まれる。

本明細書で使用される「免疫グロブリン二量体化ドメイン」または「免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメイン」は、第２のポリペプチド鎖の異なる免疫グロブリンドメインと優先的に相互作用または会合するポリペプチド鎖の免疫グロブリンドメインを指し、ここで、異なる免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインの相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化（すなわち、「ヘテロ二量体」とも呼ばれる、２つの異なるポリペプチド鎖間の二量体の形成）に実質的に寄与するか、または効率的に促進する。第１のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインおよび／または第２のポリペプチド鎖の免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインの非存在下で、第１ポリペプチド鎖と第２ポリペプチド鎖との間の二量体化に統計的に有意な減少がある場合、免疫グロブリンのヘテロ二量体化ドメイン間の相互作用は、第１および第２のポリペプチド鎖のヘテロ二量体化に「実質的に寄与するか、効率的に促進する」。いくつかの態様では、第１および第２のポリペプチド鎖が共発現される場合、第１および第２のポリペプチド鎖の少なくとも６０％、少なくとも約６０％～約７０％、少なくとも約７０％～約８０％、少なくとも８０％～約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％は、互いにヘテロ二量体を形成する。代表的な免疫グロブリンヘテロ二量体化ドメインとしては、免疫グロブリンＣＨ１ドメイン、免疫グロブリンＣＬドメイン（例えば、ＣκもしくはＣλアイソタイプ）、または本明細書に提供される野生型免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメイン、ならびに改変（または突然変異）免疫グロブリンＣＨ１およびＣＬドメインなどのそれらの誘導体が挙げられる。

「野生型免疫グロブリンヒンジ領域」とは、天然に存在する抗体の重鎖に見られるＣＨ１ドメインとＣＨ２ドメイン（ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＤの場合）との間に挿入され、接続される、またはＣＨ１ドメインとＣＨ３ドメイン（ＩｇＥおよびＩｇＭの場合）との間に挿入され、接続される天然に存在する上部および中間ヒンジアミノ酸配列を指す。いくつかの態様では、野生型免疫グロブリンヒンジ領域配列は、ヒトのものであり、ヒトＩｇＧヒンジ領域を含むことができる。「改変された野生型免疫グロブリンヒンジ領域」または「改変された免疫グロブリンヒンジ領域」は、（ａ）最大３０％のアミノ酸変化（例えば、最大２５％、２０％、１５％、１０％、または５％のアミノ酸置換もしくは欠失）を有する野生型免疫グロブリンのヒンジ領域、または（ｂ）約５アミノ酸（例えば、約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０アミノ酸）から最大約１２０アミノ酸の長さを有する（例えば、約１０～約４０アミノ酸、または約１５～約３０アミノ酸、または約１５～約２０アミノ酸、または約２０～約２５アミノ酸の長さを有する）、最大約３０％のアミノ酸変化（例えば、最大約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、もしくは１％のアミノ酸置換もしくは欠失、またはそれらの組み合わせ）を有する、および米国特許第２０１３／０１２９７２３号および米国特許第２０１３／００９５０９７号に開示のＩｇＧコアヒンジ領域を有する野生型免疫グロブリンのヒンジ領域の一部を指す。本明細書で提供されるように、「ヒンジ領域」または「ヒンジ」は、抗原結合ドメイン（例えば、４－１ＢＢまたはＯＸ４０結合ドメイン）と免疫グロブリン定常領域との間に位置し得る。

本明細書で使用される場合、「リンカー」とは、２つの化合物、例えば２つのポリペプチドを連結することができる部分、例えばポリペプチドを指す。リンカーの非限定的な例としては、グリシン－セリン（例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ））リピートを含む柔軟なリンカー、および（ａ）膜貫通タンパク質（例えば、Ｉ型膜貫通タンパク質）のドメイン間領域；（ｂ）ＩＩ型Ｃ－レクチンのストーク領域；または（ｃ）免疫グロブリンヒンジに由来するリンカーが挙げられる。本明細書で提供される場合、リンカーは、例えば、（１）一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）におけるＶＨ領域とＶＬ領域との間のポリペプチド領域、または（２）免疫グロブリン定常領域と抗原結合ドメインとの間のポリペプチド領域を指し得る。いくつかの態様では、リンカーは、５～約３５個のアミノ酸、例えば約１５～約２５個のアミノ酸から構成される。いくつかの態様では、リンカーは、少なくとも５個のアミノ酸、少なくとも７個のアミノ酸、または少なくとも９個のアミノ酸から構成される。

本明細書で使用される場合、「重鎖」という用語は、抗体に関して使用される場合、定常領域のアミノ酸配列に基づいて、任意の異なるタイプ、例えば、アルファ（α）、デルタ（δ）、イプシロン（ε）、ガンマ（γ）、およびｍｕ（μ）を指すことができ、それぞれ抗体のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭクラス、例えば、ＩｇＧのサブクラス、例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、およびＩｇＧ_４などを生じる。

本明細書で使用される場合、用語「軽鎖」は、抗体に関して使用される場合、定常領域のアミノ酸配列に基づく任意の異なるタイプ、例えばカッパ（κ）またはラムダ（λ）を指すことができる。軽鎖アミノ酸配列は、当技術分野でよく知られている。特定の態様では、軽鎖は、ヒト軽鎖である。

本明細書で使用される場合、「ＥＵナンバリングシステム」という用語は、Ｅｄｅｌｍａｎ，Ｇ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，６３，７８－８５（１９６９）およびＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１に記載の抗体の定常領域のＥＵナンバリング規則を指し、これらのそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書で使用する場合、別段の定めがない限り、免疫グロブリン分子の定常領域内のアミノ酸残基の位置は、ＥＵ命名法に従って番号付けされる（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５ Ｔｈｅｒａｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：７７－９４）。

本明細書で使用される場合、「二量体」という用語は、共有結合（例えば、ジスルフィド結合）および他の相互作用（例えば、静電相互作用、塩橋、水素結合、および疎水性相互作用）など、１つ以上の分子内力の形態を介して互いに結合した２つのサブユニットからなる生物学的実体を指し、適切な条件下（例えば、生理学的条件下、組換えタンパク質の発現、精製、および／または保存に好適である水溶液中、または非変性および／または非還元電気泳動条件下）で安定である。本明細書で使用される「ヘテロ二量体」または「ヘテロ二量体タンパク質」は、２つの異なるポリペプチドから形成される二量体を指す。本明細書で使用される「ホモ二量体」または「ホモ二量体タンパク質」とは、２つの同一のポリペプチドから形成される二量体を指す。

「結合親和性」は、一般に、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合性相互作用の合計の強さを指す。別途指定されない限り、本明細書で使用される「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体および抗原）のメンバー間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋ_Ｄ）で表すことができる。親和性は、これらに限定されないが、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）および平衡結合定数（Ｋ_Ａ）など、当技術分野で知られている複数の方法で測定および／または表現することができる。Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎの商から計算され、Ｋ_Ａは、ｋ_ｏｎ／ｋ_ｏｆｆの商から計算される。ｋ_ｏｎは、例えば抗原に対する抗体の結合速度定数を指し、ｋ_ｏｆｆは、例えば抗原からの抗体の解離を指す。ｋ_ｏｎおよびｋ_ｏｆｆは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）またはＫｉｎＥｘＡなどの当業者に知られている技術によって決定することができる。

本明細書で使用される場合、用語「免疫特異的に結合する」、「免疫特異的に認識する」、「特異的に結合する」、および「特異的に認識する」は、抗体の文脈において類似の用語である。これらの用語は、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、およびその結合が抗原結合ドメインとエピトープの間に若干の相補性を伴うことを示している。したがって、ヒト４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０に「特異的に結合する」抗体は、また、無関係な非４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０タンパク質に結合する程度が、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される場合、４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０に対する抗体の結合の約１０％未満であり得る。

結合ドメインは、「高親和性」結合ドメインおよび「低親和性」結合ドメインに分類することができる。「高親和性」結合ドメインとは、１０^－７Ｍ未満、１０^－８Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、１０^－１０Ｍ未満のＫ_Ｄ値を有する結合ドメインを指す。「低親和性」結合ドメインとは、１０^－７Ｍより大きい、１０^－６Ｍより大きい、または１０^－５Ｍより大きいＫＤを有する結合ドメインを指す。「高親和性」結合ドメインおよび「低親和性」結合ドメインは、標的に結合するが、試験サンプル中に存在する他の成分には顕著に結合することはない。

本明細書で使用される場合、抗体は、標的の非常に近くにある場合に、当業者であれば結合に必要と考える条件下で、その標的（すなわち、ヒト４－１ＢＢまたはヒトＯＸ４０）に特異的に結合する場合、「結合可能」である。「ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメイン」は、ヒト４－１ＢＢに特異的に結合する結合ドメインを意味すると理解されるものとする。「ヒトＯＸ４０抗原結合ドメイン」は、ＯＸ４０に特異的に結合する結合ドメインを意味すると理解されるものとする。

「ポリペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを指す。ポリマーは、直鎖状または分岐状であり得、修飾されたアミノ酸を含んでもよく、また、非アミノ酸によって中断され得る。この用語は、自然にまたは介入によって、例えば、ジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識成分とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作または修飾によって、修飾されたアミノ酸ポリマーも包含する。また、定義には、例えば、アミノ酸の１つ以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸など）を含むポリペプチド、ならびに当技術分野で知られている他の修飾が含まれる。本発明のポリペプチドは、抗体に基づいているため、いくつかの態様では、ポリペプチドは、一本鎖または結合鎖として存在し得ることが理解される。

「医薬製剤」および「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤を投与される対象が許容できない毒性を有する追加の成分を含まない調製物を指す。製剤は、滅菌であってもよい。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、当技術分野で周知の経路を使用して投与した場合に、一般にアレルギー応答または他の重篤な副作用を生じない分子実体および組成物を指す。連邦政府または州政府の規制当局によって承認された分子実体および組成物、または動物、特にヒトでの使用が米国薬局方または他の一般に認められた薬局方に記載されている分子実体および組成物は、「薬学的に許容される」と考えられる。

本明細書で使用される「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、薬物、例えば４－１ＢＢ／ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片の生物学的作用の所望の部位への送達を可能にするために使用され得る方法（例えば、静脈内投与）を指す。本明細書に記載の剤および方法と共に使用され得る投与技術としては、例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａに見られる。

本明細書で使用される場合、「対象」および「患者」という用語は、同義的に使用される。対象は、動物であってもよい。いくつかの態様では、対象は、非ヒト動物（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ネコ、イヌ、ラット、マウス、サル、または他の霊長類など）などの哺乳動物である。いくつかの態様では、対象は、ヒトである。本明細書で使用する場合、「必要とする患者」または「必要とする対象」という用語は、例えば、本明細書に提供される４－１ＢＢ／ＯＸ４０抗体またはその抗原結合断片による治療または改善に適応する疾患、障害または状態のリスクがある、またはそれらに罹患している患者を指す。その必要のある患者とは、例えば、がんと診断された患者であり得る。

「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するのに有効な薬物、例えば抗４－１ＢＢ／ＯＸ４０抗体の量を指す。がんの場合、治療有効量の薬物により、がん細胞の数を減少させる；腫瘍のサイズまたは負荷を減少させる；末梢臓器へのがん細胞の浸潤を阻害する（すなわち、ある程度遅延させる、ある態様では、停止させる）；腫瘍の転移を阻害する（すなわち、ある程度遅延させる、ある態様では、停止させる）；ある程度腫瘍の成長を阻害する；がんに関連する症状のうちの１つ以上をある程度軽減する；および／または結果的に良好な応答、例えば、無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）の延長、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、または、ある場合には、病状安定（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、またはそれらの任意の組み合わせが得られることが可能である。

「治療する」または「治療」または「治療するため」または「緩和すること」または「緩和する」などの用語は、診断された病理学的状態または障害を治癒する、減速する、症状を軽減する、および／またはその進行を停止する治療手段を指す。したがって、治療が必要な場合には、すでにその障害と診断されているか、その障害を有する疑いがある場合が挙げられる。いくつかの態様では、患者が以下のうちの１つ以上を示す場合、対象は、本発明の方法に従ってがんの「治療」に奏功している：がん細胞の数の減少または完全な欠如；腫瘍サイズの縮小；例えば、軟組織および骨へのがんの広がりなど、末梢器官へのがん細胞浸潤の阻害または不在；腫瘍転移の阻害または不在；腫瘍成長の阻害または不在；特定のがんに関連する１つ以上の症状の軽減；罹患率および死亡率の低下；生活の質の向上；腫瘍の腫瘍形成性、腫瘍形成頻度、または腫瘍形成能力の低下；腫瘍内のがん幹細胞の数または頻度の減少；腫瘍形成性細胞の非腫瘍形成性状態への分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、または全生存期間（ＯＳ）の延長、完全奏効（ＣＲ）、部分奏効（ＰＲ）、病状安定（ＳＤ）、進行性疾患（ＰＤ）の減少、進行までの時間（ＴＴＰ）の短縮、またはそれらの任意の組み合わせ。

用語「がん」または「がん性」は、細胞の集団が、調節されていない細胞の成長を特徴とする哺乳動物における生理学的状態を指すか、または記載する。がんの例としては、これらに限定されないが、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、腸癌、前立腺癌、乳癌、肝癌、脳癌、および血液癌が挙げられる。がんは、原発腫瘍であってもよいし、進行がんまたは転移がんであってもよい。

がんは、固形腫瘍がんであり得る。「固形腫瘍」という用語は、通常、嚢胞または液体領域を含まない異常な組織塊を指す。固形腫瘍の例としては、肉腫、癌腫、およびリンパ腫である。白血病（血液のがん）は、一般に、固形腫瘍を形成しない。固形腫瘍には、ＯＸ４０および４－１ＢＢを発現する腫瘍浸潤リンパ球が含まれ得る。

本明細書で使用される用語「ａ」および「ａｎ」は、別段の指示がない限り、列挙された構成要素の「１つ以上」を指すことを理解されたい。

特に記載されない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で使用される場合、用語「または」は包括的であることが理解される。本明細書において「Ａおよび／またはＢ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、「ＡおよびＢ」、「ＡまたはＢ」、「Ａ」、および「Ｂ」の両方を含むことを意図する。同様に、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句で使用される「および／または」という用語は、次の態様の各々を包含することを意図する：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）。

本明細書で態様が「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言語を用いて記載される場合はいずれも、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」および／または「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語で記載される類似の態様も提供され、本出願の開示の一部であることが理解される。本開示では、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法および欧州特許法に定められている意味を有することができ、また、「含有する（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含有している（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することもできる；「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」も同様に、米国特許法および欧州特許法に定められている意味を有する。この用語は、オープンエンドであり、列挙されているものの基本的または新規な特徴が、列挙されている以上のものの存在によって変更されない限り、列挙されているもの以上のものが存在し得るが、従来技術の態様は除外される。また、欧州特許法に関する限り、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「実質的に含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」の使用は、特定のさらなる成分が存在し得ること、すなわち、化合物または組成物の本質的な特性に実質的に影響を及ぼさない成分が存在し得ることを意味することを理解されたい。

本明細書で使用される場合、「約」および「およそ」という用語は、数値または数値範囲を修飾するために使用される場合、その値または範囲を最大５％上回るか、または５％下回るまでの偏差が、列挙された値または範囲の意図された意味内にとどまることを示す。

本明細書で提供される任意のドメイン、成分、組成物、および／または方法は、本明細書で提供される他のドメイン、成分、組成物、および／または方法のいずれかのうちの１つ以上と組み合わせることができる。

ＩＩ．医薬組成物
本開示は、既知の製剤と比較して、安定性が向上した、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む新規医薬組成物を提供する。本明細書で提供される新規医薬組成物は、－２０℃での保存中、および複数回の凍結融解サイクル後の凝集体形成を時間の経過とともに阻害する。本開示の新規医薬組成物は、安定性を改善させるために、特定の賦形剤（すなわち、安定性促進緩衝液、安定化アミノ酸、糖成分、および界面活性剤）と共に製剤化された４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む。有利には、新規医薬組成物は、ある範囲のｐＨ値にわたって安定性の向上をもたらす。

治療用製剤には、凝集生成物または分解生成物の形成を最小限に抑えるために、タンパク質の二次および三次構造を安定化する溶液条件が望ましい。疾患の治療に使用される治療用タンパク質、例えば４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片の場合、生成物関連汚染物質は、効力の喪失、効力の予期せぬ増加、免疫原性および他の望ましくない副作用など、望ましくない結果を有し得る。製剤は、いくつかの成分から構成され得、典型的には、水溶液で提供される。このような成分には、これらに限定されないが、特定のｐＨを維持し、保存中のｐＨの変化に抵抗するための緩衝液、塩、アミノ酸、洗浄剤、ポリマー、糖、および薬物の安定性もしくは溶解性を維持する役割、または溶液に他の望ましい特性を組み込む役割を果たす界面活性剤などの他の化学賦形剤を挙げることができる。このような成分は、正または負の電荷を有する可能性があり、両性イオンである可能性があり、または両親媒性、疎水性または親水性である可能性がある。異なる成分は、その化学的特性に基づいて、タンパク質の異なる領域に結合し得る、相互作用し得る、および／または安定化し得る。

ヒト患者への投与に好適である医薬組成物は、典型的には、非経口投与用に、例えば液体担体中で製剤化されるか、または静脈内もしくは皮下投与用の液体溶液もしくは懸濁液に再構成するために好適である。非経口投与用の液体組成物は、注射または持続注入による投与用に製剤化させ得る。注射または注入による投与経路には、静脈内、腹腔内、筋肉内、髄膜腔内および皮下が含まれる。いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬製剤は、投与前に凍結乾燥される。いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬製剤は、投与前に凍結乾燥されない。

本開示は、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む新規医薬組成物を提供する。いくつかの態様では、本開示は、（ａ）４－１ＢＢおよびＯＸ４０を特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭの安定性促進緩衝液；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭの安定化アミノ酸；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖの糖；および（ｅ）約０．０１％～約０．０３％の界面活性剤を提供する。

いくつかの態様では、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、およびグルタミン酸塩からなる群から選択される安定性促進緩衝液を含む。いくつかの態様では、安定性促進緩衝液は、組成物中に、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、または約１５ｍＭの濃度で存在する。いくつかの態様では、安定性促進緩衝液は、グルタミン酸塩である。いくつかの態様では、グルタミン酸塩は、組成物中に、約５ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの態様では、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、アルギニン、メチオニン、ロイシン、およびグリシンからなる群から選択される安定化アミノ酸を含む。いくつかの態様では、安定化アミノ酸は、組成物中に、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの態様では、安定化アミノ酸は、ロイシンである。いくつかの態様では、ロイシンは、組成物中に、約４０ｍＭの濃度で存在する。

いくつかの態様では、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、スクロース、トレハロース、およびソルビトールからなる群から選択される糖を含む。いくつかの態様では、糖は、組成物中に、約２％ｗ／ｖ～約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、糖は、組成物中に、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、または約８％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、糖は、スクロースである。いくつかの態様では、スクロースは、組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。

いくつかの態様では、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、界面活性剤を含む。いくつかの態様では、界面活性剤は、組成物中に、約０．０１％ｗ／ｖ～約０．０３％ｗ／ｖの濃度で存在する。いくつかの態様では、界面活性剤は、ポリソルベート－８０である。いくつかの態様では、ポリソルベート－８０は、組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する。

いくつかの態様では、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物は、特定のｐＨ範囲内での安定性の向上をもたらす。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７の範囲にある。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、約４．５である。いくつかの態様では、組成物のｐＨは、４．５である。

本明細書に開示される医薬組成物のいくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約１０～５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約１０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約３０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、組成物中に、約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。

グルタミン酸塩、スクロース、およびポリソルベート－８０と共に製剤化された４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物への塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）の添加は、組成物に対して不安定化効果を有し得、タンパク質の凝集を引き起し得るタンパク質間の相互作用を促進することができる。したがって、いくつかの態様では、本明細書に開示される医薬組成物は、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含まない。

本明細書に開示される医薬組成物のいくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９０％を超える純度を有する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９１％を超える純度を有する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９２％を超える純度を有する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９３％を超える純度を有する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９４％を超える純度を有する。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、約９５％を超える純度を有する。

いくつかの態様では、本明細書では、以下を含む医薬組成物が提供される：（ａ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約１０ｍＭグルタミン酸塩；（ｃ）約４０ｍＭロイシン；（ｄ）約３％ｗ／ｖスクロース；および（ｅ）約０．０２％ポリソルベート－８０を含み；ここで、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７である。

いくつかの態様では、本明細書では、以下を含む医薬組成物が提供される：（ａ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩；（ｃ）４０ｍＭロイシン；（ｄ）３％ｗ／ｖスクロース；および（ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０を含み；ここで、組成物のｐＨは、４．５である。

一般に、そのような組成物は、典型的には、薬学的に許容される担体をさらに含むことができる。本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される」という用語は、動物、特にヒトでの使用に関して政府規制機関によって承認されているか、米国薬局方もしくは他の一般に認められている薬局方に収載されていることを意味する。このような医薬担体としては、これらに限定されないが、水および油などの滅菌液体、例えば、石油、動物、植物または合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油、グリセロールポリエチレングリコールリシノール酸などが挙げられる。水、または生理食塩水水溶液、デキストロースおよびグリセロール水溶液は、特に注射用溶液の担体として使用することができる。

ＩＩＩ．４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体
本明細書では、ヒト４－１ＢＢに特異的に結合する抗原結合ドメイン（すなわち、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメイン）およびヒトＯＸ４０に結合する抗原結合ドメイン（すなわち、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメイン）を含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む新規医薬組成物が提供される。本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、両方の標的タンパク質に対して二価である、すなわち、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、２つの４－１ＢＢ結合ドメインおよび２つのＯＸ４０結合ドメインを含む。このような４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、ＡＤＡＰＴＩＲ（商標）技術によって例示される。例示的な分子は、本開示全体においてＦＸＸ０１１０２と呼ばれる。各標的に対して二価である二重特異性抗体またはその抗原結合断片としては、これらに限定されないが、二重可変ドメイン抗体、ＩｇＧ－ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ－Ｆｃ－ｓｃＦｖ、または二量体を含むＡＤＡＰＴＩＲ（商標）抗体が挙げられ、二量体の各ポリペプチドには、２つの異なる抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む。

Ａ．４－１ＢＢ結合ドメイン
本明細書では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を集合させるために使用できる、ヒト４－１ＢＢに結合する抗原結合ドメイン（すなわち、４－１ＢＢ結合ドメイン）が提供される。４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒト４－１ＢＢに結合することに加えて、他の種、例えばカニクイザル由来の４－１ＢＢ、および／またはマウス４－１ＢＢに結合することができる。いくつかの態様では、４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒト４－１ＢＢおよびカニクイザル４－１ＢＢに結合する。

４－１ＢＢ結合ドメインは、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むことができる。４－１ＢＢ結合ドメインは、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を含むことができる。ＶＨおよびＶＬは、別個のポリペプチドであってもよく、または同じポリペプチド上に存在してもよい（例えば、ｓｃＦｖ内）。

いくつかの態様では、本明細書に記載される４－１ＢＢ結合ドメインは、表Ａに提供される６つのＣＤＲ（例えば、配列番号１～６）の組み合わせを含む。

４－１ＢＢに対して二価である４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、それぞれが上記の表Ａおよび表Ｂに列挙される６つのＣＤＲを含む２つの４－１ＢＢ結合ドメインを含むことができる。

本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢ結合ドメインは、表Ｃに提供されるＶＨ配列を含む。

本明細書に記載の４－１ＢＢ結合ドメインは、表ＣのＶＨ配列のＣＤＲ、例えば、ＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＨを含むことができる。

本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢ結合ドメインは、表Ｄに提供されるＶＬ配列を含む。

本明細書に記載の４－１ＢＢ結合ドメインは、表ＤのＶＬ配列のＣＤＲ、例えばＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＬを含むことができる。

いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、それぞれが表Ｃに提供されるＶＨおよび表Ｄに提供されるＶＬを含む、２つの４－１ＢＢ結合ドメインを含むことができる。表Ｃに提供されるＶＨおよび表Ｄに提供されるＶＬは、異なるポリペプチド上に存在する、または同じポリペプチド上に存在することができる。ＶＨおよびＶＬが同じポリペプチド上にある場合、それらはいずれの配向（すなわち、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）であってもよく、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）によって接続され得る。いくつかの態様では、ＶＨおよびＶＬは、少なくとも１５アミノ酸長（例えば、１５～５０アミノ酸、１５～４０アミノ酸、１５～３０アミノ酸、１５～２５アミノ酸、または１５～２０アミノ酸）であるグリシン－セリンリンカーにより接続される。いくつかの態様では、ＶＨおよびＶＬは、少なくとも２０アミノ酸長（例えば、２０～５０アミノ酸、２０～４０アミノ酸、２０～３０アミノ酸、または２０～２５アミノ酸）であるグリシン－セリンリンカーにより接続される。

本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体または抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢ結合ドメインは、表ＣのＶＨ配列のＣＤＲ、例えばＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＨ、および表ＤのＶＬ配列のＣＤＲ、例えば、ＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＬを含むことができる。

Ｂ．ＯＸ４０結合ドメイン
本明細書では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を集合させるために使用できるヒトＯＸ４０に結合する抗原結合ドメイン（すなわち、ＯＸ４０結合ドメイン）が提供される。ＯＸ４０結合ドメインは、ヒトＯＸ４０に結合することに加えて、他の種、例えばカニクイザルおよび／またはマウスＯＸ４０に由来するＯＸ４０にも結合することができる。いくつかの態様では、ＯＸ４０結合ドメインは、ヒトＯＸ４０およびカニクイザルＯＸ４０に結合する。

ＯＸ４０結合ドメインは、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）、すなわち、可変重鎖（ＶＨ）ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、およびＶＬ ＣＤＲ３を含むことができる。ＯＸ４０結合ドメインは、可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）を含むことができる。ＶＨおよびＶＬは、別個のポリペプチドであってもよく、または同じポリペプチド上に存在してもよい（例えば、ｓｃＦｖ内）。

いくつかの態様では、本明細書に記載されるＯＸ４０結合ドメインは、表Ｅおよび表Ｆに列挙される６つのＣＤＲを含む。

ＯＸ４０に対して二価である４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、それぞれが上記の表Ｅおよび表Ｆに列挙される６つのＣＤＲを含む２つのＯＸ４０結合ドメインを含むことができる。

本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、ＯＸ４０結合ドメインは、表Ｇに示すＶＨ配列を含む。

本明細書に記載のＯＸ４０結合ドメインは、表ＧのＶＨ配列のＣＤＲ、例えばＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲを含むＶＨを含むことができる。

本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、ＯＸ４０結合ドメインは、表Ｈに示すＶＬ配列を含む。

本明細書に記載のＯＸ４０結合ドメインは、表ＩのＶＬ配列のＣＤＲ、例えばＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＬを含むことができる。

いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、それぞれが表Ｇに提供されるＶＨおよび表Ｈに提供されるＶＬを含む、２つのＯＸ４０結合ドメインを含むことができる。表Ｇに提供されるＶＨおよび表Ｈに提供されるＶＬは、異なるポリペプチド上に存在する、または同じポリペプチド上に存在することができる。ＶＨおよびＶＬが同じポリペプチド上にある場合、それらはいずれの配向（すなわち、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）であってもよく、リンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）によって接続され得る。いくつかの態様では、ＶＨおよびＶＬは、少なくとも１５アミノ酸長（例えば、１５～５０アミノ酸、１５～４０アミノ酸、１５～３０アミノ酸、１５～２５アミノ酸、または１５～２０アミノ酸）であるグリシン－セリンリンカーにより接続される。いくつかの態様では、ＶＨおよびＶＬは、少なくとも２０アミノ酸長（例えば、２０～５０アミノ酸、２０～４０アミノ酸、２０～３０アミノ酸、または２０～２５アミノ酸）であるグリシン－セリンリンカーにより接続される。

本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体または抗原結合断片のいくつかの態様では、ＯＸ４０結合ドメインは、表ＧのＶＨ配列のＣＤＲ、例えばＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＨ、および表ＨのＶＬ配列のＣＤＲ、例えば、ＩＭＧＴ定義のＣＤＲ、Ｋａｂａｔ定義のＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ定義のＣＤＲ、またはＡｂＭ定義のＣＤＲを含むＶＬを含むことができる。

Ｃ．４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメイン
４－１ＢＢまたはＯＸ４０結合ドメインにおいて、ＶＨ ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬ ＣＤＲまたはＶＬは、別個のポリペプチドであってもよく、または同じポリペプチド上にあってもよい。ＶＨ ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬ ＣＤＲまたはＶＬが同じポリペプチド上にある場合、それらはいずれの配向（すなわち、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）であってもよい。

ＶＨ ＣＤＲまたはＶＨおよびＶＬ ＣＤＲまたはＶＬが同じポリペプチド上にある場合、それらはリンカー（例えば、グリシン－セリンリンカー）によって接続され得る。ＶＨは、リンカー配列のＮ末端に位置することができ、ＶＬは、リンカー配列のＣ末端に位置することができる。あるいは、ＶＬは、リンカー配列のＮ末端に位置し、ＶＨは、リンカー配列のＣ末端に位置することができる。

ＶＨ領域とＶＬ領域とを接合させるためのペプチドリンカーの使用は、当技術分野でよく知られており、この特定の分野には、多数の出版物が存在する。いくつかの態様では、ペプチドリンカーは、Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒアミノ酸配列（（Ｇｌｙ_４Ｓｅｒ）_３）（配列番号２０）の３つのリピートからなる１５量体である。いくつかの態様では、好適なリンカーは、単純なリンカー（例えば、（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎ）（ｎ＝１～５（配列番号２１））をランダム突然変異誘発によって最適化することによって得ることができる。

４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、ヒト化結合ドメインであり得る。
４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、ラット結合ドメインであり得る。４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、マウス結合ドメインであり得る。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体は、ヒト化４－１ＢＢ結合ドメインおよびラットＯＸ４０結合ドメインを含む。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体は、ヒト化４－１ＢＢ結合ドメインおよびマウスＯＸ４０結合ドメインを含む。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体は、ヒト化４－１ＢＢ結合ドメインおよびヒト化ＯＸ４０結合ドメインを含む。

本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、ｓｃＦｖであり得る。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片中の４－１ＢＢおよびＯＸ４０結合ドメインのすべてが、ｓｃＦｖである。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片中の少なくとも１つの４－１ＢＢまたはＯＸ４０結合ドメインは、ｓｃＦｖである。本明細書に記載される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、ポリペプチドは、４－１ＢＢ結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）およびＯＸ４０結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。

本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体または抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢ ｓｃＦｖは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体または抗原結合断片のいくつかの態様では、ＯＸ４０ ｓｃＦｖは、配列番号１９のアミノ酸配列を含む。

いくつかの態様では、４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、別個のポリペプチド鎖上にＶＨおよびＶＬを含むことができる。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片における４－１ＢＢおよびＯＸ４０結合ドメインのすべては、別個のポリペプチド鎖上にＶＨおよびＶＬを含む。いくつかの態様では、４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０結合ドメインは、同じポリペプチド鎖上にＶＨおよびＶＬを含むことができる。いくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片における４－１ＢＢまたはＯＸ４０結合ドメインのすべては、同じポリペプチド鎖上にＶＨおよびＶＬを含む。

本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片のいくつかの態様では、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、２つのポリペプチドを含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端の順で、第１の抗原結合ドメイン、リンカー（例えば、リンカーがヒンジ領域である）、免疫グロブリン定常領域、および第２の抗原結合ドメインを含む。この構成は、本明細書ではＡＤＡＰＴＩＲ（商標）フォーマットとも呼ばれる。例示的な分子は、本開示全体においてＦＸＸ０１１０２と呼ばれる。

このようなフォーマットでは、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、２つのポリペプチドの二量体を含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、第１のｓｃＦｖ、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２のｓｃＦｖを含み、ここで、（ａ）第１のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含むか、または（ｂ）第１のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含む。

本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合断片、または本明細書で提供されるＣＤＲ、ＶＨ、ＶＬ、ｓｃＦｖ、および／またはヒンジのいずれかを含むポリペプチドは、免疫グロブリン定常領域をさらに含み得る。定常領域の存在により、定常領域を有しない同様の二重特異性抗体と比較して、二重特異性抗体の半減期が延長される。免疫グロブリン定常領域は、例えばヒンジと４－１ＢＢ結合ドメイン（例えば４－１ＢＢ結合ｓｃＦｖ）との間に位置し得る。免疫グロブリン定常領域は、ヒンジとＯＸ４０結合ドメイン（例えば、ＯＸ－４０結合ｓｃＦｖ）との間に位置することもできる。いくつかの態様では、ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端の順に、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および抗原結合ドメイン（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。

いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＤの免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含み、任意により、ＩｇＧは、ヒトである。場合によっては、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１（例えば、ヒトＩｇＧ１）の免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。いくつかの態様では、ポリペプチドは、ＣＨ１ドメインを含まない。

いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、それぞれ配列番号１～３の４－１ＢＢ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、それぞれ配列番号４～６の４－１ＢＢ ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、それぞれ配列番号７～９のＯＸ４０ ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列、ならびにそれぞれ配列番号１０～１２のＯＸ４０ ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列を含む。

いくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインおよびヒトＯＸ４０結合ドメインは、同じポリペプチド上にある。いくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒトＯＸ４０結合ドメインのＮ末端にある。いくつかの態様では、ヒト４－１ＢＢ結合ドメインは、ヒトＯＸ４０結合ドメインのＣ末端にある。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＩｇＧ１の免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む。

いくつかの態様では、抗体は、ＣＨ１ドメインを含まない。

いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域は、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａ、ならびにＧ２３６の欠失を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む。いくつかの態様では、抗体またはその抗原結合断片は、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間、および／または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間にリンカーを含む。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間のリンカー、および／または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間のリンカーは、１０～３０アミノ酸、１５～３０アミノ酸、または２０～３０アミノ酸を含む。いくつかの態様では、免疫グロブリン定常領域とヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間のリンカー、または免疫グロブリン定常領域とヒトＯＸ４０結合ドメインとの間のリンカーは、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含み、式中、ｎ＝１～５（配列番号２１）、任意によりｎ＝１である。

Ｄ．４－１ＢＢおよびＯＸ４０結合ドメインを含む組成物
いくつかの態様では、本明細書に記載の医薬組成物は、２つのポリペプチドの二量体を含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、第１のｓｃＦｖ、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２のｓｃＦｖを含み、ここで、（ａ）第１のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含むか、または（ｂ）第１のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、第２のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、二量体は、ホモ二量体である。

いくつかの態様では、本明細書に記載の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含む。

本開示のいくつかの態様は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供し、ここで、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含み；（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む。

本開示のいくつかの態様は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供し、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み；（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。

本開示のいくつかの態様は、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供し、ここで、（ａ）４－１ＢＢ抗原結合ドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み；（ｂ）ＯＸ４０抗原結合ドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む。

本開示のいくつかの態様は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を提供する。

本開示のいくつかの態様は、以下を含む医薬組成物を提供する：（ａ）１０～５０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって、ここで、抗体またはその抗原結合断片は、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；（ｉｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン；および配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；または（ｉｖ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭグルタミン酸塩と；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭロイシンと；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖスクロースと；（ｅ）約０．０１％～約０．０３％ポリソルベート－８０と、を含み；ここで、組成物のｐＨは、約４．３～約４．７である。

本開示のいくつかの態様は、以下を含む医薬組成物を提供する：（ａ）１０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって；（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン；（ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含むＯＸ４０抗原結合ドメインを含む抗体またはその抗原結合断片と；（ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩と；（ｃ）４０ｍＭロイシンと；（ｄ）３％ｗ／ｖスクロースと；（ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０と、を含む医薬組成物を提供し、ここで、組成物のｐＨは、４．５である。

いくつかの態様では、医薬組成物は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメインと、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＯＸ４０抗原結合ドメインと、を含む。

ＩＶ．方法および使用
本開示は、４－１ＢＢおよび／またはＯＸ４０に結合する抗体または抗原結合断片を含む医薬組成物を提供し、本組成物は、これらに限定されないが、がん治療法などの治療的治療法などの様々な用途において有用である。いくつかの態様では、医薬組成物は、腫瘍成長の阻害および／または腫瘍体積の減少に有用である。使用方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ法またはｉｎ ｖｉｖｏ法であり得る。本明細書に記載の医薬組成物は、治療法において使用するための開示された抗体または抗原結合断片のいずれかの使用を含むことができる。

本開示は、対象におけるがんの治療方法を提供し、本方法は、（ａ）４－１ＢＢおよびＯＸ４０を特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭの安定性促進緩衝液；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭの安定化アミノ酸；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖの糖；および（ｅ）約０．０１％～約０．０３％の界面活性剤を含む有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む。

いくつかの態様では、がんは、これらに限定されないが、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、大腸／腸癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肝癌、脳癌、および血液癌が挙げられる。がんは、原発腫瘍であってもよいし、進行がんまたは転移がんであってもよい。いくつかの態様では、がんは、固形腫瘍である。例えば、本開示には、肉腫、癌腫、およびリンパ腫の治療のための二重特異性抗体の使用が含まれる。本開示は、本明細書に記載の、治療有効量の医薬組成物を対象に投与することによって、肉腫、癌腫、またはリンパ腫を有するヒト対象を治療するための方法を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、腫瘍浸潤リンパ球を含む腫瘍または癌性組織を有するヒト対象を治療する方法を提供する。本開示は、４－１ＢＢおよびＯＸ４０を発現するリンパ球を含む腫瘍を有するヒト対象を治療することを提供する。いくつかの態様では、本開示は、固形腫瘍を有するヒト対象に、（ａ）４－１ＢＢおよびＯＸ４０を特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭの安定性促進緩衝液；（ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭの安定化アミノ酸；（ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖの糖；および（ｅ）約０．０１％～約０．０３％の界面活性剤を含む、治療有効量の医薬組成物を投与することを提供する。

本開示のいくつかの態様は、対象において、免疫応答を増強する方法を提供し、本方法は、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む。

本開示のいくつかの態様は、対象において、Ｔ細胞共刺激経路を刺激する方法を提供し、本方法は、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

本開示のいくつかの態様は、対象においてＮＫ細胞および／またはＴ細胞（例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞および／またはＣＤ８＋Ｔ細胞）の増殖を増加させる方法を提供し、本方法は、本明細書に開示される４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む。

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物を対象に投与することによって、対象における腫瘍浸潤リンパ球の数を増加させる方法を提供する。

本開示のいくつかの態様は、本明細書に開示の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む治療有効量の医薬組成物を対象に投与することによって、対象において腫瘍浸潤リンパ球によるグランザイムの発現を増加させる方法を提供する。

いくつかの態様では、対象は、ヒトである。

いくつかの態様では、医薬品として使用するための、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が本明細書に提供される。いくつかの態様では、がんの治療のための方法で使用するための、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片を含む医薬組成物が本明細書に提供される。

Ｖ．キットおよび容器
本開示はまた、本明細書に記載され例示される任意の医薬製剤を含む容器を提供する。

いくつかの態様では、本開示は、本明細書に記載および例示される医薬製剤および／または二重特異性抗体もしくはその抗原結合断片のいずれかを含むキットを提供する。キットは、とりわけ診断法、基礎研究法、または治療的方法で使用するための医薬製剤、抗体、その抗原結合断片、および他の剤を供給するために使用することができる。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載され例示される医薬製剤、抗体もしくはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体のうちのいずれか１つ以上、およびがんを治療する方法における１つ以上の医薬製剤、抗体、またはその抗原結合断片を使用するための指示書を含む。いくつかの態様では、キットは、本明細書に記載され例示される医薬製剤、抗体もしくはその抗原結合断片、および／または二重特異性抗体のうちのいずれか１つ以上、および対象における固形腫瘍がんの治療において使用するための１つ以上の医薬製剤、抗体、またはその抗原結合断片を使用するための指示書を含む。

実施例
本明細書に記載された実施例は、例示目的のみのためであり、それらを考慮した様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願の趣旨および範囲内に含まれるものとすることを理解されたい。

実施例１．様々な賦形剤を使用してタンパク質を安定化し、凝集および／または分解を最小限に抑える。
異なる成分および賦形剤は、それらの化学的特徴に基づいて、タンパク質の異なる領域に結合し得る、相互作用し得るおよび／または安定化し得る。したがって、以下の表１に列挙されているサブセットなど、様々な異なるタイプの賦形剤をスクリーニングして、タンパク質製剤に対するそれらの影響を判定することが有用である。

異なる製剤の影響は、様々な手段で測定することができる。１つのアプローチは、製剤化されたタンパク質を様々な温度で保存することであり、これには、薬物が製造された後の潜在的な保存条件（「意図された保存条件」）および加速保存条件（意図された保存条件よりも高い温度）の両方を含む。保存安定性実験を行う場合、サンプルは、様々な時点で取り出され、分析用サイズ排除高速液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＨＰＬＣ）などの様々な技法によって分析される。ＳＥ－ＨＰＬＣを使用して純度の経時変化を測定することは、様々な製剤が凝集または分解を阻害または促進するか否か評価するのに有用であり得る。分析陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ－ＨＰＬＣ）および／またはキャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）を使用して、タンパク質の電荷変動プロファイルの変化を監視し、様々な製剤条件が、タンパク質構造の電荷関連の変化を阻害または促進しているかを判断できる。

保存安定性実験を使用して異なる製剤を評価することに加えて、他の方法を使用して、タンパク質の安定性に対する生物物理学的影響の特徴を明らかにすることができる。例えば、示差走査蛍光分析（ＤＳＦ）または示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を使用して、融点（Ｔ_Ｍ、熱溶融転移の中点）を測定することにより、様々な製剤が、タンパク質の熱安定性を安定化（Ｔ_Ｍの上昇）しているか不安定化（Ｔ_Ｍの低下）しているかを評価するのに有用であり得る。製剤の安定化効果を評価するために使用できる別の生物物理学的方法は、粒子相互作用パラメータまたは第２ビリアル係数であるＢ_２２を決定することである。特定の製剤中での様々なタンパク質濃度での光散乱測定を使用すると、線の傾きを使用して、その溶液が有益であるか（増加、正の傾き）、または不利であるか（減少、負の傾き）を判断できる。２６６ｎｍでの動的光散乱（ＤＬＳ）監視を使用して、凝集温度（Ｔ_ａｇｇ）を決定することもでき、これは異なる製剤を比較する際にも有用である。

実施例２．異なる緩衝液、ｐＨ、およびスクロース濃度の評価
ＦＸＸ０１１０２二重特異性タンパク質をバイオリアクター中のＣＨＯ細胞によって発現させ、カラムクロマトグラフィーを使用して、ほぼ均一になるまで精製した（ＳＥ－ＨＰＬＣによる純度＞９５％）。それを濃縮し、緩衝液交換し、以下の表２に示す一連の異なる組成物に製剤化した。すべての緩衝液は、１０ｍＭで使用され、ＦＸＸ０１１０２タンパク質濃度は、各溶液で１０ｍｇ／ｍＬであった。本試験の目的は、ＦＸＸ０１１０２二重特異性抗体の安定性に対する様々な緩衝液、ｐＨ、およびスクロース濃度の効果を測定することであった。凝集の開始は、Ｕｎｃｌｅ装置（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用して、温度（Ｔ_ａｇｇ）およびＴ_ｍ（融解曲線の中点）に対応させて測定した。Ｔ_ａｇｇは、温度上昇と対応させて、２６６ｎｍでの光散乱測定によって測定した。

サンプルセットでのＴ_ｍ値を比較したところ、値がすべて約６１～６２℃の範囲内にあるため（データは示さず）、ｐＨ、緩衝液、およびスクロース濃度が、折り畳みのない第１のドメイン（Ｔ_ｍ１）に大きな影響を有しないことが示唆された。しかし、２６６ｎｍでの動的光散乱（ＤＬＳ）データの比較は、サンプル中の不溶性微粒子の形成における差異を示した（図１Ａおよび図１Ｂ）。スクロース濃度は、緩衝液およびｐＨの影響に関して、わずかな変化を引き起こしたため、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩および８％ｗ／ｖグルタミン酸緩衝液については、２％ｗ／ｖスクロースデータのみをプロットした。図１Ａに示すとおり、ｐＨ５．８および６．６の２つのクエン酸緩衝液は、非常に類似したＴ_ａｇｇ曲線を有し、ｐＨ６．６のトレースは、わずかに高い温度にシフトし、これは、ＦＸＸ０１１０２のより安定な溶液条件を反映した。クエン酸塩のＴ_ａｇｇデータでは、クエン酸塩が、試験した緩衝液の中で最も低い安定性促進緩衝液であることを示唆し、次いでコハク酸塩であることが示唆された。ｐＨ５．２の低ｐＨコハク酸塩製剤は、ｐＨ６．０の溶液よりも高いＴ_ａｇｇ値をもたらした。ヒスチジンおよびグルタミン酸塩緩衝液はすべて、光散乱の増加が最小限であり、セット内の好ましい製剤として特定された。Ｈｉｓ緩衝液およびＧｌｕ緩衝液のプロット（図１Ｂ）は、評価したものの中で、グルタミン酸塩が、最も低い光散乱シグナルを有することを示した。ヒスチジン製剤は、コハク酸塩製剤と同じ傾向を示し、低ｐＨ５．８の製剤の方が、高ｐＨ６．２溶液よりも優れた性能を示した。異なる緩衝剤で同様のｐＨ値が使用されたため、Ｔ_ａｇｇの差は、ｐＨのみの結果ではなく、緩衝液のｐＨと電荷特性との組み合わせによるものである可能性がある。これらの結果に部分的に基づいて、グルタミン酸塩は、その後の実験で主要な緩衝剤となった。

実施例３．低ｐＨ製剤に対するＮａＣｌの影響の評価
ＦＸＸ０１１０２二重特異性タンパク質を濃縮し、１００ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含む場合、および含まない場合において、１０ｍＭグルタミン酸塩、８％重量／体積スクロース、および０．０２％重量／体積ポリソルベート－８０の溶液にｐＨ４．５、最終タンパク質濃度８ｍｇ／ｍＬで交換した。タンパク質濃度０、２、４、６、および８ｍｇ／ｍＬで、一連の希釈を生成した。これらの溶液は、Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製の「Ｕｎｃｌｅ」装置で分析した。目標は、塩化ナトリウムを含めることで、グルタミン酸塩／スクロース／ポリソルベート－８０製剤の安定化特性が改善されるかを判断することであった。

これら２つの溶液についてＢ_２２を調べたところ、ＮａＣｌを製剤に添加することにより、傾きの大幅な減少が生じ、これは不安定化効果に相当し、凝集を引き起こし得るタンパク質間相互作用を促進することが明らかであった（図２）。したがって、塩化ナトリウムは、これらの試験ではさらに評価しなかった。

実施例４．ＦＸＸ０１１０２製剤のＢ２２値に対するアルギニン、メチオニン、ロイシン、およびグリシンの影響の評価
アミノ酸のメチオニン、アルギニン、およびグリシンも、それらがＦＸＸ０１１０２に及ぼし得る安定化特性について調査した。ＦＸＸ０１１０２の１０ｍｇ／ｍＬ溶液を、追加の賦形剤を含まず、１００ｍＭアルギニン、５０ｍＭメチオニンまたは５０ｍＭグリシンのいずれかを用いて、１０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ４．５で調製した。０、２、４、６、８、および１０ｍｇ／ｍＬの一連の希釈をＵｎｃｌｅで分析し、Ｂ_２２への影響を調べた。Ｂ_２２勾配の比較（図３）は、グリシンおよびメチオニンの両方が、アルギニンと比較してＢ_２２勾配値を増加させるようであり、追加のアミノ酸を添加しなかった製剤と比較して、勾配を減少させることを示す。これは、非荷電アミノ酸またはより疎水性の高いアミノ酸が、塩または他の荷電アミノ酸を添加する場合と比較して、ＦＸＸ０１１０２の安定性に対してより有益な効果を有し得ることを示唆した。

ＦＸＸ０１１０２の安定性に対する疎水性アミノ酸の影響をさらに調べるために、２５ｍＭロイシンを含むまたは含まない製剤のＢ_２２勾配を比較した。ロイシンを含む場合または含まない場合の、ｐＨ４．５の１０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース中のＦＸＸ０１１０２の一連の希釈を調べた。ロイシン含有製剤の傾きは、ロイシンを含まないタンパク質溶液の傾きよりわずかに高く、これは、ロイシンがタンパク質に安定化効果を発揮し、自己相互作用特性を低下させ得ることを示唆している（図４）。

実施例５．ＦＸＸ０１１０２製剤の凝集温度（Ｔ_ａｇｇ）に対する硫酸マグネシウム、リジン、およびロイシンの影響の評価
製剤のサブセットについて、温度に対応させた凝集の開始（Ｔ_ａｇｇ）を、Ｕｎｃｌｅ機器（Ｕｎｃｈａｉｎｅｄ Ｌａｂｓ）を使用して決定した。Ｔ_ａｇｇは、温度の上昇に対応させて、２６６ｎｍでの光散乱測定によって測定した。

２５ｍＭロイシン、ＭｇＳＯ_４およびリジンを含む、１０ｍＭグルタミン酸塩、４％ｗ／ｖスクロース、ｐＨ４．５中のＦＸＸ０１１０２。２６６ｎｍでの散乱対温度のプロットの比較により、ＭｇＳＯ_４およびリジンの両方が、追加の賦形剤を含まない製剤と比較して、はるかに低い温度で散乱の増加を引き起こすことが示された（図５）。ロイシンを含むサンプルは、評価された温度の全範囲にわたって散乱の増加をいずれも示さなかった。これは、ロイシンで得られたＢ_２２の改善（前の実施例で説明した）が、ＦＸＸ０１１０２を製剤化したときに、凝集に対する耐性の増加に変換された可能性を有することを示した。

実施例６．－２０℃でのＦＸＸ０１１０２製剤の安定性評価
－２０℃で保存した場合のＦＸＸ０１１０２の安定性を評価するために実験を行った。以下の表３に示すすべての製剤は、緩衝剤として１０ｍＭグルタミン酸塩および０．０２％ポリソルベートを含んでいた。さらに、すべての製剤には糖成分、３％ｗ／ｖまたは８％ｗ／ｖスクロース、３％トレハロース、または３％ソルビトールが含まれていた。以前のデータに基づいて、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＧｌｙアミノ酸の添加により、ＦＸＸ０１１０２の安定性を改善させるかを調査した。安定性が改善した製剤は、サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定したときに、凝集形成が少ないことを示すものとなる。

２つのクロマトグラフィーカラムを使用して、清澄バイオリアクター上清からＦＸＸ０１１０２を精製し、９５％を超える開始純度を達成した。この物質を、ＵＦ／ＤＦシステムおよび少なくとも１０倍量の緩衝液を使用して、グルタミン酸塩に緩衝液交換し、１０ｍｇ／ｍＬに濃縮した。様々な製剤を調製後、０．５ｍＬ Ｓａｒｓｔｅｄｔバイアルに２００μＬのアリコートを作製した。ｐＨは、試験の開始時に測定した。ほとんどのサンプルは、約４．６のｐＨを有する。ＳＥ－ＵＰＬＣを使用して、初期の高分子量含量％（％ＨＭＷ）を決定した。次に、バイアルを－２０℃に置き、（製剤のサブセットについて）保存後、３週間、６週間、３ヶ月、６ヶ月、および７ヶ月に測定した。適切な時間枠で、バイアルを冷凍庫から取り出し、分析した。より大きい３．７５ｍＬアリコートを調製し、３回の凍結／解凍（３ｘＦ／Ｔ）サイクルを行った。これは、様々な製剤を比較するための追加のストレステストとして用いた。このデータを以下の表３にまとめる。３ヶ月後のデータの評価後、目的の特定の製剤に焦点を当てるために、サンプルのサブセットのみを６ヶ月目および７ヶ月目に分析した。

ソルビトールおよびトレハロース含有製剤（ＩＤ＃５、６）をセット内の他の製剤と比較したときに、それらが凝集体形成に寄与していることが示された。これら２つの製剤は、３ｘＦ／Ｔサンプル、３ヶ月および６ヶ月の時点の％ＨＭＷに基づいて分析した、最も性能の低い条件であった。したがって、スクロースが、好ましい糖成分として特定された。３％および８％スクロース（それぞれ、ＩＤ＃２および＃３）の凝集データでは、高濃度のスクロースが、長期保存に顕著な利点を有しないことが示されたが、これらの製剤の３ヶ月および６ヶ月での％ＨＭＷは、かなり類似していた。しかし、スクロース濃度が高くなると、３ｘＦ／Ｔ後に存在する凝集体が少なくなることが観察された（６．３対８．８％）。

上記で実施したＢ_２２分析に基づいて、Ｍｅｔ、ＧｌｙおよびＬｅｕが、ＦＸＸ０１１０２の保存安定性にプラスの影響を有するであろうことが予測された。各アミノ酸の３つの濃度について、－２０℃の安定性に対する影響を分析した。それぞれについて、濃度が増加することにより、時間の経過とともに凝集体の形成が減少した。Ｍｅｔ（ＩＤ＃１０、１１、１２）、Ｇｌｙ（ＩＤ＃１３、１４、１５）、およびＬｅｕ（ＩＤ＃７、８、９）では、添加されたアミノ酸賦形剤の濃度と対応させて、時間の経過とともに％ＨＭＷが低下する明らかな傾向が見られた。ロイシンは、製剤ＩＤ＃９が、３ｘＦ／Ｔ分析において、かつ経時的に、凝集体形成が最も低かったため、最大の安定化影響を有すると考えられる。アミノ酸の組み合わせを含む製剤も調査され（ＩＤ＃１６、１７、１８）、このアプローチにはある程度の利点があることが示された。しかし、この組み合わせの％ＨＭＷを、同等の濃度のＬｅｕを含む製剤（すなわち、＃１６対＃８、または＃１８対＃８）と比較したところ、Ｌｅｕがこの効果の主な推進力であることが示唆された。ＩＤ＃７、８、および９のＴ_ｍ値およびＴ_ａｇｇ値は、ロイシン濃度を１０ｍＭから４０ｍＭに増加させることが、これら２つのパラメータのいずれかに大きな影響を有するか否かを確認するために決定した。差は比較的小さく、３つの緩衝液すべてのＴ_ｍは６１℃であり、２６６ｎｍで測定した光散乱には大きな変化はなかった。

実施例７－２０℃でのＦＸＸ０１１０２の追加グルタミン酸塩製剤の評価
－２０℃で保存した場合のＦＸＸ０１１０２の安定性を評価するために実験を行った。以下の表４に示すすべての製剤は、緩衝剤として５ｍＭグルタミン酸塩を含んでいた。さらに、すべての製剤には糖成分（０、２、３、または８％ｗ／ｖスクロースのいずれか）が含まれていた。以前のデータに基づいて、ＦＸＸ０１１０２の安定性に対するＬｅｕ濃度およびｐＨの変動をさらに調査した。実施例６に記載したものと同様の方法で実施した。安定性が改善した製剤は、サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定したときに、凝集形成が少ないことを示すものとなる。データは、最初と６週間の時点との間の％ＨＭＷの差、および３ｘＦ／Ｔストレス試験で分析した。データは、ｐＨ値が低く、ロイシン濃度が高い場合には、時間の経過とともに、複数の凍結融解サイクル中にも凝集体の形成が阻害されることを示した。製剤にスクロースを含めることにより、緩衝剤としての１０ｍＭグルタミン酸塩および０．０２％ポリソルベートによりプラスの効果を有した。さらに、すべての製剤には、糖成分、３％ｗ／ｖもしくは８％ｗ／ｖスクロース、３％トレハロース、または３％ソルビトールが含まれていた。以前のデータに基づいて、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、またはＧｌｙアミノ酸の添加も調べたが、スクロースが存在しない場合、他の製剤よりも高い％ＨＭＷが得られた（製剤＃６、表４）。前の実験と同様に、より高いレベルのスクロースは、６週間の保存安定性データに名目上の影響を有していたが、３ＸＦ／Ｔ中の凝集体形成の阻害に対して、より大きい影響を有していた。

本発明は、本明細書に記載される特定の態様によって範囲が限定されるものではない。実際に、記載されたものに加えて本発明の様々な修正が、前述の説明および添付の図面から当業者には明らかとなるであろう。このような修正は、添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されている。

本明細書で引用されるすべての参考文献（例えば、刊行物、特許、または特許出願）は、あたかも各々の個々の参考文献（例えば、刊行物、特許または特許出願）が、具体的かつ個別に、その全体があらゆる目的で参照により組み込まれるように示されているかのように、参照によりその全体が、あらゆる目的のために同じ範囲で本明細書に組み込まれる。

他の態様は、以下の特許請求の範囲内に含まれる。
配列
配列番号１
ＧＹＴＦＴＳＹＷ
配列番号２
ＩＹＰＧＳＳＴＴ
配列番号３
ＡＳＦＳＤＧＹＹＡＹＡＭＤＹ
配列番号４
ＱＤＩＳＮＹ
配列番号５
ＹＴＳ
配列番号６
ＱＱＧＹＴＬＰＹＴ
配列番号７
ＧＦＴＬＳＹＹＧ
配列番号８
ＩＳＨＤＧＳＤＫ
配列番号９
ＳＮＤＱＦＤＰ
配列番号１０
ＮＩＧＳＫＳ
配列番号１１
ＤＤＳ
配列番号１２
ＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶ
配列番号１３
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＳＧＧＳ ＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＦＳＤＧＹＹＡＹＡＭＤＹＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬ ＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＲＲＨＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＧＹＮ ＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＡＡＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶ ＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹ ＫＣＡＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥ ＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱ ＫＳＬＳＬＳＰＧＧＧＧＳＰＳＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶ ＶＹＤＤＳＧＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＴＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬ ＴＶＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳＹＹＧＭ
ＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＡＩＳＨＤＧＳＤＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＲＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴ ＡＶＹＹＣＳＮＤＱＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＲ
配列番号１４
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＳＧＧＳ ＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＦＳＤＧＹＹＡＹＡＭＤＹＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１５
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＲＲＨＴＧＩＰＡ ＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＧＹＮＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１６
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＮＩＹＰＳＧＧＳ ＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＶＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＳＦＳＤＧＹＹＡＹＡＭＤＹＷＧＱＧ ＴＬＶＴＶＳＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬ ＮＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＹＡＳＲＲＨＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＧＹＮ ＬＰＹＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１７
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳＹＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＡＩＳＨＤＧＳＤ ＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＲＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＮＤＱＦＤＰＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１８
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＧＲＰＳＧＩＰＥＲ ＦＳＧＳＴＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ
配列番号１９
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＲＩＴＣＧＧＮＮＩＧＳＫＳＶＮＷＦＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＶＹＤＤＳＧＲＰＳＧＩＰＥＲ ＦＳＧＳＴＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＱＶＷＤＳＳＳＤＨＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＬＳＹＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷ ＶＡＡＩＳＨＤＧＳＤＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＲＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＳＮＤＱＦＤＰＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳＲ
配列番号２０
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ
配列番号２１
ＧＧＧＧＳ

Claims (65)

1. （ａ）４－１ＢＢおよびＯＸ４０に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；
   （ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭの安定性促進緩衝液と；
   （ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭの安定化アミノ酸と；
   （ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖの糖と；
   （ｅ）約０．０１％～約０．０３％の界面活性剤と、を含む、医薬組成物。
2. 前記安定性促進緩衝液が、コハク酸塩、ヒスチジン、クエン酸塩、およびグルタミン酸塩からなる群から選択される、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記安定性促進緩衝液が、前記組成物中に、約５ｍＭ、約６ｍＭ、約７ｍＭ、約８ｍＭ、約９ｍＭ、約１０ｍＭ、約１１ｍＭ、約１２ｍＭ、約１３ｍＭ、約１４ｍＭ、または約１５ｍＭの濃度で存在する、請求項１または２に記載の医薬組成物。
4. 前記安定性促進緩衝液が、グルタミン酸塩である、請求項３に記載の医薬組成物。
5. 前記グルタミン酸塩が、前記組成物中に、約５ｍＭの濃度で存在する、請求項２～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
6. 前記安定化アミノ酸が、アルギニン、メチオニン、ロイシン、およびグリシンからなる群から選択される、請求項１～５のいずれかに記載の医薬組成物。
7. 前記安定化アミノ酸が、前記組成物中に、約２５ｍＭ、約２６ｍＭ、約２７ｍＭ、約２８ｍＭ、約２９ｍＭ、約３０ｍＭ、約３１ｍＭ、約３２ｍＭ、約３３ｍＭ、約３４ｍＭ、約３５ｍＭ、約３６ｍＭ、約３７ｍＭ、約３８ｍＭ、約３９ｍＭ、約４０ｍＭ、約４１ｍＭ、約４２ｍＭ、約４３ｍＭ、約４４ｍＭ、約４５ｍＭ、約４６ｍＭ、約４７ｍＭ、約４８ｍＭ、約４９ｍＭ、または約５０ｍＭの濃度で存在する、請求項６に記載の医薬組成物。
8. 前記安定化アミノ酸が、ロイシンである、請求項６または７に記載の医薬組成物。
9. 前記ロイシンが、前記組成物中に、約４０ｍＭの濃度で存在する、請求項６～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
10. 前記糖が、スクロース、トレハロース、およびソルビトールからなる群から選択される、請求項１～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
11. 前記糖が、前記組成物中に、約２％ｗ／ｖ～約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１０に記載の医薬組成物。
12. 前記糖が、前記組成物中に、約２％ｗ／ｖ、約３％ｗ／ｖ、約４％ｗ／ｖ、約５％ｗ／ｖ、約６％ｗ／ｖ、約７％ｗ／ｖ、または約８％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１０または１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
13. 前記糖が、スクロースである、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
14. 前記スクロースが、前記組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１１～１３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
15. 界面活性剤をさらに含む、請求項１～１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
16. 前記界面活性剤が、ポリソルベート－８０である、請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 前記ポリソルベート－８０が、前記組成物中に、約０．０１％ｗ／ｖ～約０．０３％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 前記ポリソルベート－８０が、前記組成物中に、約３％ｗ／ｖの濃度で存在する、請求項６または１７に記載の医薬組成物。
19. 前記組成物の前記ｐＨが、約４．３～約４．７の範囲にある、請求項１～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
20. 前記組成物の前記ｐＨが、約４．５である、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
21. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、前記組成物中に、約１０ｍｇ／ｍＬ～約５０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
22. 塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含まない、請求項１～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
23. 前記４つの二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、約９０％を超える純度を有する、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
24. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
    （ａ）約１０ｍｇ／ｍＬの濃度の４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；
    （ｂ）約１０ｍＭグルタミン酸塩と；
    （ｃ）約４０ｍＭロイシンと；
    （ｄ）約３％ｗ／ｖスクロースと；
    （ｅ）約０．０２％ポリソルベート－８０と、を含み、
    ここで、前記組成物の前記ｐＨが、約４．３～約４．７である、医薬組成物。
25. 請求項１～２４のいずれか一項に記載の医薬組成物であって、
    （ａ）１０ｍｇ／ｍＬの濃度の前記４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；
    （ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩と；
    （ｃ）４０ｍＭロイシンと；
    （ｄ）３％ｗ／ｖスクロースと；
    （ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０と、を含み、
    ここで、前記組成物の前記ｐＨが、４．５である、医薬組成物。
26. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を含む、請求項１～２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
27. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、またはｓｃＦｖ－Ｆｃを含む、請求項１～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
28. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、
    ここで、（ａ）前記４－１ＢＢ抗原結合ドメインが、（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含み；
    （ｂ）前記ＯＸ４０抗原結合ドメインが、（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；（ｉｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；（ｉｖ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；（ｖ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および（ｖｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む、請求項１～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
29. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、
    （ａ）前記４－１ＢＢ抗原結合ドメインが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み；
    （ｂ）前記ＯＸ４０抗原結合ドメインが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
30. 前記４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインおよびヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、
    （ａ）前記４－１ＢＢ抗原結合ドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含み；
    （ｂ）前記ＯＸ４０抗原結合ドメインが、配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む、請求項１～２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
31. 前記二重特異性抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１３のアミノ酸配列を含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
32. 以下を含む医薬組成物：
    （ａ）１０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって：
    （ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３：配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３；を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；
    （ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、ならびに配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；
    （ｉｉｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン、および配列番号１９のアミノ酸配列を含むｓｃＦｖを含むＯＸ４０抗原結合ドメイン；または
    （ｉｖ）配列番号１３のアミノ酸配列；を含む、４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；
    （ｂ）約５ｍＭ～約１５ｍＭグルタミン酸塩と；
    （ｃ）約２５ｍＭ～約５０ｍＭロイシンと；
    （ｄ）約２％～約８％ｗ／ｖスクロースと；
    （ｅ）約０．０１％～約０．０３％ポリソルベート－８０と；を含み、
    ここで、前記組成物の前記ｐＨが、約４．３～約４．７である、医薬組成物。
33. 以下を含む医薬組成物：
    （ａ）１０ｍｇ／ｍＬの４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片であって：
    （ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）－ＣＤＲ１；配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含む４－１ＢＢ抗原結合ドメイン；および
    （ｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ１；配列番号８のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ２；配列番号９のアミノ酸配列を含むＶＨ－ＣＤＲ３；配列番号１０のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ１；配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＶＬ－ＣＤＲ３を含むＯＸ４０抗原結合ドメインを含む４－１ＢＢｘＯＸ４０二重特異性抗体またはその抗原結合断片と；
    （ｂ）１０ｍＭグルタミン酸塩と；
    （ｃ）４０ｍＭロイシンと；
    （ｄ）３％ｗ／ｖスクロースと；
    （ｅ）０．０２％ポリソルベート－８０と、を含み、
    ここで、前記組成物の前記ｐＨが、４．５である、医薬組成物。
34. （ａ）前記４－１ＢＢ抗原結合ドメインが、配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含み；
    （ｂ）前記ＯＸ４０抗原結合ドメインが、配列番号１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域および配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３３に記載の医薬組成物。
35. 前記医薬製剤が、液体である、請求項１～３４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
36. 前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインおよび前記ヒトＯＸ４０結合ドメインが、同じポリペプチド上にある、請求項２８～３０および３２～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
37. 前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインが、前記ヒトＯＸ４０結合ドメインのＮ末端にある、請求項３６に記載の医薬組成物。
38. 前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインが、前記ヒトＯＸ４０結合ドメインのＣ末端にある、請求項３６に記載の医薬組成物。
39. 前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン定常領域を含む、請求項１～３０および３２～３８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
40. 前記免疫グロブリン定常領域が、ＩｇＧ１の免疫グロブリンＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む、請求項３９に記載の医薬組成物。
41. 前記抗体が、ＣＨ１ドメインを含まない、請求項１～４０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
42. 前記免疫グロブリン定常領域が、ＥＵナンバリングシステムに従って、置換Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＫ３２２Ａ、ならびにＧ２３６の欠失を含むヒトＩｇＧ１ ＣＨ２ドメインを含む、請求項３９～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
43. 前記抗体またはその抗原結合断片が、免疫グロブリン定常領域と前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間、および／または免疫グロブリン定常領域と前記ヒトＯＸ４０結合ドメインとの間にリンカーを含む、請求項２８～３０および３２～４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
44. 前記免疫グロブリン定常領域と前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間の前記リンカー、および／または前記免疫グロブリン定常領域と前記ヒトＯＸ４０結合ドメインとの間の前記リンカーが、１０～３０アミノ酸、１５～３０アミノ酸、または２０～３０アミノ酸を含む、請求項４３に記載の医薬組成物。
45. 前記免疫グロブリン定常領域と前記ヒト４－１ＢＢ結合ドメインとの間の前記リンカー、または前記免疫グロブリン定常領域と前記ヒトＯＸ４０結合ドメインとの間の前記リンカーが、アミノ酸配列（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）ｎを含み、式中、ｎ＝１～５（配列番号２１）、任意によりｎ＝１である、請求項４４に記載の医薬組成物。
46. 前記抗体が、２つのポリペプチドの二量体を含み、各ポリペプチドは、アミノ末端からカルボキシル末端への順で、第１のｓｃＦｖ、ヒンジ領域、免疫グロブリン定常領域、および第２のｓｃＦｖを含み、ここで、（ａ）前記第１のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含み、前記第２のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含むか、または（ｂ）前記第１のｓｃＦｖは、ヒトＯＸ４０抗原結合ドメインを含み、前記第２のｓｃＦｖは、ヒト４－１ＢＢ抗原結合ドメインを含む、請求項２８～４５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
47. 前記二量体が、ホモ二量体である、請求項４６に記載の医薬組成物。
48. 前記医薬製剤が－２０℃で保存できる、請求項１～４７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
49. －２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、および約７ヶ月後にｐＨに有意な変化を有しない、請求項１～４８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
50. －２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後に高分子量含有率（％ＨＭＷ）に有意な変化を有しない、請求項１～４９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
51. －２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後の前記％ＨＭＷの前記変化が、５％未満である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
52. １、２、または３回の凍結／解凍サイクル後に前記％ＨＭＷの有意な変化を有しない、請求項１～５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
53. １、２、または３回の凍結／解凍サイクル後の前記％ＨＭＷの前記変化が、５％未満である、請求項１～５２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
54. 前記％ＨＭＷが、サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定される、請求項５０～５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
55. サイズ排除超圧液体クロマトグラフィー（ＳＥ－ＵＰＬＣ）によって測定した場合、－２０℃での保存後、約３週間後、約６週間後、約３ヶ月後、約６ヶ月後、または約７ヶ月後、凝集体形成に有意な変化を有しない、請求項１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
56. 対象におけるがんを治療する方法であって、有効量の請求項１～５５のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
57. 前記がんが、固形腫瘍がんである、請求項５６に記載の方法。
58. 前記がんが、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である、請求項５６または５７に記載の方法。
59. 前記がんが、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、胃癌、大腸／腸癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肝癌、脳癌、または血液癌からなる群から選択される、請求項５６～５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 前記対象が、ヒトである、請求項５６～５９のいずれか一項に記載の方法。
61. 前記対象が、腫瘍浸潤リンパ球上で４－１ＢＢおよびＯＸ４０を発現する、請求項５６～６０のいずれか一項に記載の方法。
62. がんの治療に使用するための、請求項１～６１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
63. 固形腫瘍がんの治療に使用するための、請求項１～６２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
64. 前記固形腫瘍がんが、肉腫、癌腫、またはリンパ腫である、請求項６３に記載の使用のための抗体医薬組成物。
65. 前記がんが、黒色腫、腎癌、膵癌、肺癌、大腸／腸癌、胃癌、前立腺癌、卵巣癌、乳癌、肝癌、脳癌、または血液癌からなる群から選択される、請求項６４に記載の使用のための医薬組成物。