JP2023535409A - Ｂｒｍ分解の抗体コンジュゲート化化学的誘導物質及びｂｒｍ分解の方法 - Google Patents

Ｂｒｍ分解の抗体コンジュゲート化化学的誘導物質及びｂｒｍ分解の方法 Download PDF

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    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Abstract

ここに記載の主題は、分解のためにＢＲＭを標的化する抗体－ＣＩＤＥコンジュゲート（Ａｂ－ＣＩＤＥ）、それらを含有する医薬組成物、並びにＢＲＭ分解が有益である疾患及び状態の治療におけるそれらの使用、に関する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年７月２１日に出願された米国特許出願第６３／０５４，７５７号の優先権及び利益を主張し、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
配列表の公式コピーは、２０２１年７月２０日に作成された４４，９３６バイトのサイズを有するＰ３６０１０－ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔというファイルを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出され、明細書と同時に提出される。このＡＳＣＩＩ形式の文書に含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
分野
本明細書に記載の主題は、一般に、標的ＢＲＭタンパク質の細胞内分解を促進するのに有用な抗体－タンパク質分解標的化キメラ分子を含むデグレーダーコンジュゲートに関する。
背景
細胞維持及び正常な機能は、細胞タンパク質の制御された分解を必要とする。例えば、調節タンパク質の分解は、ＤＮＡ複製、染色体分離などの細胞周期における事象を引き起こす。したがって、そのようなタンパク質の分解は、細胞の増殖、分化、及び死に影響を及ぼす。
タンパク質の阻害剤は、細胞内のタンパク質活性を遮断又は低下させることができるが、細胞内のタンパク質分解はまた、活性を低下させるか又は標的タンパク質を完全に除去することができる。したがって、細胞のタンパク質分解経路を利用することは、タンパク質活性を低下させる又は除去するための手段を提供することができる。細胞の主要な分解経路の１つは、ユビキチン－プロテアソーム系として知られている。この系では、タンパク質は、タンパク質をユビキチン化することによってプロテアソームによる分解のためにマークされる。タンパク質のユビキチン化は、タンパク質に結合し、ユビキチン分子をタンパク質に付加するＥ３ユビキチンリガーゼによって達成される。Ｅ３ユビキチンリガーゼは、Ｅ１及びＥ２ユビキチンリガーゼを含む経路の一部であり、これらは、ユビキチンをＥ３ユビキチンリガーゼに利用可能にしてタンパク質に付加する。
この分解経路を利用するために、化学的分解誘導物質（ＣＩＤＥ）として知られている分子構築物は、Ｅ３ユビキチンリガーゼを分解の標的となるタンパク質と一緒にさせる。プロテアソームによる分解のためのタンパク質を促進するために、ＣＩＤＥは、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する基及び分解のためのタンパク質標的に結合する基から構成される。これらの基は、典型的には、リンカーで連結されている。このＣＩＤＥは、Ｅ３ユビキチンリガーゼをタンパク質に近接させることができ、その結果、Ｅ３ユビキチンリガーゼはユビキチン化され、分解のために標識される。しかし、比較的大きなサイズのＣＩＤＥは、標的化送達に問題があるだけでなく、迅速な代謝／クリアランス、短い半減期、及び低いバイオアベイラビリティなどの望ましくない特性に寄与する可能性がある。
タンパク質標的を含有する細胞へのＣＩＤＥの標的化送達の増強を含む、ＣＩＤＥを改善するための継続的な必要性が当技術分野において存在する。本明細書に記載の主題は、当技術分野におけるこの欠点及びその他の欠点に対処する。
簡単な概要
一態様において、本明細書中に記載される主題は、コンジュゲートされた、又は共有結合的に連結されたＡｂ－ＣＩＤＥであって、Ａｂ－ＣＩＤＥの構成要素を連結する共有結合の位置：抗体（Ａｂ）、リンカー１（Ｌ１）、リンカー２（Ｌ２）、タンパク質結合基（ＰＢ）及びＥ３リガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）は、効能、インビボ薬物動態、安定性及び溶解性などの望ましい特性を有するＡｂ－ＣＩＤＥを調製するために所望に応じて調整することができる。
一態様では、本明細書に記載される主題は化学構造：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
［式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｄは、構造：
（式中、
ＢＲＭは、ＢＲＭ結合化合物の残基であり、
Ｅ３ＬＢは、Ｅ３リガーゼ結合化合物の残基であり、
Ｌ２は、ＢＲＭをＥ３ＬＢと共有結合させる部分である）
を有するＣＩＤＥ、又はそのプロドラッグであり、
Ｌ１は、ＡｂをＢＲＭ、Ｅ３ＬＢ又はＬ２の１つに共有結合させるリンカー－１であり、並びに
ｐは、１～１６である］
を有するＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
別の態様では、本明細書に記載される主題は化学構造：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
［式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｄは、構造：
（式中、Ｌ１は、Ｌ１－Ｑ、Ｌ１－Ｑ’、Ｌ１－Ｓ、Ｌ１－Ｔ、並びに存在する場合には任意に、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙから選択される１つの結合点に結合しており、
Ｌ１Ｑは、ＢＲＭ上の
にあり、ここでＭはＯであり、
Ｌ１－Ｑ’は、ＢＲＭ上の
にあり、ここでＭ’は－ＮＨであり、
Ｌ１－Ｓは、Ｌ２上の
にあり、
Ｌ１－Ｔは、Ｅ３ＬＢ上の
にあり、ここでＡはＬ２に共有結合した基であり、
Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｖは、Ｅ３ＬＢ上の
にあり、並びに
Ｌ１－Ｙは、Ｅ３ＬＢ上の
にあり、ここで－－－－は、単結合又は二重結合である）
を有するＣＩＤＥ、又はそのプロドラッグである］
を有するＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
別の態様では、本明細書に記載される主題は化学構造：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ、
［式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｄは、構造：
（式中、
Ｒ３は、シアノ、
であり、
ここで－－－－は、単結合又は二重結合である）
を有するＣＩＤＥ、又はそのプロドラッグである］
を有するＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
別の態様では、本明細書に記載される主題は化学構造：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ、
［式中、
Ａｂは、抗体であり、
Ｄは、構造：
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃは、それぞれ独立して、水素若しくはＣ１－５アルキルであるか；又は、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃのうちの２つは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ１－５シクロアルキルを形成する）
を有するＣＩＤＥ、又はそのプロドラッグである］
を有するＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
別の態様では、本明細書に記載される主題は化学構造：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
［式中、
Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ－Ｌ２－ＰＢを有するＣＩＤＥであり、
Ｅ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合しており、該Ｅ３ＬＢは、以下の式：
（式中、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃは、それぞれ独立して、水素若しくはＣ１－５アルキルであるか；又は、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃのうちの２つは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ１－５シクロアルキルを形成し、
Ｒ２は、Ｃ１－５アルキルであり、
Ｒ３は、シアノ、
からなる群から選択され、ここで－－－－は、単結合又は二重結合であり、
Ｙ１及びＹ２の一方は－ＣＨであり、Ｙ１及びＹ２の他方は－ＣＨ又はＮである）
を有し、
Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、該Ｌ２は、以下の式：
（式中、Ｒ４は、水素又はメチルである）
（式中、ｚは、１又は０であり、
Ｇは、
又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、並びに
は、ＰＢへの結合点である）
を有し、
ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、以下の構造：
を有し；
Ａｂは、リンカーである少なくとも１つのＬ１に共有結合した抗体であり、
Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｖは、それぞれ独立して、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、
Ｌ１－Ｙは、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、
ｑは、１又は０であり、
及び、
ｐは、約１～約８の値を有する］
を有するＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
本明細書中に記載される主題の別の態様は、Ａｂ－ＣＩＤＥと、１つ又は複数の薬学的に許容され得る賦形剤とを含む医薬組成物である。
本明細書中に記載される主題の別の態様は、Ａｂ－ＣＩＤＥを含む医薬組成物を対象に投与することによって状態及び疾患を治療する方法におけるＡｂ－ＣＩＤＥの使用である。
本明細書に記載の主題の別の態様は、Ａｂ－ＣＩＤＥを作製する方法である。
本明細書に記載の主題の別の態様は、Ａｂ－ＣＩＤＥ、容器、及び医薬組成物が疾患又は状態を治療するために使用され得ることを示す添付文書又はラベルを含む医薬組成物を含む製造品である。
さらに他の実施形態も本明細書で完全に説明される。
図１Ａ及び図１Ｂは、細胞に基づくアッセイにおいて活性である例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１を示す。 図２Ａ及び図２Ｂは、細胞に基づくアッセイにおいて活性である例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３を示す。 例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１の用量及び抗原依存性抗腫瘍活性を示す。 例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３の用量及び抗原依存性抗腫瘍活性を示す。データは、Ａｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１Ａｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１のデータとは対照的である。 ＢＲＭ及びＢＲＧ１分解が、例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１の抗腫瘍活性と相関することを示す。 例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３の抗腫瘍活性とＢＲＭ及びＢＲＧ１分解があまり相関しないことを示す。＊＊がＡｂ－ＣＩＤＥ－Ｌ１ａ－ＢＲＭ１－１のレーンを示すことを除いて、全てのレーンＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３のレーンである。 抗体連結戦略がＣＩＤＥの活性を調節し得ることを示す。データは、例示的なＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１が非コンジュゲートＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３よりも強いＢＲＭ分解を提供するが、ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３は一般にＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１よりも強力であることを示す。＊＊がＡｂ－ＣＩＤＥ－Ｌ１ａ－ＢＲＭ１－３のレーンを示すことを除いて、全てのレーンＡｂ－ＣＩＤＥ Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１のレーンである。 本明細書中に記載される抗体連結戦略のいくつかを示す。
詳細な説明
ＳＭＡＲＣＡ２としても知られるＢＲＭの標的化タンパク質分解、並びに関連する疾患及び障害の治療に有用な抗体－化学的分解誘導物質（「ＣＩＤＥ」）コンジュゲート（本明細書では「Ａｂ－ＣＩＤＥ」と呼ばれる）が本明細書に開示される。特に、本開示は、標的タンパク質がユビキチンリガーゼに近接して配置されて分解をもたらし、したがってＢＲＭを調節するように、一端にＶｏｎ Ｈｉｐｐｅｌ－Ｌｉｎｄａｕ Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合するリガンドを含み、他端にＢＲＭ（標的タンパク質）に結合する部分を含む抗体コンジュゲート化ＣＩＤＥＳに関する。本明細書に記載されるように、連結戦略及びリンカーの種類を調節し、調節がＢＲＭに対するＣＩＤＥの活性に有利な効果を有し得ることを示すデータを報告する。
本明細書に記載の主題は、抗体標的化を利用して、ＣＩＤＥを標的細胞又は組織に誘導する。本明細書中に記載されるように、抗体をＣＩＤＥに連結してＡｂ－ＣＩＤＥを形成することにより、ＣＩＤＥが標的細胞又は標的組織に送達されることが示されている。本明細書において、例えば実施例において示されるように、抗原を発現する細胞は、抗原特異的Ａｂ－ＣＩＤＥによって標的化され得て、それにより、Ａｂ－ＣＩＤＥのＣＩＤＥ部分が標的細胞内に送達される。細胞上に見られない抗原に対する抗体を含むＣＩＤＥは、細胞へのＣＩＤＥの有意な細胞内送達をもたらさない。
したがって、本明細書中に記載される主題は、標的タンパク質のユビキチン化及びその後のタンパク質の分解をもたらすＡｂ－ＣＩＤＥ組成物に関する。組成物は、リンカー１（Ｌ１）に共有結合した抗体を含み、これは、ＣＩＤＥへの任意の利用可能な結合点で共有結合しており、ＣＩＤＥは、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合（Ｅ３ＬＢ）部分を含み、Ｅ３ＬＢ部分は、ＶＨＬであるＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質を認識し、リンカー２（Ｌ２）は、Ｅ３ＬＢ部分をタンパク質結合部分（ＰＢ）に共有結合し、これは、ＢＲＭ又はＳＭＡＲＣＡ２である標的タンパク質を認識する部分である。本明細書に記載の主題は、タンパク質活性を分解し、したがって調節し、タンパク質活性に関連する疾患及び状態を治療するために有用である。
ここで、本明細書に開示されている主題を以下により完全に記載する。しかし、本明細書で説明する、本明細書にて開示する主題の多くの修正及び他の実施形態が、前述の記載にて提示される教示の利益を有する、本明細書にて開示する主題が関係する当業者に想到されるであろう。したがって、本明細書にて開示する主題は、開示した特定の実施形態に限定されるべきではなく、修正及び他の実施形態が、添付の特許請求の範囲の範囲内に含まれると意図されるものと考えられるべきである。換言すれば、本明細書に記載されている主題は、全ての代替物、変更及び均等物を包含する。組み込まれる文献、特許、及び同様の資料のうちの１つ以上が、定義される用語、用語の用法、記載される技術等を非限定的に含む、本出願と異なるか、又は矛盾する場合は、本出願が優先される。別途定義されない限り、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、当業者により一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照によりその全体が援用される。
Ｉ．定義
「ＣＩＤＥ」という用語は、一般に３つの成分、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）、リンカーＬ２、及びタンパク質結合基（ＰＢ）を有するタンパク質分解標的化キメラ分子である、化学的分解誘導物質（Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｃｅｒｓ ｏｆ ＤＥｇｒａｄａｔｉｏｎ）を指す。
「残基」、「部分」、「一部」、又は「基」という用語は、別の成分に共有結合又は連結された成分を指す。「成分」という用語はまた、本明細書では、そのような残基、部分、一部又は基を記載するために使用される。例として、化合物の残基は、共有結合で置き換えられた水素又はヒドロキシなどの化合物の原子（複数の場合がある）を有し、それによって残基をＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ又はＡｂ－ＣＩＤＥの別の成分に結合する。例えば、「ＣＩＤＥの残基」とは、リンカーＬ２などの１つ以上の基に共有結合しているＣＩＤＥを指し、それ自体は任意に抗体にさらに連結され得る。
「共有結合した（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｂｏｕｎｄ）」又は「共有結合した（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）」という用語は、１つ又は複数の電子対の共有によって形成される化学結合を指す。
本明細書で使用される「ペプチド模倣」又はＰＭという用語は、非ペプチド化学部分を意味する。ペプチドは、あるアミノ酸のカルボキシル基が別のアミノ酸のアミノ基と反応するときに形成される共有化学結合であるペプチド（アミド）結合によって連結されたアミノ酸モノマーの短鎖である。最短のペプチドは、単一のペプチド結合によって結合された２アミノ酸からなるジペプチド、続いてトリペプチド、テトラペプチドなどである。ペプチド模倣化学部分には、非アミノ酸化学部分が含まれる。ペプチド模倣化学部分はまた、１つ又は複数の非アミノ酸化学単位によって分離された１つ又は複数のアミノ酸を含み得る。ペプチド模倣化学部分は、その化学構造のいずれの部分にも、ペプチド結合によって連結された２個以上の隣接アミノ酸を含有しない。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、それらが所望される生物活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、二量体、多量体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体断片を具体的に網羅する（Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｊｏｕｒ．ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７０：４８５４－４８６１）。抗体は、マウス、ヒト、ヒト化、キメラであってもよいか、又は他の種に由来するものであってもよい。抗体は、特定の抗原を認識し、それに結合することができる、免疫系によって生成されるタンパク質である（Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）．標的抗原は、一般に、複数の抗体のＣＤＲ（相補性決定領域）によって認識されるエピトープとも呼ばれる多数の結合部位を有する。異なるエピトープに特異的に結合するそれぞれの抗体は、異なる構造を有する。したがって、１つの抗原は、１を超える対応する抗体を有し得る。抗体は、完全長免疫グロブリン分子又は完全長免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、目的の標的又はその一部の抗原を免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を含み、そのような標的としては、がん細胞又は自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に開示される免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスのものであり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。しかしながら、一態様において、免疫グロブリンは、ヒト、マウス、又はウサギ起源のものである。
本明細書で使用される「抗体断片（複数の場合がある）」という用語は、完全長抗体の一部分、一般にはその抗原結合領域又は可変領域を含む。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖抗体；ミニボディ（Ｏｌａｆｓｅｎ ｅｔ ａｌ（２００４）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌ．１７（４）：３１５－３２３）、Ｆａｂ発現ライブラリによって産生される断片、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、ＣＤＲ（相補性決定領域）、及びがん細胞抗原、ウイルス抗原、又は微生物抗原に免疫特異的に結合する上記のいずれかのエピトープ結合断片、一本鎖抗体分子、並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する突然変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して指向されている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。それらの特異性に加えて、モノクローナル抗体は、他の抗体が混入することなく合成することができるという点で、有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本明細書中に記載される主題に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、又は組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４８１６５６７号；米国特許第５８０７７１５号を参照）によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１－５９７に記載される技術を用いてファージ抗体ライブラリから単離され得る。
本明細書におけるモノクローナル抗体には、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一又は相同である一方で、鎖（複数の場合がある）の残りが、別の種に由来するか、又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体、並びにそのような抗体の断片を具体的に含み、これは、それらが所望される生物活性を呈する限りにおいてである（米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら（１９８４年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１～６８５５頁）。本明細書において対象となるキメラ抗体としては、非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など）に由来する可変ドメイン抗原結合配列と、ヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が挙げられる。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定の供給源又は種に由来し、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、下位クラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
本明細書で使用される「インタクト抗体」という用語は、ＶＬ及びＶＨドメイン、並びに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒトの天然配列の定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列バリアントであり得る。インタクト抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得、この機能は、抗体のＦｃ定常領域（天然配列のＦｃ領域又はアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に起因し得る生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、食作用、並びにＢ細胞受容体及びＢＣＲなどの細胞表面受容体の下方制御が挙げられる。
本明細書で使用される「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在していてもよく、又は存在していなくてもよい。本明細書で特に指示がない限り、Ｆｃ領域又は定常領域のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されている、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。
本明細書で使用される「フレームワーク」又は「ＦＲ」という用語は、超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ：ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（又はＶＬ）中において以下の配列で現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒト化」抗体とは、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基、及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。
「単離された抗体」とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフ（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって決定される、９５％超又は９９％超の純度まで精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、「Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ」、第８４８巻７９～８７頁（２００７年）を参照されたい。
「単離された核酸」とは、自然環境の構成要素から切り離されている核酸分子のことである。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外、又は天然の染色***置とは異なる染色***置に存在する。
「抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（又はその断片）をコードする１つ又は複数の核酸分子を指し、単一のベクター又は別個のベクター内の核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つ又は複数の場所に存在する。
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射性標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、薬学的製剤中に存在してもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端までの各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、これに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、これに定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられ得る。
基準となるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列同一性最大パーセントが得られるように、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、基準となるポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のための整列は、当技術分野における技術の範囲内にある種々の方法において、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを用いて達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成している。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が作成したものであり、ソースコードは、使用者用書類と共に、米国著作権局、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、又はそのソースコードからコンパイルし得る。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、変わらない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、アミノ酸配列Ｂとの、又はアミノ酸配列Ｂに対する、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有する又は含む、所与のアミノ酸配列Ａとして記述され得る）は、以下のように計算される：
１００ × 分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって、そのプログラムのＡとＢのアラインメントにおいて同一のマッチとしてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂ中のアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、Ａ対Ｂの％アミノ酸配列同一性は、Ｂ対Ａの％アミノ酸配列同一性に等しくないことが理解されよう。特に明記しない限り、本明細書で使用される全ての％アミノ酸配列同一性の値は、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して直前の段落に記載されているように得られる。
重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、無傷抗体には、異なる「クラス」が割り当てられ得る。インタクトな免疫グロブリン抗体には５つの主要なクラス、すなわち、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元配置は周知である。Ｉｇ形態には、ヒンジ修飾又はヒンジなしの形態（Ｒｏｕｘら（１９９８年）、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」１６１：４０８３～４０９０頁；Ｌｕｎｄら（２０００年）、「Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」２６７：７２４６～７２５６頁；米国特許出願公開第２００５／００４８５７２号；米国特許出願公開第２００４／０２２９３１０号明細書）が含まれる。
本明細書で使用される「ヒトコンセンサスフレームワーク」という用語は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークを指す。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１～３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、第１～３巻におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨに関して、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるようなサブグループＩＩＩである。
本明細書の目的において「受容体ヒトフレームワーク」とは、以下に定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して、配列が同一である。
本明細書で使用される「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に抗体重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然の抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、概して、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）と、を含む。例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照のこと。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するために充分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨ又はＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照のこと。
「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変性であり、及び／又は構造上規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般的に、天然４鎖抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、及びＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）、計６つのＨＶＲを含む。ＨＶＲは、一般的に、超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、最も高い配列可変性を有し、及び／又は抗原認識に関与している。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６－３２（Ｌ１）、５０－５２（Ｌ２）、９１－９６（Ｌ３）、２６－３２（Ｈ１）、５３－５５（Ｈ２）及び９６－１０１（Ｈ３）で生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）。）例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３、ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２及びＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１のアミノ酸残基２４－３４、Ｌ２の５０－５６、Ｌ３の８９－９７、Ｈ１の３１－３５Ｂ、Ｈ２の５０－６５及びＨ３の９５－１０２に存在する。（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）。）ＶＨにおけるＣＤＲ１を除き、ＣＤＲは、概して、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、「特異性決定領域」、すなわち「ＳＤＲ」も含み、それは、抗原と接触する残基である。ＳＤＲは、省略－ＣＤＲ、すなわちａ－ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含まれる。例示的なａ－ＣＤＲ（ａ－ＣＤＲ－Ｌ１、ａ－ＣＤＲ－Ｌ２、ａ－ＣＤＲ－Ｌ３、ａ－ＣＤＲ－Ｈ１、ａ－ＣＤＲ－Ｈ２及びａ－ＣＤＲ－Ｈ３）は、Ｌ１の３１－３４、Ｌ２の５０－５５、Ｌ３の８９－９６、Ｈ１の３１－３５Ｂ、Ｈ２の５０－５８及びＨ３の９５－１０２のアミノ酸残基に存在する。（Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照。）別途指定されない限り、ＨＶＲ残基、及び可変ドメイン中の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔら（前出）に従って本明細書では番号付けされる。
「エフェクター機能」は、抗体のアイソタイプにより異なる抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、以下のものが挙げられる：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；並びにＢ細胞活性化。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する抗原分子上の特定の部位を指す。
「親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、合計の非共有性相互作用の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原）のメンバー間の１：１相互作用を反映する特異的結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な説明的かつ例示的な実施形態が以下に記載される。特定の実施形態において、本明細書に記載される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎｍ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。
「親和性成熟」抗体とは、改変などを有しない親抗体と比較して、１つ以上の超可変領域（ＨＶＲ）に１つ以上の改変を有し、そのような改変により抗体の抗原に対する親和性が改善される抗体を指す。
「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、連結している別の核酸を増殖することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造としてのベクターだけでなく、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。ある種のベクターは、それらが作動的に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。
本明細書で使用される「遊離システインアミノ酸」という用語は、親抗体へと操作され、チオール官能基（－ＳＨ）を有し、分子内又は分子間ジスルフィド架橋として対になっていないシステインアミノ酸残基を指す。本明細書で使用される「アミノ酸」という用語は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、メチオニン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、トリプトファン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン又はシトルリンを意味する。
本明細書で使用される「リンカー」、「リンカー単位」又は「連結」という用語は、ＣＩＤＥ部分を抗体に共有結合させる原子の鎖を含む化学部分、又はＣＩＤＥの残基、部分、一部、基若しくは成分をＣＩＤＥの別の残基、部分、一部、基若しくは成分に共有結合させる原子の鎖を含む化学部分を意味する。様々な実施形態において、リンカーは、リンカー１、リンカー２、Ｌ１又はＬ２として特定される二価の基である。
「患者」又は「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、並びに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、患者、個体、又は対象は、ヒトである。いくつかの実施形態において、患者は「がん患者」、すなわち、がんの１つ以上の症候を罹患しているか、又は罹患するリスクがある者であり得る。
「患者母集団」は、がん患者の群を指す。これらのような母集団を使用して、薬物の統計的に有意な有効性及び／又は安全性を実証することができる。
用語「がん」及び「がん性」は、制御されない細胞成長／増殖を典型的な特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指す又は説明する。「腫瘍」は、１つ以上のがん性細胞を含む。がんの例は、本明細書の他の箇所に提供される。
本明細書で使用される場合、「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及びその文法的な変形語、例えば、「治療する（ｔｒｅａｔ）」又は「治療すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、治療される個体の本来の経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。治療の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症候の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される主題の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
１つ以上の他の薬物と「同時に」投与される薬物は、同一治療サイクル中、１つ以上の他の薬物と同じ治療日に、及び任意に、１つ以上の他の薬物と同じ時間に投与される。例えば、３週間毎に付与されるがん療法の場合、同時に投与される薬物はそれぞれ、３週間のサイクルの１日目に投与される。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な薬用量及び所要期間で有効な量を指す。例えば、がんを治療するための有効量の薬物によって、がん細胞の数が低減し、腫瘍サイズが縮小し、抹消臓器へのがん細胞浸潤が阻害され（すなわち、ある程度遅れる、好ましくは止まる）、腫瘍転移が阻害され（すなわち、ある程度遅れる、好ましくは止まる）、腫瘍成長がある程度阻害され、かつ／又はがんと関連付けられる症候のうちの１つ以上がある程度緩和され得る。薬物が既存のがん細胞の成長を予防し、及び／又はそれらを死滅させることができる程度まで、この薬物は、細胞増殖抑制性及び／又は細胞傷害性であり得る。有効量によって、無進行生存率が上昇し（例えば、固体腫瘍の奏効評価基準（ＲＥＣＩＳＴ）若しくはＣＡ－１２５変化によって測定される）、客観的奏効がもたらされ（部分奏効（ＰＲ）若しくは完全奏効（ＣＲ））がもたらされ、全生存期間が延長し、及び／又はがんの１つ以上の症候が改善される（例えば、ＦＯＳＩによって評価される）。
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、そのような量を受けていない対応する対象と比較して、疾患、障害、若しくは副作用の治療、又は疾患若しくは障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増強するのに有効な量を含む。治療に使用するために、治療有効量のＡｂ－ＣＩＤＥ及びその塩を生の化学物質として投与することができる。加えて、有効成分は医薬組成物として提供され得る。
「薬学的製剤」という用語は、調製物中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつ製剤を投与する対象にとって許容できないほど有毒である更なる構成成分を含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容され得る賦形剤」とは、対象にとって無毒である活性成分以外の薬学的製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る賦形剤としては、緩衝液、担体、安定剤、又は防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する場合、語句「薬学的に許容され得る塩」とは、分子の薬学的に許容され得る有機又は無機塩を意味する。代表的な塩としては、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸性リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチジン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’－メチレン－ビス－（２－ヒドロキシ－３－ナフトエート））が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容され得る塩には、酢酸イオン、コハク酸イオン又は他の対イオン等の、別の分子が含まれてもよい。対イオンは、親化合物の電荷を安定させる任意の有機又は無機部位であってよい。さらに、薬学的に許容され得る塩は、その構造内に複数の荷電原子を有することができる。複数の荷電原子が薬学的に許容され得る塩の一部である場合、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に許容され得る塩は、１つ又は複数の荷電原子及び／又は１つ又は複数の対イオンを有することができる。
薬学的に許容され得ない他の塩は、本明細書に記載の化合物の調製に有用であり得て、これらは主題のさらなる態様を形成すると見なされるべきである。シュウ酸塩又はトリフルオロ酢酸塩などのこれらの塩は、それ自体は薬学的に許容され得ないが、本明細書に記載の化合物及びそれらの薬学的に許容され得る塩を得る際の中間体として有用な塩の調製に有用であり得る。
本明細書で使用される「アルキル」という用語は、１～５個のいずれかの長さの炭素原子（Ｃ１－Ｃ５）の飽和した直鎖又は分岐鎖の一価の炭化水素ラジカルを指し、アルキルラジカルは、以下に記載する１つ以上の置換基で、独立して置換されていてもよい。別の実施形態では、アルキルラジカルは、１、２、３、４又は５個の炭素原子である。アルキル基の例としては、メチル（Ｍｅ、－ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、－ＣＨ２ＣＨ３）、１－プロピル（ｎ－Ｐｒ、ｎ－プロピル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－プロピル（ｉ－Ｐｒ、ｉ－プロピル、－ＣＨ（ＣＨ３）２）、１－ブチル（ｎ－Ｂｕ、ｎ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－１－プロピル（ｉ－Ｂｕ、ｉ－ブチル、－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－ブチル（ｓ－Ｂｕ、ｓ－ブチル、－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２－メチル－２－プロピル（ｔ－Ｂｕ、ｔ－ブチル、－Ｃ（ＣＨ３）３）、１－ペンチル（ｎ－ペンチル、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３－ペンチル（－ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２－メチル－２－ブチル（－Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３－メチル－２－ブチル（－ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２－メチル－１－ブチル（－ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）などが挙げられるが、これらに限定されない。
用語「アルキレン」とは、本明細書で使用する場合、１～１２個の炭素原子（Ｃ１－Ｃ１２）の任意の長さを有する、飽和直鎖又は分枝鎖二価炭化水素ラジカルであって、アルキレンラジカルが独立して、以下に記載する１つ以上の置換基で置換されていてもよい、炭化水素ラジカルである。別の実施形態において、アルキレンラジカルは、１～８個の炭素原子（Ｃ１－Ｃ８）、又は１～６個の炭素原子（Ｃ１－Ｃ６）である。アルキレン基の例としては、メチレン（－ＣＨ２－、エチレン（－ＣＨ２ＣＨ２－）、プロピレン（－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－）などが挙げられるが、これらに限定されない。
「炭素環」、「カルボシクリル」、「炭素環」及び「シクロアルキル」という用語は、単環式環として３～５個の炭素原子（Ｃ３－Ｃ５）を有する一価の非芳香族の飽和又は部分不飽和環を指す。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１－シクロペンタ－１－エニル、１－シクロペンタ－２－エニル、１－シクロペンタ－３－エニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。カルボシクリル基は、１つ又は複数のアルキル基で独立して置換されていてもよい。
「複素環」、「複素環式」、「ヘテロシクロアルキル」又は「ヘテロシクリル」は、縮合、架橋又はスピロ環系を含む単環又は複数の縮合環を有し、１～１０個のヘテロ原子を含む３～２０個の環原子を有する飽和又は部分不飽和基を指す。これらの環原子は、炭素、窒素、硫黄、又は酸素からなる群から選択され、縮合環系では、結合点が非芳香族環を通ることを条件として、環の１つ又は複数はシクロアルキル、アリール、又はヘテロアリールであり得る。特定の実施形態では、複素環基の窒素原子及び／又は硫黄原子は、任意に酸化されて、Ｎ－オキシド、－Ｓ（Ｏ）－又は－ＳＯ２－部分を提供する。複素環の例としては、アゼチジン、ジヒドロインドール、インダゾール、キノリジン、イミダゾリジン、イミダゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドリン、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン、チアゾリジン、モルホリニル、チオモルホリニル（チアモルホリニルとも呼ばれる）、１，１－ジオキソチオモルホリニル、ピペリジニル、ピロリジン、テトラヒドロフラニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクリル基は、国際公開第２０１４／１００７６２号に記載されているように置換することができる。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合せできない特性を有する分子を指し、一方で「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合せできる分子を指す。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子又は基の配置に関して異なる、化合物を指す。
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像でない、立体異性体を指す。ジアステレオマーは、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性等の異なる物理特性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィーなどの高分解能分析手順の下で分離されてもよい。
「エナンチオマー」は、互いに重ね合せできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
本明細書で使用される立体化学的な定義及び慣例は、一般的にＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物が光学的に活性な形態で存在し、すなわち、それらは面偏光の面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ、又はＲ及びＳは、そのキラル中心を中心とした分子の絶対配置を表すために使用される。接頭語ｄとｌ又は（＋）と（－）は、化合物による平面偏光の回転の符号を表すために使用され、（－）又は１はその化合物が左旋性であることを意味する。接頭語（＋）又はｄを有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造において、これらの立体異性体は、互いの鏡像であることを除いて同一である。また、特定の立体異性体はエナンチオマーと呼ばれることもあり、そのような異性体の混合物をしばしばエナンチオマー混合物と呼ぶこともある。エナンチオマーの５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と称され、これは、化学反応又はプロセスにおいて立体選択又は立体特異性がなかった場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、２つのエナンチオマー種の等モル混合物を指し、光学活性がないものをいう。
本明細書における他の用語、定義及び略語には、以下が含まれる。野生型（「ＷＴ」）；システイン操作変形体抗体（「チオ」）；軽鎖（「ＬＣ」）；重鎖（「ＨＣ」）；６－マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）；マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）；バリン－シトルリン（「ｖａｌ－ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン－フェニルアラニン（「ａｌａ－ｐｈｅ」）、ｐ－アミノベンジル（「ＰＡＢ」）及びｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢＣ」）；Ａ１１８Ｃ（ＥＵナンバリング）＝Ａ１２１Ｃ（順次ナンバリング）＝軽鎖の重鎖Ｋ１４９Ｃ（Ｋａｂａｔナンバリング）のＡ１１４Ｃ（Ｋａｂａｔナンバリング）。本明細書では、さらに追加の定義及び略語が提供される。
ＩＩ．化学的分解誘導物質
化学的分解誘発物質（ＣＩＤＥ）分子を抗体とコンジュゲートさせて「Ａｂ－ＣＩＤＥ」コンジュゲートを形成することができる。抗体は、リンカー（Ｌ１）を介してＣＩＤＥ（「Ｄ」）にコンジュゲートされ、ＣＩＤＥは、ユビキチンＥ３リガーゼ結合基（「Ｅ３ＬＢ」）、リンカー（「Ｌ２」）及びタンパク質結合基（「ＰＢ」）を含む。Ａｂ－ＣＩＤＥ分子の一般式は以下のとおりである：
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
式中、Ｄは構造Ｅ３ＬＢ－Ｌ２－ＰＢを有するＣＩＤＥであり、Ｅ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、Ａｂは、Ｌ１に共有結合した抗体であり、Ｌ１は、Ａｂ及びＤに共有結合したリンカーであり、ｐは約１～約５０の値を有する。変数ｐは、抗体が１つ以上のＬ１－Ｄ基に連結され得ることを反映する。一実施形態において、ｐは、１～８である。別の実施形態において、ｐは、約２である。
以下のセクションでは、Ａｂ－ＣＩＤＥを構成する成分について説明する。強力な効力及び望ましい治療指数を有するａｂ－ＣＩＤＥを得るために、以下の成分を提供する。
１．抗体（Ａｂ）
本明細書に記載されるように、抗体、例えばモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を使用して、ＣＩＤＥを標的細胞、例えば抗体によって標的化される特異的タンパク質を発現する細胞に送達する。Ａｂ－ＣＩＤＥの抗体部分は、抗原を発現する細胞を標的とすることができ、それによって抗原特異的Ａｂ－ＣＩＤＥは、典型的にはエンドサイトーシスによって標的細胞に細胞内送達される。細胞表面上に見出されない抗原に対する抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥは、細胞内へのＣＩＤＥ部分のより特異性の低い細胞内送達をもたらし得るが、Ａｂ－ＣＩＤＥは依然として飲作用を受け得る。本明細書に記載されるＡｂ－ＣＩＤＥ及びそれらの使用方法は、細胞表面の抗体認識及び／又はＡｂ－ＣＩＤＥのエンドサイトーシスを有利に利用して、細胞内のＣＩＤＥ部分を送達する。
特定の実施形態では、抗体は、以下に完全に記載されるチオマブである。チオマブは、調節されたＦｃエフェクター、例えば、ＬＡＬＡＰＧ又はＮＧ２ＬＨ突然変異を有し得る。さらに、任意の抗体標的（ＣＤ７１、Ｔｒｏｐ２、ＭＳＬＮ、ＮａＰｉ２ｂ、Ｌｙ６Ｅ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ２２）を、ＬＡＬＡＰＧ又はＮＧ２ＬＨ突然変異を含む任意のＦｃエフェクター調節を伴うチオマブ突然変異の任意の適切な組み合わせと組み合わせることができるような組み合わせが企図される。
ａ．ヒト抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で公知の様々な技術を使用して作製され得る。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。このような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含むか、又は染色体外に存在するか、又は動物の染色体にランダムに統合されている。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号；及び、ＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組合せることによって更に改変され得る。
ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照。）ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）、及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載する）が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。
ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても作製され得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
ｂ．ライブラリ由来の抗体
Ａｂ－ＣＩＤＥで使用するための抗体は、コンビナトリアルライブラリを所望される活性（複数の場合がある）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリを産生し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。そのような方法については、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」第１７８巻１～３７頁（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、２００１年）で概説し、更に下に記載されている：例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、「Ｎａｔｕｒｅ」第３４８巻５５２～５５４頁；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、「Ｎａｔｕｒｅ」第３５２巻６２４～６２８頁（１９９１年）；Ｍａｒｋｓら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第２２２巻５８１～５９７頁（１９９２年）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」第２４８巻１６１～１７５頁（Ｌｏら、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ、２００３年）；Ｓｉｄｈｕら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第３３８巻２号第２９９～３１０頁（２００４年）；Ｌｅｅら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」第３４０巻５号１０７３～１０９３頁（２００４年）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」第１０１巻３４号第１２４６７～１２４７２頁（２００４年）；及びＬｅｅら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ」第２８４巻１～２号第１１９～１３２頁（２００４年）。
ある種のファージディスプレイ法では、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリはポリメラーゼ連鎖反応（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ：ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリ内で無作為に再結合され、次いでＷｉｎｔｅｒら、「Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、第１２巻：第４３３～４５５頁（１９９４年）に記載されているような、抗原結合ファージに対してスクリーニングすることが可能である。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、又はＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化源からのライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。あるいは、ナイーブレパートリーは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、「ＥＭＢＯ Ｊ」、第１２巻：第７２５～７３４頁（１９９３年）によって記載されるように、（例えば、ヒトから）クローニングされて、いかなる免疫化も伴うことなく、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する単一抗体源を提供することができる。最後に、天然ライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、第２２７巻第３８１～３８８頁（１９９２年）に記載されるように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を遂行することによって、合成的に作製し得る。ヒト抗体ファージライブラリについて記載する特許公報としては、例えば：米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片と見なされる。
ｃ．キメラ抗体及びヒト化抗体
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある種のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４））に記載されている。一つの例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）とヒト定常領域を含む。さらなる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のそれらから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体が、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化される。通常、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来する１つ以上の可変ドメインを含み、ＦＲ（又はその一部）はヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を復元又は改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）でレビューされ、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉら．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）グラフトの記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ」の記載）、Ｄａｌｌ’ＡｃｑｕａらＭｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」の記載）、並びにＯｓｂｏｕｒｎらＭｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａらＢｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングの「ガイド付き選択」アプローチの記載）にさら記載されている。
ヒト化に使用可能なフレームワーク領域としては、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１５１巻：２２９６頁（１９９３年）を参照されたい）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」、８９巻：４２８５頁（１９９２年）；及びＰｒｅｓｔａら、「Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．」、１５１巻：２６２３頁（１９９３年）を参照されたい）；ヒト成熟（体細胞性変異を受けた）フレームワーク領域又はヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ、「Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．」、１３巻：１６１９～１６３３頁（２００８年）を参照されたい）；並びに、ＦＲライブラリのスクリーニングから誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、２７２巻：１０６７８～１０６８４頁（１９９７年）及び、Ｒｏｓｏｋら、「Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．」、２７１巻：２２６１１～２２６１８頁（１９９６年）を参照されたい）が挙げられる。
ｄ．多重特異性抗体
特定の実施形態において、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。本明細書で使用される「多重特異性抗体」という用語は、多重エピトープ特異性を有する（すなわち、１つの生物学的分子上の２つ若しくはそれ以上の異なるエピトープに結合することができるか、又は２つ若しくはそれ以上の異なる分子上のエピトープに結合することができる）抗原結合ドメインを含む抗体を網羅する。
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原結合部位（二重特異性抗体など）に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、多重特異的抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、１つかつ同一の分子内の２つのエピトープを結合してもよい（分子内結合）。例えば、多重特異的抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、同じタンパク質分子上の２つの異なるエピトープに結合してもよい。特定の実施形態において、多重特異的抗体が結合する２つの異なるエピトープは、通常１つの単一特異性抗体（例えば、従来の抗体など）又は１つの免疫グロブリンの単一可変ドメインに同時には結合しないエピトープである。いくつかの実施形態において、多重特異的抗体の第１の抗原結合ドメイン及び第２の抗原結合ドメインは、２つの別個の分子内に位置するエピトープに結合してもよい（分子内結合）。例えば、多重特異性抗体の第１の抗原結合ドメインは、１つのタンパク質分子上の１つのエピトープに結合し得るが、多重特異性抗体の第２の抗原結合ドメインは、異なるタンパク質分子上の別のエピトープに結合し、それによって２つの分子を架橋し得る。
いくつかの実施形態において、多重特異性抗体（二重特異性抗体など）の抗原結合ドメインは、２つのＶＨ／ＶＬ単位を含み、第１のＶＨ／ＶＬ単位は、第１のエピトープに結合し、第２のＶＨ／ＶＬ単位は、第２のエピトープに結合し、各ＶＨ／ＶＬ単位は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。そのような多重特異性抗体としては、完全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、及び抗体断片（共有結合的又は非共有結合的に連結されているＦａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ、及びトリアボディなど）が挙げられるが、これらに限定されない。重鎖可変領域の少なくとも一部分及び／又は軽鎖可変領域の少なくとも一部分を更に含むＶＨ／ＶＬ単位はまた、「アーム」又は「ヘミマー」又は「半抗体」とも称され得る。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、第２のヘミマーとの分子内ジスルフィド結合が形成されることを可能にするのに十分な重鎖可変領域の一部分を含む。いくつかの実施形態において、ヘミマーは、例えば、相補的ホール突然変異又はノブ突然変異を含む第２のヘミマー又は半抗体とのヘテロ二量体化を可能にする、ノブ突然変異又はホール突然変異を含む。ノブ突然変異及びホール突然変異は、以下でさらに論じられる。
特定の実施形態において、本明細書に提供される多重特異性抗体は、二重特異性抗体であり得る。本明細書で使用される「二重特異性抗体」という用語は、１つの分子上の２つの異なるエピトープに結合することができるか、又は２つの異なる分子上のエピトープに結合することができる抗原結合ドメインを含む多重特異性抗体を指す。二重特異性抗体はまた、本明細書において、「二重特異性」を有するもの、又は「二重特異性」であるとも称される。例示的な二重特異性抗体は、タンパク質及び任意の他の抗原の両方に結合し得る。特定の実施形態において、結合特異性のうちの一方は、タンパク質に対するものであり、他方はＣＤ３に対するものである。例えば、米国特許第５，８２１，３３７号を参照されたい。特定の実施形態において、二重特異性抗体は、同じタンパク質分子の２つの異なるエピトープに結合し得る。特定の実施形態において、二重特異性抗体は、２つの異なるタンパク質分子に対する２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体を使用して、タンパク質を発現する細胞に細胞毒性薬剤を局在化することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製され得る。
多重特異性抗体を作製するための技法には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現が含まれるが、これらに限定されない（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、「Ｎａｔｕｒｅ」３０５：５３７（１９８３年）、国際公開第９３／０８８２９号、並びにＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら「ＥＭＢＯ Ｊ．」１０：３６５５（１９９１年）を参照のこと）、及び「ノブ・イン・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照のこと）、国際公開第２００９／０８９００４号、米国特許出願公開第２００９／０１８２１２７号、同第２０１１／０２８７００９号、Ｍａｒｖｉｎ及びＺｈｕ、「Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．」（２００５年）２６（６）：６４９～６５８頁、並びにＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５年）「Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．」、２６：１～９頁）。本明細書で使用される場合、「ノブイントゥホール」又は「ＫｎＨ」技術という用語は、２つのポリペプチドを、それらが相互作用する界面で一方のポリペプチドに***（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することによって、インビトロ又はインビボでの対合を指向する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、又はＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２８７００９号、米国特許出願公開第２００７／０１７８５５２号、国際公開第９６／０２７０１１号、国際公開第９８／０５０４３１号、Ｚｈｕら、１９９７年、「Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ」６：７８１～７８８頁、及び国際公開第２０１２／１０６５８７号を参照のこと）。いくつかの実施形態において、ＫｎＨにより、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖の対合が駆動される。例えば、それらのＦｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインをさらに含み得るか、又は類似の若しくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインをさらに含み得る。ＫｎＨ技術を使用して、２つの異なる受容体細胞外ドメインを共に、又は異なる標的認識配列を含む（例えば、アフィボディ、ペプチボディ、及び他のＦｃ融合を含む）任意の他のポリペプチド配列を対合させることもできる。
本明細書で使用される「ノブ突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面で***（ノブ）をポリペプチドに導入する突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドは、ホール突然変異を有する。
本明細書で使用される「ホール突然変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面で空洞（ホール）をポリペプチドに導入する突然変異を指す。いくつかの実施形態において、他のポリペプチドは、ノブ突然変異を有する。
「***」は、第１のポリペプチドの界面から突出し、したがって、隣接界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）の補償空洞内に位置付け可能となることで、例えば、ヘテロ多量体を安定させ、それによりホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成が好都合になる、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。***は、元の界面に存在し得るか、又は合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸は、突起をコードするように変化する。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも大きい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置き換えられる。１つを超える元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解される。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、米国特許出願公開第２０１１／０２８７００９号の表１に示される。「突起」を導入する突然変異は、「ノブ突然変異」と称され得る。
いくつかの実施形態において、***の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、トリプトファン又はチロシンである。いくつかの実施形態において、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、トレオニン、又はバリンなどの***の形成のための元の残基は、小さい側鎖体積を有する。
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、したがって、隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する***を収容する少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元の界面に存在し得るか、又は合成的に（例えば、界面をコードする核酸を改変することによって）導入され得る。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸は、空洞をコードするように変化する。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面の少なくとも１つの「元の」アミノ酸残基をコードする核酸が、元のアミノ酸残基よりも小さい側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置き換えられる。１つを超える元の残基及び対応する移入残基が存在し得ることが理解される。いくつかの実施形態において、空洞の形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される天然に存在するアミノ酸残基である。いくつかの実施形態において、移入残基は、セリン、アラニン、又はトレオニンである。いくつかの実施形態において、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、又はトリプトファンなどの空洞の形成のための元の残基は、大きい側鎖体積を有する。「空洞」を導入する突然変異は、「ホール突然変異」と称され得る。
***は、空洞内で「位置付け可能」であり、これは、それぞれ、第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面の***及び空洞の空間的位置、並びに***及び空洞の大きさが、界面での第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの正常な会合を著しく乱すことなく***が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐなどの***は典型的には、界面の軸から垂直には延びず、好ましい立体構造を有さず、***と対応する空洞との整列は、場合によっては、Ｘ線結晶学又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるものなどの三次元構造に基づいて***／空洞の対をモデル化することに依存し得る。これは、当該技術分野で広く受け入れられている技術を使用して達成され得る。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ１定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）を含む。
いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のノブ突然変異は、Ｔ３６６Ｗ（ＥＵ番号付け）である。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）から選択される１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態において、ＩｇＧ４定常領域内のホール突然変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ（ＥＵ番号付け）を含む。
多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）；２つ以上の抗体又は断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照）；二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７－１５５３（１９９２）を参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照）；及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照）；及び、例えば、Ｔｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。
「オクトパス抗体」又は「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号Ａ１、及びＷｕら、「Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」（２００７年））。本明細書の抗体又は断片には、標的タンパク質並びに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照されたい）。
ｅ．抗体断片
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、及び以下に記載する他の断片が挙げられるがこれらに限定されない。特定の抗体断片の総説としては、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説に関して、例えばＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、「Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」中、第１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク）、第２６９～３１５頁（１９９４年）を参照されたい；また、国際公開第ＷＯ９３／１６１８５号を参照されたい；及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第ＷＯ１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎら、「Ｎａｔ．Ｍｅｄ．」第９巻１２９～１３４頁（２００３年）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ」第９０巻６４４４～６４４８頁（１９９３年）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディはまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９～１３４（２００３）に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全部若しくは一部を含む抗体断片である。特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、マサチューセッツ州ウォルサム；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照）。
抗体断片は、本明細書に記載されているように、インタクト抗体のタンパク質分解消化、及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌又はファージ）による生産を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製することができる。
ｆ．抗体バリアント
特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。最終構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、ただし、その最終構築物が所望の特性、例えば、抗原結合を保有することを条件とする。
ｇ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される組換え法及び組成物を使用して生成されうる。一実施形態において、本明細書に記載される抗体をコードする単離核酸が提供される。そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードしうる。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、このような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態において、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下を用いて形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸と、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクターと、抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターとを含むベクター。一実施形態において、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態において、抗体の作製方法が提供され、本方法は、上述される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗体の組換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。そのような核酸は、容易に単離可能であり、従来の手順を用いて（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。バクテリアにおける抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、第５，７８９，１９９号、及び第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現について記載している、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照のこと。）発現後、抗体は、可溶性画分中で細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌や酵母等の真核生物は、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株や酵母株が含まれ、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。
また、グリコシル化抗体を発現させるのに適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、昆虫細胞と組み合わせて使用することができ、特にスポドプテラ・フルギペルダ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションに使用することができる。
植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、第６，０４０，４９８号、第６，４２０，５４８号、第７，１２５，９７８号、及び第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物で抗体を生成するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳＴＭ技法について記載）を参照されたい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用されてもよい。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓系統（例えば、「ＧｒａｈａｍらＪ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）」に記載の２９３細胞又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、「Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）」に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌腫細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳類宿主細胞株の総説に関して、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ ＡＰｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ）２５５～２６８頁（２００３年）を参照されたい。
ここで抗体親和性に関して、実施形態において、抗体は、１つ又は複数の腫瘍関連抗原又は細胞表面受容体に結合する：複数の実施形態において、腫瘍関連抗原又は細胞表面受容体は、ＣＤ７１、Ｔｒｏｐ２、ＭＳＬＮ、ＮａＰｉ２ｂ、Ｌｙ６Ｅ、ＥｐＣＡＭ及びＣＤ２２から選択される。
本明細書に記載されるように、Ａｂ－ＣＩＤＥは、抗体、例えば、以下から選択される抗体を含み得る：
ｉ．抗Ｌｙ６Ｅ抗体
Ｌｙ６Ｅ（リンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ；Ｌｙ６７，ＲＩＧ－Ｅ，ＳＣＡ－２，ＴＳＡ－１）；ＮＰ＿００２３３７．１；ＮＭ＿００２３４６．２；ｄｅ Ｎｏｏｉｊ－ｖａｎ Ｄａｌｅｎ，Ａ．Ｇ．ら（２００３年）「Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ」１０３（６）、７６８～７７４頁；Ｚａｍｍｉｔ，Ｄ．Ｊ．ら（２００２年）「Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．」２２（３）：９４６～９５２頁；国際公開第２０１３／１７７０５号。
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むことができる。レチノイン酸誘導型遺伝子Ｅ（ＲＩＧ－Ｅ）及び幹細胞抗原２（ＳＣＡ－２）としても知られるリンパ球抗原６複合体、遺伝子座Ｅ（Ｌｙ６Ｅ）。ＧＰＩ結合した１３１アミノ酸長、約８．４ｋＤａタンパク質の既知でない結合パートナーとの未知の機能である。これは、マウスの未成熟胸腺細胞、胸腺髄質上皮細胞で発現される転写物として最初に同定された（Ｍａｏ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３：５９１０－５９１４）。いくつかの実施形態において、本明細書中に記載される主題は、ＰＣＴ公開番号ＷＯ２０１３／１７７０５５号に記載される抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥを提供する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥを提供する。
一態様において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥを提供する。更なる実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様において、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥを提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様において、Ａｂ－ＣＩＤＥは、（ａ）（ｉ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗体を含む。
別の態様では、本明細書に記載される主題は、（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体を含む、Ａｂ－ＣＩＤＥを提供する。
上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗Ｌｙ６Ｅ抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様では、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態において、配列番号８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、配列番号８において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、配列番号８において合計で１～５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号８のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３。
別の態様では、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗Ｌｙ６Ｅ抗体が提供され、該抗体は、配列番号７のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態において、配列番号７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、Ｌｙ６Ｅに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、配列番号７において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、配列番号７において合計で１～５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、配列番号７のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが提供され、この抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥが提供され、該抗体は、それぞれ配列番号８及び配列番号７のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む、Ａｂ－ＣＩＤＥが提供される。例えば、特定の実施形態において、配列番号８のＶＨ配列及び配列番号７のＶＬ配列をそれぞれ含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが提供される。
更なる態様において、上記のいずれかの実施形態によるＡｂ－ＣＩＤＥの抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗Ｌｙ６Ｅ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。いくつかの実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは、それぞれ配列番号１０及び９のアミノ酸配列を含む重鎖及び軽鎖を含む抗Ｌｙ６Ｅ抗体を含む
ｉｉ．抗ＮａＰｉ２ｂ抗体
Ｎａｐｉ２ｂ（Ｎａｐｉ３ｂ、ＮＡＰＩ－３Ｂ、ＮＰＴＩＩｂ、ＳＬＣ３４Ａ２、溶質担体ファミリー３４（リン酸ナトリウム）、メンバー２、ＩＩ型ナトリウム依存性リン酸輸送体３ｂ、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＮＭ＿００６４２４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７（２２）：１９６６５～１９６７２頁（２００２年），「Ｇｅｎｏｍｉｃｓ」６２（２）：２８１～２８４頁（１９９９年），Ｆｅｉｌｄ，Ｊ．Ａ．ら（１９９９年）「Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．」２５８（３）：５７８～５８２頁）；国際公開第２００４０２２７７８号（請求項２）；欧州特許第１３９４２７４号（実施例１１）；国際公開第２００２１０２２３５号（請求項１３；３２６頁）；欧州特許第８７５５６９号（請求項１；１７～１９頁）；国際公開第２００１５７１８８号（請求項２０；３２９頁）；国際公開第２００４０３２８４２号（実施例ＩＶ）；国際公開第２００１７５１７７号（請求項２４；１３９～１４０頁）；相互参照：ＭＩＭ：６０４２１７；ＮＰ＿００６４１５．１；ＮＭ＿００６４２４＿１。
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書には、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのＨＶＲを含む、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが記載される。
一態様において、本明細書には、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが記載される。更なる実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３を含む。
別の態様において、本明細書には、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが記載される。一実施形態では、抗体は、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む。
別の態様において、Ａｂ－ＣＩＤＥは、（ａ）（ｉ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む、抗体を含む。
別の態様では、本明細書には、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３、（ｄ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３を含む抗体を含む、Ａｂ－ＣＩＤＥが記載される。
上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、上の実施形態のいずれかにあるようなＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えば、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。
別の態様において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施形態では、配列番号５４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の配列同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対して、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、配列番号１７において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、配列番号１７において合計で１～５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域内で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号１７のＶＨ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＨは、以下から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む：（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｈ３。
別の態様では、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体が提供され、該抗体は、配列番号１８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。特定の実施形態において、配列番号１８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比べて、置換（例えば、保存的置換）、挿入、又は欠失を含有するが、その配列を含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、抗ＮａＰｉ２ｂに結合する能力を保持する。特定の実施形態において、配列番号１８において合計で１～１０個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、配列番号１８において合計で１～５個のアミノ酸が置換、挿入、及び／又は欠失している。特定の実施形態において、置換、挿入、又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域で（すなわち、ＦＲ内で）生じる。任意に、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、配列番号１８のＶＬ配列を含み、その配列の翻訳後修飾を含む。特定の実施形態では、ＶＬは、（ａ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ１、（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ－Ｌ３から選択される、１つ、２つ、又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様において、抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが提供され、この抗体は、上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＨ、及び上述の実施形態のいずれかにあるようなＶＬを含む。
一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥが提供され、該抗体は、それぞれ配列番号１７及び配列番号１８のＶＨ配列及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
さらなる態様において、本明細書において、本明細書に提供される抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含む、Ａｂ－ＣＩＤＥが提供される。例えば、特定の実施形態において、配列番号１７のＶＨ配列及び配列番号１８のＶＬ配列をそれぞれ含む抗ＮａＰｉ２ｂ抗体と同じエピトープに結合する抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥが提供される。
更なる態様において、上記のいずれかの実施形態によるＡｂ－ＣＩＤＥの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、ヒト抗体を含むモノクローナル抗体である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施形態において、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
ｉｉｉ．抗ＣＤ２２抗体
ＣＤ２２（Ｂ細胞受容体ＣＤ２２－Ｂアイソフォーム、ＢＬ－ＣＡＭ、Ｌｙｂ－８、Ｌｙｂ８、ＳＩＧＬＥＣ－２、ＦＬＪ２２８１４、Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号ＡＫ０２６４６７）；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１３７－１４６；ＷＯ２００３０７２０３６（請求項１；図１）；相互参照：ＭＩＭ：１０７２６６；ＮＰ＿００１７６２．１；ＮＭ＿００１７７１＿１
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは、３つの軽鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｌ１、ＨＶＲ－Ｌ２及びＨＶＲ－Ｌ３）及び３つの重鎖超可変領域（ＨＶＲ－Ｈ１、ＨＶＲ－Ｈ２及びＨＶＲ－Ｈ３）を含む抗ＣＤ２２抗体を含むことができる。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ２２抗体は、３つの軽鎖超可変領域及び３つの重鎖超可変領域（配列番号１９～２４）を含み、その配列を以下に示す。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ２２抗体が、配列番号２５の可変軽鎖配列及び配列番号２６の可変重鎖配列を含む。一実施形態において、本発明のＡｂ－ＣＩＤＥｓの抗ＣＤ２２抗体は、配列番号２７の軽鎖配列及び配列番号２８の重鎖配列を含む：
ｉｖ．抗ＣＤ７１抗体
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗ＣＤ７１抗体を含むことができる。ＣＤ７１（トランスフェリン受容体）は、鉄の細胞取り込みにおいて重要な役割を果たす内在性膜糖タンパク質である。これは、細胞増殖及び活性化のマーカーとしてよく知られている。造血系における全ての増殖細胞はＣＤ７１を発現するが、ＣＤ７１は有用な赤血球関連抗原と考えられてきた。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ７１抗体はヒト化されている。
一実施形態において、抗ＣＤ７１抗体は、Ｎ２９７Ｇ突然変異と、ＩｇＧ１ ｍＡｂエフェクター機能を低減／排除するＩｇＧ２下部ヒンジ領域との組み合わせであるＮＧ２ＬＨ改変を含む。別の実施形態では、抗ＣＤ７１抗体は、リンカーへのコンジュゲートに使用される操作されたＣｙｓ残基を含む。１つの実施形態において、これらの変化の全てを欠く親ＩｇＧ１ ｍＡｂが、ＷＯ２０１６０８１６４３に記載されており、その全体が参照により組み込まれる。
複数の実施形態において、抗ＣＤ７１抗体は、抗ｈｕＴｆＲ１．ｈＩｇＧ１．ＬＣ．Ｋ１４９Ｃ．ＨＣ．Ｌ１７４Ｃ．Ｙ３７３Ｃ．ＮＧ２ＬＨ ＡＢＰ１ＡＡ２５９７０（高親和性ＤＡＲ６）である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ７１抗体は、配列番号３０の軽鎖配列及び配列番号２９の重鎖配列を含む。
複数の実施形態において、抗ＣＤ７１抗体は、抗ｈｕＴｆＲ２．ｈＩｇＧ１．ＬＣ．Ｋ１４９Ｃ．ＨＣ．Ｌ１７４Ｃ．Ｙ３７３Ｃ．ＮＧ２ＬＨ ＡＢＰ１ＡＡ２５９６９（低親和性ＤＡＲ６）である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ７１抗体は、配列番号３２の軽鎖配列及び配列番号３１の重鎖配列を含む。
複数の実施形態において、抗ＣＤ７１抗体は、抗ｈｕＴｆＲ１．ｈＩｇＧ１．ＬＣ．Ｋ１４９Ｃ．ＮＧ２ＬＨ ＡＢＰ１ＡＡ３０１３９（高親和性ＤＡＲ２）である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ７１抗体は、配列番号３４の軽鎖配列及び配列番号３３の重鎖配列を含む。
複数の実施形態において、抗ＣＤ７１抗体は、抗ｈｕＴｆＲ２．ｈＩｇＧ１．ＬＣ．Ｋ１４９Ｃ．ＮＧ２ＬＨ ＡＢＰ１ＡＡ３０１４０（低親和性ＤＡＲ２）である。一実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＣＤ７１抗体は、配列番号３６の軽鎖配列及び配列番号３５の重鎖配列を含む。
ｖ．抗Ｔｒｏｐ２抗体
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗Ｔｒｏｐ２抗体を含むことができる。Ｔｒｏｐ２（栄養膜抗原２）は、多くのがんにおいて示差的に発現される細胞内カルシウムシグナル伝達物質である膜貫通糖タンパク質である。それは、自己再生、増殖、浸潤及び生存について細胞にシグナル伝達する。Ｔｒｏｐ２は、細胞表面糖タンパク質Ｔｒｏｐ－２／Ｔｒｏｐ２、胃腸腫瘍関連抗原ＧＡ７３３１、膵癌腫マーカータンパク質ＧＡ７３３－１／ＧＡ７３３、膜成分第１染色体表面マーカー１Ｍ１Ｓ１、上皮糖タンパク質－１、ＥＧＰ－１、ＣＡＡ１、ゼラチン滴様角膜ジストロフィーＧＤＬＤ及びＴＴＤ２としても知られている。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗Ｔｒｏｐ２抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗Ｔｒｏｐ２抗体は、米国特許出願公開第２０１４／０３７７２８７号及び米国特許出願公開第２０１５／０３６６９８８号に記載されており、それぞれその全体が参照により組み込まれる。
ｖｉ．抗ＭＳＬＮ抗体
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗ＭＳＬＮ抗体を含むことができる。ＭＳＬＮ（メソテリン）は、細胞接着タンパク質として機能し得るグリコシルホスファチジルイノシトールアンカー細胞表面タンパク質である。ＭＳＬＮは、ＣＡＫ１及びＭＰＦとしても知られている。このタンパク質は、上皮中皮腫、卵巣がん及び特定の扁平上皮癌腫において過剰発現される。上述の実施形態のうちのいずれかにおいて、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗ＭＳＬＮ抗体はヒト化されている。一実施形態において、抗ＭＳＬＮ抗体は、その全体が参照により組み込まれる、Ｓｃａｌｅｓ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２０１４，１３（１１），２６３０－２６４０に記載されるｈ７Ｄ９．ｖ３である。
ｖｉｉ．抗ＥｐＣＡＭ抗体
特定の実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは抗ＥｐＣＡＭ抗体を含むことができる。一態様では、Ａｂ－ＣＩＤＥの抗体は、多数の細胞又は組織型上に見出されるタンパク質に対する抗体であり得る。そのような抗体の例としては、ＥｐＣＡＭが挙げられる。上皮細胞接着分子（ＥｐＣＡＭ）は、上皮におけるＣａ２＋非依存性ホモタイプ細胞－細胞接着を媒介する膜貫通糖タンパク質である（Ｌｉｔｖｉｎｏｖ，Ｓ．ら（１９９４年）「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ」１２５（２）：４３７～４６頁）。ＤＩＡＲ５、ＥＧＰ－２、ＥＧＰ３１４、ＥＧＰ４０、ＥＳＡ、ＨＮＰＣＣ８、ＫＳ１／４、ＫＳＡ、Ｍ ４ Ｓ １、ＭＩＣ１８、ＭＫ－１、ＴＡＣＳＴＤ１、ＴＲＯＰ１、ＥｐＣＡＭとしても知られており、細胞シグナル伝達（Ｍａｅｔｚｅｌ，Ｄ．ら（２００９年）「Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ」１１（２）：１６２～７１頁）、遊走（ワシントン州オスタ；ら（２００４）、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、６４（１６）：５８１８～２４頁）、増殖及び分化（Ｌｉｔｖｉｎｏｖ，Ｓ．ら（１９９６年）「Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．」１４８（３）：８６５～７５頁）にも関与している。さらに、ＥｐＣＡＭは、ｃ－ｍｙｃ、ｅ－ｆａｂｐ及びサイクリンＡ及びＥを上方調節する能力を介して発癌性の可能性を有する（Ｍｕｎｚ，Ｍ．ら（２００４年）「Ｏｎｃｏｇｅｎｅ」２３（３４）：５７４８～５８頁）。ＥｐＣＡＭは、上皮及び上皮由来新生物において排他的に発現されるので、ＥｐＣＡＭは、様々ながんの診断マーカーとして使用することができる。言い換えれば、Ａｂ－ＣＩＤＥを使用して、標的化抗体を使用する場合のように特定の細胞型又は組織型ではなく、多くの細胞又は組織にＣＩＤＥを送達することができる。
１．抗体親和性
特定の実施形態において、本明細書中に提供される抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有し、任意に、≧１０－１３Ｍ（例えば１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）である。
一実施形態では、Ｋｄは、以下のアッセイにより説明されるように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて行われる放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、その後抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、２９３：８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間にわたって室温（およそ２３℃）で遮断する。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］－抗原を、目的とされるＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」、５７巻：４５９３～４５９９頁（１９９７年）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一貫する）。次に、目的とするＦａｂを一晩インキュベートするが、このインキュベーションは、平衡が達成されることを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続し得る。その後、混合物を、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のため、捕捉プレートに移す。次に、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を付加し、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）上で１０分間、計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイでの使用のために選択する。
別の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、ニュージャージー州ピスカタウェイ）を使用した表面プラズモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、ｐＨ４．８の１０ｍＭの酢酸ナトリウムによって、５μｇ／ｍｌ（約０．２μＭ）に希釈した後、５μｌ／分の流速でインジェクトし、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答ユニット（ＲＵ）を達成する。抗原のインジェクション後、１Ｍのエタノールアミンをインジェクトして、未反応基をブロックする。動態測定のため、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ～５００ｎＭ）を、およそ２５μＬ／分の流量にて２５℃で０．０５％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）を有するＰＢＳ中に注射する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎら、「Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．」、２９３：８６５～８８１頁（１９９９年）を参照されたい。上述の表面プラズモン共鳴アッセイによりオン速度が１０６Ｍ－１ ｓ－１を超える場合、オン速度を、ストップフローを装備した分光測色計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを有する８０００シリーズＳＬＭ－ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光測色計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定される抗原の増加した濃度の存在下でＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃での蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する蛍光クエンチ技法を使用することによって決定することができる。
２．リンカー（Ｌ１）
本明細書に記載の「リンカー」（Ｌ１、リンカー－１）は、１つ以上のＣＩＤＥ部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結してＡｂ－ＣＩＤＥを形成するために使用することができる二官能性又は多官能性部分である。いくつかの実施形態において、Ａｂ－ＣＩＤＥは、ＣＩＤＥに及び抗体に共有結合するための反応性官能基を有するＬ１を使用して調製することができる。例えば、いくつかの実施形態において、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基又はリンカーＬ１－ＣＩＤＥ基と結合を形成して、Ａｂ－ＣＩＤＥを作製することができる。具体的に、リンカーの化学構造が、Ａｂ－ＣＩＤＥの効能及び安全性の両方に対して大きな影響を及ぼし得る（Ｄｕｃｒｙ＆Ｓｔｕｍｐ、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ」、２０１０年、２１，５～１３頁）。正しいリンカーを選択することは、標的細胞の意図された細胞区画への適切な薬物送達に影響する。
特定の実施形態において、Ｌ１リンカーは、自壊性であり得る。
特定の実施形態において、Ｌ１リンカーは、Ｌ１ａ、Ｌ１ｂ及びＬ１ｃ：
Ｌ１ａの例：
（式中、
Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２；－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２；－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３；又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素又はＣ１－５アルキルであり、又は、Ｒ５及びＲ６は、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシであり、
は、Ａｂへの結合点である）
からなる群から選択される。
特定の実施形態において、Ｌ１リンカーは、親水性自壊性リンカーである。これらのタイプのＬ１リンカーの例は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１４／１００７６２号に記載されているものである。Ｌ１リンカーとしては、限定されないが、式Ｉ～ＸＩＩが挙げられる。
本開示は、式（Ｉ）：
（式中、
Ｄは薬物部分又はＣＩＤＥであり、
Ｔは抗体などの標的化部分であり、
Ｘは親水性自壊性リンカーであり、
Ｌ１は、Ｌ１とは異なり、結合、第２の自壊性リンカー、又は環化自己消去リンカーであり、
Ｌ２は、結合又は第２の自壊性リンカーであり、
Ｌ１が第２の自壊性リンカー又は環化自己消去リンカーである場合、Ｌは結合であり、
Ｌ２が第２の自壊性リンカーである場合、Ｌ１は結合であり、
Ｌ３はペプチドリンカーであり、
Ｌ４は、結合又はスペーサーであり、並びに
Ａはアシル単位である）
のＬ１リンカー又はその塩、溶媒和物若しくは水和物を提供する。
いくつかの実施形態において、式（ｌａ）：
（式中、Ｄ、Ｔ、Ｘ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＡは、式（Ｉ）について定義されるとおりであり、ｐは１～２０である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。いくつかの実施形態において、ｐは、１～８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～６である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、２～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、又は４である。
本開示はまた、式（ＩＩ）：
（式中、
Ｄは、薬物部分又はＣＩＤＥであり、
Ｔは、標的化部分又は抗体であり、
Ｒ１は、水素、非置換若しくは置換Ｃ１－３アルキル、又は非置換若しくは置換ヘテロシクリルであり、
Ｌ１は、結合、第２の自壊性リンカー、又は環化自己消去リンカーであり、２
Ｌ２は、結合、第２の自壊性リンカーであり、
Ｌ１が第２の自壊性リンカー又は環化自己消去リンカーである場合、Ｌ２は結合であり、
Ｌ１が第２の自壊性リンカーである場合、Ｌ２は結合であり、
Ｌ３はペプチドリンカーであり、
Ｌ４は、結合又はスペーサーであり、並びに
Ａはアシル単位である）
のＬ１リンカー又はその塩、溶媒和物若しくは水和物を提供する。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩａ）：
（式中、Ｄ、Ｔ、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＡは、式（ＩＩ）について定義されるとおりであり、ｐは１～２０である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。いくつかの実施形態において、ｐは、１～８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～６である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、２～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、又は４である。
本開示はまた、式（ＩＩＩ）：
（式中、Ｔは標的化部分である）
のＬ１リンカー又はその塩、溶媒和物若しくは水和物を提供する。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩａ）：
（式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１～２０である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。いくつかの実施形態において、ｐは、１～８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～６である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、２～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、又は４である。
本開示は、式（ＩＶ）：
（式中、Ｔは標的化部分である）
のＬ１リンカー又はその塩、溶媒和物若しくは水和物を提供する。
いくつかの実施形態において、式（ＩＶａ）：
（式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１～２０である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。いくつかの実施形態において、ｐは、１～８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～６である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、２～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、又は４である。
本開示は、式（Ｖ）：
（式中、Ｔは標的化部分である）
のＬ１リンカー又はその塩、溶媒和物若しくは水和物を提供する。
いくつかの実施形態において、式（Ｖａ）：
（式中、Ｔは標的化部分であり、ｐは１～２０である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。いくつかの実施形態において、ｐは、１～８である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～６である。いくつかの実施形態において、ｐは、１～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、２～４である。いくつかの実施形態において、ｐは、１、２、３、又は４である。
本開示は、式（ＶＩ）：
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物を提供する。
本開示は、式（ＶＩＩ）：
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物を提供する。
本開示は、式（ＶＩＩＩ）：
のＬ１リンカーを提供する。
本開示は、式（ＸＩＩ）：
（式中、ＲはＮＯ２又はＮＨ２である）
のＬ１リンカー又はその塩若しくは溶媒和物若しくは立体異性体を提供する。
特定の実施形態において、Ｌ１リンカーはまた、一般に、切断可能（例えば、ペプチド、ヒドラゾン又はジスルフィドなど）又は切断不可能（チオエーテルなど）の２つのカテゴリーに分けることもできる。リンカーが切断不可能なリンカーである場合、Ｅ３ＬＢ部分上のその位置は、ＶＨＬ結合を妨害しないような位置である。具体的には、切断不可能なリンカーは、ＶＨＬ結合ドメインのプロリン上のヒドロキシル位置で共有結合されるべきではない。リソソーム酵素（カテプシンＢ等）によって加水分解され得るバリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）等のペプチドリンカーが、薬物を抗体と接続するために使用されてきた（米国特許第６，２１４，３４５）。それらは、全身循環におけるそれらの相対的安定性及び腫瘍内で薬物を効率的に放出する能力に一部起因して、特に有用であった。しかしながら、天然ペプチドによって表されるケミカルスペースは限定されているため、ペプチドのように作用し、リソソームプロテアーゼによって有効に切断され得る、多様な非ペプチドリンカーを有することが望ましい。より優れた非ペプチド構造の多様性が、ペプチドリンカーによって付与されない新規の有益な特性をもたらし得る。リソソーム酵素によって切断され得るリンカーＬ１のための異なる種類の非ペプチドリンカーが、本明細書に提供される。
ａ．ペプチド模倣リンカー
リソソーム酵素によって切断可能なＡｂ－ＣＩＤＥのための異なるタイプの非ペプチド性ペプチド模倣リンカーが本明細書で提供される。例えば、ジペプチド（例えばＶａｌ－Ｃｉｔ）の中央のアミド結合をアミド模倣物で置き換えられていた、及び／又はアミノ酸全体（例えば、Ｖａｌ－Ｃｉｔジペプチド中のバリンアミノ酸）が非アミノ酸部分（例えば、シクロアルキルジカルボニル構造（例えば、環サイズ＝４又は５））で置き換えられていた。
Ｌ１がペプチド模倣リンカーである場合、下記式：
－Ｓｔｒ－（ＰＭ）－Ｓｐ－、
（式中、
Ｓｔｒは、Ａｂに共有結合したストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合又はＣＩＤＥ部分に共有結合したスペーサー単位であり、並びに
ＰＭは、
からなる群から選択される非ペプチド化学部分であり、
Ｗは、－ＮＨ－ヘテロシクロアルキル－又はヘテロシクロアルキルであり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－ＮＨ２、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－ＮＨ－ＣＨ３、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－Ｎ－（ＣＨ３）２、Ｃ１～Ｃ６アルケニル、又はＣ１～Ｃ６アルキレニルであり、
各Ｒ１は、独立して、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、又は（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、又は、ヘテロアリールアルキルであるか、又は、Ｒ３及びＲ２は、一緒に、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく；及び
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２－であるか、又はＲ４及びＲ５はＣ３～Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよい）
によって表される。
Ｌ１は、Ｅ３ＬＢ、Ｌ２、又はＰＢ基のいずれかを介してＣＩＤＥに接続されてもよいことに留意されたい。
複数の実施形態において、Ｙは、ヘテロアリールであり、Ｒ４及びＲ５は、一緒に、シクロブチル環を形成する。
複数の実施形態において、Ｙは
からなる群から選択される部分である。
複数の実施形態において、Ｓｔｒは、下記式：
（式中、Ｒ６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、（Ｃ１～Ｃ８アルキレン）Ｏ－、及びＣ１～Ｃ１０アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）－Ｃ２～Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４～Ｃ７ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールアルキル、アリールアリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１～５個の置換基で置換されていてもよく、各Ｒａは、独立して、Ｈ又は１～Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、－Ａｒ－Ｒｂ－であり、ここでＡｒはアリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは（Ｃ１～Ｃ１０アルキレン）Ｏ－である。マレイミドが抗体上の露出したＣｙｓ残基とマイケル付加を介して反応すると、抗体へのコンジュゲートが起こり得る）
で表される化学部分である。露出したＣｙｓ残基は、分子工学によって人工的に導入することができ、及び／又は、鎖間ジスルフィド結合の還元によって生成することができる）
複数の実施形態において、Ｓｔｒは、式：
（式中、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン、Ｃ１～Ｃ１０アルケニル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキレン）Ｏ－、Ｎ（Ｒｃ）－（Ｃ２～Ｃ６アルキレン）－Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）－（Ｃ２～Ｃ６アルキレン）から選択され、各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、－Ａｒ－Ｒｂ－であり、ここでＡｒはアリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１～Ｃ１０アルキレン）Ｏ－又はＳｐ－Ｃ１～Ｃ６－アルキレン－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－である）
を有する。
複数の実施形態において、Ｌ１は、下記式：
（Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルケニル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ１０アルキルである）
で表される非ペプチド化学部分である。
複数の実施形態において、Ｌ１は、下記式：
（Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、一緒に、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル環を形成する）
で表される非ペプチド化学部分である。
複数の実施形態において、Ｌ１は、下記式：
（Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２又は（Ｃ１～Ｃ６アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、Ｗは上に定義されるとおりである）
で表される非ペプチド化学部分である。
いくつかの実施形態において、リンカーは、国際公開第２０１５／０９５２２７号、国際公開第２０１５／０９５１２４号又は国際公開第２０１５／０９５２２３号に記載されているものなどのペプチド模倣リンカーであり得、それぞれ参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
特定の実施形態において、リンカーは
からなる群から選択される。
ｂ．非ペプチド模倣リンカー
一態様では、リンカーＬ１は、以下のように抗体及びＣＩＤＥに共有結合し得る。
一態様では、リンカーＬ１は、抗体とジスルフィド結合を形成し、リンカーは構造：
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、独立して、Ｈ、置換されていてもよい分枝又は直鎖のＣ１－Ｃ５アルキル、及び置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択されるか、又は、Ｒ１とＲ２が、若しくはＲ３とＲ４が、それらが結合している炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキル環又は３～６員ヘテロシクロアルキル環を形成する）
を有する。
一態様では、リンカーのカルボニル基は、ＣＩＤＥ内のアミン基に接続されている。Ａｂに結合した硫黄原子は、抗体中のシステインからの硫黄基であることにも留意されたい。別の態様において、Ｌ１は、抗体上に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することが可能である官能性を有する。そのような反応性官能基の非限定的な例には、マレイミド、ハロアセトアミド、α－ハロアセチル、コハク酸イミドエステル、４－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアン酸塩、及びイソチオシアン酸塩が含まれる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎら（２００４年）、「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」１５（４）：７６５～７７３の７６６頁におけるコンジュゲート方法、及びその中の実施例を参照されたい。
いくつかの実施形態において、Ｌ１リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能である官能性を有する。そのような求電子性基の例としては、アルデヒド及びケトンカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応して抗体ユニットとの共有結合を形成することができる。そのような反応性官能基の非限定的な例には、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジドが含まれるが、これらに限定されない。
Ｌ１リンカーは、１つ又は複数のリンカー構成要素を含んでもよい。例示的なリンカー構成成分としては、６－マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン－シトルリン（「ｖａｌ－ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン－フェニルアラニン（「ａｌａ－ｐｈｅ」）、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）吉草酸（「ＳＰＰ」）、及び４－（マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。様々なリンカー構成成分が当技術分野で既知であり、このうちのいくつかが以下に記載される。
Ｌ１リンカーは、ＣＩＤＥの放出を容易にする「切断可能リンカー」であってもよい。非限定的な例示的な切断可能リンカーとしては、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、「Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」５２：１２７～１３１頁（１９９２年）、米国特許第５，２０８，０２０号）が挙げられる。
特定の実施形態において、リンカーは下記式：
（式中、Ａは、「ストレッチャー単位」であり、及び、ａは０～１の整数であり、Ｗは「アミノ酸単位」であり、及び、ｗは０～１２の整数であり、Ｙは「スペーサー単位」であり、及び、ｙは０、１、又は２である）
を有する。そのようなリンカーの例示的な実施形態は、米国特許第７，４９８，２９８号に記載されている。
いくつかの実施形態において、Ｌ１リンカー成分は、抗体を別のリンカー成分又はＣＩＤＥ部分に連結する「ストレッチャー単位」を含む。例示的なストレッチャー単位を、以下に示す（波線は、抗体、ＣＩＤＥ、又は追加のリンカー成分への共有結合の部位を示す）。
特定の実施形態において、リンカーは
である。
特定の実施形態において、リンカーは下記式：
－Ａａ－Ｙｙ－
（式中、Ａ及びＹは上記のように定義される）
を有する。特定の実施形態において、スペーサー単位Ｙは、モノホスフェート又はビスホスフェートなどのホスフェートであってもよい。特定の実施形態において、ストレッチャー成分Ａは
を含む。
特定の実施形態において、リンカーは
である。
３．ＣＩＤＥ（「Ｄ」）
有用なＣＩＤＥは、上記の一般式を有する。
有用なＡｂ－Ｌ１－ＣＩＤＥ及び非コンジュゲートデグレーダーは、細胞標的化、並びにタンパク質標的化及び分解などの望ましい特性を示す。特定の実施形態において、Ａｂ－Ｌ１－ＣＩＤＥは、０．０００１～約２．０未満、又は約１．０未満、又は約０．８未満、又は約０．７未満、又は約０．６未満、又は約０．５未満、又は約０．４未満、又は約０．３未満、又は約０．２未満のＤＣ５０（μｇ／ｍＬ）を示す。特定の実施形態において、Ａｂ－Ｌ１－ＣＩＤＥは、少なくとも７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８又は９９のＤＣｍａｘを示す。
ＣＩＤＥには、以下の構成要素を有するものが含まれる。
ａ．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合基（Ｅ３ＬＢ）
Ｅ３ユビキチンリガーゼ（そのうち６００以上がヒトで知られている）は、ユビキチン化の基質特異性を付与する。これらのリガーゼに結合する既知のリガンドが存在する。本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合基は、フォンヒッペル・リンドウ（ＶＨＬ）であるＥ３ユビキチンリガーゼを結合することができるペプチド又は小分子である。
特定のＥ３ユビキチンリガーゼはフォンヒッペル・リンドウ（ＶＨＬ）腫瘍抑制因子であり、Ｅ３リガーゼ複合体ＶＣＢの基質認識サブユニットであり、エロンギンＢ及びＣと、Ｃｕｌ２とＲｂｘｌとから構成されている。ＶＨＬの主要な基質は、低酸素誘導因子Ｉα（ＨＩＦ－Ｉα）であり、これは、低酸素レベルに応答して血管新生促進増殖因子ＶＥＧＦ及び赤血球誘導サイトカインエリスロポエチンなどの遺伝子をアップレギュレートする転写因子である。
一態様では、本明細書の主題は、化学構造：
（式中、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃは、それぞれ独立して、水素若しくはＣ１－５アルキルであるか；又は、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃのうちの２つは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ１－５シクロアルキルを形成し、
Ｒ２は、Ｃ１－５アルキルであり、
Ｒ３は、シアノ、
からなる群から選択され、ここで－－－－は、単結合又は二重結合であり、ｑは１又は０であり、
Ｙ１及びＹ２の一方は－ＣＨであり、Ｙ１及びＹ２の他方は－ＣＨ又はＮであり、
ここでＬ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙは、それぞれ独立して、本明細書の他の箇所に記載されるとおりであり、Ｌ２は、本明細書の他の箇所に記載されているとおりである）
を有するＣＩＤＥのＥ３ＬＢ部分に関する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ３がシアノである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ３が
である構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ３が
である構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃがそれぞれ独立して水素又はメチルである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ１Ａ及びＲ１Ｂがそれぞれメチルである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、以下の式：
のうちの１つを有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ２が水素、メチル、エチル又はプロピルである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ２がメチルである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｒ２が
である構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｙ１及びＹ２がそれぞれ－ＣＨである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｙ１がＮであり、Ｙ２が－ＣＨである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢは、Ｙ１が－ＣＨであり、Ｙ２がＮである構造を有する。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢのプロリン部分は、構造：
を有する。
Ｅ３ＬＢ部分は、Ｌ２部分に共有結合しているか又は共有結合することができる部分を有する少なくとも１つの末端と、Ｌ１部分に共有結合しているか又は共有結合することができる部分を有する少なくとも１つの末端とを有する。例えば、Ｅ３ＬＢ部分は、アミド結合を介してＬ２部分に共有結合することができる－ＮＨＣＯＯＨ部分で終端する。
本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかでは、本明細書に記載のＥ３ＬＢは、その薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー、ジアステレオマー、溶媒和物又は多形であり得る。加えて、本明細書に記載の態様又は実施形態のいずれかでは、本明細書に記載のＥ３ＬＢは、結合を介して又は化学リンカーによってＰＢに直接結合されてもよい。
ｂ．ＢＲＭタンパク質結合群（ＰＢ）
ＣＩＤＥのＰＢ部分は、ＢＲＭの全てのバリアント、突然変異、スプライスバリアント、インデル及び融合物を含む、ＢＲＭに結合する小分子部分である。ＢＲＭは、サブファミリーＡ、メンバー２、ＳＭＡＲＣＡ２及びＢＲＡＨＭＡとしても知られている。そのような小分子標的タンパク質結合部分には、これらの組成物の薬学的に許容され得る塩、エナンチオマー、溶媒和物及び多形、並びに目的のタンパク質を標的とし得る他の小分子も含まれる。
本明細書に記載のＣＩＤＥ又はＤＡＣは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９／１９５２０１号に開示されているものを含む、既知のＢＲＭ結合化合物、結合化合物の任意の残基を含むことができる。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式Ｉ：
式中、Ｘは、水素又はハロゲンであり、
は、
からなる群から選択され、
ここで（ａ）～（ｅ）については、＊は［Ｘ］への結合点を示すか、又は［Ｘ］が存在しない場合、＊は［Ｙ］への結合点を示し、＊＊はフェニル環への結合点を示しており、
（ｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
ただし、
が（ａ）である場合、［Ｘ］は、
（式中、＃は
への結合点を示し、＃＃はＬ２への結合点を示す）ではなく、
［Ｙ］は存在せず、及び
［Ｚ］は存在しないか、あるいは
（ｉｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、［Ｘ］の３～１５員ヘテロシクリルは、１つ又は複数の－ＯＨ又はＣ１－６アルキルで置換されていてもよく、
［Ｙ］は存在せず、及び
［Ｚ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
ただし、
が（ａ）であり［Ｘ］が
（式中、＆は
への結合点を示し、＆＆は［Ｚ］への結合点を示す）である場合、［Ｚ］は、
（式中、＃は［Ｘ］への結合点を示し、＃＃はＬ２への結合点を示す）ではないか、あるいは
（ｉｉｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
［Ｙ］は、メチレンであり、［Ｙ］のメチレンは、１つ又は複数のメチル基で置換されていてもよく、
［Ｚ］は、３～１５員ヘテロシクリルであるか、あるいは
（ｉｖ）［Ｘ］は、存在せず、
［Ｙ］は、エテニレンであり、［Ｙ］のエテニレンが１つ又は複数のハロで置換されていてもよく、及び
［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
ただし、
は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、若しくは（ｅ）であるか、あるいは
（ｖ）［Ｘ］は、存在せず、
［Ｙ］は、エチニレンであり、及び
［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
ただし、
は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、若しくは（ｅ）であるか、あるいは
（ｖｉ）［Ｘ］は、存在せず、
［Ｙ］は、シクロプロピル又はシクロブチルであり、及び
［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
ただし、
は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、若しくは（ｅ）である
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式（Ｉ－Ａ）：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、［Ｘ］、［Ｙ］及び［Ｚ］は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるとおりである）
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式（Ｉ－Ｂ）：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、［Ｘ］、［Ｙ］及び［Ｚ］は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるとおりである）
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式（Ｉ－Ｃ）：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、［Ｘ］、［Ｙ］及び［Ｚ］は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるとおりである）
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式（Ｉ－Ｄ）：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、［Ｘ］、［Ｙ］及び［Ｚ］は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるとおりである）
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＢＲＭ結合化合物は、式（Ｉ－Ｅ）：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、［Ｘ］、［Ｙ］及び［Ｚ］は、式（Ｉ）の化合物について上に定義されるとおりである）
の化合物又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩である。
特定の実施形態において、ＣＩＤＥのＰＢ（ＢＲＭ）部分は、構造：
（式中、
は、Ｌ２への共有結合点である）
を有する。
ｃ．リンカーＬ２
本明細書に記載のＣＩＤＥのＥ３ＬＢ及びＰＢ部分は、リンカー（Ｌ２、リンカーＬ２、リンカー－２）と連結することができる。特定の実施形態において、リンカーＬ２は、Ｅ３ＬＢ部分に共有結合し、ＰＢ部分に共有結合し、したがってＣＩＤＥを構成する。
特定の実施形態において、Ｌ２部分は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１９／１９５２０１号に開示されているリンカーから選択することができる。
Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基は、リンカーの化学的性質に対して適切かつ安定である任意の基を介してリンカー基に共有結合していてもよいが、特定の態様では、Ｌ２は、アミド、エステル、チオエステル、ケト基、カルバメート（ウレタン）又はエーテルを介してＥ３ＬＢ基及びＰＢ基に独立して共有結合しており、これらの基の各々は、Ｅ３ＬＢ基及びＰＢ基のどこかに挿入されて、Ｅ３ＬＢ基のユビキチンリガーゼへの結合及びＰＢ基のＢＲＭ標的タンパク質への結合が分解されるのを可能にし得る。換言すれば、本明細書に示されるように、リンカーは、Ｅ３ＬＢ及びＰＢのそれぞれの結合パートナーへの結合を調節するように設計され、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに接続され得る。
特定の実施形態において、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、Ｌ２は、式：
（式中、Ｒ４は、水素又はメチルである）
（式中、ｚは、１又は０であり、
Ｇは、
又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、並びに
は、ＰＢへの結合点である）
を有する。
Ｌ２ａの特定の実施形態において、Ｒ４は水素である。
Ｌ２ａの特定の実施形態において、Ｒ４はメチルである。
Ｌ２ａの特定の実施形態において、Ｒ４はメチルであり、以下：
のように、メチルは、それが結合しているピペラジンに対して配向される。
Ｌ２ｃの特定の実施形態において、ｚは０である。
Ｌ２ｃの特定の実施形態において、ｚは１である。
ここでＡｂ－ＣＩＤＥを参照すると、Ａｂ－ＣＩＤＥは単一の抗体を含むことができ、単一の抗体は１つを超えるＣＩＤＥを有することができ、各ＣＩＤＥはリンカーＬ１を介して抗体に共有結合している。「ＣＩＤＥ負荷」は、抗体あたりのＣＩＤＥ部分の平均数である。ＣＩＤＥ負荷は、抗体（Ａｂ）あたり１～２０個のＣＩＤＥ（Ｄ）の範囲であり得る。すなわち、Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐのＡｂ－ＣＩＤＥの式において、ｐは、約１～約２０、約１～約８、約１～約５、約１～約４、又は約１～約３の値を有する。リンカーＬ１を介して抗体に共有結合した各ＣＩＤＥは、同じ又は異なるＣＩＤＥであり得て、抗体に共有結合した任意の他のＬ１と同じタイプ又は異なるタイプのリンカーを有し得る。ある特定の実施形態において、Ａｂはシステイン操作抗体であり、ｐは約２である。
コンジュゲート反応からのＡｂ－ＣＩＤＥの調製物中の抗体あたりのＣＩＤＥの平均数は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、電気泳動及びＨＰＬＣなどの従来の手段によって特性評価され得る。ｐに関するＡｂ－ＣＩＤＥの定量的分布も決定され得る。ＥＬＩＳＡにより、Ａｂ－ＣＩＤＥの特定の調製物中のｐの平均値を決定することができる（Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４年）「Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」１０：７０６３－７０７０頁；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎら（２００５年）「Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．」１１：８４３－８５２頁）。しかしながら、ｐの値の分布は、抗体－抗原結合及びＥＬＩＳＡの検出限界によって識別できない。また、Ａｂ－ＣＩＤＥの検出のためのＥＬＩＳＡアッセイは、ＣＩＤＥ部分が抗体のどこに結合しているか（重鎖若しくは軽鎖断片、又は特定のアミノ酸残基など）を決定しない。いくつかの例では、ｐが他のＣＩＤＥ負荷を有するＡｂ－ＣＩＤＥからの特定の値である均一なＡｂ－ＣＩＤＥの分離、精製及び特徴付けは、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段によって達成され得る。
いくつかのＡｂ－ＣＩＤＥの場合、ｐは抗体上の結合部位の数によって制限され得る。例えば、抗体は、１個のみ若しくはいくつかのシステインチオール基を有し得るか、又は、１個のみ若しくはいくつかの十分に反応性のチオール基を有し得、それによって、リンカーが結合され得る。Ｌ１－Ｄを接続するためのＡｂ上の別の反応部位は、リジン残基のアミン官能基である。ｐの値は、約１～約２０、約１～約８、約１～約５、約１～約４、約１～約３の値を含み、ｐは２に等しい。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の主題は、ｐが約１、２、３、４、５、６、７、又は８である任意のＡｂ－ＣＩＤＥに関する。
一般に、コンジュゲーション反応中に抗体にコンジュゲート化されるＣＩＤＥ部分は理論上の最大値よりも少ない。抗体は、例えば、リンカーＬ１－ＣＩＤＥ基（Ｌ１－Ｄ）又はリンカー試薬と反応しない多くのリジン残基を含み得る。最も反応性の高いリジン基のみがアミン反応性リンカー試薬と反応し得る。また、最も反応性のシステインチオール基のみが、チオール反応性リンカー試薬又はリンカーＬ１－ＣＩＤＥ基と反応してもよい。一般に、抗体は、存在するとしても、ＣＩＤＥ部分に連結され得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有しない。化合物の抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、部分的又は完全な還元条件下で、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はＴＣＥＰなどの還元剤で還元されなければならない。しかしながら、ＣＡＲのＣＩＤＥ負荷（ＣＩＤＥ／抗体比、「ＣＡＲ」）は、以下を含むいくつかの異なる方法で制御され得る：（ｉ）抗体と比較してモル過剰のＬ１－ＣＩＤＥ基又はリンカー試薬を限定すること、（ｉｉ）コンジュゲート反応時間又は温度を限定すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分又は限定的還元条件によって制御されてもよい。
ＩＩＩ．Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物
本明細書に記載のＣＩＤＥは、リンカーＬ１に共有結合してＬ１－ＣＩＤＥ基を調製することができる。これらの化合物は、以下の一般式を有する：
（Ｌ１－Ｄ）、
式中、Ｄは構造Ｅ３ＬＢ－Ｌ２－ＰＢを有するＣＩＤＥであり、ここでＥ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合したＥ３リガーゼ結合基であり、Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、ＰＢは、Ｌ２に共有結合したＢＲＭタンパク質結合基であり、Ｌ１はリンカーであり、Ｄに共有結合されている。これらの各成分の有用な基は上記のとおりである。
特定の実施形態において、Ｌ１は、ペプチド模倣リンカーを含む、本明細書の他の箇所に記載されるとおりである。これらの実施形態において、Ｌ１－ＣＩＤＥは下記式：
（式中、
Ｓｔｒはストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、結合又はＤ、すなわちＣＩＤＥ部分に共有結合したスペーサー単位であり、
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、又は（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ４及びＲ５は、それぞれ独立して、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＯＣＨ２－であるか、又はＲ４及びＲ５はＣ３～Ｃ７シクロアルキル環を形成してもよく、
ＤはＣＩＤＥ部分である）
を有する。
Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物を下記式：
（式中、６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン；Ｒ４及びＲ５は、一緒に、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキル環を形成し、ＤはＣＩＤＥである）
で表すことができる。
Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物を下記式：
（式中、Ｒ１、Ｒ４及びＲ５は本明細書の他の箇所に記載されるとおりであり、ＤはＣＩＤＥ部分である）
で表すことができる。
Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物を下記式：
（式中、
Ｓｔｒはストレッチャー単位であり、
Ｓｐは、Ｄ、すなわちＣＩＤＥ部分に共有結合した任意のスペーサー単位であり、
Ｙは、ヘテロアリール、アリール、－Ｃ（Ｏ）Ｃ１～Ｃ６アルキレン、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－ＮＨ２、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－ＮＨ－ＣＨ３、Ｃ１～Ｃ６アルキレン－Ｎ－（ＣＨ３）２、Ｃ１～Ｃ６アルケニル、又はＣ１～Ｃ６アルキレニルであり、
Ｒ１は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（ＮＨ）ＮＨ２、又は（Ｃ１～Ｃ１０アルキル）ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ２であり、
Ｒ３及びＲ２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１０アルキル、アリールアルキル、若しくはヘテロアリールアルキルであるか、又はＲ３及びＲ２は、一緒に、Ｃ３～Ｃ７シクロアルキルを形成してもよく；並びに
ＤはＣＩＤＥ部分である）
で表すことができる。
Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物を下記式：
（式中、Ｒ６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレンであり、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は本明細書の他の箇所に記載されるとおりであり、ＤはＣＩＤＥ部分である）
で表すことができる。
Ｌ１－ＣＩＤＥ化合物を下記式：
（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＲ３は本明細書の他の箇所に記載されるとおりであり、ＤはＣＩＤＥ部分である）
で表すことができる。
上記のＬ１－ＣＩＤＥ化合物のいずれにおいても、Ｓｔｒは下記式：
（式中、Ｒ６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｏ－（Ｃ１～Ｃ８アルキレン）、及びＣ１～Ｃ１０アルキレン－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒａ）－Ｃ２－Ｃ６アルキレンからなる群から選択され、各アルキレンは、ハロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメチル、ジフルオロメチル、アミノ、アルキルアミノ、シアノ、スルホニル、スルホンアミド、スルホキシド、ヒドロキシ、アルコキシ、エステル、カルボン酸、アルキルチオ、Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｃ４～Ｃ７ヘテロシクロアルキルアリール、アリールアルキル、ヘテロアリールアルキル及びヘテロアリールからなる群から選択される１～５個の置換基で置換されていてもよい；各Ｒａは、独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、Ｓｐは、－Ａｒ－Ｒｂ－であり、ここでＡｒはアリール又はヘテロアリールであり、Ｒｂは（Ｃ１～Ｃ１０アルキレン）Ｏ－である）
を有することができる。
特定のＬ１－ＣＩＤＥ化合物において、Ｒ６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐは－Ａｒ－Ｒｂ－であり、ここでＡｒはアリールであり、Ｒｂは（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）Ｏ－であり、又はＲ６は－（ＣＨ２）であり、ｑは１～１０である。
上記のＬ１－ＣＩＤＥ化合物のいずれにおいても、Ｓｔｒは下記式：
（式中、
は抗体にコンジュゲートすることができる部分を示し、Ｒ７は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン、Ｃ１～Ｃ１０アルキレン－Ｏ、Ｎ（Ｒｃ）－（Ｃ２～Ｃ６アルキレン）－Ｎ（Ｒｃ）及びＮ（Ｒｃ）－（Ｃ２－Ｃ６アルキレン）から選択される；各Ｒｃは、独立して、Ｈ又はＣ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｓｐは、－Ａｒ－Ｒｂ－であり、ここでＡｒはアリール若しくはヘテロアリールであり、Ｒｂは、（Ｃ１～Ｃ１０アルキレン）Ｏ－であり、又はＲ６は、Ｃ１～Ｃ１０アルキレンであり、Ｓｐは－Ａｒ－Ｒｂ－であり、Ａｒはアリール、Ｒｂは（Ｃ１～Ｃ６アルキレン）Ｏ－である）
を有することができる。
Ｌ１－ＣＩＤＥは、下記式を有することができ、式中、各例において、ＤはＣＩＤＥ部分である。
ここでＣＩＤＥのＰＢ基を参照すると、特定の実施形態では、ＰＢは本明細書の他の箇所に記載されているとおりである。ここでＣＩＤＥのＥ３ＬＢ基を参照すると、Ｅ３ＬＢは本明細書の他の箇所に記載されているとおりである。Ａｂ－ＣＩＤＥは、ＰＢ、Ｅ３ＬＢ、Ａｂ、Ｌ１及びＬ２の任意の組み合わせを含むことができる。
本明細書に開示される主題を考慮して、当業者は、Ｌ１及びＬ２の結合点が変化し得ることを理解するであろう。さらに、－Ｓｔｒ－（ＰＭ）－Ｓｐ－などのリンカーの部分を交換することができる。さらに、リンカーＬ１の一部を交換することができる。ＣＩＤＥ、抗体及び交換され得る他のリンカーへのＬ１リンカー結合の非限定的な例としては、表１～Ｌ１に示されるものが挙げられるが、これらに限定されない。
特定の実施形態において、リンカーＬ１は、異なる位置、Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙ（Ｒ３基由来）でＥ３ＬＢ残基に共有結合することができる。
からなる群から選択され、ここで－－－－は、単結合又は二重結合であり、
Ａｂは、リンカーである少なくとも１つのＬ１に共有結合した抗体であり、
Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｖは、それぞれ独立して、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、
Ｌ１－Ｙは、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、並びに
ｑは１又は０である。
リンカーＬ１は、リンカーＬ１と抗体との間の共有結合がジスルフィド結合である限り、抗体の任意の位置に結合することができる。
複数の実施形態において、抗体Ａｂは、それぞれリンカーＬ１を介して、１～８個の化学的分解誘発物質（ＣＩＤＥ）Ｄにコンジュゲート化される。
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ、ここでｐは１～８である
Ｄは、以下のように、リンカーＬ２を介して標的タンパク質結合（ＰＢ）リガンドに連結されたＥ３リガーゼ結合（Ｅ３ＬＢ）リガンドを含む。
Ｅ３ＬＢ－Ｌ２－ＰＢ
複数の実施形態において、Ｌ１は、抗体の操作されたＣｙｓ残基の硫黄とジスルフィド結合を形成して、ＣＩＤＥをＡｂに連結する。
複数の実施形態において、抗体は、Ｌ１を介してＣＩＤＥのＥ３ＬＢリガンドに連結される。
複数の実施形態において、Ｌ１は、ＣＩＤＥのＥ３ＬＢリガンドのＥ３ＬＢリガンド残基に連結される。
例えば、実施形態では、Ｌ１は、以下：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、Ｌ１はＬ１ｂ及びＬ１ｃから選択される）
に示すように、結合点（Ｌ１－Ｑ）でＢＲＭの一部に共有結合している。
実施形態では、Ｌ１は、以下：
（式中、Ｘは水素又はハロゲンであり、Ｌ１はＬ１ｂ及びＬ１ｃから選択される）
に示すように、結合点（Ｌ１－Ｑ’）でＢＲＭの一部に共有結合している。
実施形態では、Ｌ１は、以下：
（式中、Ｌ１は、Ｌ１ａ、Ｌ１ｂ及びＬ１ｃから選択される）
に示すように、結合点（Ｌ１－Ｑ’）でＥ３ＬＢの一部に共有結合している。
ここで、本明細書中に記載されるようなＡｂ－ＣＩＤＥ及びＬ１－ＣＩＤＥ化合物を参照すると、これらは固体形態又は液体形態で存在することができる。固体状態では、それは結晶形態若しくは非結晶形態で、又はそれらの混合物として存在し得る。当業者は、薬学的に許容され得る溶媒和物が結晶性又は非結晶性化合物のために形成され得ることを理解するであろう。結晶性溶媒和物では、結晶化中に溶媒分子が結晶格子に組み込まれる。溶媒和物は、エタノール、イソプロパノール、ＤＭＳＯ、酢酸、エタノールアミン、又は酢酸エチルなどであるがこれらに限定されない非水性溶媒を含んでもよく、又は結晶格子に組み込まれる溶媒として水を含んでもよい。水が結晶格子に組み込まれる溶媒である溶媒和物は、一般的に水和物と呼ばれる。水和物には、化学量論的な水和物、並びに様々な量の水を含有する組成物が含まれる。本明細書に記載される主題は、全てのそのような溶媒和物を含む。
当業者は、その様々な溶媒和物を含む結晶形態で存在する本明細書に記載される特定の化合物及びＡｂ－ＣＩＤＥが多型（すなわち、異なる結晶構造で生じる能力）を示し得ることをさらに理解するであろう。これらの異なる結晶形態は、典型的には「多形」として知られている。本明細書に開示される主題は、全てのそのような多形を含む。多形は、同じ化学組成を有するが、充填、幾何学的配置、及び結晶性固体状態の他の記述特性が異なる。したがって、多形は、形状、密度、硬度、変形能、安定性、及び溶解特性などの異なる物理的特性を有し得る。多形は、典型的には、異なる融点、ＩＲスペクトル、及びＸ線粉末回折パターンを示し、これを同定に使用することができる。当業者は、例えば、化合物の製造に使用される反応条件又は試薬を変更又は調整することによって、異なる多形が製造され得ることを理解するであろう。例えば、温度、圧力又は溶媒の変化は、多形をもたらし得る。さらに、ある多形は、特定の条件下で別の多形に自発的に変換し得る。
本明細書中に記載される化合物及びＡｂ－ＣＩＤＥ又はその塩は、立体異性体型（例えば、それは１つ以上の不斉炭素原子を含有する）で存在し得る。各立体異性体（鏡像異性体及びジアステレオマー）及びこれらの混合物は、本明細書に開示されている主題の範囲に含まれる。同様に、式（Ｉ）の化合物又は塩は、その式で示すもの以外の互変異性形態で存在することができ、これらもまた、本明細書にて開示する主題の範囲に含まれると理解されている。本明細書にて開示する主題は、本明細書で記載する全ての具体的な基の組み合わせ及び部分集合を含むものと理解されるべきである。本明細書に開示されている主題の範囲には、立体異性体の混合物の他に、精製された鏡像異性体又は鏡像異性体的に／ジアステレオマー的に濃縮された混合物が含まれる。本明細書にて開示する主題は、本明細書で上記に定義される全ての具体的な基の組み合わせ及び部分集合を含むものと理解されるべきである。
本明細書に開示されている主題には、１つ又は複数の原子が、通常自然に見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子により置き換えられているという事実を除いて本明細書に記載されている化合物の同位体標識された形態も含まれる。本明細書に記載されている化合物及びその薬学的に許容され得る塩の中に取り込まれることができる同位体の例としては、水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素、ヨウ素及び塩素の同位体、例えば、２Ｈ、３Ｈ、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、３６Ｃｌ、１２３Ｉ及び１２５Ｉが挙げられる。
上述の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含有する、本明細書中に開示されるような化合物及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びにその薬学的に許容され得る塩は、本明細書中に開示される主題の範囲内である。同位体標識化合物、例えば３Ｈ、１４Ｃなどの放射性同位体が組み込まれたものが本明細書に開示されており、薬物及び／又は基質組織分布アッセイに有用である。トリチウム標識（即ち、３Ｈ）及び炭素１４（即ち１４Ｃ）同位体は、調製及び検出可能性の容易さから、一般に、使用される。１１Ｃ及び１８Ｆ同位体はＰＥＴ（陽電子放出断層撮影）において有用であり、１２５Ｉ同位体はＳＰＥＣＴ（単一光子放出コンピュータ断層撮影）において有用であり、これらは全て脳撮像において有用である。さらに、重水素、すなわち２Ｈなどのより重い同位体による置換は、より大きな代謝安定性から生じる特定の治療上の利点、例えばインビボ半減期の増加又は必要投与量の減少をもたらすことができ、したがって、いくつかの状況では好ましい場合がある。同位体標識化合物を、一般に、容易に入手可能な同位体標識試薬を非同位体標識試薬の代わりに用いることによって、以下のスキーム及び／又は実施例に開示される手順を行うことによって調製することができる。
いくつかの実施形態において、Ｄは、
であり、式中、Ｌ１は、Ｌ１－Ｑ、Ｌ１－Ｑ’、Ｌ１－Ｓ、Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙからなる群から選択される１つの結合点でＤに共有結合している。Ｌ１の結合点ではないＬ１－Ｑ、Ｌ１－Ｑ’、Ｌ１－Ｓ、Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙのそれぞれは、その元の価数を保持することを理解されたい。例えば、Ｌ１がＬ１－Ｑ’に結合している場合、Ｌ１－Ｑ、Ｌ１－Ｓ、Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ又はＬ１－Ｙでは結合しておらず、Ｄは構造：
を有する。
複数の実施形態において、Ｌ１は、構造
（式中、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄは、それぞれ独立して、Ｈ、置換されていてもよい分岐又は直鎖Ｃ１－Ｃ５アルキル、及び置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択されるか、又は、ＲａとＲｂが、若しくはＲｃとＲｄが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキル環又は３～６員ヘテロシクロアルキル環を形成し、ここで
はＡｂとの結合点である）
を有するＬ１ａである。
複数の実施形態において、Ｌ１ａは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ及びＲｄの少なくとも１つは、メチルである。
複数の実施形態において、Ｌ１ａは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ及びＲｄの少なくとも２つは、メチルである。
複数の実施形態において、Ｌ１ａは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｒａ及びＲｃはそれぞれメチルであり、Ｒｂ及びＲｄはそれぞれ水素である。
複数の実施形態において、Ｌ１ａは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｒａ、Ｒｃ及びＲｄはそれぞれメチルであり、Ｒｂは水素である。
複数の実施形態において、Ｌ１ａは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｒａ及びＲｂはそれぞれ水素であり、Ｒｃ及びＲｄは、それらが結合している炭素原子と一緒になって、置換されていてもよい３～６員ヘテロシクロアルキル環を形成する。複数の実施形態において、３～６員ヘテロシクロアルキル環は、置換されていてもよいピペリジン環である。複数の実施形態において、ピペリジン環は、メチルで置換されている。
複数の実施形態において、Ｌ１ａはＬ１－Ｔに結合しており、ここでＲａ、Ｒｂ、Ｒｃ及びＲｄのうち少なくとも２つはメチルであり、リン酸部分はＬ１－Ｑに結合しており、リン酸部分は構造：
（式中、ｅは１である）
を有する。
複数の実施形態において、Ｌ１は、構造
（式中、
Ｚ及びＺ１は、それぞれ独立して、Ｃ１－１２アルキレン又は－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－であり、ここでｇは０、１又は２であり、ｈは１～５であり、ＲｚはＨ又はＣ１－３アルキルであり、ｄは、０、１又は２であり、
はＡｂへの結合点である）
を有するＬ１ｂである。
複数の実施形態において、Ｚ及びＺ１は、それぞれ独立して、Ｃ１－１２アルキレンであり、Ｒｚは、水素であり、ｄは、０又は１である。
複数の実施形態において、Ｚは、Ｃ２アルキレンであり、Ｚ１は、Ｃ５アルキレンであり、Ｒｚは、水素であり、ｄは、０又は１である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｂはＬ１－Ｑに結合しており、ｄは１である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｂはＬ１－Ｔに結合しており、ｄは０である。
複数の実施形態において、Ｌ１は、構造
（式中
Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレン又は－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－であり、ここでｇは０、１又は２であり、ｈは１～５であり、
ｗは、０、１、２、３、４又は５であり、ここで
はＡｂへの結合点であり、
Ｊは、水素、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（＝ＮＨ）－ＮＨ２であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、
Ｋは、－ＣＨ２－、－ＣＨ（Ｒ）－、－ＣＨ（Ｒ）－Ｏ－＾、－Ｃ（Ｏ）－、＾－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－ＣＨ（Ｒ）－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＾、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－＾、＾－Ｏ－Ｃ（Ｌ１ｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｘＲｙ－、＾－Ｃ（Ｌ１ｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｘＲｙ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ－［ＣＨ２］ｑ－Ｏ－＾、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ－［ＣＨ２］ｑ－＾から選択され、ここで＾は、ＣＩＤＥへの結合を示し、Ｒは、水素、Ｃ１－３アルキル、Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）、－Ｏ－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）又はＣ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ｑは０、１、２又は３であり、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択されるか、又はＲｘ及びＲｙは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択されるか、又はＲａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、及び
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシルである）
を有するＬ１ｃである。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｋは、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｋは、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれメチルであり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と共に、Ｃ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、Ｋは、－ＣＨ２－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれメチルであり、Ｋは、－ＣＨ２－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と共に、Ｃ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及び８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、０であり、Ｊは、水素であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、０であり、Ｊは、水素であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、０、Ｊは、水素であり、Ｋは、－ＣＨ２－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、０、Ｊは、水素であり、Ｋは、－ＣＨ２－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｋは、－ＣＨ（Ｒ）－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、ここでＲは、Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、２であり、Ｊは、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２であり、Ｋは、－ＣＨ（Ｒ）－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、ここでＲは、Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいピペラジンを形成し、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、Ｋは、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｚ２は、Ｃ５アルキレンであり、ｗは、３であり、Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれメチルであり、Ｋは、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、Ｒａ及びＲｂは、それぞれが結合している炭素と共に、Ｃ４シクロアルキルを形成し、Ｒ７及び８は、それぞれ独立して、水素である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｑに結合しており、Ｋは、－ＣＨ２－である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｑに結合しており、Ｋは、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｓに結合しており、Ｋは、－ＣＨ２－である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｔに結合しており、Ｋは、－ＣＨ（Ｒ）－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－であり、ここでＲは、Ｃ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成する。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｕに結合している。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｖに結合している。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｙに結合しており、Ｋは、－ＣＨ２－である。
複数の実施形態において、Ｌ１ｃは、Ｌ１－Ｑに結合しており、ここでＫは、－ＣＨ２－であり、リン酸部分は、Ｌ１－Ｔに結合しており、リン酸部分は、構造：
（式中、ｅは０である）
を有する。
特定の実施形態において、本明細書に記載の主題は、以下のＬ１－ＣＩＤＥを含む。
本明細書に開示される主題は、以下の非限定的な実施形態を含む。
１．化学構造
Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
［式中、
Ｄは、構造Ｅ３ＬＢ－Ｌ２－ＰＢを有するＣＩＤＥであり、
Ｅ３ＬＢは、Ｌ２に共有結合しており、該Ｅ３ＬＢは、式：
（式中、
Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃは、それぞれ独立して、水素若しくはＣ１－５アルキルであるか；又は、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃのうちの２つは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ１－５シクロアルキルを形成し、
Ｒ２は、Ｃ１－５アルキルであり、
Ｒ３は、シアノ、
からなる群から選択され、ここで－－－－は、単結合又は二重結合であり、
Ｙ１及びＹ２の一方は－ＣＨであり、Ｙ１及びＹ２の他方は－ＣＨ又はＮである）
を有し、
Ｌ２は、Ｅ３ＬＢ及びＰＢに共有結合したリンカーであり、該Ｌ２は、式：
（式中、Ｒ４は、水素又はメチルである）
（式中、ｚは、１又は０であり、
Ｇは、
又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、並びに
は、ＰＢへの結合点である）
を有し、
ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、構造：
を有し、
Ａｂは、リンカーである少なくとも１つのＬ１に共有結合した抗体であり、
Ｌ１－Ｔ、Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｖは、それぞれ独立して、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、
Ｌ１－Ｙは、水素、又はＡｂ及びＤに共有結合したＬ１リンカーであり、
ｑは、１又は０であり、及び、
ｐは、約１～約８の値を有する］
を有するコンジュゲート。
２．Ｒ３がシアノである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
３．Ｒ３が
である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
４．Ｒ３が
である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
５．Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃが、それぞれ独立して、水素又はメチルである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
６．Ｒ１Ａ及びＲ１Ｂがそれぞれメチルである、実施形態５に記載のコンジュゲート。
７．Ｅ３ＬＢが式：
を有する、実施形態６のコンジュゲート。
８．Ｌ１が、各場合において、独立して、
（式中、
Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２；－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２；－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３；又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、
Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素又はＣ１－５アルキルであり、又は、Ｒ５及びＲ６は、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、
Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシであり、
ここで
はＡｂへの結合点である）
からなる群から選択されるリンカーである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
９．構造：
を有する、実施形態８に記載のコンジュゲート。
１０．Ｌ１－Ｔがリンカーである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１１．Ｌ１－Ｕ又はＬ１－Ｖがリンカーである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１２．
Ｌ１－Ｙがリンカーであり、ｑが１である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１３．Ｌ１－Ｙが構造
を有する、実施形態１２に記載のコンジュゲート。
１４．Ｌ１－Ｔはリンカーであり、
Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｔはそれぞれ水素であり、並びに
ｑは０である
実施形態１に記載のコンジュゲート。
１５．ｚが０である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１６．ｚが１である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１７．Ｒ２が、水素、メチル、エチル又はプロピルである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
１８．Ｒ２がメチルである、実施形態１７に記載のコンジュゲート。
１９．Ｒ２が
としてＥ３ＬＢに結合している、実施形態１８に記載のコンジュゲート。
２０．Ｙ１及びＹ２がそれぞれ－ＣＨである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
２１．Ｙ１がＮであり、Ｙ２が－ＣＨである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
２２．Ｙ１が－ＣＨであり、Ｙ２がＮである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
２３．Ｒ４が水素である、実施形態１に記載のコンジュゲート。
２４．Ｒ４がメチルである、実施形態１に記載のコンジュゲート。
２５．Ｒ４が以下
のメチルである、実施形態２４に記載のコンジュゲート。
２６．Ａｂが、ＣＤ７１、Ｔｒｏｐ２、ＮａＰｉ２ｂ、Ｌｙ６Ｅ、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ、及びＣＤ２２からなる群から選択される１つ又は複数のポリペプチドに結合する抗体である、実施形態１のコンジュゲート。
２７．Ａｂが、ＣＤ７１及びＴｒｏｐ２からなる群から選択される１つ又は複数のポリペプチドに結合する抗体である、実施形態２６のコンジュゲート。
２８．ＰＢが、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、構造：
を有する、実施形態１のコンジュゲート。
２９．式Ｉａ：
（式中、
Ｌ１－Ｔは、Ａｂに共有結合したリンカーであり、
Ａｂは、ＣＤ７１、Ｔｒｏｐ２、ＮａＰｉ２ｂ、Ｌｙ６Ｅ、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ、及びＣＤ２２からなる群から選択される１つ又は複数のポリペプチドに結合する抗体であり、
ＰＢは、Ｌ２に共有結合したタンパク質結合基であり、構造：
を有し、
Ｌ２は、Ｌ２ａ、Ｌ２ｂ及びＬ２ｃからなる群から選択され；
及び、
ｐは、約４～約８の値を有する）
を有する実施形態１のコンジュゲート。
３０．Ｌ１－Ｔが、
（式中、
はＡｂへの結合点である）
からなる群から選択されるリンカーである、実施形態２９に記載のコンジュゲート。
３１．Ｌ２がＬ２ａである、実施形態２９に記載のコンジュゲート。
３２．Ｇが
である、実施形態３１に記載のコンジュゲート。
３３．Ｒ４がメチルである、実施形態３１に記載のコンジュゲート。
３４．ＰＢが
である、実施形態２９のコンジュゲート。
３５．ｐが約５～約７の値を有する、実施形態２９に記載のコンジュゲート。
３６．構造：
を有する、実施形態１に記載のコンジュゲート。
３７．構造：
を有する、実施形態１に記載のコンジュゲート。
３８．実施形態１に記載のコンジュゲートと、１つ又は複数の薬学的に許容され得る賦形剤と、を含む医薬組成物。
３９．治療を必要とするヒトにおいて疾患を治療する方法であって、有効量の実施形態１に記載のコンジュゲート又は実施形態３８に記載の組成物を前記ヒトに投与することを含む方法。
４０．疾患ががんである、実施形態３９の方法。
４１．がんがＢＲＭ依存性である、実施形態４０に記載の方法。
４２．がんが非小細胞肺がんである、実施形態４０に記載の方法。
４３．対象における標的ＢＲＭタンパク質のレベルを低下させる方法であって、
実施形態１に記載のコンジュゲート又は実施形態３８に記載の組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＰＢ部分が前記標的ＢＲＭタンパク質に結合し、ユビキチンリガーゼが前記結合した標的ＢＲＭタンパク質の分解をもたらし、前記ＢＲＭ標的タンパク質のレベルが低下する、方法。
ＩＶ．製剤
本明細書に記載される治療用Ａｂ－ＣＩＤＥの薬学的製剤は、非経口投与、例えば、薬学的に許容され得る非経口賦形剤を用いたボーラス、静脈内、腫瘍内注射のために、及び単位投与量の注射可能な形態で調製することができる。所望の純度を有するＡｂ－ＣＩＤＥを、任意に、再構成のための凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、１つ又は複数の薬学的に許容され得る賦形剤（「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（１９８０年）第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編）と混合する。
Ａｂ－ＣＩＤＥを、医薬組成物として標準的な製薬慣行に従って製剤化することができる。この態様によれば、１つ又は複数の薬学的に許容され得る賦形剤と会合したＡｂ－ＣＩＤＥを含む医薬組成物が提供される。
典型的な製剤は、Ａｂ－ＣＩＤＥを担体及び／又は希釈剤などの賦形剤と混合することによって調製される。好適な担体、希釈剤、及び他の賦形剤は当業者に周知であり、炭水化物、ワックス、水溶性及び／又は水膨潤性ポリマー、親水性又は疎水性材料、ゼラチン、油、溶媒、並びに水などの材料を含む。使用される特定の担体、希釈剤、又は他の賦形剤は、Ａｂ－ＣＩＤＥが適用される手段及び目的に依存する。溶媒は、一般的に、哺乳動物に投与することが安全（ＧＲＡＳ）であると当業者によって認識されている溶媒に基づいて選択される。
一般的に、安全な溶媒は、水及び水に可溶性又は混和性である他の非毒性溶媒等の非毒性水性溶媒である。好適な水性溶媒としては、水、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（例えば、ＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００）等、及びそれらの混合物を含む。許容され得る希釈剤、担体、賦形剤及び安定化剤は、用いられる投与量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、ホスフェート、シトレート及びその他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；メチル又はプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む単糖類、二糖類及びその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；並びに／又はＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）若しくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含む。
製剤はまた、Ａｂ－ＣＩＤＥの的確な提示を提供するか、又は医薬品の製造を補助するために、１つ以上の緩衝剤、安定化剤、界面活性剤、湿潤剤、潤滑剤、乳化剤、懸濁化剤、防腐剤、抗酸化剤、オペーク剤（ｏｐａｑｕｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、流動促進剤、加工助剤、着色剤、甘味剤、芳香剤、香味剤及び他の既知の添加剤も含み得る。製剤は、従来の溶解及び混合手順を使用して調製されてもよい。
製剤は、周囲温度で、適切なｐＨで、及び所望の度合いの純度で、生理学的に許容され得る担体、すなわち、用いられる用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性である担体と混合することによって行われてもよい。製剤のｐＨは、具体的な用途及び化合物の濃度に主に依存するが、約３～約８の範囲であってもよい。ｐＨ５の酢酸塩緩衝液中の製剤は、適切な実施形態である。
Ａｂ－ＣＩＤＥ製剤は無菌であり得る。特に、インビボ投与用に使用される製剤は、滅菌性でなければならない。かかる無菌化は、無菌濾過膜を通じた濾過によって容易に達成される。
Ａｂ－ＣＩＤＥは、通常、固体組成物、凍結乾燥製剤として、又は水溶液として保管され得る。
Ａｂ－ＣＩＤＥを含む医薬組成物は、充分な医学的実用性に合わせた様式で、すなわち、量、濃度、スケジュール、コース、賦形剤、及び投与経路で製剤化され、処方され、投与され得る。この文脈で考慮すべき要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に公知である他の要因が挙げられる。投与されるべき化合物の「治療的有効量」は、このような考慮によって管理され、凝固因子によって媒介される障害を予防、軽減又は治療するために必要な最小の量である。そのような量は、好ましくは、宿主に対して毒性である量、又は宿主を出血に対して著しくより感受性にする量を下回る。
Ａｂ－ＣＩＤＥは、容易に制御可能な薬物用量を提供し、所定のレジメンで患者コンプライアンスを可能にするように薬学的剤形に製剤化され得る。適用のための医薬組成物（又は製剤）は、薬物を投与するために使用される方法に応じて、多様な様式で包装されてもよい。一般的に、分配用物品は、薬学的製剤をその中に適した形態で配置した容器を含む。好適な容器は、当業者に周知であり、瓶（プラスチック及びガラス）、小袋（ｓａｃｈｅｔｓ）、アンプル、プラスチックバッグ、金属シリンダーなどの材料が挙げられる。容器は、パッケージの内容物への不用意なアクセスを防止するための不正開封防止アセンブリを含んでもよい。それに加えて、容器は、容器の内容物を説明するラベルをその上に配置している。ラベルは、適切な注意書きも含み得る。
医薬組成物は、水性又は油性の減菌注射用懸濁液などの減菌注射用調製物の形態であってもよい。この懸濁液は、上述されているこれらの好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、既知の技術に従って製剤化され得る。無菌注射可能調製物は、１，３－ブタンジオールなどの非毒性の非経口的に許容され得る希釈剤又は溶媒中の無菌注射可能溶液又は懸濁液でもあり得る。無菌注射可能調製物は、凍結乾燥された粉末としても調製され得る。利用され得る許容され得る賦形剤及び溶媒には、水、リンゲル液及び等張性塩化ナトリウム溶液がある。加えて、無菌の不揮発性油が、溶媒又は懸濁媒として慣習的に用いられ得る。この目的のために、合成モノグリセリド又は合成ジグリセリドを含むいかなる無刺激の不揮発性油も採用され得る。加えて、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において同様に使用され得る。
単一剤形を作製するために担体材料と組み合わせることができるＡｂ－ＣＩＤＥの量は、治療される宿主及び特定の投与様式に依存して変化し得る。例えば、ヒトへの経口投与を意図した徐放性製剤は、総組成物の約５～約９５％（重量：重量）まで変化し得る、適切かつ都合の良い量の担体材料と配合される、およそ１～１０００ｍｇの活性材料を含有し得る。医薬組成物は、投与のために容易に測定可能な量を提供するように調製され得る。例えば、静脈内注入が意図される水溶液は、約３０ｍＬ／時間の速度での好適な容量の注入が起こり得るように、１ミリリットルの溶液あたり約３～５００μｇの活性成分を含有し得る。
非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、及び製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質を含有し得る水性及び非水性の無菌注射溶液、並びに懸濁化剤及び増粘剤を含み得る水性及び非水性の無菌懸濁液が含まれる。
製剤は、単位用量又は複数回の用量容器、例えば、密封アンプル及びバイアルに包装されてもよく、使用直前に注射するために、例えば、水等の滅菌液体担体を添加するだけでよいフリーズドライ（凍結乾燥）条件で保管されてもよい。即席の注射溶液及び懸濁液を、前述の種類の滅菌粉末、顆粒及び錠剤から調製する。好ましい単位投与量製剤は、活性成分の本明細書に上記した一日用量又は一日単位副用量、又はその適切な画分を含有するものである。
主題は更に、上で定義した少なくとも１つの活性成分と、活性成分用の獣医用の担体を共に含む、獣医用組成物を提供する。獣医用担体は、本組成物の投与の目的に有用な材料であり、またさもければ不活性であるか、又は獣医学の技術分野において許容され得、活性成分と両立可能な固体、液体、又は気体材料であってもよい。これらの獣医用組成物は、非経口で、又は任意の他の所望の経路によって投与されてもよい。
Ｖ．適応症及び治療方法
本明細書にて開示するＡｂ－ＣＩＤＥは、ＢＲＭに関連する様々な疾患又は障害を治療するために使用可能であることが想倒される。治療に使用するためのＡｂ－ＣＩＤＥ又はＡｂ－ＣＩＤＥを含む組成物も本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、本明細書中に開示されるような疾患及び障害を治療又は予防するためのＡｂ－ＣＩＤＥ又はＡｂ－ＣＩＤＥを含む組成物が本明細書中に提供される。治療におけるＡｂ－ＣＩＤＥ又はＡｂ－ＣＩＤＥを含む組成物の使用も本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、本明細書に開示される疾患及び障害を治療又は予防するためのＡｂ－ＣＩＤＥの使用が本明細書で提供される。本明細書で開示される疾患及び障害を治療又は予防するための医薬品の製造におけるＡｂ－ＣＩＤＥ又はＡｂ－ＣＩＤＥを含む組成物の使用も本明細書で提供される。
一般に、治療される疾患又は障害は、ＢＲＭ依存性疾患又は障害、例えばがんなどの過剰増殖性疾患である。本明細書で治療されるがんの例には、ＢＲＭ依存性がんが含まれる。特定の実施形態において、がんは、非小細胞肺がんである。
特定の実施形態において、本明細書に記載の主題は、対象の標的ＢＲＭタンパク質のレベルを低下させる方法であって、
本明細書に記載のＡｂ－ＣＩＤＥ又は本明細書に記載のＡｂ－ＣＩＤＥを含む組成物を対象に投与することを含む方法に関し、ＰＢ部分は、標的ＢＲＭタンパク質に結合し、ユビキチンリガーゼは、結合した標的ＢＲＭタンパク質の分解をもたらし、ＢＲＭ標的タンパク質のレベルが低下する。
特定の実施形態において、上記のものなどの抗ＮａＰｉ２ｂ抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥは、固形腫瘍、例えば卵巣を治療する方法で使用される。特定の実施形態において、抗ＣＤ７１、Ｔｒｏｐ２、ＮａＰｉ２ｂ、Ｌｙ６Ｅ、ＥｐＣＡＭ、ＭＳＬＮ又はＣＤ２２抗体を含むＡｂ－ＣＩＤＥは、腫瘍又はがんを治療する方法において使用される。
Ａｂ－ＣＩＤＥは、治療される状態に適した任意の経路によって投与され得る。Ａｂ－ＣＩＤＥは、典型的には非経口的に、すなわち注入、皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内及び硬膜外に投与される。
Ａｂ－ＣＩＤＥは、単独で、又は治療において他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、Ａｂ－ＣＩＤＥを少なくとも１種のさらなる治療薬と同時投与することができる。上述のかかる併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別個の製剤中に含まれる）、及び個別投与を包含するが、この場合、Ａｂ－ＣＩＤＥの投与は、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与の前に、それと同時に、かつ／又はその後に行われ得る。Ａｂ－ＣＩＤＥはまた、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
Ａｂ－ＣＩＤＥ（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内を含み、局所治療に所望される場合、病巣内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、投与が短時間であるか、又は慢性的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路によるもの、例えば、静脈内注射又は皮下注射等の注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
疾患の予防又は治療のために、Ａｂ－ＣＩＤＥの適切な投与量（単独で又は１つ又は複数の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）は、治療される疾患の種類、Ａｂ－ＣＩＤＥの種類、疾患の重症度及び経過、Ａｂ－ＣＩＤＥが予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴及びＡｂ－ＣＩＤＥに対する応答、並びに主治医の裁量に依存する。Ａｂ－ＣＩＤＥは、好適には、患者に一度に又は一連の治療にわたって投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）のＡｂ－ＣＩＤＥが、例えば、１回以上の別個の投与によるか、又は連続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。数日間又はそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、治療は通常、疾患症候の所望の抑制が生じるまで続けられる。Ａｂ－ＣＩＤＥの１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組合せ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、間欠的に、例えば、毎週又は３週間に１回（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば約６回の用量を受けるように）投与され得る。最初の多めの投与量、それに続く１回以上の量の少ない用量を投与してよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
本明細書に記載の方法は、標的タンパク質を分解する方法を含む。特定の実施形態において、本方法が、対象にＡｂ－ＣＩＤＥを投与することを含み、標的タンパク質が分解される。タンパク質の分解レベルは、約１％～約５％；又は約１％～約１０％；又は約１％～約１５％；又は約１％～約２０％；約１％～約３０％；又は約１％～約４０％；約１％～約５０％；又は約１０％～約２０％；又は約１０％～約３０％；又は約１０％～約４０％；又は約１０％～約５０％；又は少なくとも約１％；又は少なくとも約１０％；又は少なくとも約２０％；又は少なくとも約３０％；又は少なくとも約４０％；又は少なくとも約５０％；又は少なくとも約６０％；又は少なくとも約７０％；又は少なくとも約８０％；又は少なくとも約９０％；又は少なくとも約９５％；又は少なくとも約９９％であり得る。
本明細書に記載の方法は、非小細胞肺がんなどの新生物組織の増殖を減少させる方法を含む。特定の実施形態において、本方法が、Ａｂ－ＣＩＤＥを対象に投与することを含み、新生物組織の増殖が低下する。低下のレベルは、約１％～約５％；又は約１％～約１０％；又は約１％～約１５％；又は約１％～約２０％；約１％～約３０％；又は約１％～約４０％；約１％～約５０％；又は約１０％～約２０％；又は約１０％～約３０％；又は約１０％～約４０％；又は約１０％～約５０％；又は少なくとも約１％；又は少なくとも約１０％；又は少なくとも約２０％；又は少なくとも約３０％；又は少なくとも約４０％；又は少なくとも約５０％；又は少なくとも約６０％；又は少なくとも約７０％；又は少なくとも約８０％；又は少なくとも約９０％；又は少なくとも約９５％；又は少なくとも約９９％であり得る。
ＶＩ．製造物品
別の態様では、本明細書に記載されるのは、製造品であり、例えば、上記の疾患及び障害の治療に有用な材料を含む「キット」が提供される。キットは、Ａｂ－ＣＩＤＥを含む容器を備える。本キットは、容器上の、又は容器に関連したラベル又は添付文書をさらに含んでもよい。「添付文書」という用語は、かかる治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、禁忌症についての情報、及び／又はその使用に関する警告を含む、治療薬の商用のパッケージに通例含まれる説明書を指すように使用される。
適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ブリスターパックなどが挙げられる。「バイアル」は、液体又は凍結乾燥調製物を保持するのに適した容器である。一実施形態において、バイアルは、単回使用バイアル、例えば、栓を有する２０ｃｃの単回使用バイアルである。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、状態を治療するのに有効なＡｂ－ＣＩＤＥ又はその製剤を保持してもよく、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静注溶液バッグ、又は皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。
組成物中の少なくとも１つの活性物質はＡｂ－ＣＩＤＥである。ラベル又は添付文書は、本組成物ががん等の選択された状態を治療するために使用されることを示す。さらに、ラベル又は添付文書は、治療される患者が、過剰増殖性障害、神経変性、心肥大、疼痛、片頭痛、又は神経外傷性疾患若しくは事象などの障害を有する患者であることを示すことができる。一実施形態において、ラベル又は添付文書は、Ａｂ－ＣＩＤＥを含む組成物を使用して、異常な細胞増殖に起因する障害を治療できることを示す。ラベル又は添付文書はまた、該組成物が他の障害を治療するために使用され得ることも示してもよい。これに代えて、又はこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液を含む第２の容器を更に備えていてもよい。他のバッファー、希釈剤、フィルタ、ニードル及びシリンジを含め、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
キットは、Ａｂ－ＣＩＤＥ及び存在する場合には第２の薬学的製剤の投与のための指示書をさらに含み得る。例えば、キットがＡｂ－ＣＩＤＥを含む第１の組成物と第２の薬学的製剤とを含む場合、キットは、キットを必要とする患者に対する、第１及び第２の医薬組成物の同時の、連続した、又は別個の投与に関する指示書をさらに含んでもよい。
別の実施形態において、キットは、Ａｂ－ＣＩＤＥの固体経口用形態（例えば錠剤又はカプセル）の送達に好適である。そのようなキットは、好ましくは、いくつかの単位投薬量を含む。そのようなキットは、それらの意図される使用の順序で配置された投薬量を有するカードを含み得る。そのようなキットの例は「ブリスターパック」である。ブリスターパックは包装業界において周知であり、医薬品の単位投与形態の包装に幅広く使用されている。所望される場合、治療スケジュール中の投薬量が投与され得る日を指定する、例えば数字、文字、若しくは他の印の形態での、又はカレンダーインサートを用いた記憶補助機構が提供され得る。
一実施形態によれば、キットは、（ａ）Ａｂ－ＣＩＤＥを含む第１の容器と、任意に（ｂ）第２の薬学的製剤を含有する第２の容器であって、該第２の薬学的製剤が抗過剰増殖活性を有する第２の化合物を含む、第２の容器と、を含むことができる。代替的又は追加的に、本キットは、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容され得る緩衝液を含む第３の容器をさらに備えてもよい。他のバッファー、希釈剤、フィルタ、ニードル及びシリンジを含め、商業的及びユーザの観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
キットがＡｂ－ＣＩＤＥと第２の治療剤を含む特定の他の実施形態において、キットは、分けられたボトル又は分けられたホイルパケット等の、別個の組成物を含有するための容器を備えてもよいが、しかしながら、その別個の組成物はまた、単一の分けられていない容器に含有されてもよい。典型的には、キットは、別個の成分の投与のための指示書を備える。キット形態は、別個の構成要素が好ましくは異なる剤形（例えば、経口及び非経口）で投与される場合、異なる投薬間隔で投与される場合、又は組み合わせの個々の構成成分の滴定が処方医師によって望まれる場合に、特に有利である。
ＶＩＩ．コンジュゲートの作製方法
合成経路
本明細書に記載の主題はまた、Ｌ１－ＣＩＤＥからＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥを調製する方法に関する。一般に、本方法は、抗体又はそのバリアント、突然変異、スプライスバリアント、インデル及び融合物を、抗体がＬ１－ＣＩＤＥ上の任意の利用可能な結合点に共有結合している条件下で、Ｌ１－ＣＩＤＥと接触させることを含み、Ａｂ－ＣＩＤＥが調製される。本明細書に記載の主題はまた、Ｌ１に共有結合したＡｂ－Ｌ１部分、すなわち抗体、又はそのバリアント、突然変異、スプライスバリアント、インデル及び融合体からＡｂ－ＣＩＤＥを調製する方法であって、Ａｂ－ＣＩＤＥがＡｂ－Ｌ１上の任意の利用可能な結合点に共有結合する条件下でＣＩＤＥをＡｂ－Ｌ１と接触させることを含み、Ａｂ－ＣＩＤＥが調製される方法に関する。本方法は、Ａｂ－ＣＩＤＥの日常的な単離及び精製をさらに含むことができる。
本明細書に記載される、ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ、並びにその他の化合物は、特に本明細書に含まれる説明に照らして、化学分野で周知のプロセスに類似するプロセス、及び以下に記載される他の複素環のプロセスを含む合成経路によって合成することができる：「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＩＩ」、Ｋａｔｒｉｔｚｋｙ及びＲｅｅｓ編、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（１９９７年）例として、第３巻；「Ｌｉｅｂｉｇｓ Ａｎｎａｌｅｎ ｄｅｒ Ｃｈｅｍｉｅ」第９巻１９１０～１６頁（１９８５年）；「Ｈｅｌｖｅｔｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ」第４１巻１０５２～６０頁（１９５８年）；「Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌ－Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ」第４０巻１２号第１３２８～３１頁（１９９０年）。出発材料は、一般に、Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）などの商業的供給源から入手可能であるか、又は当業者に周知の方法（例えば、Ｌｏｕｉｓ Ｆ．Ｆｉｅｓｅｒ ａｎｄ Ｍａｒｙ Ｆｉｅｓｅｒ，Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｖ．１－２３，Ｗｉｌｅｙ，Ｎ．Ｙ．（１９６７－２００６ ｅｄ．）、又はＢｅｉｌｓｔｅｉｎｓ Ｈａｎｄｂｕｃｈ ｄｅｒ ｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎ Ｃｈｅｍｉｅ，４，Ａｕｆｌ．ｅｄ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ、サプリメントを含む（Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎオンライン・データベースを介しても入手可能）を使用して容易に調製される。
ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びに本明細書に記載の他の化合物並びに必要な試薬及び中間体の合成に有用な合成化学変換及び保護基方法論（保護及び脱保護）は当技術分野で公知であり、例えば、Ｒ．Ｌａｒｏｃｋ，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９８９）；Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９９）；及びＬ．Ｐａｑｕｅｔｔｅ，ｅｄ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ（１９９５）及びその後続版に記載されるものを含む。ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びに他の化合物の調製において、中間体の遠隔官能性（例えば、一級アミン又は二級アミン）の保護が必要な場合がある。このような保護の必要性は、離れている官能基の性質及び調製方法の条件に応じて変わってくる。好適なアミノ保護基には、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ－ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢｚ又はＣＢＺ）、及び９－フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が含まれる。そのような保護の必要性は、当業者によって容易に決定される。保護基及びその用途の一般的な説明については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、ニューヨーク（１９９１年）を参照されたい。
一般手順及び実施例は、ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びに本明細書に記載の他の化合物を調製するための例示的な方法を提供する。当業者は、Ａｂ－ＣＩＤＥ及び化合物を合成するために他の合成経路が使用され得ることを理解するであろう。特定の出発物質及び試薬がスキーム、一般手順及び実施例に示され議論されているが、他の出発物質及び試薬を容易に置換して、種々の誘導体及び／又は反応条件を提供することができる。さらに、記載された方法によって調製された例示的な化合物の多くは、当業者に周知の従来の化学を使用して、本開示に照らしてさらに修飾することができる。
一般に、Ａｂ－ＣＩＤＥは、国際公開第２０１３／０５５９８７号；国際公開第２０１５／０２３３５５号；国際公開第２０１０／００９１２４号；国際公開第２０１５／０９５２２７号の手順に従って、ＣＩＤＥをＬ１リンカー試薬と連結してＬ１－ＣＩＤＥを調製し、Ｌ１－ＣＩＤＥを、本明細書に記載のシステイン操作抗体を含む抗体又はそのバリアント、突然変異、スプライスバリアント、インデル及び融合物のいずれかとコンジュゲートすることによって、調製することができる。あるいは、Ａｂ－ＣＩＤＥは、最初に、本明細書中に記載されるシステイン操作抗体を含む抗体又はそのバリアント、突然変異、スプライスバリアント、インデル及び融合体をＬ１リンカー試薬と結合させ、それを任意のＣＩＤＥとコンジュゲートさせることによって調製され得る。
以下の合成経路は、ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びに他の化合物及びその成分を調製する例示的な方法を記載する。ＣＩＤＥ、Ｌ１－ＣＩＤＥ及びＡｂ－ＣＩＤＥ並びに他の化合物及びその成分を調製するための他の合成経路は、本明細書の他の箇所に開示されている。
１．リンカーＬ１
リンカーＬ１に関して、スキーム１～４は、抗体Ａｂへのジスルフィド結合のための例示的なリンカーＬ１への合成経路を示す。Ａｂはジスルフィド結合を介してＬ１に接続され、ＣＩＤＥはＣＩＤＥ上の任意の利用可能な結合を介してＬ１に接続される。
スキーム１を参照して、１，２－ジ（ピリジン－２－イル）ジスルファン及び２－メルカプトエタノールを室温でピリジン及びメタノール中で反応させて、２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エタノールを得た。トリエチルアミン及びアセトニトリル中の４－ニトロフェニルカルボノクロリド酸塩によるアシル化により、４－ニトロフェニル２－（ピリジン－２－イルジスルファニル）エチルカーボネート９を得た。
スキーム２を参照して、無水ＤＭＦ／ＭｅＯＨ（２５ｍＬ／２５ｍＬ）中の１，２－ビス（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファン１０（１．０ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）の混合物に、ＨＯＡｃ（０．１ｍＬ）を添加し、続いて２－アミノエタンチオール塩酸塩１１（１８３ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で撹拌した後、一晩、これを真空下で濃縮して溶媒を除去し、残渣をＤＣＭ（３０ｍＬ×４）で洗浄すると、２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）エタンアミン塩酸塩１２が淡黄色固体（３００ｍｇ、６９．６％）として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．２８（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．５６（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．２４（ｓ，４Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．１５－３．１３（ｍ，２Ｈ），３．０８－３．０６（ｍ，２Ｈ）．
スキーム３を参照して、無水ＤＣＭ／ＣＨ３ＯＨ（２５０ｍＬ／２５０ｍＬ）中の１，２－ビス（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファン１０（９．６ｇ、３０．９７ｍｍｏｌ）及び２－メルカプトエタノール（１．２１ｇ、１５．４９ｍｍｏｌ）の溶液をＮ２下で２４時間室温で撹拌した。混合物を真空下で濃縮した後、残渣をＤＣＭ（３００ｍＬ）で希釈した。ＭｎＯ２（１０ｇ）を添加し、混合物を室温でさらに０．５時間撹拌した。混合物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝１００／１～１００／１）により精製して、２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）エタノール１３（２．２ｇ、６１．１％）を褐色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ９．３３（ｄ，Ｊ＝２．８ Ｈｚ，１Ｈ），８．３８－８．３５（ｄｄ，Ｊ＝９．２，２．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝９．２ Ｈｚ，１Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．８１－３．７６（ｑ，２Ｈ），３．０１（ｔ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，２Ｈ）．
１３（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）溶液に、ＤＩＥＡ（８３４ｍｇ、６．４５ｍｍｏｌ）を添加し、続いてＰＮＰカーボネート（ビス（４－ニトロフェニル）カーボネート、１．３１ｇ、４．３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を室温で４時間撹拌し、混合物を分取ＨＰＬＣ（ＦＡ）によって精製して、４－ニトロフェニル２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）エチルカーボネート１４（２７０ｍｇ、３３．１％）を淡褐色の油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ９．３０（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．４３－８．４０（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．３０－８．２８（ｍ，２Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．３９－７．３７（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｔ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．２１（ｔ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，２Ｈ）．
スキーム４を参照して、塩化スルフリル（ＤＣＭ中２．３５ｍＬの１．０Ｍの溶液、２．３５ｍｍｏｌ）を、乾燥ＤＣＭ（７．５ｍＬ）中、５－ニトロピリジン－２－チオール（３３４ｍｇ、２．１４ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、アルゴン雰囲気下、０℃（氷／アセトン）で滴下して加えた。反応混合物は黄色の懸濁液から黄色の溶液となり、それを室温まで温め、その後、２時間撹拌してから、溶媒を真空中蒸発によって除去して、黄色固体を得た。固体をＤＣＭ（１５ｍＬ）中に再溶解し、（Ｒ）－２－メルカプトプロパン－１－オール（２１３ｍｇ、２．３１ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＣＭ溶液（７．５ｍＬ）で、アルゴン雰囲気下、０℃で液滴処理した。反応混合物を室温まで温め、２０時間撹拌し、この時点でＬＣ／ＭＳによる分析は、保持時間１．４１分間（ＥＳ＋）ｍ／ｚ２４７（［Ｍ＋Ｈ］＋．、約１００％の相対強度）での実質的な生成物形成を示した。沈殿物をフィルタにかけることによって除去し、濾液を真空中で蒸発させて、橙色固体を得、これをＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で処理し、水酸化アンモニウム溶液で塩基性化した。混合物をＤＣＭ（３×２５ｍＬ）で抽出し、合わせた抽出物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）、ブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、フィルタにかけ、真空中で蒸発させて、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１％増分の勾配溶出：１００％のＤＣＭから９８：２ｖ／ｖのＤＣＭ／ＭｅＯＨ）による精製によって、（Ｒ）－２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）プロパン－１－オール１５を油状物（１１１ｍｇ、２１％の収率）として得た。
ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のトリホスゲン、Ｃｌ３ＣＯＣＯＯＣＣｌ３、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＣＡＳ Ｒｅｇ．番号３２３１５－１０－９（２４１ｍｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）の溶液に、（Ｒ）－２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）プロパン－１－オール１５（５００ｍｇ、２．０３ｍｍｏｌ）及びピリジン（１５３ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）溶液を２０℃で滴下した。反応混合物を２０℃で３０分間撹拌した後、これを濃縮し、（Ｒ）－２－（（５－ニトロピリジン－２－イル）ジスルファニル）カルボノクロリド酸プロピル１６をさらに精製することなく直接使用して、カルボノクロリド酸基を通してＣＩＤＥ上の任意の利用可能な基を共有結合させることができる。
２．システイン操作抗体
還元及び再酸化によるコンジュゲートのためのシステイン操作抗体に関して、それらは一般に以下のように調製することができる。軽鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔに従って番号付けされる（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、（１９９１年）、第５版，ＵＳ Ｄｅｐｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ）。重鎖アミノ酸は、Ｋａｂａｔシステムとして記載されている場合を除いて、ＥＵナンバリングシステム（Ｅｄｅｌｍａｎら（１９６９年）「Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ｏｆ Ｓｃｉ．」、６３（１）：７８～８５頁）に従ってナンバリングされる。一文字アミノ酸略号が使用される。
ＣＨＯ細胞中で発現された完全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）は、システイン付加物（シスチン）を有するか、又は細胞培養条件のために、操作されたシステイン上でグルタチオン付加される。このように、ＣＨＯ細胞から精製されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体は、Ｃｙｓ反応性リンカーＬ１－ＣＩＤＥ中間体にコンジュゲートすることができない。システイン操作抗体を、ＤＴＴ（Ｃｌｅｌａｎｄの試薬、ジチオスレイトール）又はＴＣＥＰ（トリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩；Ｇｅｔｚら（１９９９年）、「Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．」２７３巻：７３～８０頁；Ｓｏｌｔｅｃ Ｖｅｎｔｕｒｅｓ、マサチューセッツ州ビバリー）などの還元剤で処理した後、デヒドロアスコルビン酸などの穏やかな酸化剤で鎖間ジスルフィド結合を再形成（再酸化）することによって、本明細書に記載のＬ１－ＣＩＤＥ中間体とのコンジュゲートに対して反応性にすることができる。ＣＨＯ細胞（Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｅｎｇ．１０５（４）：７４８－７６０；Ｇｏｍｅｚ ｅｔ ａｌ（２０１０）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２６：１４３８－１４４５）中で発現させた完全長のシステイン操作されたモノクローナル抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）を、例えば、室温で２ｍＭ ＥＤＴＡを含む５０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ８．０）中で一晩、約５０倍過剰のＤＴＴで還元し、これにより、Ｃｙｓ及びグルタチオン付加物が除去され、並びに抗体中の鎖間ジスルフィド結合が還元された。付加物の除去をＰＬＲＰ－Ｓカラムを使用する逆相ＬＣＭＳによって監視した。還元されたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を希釈し、少なくとも４体積の１０ｍＭのコハク酸ナトリウム（ｐＨ５）緩衝液に添加することによって酸性にした。
あるいは、抗体を希釈し、少なくとも４体積の１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）に添加し、ｐＨが約５になるまで１０％の酢酸によって滴定することによって酸性にした。ｐＨを下げ、希釈したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を、その後、ＨｉＴｒａｐ Ｓカチオン交換カラムに負荷し、数カラム体積の１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ５）で洗浄し、５０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭの塩化ナトリウムで溶出した。再酸化を実行することによって、親Ｍａｂ内に存在するシステイン残基間のジスルフィド結合を再度確立した。溶出され、還元された上述のＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を、１５×デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）で約３時間、又はあるいは、２００ｎＭ～２ｍＭの水性硫酸銅（ＣｕＳＯ４）で室温で一晩処理した。当該技術分野において既知である他の酸化体（すなわち、酸化剤）及び酸化条件が使用され得る。周囲空気酸化もまた、効果的であり得る。この穏やかな部分的再酸化工程により、高い忠実度で鎖内ジスルフィドを効率的に形成する。再酸化は、ＰＬＲＰ－Ｓカラムを使用する逆相ＬＣＭＳによって監視した。再酸化したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体を上述のコハク酸緩衝液で希釈して、約ｐＨ５に到達させ、１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）、１０ｍＭのコハク酸（ｐＨ５）（緩衝液Ａ）中３００ｍＭの塩化ナトリウム（緩衝液Ｂ）の勾配で溶出を実行したことを除いて、上述のようにＳカラムで精製を実行した。溶出したＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体に、ＥＤＴＡを最終濃度２ｍＭまで添加し、必要に応じて５ｍｇ／ｍＬを超える最終濃度に達するように濃縮した。コンジュゲートの準備ができた得られたＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体をアリコートで－２０℃又は－８０℃で保存した。液体クロマトグラフィー／質量分析を、６２００シリーズのＴＯＦ又はＱＴＯＦ Ａｇｉｌｅｎｔ ＬＣ／ＭＳで行った。８０℃まで加熱したＰＲＬＰ－Ｓ（登録商標）、１０００Ａ、ミクロボアカラム（５０ｍｍ×２．１ｍｍ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、英国シュロップシャー）で試料のクロマトグラフィーを行った。３０～４０％Ｂの直線勾配（溶媒Ａ：水中０．０５％ ＴＦＡ、溶媒Ｂ：アセトニトリル中０．０４％ ＴＦＡ）を使用し、エレクトロスプレー源を使用して溶離液を直接イオン化した。データを回収し、ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ）によってデコンボリューションした。ＬＣ／ＭＳ分析の前に、抗体又はコンジュゲート（５０マイクログラム）をＰＮ Ｇａｓｅ Ｆ（２単位／ｍｌ；ＰＲＯｚｙｍｅ、カリフォルニア州サンリアンドロ）で３７℃にて２時間処理して、Ｎ結合型炭水化物を除去した。
あるいは、抗体又はコンジュゲートを、３７℃で１５分間、ＬｙｓＣ（０．２５μｇ／５０μｇ（マイクログラム）抗体又はコンジュゲート）で部分的に消化して、ＬＣＭＳによる分析のためのＦａｂ及びＦｃ断片を得た。デコンボリューションしたＬＣＭＳスペクトルのピークを割り当て、定量化した。観察された全てのピークに対するＣＩＤＥコンジュゲート抗体に対応する１つ以上のピークの強度の比を計算することによって、ＣＩＤＥ対抗体比（ＣＡＲ）を計算した。
３．リンカーＬ１－ＣＩＤＥ基の抗体へのコンジュゲート
リンカーＬ１－ＣＩＤＥ化合物を抗体にコンジュゲートする１つの方法では、上記の還元及び再酸化手順の後、システイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体）を、１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ中で、１Ｍ ＴｒｉｓでｐＨ７．５～８．５にｐＨ調整する。チオール反応性基（例えば、マレイミド若しくは４－ニトロピリジジスルフィド、又はメタンチオスルホニル（ＭＴＳ）ジスルフィド）を有する約３モル～２０当量の過剰のリンカー－ＣＩＤＥ中間体をＤＭＦ、ＤＭＡ又はプロピレングリコールに溶解し、還元、再酸化及びｐＨ調整した抗体に添加する。反応を室温又は３７℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣＭＳ分析によって決定される完了まで（１～約２４時間）監視する。反応が完了すると、コンジュゲートは、残りの未反応Ｌ１－ＣＩＤＥ中間体及び凝集したタンパク質（有意なレベルで存在する場合）を除去することを目的とする、いくつかの方法の１つ又は任意の組み合わせによって精製される。例えば、コンジュゲートを、最終ｐＨが約５．５になるまで１０ｍＭのヒスチジン－酢酸（ｐＨ５．５）で希釈し、Ａｋｔａ精製システムに接続されたＨｉＴｒａｐ Ｓカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）又はＳマキシスピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用するＳカチオン交換カラムクロマトグラフィーによって精製し得る。あるいは、コンジュゲートを、Ａｋｔａ精製システムに接続されたＳ２００カラム又はＺｅｂａスピンカラムを使用するゲル濾過クロマトグラフィーによって精製し得る。あるいは、透析を使用してもよい。ゲル濾過又は透析のいずれかを使用して、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）抗体－薬物コンジュゲートを、２４０ｍＭのスクロースを有する２０ｍＭのＨｉｓ／酢酸（ｐＨ５）中に製剤化した。精製されたコンジュゲートを、遠心分離限外濾過によって濃縮し、無菌条件下で０．２－μｍのフィルタを通してフィルタにかけ、保管のために凍結する。Ａｂ－ＣＩＤＥをＢＣＡアッセイによって特性評価して、タンパク質濃度を決定し、凝集分析のために分析的ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィー）を行い、リジンＣエンドペプチダーゼ（ＬｙｓＣ）での処理後にＬＣ－ＭＳを行って、ＣＡＲを計算した。
０．７５ｍｌ／分の流量で、０．２５ｍＭの塩化カリウム及び１５％のＩＰＡを有する０．２Ｍのリン酸カリウム（ｐＨ６．２）中、Ｓｈｏｄｅｘ ＫＷ８０２．５カラムを使用して、コンジュゲートに対してサイズ排除クロマトグラフィーを実施する。コンジュゲートの凝集状態は、２８０ｎｍの溶出ピーク面積吸光度の積分によって決定した。
Ａｇｉｌｅｎｔ ＱＴＯＦ ６５２０ ＥＳＩ機器を使用して、Ａｂ－ＣＩＤＥに対してＬＣ－ＭＳ分析を実行し得る。一例として、ＣＡＲを、Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）中、１：５００ｗ／ｗエンドプロテイナーゼＬｙｓ Ｃ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で３７℃で３０分間処理する。結果として得られた切断断片を、８０℃に加熱した１０００Å（Ａｎｇｓｔｒｏｍ）、８μｍ（ミクロン）ＰＬＲＰ－Ｓ（高度架橋ポリスチレン）カラムに負荷し、３０％のＢ～４０％のＢまでの勾配で５分間溶出する。移動相Ａは、０．０５％のＴＦＡを有するＨ２Ｏであり、移動相Ｂは、０．０４％のＴＦＡを有するアセトニトリルであった。流量は、０．５ｍｌ／分であった。タンパク質溶出を、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度検出によって、エレクトロスプレーイオン化及びＭＳ分析の前に監視した。非コンジュゲートＦｃ断片、残渣非コンジュゲートＦａｂ、及び薬物化Ｆａｂのクロマトグラフィー分解が、通常達成された。得られたｍ／ｚスペクトルを、Ｍａｓｓ Ｈｕｎｔｅｒ（商標）ソフトウェア（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてデコンボリューションして、抗体断片の質量を算出した。
一般的な合成方法
化学構造Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐを有するコンジュゲートを調製するための一般的な方法を以下に記載する。
１．１ Ｅ３ＬＢ－Ｌ２中間体を調製するためにＬ２をＥ３ＬＢにカップリングする一般的な合成方法
特定の実施形態において、Ｌ２を最初に第１の適切な溶媒、第１の塩基及び第１のカップリング試薬と接触させて、第１の溶液を調製する。特定の実施形態において、Ｌ２と、第１の適切な溶媒、第１の塩基、及び第１のカップリング試薬との接触は、室温（約２５℃）で約１５分間進行する。次いで、Ｅ３ＬＢを当該第１の溶液と接触させる。
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢと第１の溶液との接触は、室温（約２５℃）で約１時間進行する。次いで、溶液を濃縮し、任意に精製する。
特定の実施形態において、第１のカップリング試薬に対するＬ２の第１の塩基に対するモル比は、約１：４：１．１９である。特定の実施形態において、第１のカップリング試薬に対するＬ２の第１の塩基に対するモル比は、約１：２：０である。５、約１：３：１、約１：４：２、約１：５：３、又は約１：６：４である。
特定の実施形態において、Ｌ２対Ｅ３ＬＢのモル比は約１：１である。特定の実施形態において、Ｌ２対Ｅ３ＬＢのモル比は、約１：０．５、約１：０．７５、約１：２、又は約０．５：１である。
１．２ Ｅ３ＬＢ－Ｌ２中間体をＰＢにカップリングしてＣＩＤＥを調製するための一般的な合成方法
特定の実施形態において、Ｅ３ＬＢ－Ｌ２中間体をＰＢに結合させてＣＩＤＥを調製する。特定の実施形態において、ＰＢを最初に、第２の適切な溶媒、第２の塩基、及び第２のカップリング試薬と接触させる。特定の実施形態において、接触は、室温（約２５℃）で約１０分間進行する。次いで、溶液をＥ３ＬＢ－Ｌ２中間体と接触させる。特定の実施形態において、第２の溶液とＥ３ＬＢ－Ｌ２中間体との接触は、室温（約２５℃）で約１時間進行する。次いで、溶液を濃縮し、任意に精製してＣＩＤＥを調製する。
特定の実施形態において、ＰＢ対第２の塩基対第２のカップリング試薬のモル比は、約１：４：１．２である。特定の実施形態において、ＰＢ対第２の塩基対第２のカップリング試薬のモル比は、約１：３：０．７５、約１：５：１、約１：３：２、又は約１：５：３である。
特定の実施形態において、ＰＢ対Ｅ３ＬＢ－Ｌ２中間体のモル比は約１：１である。特定の実施形態において、ＰＢ対Ｅ３ＬＢ－Ｌ２中間体のモル比は、約１：０．５、約１：０．７５、約１：２、又は約０．５：１である。
１．３ Ｌ１－ＣＩＤＥを調製するためにＣＩＤＥをＬ１に結合する一般的な合成方法
特定の実施形態において、ＣＩＤＥを第３の適切な溶媒中でＬ１及び第３の塩基と接触させて溶液を調製する。特定の実施形態において、接触は、約（約２５℃）で約２時間進行する。次いで、任意に精製してＬ１－ＣＩＤＥを調製することができる。
特定の実施形態において、Ｌ１に対するＣＩＤＥのモル比は、約１：４である。特定の実施形態において、Ｌ１に対するＣＩＤＥのモル比は、約１：１、１：２、１：３、１：５、１：６、１：７、又は約１：８である。
１．４ Ｌ１－ＣＩＤＥを抗体にカップリングするための一般的な合成方法
特定の実施形態において、Ｌ１－ＣＩＤＥをチオール及び第４の適切な溶媒と接触させて、第４の溶液を形成する。次いで、この溶液を抗体と接触させてコンジュゲートを調製する。特定の実施形態において，
特定の実施形態において、チオールは、マレイミド又は４－ニトロピリジジスルフィドである。特定の実施形態において、適切な溶媒は、ジメチルホルムアミド、ジメチルアセトアミド、及びプロピレングリコールからなる群から選択される。
特定の実施形態において、Ｌ１－ＣＩＤＥ対チオール反応性基のモル比は、約３：１～約２０：１である。
特定の実施形態において、Ｌ１－ＣＩＤＥ、チオール反応性基及び適切な溶媒を含む溶液と抗体との接触は、約１～約２４時間進行する。特定の実施形態において、Ｌ１－ＣＩＤＥ、チオール反応性基及び適切な溶媒を含む溶液と抗体との接触は、約室温（約２５℃）～約３７℃で進行する。
上記の一般的方法の特定の実施形態において、適切な溶媒は、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド及び炭酸プロピレンからなる群から選択される極性非プロトン性溶媒である。
上記一般的方法の特定の実施形態において、塩基は、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、トリエチルアミン、及び２，２，２，６，６－テトラメチリピペリジンからなる群から選択される。特定の実施形態において、カップリング試薬は、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、（ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ），（７－アザベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＡＯＰ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’、Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ－（ベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｏ－（６－クロロベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、Ｏ－（Ｎ－スク－シンイミジル）－１、１，３，３－テトラメチル－ウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＳＴＵ）、Ｏ－（５－ノルボルネン－２，３－ジカルボキシイミド）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＮＴＵ）、Ｏ－（１，２－ジヒドロ－２－オキソ－１－ピリジル－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）、及びカルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）からなる群から選択される。
好ましい実施形態において、溶媒はジメチルホルムアミドであり、塩基はＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンであり、カップリング試薬はＨＡＴＵである。
上記の一般的方法の特定の実施形態において、接触は、約３０秒、１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１１分、１２分、１３分、１４分、１５分、１６分、１７分、１８分、１９分、２０分、３０分、６０分、９０分、１２０分、１８０分、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、２０時間、４０時間、６０時間又は７２時間にわたり進行する。
上記の一般的方法の特定の実施形態において、接触は、約２０℃、２１℃、２２℃、２３℃、２４℃、２５℃、２６℃、２７℃、２８℃、２９℃、３０℃、３１℃、３２℃、３３℃、３４℃、３５℃、３６℃、３７℃、３８℃、３９℃、４０℃、４１℃、４２℃、４３℃、４４℃、４５℃、４６℃、４７℃、４８℃、４９℃、５０℃、６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、又は１００℃で進行する。
以下の実施例は、限定するものではなく、例証として提供されている。
実施例
全ての化合物は、特に明記しない限り、オレフィン異性体（約１：１）の混合物である。括弧内に列挙されている１３Ｃ共鳴は、特定の化合物の主要な異性体のオレフィン異性体及び／又は代替Ｎ－Ｍｅアミド結合回転異性体を表す。
合成例１
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１を以下のスキーム、スキーム１によって合成した：
３，３’－ジスルファンジイルビス（ブタン－２－オール）を以下のように２段階で合成した：
３－メルカプトブタン－２－オール（２．０ｇ、１９ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（４０ｍＬ）の２３℃溶液に、ＭｎＯ２（２．４６ｇ、２８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１時間撹拌し、次いで、フィルタにかけた。濾液を真空中で濃縮して、３，３’－ジスルファンジイルビス（ブタン－２－オール）（１．９７ｇ、９９％）を無色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．１３－４．０８及び３．８３－３．７８（ｍ，２ Ｈ），２．９４－２．９１及び２．８２－２．７８（ｍ，２ Ｈ），２．３８－２．２６及び２．１４－２．０２（ｍ，２ Ｈ），１．３５－１．２２（ｍ，１２ Ｈ）．
Ｓ－（３－ヒドロキシブタン－２－イル）メタンスルホノチオアート、以下の化合物３（上記スキーム１の化合物２である）を以下のように合成した：
３，３’－ジスルファンジイルビス（ブタン－２－オール）（１．９７ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の２３℃溶液に、メタンスルフィン酸ナトリウム（１．９１ｇ、１８．７ｍｍｏｌ）及びヨウ素（２．３８ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を暗所、２３℃で１日間撹拌し、次いで、フィルタにかけた。濾液を濃縮し、残渣を、ＤＣＭ中の０～５％ ＭｅＯＨで溶出するシリカ上のクロマトグラフィーによって精製すると、Ｓ－（３－ヒドロキシブタン－２－イル）メタンスルホノチオアート（１．２０ｇ、７０％）が淡黄色油状物として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ ４．１３－４．１１及び３．９６－３．９３（ｍ，１ Ｈ），３．７７－３．７３及び３．５１－３．４７（ｍ，１ Ｈ），３．４２及び３．３９（ｓ，３ Ｈ），２．０４及び１．９６（ｂｒｓ，１ Ｈ），１．５３及び１．４２（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，３ Ｈ），１．３３及び１．２３（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，３ Ｈ）．
Ｓ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成。
２３℃のジクロロメタン（２ｍＬ）中のＳ－（３－ヒドロキシブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（３００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）及びピリジン（５１６ｍｇ、６．５１ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（２ｍＬ）中のトリホスゲン（２４２ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。反応物を２３ ℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固すると、表題化合物（３８０ｍｇ、９５％）が黄色油状物として得られ、これを次の工程に直接使用した。
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２Ｓ，４Ｒ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシ－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド［上記の実施例１スキームにおける化合物１；調製については、米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号のｐ２９３～２９４（ページ番号の先頭）を参照］、（３００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）及び４ÅＭＳ（１００ｍｇ）の２３℃の無水ジクロロメタン（５ｍＬ）中の混合物に、トリエチルアミン（１９８ｍｇ、１．９５ｍｍｏｌ）及びＳ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（３６２ｍｇ、１．４６ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中の溶液を２３℃でゆっくり添加した。混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中０～７０％酢酸エチル）によって精製し、表題化合物（１２０ｍｇ、３０％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８２５．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の溶液に、ギ酸（２ｍＬ、２ｍｍｏｌ）を含む水（１ｍＬ）を２３℃で添加した。混合物を５０℃で１時間撹拌し、次いで、濃縮すると、表題化合物（１０５ｍｇ、９６％）が黄色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７５１．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
２３℃の、Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１０５ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及び２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノール［上記実施例１スキームの化合物３。これは、以下の実施例４スキームにおける化合物４である。］（７３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及びＨＯＡｃ（０．２～０．３ｍＬ）のジクロロメタン（２ｍＬ）及びメタノール（２ｍＬ）中の溶液に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（５９３ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で３時間撹拌し、次いで、濃縮した。残留物を、分取ＴＬＣ（ジクロロメタン中８％メタノール）により精製し、表題化合物（４８ｍｇ、２７％）を白色の固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １４．２１－１４．０８（ｍ，１Ｈ），９．０１－８．９７（ｍ，１Ｈ），８．５９－８．４６（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝４．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５５－７．３３（ｍ，５Ｈ），７．２８－７．１９（ｍ，１Ｈ），６．９６－６．７９（ｍ，２Ｈ），６．６０－６．４８（ｍ，１Ｈ），６．１８－６．０８（ｍ，２Ｈ），６．０５－５．９１（ｍ，２Ｈ），５．２４－５．１１（ｍ，１Ｈ），４．９９－４．８６（ｍ，２Ｈ），４．５７－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．４３－４．３５（ｍ，１Ｈ），４．３１－４．１７（ｍ，４Ｈ），３．９４－３．７９（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．６７（ｍ，２Ｈ），３．６１－３．５１（ｍ，２Ｈ），３．２９－３．２３（ｍ，４Ｈ），３．２１－３．１４（ｍ，３Ｈ），３．０４－２．９３（ｍ，３Ｈ），２．８７－２．７８（ｍ，１Ｈ），２．６４－２．５８（ｍ，３Ｈ），２．４８－２．４１（ｍ，３Ｈ），２．３８－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．２０－２．１６（ｍ，２Ｈ），２．０７－１．８２（ｍ，２Ｈ），１．４９－１．２１（ｍ，１０Ｈ），１．０６－０．９０（ｍ，６Ｈ），０．８８－０．７６（ｍ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１２５１．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例２
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２を以下のスキーム、スキーム２によって合成した：
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
４－ニトロフェニルカルボノクロリド酸塩（１．６８ｇ、８．３４ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（上記の実施例スキーム２中の化合物１を参照；調製についてはＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１９，６２，９４１又はＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１４，５７，８６５７を参照）（３．０ｇ、６．９５ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（８０ｍＬ）の混合物に、２３℃ で２，６－ルチジン（１．１２ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３で１８時間攪拌し、次いで、濃縮すると、表題化合物（４．０ｇ、９９％）が黄色固体として得られた。これを次の工程で直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５９７．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物４、スキーム２：スキーム２ａを介したアリル１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－ヒドロキシ－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレートの合成。
ｉ．スキーム２ａの化合物２を調製するための一般的手順
４つの別個の反応を並行して行った。ピリジン（３．００Ｌ）中の化合物１（２００ｇ、１．２１モル）の溶液に、ＳｅＯ２（３３６ｇ、３．０３モル）を２３℃で添加した。次いで、混合物を９５℃の油浴中で１時間加熱した。後処理のために４つの反応を組み合わせた。合わせた反応物を４５～５０℃でフィルタにかけ、次いで、濾液を２３℃に冷却し、その温度で１．５時間維持した。混合物をフィルタにかけて、濾過ケークを真空中で乾燥させると、化合物２が得られた。濾液を５．００Ｌまで減圧濃縮し、２３℃で１２時間撹拌した。混合物をフィルタにかけ、濾過ケークを真空中で乾燥させて、さらなる化合物２（両方のロットを合わせて＝８３０ｇ、収率８８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．６３－８．６４（ｍ，２Ｈ），８．３７－８．４０（ｍ，２Ｈ），８．１７－８．１９（ｍ，２Ｈ），７．９０－７．９４（ｍ，１Ｈ），７．４８－７．５２（ｍ，２Ｈ）．
ｉｉ．スキーム２ａの化合物３を調製するための一般的手順
２つの反応を並行して行った。化合物２（１４０ｇ、５３８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７００ｍＬ）中２３℃溶液に、化合物２Ａ（５４ｇ、５３８ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２２５ｇ、５９２ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（２７８ｇ、２．１５モル）を添加した。混合物を２３℃にて１時間撹拌した。次いで、２つの反応物を後処理のために合わせた。合わせた反応混合物をＤＣＭ（３．００Ｌ）で希釈し、ブライン（１．００Ｌ×３）で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧下で濃縮した。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、石油エーテル／酢酸エチル＝５０／１～０／１）により精製して、化合物３（２００ｇ、収率６７％）を黄色固体として得た。
ｉｉｉ．スキーム２ａの化合物４を調製するための一般的手順
ＭｅＯＨ（１．３０Ｌ）中の化合物３（１８４ｇ、５３１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮａＢＨ４（１６．１ｇ、４２５ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を２３℃に加温し、その温度で１時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、残渣を水で希釈し、ＨＣｌ（１Ｍ）でｐＨ＝７に調整し、ＥｔＯＡｃ（１．００Ｌ×３）で抽出した。合わせた有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、減圧下で濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール＝１００／１～１０／１）によって精製した。粗生成物をＥｔＯＨ（５００ｍＬ）を用いて２３℃で１０分間研和して、化合物４（１６１ｇ、収率５４％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ：（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．２４（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），６．１４（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．５７－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，２Ｈ），２．２３（ｓ，２Ｈ），２．１２（ｓ，５Ｈ）．
ｉｖ．スキーム２ａの化合物５を調製するための一般的手順
４つの反応を並行して行った。ＥｔＯＨ（６００ｍＬ）中の化合物４（４０ｇ、１４３ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｐｄ／Ｃ（８．５０ｇ、１０％）をＮ２雰囲気下で添加した。懸濁液を脱気し、Ｈ２で３回パージした。混合物をＨ２（１５ｐｓｉ）下、２３℃で１２時間撹拌した。次いで、４つの反応物を後処理のために合わせた。合わせた反応混合物をフィルタにかけ、濾過ケークをＭｅＯＨ（１．００Ｌ）で洗浄した。合わせた濾液及び洗液を減圧下で濃縮して、化合物５（１４０ｇ、収率９８％）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ：（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．１１（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），６．７２（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），５．２９（ｓ，１Ｈ），３．７４（ｓ，１Ｈ），３．６２－３．４９（ｍ，１Ｈ），３．４７－３．３５（ｍ，２Ｈ），２．４８（ｓ，１Ｈ），２．３５－２．２５（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．９０（ｓ，１Ｈ）．
ｖ．スキーム２ａの化合物６を調製するための一般的手順
ＭｅＯＨ（３５０ｍＬ）及びＤＣＭ（７００ｍＬ）中のＦｍｏｃ－Ｌ－シトルリン（化合物５Ａ）（９５ｇ、２３９ｍｍｏｌ）及び化合物５（７２ｇ、２８７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥＥＤＱ（７１ｇ、２８７ｍｍｏｌ）を０℃で一度に添加した。混合物を２３℃に加温し、Ｎ２下、その温度で１５時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗生成物をＭＴＢＥ（１．００Ｌ）を用いて１５℃で２時間研和して、化合物６（１８５ｇ、粗製）を橙色固体として得た。
ｖｉ．スキーム２ａの化合物７を調製するための一般的手順
化合物６（１９０ｇ、３０２ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．４０Ｌ）中の攪拌溶液に、ピペリジン（５２ｇ、６０４ｍｍｏｌ）を１０℃で添加した。混合物を１０℃で１８時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール＝１００／１～３／１）により精製して、化合物７（８５ｇ、収率６８％）を黄色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．６５（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），５．４３（ｓ，１Ｈ），３．６８（ｓ，１Ｈ），３．６２（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．５３－３．４４（ｍ，２Ｈ），３．２４－３．０６（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｄ，Ｊ＝５．２ Ｈｚ，２Ｈ），２．４５（ｓ，１Ｈ），２．３６－２．２５（ｍ，２Ｈ），２．２２（ｓ，３Ｈ），１．９７（ｓ，１Ｈ），１．８６－１．７５（ｍ，１Ｈ），１．６８－１．５４（ｍ，６Ｈ）．
ｖｉｉ．スキーム２ａの化合物８を調製するための一般的手順
化合物７（７６ｇ、１８７ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（４７０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２９０ｍＬ）中の１０℃の溶液に、化合物７Ａ（６３ｇ、２３４ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（２０ｇ、２３４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を１０℃で１２時間撹拌し、次いで、減圧下で濃縮した。その残渣をカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ジクロロメタン／メタノール＝１０／１～３／１）により精製して、化合物８（９２ｇ、収率７０％）を黄色固体として得た。
ｖｉｉｉ．スキーム２ａの化合物９を調製するための一般的手順
化合物８（６３ｇ、１１２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１９０ｍＬ）及びＭｅＯＨ（９５ｍＬ）中の攪拌溶液に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（９．４３ｇ、２２５ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１９０ｍＬ）中の溶液を０℃で添加した。反応混合物を１５℃に加温し、その温度で１２時間撹拌した。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮した。残渣を逆相ＨＰＬＣ（０．１％ ＴＦＡ条件）により精製して、化合物９（５０ｇ、収率８１％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．６８（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，２Ｈ），７．３７（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），５．４８（ｓ，１Ｈ），４．５０－４．５３（ｍ，１Ｈ），３．７８（ｓ，２Ｈ），３．６９－３．５６（ｍ，１Ｈ），３．２７－３．１０（ｍ，５Ｈ），２．７９（ｓ，３Ｈ），２．７１－２．６２（ｍ，２Ｈ），２．６０－２．５０（ｍ，２Ｈ），２．１７－２．０７（ｍ，１Ｈ），２．０６－２．０３（ｍ，４Ｈ），２．０３－１．９７（ｍ，１Ｈ），１．９７－１．８６（ｍ，１Ｈ），１．７４－１．７８（ｍ，１Ｈ），１．６９－１．５３（ｍ，２Ｈ）．
ｉｘ．スキーム２の化合物４を調製するための一般的手順（２２０）
化合物９（７０ｇ、１３１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３５０ｍＬ）中の１５℃の溶液に、ＫＦ（２３ｇ、３９４ｍｍｏｌ）及びＢｕ４ＮＨＳＯ４（１２．５ｇ、３６．８ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、３－ブロモプロプ－１－エン（３９８ｇ、３．２９モル）を１５℃で滴下し、混合物をその温度でさらに６時間撹拌した。反応混合物をフィルタにかけ、濾液を減圧下で濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ ｌｕｎａ ｃ１８ ２５０ｍｍ＊１００ｍｍ＊１０ｕｍ；移動相：［水（０．１％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ］；Ｂ％：０％～２０％、３０分）によって精製し、２２０（２６ｇ、収率３４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．６９（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．４ Ｈｚ，２Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），５．７５（ｄ，Ｊ＝１０．０ Ｈｚ，２Ｈ），５．４９（ｓ，１Ｈ），４．５０－４．５４（ｍ，１Ｈ），４．３４－４．０９（ｍ，１Ｈ），４．０３（ｓ，２Ｈ），３．９６－３．５１（ｍ，３Ｈ），３．５０－３．３３（ｍ，３Ｈ），３．２６－３．０６（ｍ，６Ｈ），２．７５－２．４９（ｍ，４Ｈ），２．２２－２．０８（ｍ，１Ｈ），２．０６－１．８７（ｍ，２Ｈ），１．８１－１．７２（ｍ，１Ｈ），１．７０－１．５２（ｍ，２Ｈ）．ＬＣＭＳ：（Ｍ＋Ｈ＋＝５７３．３）
化合物６、スキーム２：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸の合成
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（７６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１，３－ジメチルピリミジン－２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）－トリオン（５８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）及びメチルアルコール（５ｍＬ）中の２３℃の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１７ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下２３℃で１０時間攪拌し、次いで、濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：（２５～４５％）水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮよって精製して、表題化合物（５０ｍｇ、６９％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９９０．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（６９ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（１６ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を含む２３℃のＤＭＦ（８ｍＬ）の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．２１ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（３２ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、（２５～４５％）水（０．０７５％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ）によって精製し、表題化合物（６７ｍｇ、８４％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１１５５．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物７、スキーム２：１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテートの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（６７．４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＨＦＩＰ（２ｍＬ、０．０６ｍｍｏｌ）中５％ ＴＦＡ溶液を２３℃で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮すると、表題化合物（６２ｍｇ、９９．９％）が黄色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０５４．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２：（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネートの合成
１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテート（６２ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（５０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を含む２３℃のＤＭＦ（２．５ｍＬ）の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２７ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：（２６～４６％）水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮによって精製して、表題化合物（４４ｍｇ、４２％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ８．８８－８．８３（ｍ，１Ｈ），７．８０－７．７５（ｍ，１Ｈ），７．７５－７．６５（ｍ，３Ｈ），７．４９－７．３２（ｍ，７Ｈ），７．２５－７．１９（ｍ，１Ｈ），６．９３－６．８４（ｍ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．７５－６．７１（ｍ，１Ｈ），６．５７－６．５４（ｍ，１Ｈ），６．２９－６．１９（ｍ，２Ｈ），５．２５－５．２１（ｍ，１Ｈ），４．９８－４．９３（ｍ，２Ｈ），４．６４－４．６２（ｍ，２Ｈ），４．５１（ｓ，３Ｈ），４．４１－４．２７（ｍ，３Ｈ），４．２３－４．０８（ｍ，１Ｈ），４．０１－３．８９（ｍ，１Ｈ），３．７９－３．５４（ｍ，４Ｈ），３．４８－３．４０（ｍ，２Ｈ），３．２７－３．１６（ｍ，４Ｈ），３．１５－３．０３（ｍ，４Ｈ），２．９７－２．８５（ｍ，２Ｈ），２．８３－２．６９（ｍ，４Ｈ），２．６１－２．５１（ｍ，３Ｈ），２．５０－２．３３（ｍ，８Ｈ），２．２９－２．１７（ｍ，６Ｈ），２．１４－２．１１（ｍ，３Ｈ），１．９３（ｓ，４Ｈ），１．７５（ｓ，１Ｈ），１．６２－１．４５（ｍ，９Ｈ），１．３５－１．２３（ｍ，４Ｈ），１．１６－１．１０（ｍ，３Ｈ），１．０９－０．９２（ｍ，３Ｈ），０．９２－０．８０（ｍ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７６４．８ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例３
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３を以下のスキーム、スキーム３によって合成した：
Ｓ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
Ｓ－（３－ヒドロキシブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（３００ｍｇ、１．６３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）及びピリジン（５１６ｍｇ、６．５１ｍｍｏｌ）中の溶液に、トリホスゲン（２４２ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中の溶液を２３℃で添加した。反応物を２３℃で３０分間攪拌し、次いで、濃縮して乾燥させると、表題化合物（３８０ｍｇ、９５％）が黄色油状物として得られた。これを次の工程で直接使用した。
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシ－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（２５０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）（上記のスキーム３の化合物１を参照。調製は、米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号の４５１～４５２頁に記載されており、その全体が参照により本明細書に組み込まれる）及び４ÅＭＳ（５０ｍｇ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中の２３℃の混合物に、ピリジン（０．０９ｍＬ、１．１７ｍｍｏｌ）及びＳ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（２２０ｍｇ、０．８９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）中の溶液を添加した。反応物を２３℃で３０分間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーカラム（酢酸エチル中０～６０％ジクロロメタン）によって精製して、表題化合物３（１３０ｍｇ、３９％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８５０．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－ホルミルピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１３０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）の水（１ｍＬ）及びギ酸（３ｍＬ）中の溶液を５０℃で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮すると、表題化合物（１２０ｍｇ、９８％）が黄色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８０４．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（４－（（４－（トランス－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
２３℃のＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－ホルミルピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１２０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）中の溶液に、２－（６－アミノ－５－（８－（２－（トランス－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノール塩酸塩（上記のスキーム３の化合物５を参照；調製については、米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号の３０６～３０７頁（ページ番号の先頭）を参照）（８２ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｃ（０．２ｍｌ）及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３１７ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２３℃で３時間撹拌し、次いで、濃縮した。粗残渣を分取ＴＬＣ（メタノール：ジクロロメタン＝１：１０）によって精製して、表題化合物（３１ｍｇ、１４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ １４．１３（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２－７．４１（ｍ，３Ｈ），７．４０－７．３３（ｍ，２Ｈ），７．２４－７．２１（ｍ，１Ｈ），６．９０－６．８０（ｍ，２Ｈ），６．５４－６．５１（ｍ，１Ｈ），６．１４－６．１２（ｍ，２Ｈ），６．００－５．９１（ｍ，２Ｈ），５．１８－５．１５（ｍ，２Ｈ），４．９５－４．９０（ｍ，２Ｈ），４．５０－４．４６（ｍ，２Ｈ），４．３９－４．３５（ｍ，１Ｈ），４．３２－４．２２（ｍ，１Ｈ），３．９４－３．６６（ｍ，３Ｈ），３．６４－３．５５（ｍ，４Ｈ），３．５４－３．５２（ｍ，２Ｈ），３．２８－３．２１（ｍ，４Ｈ），３．０２－３．０１（ｍ，２Ｈ），２．７７－２．６９（ｍ，２Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．３０－２．２２（ｍ，４Ｈ），２．１９－２．１５（ｍ，２Ｈ），２．１０－２．０５（ｍ，２Ｈ），２．０４－１．８９（ｍ，５Ｈ），１．８１－１．５７（ｍ，５Ｈ），１．４７－１．３４（ｍ，８Ｈ），１．３３－１．２８（ｍ，２Ｈ），１．２７－１．２０（ｍ，２Ｈ），１．１６－１．０２（ｍ，２Ｈ），０．９５－０．９１（ｍ，３Ｈ），０．８５－０．７５（ｍ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１３３１．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例４
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－４の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－４を以下のスキーム、スキーム４によって合成した：
化合物１、スキーム４：
工程１：１８２の調製。
２－フルオロ－４－ヨードピリジン（２）（５２ｇ、２３０ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（７５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－カルボキシレート（１）（３７ｇ、１７５ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（２６ｇ、２６５ｍｍｏｌ）、フッ化カリウム（１７ｇ、２８４ｍｍｏｌ）及びキサントホス（４．８ｇ、８．２ｍｍｏｌ）の磁気撹拌混合物を含有する１ネック２Ｌ丸底フラスコに加えた。混合物を窒素ガスで１５分間パージし、次いで、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジ－パラジウム（０）（３．７ｇ、４．０ｍｍｏｌ）を添加した。反応フラスコに、窒素入口で蓋をした冷却器を取り付け、１１０℃に設定した予熱油浴に入れた。窒素雰囲気下、１１０℃で１．２５時間撹拌した後、得られた褐色／赤色懸濁液を２３℃に冷却し、セライトを通してフィルタにかけた。濾過ケークをＥｔ２Ｏで洗浄し、合わせた濾液及び洗液を減圧下で赤色油状物（１２７ｇ）に濃縮した。粗物質を、０～４０％ ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭを使用するフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１８２を黄色泡状固体として得た（５６ｇ、約１００％）。
工程２：１８７の調製。
１，４－ジオキサン中４Ｍ ＨＣｌ溶液（２２０ｍＬ、８８０ｍｍｏｌ）を、２３℃で１ネック２Ｌ丸底フラスコ内でＭｅＣＮ（６５０ｍＬ）中１８２（５６ｇ、約１７５ｍｍｏｌ）の磁気撹拌溶液に５０分間にわたって添加した。混合物を２３℃で１時間撹拌し、その間に黄色／オレンジ色の懸濁液になった。反応混合物を黄色固体に濃縮し、この材料をＥｔ２Ｏ（１０００ｍＬ）を用いて２３℃で１時間研和した。混合物をフィルタにかけ、集めた物質を減圧下で乾燥させて、１８７のトリＨＣｌ塩を黄色粉末として得た（６１ｇ）。塩をＤＣＭ（１０００ｍＬ）に懸濁し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５００ｍＬ）でゆっくり中和した。層を分離し、水相をＤＣＭ（２×５００ｍＬ）でさらに抽出した。合わせた有機相を飽和ＮａＣｌ（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、１８７の遊離塩基を黄色固体として得た（３２ｇ、８６％）。注：水相内での生成物の損失を防止するためにＮａＨＣＯ３溶液が十分に飽和していることを確実にする。
工程３：２０８の調製。
１，８－ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ－７－エン（５）（３．０ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を、１Ｌの三角フラスコ内で、１８７（３０ｇ、１４５ｍｍｏｌ）３－アミノ－４－ブロモ－６－クロロピリダジン（４４ｇ、２０９ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（８０ｍＬ、４６０ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ（３００ｍＬ）中の磁気撹拌溶液に２３℃で添加した。溶液を二つの４５０ｍＬ密閉可能な丸底フラスコの間で均等に分割し、次いで、１００℃に設定した油浴中で２３時間磁気撹拌した。透明な赤色反応混合物を合わせ、高真空下で濃縮して褐色残渣（１０７ｇ）を得た。残渣を、０～５％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭを使用するフラッシュクロマトグラフィーによって２回精製して、１当量のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２０ｇ、３０％）に錯化した２０８の黄色固体を得た。複合体は約７２重量％の２０８（約１５ｇの２０８）を含有していた。
工程４：０４－１の調製。
２－ヒドロキシフェニルボロン酸（９．０ｇ、６５ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（６００ｍＬ）及び脱イオン水（１２０ｍＬ）の混合物中の２０８アミン錯体（１７ｇ、３７ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１６ｇ、１１３ｍｍｏｌ）の磁気撹拌混合物を含有する１ネック２Ｌ丸底フラスコに２３℃で添加した。混合物を窒素ガスで３０分間パージし、次いで、ＲｕＰｈｏｓ－Ｐｄ－Ｇ３（１．８ｇ、２．１ｍｍｏｌ）を添加した。フラスコに、窒素入口で蓋をした冷却器を取り付け、１００℃に設定した予熱油浴に入れた。窒素雰囲気下、１００℃で２３時間撹拌した後、得られた深赤色溶液を２３℃に冷却し、減圧下で濃縮して褐色固体（４０ｇ）を得た。粗物質の１Ｈ ＮＭＲ分析により、０４－１が主生成物であることが示された。上記からの材料を、同様の純度を有する先のバッチからの６．８ｇの粗０４－１と合わせた。合わせたバッチを、０－１００％ ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭを使用するフラッシュクロマトグラフィー、引き続いて０－１０％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するさらなるクロマトグラフィーによって精製して、ＨＰＬＣによって９８％純粋な０４－１を黄色固体として得た。固体をＥｔ２Ｏで研和し、濾過によって回収し、減圧下で乾燥させて、０４－１を黄色粉末として得た（８．０ｇ、合計収率４７％）。
化合物３、スキーム４：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレートの合成
２－（６－アミノ－５－（８－（２－フルオロピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノール（１．５ｇ、３．８２ｍｍｏｌ）（上記スキーム４の化合物１参照）及び水素化ナトリウム（鉱油中６０％；０．４６ｇ、１１．４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２０ｍＬ）中の溶液に、（Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－ヒドロキシエチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（上記スキーム４の化合物２を参照；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際公開第２０１１／２８６８５号の８８頁８９欄の合成経路も参照）（１．８７ｇ、７．６４ｍｍｏｌ）を２３℃で滴下した。次いで、混合物を６０℃で１２時間撹拌した。２３℃に冷却した後、反応物を水（１００ｍＬ）で希釈し、得られた混合物を酢酸エチル（１５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけた。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ中０～５％メタノール）によって精製して、表題化合物（１．２ｇ、６４％）を灰色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１７．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物４、スキーム４：２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノールの合成
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１．２ｇ、１．９５ｍｍｏｌ）を含む酢酸エチル（１０ｍＬ）の２３℃溶液に、４Ｍ ＨＣｌ／ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ、１．９５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ中０～１０％ ＭｅＯＨ（１％ ＮＨ３ ．Ｈ２Ｏ））によって精製して、表題化合物（９００ｍｇ、９０％）を黄色固体として得た。
メチル２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノエートの合成
ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（７４６ｍｇ、３．４８ｍｍｏｌ）、２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノール（９００ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）及びメチル３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノエート（上記のスキーム４の化合物５を参照；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号の第４２８頁の合成経路を参照）（４６３ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）のメチルアルコール（１０ｍＬ）及びジクロロメタン（１０ｍＬ）中の２３℃の溶液に、酢酸ナトリウム（７１２ｍｇ、８．７１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ中０～１０％ ＭｅＯＨ）によって精製して、表題化合物（１．０ｇ、７７％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７４２．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物６、スキーム４：２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸の合成
メチル２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノエート（１．０ｇ、１．３５ｍｍｏｌ）の水（６ｍＬ）及びメチルアルコール（６ｍＬ）中の２３℃溶液に、水酸化リチウム一水和物（３ｍｇ、６．７４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮すると、表題化合物（９８０ｍｇ）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７２８．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物７、スキーム４：（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸の合成
２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）イソキサゾール－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）イソオキサゾール－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（９００ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）をキラルＳＦＣ（ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＤ（２５０ｍｍ＊５０ｍｍ、１０ｕｍ）０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ、ＩＰＡ、１８％）によって分離して、第１のピーク（２Ｓ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（４００ｍｇ、４４％）及び第２のピーク（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（４５０ｍｇ、５０％）の両方を白色固体として得た。
化合物１５の合成、スキーム４：
スキーム４の化合物８（以下、化合物Ｙと呼ぶ）の調製。アリル（（Ｓ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３，３－ジメチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバメートの合成。
クロロギ酸アリル（４８５ｍｇ、４．０２ｍｍｏｌ）を、（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（例えば、上記の化合物１を参照。Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１９，６２，９４１に記載される調製を参照）（１．６５ｇ、３．８３ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１．６１ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）の１：１ ＴＨＦ：Ｈ２Ｏ（３４ｍＬ）中の０℃混合物に添加した。得られた混合物を２５℃に加温し、その温度で１２時間撹拌した。水（５０ｍＬ）で希釈した後、反応混合物をＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮した。残渣を、ＤＣＭ中０－３％ＭｅＯＨで溶離するシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、（２Ｓ，４Ｒ）－アリル－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（上記の化合物Ｙを参照）（１．６０ｇ、８１％）を灰色固体として得た。ＬＣＭＳ（１０－８０，ＡＢ，７．０分）：ＲＴ＝２．５７分、ｍ／ｚ＝５３７．１ ［Ｍ＋Ｎａ］＋．
スキーム４の化合物９の調製。（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（ヒドロキシヒドロホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート
（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（２．０ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（３０ｍＬ）の溶液に、ＴＨＦ（５ｍＬ）中のＰＣｌ３（１．６７ｍＬ、１９．３ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（３ｍＬ）中のＥｔ３Ｎ（４．０３ｍＬ、２９ｍｍｏｌ）を－７８℃で添加した。反応混合物を－７８℃で２０分間撹拌し、次いで、２３℃に加温した。得られた混合物を２３℃で１２時間撹拌し、次いで、水（２０ｍＬ）及びＮａＨＣＯ３水溶液（５ｍＬ）でクエンチした。２３℃で１０分間撹拌した後、混合物を１Ｎ ＨＣｌでｐＨ＝３に酸性化し、続いて減圧下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ中０～１０％メタノール）によって精製して、表題化合物（１．５ｇ、６５％）を無色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４８０．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
スキーム４の化合物１０の調製。（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（ヒドロキシ（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（ヒドロキシヒドロホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（６００ｍｇ、１．２５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（０．５２ｍＬ、３．７５ｍｍｏｌ）のＣＣｌ４（８ｍＬ）及びアセトニトリル（８ｍＬ）中の２３℃溶液に、１－（トリメチルシリル）－１Ｈ－イミダゾール（０．５３ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）を２３℃で添加した。反応混合物を２３℃で４０分間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をＭＴＢＥ／ＥｔＯＡｃ＝５／１（３ｍＬ）で研和し、得られた沈殿を濾過によって回収し、ＭＴＢＥ（３ｍＬ）で洗浄し、風乾すると、表題化合物（６８０ｍｇ、９９％）が得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５４６．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
スキーム４の化合物１０の調製。（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（（（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
２３℃の（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（ヒドロキシ（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（６００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）及び（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（ホスホノオキシ）エチル）カルバメート（上記スキーム４の化合物１２）；Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００７，７２，３１１６．に記載されるとおりに調製）（４００ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１３ｍＬ）中の溶液に、Ｅｔ２Ｏ（５．５ｍＬ、５．５ｍｍｏｌ）中１Ｍ塩化亜鉛を添加した。反応混合物を２３℃で１２時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーカラム（ＤＣＭ中０～３０％メタノール（３％ ＮＨ３・Ｈ２Ｏ））によって精製して、表題化合物（３４０ｍｇ、３７％）を黄色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８１４．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物１５、スキーム４：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシ（（ヒドロキシ（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）ホスホリル）オキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメートの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－アリル４－（（（（（２－（（（（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メトキシ）カルボニル）アミノ）エトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（３４０ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）及び１，３－ジメチルピリミジン－２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）－トリオン（３１６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５ｍＬ）及びメチルアルコール（５ｍＬ）中の２３℃溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（９４ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を窒素雰囲気下２３℃で２時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：ＹＭＣ Ｔｒｉａｒｔ Ｃ１８ １５０＊２５ｍｍ＊５μｍ；移動相：２０～５０％水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ；検出器、ＵＶ２５４ｎｍで、表題化合物（２０２ｍｇ、６６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７５７．４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物１６、スキーム４：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリルオキシ）エチル）カルバメートの合成
（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（３０８ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（２０１ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシ（（ヒドロキシ（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）ホスホリル）オキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート（８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の溶液を２３℃で２０分間撹拌した。次いで、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１ｍＬ、０．６３ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を２３℃で２日間撹拌した。混合物を、以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １５０＊３０ｍｍ×５μｍ；移動相：２４～５１％の水（０．０５％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）－ＡＣＮによって直接精製して、表題化合物（６０ｍｇ、３９％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４６７．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物１７、スキーム４：［２－アミノエトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル］［（３Ｒ，５Ｓ）－１－［（２Ｒ）－２－［３－［２－［（３Ｒ）－４－［２－［［４－［３－［３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル］－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１オクタン－８－イル］－２－ピリジル］オキシ］エチル］－３－メチル－ピペラジン－１－イル］エトキシ］イソオキサゾール－５－イル］－３－メチル－ブタノイル］－５－［［（１Ｓ）－１－［４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル］エチル］カルバモイル］ピロリジン－３－イル］リン酸水素の合成
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリルオキシ）エチル）カルバメート（２０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）及びピペリジン（２ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）中の溶液を２３℃で２時間撹拌した。次いで、混合物を分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ １５０＊３０ ｍｍ＊５ｕｍ、２０～５０％水（０．０５％ＮＨ３・Ｈ２Ｏ）－ＡＣＮ））によって直接精製して、表題化合物（１８ｍｇ、９４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ９．０１－８．９１（ｍ，１Ｈ），７．９３－７．８９（ｍ，１Ｈ），７．７９－７．７５（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．４３－７．２８（ｍ，５Ｈ），７．２３－７．１９（ｍ，２Ｈ），６．８８－６．８０（ｍ，３Ｈ），６．５４－６．５２（ｍ，１Ｈ），６．１４－６．１０（ｍ，２Ｈ），５．９７（ｓ，２Ｈ），４．８９－４．８６（ｍ，２Ｈ），４．５２－４．３５（ｍ，３Ｈ），４．２６－４．２１（ｍ，５Ｈ），４．０８－３．７３（ｍ，５Ｈ），３．０６－２．９８（ｍ，４Ｈ），２．９５－２．９１（ｍ，３Ｈ），２．８９－２．８４（ｍ，６Ｈ），２．６９－２．６６（ｍ，４Ｈ），２．４６－２．４１（ｍ，６Ｈ），２．３６－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．１７－２．１５（ｍ，３Ｈ），１．９８－１．９５（ｍ，３Ｈ），１．８９－１．８４（ｍ，２Ｈ），１．５５－１．５１（ｍ，９Ｈ），１．３９－１．３１（ｍ，３Ｈ），１．２６－１．２１（ｍ，３Ｈ），１．０３－０．９２（ｍ，８Ｈ），０．８０－０．７１（ｍ，５Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１２４５．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－４：［（３Ｒ，５Ｓ）－１－［２－［３－［２－［（３Ｒ）－４－［２－［［４－［３－［３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル］－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１オクタン－８－イル］－２－ピリジル］オキシ］エチル］－３－メチル－ピペラジン－１－イル］エトキシ］イソオキサゾール－５－イル］－３－メチル－ブタノイル］－５－［［（１Ｓ）－１－［４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル］エチル］カルバモイル］ピロリジン－３－イル］［２－［６－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）ヘキサノイルアミノ］エトキシ－ヒドロキシ－ホスホリル］リン酸水素の合成
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）中の［２－アミノエトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル］［（３Ｒ，５Ｓ）－１－［２－［３－［２－［（３Ｒ）－４－［２－［［４－［３－［３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル］－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１オクタン－８－イル］－２－ピリジル］オキシ］エチル］－３－メチル－ピペラジン－１－イル］エトキシ］イソオキサゾール－５－イル］－３－メチル－ブタノイル］－５－［［（１Ｓ）－１－［４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル］エチル］カルバモイル］ピロリジン－３－イル］リン酸水素（５０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の２３℃溶液に、１－（６－（２，５－ジオキソピロリジン－１－イル）－６－オキソヘキシル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（２４ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０１ｍＬ、０．０８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２３℃で１時間撹拌し、次いで、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍｔｏ、１７－４７％水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮ）によって直接精製して、表題化合物（７．９ｍｇ、１４％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．９８－８．９５（ｍ，１Ｈ），８．６０－８．４１（ｍ，１Ｈ），７．９４－７．９０（ｍ，１Ｈ），７．７９－７．７５（ｍ，１Ｈ），７．４８（ｓ，１Ｈ），７．４５－７．３０（ｍ，４Ｈ），７．２３－７．２０（ｍ，１Ｈ），６．９９－６．９４（ｍ，２Ｈ），６．８８－６．８０（ｍ，２Ｈ），６．５４－６．５０（ｍ，１Ｈ），６．１４－６．１０（ｍ，１Ｈ），５．９８－５．９６（ｍ，２Ｈ），４．８９－４．８６（ｍ，２Ｈ），４．５４－４．３５（ｍ，３Ｈ），４．２６－４．２１（ｍ，４Ｈ），３．９５－３．７１（ｍ，５Ｈ），３．２４－３．２１（ｍ，１Ｈ），３．０４－２．９８（ｍ，３Ｈ），２．８２－２．７５（ｍ，１Ｈ），２．６９－２．６４（ｍ，１Ｈ），２．４５－２．４２（ｍ，５Ｈ），２．３６－２．３１（ｍ，１Ｈ），２．１８－２．１５（ｍ，２Ｈ），２．０７－１．９２（ｍ，５Ｈ），１．７９（ｓ，１２Ｈ），１．４６－１．４４（ｍ，５Ｈ），１．３８－１．３５（ｍ，３Ｈ），１．２６－１．２２（ｍ，３Ｈ），１．１６－１．１４（ｍ，２Ｈ），０．９９－０．９５（ｍ，６Ｈ），０．８９－０．７６（ｍ，４Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４３８．８ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
合成例５
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－５の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２を以下のスキーム、スキーム５によって合成した：
（Ｓ）－Ｎ－（１－（４－ブロモフェニル）エチル）アセトアミドの合成
塩化アセチル（２．３５ｇ、３０ｍｍｏｌ）を、（Ｓ）－１－（４－ブロモフェニル）エタンアミン（５．０ｇ、２５ｍｍｏｌ）及びＥｔ３Ｎ（３．８ｇ、３７．４９ｍｍｏｌ）を含むＴＨＦ（５０ｍＬ）の溶液に０℃で滴下した。反応物をその温度で２．５時間撹拌し、次いで、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×３）及び飽和ＮａＣｌ溶液（５０ｍＬ）に分配した。合わせた有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中０～５０％ ＥｔＯＡｃ）によって精製して、表題化合物（４．０ｇ、６６％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：２４１．８ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
（Ｓ）－Ｎ－（１－（４－シアノフェニル）エチル）アセトアミドの合成
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中のシアン化銅（Ｉ）（１．７８ｇ、２０ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）－Ｎ－（１－（４－ブロモフェニル）エチル）アセトアミド（４．０ｇ、１６．５ｍｍｏｌ）の混合物を２４時間還流した。２３℃に冷却した後、混合物をフィルタにかけ、濾液を濃縮した。残渣を２３℃の飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（８０ｍＬ）に添加し、１０分間撹拌した。次いで、飽和次亜塩素酸ナトリウム水溶液を添加し、撹拌を２３℃で２４時間続けた。混合物をＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ×３）で抽出し、合わせた有機層を水（７０ｍＬ×３）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、表題化合物（２．７ｇ、８７％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１８９．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
（Ｓ）－４－（１－アミノエチル）ベンゾニトリル塩酸塩の合成
（Ｓ）－Ｎ－（１－（４－シアノフェニル）エチル）アセトアミド（２．４ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）及び２Ｍ ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ、１２．８ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃で２４時間撹拌した。反応溶液を２３℃に冷却し、次いで、濃縮すると、表題化合物（１．８ｇ、９７％）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４７．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物４、スキーム５：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシレートの合成
（Ｓ）－４－（１－アミノエチル）ベンゾニトリル塩酸塩（１．６ｇ、１１ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸（２．８ｇ、１２ｍｍｏｌ）を含むＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）の２３℃混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（４．３ｇ、３３ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１．６３ｇ、１２ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（ジクロロメタン中５０～１００％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物（１．７ｇ、４３％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３６０．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－Ｂｕｔｙｌ ２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（４－ニトロベンゾイル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
４－ニトロフェニルクロロホルメート（１．６８ｇ、８．３ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシレート（３．０ｇ、７．０ｍｍｏｌ）を含む無水ジクロロメタン（８０ｍＬ）の混合物に、２３℃で２，６－ルチジン（１．１ｇ、１０．４３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１８時間攪拌し、次いで、濃縮すると、表題化合物（４３７ｍｇ、９９．８％）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５９７．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物６、スキーム５：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（４－ニトロベンゾイル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート（４３７ｍｇ、０．８３ｍｍｏｌ）及びアリル１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－ヒドロキシ－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソ得エチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（３３４ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の２３℃混合物に、ＤＭＡＰ（２０３ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４０℃で１８時間撹拌し、次いで、２３℃に冷却し、フィルタにかけた。濾液を分取ＨＰＬＣ（Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０＊４０ ｍｍ＊５ｕｍ／水（０．２２５％ ＦＡ）－ＡＣＮ、１８～４８％）によって直接精製して、表題化合物（６５ｍｇ、８％）を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９５８．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物７、スキーム５：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸の合成
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（６５ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１，３－ジメチルピリミジン－２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）－トリオン（５３ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３ｍＬ）及びメチルアルコール（３ｍＬ）中の溶液に、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）を２３℃で添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、２３℃で１０時間攪拌し、次いで、濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：（２４～５０％）水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮによって精製して、表題化合物（４０ｍｇ、６４％）を赤色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９１８．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物９、スキーム５：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレートの合成
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（４０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（１０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４ｍＬ）中の２３℃混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０２ｍＬ、０．１３ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％ ＴＦＡ）－ＡＣＮ、２０％～５０％）によって精製して、表題化合物（３１ｍｇ、６５％）を青色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０８２．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテートの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート（３０．５ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）のＨＦＩＰ（３ｍＬ）中５％ ＴＦＡ溶液を２３℃で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合物を濃縮すると、表題化合物（２８ｍｇ、９９％）が桃色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９８２．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ－１－５：（３Ｒ，５Ｓ）－１－（２－（３－（４－（トランス－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネートの合成
（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテート（２８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び２－（３－（４－（（４－（トランス－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（２７ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の２３℃のＤＭＦ（３ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０１ｍＬ、０．０８ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（１３ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２３℃で４時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：（１８～３６％）水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－ＡＣＮによって精製して、表題化合物（２３ｍｇ、３１％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）：δ ７．８０－７．５８（ｍ，６Ｈ），７．５７－７．３４（ｍ，５Ｈ），７．２４－７．２１（ｍ，１Ｈ），６．９６－６．８４（ｍ，２Ｈ），６．８０－６．７３（ｍ，１Ｈ），６．５６－６．５４（ｍ，１Ｈ），６．３３－６．２０（ｍ，１Ｈ），６．１７－６．０３（ｍ，１Ｈ），５．２７－５．１９（ｍ，１Ｈ），５．１４－５．１２（ｍ，１Ｈ），４．６２－４．６０（ｍ，５Ｈ），４．５４－４．５１（ｍ，３Ｈ），４．４２－４．３９（ｍ，１Ｈ），４．１７－３．８６（ｍ，２Ｈ），３．８４－３．７６（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．６４（ｍ，３Ｈ），３．６３－３．５０（ｍ，４Ｈ），３．４８－３．４３（ｍ，３Ｈ），３．３８－３．３５（ｍ，２Ｈ），３．２５－３．２２（ｍ，２Ｈ），３．２６－３．１８（ｍ，１Ｈ），３．１７－３．００（ｍ，４Ｈ），２．８６－２．８３（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５５（ｍ，６Ｈ），２．４８－２．３５（ｍ，７Ｈ），２．２９－２．１２（ｍ，８Ｈ），２．０９－１．８６（ｍ，８Ｈ），１．８５－１．６８（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．７５（ｍ，５Ｈ），１．６７－１．５２（ｍ，７Ｈ），１．５１－１．４３（ｍ，２Ｈ），１．４１－１．２３（ｍ，９Ｈ），１．１０－０．９４（ｍ，３Ｈ），０．９３－０．８１（ｍ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１７７２．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
合成例６
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－６の合成
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－６を以下のスキーム、スキーム６によって合成した：
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド塩酸塩の合成
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシレート（上記スキーム５の化合物４を参照）（２．０ｇ、５．５６ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（５ｍＬ）中２３℃溶液に、４Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ；乾燥ＨＣｌガスを乾燥ＥｔＯＡｃ中にバブリングすることによって調製された）を添加した。反応混合物を２３℃で１６時間攪拌し、次いで、濃縮すると、表題化合物（１．４ｇ、９７％）が白色固体として得られた。
化合物４、スキーム６：（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミドの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド塩酸塩（９００ｍｇ、３．４７ｍｍｏｌ）及び２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（上記のスキーム６の化合物３を参照。参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号の４５０頁に開示されている合成経路を参照）（１．４ｇ、３．４３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）中２３℃溶液に、ＤＩＥＡ（１．７１ｍＬ、１０．２９ｍｍｏｌ）及びＨＡＴＵ（２．０ｇ、５．１５ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２３℃で２時間撹拌し、次いで、水（１００ｍＬ）と酢酸エチル（１００ｍＬ×３）に分配した。合わせた有機層をブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタニカケ、濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中０～１００％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物（２．０ｇ、９８％）を無色油状物として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５６８．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物５、スキーム６：（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミドの合成
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（２ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）をキラルＳＦＣ（ＤＡＩＣＥＬ ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＯＤ（２５０ｍｍ＊３０ｍｍ，１０ｕｍ）；（２０％）０．１％ＮＨ３Ｈ２Ｏ，ＥｔＯＨ）によって分離して、第１のピーク（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｓ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（４００ｍｇ、２０％）及び第２のピーク（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（７００ｍｇ、３５％）を両方とも白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６，）：δ ８．４９（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．８２－７．７６（ｍ，２Ｈ），７．５０－７．４４（ｍ，２Ｈ），６．１１（ｓ，１Ｈ），５．１３（ｄ，Ｊ＝３．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．９３－４．８９（ｍ，１Ｈ），４．３６－４．３１（ｍ，１Ｈ），４．２７－４．２５（ｓ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．７２－３．５３（ｍ，４Ｈ），３．４５－３．４０（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｓ，６Ｈ），２．７６－２．６７（ｍ，２Ｈ），２．２５－２．１６（ｍ，１Ｈ），２．０８－１．９６（ｍ，１Ｈ），１．７９－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．４４－１．３３（ｍ，３Ｈ），１．３０－１．１９（ｍ，２Ｈ），０．９８－０．８９（ｍ，３Ｈ），０．８４－０．７４（ｍ，３Ｈ）．
化合物８、スキーム６：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
２３℃の（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（３００ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）及び４ÅＭＳ（１００ｍｇ）の無水ジクロロメタン（３ｍＬ）中の混合物に、Ｓ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（上記のスキーム６の化合物７又は上記のスキーム１の化合物２を参照）（３９１ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）及びＥｔ３Ｎ（２１４ｍｇ、２．１１ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（３ｍＬ）中の溶液をゆっくり添加した。反応物を２３℃で１６時間撹拌し、次いで、フィルタにかけた。濾液を濃縮し、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（石油エーテル中０～７０％酢酸エチル）によって精製して、表題化合物（２００ｍｇ、４９％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７７８．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物９、スキーム６：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－ホルミルピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－（ジメトキシメチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中の２３℃の溶液に、ギ酸（１ｍＬ）及び水（３ｍＬ）を添加した。混合物を５０℃で１６時間撹拌し、次いで、２３℃に冷却し、濃縮すると、表題化合物（８０ｍｇ、８５％）が黄色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７３２．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－６：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（４－（（４－（トランス－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）メチル）ピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエートの合成
２３℃のＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（４－ホルミルピペリジン－１－イル）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（８０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及び２－（６－アミノ－５－（８－（２－（３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノール塩酸塩（上記スキーム６の化合物５を参照；参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０２０／００３８３７８号の３０６～３０７頁の合成経路を参照）（６０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）及びＨＯＡｃ（０．２ｍｌ）のジクロロメタン（１ｍＬ）及びメタノール（１ｍＬ）中の溶液に、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（２３２ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２３℃で３時間撹拌し、次いで、濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ（水（０．２２５％ ＦＡ）－ＡＣＮ、１５～４５％））によって精製し、表題化合物（３５ｍｇ、２６％）を白色固体として得た。ｐｒｅ－ＨＰＬＣ（ＦＡ）後、所望の生成物はＦＡ塩であった。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ ８．５５－８．５３（ｍ，１Ｈ），８．１７－８．１５（ｍ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．８１－７．７５（ｍ，３Ｈ），７．５１－７．４４（ｍ，３Ｈ），７．２３－７．２０（ｍ，１Ｈ），６．８９－６．８２（ｍ，２Ｈ），６．５４－６．５１（ｍ，１Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，２Ｈ），５．９７（ｓ，２Ｈ），５．２６－５．０７（ｍ，２Ｈ），５．０１－４．８５（ｍ，２Ｈ），４．５１－４．４６（ｍ，２Ｈ），４．３８－４．２７（ｍ，２Ｈ），３．８７－３．８０（ｍ，２Ｈ），３．５９－３．５６（ｍ，３Ｈ），３．５４－３．５２（ｍ，３Ｈ），３．２８－３．２４（ｍ，１Ｈ），３．０３－２．９９（ｍ，２Ｈ），２．７６－２．７０（ｍ，２Ｈ），２．３６－２．３１（ｍ，２Ｈ），２．１９－２．０９（ｍ，４Ｈ），２．０１－１．９４（ｍ，４Ｈ），１．８０－１．６２（ｍ，５Ｈ），１．４５－１．３２（ｍ，９Ｈ），１．２７－１．２５（ｍ，１Ｈ），１．１４－１．０２（ｍ，２Ｈ），０．９５－０．８９（ｍ，３Ｈ），０．８８－０．７０（ｍ，３Ｈ）；ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１２５９．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋。
合成例７
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－７の合成
スキーム：
実験：
化合物７を調製するための一般的手順：
四塩化炭素（１０ｍＬ）中のイソブチルアルデヒド（２．７ｍＬ、２９．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、窒素雰囲気下、５０℃でジスルフィド（１．２ｍＬ、１４．８ｍｍｏｌ）を滴下した。反応物を窒素流下３０℃でさらに４８時間撹拌して、遊離した塩化水素を除去した。ＴＬＣ（石油エーテル中２５％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了したことを示した。溶液を真空下で蒸留し、石油エーテル中２５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると、２－［（１，１－ジメチル－２－オキソエチル）ジスルファニル］－２－メチル－プロパナール（３０００ｍｇ、９８．２％）が無色油状物として得られる。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝９．０９（ｓ，２Ｈ），１．３７（ｓ，１２Ｈ）．
化合物８を調製するための一般的手順：
２，２’－ジスルファンジイルビス（２－メチルプロパナール）（１５００．０ｍｇ、７．３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍＬ）溶液に、メチルマグネシウムブロミド（９．７ｍＬ、２９．１ｍｍｏｌ）を０℃で５分間にわたって滴下した。混合物を０℃で２時間撹拌した。
ＴＬＣ（石油エーテル中２０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了したことを示した。混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍｌ×３）で抽出した。合わせた有機相を水（２０ｍＬ）及びブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、３－［（２－ヒドロキシ－１，１－ジメチルプロピル）ジスルファニル］－３－メチル－ブタン－２－オール（１３７０ｍｇ、７９％）を黄色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．７７－３．７４（ｍ，１Ｈ），１．３１（ｓ，６Ｈ），１．２６（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，３Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ）．
化合物２を調製するための一般的手順：
２－メチル－２－［（５－ニトロ－２－ピリジル）ジスルファニル］プロパン－１－オール（５９８３．８ｍｇ、２２．９９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）中溶液に、３－［（２－ヒドロキシ－１，１－ジメチル－プロピル）ジスルファニル］－３－メチル－ブタン－２－オール（１３７０．０ｍｇ、５．７５ｍｍｏｌ）及びヨウ素（２９１７ｍｇ、１１．４９ｍｍｏｌ）を２５℃で添加し、反応混合物を４５℃で２４時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル中３３％ ＥｔＯＡｃ Ｒｆ＝０．４）は、反応が完了に至ったことを示した。混合物をフィルタにかけ、濾液を真空中で濃縮し、石油エーテル中０～５０％ＥｔＯＡｃで溶出するフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると、３－メチル－３－メチルスルホニルスルファニル－ブタン－２－オール（４６０ｍｇ、収率４０．４％）が黄色油状物として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝４．１４－４．０９（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｓ，３Ｈ），１．６８（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｓ，３Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ）．
化合物３を調製するための一般的手順：
トリホスゲン（１１２．３ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、３－メチル－３－メチルスルホニルスルファニル－ブタン－２－オール（１５０．０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）及びピリジン（２３９．３ｍｇ、３．０３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液を添加し、反応物を２５℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固して粗生成物を得て、これを次の工程で直接使用した。
無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中の上記粗生成物に、４ÅＭＳ（１００ｍｇ）を添加し、続いてトリエチルアミン（３２．９ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）及び化合物１（５０．０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液を２０℃でゆっくり添加し、さらに１６時間撹拌した。残渣を濃縮し、石油エーテル中０～７０％酢酸エチルで溶出するシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると、化合物３（６４ｍｇ、９３．８％）が白色固体として得られた。ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．９７４分、ｍ／ｚ＝８３９．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物４を調製するための一般的手順：
化合物３（５０．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のギ酸（２ｍＬ）及び水（２ｍＬ）中溶液を添加し、５０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濃縮して、化合物４（４５ｍｇ、９８．７％）を黄色固体として得、これを次の工程に直接使用した。
ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８４８分、ｍ／ｚ＝７６５．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－７の一般的な調製手順：
化合物４（４５．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２ｍＬ）中溶液に、化合物５（３３．１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及びナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（２４９．４ｍｇ、１．１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、ＴＬＣ（ＤＣＭ中８％ ＭｅＯＨ）によって精製して、Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－７（１５．０ｍｇ、１９．４％）を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ４）：δ＝８．８８（ｓ，１Ｈ），７．８１－７．７５（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．４１（ｍ，５Ｈ），７．２４－７．２０（ｍ，１Ｈ），６．９２－６．８７（ｍ，２Ｈ），６．５７（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．２２（ｄ，Ｊ＝２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｄ，Ｊ＝３．２ Ｈｚ，１Ｈ），５．２８－５．２４（ｍ，１Ｈ），５．０５－５．０２（ｍ，１Ｈ），４．６１（ｓ，２Ｈ），４．５３－４．４９（ｍ，３Ｈ），４．３６－４．３１（ｍ，４Ｈ），４．０４－３．９０（ｍ，２Ｈ），３．６７－３．６５（ｍ，１Ｈ），３．４６－３．４３（ｍ，１Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），３．１６－３．０３（ｍ，４Ｈ），２．９５－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．７８－２．７２（ｍ，３Ｈ），２．６８－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．４９（ｓ，３Ｈ），２．３９－２．３３（ｍ，２Ｈ），２．２６－２．２３（ｍ，２Ｈ），２．１９－２．０６（ｍ，４Ｈ），１．５９－１．５２（ｍ，７Ｈ），１．４６（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，２Ｈ），１．４０－１．２９（ｍ，６Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），１．０５（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），０．８８（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ）．
ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．８２９分、ｍ／ｚ＝６３３．５ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．ＨＲＭＳ（５－９５ＡＢ）：ｍ／ｚ＝１２６５．５１２６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例８
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－８の合成
スキーム：
実験：
化合物２を調製するための一般的手順：
ジクロロメタン（２．００ｍＬ）及びトリフルオロ酢酸（０．４０ｍＬ）中の化合物１（１２０．００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液を２５℃で１時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中１０％ ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．６）は、ほとんどの出発物質が消費され、新しいスポットが形成されたことを示した。次いで、混合物に水（３．００ｍＬ）を添加し、飽和ＮａＨＣＯ３（８．００ｍＬ）でｐＨ＝９に調整した。次いで、混合物をジクロロメタン（１５ｍＬ×３）で抽出した。有機層を濃縮して、粗化合物２（９０．００ｍｇ、８５．３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７８９分、ｍ／ｚ＝５４１．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物４を調製するための一般的手順：
メチルアルコール（５．００ｍＬ）及びジクロロメタン（５．００ｍＬ）中の化合物３（７５．５０ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及び化合物２（９０．００ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１２．９ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（１６．８０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中１２％ ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．６）は、ほとんどの出発物質が消費され、新しいスポットが形成されたことを示した。混合物をフィルタにかけ、濾液を濃縮し、Ｐｒｅ－ＴＬＣ（ＤＣＭ中１２％ ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物４（４０．００ｍｇ、２８．１％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７５５分、ｍ／ｚ＝１０４１．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物６を調製するための一般的手順：
トリホスゲン（１８．３ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）と４Ａモレキュラーシーブのジクロロメタン（２．０ｍＬ）中混合物に、ｔｅｒｔ－ブチル４－（ヒドロキシメチル）－４－メチルスルホニルスルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（２０．０ｍｇ、０．０６２ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．０２ｍＬ、０．１８４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．０ｍＬ）中溶液を添加した。反応混合物を２０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮して粗生成物を得て、これを次の工程で直接使用した。
無水ジクロロメタン（５．００ｍＬ）中の上記粗生成物及び４ÅＭＳ（１００ｍｇ）に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０２ｍＬ、０．０９ｍｍｏｌ）及び化合物４（３０．００ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）の無水Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．００ｍＬ）中溶液を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＤＣＭ中１１％ ＭｅＯＨ、Ｒｆ＝０．６）は、ほとんどの出発物質が消費され、新しいスポットが形成されたことを示した。混合物をフィルタにかけ、濃縮して粗生成物を得、これをＰｒｅ－ＴＬＣ（ＤＣＭ中１１％ ＭｅＯＨ）によって精製して、化合物６（２５．００ｍｇ、６２．３％）を淡黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（１０－８０，ＡＢ，７．０分）：ＲＴ＝３．０９６分、ｍ／ｚ＝６９７．１ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋
化合物７を調製するための一般的手順：
化合物６（２０．００ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．００ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．８０ｍＬ、１０．３８ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。混合物を濃縮して、粗生成物７をＴＦＡ塩として得、これを次の工程に直接使用した。
Ｌ１－ＣＩＢＥ－ＢＲＭ１－８の一般的調製手順：
ジクロロメタン（２ｍＬ）及びメチルアルコール（１ｍＬ）中のホルムアルデヒド（４．３ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）及び化合物７（２０．２０ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の溶液に酢酸（１．００ｍｇ）を添加した。混合物を２５℃で３０分間添加した。次いで、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（９．２ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１時間撹拌した。次いで、混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３（５ｍＬ）で洗浄し、有機層を濃縮し、残渣を逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル１４～４４／水中０．２２５％ ＦＡ）によって精製して、Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－８（３．６０ｍｇ、１８．２％）を白色固体として得た。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ＝８．９９（ｓ，１Ｈ），８．４９（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｓ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．７８（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９－７．３６（ｍ，６Ｈ），７．２２－７．２０（ｍ，１Ｈ），６．８８－６．８５（ｍ，２Ｈ），６．５４－６．５２（ｍ，１Ｈ），６．１３（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），５．９７－５．９４（ｍ，２Ｈ），５．２５－５．２１（ｍ，１Ｈ），４．９３－４．８９（ｍ，１Ｈ），４．５２－４．４３（ｍ，６Ｈ），４．２６－４．２１（ｍ，６Ｈ），３．８７（ｂｒ ｓ，１Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝９．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｓ，３Ｈ），３．０２－２．９６（ｍ，４Ｈ），２．６１（ｂｒ ｓ，４Ｈ），２．４６－２．３３（ｍ，１０Ｈ），２．２０－２．１４（ｍ，６Ｈ），１．９６－１．８９（ｍ，１０Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，３Ｈ），０．９９－０．９５（ｍ，６Ｈ），０．８１（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ）．ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝０．７８１分、ｍ／ｚ＝１３０６．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
化合物９を調製するための一般的手順：
四塩化炭素（１５０ｍＬ）中のｔｅｒｔ－ブチル４－ホルミル－１－ピペリジンカルボキシレート（９８７０．７ｍｇ、４６．２８ｍｍｏｌ）の混合物に、ジスルフルジクロリド（１．４８ｍＬ、１８．５１ｍｍｏｌ）を５５℃で添加し、混合物を５５℃で１６時間撹拌し、ＴＬＣ（ジクロロメタン中１０％メチルアルコール、Ｒｆ＝０．５）は、反応が完了したことを示した。混合物をフィルタにかけ、有機層を真空中で濃縮した。残渣に水（３０ｍＬ）を添加し、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して粗生成物を得て、これをＰｒｅ－ＴＬＣ（ジクロロメタン中１０％メチルアルコール、Ｒｆ＝０．５）によって精製すると、ｔｅｒｔ－ブチル４－［（１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ホルミル－４－ピペリジル）ジスルファニル］－４－ホルミル－ピペリジン－１－カルボキシレート（５．５ｇ、６０．８％）が白色固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝９．０６（ｓ，２Ｈ），３．７３（ｂｒ ｓ，４Ｈ），３．１８－３．１１（ｍ，４Ｈ），２．０７－２．０２（ｍ，４Ｈ），１．７４－１．６９（ｍ，４Ｈ），１．４６（ｓ，１８ Ｈ）．
化合物１０を調製するための一般的手順：
ｔｅｒｔ－ブチル４－［（１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－ホルミル－４－ピペリジル）ジスルファニル］－４－ホルミル－ピペリジン－１－カルボキシレート（３０００．０ｍｇ、６．１４ｍｍｏｌ）のメチルアルコール（４０ｍＬ）中の混合物に、水素化ホウ素ナトリウム（６９６．７ｍｇ、１８．４２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を２５℃で１時間撹拌し、ＴＬＣ（ジクロロメタン中１０％メチルアルコール、Ｒｆ＝０．５）が新たなスポットを示したので、水（３０ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、得られた混合物をジクロロメタン（３×３０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して粗生成物を得て、これをジクロロメタン中０～３％メチルアルコールで溶出するシリカ上のクロマトグラフィーによって精製して、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（ヒドロキシメチル－４－ピペリジル］ジスルファニル］－４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（３０００ｍｇ、９９％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．７５－３．７２（ｍ，４Ｈ），３．５９（ｓ，４Ｈ），３．３２－３．２６（ｍ，４Ｈ），１．７５－１．６７（ｍ，８Ｈ），１．４６（ｓ，１８Ｈ）．
化合物１１を調製するための一般的手順：
水素化リチウムアルミニウム（１２３２．４ｍｇ、３２．４７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中の懸濁液に、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［１－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－（ヒドロキシメチル－４－ピペリジル］ジスルファニル］－４－（ヒドロキシメチル）ピペリジン－１－カルボキシレート（３２００．０ｍｇ、６．４９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍＬ）中溶液を滴加した。形成された混合物を窒素下、２５℃で２時間撹拌した。反応物をＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮すると、粗生成物ｔｅｒｔ－ブチル４－（ヒドロキシメチル）－４－スルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（２７００ｍｇ、１００％）が得られ、これを次の工程に直接使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．９６－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ）３．２７－３．２１（ｍ，２Ｈ），１．６４－１．６１（ｍ，４Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
化合物１２を調製するための一般的手順：
イミダゾール（１７８３．５ｍｇ、２６．２ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル４－（ヒドロキシメチル）－４－スルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（２７００．０ｍｇ、１０．９２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）中の溶液に、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（２４６７．８ｍｇ、１６．３７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４０ｍＬ）中の溶液を添加した。混合物を２０℃で１２時間連続的に撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル中２０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５８）は、反応が完了したことを示した。次いで、混合物を水（２０ｍＬ）で洗浄し、有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮し、粗生成物をシリカ上のクロマトグラフィー（石油エーテル中１０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．５８）によって精製すると、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－４－スルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（３８００ｍｇ、９６．３％）が得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．９６－３．９２（ｍ，２Ｈ），３．５２（ｓ，２Ｈ），３．２０－３．１３（ｍ，２Ｈ），１．７２－１．６５（ｍ，２Ｈ），１．５２－１．４９（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），０．９０（ｓ，９Ｈ），０．０６（ｓ，６Ｈ）．
化合物１３を調製するための一般的手順：
Ｎ２保護下のメタンスルホニルクロリド（２．５１ｇ、２１．９１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－４－スルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（３．８ｇ、１０．５１ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（５．４５ｍＬ、４２．０３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液を滴加した。混合物を２５℃で２時間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル中２０％酢酸エチル、Ｒｆ＝０．３）は新たなスポットを示した。反応物を水（３０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を濃縮し、石油エーテル中０～１０％酢酸エチルで溶出するシリカ上カラムによって精製すると、ｔｅｒｔ－ブチル４－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－４－メチルスルホニルスルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（１６７０ｍｇ、３６．１％）が白色固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．９４－３．８８（ｍ，４Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），３．２６－３．２０（ｍ，１Ｈ），１．９９－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８６－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），０．９１（ｓ，９Ｈ），０．１０（ｓ，６Ｈ）．ＬＣＭＳ（５－９５，ＡＢ，１．５分）：ＲＴ＝１．１２６分、ｍ／ｚ＝３４０．１［Ｍ－１００＋Ｈ］＋．
化合物５を調製するための一般的手順：
ｔｅｒｔ－ブチル４－［［ｔｅｒｔ－ブチル（ジメチル）シリル］オキシメチル］－４－メチルスルホニルスルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（１５００．００ｍｇ、３．４１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０．０ｍＬ）中溶液に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（ＴＨＦ中５．１２ｍＬ、５．１２ｍｍｏｌ、１ｍｏｌ／Ｌ）を添加した。混合物を０℃で２０分間撹拌した。ＴＬＣ（石油エーテル中６０％ ＥｔＯＡｃ、Ｒｆ＝０．４）は、ほとんどの出発物質が消費されたことを示した。混合物にＥｔＯＡｃ（７０ｍＬ）を添加し、有機層を水（２５ｍＬ×２）、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、有機層を濃縮して粗生成物を得て、これを石油エーテル中０～６０％ ＥｔＯＡｃで溶出するシリカ上フラッシュカラムによって精製して、ｔｅｒｔ－ブチル４－（ヒドロキシメチル）－４－メチルスルホニルスルファニル－ピペリジン－１－カルボキシレート（６７０．００ｍｇ、６０．４％）を無色油状物として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，クロロホルム－ｄ）：δ＝３．９６（ｓ，２Ｈ），３．８９－３．８５（ｍ，２Ｈ），３．４３（ｓ，３Ｈ），３．３１－３．２８（ｍ，２Ｈ），２．１２－２．０８（ｍ，２Ｈ），１．８２－１．７６（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
合成例９
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－９の合成
工程１：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシホスホリル）オキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（３００ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の１－メチルピロリジン－２－オン（８．０ｍＬ）中の溶液に、炭酸セシウム（０．３２ｇ、０．９７ｍｍｏｌ）及びジ－ｔｅｒｔ－ブチル（クロロメチル）ホスフェート（０．１９ｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で１２時間撹拌した。反応混合物を水（２０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１０ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、減圧下で濃縮して残渣を得た。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（シリカゲル、１００～２００メッシュ、ジクロロメタン中０～２％メタノール）によって精製して、表題化合物（２００ｍｇ、収率４９％）を黄色油状物として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８３９．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程２：（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシホスホリル）オキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（２００ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液に、ヘキサフルオロイソプロパノール（５．０ｍＬ）中の５％トリフルオロ酢酸を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。反応物を、Ｃｏｌｕｍｎ Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ条件水（０．２２５％ギ酸）－アセトニトリル（５％～３５％）によって濃縮精製すると、表題化合物（１００ｍｇ、収率５６．６％）が黄色固体として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６２７．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２Ｓ，４Ｒ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシ－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（３８０ｍｇ、０．６２ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２５０ｍｇ、２．４７ｍｍｏｌ）並びに４ÅＭＳ（５０ｍｇ）の無水ジクロロメタン（５．０ｍＬ）中混合物に、Ｓ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（３２２ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ）を２０℃で１６時間ゆっくり添加した。混合物をｐｒｅ－ＴＬＣ（ジクロロメタン中７％メタノール）によって精製し、表題化合物（１５０ｍｇ、２８．９％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８３９．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：Ｓ－（２－メチル－３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１５０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の水（３．０ｍＬ）及びギ酸（８．０ｍＬ）中溶液を５０℃で２時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固すると、表題化合物（１３５ｍｇ、収率９８．７％）が白色固体として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７６５．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（ホスホノオキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（１３８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びＳ－（２－メチル－３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１３０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）及びメタノール（５．０ｍＬ）中溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（７２０ｍｇ、３．４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４０℃で４８時間撹拌した。反応混合物をＣｏｌｕｍｎ Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０＊２５ｍｍ＊５ｕｍ条件水（０．２２５％ギ酸）－アセトニトリル２０－５０％）によって精製して、表題化合物（５４．２ｍｇ、２１．３％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１３７５．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．９８（ｓ，１Ｈ），８．５２（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｓ，２Ｈ），７．７４（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．４７－７．３０（ｍ，５Ｈ），７．２９－７．２４（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｔ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．５０（ｄ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｓ，１Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝２．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．７９－５．７５（ｍ，１Ｈ），５．５１－５．４６（ｍ，２Ｈ），５．２３－５．１８（ｍ，１Ｈ），５．０６－４．８５（ｍ，３Ｈ），４．４８－４．３５（ｍ，５Ｈ），４．２６－４．２３（ｍ，２Ｈ），３．８９－３．８３（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．７１（ｍ，２Ｈ），３．０９－２．９９（ｍ，５Ｈ），２．９７－２．８７（ｍ，４Ｈ），２．８４－２．７７（ｍ，３Ｈ），２．７３－２．７１（ｍ，２Ｈ），２．４６－２．４４（ｍ，３Ｈ），２．３０－２．１１（ｍ，５Ｈ），２．０５－１．９４（ｍ，３Ｈ），１．５７－１．３５（ｍ，９Ｈ），１．３３－１．２２（ｍ，６Ｈ），１．１１－１．０４（ｍ，４Ｈ），０．９８－０．９１（ｍ，３Ｈ），０．８６－０．７７（ｍ，３Ｈ）．
合成例１０
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１０の合成
工程１：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（ホスホノオキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１００ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（９９．２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．００ｍＬ）及びメタノール（１．００ｍＬ）中溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（６１５ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。混合物をＣｏｌｕｍｎ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３ｕｍ条件水（０．２２５％ギ酸）－アセトニトリル１０％～４０％）によって精製して、表題化合物（１１０ｍｇ、５１．４％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１３７５．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．９９（ｓ，１Ｈ），８．５１（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．１５（ｓ，２Ｈ），７．８２－７．７２（ｍ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝７．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２－７．３２（ｍ，６Ｈ），７．３０－７．２４（ｍ，１Ｈ），７．０８－７．０３（ｍ，１Ｈ），６．５６－６．４６（ｍ，１Ｈ），６．３３－６．３０（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｓ，１Ｈ），５．９１－５．８６（ｍ，１Ｈ），５．５５－５．５０（ｍ，２Ｈ），５．２１－５．１８（ｍ，１Ｈ），４．９８－４．８７（ｍ，２Ｈ），４．５１－４．３１（ｍ，５Ｈ），４．３０－４．２２（ｍ，２Ｈ），３．９１－３．８４（ｍ，２Ｈ），３．７７－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．５８－３．５１（ｍ，２Ｈ），３．１８－３．１１（ｍ，４Ｈ），３．０７－２．９７（ｍ，４Ｈ），２．９５－２．８１（ｍ，５Ｈ），２．７９－２．７２（ｍ，２Ｈ），２．４７－２．４５（ｍ，３Ｈ），２．３７－２．１４（ｍ，５Ｈ），２．１０－１．８８（ｍ，３Ｈ），１．４８－１．２３（ｍ，９Ｈ），１．２０－１．０５（ｍ，３Ｈ），０．９８－０．９３（ｍ，３Ｈ），０．８８－０．７６（ｍ，３Ｈ）．
合成例１１
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１１の合成
工程１：Ｓ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
ジクロロメタン（４．０ｍＬ）中のＳ－（３－ヒドロキシブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（２００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）及びピリジン（３４３ｍｇ、４．３４ｍｍｏｌ）の溶液に、ジクロロメタン（２．０ｍＬ）中のトリホスゲン（１２９ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で３０分間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固すると、表題化合物（２５０ｍｇ、９３．４％）が黄色油状物として得られ、これを次の工程に直接使用した。
工程２：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
無水ＤＣＭ（４．０ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（２６０ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１９４ｍｇ、１．９２ｍｍｏｌ）及び４ÅＭＳ（８０ｍｇ）の混合物に、無水ジクロロメタン（２．０ｍＬ）中のＳ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（２５０ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）を２０℃で１６時間ゆっくり添加した。反応混合物を濾過し、濾液をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００～２００メッシュ、石油エーテル中０～７０％酢酸エチル）によって精製すると、表題化合物（１５０ｍｇ、４１．６％）が黄色油状物として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７５２．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
ギ酸（５．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）中のＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１５０ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）の溶液を５０℃で１６時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固すると、表題化合物（１００ｍｇ、収率７３．９％）が黄色油状物として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６７９．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（ホスホノオキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（１６９ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）ブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）及びメタノール（５．０ｍＬ）中溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（１．４０ｇ、６．６３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で４８時間撹拌した。反応混合物をＣｏｌｕｍｎ Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３ｕｍ条件水（０．２２５％ギ酸）－アセトニトリル１０－４０％）によって精製して、表題化合物（２５．６ｍｇ、収率８．８％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６５９．１ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．５８（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８２－７．７４（ｍ，３Ｈ），７．５５（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．５０－７．４３（ｍ，３Ｈ），７．３９－７．３４（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．１５－７．０９（ｍ，１Ｈ），６．５４－６．５１（ｍ，１Ｈ），６．３７－６．２１（ｍ，２Ｈ），６．１６－６．１０（ｍ，２Ｈ），５．５７－５．５２（ｍ，２Ｈ），５．１８－５．１２（ｍ，２Ｈ），４．９９－４．８７（ｍ，２Ｈ），４．５２－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．４０－４．２２（ｍ，４Ｈ），３．８７－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７４－３．７０（ｍ，１Ｈ），３．６０－３．５０（ｍ，２Ｈ），３．１５－３．００（ｍ，２Ｈ），２．９６－２．７９（ｍ，４Ｈ），２．６９－２．６４（ｍ，１Ｈ），２．３５－２．１８（ｍ，９Ｈ），２．１６－２．０９（ｍ，２Ｈ），２．０２－１．７４（ｍ，６Ｈ），１．５３－１．２３（ｍ，１２Ｈ），０．９５－０．９１（ｍ，３Ｈ），０．８５－０．７４（ｍ，３Ｈ）．
合成例１２
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１２の合成
工程１：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボキサミド（３００ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、ピリジン（１７５ｍｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及び４ÅＭＳ（１００ｍｇ）の無水ジクロロメタン（５．０ｍＬ）中の混合物に、無水ジクロロメタン（２ｍＬ）中のＳ－（３－（（クロロカルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（２５９ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）を２０℃で１６時間ゆっくり添加した。反応混合物をｐｒｅ－ＴＬＣ（ジクロロメタン中７％メタノール）によって精製して、表題化合物（６０．０ｍｇ、１４．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７２２．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
水（１．００ｍＬ）及びギ酸（５．００ｍＬ）中のＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－２－（３－（２，２－ジエトキシエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（６０．０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の溶液。反応混合物を５０℃で２時間撹拌した。得られた残渣を濃縮すると、表題化合物（５０ｍｇ、９２．２％）が白色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６９３．２ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：Ｓ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（（２Ｒ）－２－（３－（２－（４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（ホスホノオキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート
（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（１３８．５１ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）及びＳ－（３－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－メチルブタン－２－イル）メタンスルホノチオエート（１２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．００ｍＬ）及びメタノール（５．００ｍＬ）中溶液に、ナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（３８．０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で３６時間撹拌した。反応混合物をＣｏｌｕｍｎ Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０＊２５ｍｍ＊５ｕｍ条件水（０．２２５％ギ酸）－アセトニトリル１７－４７％）によって精製して、表題化合物（１５．９ｍｇ、収率５０．４％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６６６．１ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）８．６１－８．５６（ｍ，１Ｈ），７．８１－７．７３（ｍ，３Ｈ），７．５７－７．４２（ｍ，４Ｈ），７．３８－７．３２（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．１５－７．０８（ｍ，１Ｈ），６．５４－６．５０（ｍ，１Ｈ），６．２９－６．２５（ｍ，２Ｈ），６．１５－６．１０（ｍ，２Ｈ），５．５８－５．５２（ｍ，２Ｈ），５．２２－５．１１（ｍ，２Ｈ），５．０４－５．０１（ｍ，１Ｈ），４．９４－４．９１（ｍ，１Ｈ），４．４９－４．４５（ｍ，２Ｈ），４．４１－４．３６（ｍ，１Ｈ），４．２８－４．２５（ｍ，３Ｈ），３．９０－３．８２（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．７１（ｍ，２Ｈ），３．５６－３．５１（ｍ，１Ｈ），３．１０－２．８２（ｍ，５Ｈ），２．３１－２．１８（ｍ，７Ｈ），２．１６－２．０９（ｍ，２Ｈ），２．０２－１．７７（ｍ，５Ｈ），１．５６－１．４０（ｍ，１１Ｈ），１．３９－１．２０（ｍ，８Ｈ），１．１６－１．１２（ｍ，１Ｈ），０．９５－０．９１（ｍ，３Ｈ），０．８５－０．７６（ｍ，４Ｈ）。
合成例１３
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１３の合成
工程１：（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（クロロメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート
（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．４ｇ、３．２２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５０．０ｍＬ）及びＮＭＰ（１．０ｍＬ）中溶液に、塩化チオニル（０．７０ｍＬ、９．６７ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応混合物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００－２００メッシュ、ジクロロメタン中０－５％メタノール）によって精製すると、表題化合物（１．４０ｇ、収率９６％）が黄色油状物として得られた。
工程２：（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート
（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（クロロメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．４０ｇ、３．０９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム３（１．０７ｇ、７．７３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６０ｍＬ）中溶液に、２－ブロモフェノール（０．５４ｍＬ、４．６４ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応物を２５℃で３時間撹拌した。反応物を水（３０．０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５０．０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０．０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して乾燥させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００－２００メッシュ、ジクロロメタン中０－５％メタノール）によって精製して、表題化合物（１．１ｇ、収率６０％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５９０．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：（Ｓ）－エチル１－（（１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート
（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．１０ｇ、１．８７ｍｍｏｌ）及びビス（ピナコラト）ジボロン（７１１ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（２０．０ｍＬ）中溶液に、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１３７ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５４９ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、１００℃で３時間撹拌した。混合物の粗製物を次の工程で直接使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６３７．１ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（７５０ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）及びオルトリン酸三カリウム（８１４ｍｇ、３．８４ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１５．０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１．００ｍＬ）中溶液に、クロロ［（ジ（１－アダマンチル）－ｎ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（１７１ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）－エチル１－（（１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（８３２ｍｇ、１．３１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、１００℃で３時間撹拌した。反応物をシリカゲルカラム（シリカゲル、１００－２００メッシュ、ジクロロメタン中０－１５％メタノール）によって精製して、表題化合物（４００ｍｇ、収率２８％）を暗色油状物として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１２５１．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（４００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のメタノール（５．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）中の溶液に、水酸化リチウム一水和物（９２．７ｍｇ、３．８７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、２５℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固すると、表題化合物（３００ｍｇ、収率７７．１％）が暗色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１００５．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程６：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（３００ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０．０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．２０ｍＬ、３．００ｍｍｏｌ）を添加した。溶液を２０℃で５時間撹拌し、濃縮乾固した。粗生成物を、以下の条件（カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：１２－４２％水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル）を用いて分取ＨＰＬＣによって精製して、表題化合物（８９ｍｇ、３２．９％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９０５．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程７：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（８６．０２ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート（９６．０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１．５０ｍＬ）及びメタノール（１．５０ｍＬ）中溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１３．６ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。得られた溶液をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ（アセトニトリル１７～４７％／水中０．０５％ ＮＨ３Ｈ２Ｏ）によって精製して、表題化合物（８９．０ｍｇ、収率５８．７％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４２９．９ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程８：Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（５０．０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２，２，２－トリフルオロ酢酸（１２．４ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４．０ ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０２ｍＬ、０．１０ｍｍｏｌ）及び２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１６．０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応混合物をオイルポンプによって濃縮乾固した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アクリロニトリル、２０～５０％）によって精製し、表題化合物（３３．６ｍｇ、収率５９．７％）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）：δ（ｐｐｍ）１０．１９（ｓ，１Ｈ），９．０２－８．８６（ｍ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．５１－７．４１（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，５Ｈ），７．２９－７．０９（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｓ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），６．１５－５．９６（ｍ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），４．９３－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．７１－４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５２－４．２４（ｍ，９Ｈ），３．６６（ｓ，４Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，５Ｈ），３．０９－２．９６（ｍ，８Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３４（ｍ，４Ｈ），２．２９－２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｄ，Ｊ＝１１．２ Ｈｚ，３Ｈ），１．９１（ｓ，２Ｈ），１．８３－１．５５（ｍ，５Ｈ），１．５１－１．３０（ｍ，９Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝５．８ Ｈｚ，５Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），０．８６－０．７５（ｍ，３Ｈ）。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７９７．５ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
合成例１４
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１４の合成
工程１：ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボンキシレート
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート（４５０ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及びオルトリリン酸三カリウム（０．１９ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（２０ｍＬ）中溶液に、クロロ［（ジ（１－アダマンチル）－ｎ－ブチルホスフィン）－２－（２－アミノビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（１０３ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）－エチル１－（（１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（９７７ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、１００℃で３時間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機物をブライン（３０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、表題化合物（４００ｍｇ、４９．１％）を暗色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０６０．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程２：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボンキシレート（４５０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）のメタノール（５．０ｍＬ）及び水（２．０ｍＬ）中溶液に、水酸化リチウム一水和物（１０２ｍｇ、４．２４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮すると、表題化合物（４３８ｍｇ、収率９７．５％）が暗色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０３２．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（４００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（４．０ｍＬ）中混合物に、トリフルオロ酢酸（０．３０ｍＬ、３．９０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０ ｏＣで５時間撹拌した。反応物を濃縮乾固し、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル１２％～４２％）によって精製し、表題化合物（３６０ｍｇ、収率８８．９％）を得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９３２．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－２－カルボキサミド（３１３．２１ｍｇ、０．５８００ｍｍｏｌ）及び１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート（３６０ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．５０ｍＬ）及びメタノール（０．５０ｍＬ）中溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（４９．３ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（６．００ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、１滴の酢酸を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。得られた残渣をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ（アセトニトリル１７－４７／水中０．０５％ ＮＨ３Ｈ２Ｏ、２０％～５０％）によって精製して、表題化合物（２５０ｍｇ、４６．７％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１３８４．８ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（５０．０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２，２，２－トリフルオロアセテート（１２．８ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４．００ｍＬ）中混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０２ｍＬ、０．１１００ｍｍｏｌ）、２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（１６．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で３時間撹拌した。混合物をオイルポンプによって濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル２０％～５０％）によって精製し、表題化合物（３８．５ｍｇ、６５．４％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７７５．３ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）１０．１９（ｓ，１Ｈ），９．０２－８．８６（ｍ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．５１－７．４１（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，５Ｈ），７．２９－７．０９（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｓ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），６．１５－５．９６（ｍ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），４．９３－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．７１－４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５２－４．２４（ｍ，９Ｈ），３．６６（ｓ，４Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，５Ｈ），３．０９－２．９６（ｍ，８Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３４（ｍ，４Ｈ），２．２９－２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｄ，Ｊ＝１１．２ Ｈｚ，３Ｈ），１．９１（ｓ，２Ｈ），１．８３－１．５５（ｍ，５Ｈ），１．５１－１．３０（ｍ，９Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝５．８ Ｈｚ，５Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），０．８６－０．７５（ｍ，３Ｈ）．
合成例１５
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１５の合成
工程１：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（フルオロスルホニル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（５００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３．０ｍＬ）中の溶液を、ＳＯ２Ｆ２バルーン下にて０℃で１６時間撹拌した。混合物を濃縮すると、表題化合物（５６６ｍｇ、９９．８％）が黄色油状物として得られた。粗生成物を次の工程に直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７１３．５ ［Ｍ＋Ｎａ］＋．
工程２：Ｎ－（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－４－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）ベンズアミド
Ｎ－（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－３－ヒドロキシ－４－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）ベンズアミド（３２０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０．０ｍＬ）中溶液に、２，６－ルチジン（０．２４ｍＬ、２．０９ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（０．３２ｍＬ、１．４０ｍｍｏｌ）を添加し、０℃で２時間撹拌した。反応物を濃縮し、残渣を、カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ Ｃ１８ ７５＊３０ｍｍ＊３ｕｍ条件水（０．０５％ ＮＨ３Ｈ２Ｏ＋１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル（３５％～６５％）によって精製して、表題化合物（１４０ｍｇ、３５％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５７３．４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェノキシ）スルホニル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
アセトニトリル（５．０ｍＬ）及びＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．００ｍＬ）中の１Ｍ ２－ｔｅｒｔ－ブチルイミノ－２－ジエチルアミノ－１，３－ジメチル－ペルヒドロ－１，３，２－ジアザホスホリンのアセトニトリル（０．８６ｍＬ、０．８６ｍｍｏｌ）、（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（フルオロスルホニル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（３００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）及びＮ－（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）－３－（（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ）－４－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）ベンズアミド（２７４ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の溶液を、２４℃で１６時間撹拌した。粗混合物を濃縮乾固し、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０＊２５ｍｍ＊５ｕｍ／水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル／４０－７０％）によって精製して、表題化合物（２００ｍｇ、収率３９％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１１９５．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェニル（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェニル）スルフェート２，２，２－トリフルオロアセテート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェノキシ）スルホニル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（２０５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の５％トリフルオロ酢酸中のヘキサフルオロイソプロパノール（６．００ｍＬ）の溶液を１５℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮すると、表題化合物（２０７ｍｇ、９９．８％）が白色固体として得られた。粗生成物を次の工程に直接使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０９５．４ ［Ｍ＋Ｈ－ＴＦＡ］＋．
工程４：２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェニル（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェニル）スルフェート
２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェニル（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェニル）スルフェート２，２，２－トリフルオロアセテート（２０７ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（１８４ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のメタノール（１．００ｍＬ）及びジクロロメタン（１．００ｍＬ）中溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１１．８ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）及びアセトキシナトリウム（４２．１ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。反応物を２０℃で３時間撹拌した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １５０＊２５ｍｍ＊５ｕｍ／水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル／３０－６０％）によって精製して、表題化合物（１４５ｍｇ、５２．３％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８１０．９ ［１／２Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェニル（５－（（２－（２－（２－（２－（４－（１７－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）－１５－オキソ－２，５，８，１１－テトラオキサ－１４－アザヘプタデシル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェニル）スルフェート
２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェニル（５－（（２－（２－（２－（２－アジドエトキシ）エトキシ）エトキシ）エチル）カルバモイル）－２－（（（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ，６Ｒ）－３，４，５－トリヒドロキシ－６－（ヒドロキシメチル）テトラヒドロ－２Ｈ－ピラン－２－イル）オキシ）フェニル）スルフェート（４５．０ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）及び３－（２，５－ジオキソピロール－１－イル）－Ｎ－［２－［２－［２－（２－プロパ－２－イノキシエトキシ）エトキシ］エトキシ］エチル］プロパンアミド（２０．０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（１．００ｍＬ）及び水（１．００ｍＬ）中の溶液に、硫酸銅（１２．４ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の水（０．２ｍＬ）中の溶液及びアスコルビン酸ナトリウム（１１．０１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の水（０．２ｍＬ）中の溶液を０℃で添加した。反応物をＮ２雰囲気下にて２６℃で１時間撹拌した。粗生成物を分取ＨＰＬＣ（Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊３ｕｍ／水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル／１５－４５％）によって精製して、表題化合物（２２．６ｍｇ、４０．６％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１００１．９ ［１／２Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例１６
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１６の合成
工程１：（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（２－ブロモ－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート
（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（クロロメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．００ｇ、２．２１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．７６ｇ、５．５２ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（６０．０ｍＬ）中溶液に、２－ブロモ－４－フルオロ－フェノール（０．６３ｇ、３．３１ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応物を２５℃で３時間撹拌した。反応混合物を水（３０．０ｍＬ）で希釈し、ジクロロメタン（５０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機物をブライン（２０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して乾燥させた。残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００－２００メッシュ、ジクロロメタン中０－５％メタノール）によって精製して、表題化合物（１．２ｇ、８９．５％）を白色固体として得た。
工程２：（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（４－フルオロ－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート
（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（２－ブロモ－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．００ｇ、１．６５ｍｍｏｌ）及び４，４，４’，４’，５，５，５’，５’－オクタメチル－２，２’－ビ（１，３，２ジオキサボロラン）（６２７ｍｇ、２．４７ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（５．０ｍＬ）中溶液に、１，１’－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセンパラジウムジクロリド（１２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（４８５ｍｇ、４．９４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＮ２下、１００℃で３時間撹拌した。混合物の粗製物を次の工程で直接使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６５５．４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）－５－フルオロフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１．１１ｇ、１．９９ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．３８ｍＬ、４．５８ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（５ｍＬ）中溶液に、［２－（２－アミノフェニル）フェニル］－クロロ－パラジウム；ビス（１－アダマンチル）－ブチル－ホスファン（１０２．１５ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び（Ｓ）－エチル１－（（１－（（４－（（４－フルオロ－２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．００ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＮ２下、１００℃で３時間撹拌した。反応物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、１００－２００メッシュ、ジクロロメタン中０－１０％メタノール）によって精製すると、表題化合物（３６０ｍｇ、２２．４％）が暗色固体として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０９５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（３Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）－５－フルオロフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（３６０ｍｇ、０．３４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２．００ｍＬ）、メタノール（５．０ｍＬ）及び水（２．００ｍＬ）中の溶液に、水酸化リチウム一水和物（４１．０ｍｇ、１．７１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物をＮ２雰囲気下、１００℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固して、表題化合物（３５０ｍｇ、９９．９％）を白色固体として得た。
工程５：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（３４０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（５．０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．０５ｍＬ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。反応混合物を濃縮乾固し、残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル１２％～４２％）によって精製して、表題化合物（８０ｍｇ、２６．１％）を白色固体として得た。
工程６：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（７０．３ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）及び１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸２，２，２－トリフルオロアセテート（８０．０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）及びメタノール（０．６ｍＬ）中溶液に、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１１．１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（６．０ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）及び１滴の酢酸を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。得られた残渣をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ（アセトニトリル１７～４７％／水中０．０５％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）によって精製して、表題化合物（８０ｍｇ、収率６３．８％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４４８．８ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程７：Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）－４－フルオロフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（８０．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）ピロール－２，５－ジオン；２，２，２－トリフルオロ酢酸（１９．６ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（４．００ｍＬ）中溶液に、２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－ＮＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（２５．２ｍｇ、０．０７ｍｍｏｌ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０３ｍＬ、０．１７００ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。反応混合物をオイルポンプによって濃縮乾固した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル、２０％～５０％）によって精製し、表題化合物（６８．２ｍｇ、収率７５％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８０６．７ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
１Ｈ ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）１０．１９（ｓ，１Ｈ），９．０２－８．８６（ｍ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７－７．７８（ｍ，２Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．５１－７．４１（ｍ，５Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，５Ｈ），７．２９－７．０９（ｍ，１Ｈ），６．９７（ｓ，２Ｈ），６．７６（ｓ，１Ｈ），６．４２（ｓ，１Ｈ），６．１５－５．９６（ｍ，２Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），４．９３－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．７１－４．６０（ｍ，２Ｈ），４．５２－４．２４（ｍ，９Ｈ），３．６６（ｓ，４Ｈ），３．３３（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，５Ｈ），３．０９－２．９６（ｍ，８Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３４（ｍ，４Ｈ），２．２９－２．１４（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｄ，Ｊ＝１１．２ Ｈｚ，３Ｈ），１．９１（ｓ，２Ｈ），１．８３－１．５５（ｍ，５Ｈ），１．５１－１．３０（ｍ，９Ｈ），１．１９（ｄ，Ｊ＝５．８ Ｈｚ，５Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），０．８６－０．７５（ｍ，３Ｈ）．
合成例１７
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１７の合成
工程１：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシヒドロホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－ヒドロキシエチル）カルバメート（１．０ｇ、３．５３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３．００ｍＬ）中溶液に、テトラヒドロフラン（５．０ｍＬ）中の三塩化リン（０．７３ｍＬ、８．４４ｍｍｏｌ）及びテトラヒドロフラン（３．０ｍＬ）中のトリエチルアミン（１．１ｍＬ、７．８９ｍｍｏｌ）を－７８℃で添加した。反応混合物を－７８℃で２０分間撹拌し、次いで、２５℃に加温した。得られた混合物を２５℃で１２時間撹拌した。反応物を水（２０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（１０ｍＬ×３）で抽出した。有機物をブライン（２０ｍＬ×２）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、濃縮して、表題化合物（１．２０ｇ、９７．９％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６９５．３ ［２Ｍ＋Ｈ］＋．
工程２：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシ（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシヒドロホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート（０．５０ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．６ｍＬ、４．３２ｍｍｏｌ）の四塩化炭素（５．０ｍＬ）及びアセトニトリル（５．０ｍＬ）中溶液に、１－（トリメチルシリル）－１Ｈ－イミダゾール（０．６１ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応混合物を２５℃で４０分間撹拌した。混合物をメタノール（０．１ｍＬ）で処理し、２５℃で１０分間撹拌した。溶媒を除去し、残渣をメチルｔｅｒｔ－ブチルエーテル／酢酸エチル＝５／１（３．０ｍＬ）で洗浄し、沈殿をフィルタにかけ、ｔｅｒｔ－ブチルエーテル（３．００ｍＬ）で洗浄すると、表題化合物（５９０ｍｇ、収率９９．１％）が黄色油状物として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４１４．３ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシホスホリル）オキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート（１．７０ｇ、２．６４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３６．０ｍＬ）中の溶液に、炭酸セシウム（１．７２ｇ、５．２８ｍｍｏｌ）及びジ－ｔｅｒｔ－ブチル（クロロメチル）ホスフェート（１．０２ｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を７０℃で１２時間撹拌した。反応混合物を水（１５０ｍＬ）でクエンチし、酢酸エチル（８０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブライン（１００ｍＬ×２）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、フィルタにかけ、減圧下で濃縮乾固した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル＝１００：１～５０：１）によって精製して、表題化合物（１．０５ｇ、収率４５．９％）を無色油状物として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８６６．４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート２，２，２－トリフルオロ酢酸
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（（ジ－ｔｅｒｔ－ブトキシホスホリル）オキシ）メトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート（１．０５ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）のジクロレメタン（３６．０ｍＬ）中溶液に、トリフルオロ酢酸（０．０９ｍＬ、１．２１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１２時間撹拌した。反応物を濃縮すると、表題化合物（９３０ｍｇ、９９％）が黄色油状物として得られた。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６５４．４ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート
（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－２－カルボキサミド（５６８ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）及びメタノール（０．６ｍＬ）中溶液に、（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート２，２，２－トリフルオロ酢酸（９３０ｍｇ、１．２１ｍｍｏｌ）、シアノ水素化ホウ素ナトリウム（１５５ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（５９６ｍｇ、７．２６ｍｍｏｌ）及び１滴の酢酸を添加した。反応混合物を２０℃で３時間撹拌した。反応物を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ；移動相：１１～４１％（水（０．．０５％ＮＨ３Ｈ２Ｏ）－アセトニトリル）；検出器、ＵＶ２５４ｎｍによって精製して、表題化合物（７００ｍｇ、収率５２．２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１１０６．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程６：（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート
（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル二水素ホスフェート（２００ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３６．０ｍＬ）中の溶液に、テトラヒドロフラン（１．４５ｍＬ、１．４５ｍｍｏｌ）中の１Ｍ亜鉛ジクロリド及び（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（ヒドロキシ（１Ｈ－イミダゾール－１－イル）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート（１４９ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１２時間撹拌した。粗生成物を、以下の条件：カラム、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ。；移動相：９－３９％水（０．．０５％ ＮＨ３Ｈ２Ｏ）－アセトニトリル）；検出器、ＵＶ２５４ｎｍによって精製して、表題化合物（２００ｍｇ、収率７６．２％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：７２６．７ ［Ｍ／２＋Ｈ］＋．
工程７：２－アミノエトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル］［２－［６－アミノ－５－［８－［２－［３－［［１－［２－［５－［ｒａｃ－（１Ｒ）－２－メチル－１－［ｒａｃ－（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－［［ｒａｃ－（１Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボニル］プロピル］イソオキサゾール－３－イル］オキシエチル］－４－ピペリジル］オキシ］シクロブトキシ］－４－ピリジル］－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］ピリダジン－３－イル］フェノキシ］メチル水素ホスフェート
（９Ｈ－フルオレン－９－イル）メチル（２－（（（（（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メトキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）エチル）カルバメート（２００ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１０．０ｍＬ）中溶液にピペリジン（０．１０ｍＬ、１．４０ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２０℃で１２時間撹拌した。これを１Ｎ ＨＣｌ（１．００ｍｌ）でクエンチし、得られた残渣をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊４０ｍｍ＊３ｕｍ（アセトニトリル１９－４９／水（０．０５％ ＮＨ３Ｈ２Ｏ）－アクトニトリル、２０－５０％）によって精製して、表題化合物（４０．０ｍｇ、収率２２．４％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１２２９．７ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程８：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート
２－アミノエトキシ（ヒドロキシ）ホスホリル］［２－［６－アミノ－５－［８－［２－［３－［［１－［２－［５－［ｒａｃ－（１Ｒ）－２－メチル－１－［ｒａｃ－（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－［［ｒａｃ－（１Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル］カルバモイル］ピロリジン－１－カルボニル］プロピル］イソオキサゾール－３－イル］オキシエチル］－４－ピペリジル］オキシ］シクロブトキシ］－４－ピリジル］－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル］ピリダジン－３－イル］フェノキシ］メチル水素ホスフェート（１２０ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（１２．０ｍＬ）中混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（１８．７ｕＬ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加し、引き続いて２，５－ジオキソピロリジン－１－イル６－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ヘキサノエート（３３．１ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液を２５℃で１６時間撹拌した。溶液をフィルタにかけ、濃縮乾固した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％ トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル２０％～５０％）によって精製し、表題化合物（６０．８ｍｇ、３６．８％）を白色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１４２３．０ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
合成例１８
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１８の合成
工程１：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－カルボキシレート（１．００ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０．０ｍＬ）中混合物に、２，６－ルチジン（０．４９ｍＬ、４．１７ｍｍｏｌ）及び４－ニトロフェニルクロロホルメート（６７３ｍｇ、３．３４ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。粗混合物を濃縮して、表題化合物（１．４６ｇ、３６．８％）を黄色固体として得た。粗生成物をすぐに次の工程に使用した。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４２５．１ ［Ｍ－Ｂｏｃ＋Ｈ］＋．
工程２：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ ４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート
Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１５．０ｍＬ）中の（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（４－ニトロフェノキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート（１．４６ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及びアリル１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－ヒドロキシ－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボキシレート（１．５９ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）の混合物に、４－ジメチルアミノピリジン（６８０ｍｇ、５．５６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で１８時間撹拌した。粗生成物を濾過し、分取ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ／水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル／１０％～８０％）によって精製すると、表題化合物（４００ｍｇ、１５％）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９５８．５ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程３：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（アリルオキシ）カルボニル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボキシレート（２６０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）及び１，３－ジメチルピリミジン－２，４，６（１Ｈ，３Ｈ，５Ｈ）－トリオン（２１２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２．００ｍＬ）及びメタノール（２．００ｍＬ）中の溶液に、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（６２．７ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）を２５℃で添加した。反応混合物を窒素雰囲気下、２５℃で１６時間攪拌した。粗生成物を濃縮し、以下の条件を用いて分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ－ＮＸ ８０＊３０ｍｍ＊３ｕｍ、移動相：水（１０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３）－アセトニトリル１０％～８０％により精製して、表題化合物（１１０ｍｇ、収率４４．２％）を黄色固体として得た。
ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９１８．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程４：（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（１－（（（（（３Ｒ，５Ｓ）－１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル）オキシ）カルボニル）オキシ）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタンカルボン酸（１１０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）及び１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン２，２，２－トリフルオロ酢酸（４３．０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０６ｍＬ、０．３６ ｍｍｏｌ）、２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（５４．７ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２５℃で３時間撹拌した。混合物をオイルポンプによって濃縮した。残渣を分取ＨＰＬＣ（Ｂｏｓｔｏｎ Ｇｒｅｅｎ ＯＤＳ １５０＊３０ｍｍ＊５ｕｍ、水（０．０７５％ ＴＦＡ）－アセトニトリル２８％～５８％）によって精製し、表題化合物（９０ｍｇ、６９．４％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：１０８２．６ ［Ｍ＋Ｈ］＋．
工程５：（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテート
（２Ｓ，４Ｒ）－ｔｅｒｔ－ブチル２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－（（（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエトキシ）カルボニル）オキシ）ピロリジン－１－カルボキシレート（９０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）の５％トリフルオロ酢酸中のヘキサフルオロイソプロパノール（５ｍＬ）溶液を、２５℃で２時間撹拌した。混合物を濃縮すると、表題化合物（９１．０ｍｇ、収率９９．８％）が黄色油状物として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９８２．４ ［Ｍ－ＴＦＡ＋Ｈ］＋．
工程６：（３Ｒ，５Ｓ）－１－（２－（３－（２－（４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタノイル）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネート
（３Ｒ，５Ｓ）－５－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－３－イル（１－（４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタンカルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）フェニル）－２－（４－メチルピペラジン－１－イル）－２－オキソエチル）カーボネート２，２，２－トリフルオロアセテート（９１．０ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）及び２－（３－（２－（４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－イル）エトキシ）イソオキサゾール－５－イル）－３－メチルブタン酸（８１．５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（２．５０ｍＬ）中の混合物に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．０８ｍＬ、０．５０ｍｍｏｌ）及び２－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（４１．０ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２５℃で１６時間撹拌した。濃縮後、粗生成物を、以下の条件を用いた分取ＨＰＬＣ：カラム：Ｗｅｌｃｈ Ｘｔｉｍａｔｅ Ｃ１８ １００＊４０ｍｍ＊３ｕｍ条件水（０．０７５％トリフルオロ酢酸）－アセトニトリル１５－４５％）によって精製して、表題化合物（８０．６ｍｇ、収率５２％）を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８６０．４ ［１／Ｍ＋Ｈ］＋
中間体１：エチル（Ｓ）－１－（（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
工程１：Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－Ｌ－リジン
水素（３ ａｔｍ）下、（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｌ－リジン（２０．０ｇ、８１．２ｍｍｏｌ）、ＣＨ２Ｏ（１２．２ｇ、１６２ｍｍｏｌ）及びＰｄ／Ｃ（２．００ｇ）のメチルアルコール（１００ｍＬ）中溶液を室温で４時間撹拌した。濾過後、濾液を減圧下にて濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏで洗浄した。固体を濾過によって回収すると、表題化合物２０．６ ｇ（収率９２％）が白色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７５．
工程２：１－ブロモ－２－（（４－ニトロベンジル）オキシ）ベンゼン
２－ブロモフェノール（５２．６ｇ、３０４ｍｍｏｌ）、１－（ブロモメチル）－４－ニトロベンゼン（６５．７ｇ、３０４ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（８３．９ｇ、６０８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（７００ｍＬ）中の溶液を室温で１時間撹拌した。ＥｔＯＡｃを添加し、水を使用して３回洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮すると、表題化合物７３．８ ｇ（収率７８％）が黄色固体として得られた。１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ８．３４－８．２４（ｍ，２Ｈ），７．８１－７．７０（ｍ，２Ｈ），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，７．３，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．５ Ｈｚ，１Ｈ），６．９４（ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．３９（ｓ，２Ｈ）．
工程３：４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）アニリン
窒素下で、アセトニトリル（８００ｍＬ）及び水（４００ｍＬ）中の１－ブロモ－２－（（４－ニトロベンジル）オキシ）ベンゼン（４３．０ｇ、１３９．５ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（１１５ｇ、８３７ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（２４２ｇ、１３９５ｍｍｏｌ）を０℃で小分けにして添加した。混合物を室温で６時間撹拌した。ＥｔＯＡｃを使用して生成物を１回抽出した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、真空下で濃縮すると、表題化合物３５ｇ（粗製）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝２７８．
工程４：ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバメート
窒素下、Ｎ２－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－Ｎ６，Ｎ６－ジメチル－Ｌ－リジン（１３．３ｇ、４８．４ｍｍｏｌ）及びＮＭＭ（１０．３ｇ、９６．９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（２００ｍＬ）中溶液に、クロロギ酸イソブチル（７．９１ｇ、５８．１ｍｍｏｌ）を－２５℃で滴下した。反応物を－２５℃で０．５時間撹拌した。次いで、４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）アニリン（１６．１ｇ、粗製）のテトラヒドロフラン（１２０ｍＬ）中の溶液を－２５ ｏＣで添加した。反応物を室温で４時間撹拌した。溶媒を真空下にて濃縮した。ＤＣＭを添加し、水で洗浄した。有機層を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（勾配：０～９％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって精製して、６．７０ ｇ（収率２５％）の表題化合物を白色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝５３４．
工程５：（Ｓ）２－アミノ－Ｎ－（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）－６－（ジメチルアミノ）ヘキサンアミド（２，２，２－トリフルオロ酢酸塩）
ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバメート（４．００ｇ、７．４８ｍｍｏｌ）の５％ ＴＦＡ／ＨＦＩＰ（５０ｍＬ）中の溶液を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮し、次の工程で直接使用した。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３４．
工程６：エチル（Ｓ）－１－（（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
（Ｓ）－２－アミノ－Ｎ－（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）－６－（ジメチルアミノ）ヘキサンアミド（２，２，２－トリフルオロ酢酸塩）（工程５からの粗製）、１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボン酸（１．５５ｇ、８．９８ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（９．６５ｇ、７４．８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２０ｍＬ）中の溶液に、ＨＡＴＵ（３．４１ｇ、８．９８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。混合物を室温で０．５時間撹拌した。粗生成物を充填済Ｃ１８カラム（勾配：０～１００％ＭｅＯＨ水溶液（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３）によって精製すると、表題化合物２．７０ｇ（収率６１％）が赤色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝５８８．１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ９．８７（ｓ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝７．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．５４－７．４２（ｍ，３Ｈ），７．３０（ｄ，Ｊ＝８．６ Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄｄｄ，Ｊ＝８．８，７．３，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝８．４，１．５ Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｔｄ，Ｊ＝７．６，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｓ，２Ｈ），４．３０（ｑ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｑ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，２Ｈ），２．３５－２．２１（ｍ，２Ｈ），２．０３（ｔ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，２Ｈ），１．９６（ｓ，６Ｈ），１．８０－１．４１（ｍ，４Ｈ），１．３０－１．１４（ｍ，６Ｈ），１．０６（ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，３Ｈ）．
中間体５：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
工程１：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
窒素下、ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１．００ｇ、１．７９ｍｍｏｌ）、（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ボロン酸（３９１ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（４１３ｍｇ、０．３５８ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（７４１ｍｇ、５．３７ｍｍｏｌ）のジオキサン（１０ｍＬ）及び水（２ｍＬ）中の溶液を１００℃で１時間撹拌した。反応物を水で希釈し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（勾配：０％～１０％メタノール／ジクロロメタン）によって精製して、６７０ｍｇ（収率５７％）の表題化合物を黄色固体として得た。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６６１．１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ ７．７６（ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝７．６，１．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄｄｄ，Ｊ＝９．０，７．３，１．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１８－７．０１（ｍ，３Ｈ），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝６．１，２．０ Ｈｚ，１Ｈ），６．１２（ｄ，Ｊ＝２．０ Ｈｚ，１Ｈ），５．７２（ｓ，２Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．４７（ｓ，２Ｈ），４．２５（ｔ，Ｊ＝６．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．５３（ｄ，Ｊ＝１２．８ Ｈｚ，２Ｈ），３．２２（ｓ，３Ｈ），３．１４－２．６７（ｍ，８Ｈ），２．６４－２．５６（ｍ，１Ｈ），２．４６－２．３６（ｍ，１ Ｈ），２．３２－２．２２（ｍ，１Ｈ），２．２２－２．１３（ｍ，２Ｈ），２．００－１．９０（ｍ，２Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．２ Ｈｚ，３Ｈ）．
合成例１９
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１９の合成
工程１：エチル（Ｓ）－１－（（６－（ジメチルアミノ）－１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）ヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
窒素下、エチル（Ｓ）－１－（（１－（（４－（（２－ブロモフェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（５００ｍｇ、０．８５２ｍｍｏｌ）、Ｂ２Ｐｉｎ２（６４９ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ（ｄｐｐｆ）Ｃｌ２（１２４ｍｇ、０．１７０ｍｍｏｌ）及びＫＯＡｃ（２５０ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（５ｍＬ）中溶液を８０℃で２時間撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空下にて濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（勾配：０％～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（０．３％ ７Ｍ ＮＨ３／ＭｅＯＨを含有））によって精製して、３９０ｍｇ（収率７２％）の表題化合物を黄色固体として得た。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝６３６．
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－６－（ジメチルアミノ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート
窒素下で、エチル（Ｓ）１－（（６－（ジメチルアミノ）－１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）ヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（３９０ｍｇ、０．６１４ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート（３９５ｍｇ、０．６７６ｍｍｏｌ）、Ａｄ２ｎＢｕＰＰｄＧ２（４１．０ｍｇ、０．０６１ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（２６０ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）のジオキサン（５．０ｍＬ）及びＨ２Ｏ（１．２ｍＬ）中溶液を９５℃で２時間撹拌した。得られた溶液を水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を真空下で濃縮した。残渣を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＭｅＯＨ（０．１％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物３１０ｍｇ（収率４７％）が白色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０６０．
工程３：リチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
ｔｅｒｔ－ブチル４－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－６－（ジメチルアミノ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピペリジン－１－カルボキシレート（２７０ｍｇ、０．２５５ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（３２．１ｍｇ、０．７６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２ｍＬ）及びＨ２Ｏ（２ｍＬ）中の溶液を、室温で１時間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。粗製物を次の工程で直接使用した。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０３２．
工程４：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
ＴＦＡ（０．７５ｍＬ）及びＨＦＩＰ（１４ｍＬ）中のリチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（（１－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（最終工程からの粗製）の溶液を室温で３０分間撹拌した。得られた混合物を真空下で濃縮した。得られた粗生成物を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＭｅＯＨ（０．１％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物１７０ｍｇ（収率７１％）が黄色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９３２．
工程５：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１Ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
窒素下、１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１ｒ，３ｒ）－３－（ピペリジン－４－イルオキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（１７０．０ｍｇ、０．１８３ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，４Ｒ）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）ピロリジン－２－カルボキサミド（１１１ｍｇ、０．２３７ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｃ（２１．９ｍｇ、０．３６５ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１．５ｍＬ）及びＭｅＯＨ（０．５ｍＬ）中の溶液を室温で１時間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ３ＣＮ（１７．３ｍｇ、０．２７４ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、室温で３０分間撹拌した。反応物を水でクエンチした。得られた溶液を真空下で濃縮した。得られた粗生成物を充填済Ｃ１８カラム（勾配：水中０～１００％ＭｅＯＨ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物１８０ｍｇ（収率７１％）が白色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８４．
工程５：Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１Ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド（ギ酸塩）
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（（１Ｒ，３ｒ）－３－（（１－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－２－（（（Ｓ）－１－（４－シアノフェニル）エチル）カルバモイル）－４－ヒドロキシピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）ピペリジン－４－イル）オキシ）シクロブトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（６５．０ｍｇ、０．０４７ｍｍｏｌ）、１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（２，２，２－トリフルオロ酢酸塩）（２５．６ｍｇ、粗製）、ＤＩＰＥＡ（９０．９ｍｇ、０．７０５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１．５ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（２１．４ｍｇ、０．０５６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。得られた溶液を室温で３０分間撹拌した。得られた溶液を分取ＨＰＬＣ（Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｆ－Ｐｈｅｎｙｌ ＯＢＤカラム、１９×２５０ｍｍ ５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：６０ｍＬ／分；勾配：７分で２％ Ｂから２９％ Ｂ；２５４ｎｍ；ＲＴ１：６．５分）によって精製し、５．９ｍｇ（収率８％）のＬ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１９を白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５４８．１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２４（ｓ，１Ｈ），δ ８．４７（ｄ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．１７（ｓ，１Ｈ），７．９３－７．５４（ｍ，８Ｈ），７．５５－７．３０（ｍ，５Ｈ），７．２６－７．０９（ｍ，２Ｈ），７．０８－６．８７（ｍ，３Ｈ），６．４３－５．８８（ｍ，３Ｈ），５．５９（ｓ，２Ｈ），５．２２－４．８６（ｍ，５Ｈ），４．５０－４．１２（ｍ，８Ｈ），３．７２－３．５４（ｍ，３Ｈ），３．１３－２．９７（ｍ，４Ｈ），２．６３（ｓ，６Ｈ），２．４５－２．３５（ｍ，５Ｈ），２．２５－２．０２（ｍ，１６Ｈ），２．０２－１．５６（ｍ，１１Ｈ），１．５７－１．２５（ｍ，１３Ｈ），１．２９－１．１２（ｍ，４Ｈ），０．９５（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，３Ｈ），０．７９（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，３Ｈ）．
合成例２０
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２０の合成
４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－３－イル）カルバメート（ギ酸塩）
工程１：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－（（（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
窒素下で、ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（５００ｍｇ、０．７５６ｍｍｏｌ、Ｇｅｎｅｔｅｃｈ提供）、エチル（Ｓ）－１－（（１－（（４－（ヒドロキシメチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（９８６ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、Ｇｅｎｅｔｅｃｈ提供）及びＤＩＰＥＡ（４８８ｍｇ、３．７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（２５ｍＬ）中の溶液に、トリホスゲン（８５．５ｍｇ、０．２８８ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で０．５時間撹拌した。溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィー（勾配：０％～１３％メタノール／ジクロロメタン）によって精製し、次いで、充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０－１００％ＡＣＮ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製して、１９１ｍｇ（２２％）の表題化合物を白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１１２２．
工程２：リチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－（（（（４－（（Ｓ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル）オキシ）カルボニル）アミノ）－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（１３０ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ（１４．０ｍｇ、０．３５０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）及び水（３ｍＬ）中溶液を室温で１時間撹拌した。ＴＨＦを真空下で除去し、次いで、凍結乾燥すると、表題化合物１４０ｍｇ（粗製）が白色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０９４．
工程３：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（６－（２－ヒドロキシフェニル）－４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
窒素下で、リチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－（メトキシメトキシ）フェニル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（２４０ｍｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）の濃ＨＣｌ（２ｍｌ）、ＴＨＦ（２ｍｌ）及びｉ－プロパノール（２ｍＬ）中溶液を室温で０．５時間撹拌した。反応溶液を真空下で濃縮し、残りの水溶液を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＡＣＮ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物１５０ｍｇが黄色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝９４９．
工程４：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
窒素下、１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（６－（２－ヒドロキシフェニル）－４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（１５０ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）、（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（１１２ｍｇ、０．２０７ｍｍｏｌ）、ＣＨ３ＣＯＯＨ（１９．８ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）のメタノール（３ｍＬ）及びＤＣＭ（１ｍｌ）中溶液を３０℃で１時間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ３ＣＮ（１９．５ｍｇ、０．５１３ｍｍｏｌ）を添加し、３０℃で０．５時間撹拌した。反応溶液を真空下で濃縮した。残渣を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％メタノール（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物１８０ｍｇ（７７％）が黄色固体として得られた。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４７４．
工程５：４－（（Ｓ）－２－（１－（（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキサミド）－５－ウレイドペンタンアミド）ベンジル（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－３－イル）カルバメート（ギ酸塩）
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（（（４－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）－６－（２－ヒドロキシフェニル）ピリダジン－３－イル）カルバモイル）オキシ）メチル）フェニル）アミノ）－１－オキソ－５－ウレイドペンタン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（１８０ｍｇ、０．１２２ｍｍｏｌ）、１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（２，２，２－トリフルオロ酢酸塩）（６７ ｍｇ、粗製）及びＤＩＰＥＡ（１５８ｍｇ、１．２２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３ｍＬ）中溶液に、ＨＡＴＵ（６７．０ｍｇ、０．１７６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を室温で１時間撹拌した。得られた溶液を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ ＯＢＤ Ｃ１８カラム、３０＊１５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水（０．１％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：６０ｍＬ／分；勾配：７分で８％ Ｂから３８％ Ｂ；波長：２５４ｎｍ；ＲＴ１（分）：６．５分）によって精製し、４９．７ｍｇ（収率２４．０％）のＬ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２０を白色固体として得た。ＬＣ－ＭＳ：（ＥＳＩ，ｍ／ｚ）：［Ｍ＋Ｈ］＋＝１６３８．１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １３．３９（ｓ，１Ｈ），１０．１３（ｓ，１Ｈ），９．９４（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．４０（ｄ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝７．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．０，５．８ Ｈｚ，３Ｈ），７．７０－７．６１（ｍ，３Ｈ），７．５１－７．４１（ｍ，２Ｈ），７．４１－７．２８（ｍ，５Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝１６．１ Ｈｚ，４Ｈ），６．５４（ｄ，Ｊ＝６．１ Ｈｚ，１Ｈ），６．１７（ｓ，１Ｈ），６．１０（ｓ，１Ｈ），５．９６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，４．５ Ｈｚ，１Ｈ），５．４１（ｓ，２Ｈ），５．０９（ｄ，Ｊ＝５．３ Ｈｚ，３Ｈ），４．９１（ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．５０－４．３４（ｍ，４Ｈ），４．３２－４．２８（ｍ，５Ｈ），３．７４－３．６１（ｍ，２Ｈ），３．５５－３．４０（ｍ，４Ｈ），３．３９－３．３５（ｍ，３Ｈ），３．１９－２．８９（ｍ，９Ｈ），２．７０－２．６０（ｍ，２Ｈ），２．４８－２．３８（ｍ，９Ｈ），２．２３－２．１２（ｍ，１Ｈ），２．１０－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．８８（ｓ，４Ｈ），１．８０－１．７０（ｍ，４Ｈ），１．６８－１．５７（ｍ，１Ｈ），１．５２－１．３０（ｍ，１０Ｈ），１．２８－１．１６（ｍ，２Ｈ），１．１０－０．９０（ｍ，６Ｈ），０．８２（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，３Ｈ）。
合成例２１
Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２１の合成
Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド；２，２，２－トリフルオロ酢酸
工程１：ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－６－（ジメチルアミノ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート
窒素下、エチル（Ｓ）－１－（（６－（ジメチルアミノ）－１－オキソ－１－（（４－（（２－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）ヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（３１６ｍｇ、０．５７０ｍｍｏｌ）、ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－クロロピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（５３８．８ｍｇ、０．８５０ｍｍｏｌ）、Ｋ３ＰＯ４（２４０ｍｇ、１．１３ｍｍｏｌ）及びＡｄ２ｎＢｕＰＰｄＧ２（３７．８ｍｇ、０．０６００ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（４ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中の溶液を９５℃で３時間撹拌した。水を添加し、ＥｔＯＡｃを使用して３回抽出した。有機溶媒を合わせ、真空下で濃縮した。残渣を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＡＣＮ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物２３０ｍｇ（収率３９％）が赤色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝１０３２
工程２：リチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート
ｔｅｒｔ－ブチル（３Ｒ）－４－（２－（（４－（３－（３－アミノ－６－（２－（（４－（（Ｓ）－６－（ジメチルアミノ）－２－（１－（エトキシカルボニル）シクロブタン－１－カルボキサミド）ヘキサンアミド）ベンジル）オキシ）フェニル）ピリダジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－８－イル）ピリジン－２－イル）オキシ）エチル）－３－メチルピペラジン－１－カルボキシレート（２１０ｍｇ、０．２００ｍｍｏｌ）及びＬｉＯＨ．Ｈ２Ｏ（２５．６ｍｇ、０．６１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３ｍＬ）及び水（１ｍＬ）中溶液を室温で１時間撹拌した。溶媒を真空下で濃縮すると、表題化合物２５４ｍｇ（粗製）が黄色固体として得られた。
工程３：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
リチウム１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボキシレート（２５４ｍｇ、０．２５０ｍｍｏｌ）の５％ ＴＦＡ／ＨＦＩＰ（２０ｍＬ）中溶液を室温で３時間撹拌した。溶媒を真空下にて濃縮した。残渣を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＭｅＯＨ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物１０２ｍｇ（収率４４％）が赤色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝９０５．
工程４：１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（１０２ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－１－（（Ｒ）－３－メチル－２－（３－（２－オキソエトキシ）イソオキサゾール－５－イル）ブタノイル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）ピロリジン－２－カルボキサミド（６１．０ｍｇ、０．１１０ｍｍｏｌ）及びＣＨ３ＣＯＯＨ（１３．６ｍｇ、０．２３０ｍｍｏｌ）のメチルアルコール（１．２ｍＬ）及びジクロロメタン（０．４ｍＬ）中溶液を室温で１時間撹拌した。次いで、ＮａＢＨ３ＣＮ（２１．３ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）を添加し、室温で０．５時間撹拌した。水を添加して反応をクエンチした。溶媒を真空下にて濃縮した。残渣を充填済Ｃ１８カラム（溶媒勾配：水中０～１００％ＭｅＯＨ（０．０５％ ＮＨ４ＨＣＯ３））によって精製すると、表題化合物８０．０ｍｇ（収率４９％）が黄色固体として得られた。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝１４２９．
工程４：Ｎ－（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソキサゾール－３－イル）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）－Ｎ－（５－（２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－１－イル）ペンチル）シクロブタン－１，１－ジカルボキサミド（２，２，２－トリフルオロ酢酸塩）
１－（（（２Ｓ）－１－（（４－（（２－（６－アミノ－５－（８－（２－（２－（（Ｒ）－４－（２－（（５－（（Ｒ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（（Ｓ）－１－（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）フェニル）エチル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３－メチル－１－オキソブタン－２－イル）イソオキサゾール－３－イル）オキシ）エチル）－２－メチルピペラジン－１－イル）エトキシ）ピリジン－４－イル）－３，８－ジアザビシクロ［３．２．１］オクタン－３－イル）ピリダジン－３－イル）フェノキシ）メチル）フェニル）アミノ）－６－（ジメチルアミノ）－１－オキソヘキサン－２－イル）カルバモイル）シクロブタン－１－カルボン酸（６０．０ｍｇ、０．０４００ｍｍｏｌ）、１－（５－アミノペンチル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（２，２，２－トリフルオロ酢酸）（２３．０ｍｇ、粗製）及びＤＩＰＥＡ（１６３ｍｇ、１．２６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２ｍＬ）の溶液に、ＨＡＴＵ（２４．０ｍｇ、０．０６００ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応物を室温で０．５時間撹拌した。生成物を分取ＨＰＬＣ（カラム：ＸＢｒｉｄｇｅ Ｐｒｅｐ Ｐｈｅｎｙｌ ＯＢＤカラム、１９＊２５０ｍｍ、５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ ＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：２５ｍＬ／分；勾配：１０分で１７％ Ｂから２５％ Ｂ、２５％ Ｂ；波長：２５４ｎｍ；ＲＴ１（分）：８．７７）によって精製した。次いで、これを分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｘｓｅｌｅｃｔ ＣＳＨ Ｃ１８ ＯＢＤカラム３０＊１５０ｍｍ ５μｍ；移動相Ａ：水（０．０５％ ＴＦＡ）、移動相Ｂ：ＡＣＮ；流速：６０ｍＬ／分；勾配：８分で１３％ Ｂから３８％ Ｂ、３８％ Ｂ；波長：２５４／２２０ｎｍ；ＲＴ１（分）：８）によって再度精製し、５．０ｍｇ（収率７％）のＬ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－２１を黄色固体として得た。ＬＣＭＳ（ＥＳＩ）［Ｍ＋Ｈ］＋＝１５９３．１Ｈ ＮＭＲ（３００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ １０．２１（ｓ，１Ｈ），９．５３（ｓ，１Ｈ），８．９９（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｄ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．９５－７．８０（ｍ，３Ｈ），７．６７（ｄ，Ｊ＝８．１ Ｈｚ，２Ｈ），７．６３－７．５０（ｍ，２Ｈ），７．５０－７．４３（ｍ，８Ｈ），７．１９－７．０８（ｍ，１Ｈ），７．１０－６．９０（ｍ，３Ｈ），６．６４（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｓ，１Ｈ），６．１１（ｓ，１Ｈ），５．０９（ｓ，２Ｈ），４．９１（ｔ，Ｊ＝７．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｂｒ，４Ｈ），４．４１－４．３０（ｍ，４Ｈ），３．７３－３．６５（ｍ，６Ｈ），３．４７－３．３１（ｍ，７Ｈ），３．１３－２．８８（ｍ，１２Ｈ），２．７５（ｄ，Ｊ＝４．４ Ｈｚ，７Ｈ），２．４８－２．３８（ｍ，８Ｈ），２．２５－２．１５（ｍ，１Ｈ），２．０５－１．５９（ｍ，１１Ｈ），１．５０－１．２９（ｍ，８Ｈ），１．３１－１．１１（ｍ，６Ｈ），０．９６（ｄ，Ｊ＝６．４ Ｈｚ，３Ｈ），０．８７－０．７６（ｍ，３Ｈ）．
合成例２２
抗体へのＬ１－ＣＩＤＥのコンジュゲート
１０ｍＭコハク酸塩、ｐＨ５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＥＤＴＡ中のシステイン操作抗体（ＴＨＩＯＭＡＢ（商標））を、１Ｍ ＴｒｉｓでｐＨ７．５～８．５にｐＨ調整する。３～１６当量のＬ１－ＣＩＤＥ（チオール反応性マレイミド基を含有する）をＤＭＦ又はＤＭＡ（濃度＝１０ｍＭ）に溶解し、還元、再酸化及びｐＨ調整した抗体に添加する。反応を室温又は３７ ℃でインキュベートし、反応混合物のＬＣＭＳ分析によって決定される完了まで（１～約２４時間）監視する。反応が完了したら、Ａｂ－ＣＩＤＥを、残りの未反応リンカー－薬物中間体及び凝集タンパク質（有意なレベルで存在する場合）を除去することを目的とするいくつかの方法の１つ又は任意の組み合わせによって精製する。一例では、Ａｂ－ＣＩＤＥを、最終ｐＨが約５．５になるまで１０ｍＭヒスチジン－酢酸塩、ｐＨ５．５で希釈し、Ａｋｔａ精製システム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に接続されたＨｉＴｒａｐ Ｓカラム又はＳ最大スピンカラム（Ｐｉｅｒｃｅ）のいずれかを使用するＳ陽イオン交換クロマトグラフィーによって精製する。あるいは、Ａｂ－ＣＩＤＥを、Ａｋｔａ精製システム又はＺｅｂａスピンカラムに接続されたＳ２００カラムを使用するゲル濾過クロマトグラフィーによって精製する。透析を使用してコンジュゲートを精製する。
ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）Ａｂ－ＣＩＤＥを、ゲル濾過又は透析のいずれかを使用して２０ｍＭスクロースを含む２４０ｍＭ Ｈｉｓ／酢酸塩（ｐＨ５）に製剤化する。精製したＡｂ－ＣＩＤＥを遠心限外濾過によって濃縮し、滅菌条件下で０．２μｍフィルタを通してフィルタにかけ、保存のために－２０℃で凍結する。
生物学的実施例１
細胞ベースのアッセイ
ＢＲＭの免疫蛍光検出
ＣＤ２２へのコンジュゲートのＤＡＲは５．８であった。ＥｐＣＡＭへのコンジュゲートのＤＡＲは５．９であった。
ＣＤ２２へのコンジュゲートのＤＡＲは５．８であった。ＥｐＣＡＭへのコンジュゲートのＤＡＲは５．９であった。ＣＤ－２２：Ｔｈｉｏ Ｈｕ Ａｎｔｉ－ＣＤ２２ １０Ｆ４ｖ３ ｈｉｇｈ ＤＡＲ ［ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＨＣ：Ｙ３７３Ｃ ＨＣ：Ｌ１７４Ｃ］ ＭｅＭｅ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ＢＲＭ ＣＩＤＥ；ＥｐＣＡＭ：Ｔｈｉｏ Ｈｕ Ａｎｔｉ－Ｈｅｒ２ ７Ｃ２ ｈｉｇｈ ＤＡＲ ［ＬＣ：Ｋ１４９Ｃ ＨＣ：Ｌ１７４Ｃ ＨＣ：Ｙ３７３Ｃ］ ＭｅＭｅ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ＢＲＭ ＣＩＤＥ
図１ａ及び図１ｂは、Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１の活性を示す。図２ａ及び図２ｂは、Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３の活性を示す。
生物学的実施例２
ＰＫ／ＰＤ ＢＪＡＢ腫瘍アッセイ
ＢＪＡＢ－ｌｕｃヒト非ホジキンリンパ腫のマウス異種移植モデルにおいて、抗ＣＤ２２－ＢＲＭ Ａｂ－ＣＩＤＥのＰＫ／ＰＤ効果を評価した。ＢＪＡＢ－ｌｕｃを、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ細胞株レポジトリから得た。この細胞株は、Ｐｒｏｍｅｇａ ＰｏｗｅｒＰｌｅｘ １６ Ｓｙｓｔｅｍを使用して短いタンデム反復（ＳＴＲ）プロファイリングにより認証され、細胞株の外部ＳＴＲプロファイルと比較して細胞株の先祖を確認した。
モデルを確立するために、腫瘍細胞（０．２ｍＬのハンクス平衡塩溶液中２０００万個）を雌Ｃ．Ｂ－１７ ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の脇腹に皮下接種した。腫瘍が所望の体積（３００～４００ｍｍ３）に達したら、マウスをそれぞれ腫瘍サイズの同様の分布を有するｎ＝５の群に無作為化し、尾静脈を通してビヒクル（ヒスチジン緩衝液）又は試験物の単回静脈内注射を受けた。全ての抗ＣＤ２２－ＢＲＭ Ａｂ－ＣＩＤＥ及び非コンジュゲート抗体をヒスチジン緩衝液（２０ｍＭ酢酸ヒスチジンｐＨ５．５、２４０ｍＭスクロース、０．０２％ Ｔｗｅｅｎ ２０）に製剤化した。非コンジュゲートＢＲＭ ＣＩＤＥを、１０％ヒドロキシプロピル－ベータ－シクロデキストリン、５０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４に配合した。
投与の４日後、マウスを安楽死させ、腫瘍及び全血を回収した。腫瘍を切除し、液体窒素中で急速凍結する前に２つのアリコートに分割した。一方のアリコートを使用して放出されたＢＲＭ ＣＩＤＥのレベルを測定し、他方のアリコートを使用して下流ＰＤマーカーの調節を評価した。全血は外科的麻酔下で終末心臓穿刺により採取し、ヘパリンリチウムを含むチューブに入れた。血液を遠心分離まで（収集から１５分以内）、湿った氷上に静置した。サンプルを４℃で５分間、１０，０００ｒｐｍで遠心分離し、血漿を回収し、ドライアイス上に置き、リンカー安定性及び総抗体薬物動態の分析まで－７０℃で保存した。
異種移植組織のウエスタンブロッティング
ドライアイス上で、凍結組織を１５～３０ ｍｇ片に切断し、次いで、１つの３．２ｍｍ（ＮｅｘｔＡｄｖａｎｃｅ（３．２ｍｍ、ＳＳＢ３２））ステンレス鋼ビーズを含む１．５ｍＬエッペンドルフＳａｆｅ－Ｌｏｃｋチューブに移した。０．５Ｍ ＮａＣｌ及び新たに添加した１×Ｈａｌｔプロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を補充したＲＩＰＡ緩衝液（３５０ｕＬ）を添加し、チューブをＢｕｌｌｅｔ Ｂｌｅｎｄｅｒ組織ホモジナイザーに入れた。試料を最高速度で３分間均質化した。チューブをベンチトップ型遠心分離機で５分間、最高速度で４℃で回転させ、溶解物を新しいチューブに移した。Ｐｉｅｒｃｅ ＢＣＡタンパク質アッセイを使用してタンパク質濃度を決定した。試料緩衝液及び還元試薬を用いてタンパク質溶解物を調製し、９５℃で３分間インキュベートした。タンパク質（１２ｕｇ）を、トリスアセテートランニング緩衝液を含む３～８％トリスアセテートゲル上で分離し、続いてｉＢｌｏｔ転写デバイス（２５Ｖ、１０分）を使用してニトロセルロースメンブランに転写した。ＴＢＳ－Ｔ中５％ミルクで３０分間ブロッキングした後、一次抗体を１／１０００で添加した。メンブランをＳＭＡＲＣＡ２（ＢＲＭ）（ウサギ、Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号１１９６６）及びＨＤＡＣ１（マウス、Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓカタログ番号５３５６）についてブロットし、ロッカーに上で４℃にて一晩インキュベーションした。翌日、メンブレンを室温でＴＢＳ－Ｔを用いてロッカー上で３０分間洗浄し、洗浄緩衝液を少なくとも３回交換した。次いで、メンブレンを、ロッカー上で室温にて１時間、ＴＢＳ－Ｔ中１／５０００のＬｉｃｏｒ二次と共にインキュベートした。ブロットをＴＢＳ－Ｔで１時間洗浄し、洗浄緩衝液を少なくとも６回交換した。画像は、Ｌｉｃｏｒイメージングシステムでキャプチャした。
マウス腫瘍アッセイを行った。表１は、研究アーム及びパラメータを示す。
● （１）ＢＲＭ、ＢＲＧ、ＰＢＲＭ１ ＰＤ、及び（２）腫瘍ＰＫのために腫瘍組織を２つに分割する
● 上に列挙したＰＤと同じ血漿ＰＫタイムポイント
● 抗体コンジュゲート、ＩＶ製剤：ヒスチジン緩衝液、用量体積＝５ｍＬ／ｋｇ
● ＣＩＤＥ－ＢＲＭ １－３、ＩＶ製剤：１０％ ＨＰ－ｂ－ＣＤ及び５０ｍＭ酢酸ナトリウム（水中）ｐＨ４．０用量体積＝５ｍＬ／ｋｇ
Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１についての用量及び抗原依存性抗腫瘍活性を図３Ａ～３Ｌに示し、Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３については図４Ａ～４Ｌに示す。
生物学的実施例３
標的タンパク質分解アッセイ
データは、改善されたＰＤ応答を報告する。図５は、Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１について、ＢＲＭ及びＢＲＧ１分解が抗腫瘍活性と相関することを示すデータを示す。図６は、Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３について、ＢＲＭ及びＢＲＧ１分解が抗腫瘍活性とあまり相関しないことを示すデータを示す。図７は、抗体コンジュゲート戦略が分解活性を増加させることを示すデータを示す。これら全てのデータのタイムポイントは９６時間である。Ａｂ－Ｌ１ａ－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１は、非コンジュゲート型ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３よりも良好に分解するが、両方の化合物は、非コンジュゲート型の細胞アッセイにおいて同様のＢＲＭ分解特性を有する（国際公開第２０１９１９５２０１号に記載されているＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－３対ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１アッセイ）。この効果は、本明細書に記載の連結戦略が分解特性を調整し得ることを実証している。
生物学的実施例４
ＤＣ５０及びＤｍａｘを決定するための細胞アッセイ
細胞に基づくアッセイを２つの細胞株において行い、Ａｂ－Ｌ１－ＣＩＤＥのＤＣ５０及びＤｍａｘを決定した。ＢＪＡＢ、ＨＣＣ５１５及びＨ１９４４細胞を、それぞれ５０００、４０００及び２５００細胞／ウェルで３８４ウェルプレートに蒔いた。翌日、Ａｂ－ＣＩＤＥを添加した。２４時間の薬物処理後、細胞を４％ホルムアルデヒドで１５分間固定した。プレートをＰＢＳで３回洗浄した。細胞をＩＦブロッキング溶液（ＰＢＳ中１０％ ＦＣＳ、１％ ＢＳＡ、０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ、０．０１％アジド、Ｘ－１００）とインキュベートした。１．５時間後、ＩＦブロッキング緩衝液で希釈した一次抗体の２×溶液：ＢＲＭ（Ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇカタログ番号１１９６６、１：２０００）を添加した。プレートを４℃で一晩インキュベートした。翌朝、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。次いで、細胞を二次抗体（ウサギＡｌｅｘａ ４８８ Ａ２１２０６（１：２０００））と共に暗所において室温で１時間インキュベートした。Ｈｏｅｃｈｓｔ Ｈ３５７０を１：５０００でウェルに添加し、プレートをさらに３０分間インキュベートした。プレートを３×ＰＢＳで洗浄し、ＯｐｅｒａＰｈｅｎｉｘ（商標）Ｈｉｇｈ Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍで画像化した。核染色をマスクとして使用して、核ＢＲＭ平均シグナル強度を定量した。
データを以下の表２に示す。データは、本明細書に開示される抗体標的化戦略の成功を証明している。陰性対照：抗ｇＤ及び抗ＴＲＯＰ２はＮＣＩ－Ｈ１９４４細胞と相互作用しないが、抗ＴｆＲ２は相互作用する。抗ｇＤはさらに、ＨＣＣ５１５細胞と相互作用しないが、抗ＴｆＲ２及び抗ＴＲＯＰ２は相互作用する。データは、いくつかのＡｂ－Ｌ１－ＣＩＤＥが、望ましく低いＤＣ５０値及び望ましく高いＤｍａｘ値の両方を有することを示す。
生物学的実施例５：
リソソーム放出アッセイ
リソソーム放出アッセイを実行して、細胞内環境を模倣する環境におけるＬ１部分からのデグレーダーの放出を測定した。デグレーダーが、ＢＲＭに結合し、それをユビキチンリガーゼに運ぶ際に活性であるためには、Ｌ１が最初に放出されなければならない。
アッセイは、それぞれのＣＩＤＥに対応する「Ｌ１－ＢＲＭ１－＃」と呼ばれるＢＲＭ結合化合物に結合したＬ１を使用して実行した。試験は、ＢＲＭ部分へのＬ１の共有結合の切断が起こったかどうかを決定する。リンカー薬物（１０μＭ）を、１００ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ５．５）中のヒト肝臓リソソーム（０．１７ｍｇ／ｍＬ）及びシステイン（５ｍＭ）と２４時間インキュベートした。試料を、（Ａ）水中０．１％ギ酸及び（Ｂ）アセトニトリル中０．１％ギ酸を勾配中に含有するＬＣ移動相を使用して、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析計によって分析した。
アッセイの結果を以下の表３に示す。結果は、Ｌ１のＢＲＭ部分への直接連結戦略が細胞環境において放出することを示す。１つのコンジュゲートＬ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ１－１５は、本明細書に記載のリンカー－１型の抗体リンカーを含有しない。試験したＤＡＣのうち、Ｌ１－ＣＩＤＥ－ＢＲＭ １－１５はリソソーム抽出物中でデグレーダーを放出しなかった。この知見は、本明細書に記載のリンカー－１型のＬ１リンカーなどの、デグレーダーのＡｂへの選択的連結戦略の必要性を支持する。
＊「なし」は、リソソーム抽出物において３７℃で２４時間のインキュベーション後に観察された遊離薬物が１５％未満であることを示す。＊「あり」は、リソソーム抽出物において３７℃で２４時間のインキュベーション後に観察された遊離薬物が５０％よりも多いことを示す。
用いられる数値（例えば、量、温度など）に関して正確性を確保するために努力してきたが、幾らかの実験的な誤差及び偏差が考慮されるべきである。
当業者であれば、本明細書に記載される主題の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似又は同等である多数の方法及び材料を理解するであろう。本開示は、決して記載される方法及び材料のみに限定されるものではない。
そうでないと定義しない限り、本明細書で用いる技術的及び科学的な用語は、主題が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有し、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ａｎｄ Ｊａｎｅｗａｙ，Ｃ．，Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．，Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．，Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．と一致する。
本明細書及び特許請求の範囲全体を通じて、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ、ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ、及びｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語句は、文脈上別段の必要がある場合を除き、非排他的な意味で用いられる。本明細書に記載される実施形態は、「からなる」及び／又は「から本質的になる」実施形態を含むことが理解される。
本明細書で使用される場合、用語「約」は、ある値を言及する場合、明記した量からの、いくつかの実施形態では±５０％、いくつかの実施形態では±２０％、いくつかの実施形態では±１０％、いくつかの実施形態では±５％、いくつかの実施形態では±１％、いくつかの実施形態では±０．５％、及び、いくつかの実施形態では±０．１％の変化を、そのような変化が、開示した方法を実施する、又は開示した組成物を用いるのに適切であるために、包含するものと意味される。
値の範囲が提供される場合、範囲の上限及び下限と、その範囲内に記載された他の任意の値又は介在する値との間には、文脈上別段の指示がない限り、下限の単位の１０分の１までの各介在値が包含されることが理解される。これらの小さい範囲の上限及び下限は、独立してより小さい範囲に含まれてもよく、また、記載された範囲内のいずれかの具体的に除外された制限に従うことを条件として、包含される。記載された範囲が上下限の一方又は両方を含む場合、包含された上下限の一方又は両方を除いた範囲もまた、含まれる。
本明細書に記載された多くの修正及び他の実施形態は、前述の説明及び関連する図面に提示された教示の恩恵を受ける、この主題が属する技術分野の当業者には思い浮かぶであろう。したがって、本発明は開示された特定の実施形態に限定されるものではなく、改変及び他の実施形態は添付の特許請求の範囲に含まれることが意図されていると理解されよう。本明細書では特定の用語が使用されているが、これらは、一般的で説明的な意味でのみ使用されており、限定を目的とするものではない。

Claims (72)

  1. 構造：
    Ａｂ－（Ｌ１－Ｄ）ｐ
    ［式中、
    Ａｂは、抗体であり、
    Ｄは、構造：
    （式中、
    ＢＲＭは、ＢＲＭ結合化合物の残基であり、
    Ｅ３ＬＢは、Ｅ３リガーゼ結合化合物の残基であり、及び
    Ｌ２は、ＢＲＭをＥ３ＬＢと共有結合させる部分である）
    を有するＣＩＤＥ、又はそのプロドラッグであり、
    Ｌ１は、ＡｂをＢＲＭ、Ｅ３ＬＢ又はＬ２の１つに共有結合させるリンカー－１であり、並びに
    ｐは、１～１６である］
    を有するコンジュゲート。
  2. Ｌ１がＥ３ＬＢに共有結合している、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. 前記プロドラッグが、ＢＲＭに共有結合したリン酸部分を有するＣＩＤＥである、請求項２に記載のコンジュゲート。
  4. Ｌ１がＢＲＭに共有結合している、請求項１に記載のコンジュゲート。
  5. 前記プロドラッグが、Ｅ３ＬＢに共有結合したリン酸部分を有するＣＩＤＥである、請求項４に記載のコンジュゲート。
  6. 前記リン酸部分が、構造：
    （式中、ｅは、０又は１である）
    を有する、請求項３又は５に記載のコンジュゲート。
  7. Ｌ１がＬ２に共有結合している、請求項１に記載のコンジュゲート。
  8. Ｌ１が、
    ｉ）Ｌ１ａ
    （式中
    Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、及びＲｄは、独立して、Ｈ、置換されていてもよい分岐又は直鎖Ｃ１－Ｃ５アルキル、及び置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキルからなる群から選択されるか、又は、ＲａとＲｂが、若しくはＲｃとＲｄが、それらが結合している炭素原子と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－Ｃ６シクロアルキル環又は３～６員ヘテロシクロアルキル環を形成している）、
    ｉｉ）Ｌ１ｂ
    （式中、
    Ｚ及びＺ１は、それぞれ独立して、Ｃ１－１２アルキレン又は－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－であり、ここでｇは、０、１又は２であり、ｈは１～５であり、
    Ｒｚは、Ｈ又はＣ１－３アルキルである）、並びに、
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    （式中
    Ｚ２は、Ｃ１－１２アルキレン又は－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－であり、ここでｇは０、１又は２であり、ｈは１～５であり、
    ｗは、１、２、３、４又は５であり、
    Ｊは、－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＮＨ－ＮＨ－ＮＨ２であり、ここでＲｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択され、
    Ｋは、－ＣＨ２－、－ＣＨ（Ｒ）－、－ＣＨ（Ｒ）－Ｏ－＾、－Ｃ（Ｏ）－、＾－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－ＣＨ（Ｒ）－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－＾、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－＾、＾－Ｏ－Ｃ（Ｌ１ｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｘＲｙ－、＾－Ｃ（Ｌ１ｃ）－Ｃ（Ｏ）－ＮＲｘＲｙ－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ－［ＣＨ２］ｑ－Ｏ－＾、－ＣＨ２－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｒ－［ＣＨ２］ｑ－＾から選択され、ここで＾は、ＣＩＤＥへの結合を示し、Ｒは、水素、Ｃ１－３アルキル、Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）、－Ｏ－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）又はＣ（Ｏ）－Ｎ（Ｒｘ）（Ｒｙ）であり、ｑは０、１、２又は３であり、Ｒｘ及びＲｙは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択されるか、又はＲｘ及びＲｙは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、
    Ｒａ及びＲｂは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択されるか、又はＲａ及びＲｂは、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよいＣ３－６シクロアルキルを形成し、及び
    Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシルである）
    からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
  9. Ｌ１ａがＥ３ＬＢに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  10. Ｌ１ｂが、Ｅ３ＬＢ又はＢＲＭに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  11. Ｌ１ｃが、Ｅ３ＬＢ、ＢＲＭ又はＬ２に共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  12. Ｌ１ｂがＥ３ＬＢに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  13. Ｌ１ｂがＢＲＭに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  14. Ｌ１ｃがＥ３ＬＢに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  15. Ｌ１ｃがＢＲＭに共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  16. Ｌ１ｃがＬ２に共有結合している、請求項８に記載のコンジュゲート。
  17. Ｄが、構造：
    （式中、Ｌ１は、Ｌ１－Ｑ、Ｌ１－Ｑ’、Ｌ１－Ｓ、Ｌ１－Ｔ、並びに存在する場合には任意に、Ｌ１－Ｕ、Ｌ１－Ｖ及びＬ１－Ｙから選択される１つの結合点に結合しており、
    Ｌ１Ｑが、ＢＲＭ上の
    にあり、ここでＭはＯであり、
    Ｌ１－Ｑ’が、ＢＲＭ上の
    にあり、ここでＭ’は－ＮＨであり、
    Ｌ１－Ｓが、Ｌ２上の
    にあり、
    Ｌ１－Ｔが、Ｅ３ＬＢ上の
    にあり、ここでＡはＬ２に共有結合した基であり、
    Ｌ１－Ｕ及びＬ１－Ｖが、Ｅ３ＬＢ上の
    にあり、並びに
    Ｌ１－Ｙが、Ｅ３ＬＢ上の
    にあり、ここで－－－－は、単結合又は二重結合である）
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  18. Ｌ１ｃのＫが、
    Ｌ１ｃ－ＣＨ２－、
    からなる群から選択される、請求項８に記載のコンジュゲート。
  19. 構造：
    （式中、
    Ｒ３は、シアノ、
    であり、
    ここで－－－－は、単結合又は二重結合である）
    を有する、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  20. 構造：
    （式中、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃは、それぞれ独立して、水素、若しくはＣ１－５アルキルであるか、又は、Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃのうちの２つは、それぞれが結合している炭素と一緒になって、Ｃ１－５シクロアルキルを形成する）
    を有する、請求項１９に記載のコンジュゲート。
  21. Ｒ１Ａ、Ｒ１Ｂ及びＲ１Ｃが、それぞれ独立して、水素又はメチルである、請求項２０に記載のコンジュゲート。
  22. Ｒ１Ａ及びＲ１Ｂがそれぞれメチルである、請求項２１に記載のコンジュゲート。
  23. 構造：
    を有する、請求項２２に記載のコンジュゲート。
  24. Ｒ２が、水素、メチル、エチル又はプロピルである、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  25. Ｒ２がメチルである、請求項２４に記載のコンジュゲート。
  26. Ｒ２が
    としてＥ３ＬＢに結合している、請求項２５に記載のコンジュゲート。
  27. Ｙ１及びＹ２がそれぞれ－ＣＨである、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  28. Ｙ１がＮであり、Ｙ２が－ＣＨである、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  29. Ｙ１が－ＣＨであり、Ｙ２がＮである、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  30. Ｌ１が、Ｌ１－Ｑ、Ｌ１－Ｑ’又はＬ１－Ｔに結合している、請求項２３に記載のコンジュゲート。
  31. 構造：
    を有する、請求項３０に記載のコンジュゲート。
  32. Ｌ１が、Ｌ１－Ｔに結合しており、かつ
    （式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択される）
    である、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  33. Ｌ１が、Ｌ１－Ｔに結合しており、かつ
    （式中、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ及びＲｄは、それぞれ独立して、水素及びＣ１－３アルキルから選択される）であり、並びに
    構造：
    （式中、ｅは、０又は１である）
    を有するリン酸部分が、ＢＲＭに共有結合している、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  34. Ｌ１が、Ｌ１－Ｔに結合しており、かつ、
    ｉｉ）Ｌ１ｂ
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    からなる群から選択される、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  35. Ｌ１が、Ｌ１－Ｔに結合しており、かつ、
    ｉｉ）Ｌ１ｂ
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    からなる群から選択され、並びに
    構造：
    （式中、ｅは、０又は１である）
    を有するリン酸部分が、ＢＲＭに共有結合している、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  36. Ｌ１が、Ｌ１－Ｑに結合しており、かつ、
    ｉｉ）Ｌ１ｂ
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    からなる群から選択される、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  37. Ｌ１が、Ｌ１－Ｑに結合しており、かつ、
    ｉｉ）Ｌ１ｂ
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    からなる群から選択され、並びに、
    構造：
    （式中、ｅは、０又は１である）
    を有するリン酸部分が、ＢＲＭに共有結合している、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  38. Ｌ１が、Ｌ１－Ｑ’に結合しており、かつ、構造：
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    を有する、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  39. Ｌ１が、Ｌ１－Ｑ’に結合しており、かつ、構造：
    ｉｉｉ）Ｌ１ｃ
    を有し、並びに
    構造：
    （式中、ｅは、０又は１である）
    を有するリン酸部分が、Ｅ３ＬＢに共有結合している、請求項１７に記載のコンジュゲート。
  40. Ｚ及びＺ１が、それぞれ独立して、－（ＣＨ２）１－６－及び－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－から選択され、ここでｇは０、１又は２であり、ｈは１～５である、請求項８に記載のコンジュゲート。
  41. Ｚ２が、－（ＣＨ２）１－６－及び－［ＣＨ２］ｇ－［－Ｏ－ＣＨ２］ｈ－から選択され、ここでｇは０、１又は２であり、ｈは１～５である、請求項８に記載のコンジュゲート。
  42. Ｌ１が、
    （式中、
    Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、
    Ｒ５及びＲ６は、独立して、水素又はＣ１－５アルキルであるか、又は、Ｒ５及びＲ６は、それぞれが結合している窒素と一緒になって、置換されていてもよい５～７員ヘテロシクリルを形成し、並びに
    Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシである）
    からなる群から選択される、請求項８に記載のコンジュゲート。
  43. Ｌ１が、
    （式中、
    Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、並びに
    Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシである）
    からなる群から選択される、請求項４２に記載のコンジュゲート。
  44. Ｊが、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２である、請求項４３に記載のコンジュゲート。
  45. Ｌ１が、構造：
    、
    （式中、
    Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、並びに
    Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシである）
    を有する、請求項４３に記載のコンジュゲート。
  46. Ｌ１が、構造：
    を有する、請求項４５に記載のコンジュゲート。
  47. リンカー－１が、構造：
    （式中、
    Ｊは、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ２、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、又は－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）２であり、並びに
    Ｒ７及びＲ８は、それぞれ独立して、水素、ハロ、Ｃ１－５アルキル、Ｃ１－５アルコキシ又はヒドロキシである）
    を有する、請求項４３に記載のコンジュゲート。
  48. Ｌ１が、構造：
    を有する、請求項４７に記載のコンジュゲート。
  49. が、式Ｉ：
    の構造を有するＢＲＭ結合化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又は前述のいずれかの薬学的に許容され得る塩の残基であって、
    式中、Ｘは、水素又はハロゲンであり、
    からなる群から選択され、
    ここで（ａ）～（ｅ）については、＊は［Ｘ］への結合点を示すか、又は［Ｘ］が存在しない場合、＊は［Ｙ］への結合点を示し、＊＊はフェニル環への結合点を示しており、
    （ｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
    ただし、
    が（ａ）である場合、［Ｘ］は、
    （式中、＃は
    への結合点を示し、＃＃はＬ２への結合点を示す）ではなく、
    ［Ｙ］は存在せず、及び
    ［Ｚ］は存在しないか、あるいは
    （ｉｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、［Ｘ］の前記３～１５員ヘテロシクリルは、１つ又は複数の－ＯＨ又はＣ１－６アルキルで置換されていてもよく、
    ［Ｙ］は存在せず、及び
    ［Ｚ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
    ただし、
    が（ａ）であり、［Ｘ］が
    （式中、＆は
    への結合点を示し、＆＆は［Ｚ］への結合点を示す）である場合、［Ｚ］は、
    （式中、＃は［Ｘ］への結合点を示し、＃＃はＬ２への結合点を示す）ではないか、あるいは
    （ｉｉｉ）［Ｘ］は、３～１５員ヘテロシクリル又は５～２０員ヘテロアリールであり、
    ［Ｙ］は、メチレンであり、［Ｙ］の前記メチレンは、１つ又は複数のメチル基で置換されていてもよく、
    ［Ｚ］は、３～１５員ヘテロシクリルであるか、あるいは、
    （ｉｖ）［Ｘ］は、存在せず、
    ［Ｙ］は、エテニレンであり、［Ｙ］の前記エテニレンが１つ又は複数のハロで置換されていてもよく、及び
    ［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
    ただし、
    は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）であるか、あるいは、
    （ｖ）［Ｘ］は、存在せず、
    ［Ｙ］は、エチニレンであり、及び
    ［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
    ただし、
    は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）であるか、あるいは、
    （ｖｉ）［Ｘ］は、存在せず、
    ［Ｙ］は、シクロプロピル又はシクロブチルであり、及び
    ［Ｚ］は、５～２０員ヘテロアリールであり、
    ただし、
    は、（ａ）、（ｂ）、（ｄ）、又は（ｅ）である、
    請求項１に記載のコンジュゲート。
  50. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、式（Ｉ－Ａ）：
    の化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又はその薬学的に許容され得る塩である、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  51. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、式（Ｉ－Ｂ）：
    の化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又はその薬学的に許容され得る塩である、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  52. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、式（Ｉ－Ｃ）：
    の化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又はその薬学的に許容され得る塩である、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  53. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、式（Ｉ－Ｄ）：
    （式中、Ｘは、水素又はハロゲンである）
    の化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又はその薬学的に許容され得る塩である、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  54. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、式（Ｉ－Ｅ）：
    の化合物、又はその立体異性体若しくは互変異性体、又はその薬学的に許容され得る塩である、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  55. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、
    （式中、Ｍは、－ＮＨ又は酸素であり、Ｌ１－Ｑに共有結合している）
    からなる群から選択される少なくとも１つの部分を含む、請求項４９に記載のコンジュゲート。
  56. ＢＲＭ結合化合物の前記残基が、
    からなる群から選択される部分を含む、請求項５５に記載のコンジュゲート。
  57. ＢＲＭが、
    （式中、
    は、Ｌ２への結合点である）
    の残基である、請求項５６に記載のコンジュゲート。
  58. Ｌ２が、Ｅ３ＬＢ及びＢＲＭに共有結合したリンカー－２であり、前記Ｌ２は、式：
    （式中、ｚは、１又は０であり、
    Ｇは、
    又は－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－であり、並びに
    は、ＢＲＭへの結合点である）
    を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  59. Ｒ４が水素である、請求項５８に記載のコンジュゲート。
  60. Ｒ４がメチルである、請求項５８に記載のコンジュゲート。
  61. Ｒ４が、以下：
    のメチルである、請求項６０に記載のコンジュゲート。
  62. からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
  63. からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
  64. からなる群から選択される、請求項１に記載のコンジュゲート。
  65. ｐが約５～約１４の値を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  66. ｐが約５～約１０の値を有する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  67. 請求項１に記載のコンジュゲートと、１つ又は複数の薬学的に許容され得る賦形剤と、を含む医薬組成物。
  68. 疾患の治療を必要とするヒトにおいて疾患を治療する方法であって、有効量の請求項１に記載のコンジュゲート又は請求項４７に記載の組成物を前記ヒトに投与することを含む方法。
  69. 前記疾患ががんである、請求項６８に記載の方法。
  70. 前記がんがＢＲＭ依存性である、請求項６８に記載の方法。
  71. 前記がんが非小細胞肺がんである、請求項６８に記載の方法。
  72. 対象における標的ＢＲＭタンパク質のレベルを低下させる方法であって、
    請求項１に記載のコンジュゲート又は請求項６９に記載の組成物を前記対象に投与することを含み、前記ＢＲＭ部分が前記標的ＢＲＭタンパク質に結合し、ユビキチンリガーゼが、結合した前記標的ＢＲＭタンパク質の分解をもたらし、前記ＢＲＭ標的タンパク質のレベルが低下する、方法。
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Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023147328A1 (en) * 2022-01-26 2023-08-03 Genentech, Inc. Antibody-conjugated chemical inducers of degradation with hydolysable maleimide linkers and methods thereof
WO2023147329A1 (en) * 2022-01-26 2023-08-03 Genentech, Inc. Antibody-conjugated chemical inducers of degradation and methods thereof
WO2023216009A1 (zh) * 2022-05-07 2023-11-16 哈尔滨工业大学 一种小分子—纳米抗体偶联物临近效应的snacip诱导剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
KR0184860B1 (ko) 1988-11-11 1999-04-01 메디칼 리써어치 카운실 단일영역 리간드와 이를 포함하는 수용체 및 이들의 제조방법과 이용(법)
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ES2113940T3 (es) 1990-12-03 1998-05-16 Genentech Inc Metodo de enriquecimiento para variantes de proteinas con propiedades de union alteradas.
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US7018809B1 (en) 1991-09-19 2006-03-28 Genentech, Inc. Expression of functional antibody fragments
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
AU675929B2 (en) 1992-02-06 1997-02-27 Curis, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6319688B1 (en) 1997-04-28 2001-11-20 Smithkline Beecham Corporation Polynucleotide encoding human sodium dependent phosphate transporter (IPT-1)
DE69830901T2 (de) 1997-05-02 2006-05-24 Genentech Inc., San Francisco ein verfahren zur herstellung multispezifischer antikörper die heteromultimere und gemeinsame komponenten besitzen
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
ATE531812T1 (de) 1997-12-05 2011-11-15 Scripps Research Inst Humanisierung von nager-antikörpern
WO2001057188A2 (en) 2000-02-03 2001-08-09 Hyseq, Inc. Novel nucleic acids and polypeptides
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
AU782626B2 (en) 1999-10-04 2005-08-18 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
AU784983B2 (en) 1999-12-15 2006-08-17 Genentech Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
AU2001253140A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Tumor markers in ovarian cancer
ES2528794T3 (es) 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
JP3523245B1 (ja) 2000-11-30 2004-04-26 メダレックス，インコーポレーテッド ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物
CA2451465A1 (en) 2001-06-18 2002-12-27 Eos Biotechnology Inc. Methods of diagnosis of ovarian cancer, compositions and methods of screening for modulators of ovarian cancer
JP2005526501A (ja) 2002-02-21 2005-09-08 デューク・ユニヴァーシティ 自己免疫疾患用の試薬および治療方法
US9770517B2 (en) 2002-03-01 2017-09-26 Immunomedics, Inc. Anti-Trop-2 antibody-drug conjugates and uses thereof
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
CA2501131A1 (en) 2002-10-04 2004-04-22 Van Andel Research Institute Molecular sub-classification of kidney tumors and the discovery of new diagnostic markers
US7608429B2 (en) 2002-10-31 2009-10-27 Genentech, Inc. Methods and compositions for increasing antibody production
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
CA2513113A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
MXPA06011199A (es) 2004-03-31 2007-04-16 Genentech Inc Anticuerpos anti-tgf-beta humanizados.
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
ES2577292T3 (es) 2005-11-07 2016-07-14 Genentech, Inc. Polipéptidos de unión con secuencias hipervariables de VH/VL diversificadas y consenso
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
CA2651567A1 (en) 2006-05-09 2007-11-22 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
JP2009541275A (ja) 2006-06-22 2009-11-26 ノボ・ノルデイスク・エー／エス 二重特異性抗体の生産
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
AU2009270988A1 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Genentech, Inc. Anthracycline derivative conjugates, process for their preparation and their use as antitumor compounds
TW201113285A (en) 2009-09-01 2011-04-16 Incyte Corp Heterocyclic derivatives of pyrazol-4-yl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidines as janus kinase inhibitors
ES2617777T5 (es) 2010-04-23 2022-10-13 Hoffmann La Roche Producción de proteínas heteromultiméricas
CA2825064C (en) 2011-02-04 2022-08-30 Genentech, Inc. Fc variants and methods for their production
WO2013017705A1 (es) 2011-08-03 2013-02-07 Salvador Moreno Rufino Baltasar Sistema de panel para construccion con retroiluminacion a base de diodos electroluminosos
EP2750713B1 (en) 2011-10-14 2015-09-16 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
CA2872327A1 (en) 2012-05-21 2013-11-28 Genentech, Inc. Anti-ly6e antibodies and immunoconjugates and methods of use
US9492566B2 (en) 2012-12-13 2016-11-15 Immunomedics, Inc. Antibody-drug conjugates and uses thereof
JP6482471B2 (ja) 2012-12-21 2019-03-13 バイオアライアンス コマンディテール フェンノートシャップ 親水性の自壊性リンカー及びそのコンジュゲート
MX2016001862A (es) 2013-08-12 2016-08-03 Genentech Inc Compuestos de conjugado anticuerpo-farmaco dimerico de 1-(clorometil)-2,3-dihidro-1h-benzo[e]indol, y metodos de uso y tratamiento.
CA2931798C (en) 2013-12-16 2023-06-27 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
RU2689388C1 (ru) 2013-12-16 2019-05-28 Дженентек, Инк. Пептидомиметические соединения и их конъюгаты антител с лекарственными средствами
EP3082875B1 (en) 2013-12-16 2020-11-25 Genentech, Inc. Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
WO2017201449A1 (en) * 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use
AU2019249849C1 (en) 2018-04-01 2022-09-29 Arvinas Operations, Inc. BRM targeting compounds and associated methods of use
US20200038378A1 (en) 2018-04-01 2020-02-06 Arvinas Operations, Inc. Brm targeting compounds and associated methods of use
JP2022505450A (ja) * 2018-10-24 2022-01-14 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト コンジュゲート化された化学的分解誘導物質および使用方法
EP4038066A1 (en) * 2019-10-01 2022-08-10 Arvinas Operations, Inc. Brm targeting compounds and associated methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
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