JP2023523760A - 免疫グロブリン変異体 - Google Patents

Abstract

本発明は、親ＩｇＡ ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ変異体は、ＦｃαＲに対する変更された結合を示し、Ｆｃ変異体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸改変を含む。

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照により全体として本明細書に組み込まれる配列表を含有する。２０２１年４月１９日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピーはＰＡＴ０５８７４３－ＷＯ－ＰＣＴ＿ＳＬ．ｔｘｔと命名され、サイズが３１６Ｋバイトである。

本発明は、好中球の動員を促進するように最適化された特性を有するＦｃ変異体ポリペプチド及び抗体、並びにそれらを調製するための工学的方法に関する。Ｆｃ変異体ポリペプチド及び抗体は、腫瘍、特に固形腫瘍の治療に有用であり得る。

目下、全ての臨床的に承認された抗体は、免疫グロブリンＩｇＧアイソタイプを含む。抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を認識し、それに結合するＩｇＧ抗体により媒介される腫瘍細胞殺傷のための重要な機序である。
しかしながら、高い腫瘍負荷を有する患者では、再発が起こる可能性があり、ＩｇＧ抗体治療は、腫瘍に見出される免疫抑制環境に起因して有効性が損失する場合がある。腫瘍微環境においては、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞などのＦｃγＲ保有エフェクター細胞がＴＧＦβなどの免疫抑制因子によって溶解不能になる可能性がある。ＩｇＡは、骨髄エフェクター細胞、例えば、好中球及び腫瘍常在性骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）により発現されるＦｃアルファ受容体（ＦｃαＲＩ）をエンゲージすることにより抗体療法のための代替的アイソタイプを表す。ＩｇＡは、ヒト血清中でＩｇＧに次いで２番目に最も豊富な免疫グロブリンであり；単量体ＩｇＡアロタイプ（ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）の両方がヒト血清免疫グロブリンの最大２５％を占める。かつて、好中球は一般に潜在的なエフェクター細胞とみなされなかった。しかしながら、好中球は循環白血球の最も豊富な集団であり、固形腫瘍に浸潤することも示されている（Ｇｒｅｇｏｒｙ ＆ Ｈｏｕｇｈｔｏｎ（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７１：２４１１－１６；Ｖｏｇｔ Ｓｉｏｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎ．，８（３）：１２５－５８；Ｕｒｉｂｅ－Ｑｕｅｒｏｌ ＆ Ｒｏｓａｌｅｓ（２０１５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ：９８３６９８；Ｒｏｓａｌｅｓ（２０１８）Ｆｒｏｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，９：１１３）。ＭＤＳＣも骨髄系統に由来し、最も多い免疫抑制細胞タイプの１つである。ＩｇＡ抗体は、好中球の動員とそれによるＡＤＣＣの向上により腫瘍細胞を有効に殺傷することが示されている。残念ながら、治療薬としてのＩｇＡ抗体の使用は、いくつかの不利益及び制限、例えば、低い発現収量及び高価な精製スキームにより妨げられる。さらに、産生は不均質グリコシル化を被る。ＩｇＡは、グリカン不均質性に感受性であり得る複数のグリコシル化部位を有する。単量体ＩｇＡについての一過的発現レベルは、ヒトＩｇＡ１について３０～７０μｇ／Ｌで報告されている（Ｌｏｍｂａｎａ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）ＭＡＢＳ，１１：１１２２－３８；Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１６）ＭＡＢＳ，８：８７－９８）。

したがって、治療抗体として開発され得るＩｇＡ抗体が依然として必要とされている。改善された効力を有するＩｇＡ抗体は、好中球、ＭＤＳＣの動員、及び増強されたＡＤＣＣによる有効な腫瘍細胞殺傷の利点を有する、ＩｇＧ治療抗体の実行可能な代替物を提供する可能性がある。

本発明は、ＦｃαＲＩに対する改善された結合特性を有し、好中球の動員及び活性化に使用することができる、ＩｇＡアイソタイプの親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供する。本開示のＦｃ変異体は、アミノ酸挿入、アミノ酸欠失及び／又はアミノ酸置換を独立して又は組み合わせて含み得るアミノ改変を含む。

一態様において、本開示は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ変異体は、親Ｆｃポリペプチドと比較して変更されたＦｃαＲへの結合、又は変更された抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を示し、Ｆｃ変異体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸改変を含む。一実施形態では、アミノ酸改変は：ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及びＣＨ３．１２４からなる群から選択される位置にあり、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。好ましい実施形態では、Ｆｃ変異体は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、ここでアミノ酸改変は：Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｑ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ及びＬ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆからなる群から選択され、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。さらなる実施形態では、本開示は、Ｆｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸改変を含むＦｃ変異体を提供し、ここでアミノ酸改変は：Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｌ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ／Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ／Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗからなる群から選択され、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。

一実施形態において、本開示は、位置ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５及びＣＨ３．１１８におけるアミノ酸改変を含む、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供する。一実施形態では、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体は、位置ＣＨ２．９４におけるＧｌｕ、位置ＣＨ２．９７におけるＴｙｒ、位置ＣＨ３．４５におけるＡｓｐ、位置ＣＨ３．１０５におけるＴｙｒ、又は位置ＣＨ３．１１８におけるＴｙｒのアミノ酸置換を含む。好ましい実施形態では、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体は、アミノ酸置換Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｌ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、及びＱ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙを含む。

一実施形態では、本開示は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここで親ＦｃポリペプチドはヒトＩｇＡ１内に含まれ、又は親ＦｃポリペプチドはヒトＩｇＡ２内に含まれる。

本開示の一実施形態では、Ｆｃ変異体は、親Ｆｃポリペプチドと比較して変更されたＦｃαＲに対する結合を示す。親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体が本明細書に提供され、ここでＦｃ変異体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定して、親Ｆｃポリペプチドの少なくとも５０倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有する。一実施形態では、本開示は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ変異体は、表面プラズモン共鳴により測定して、親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有する。一実施形態では、本開示は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ変異体は、ＳＰＲにより測定して、親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約３００倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有する。

本開示の一実施形態では、Ｆｃ変異体は、親Ｆｃポリペプチドと比較して変更されたＡＤＣＣを示す。親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体が本明細書に提供され、ここでＦｃ変異体は、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞殺滅アッセイにおいて測定して、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約５倍増加させる。一実施形態では、本開示は、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体を提供し、ここでＦｃ変異体は、親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約２倍の、Ｃａｌｕ－３細胞殺滅アッセイにおける増加した有効性を有する。

別の態様では、本開示は、変異体Ｆｃポリペプチドを含むｌｇＡ抗体を提供し、ここで抗体は、野生型Ｆｃポリペプチドを含むＩｇＡ抗体と比較して増加したＦｃαＲ親和性、又は増加したＡＤＣＣを有する。一実施形態では、本開示は：ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及びＣＨ３．１２４からなる群から選択される位置におけるアミノ酸改変を含むｌｇＡ抗体を提供し、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。好ましい実施形態では、本開示は、アミノ酸改変を含むＩｇＡ抗体を提供し、ここでアミノ酸改変は：Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｑ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ及びＬ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆからなる群から選択され、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。

さらなる実施形態では、本開示は、アミノ酸改変を含むＩｇＡ抗体を提供し、ここでアミノ酸改変は：Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｌ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ／Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ／Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗからなる群から選択され、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。

一実施形態では、本開示は、位置ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５及びＣＨ３．１１８におけるアミノ酸改変を含むＩｇＡ抗体を提供する。一実施形態では、ＩｇＡ抗体は、位置ＣＨ２．９４におけるＧｌｕ、位置ＣＨ２．９７におけるＴｙｒ、位置ＣＨ３．４５におけるＡｓｐ、位置ＣＨ３．１０５におけるＴｙｒ又は位置ＣＨ３．１１８におけるＴｙｒのアミノ酸置換を含む。好ましい実施形態では、ＩｇＡ抗体は、アミノ酸置換Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｌ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ及びＣＨ３．１１８＿Ｙを含む。

一実施形態では、本開示は、変異体Ｆｃポリペプチドを含むｌｇＡ抗体を提供し、ここで抗体は、ヒトｌｇＡ１又はｌｇＡ２抗体である。

本開示は、本明細書に記載されるＦｃ変異体をコードする単離された核酸を提供する。本開示は、場合により、制御配列に作動可能に連結された、核酸を含むベクターを提供する。本開示は、ベクターを含む宿主細胞、並びにＦｃ変異体を生成及び場合により回収する方法を提供する。本開示は、本明細書に記載されるＦｃ変異体を含むＩｇＡ抗体、及び生理学的又は薬学的に許容され得る担体又は希釈剤を含む組成物を提供する。

本開示は、本明細書に開示されるＦｃ変異体を含むＩｇＡ抗体の治療的及び診断的使用を意図する。本明細書に開示されるＦｃ変異体は、二重特異性及び多重特異性抗体などの他の結合分子の構成にも使用され得る。本開示に記載されるＩｇＡ抗体は、癌などの増殖性疾患を含むがこれに限定されない多様な適応症の治療に使用され得る。

実施例４に記載のアッセイにおける、増大する濃度のＦｃ変異体：配列番号３（■）、６（▲）、３２（▼）、３７（◆）及び４２（

）、並びに親ＩｇＡ２（配列番号２（●））のＳＫ－ＢＲ－３細胞に対するＰＭＮ細胞毒性を示す。各Ｆｃ変異体の有効性（Ｅｍａｘ％）は、以下の通りであった：配列番号２：２５％、配列番号３：３２％、配列番号６：２７％、配列番号３２：２８％、配列番号３７：３５％及び配列番号４２：３４％。
実施例４に記載のアッセイにおける、増大する濃度のＦｃ変異体：配列番号３（■）、６（▲）、３２（▼）、３７（◆）及び４２（

）、並びに親ＩｇＡ２（配列番号２（●））のＣａｌｕ－３細胞に対するＰＭＮ細胞毒性を示す。各Ｆｃ変異体の有効性（Ｅｍａｘ％）は、以下の通りであった：配列番号２：４２％、配列番号３：４４％、配列番号６：４１％、配列番号３２：７１％、配列番号３７：７６％及び配列番号４２：８１％。
実施例４に記載のアッセイにおける、増大する濃度の配列番号４２及びＩｇＡ２（配列番号２）のＦｃ変異体のＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞に対するＰＭＮ細胞毒性を示す。配列番号２を含む変異体についてのＥＣ５０値は、２．４５ｎＭであり、配列番号４２を含む変異体についてのＥＣ５０値は、０．３６ｎＭであった。 実施例４に記載のアッセイにおける、増大する濃度の配列番号４２（

）及び親ＩｇＡ２（配列番号２（●））のＦｃ変異体のＭＤＡ－ＭＢ－１７５細胞に対するＰＭＮ細胞毒性を示す。
実施例４に記載のアッセイにおける、増大する濃度のヘテロ二量体Ｆｃ候補のＳＫ－ＢＲ－３細胞に対するＰＭＮ及びＰＢＭＣ細胞毒性を示す。図５Ａ及び５Ｂは、それぞれＩｇＡ２（配列番号３（●）；図５ａ）及びＩｇＧ１（配列番号１（●）；図５ｂ）と比較した、配列番号７－８（■）及び８０－８（▲）を有するＦｃ変異体を示す。図５Ｃ及び５Ｄは、それぞれＩｇＡ２（配列番号２（●）；図５ｃ）及びＩｇＧ１（配列番号１（●）；図５ｄ）と比較した、配列番号７－９（▼）及び８０－９（◆）を有するＦｃ変異体を示す。 （上記の通り。） （上記の通り。） （上記の通り。） マウスにおけるＩｇＧ、ＩｇＡ及び操作された免疫グロブリンの血清－時間濃度プロファイルを示す。（◆）ＨＥＫ２９３Ｔからの配列番号１免疫グロブリン、（▲）ＨＥＫ２９３Ｔからの配列番号２免疫グロブリン、（●）ＨＥＫ２９３Ｔからの操作された免疫グロブリン配列番号７－８、（ｘ）ＨＥＫ２９３Ｔからの操作された免疫グロブリン配列番号８－８０の血清中の濃度。 マウスにおけるＩｇＧ、ＩｇＡ及び糖操作された免疫グロブリンの血清－時間濃度プロファイルを示す。（◆）ＣＨＯ－Ｓからの配列番号１免疫グロブリン、（▲）ＣＨＯ－Ｓからの配列番号２免疫グロブリン、（ｘ）ＣＨＯ－Ｓからの操作された免疫グロブリン配列番号８－８０、（■）ＣＨＯ－Ｓからの操作された免疫グロブリン配列番号４０、（○）ＣＨＯ－Ｓからの操作された免疫グロブリン配列番号８２、（□）ＣＨＯ－Ｓからの操作された免疫グロブリン配列番号８３、（●）ＣＨＯ－Ｓからの操作された免疫グロブリン配列番号８４の血清中の濃度。

最適化された特性を有するＩｇＡ免疫グロブリンのＦｃ変異体、及びこれらのＦｃ変異体を含む抗体が本明細書に開示される。これらの最適化された特性は、親ＩｇＡ Ｆｃポリペプチドと比較して、ＦｃαＲに対する増強された結合及び変更された抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を含む。

定義
本開示をより容易に理解することができるように、ある用語は詳細な説明全体にわたり具体的に定義される。特に定義のない限り、本明細書において使用される全ての技術及び科学用語は、本開示が属する分野の当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。

「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、又は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語などが配列（例えば、アミノ酸配列）に関して使用される全ての場合において、前記配列は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ）」、又は「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という用語などによっても限定され得ることを理解されたい。本明細書において使用されるとき、「本質的に～からなる」という語句は、方法又は組成物に含まれる活性医薬剤の属又は種、及び方法又は組成物の意図される目的に不活性である任意の賦形剤を指す。一部の態様において、「本質的に～からなる」という語句は、本開示のＦｃ変異体以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を明示的に排除する。一部の態様において、「本質的に～からなる」という語句は、本開示のＦｃ変異体及び第２の同時投与薬剤以外の１つ以上の追加の活性剤の包含を明示的に排除する。

本明細書において使用されるとき、「抗体」という用語は、対応する抗原に非共有結合的に、可逆的に、及び特異的に結合し得る免疫グロブリンファミリーのポリペプチドを指す。それぞれの抗体の基礎的な機能単位は、本明細書において「Ｉｇ単量体」と定義される１つのＩｇ単位のみを含有する免疫グロブリン単量体である。分泌抗体は、２つのＩｇ単位を有する二量体（例えば、ＩｇＡ）、４つのＩｇ単位を有する四量体又は５つのＩｇ単位を有する五量体（例えば、哺乳類ＩｇＭ）でもあり得る。「抗体」という用語には、例えば、モノクローナル抗体（例として、免疫グロブリンＦｃ領域を有する全長抗体）が含まれる。Ｉｇ単量体は、４つのポリペプチド鎖；ジスルフィド結合により連結される２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖からなるＹ型分子である（Ｗｏｏｆ ＆ Ｂｕｒｔｏｎ（２００４）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４（２）：８９－９９）。それぞれの鎖は、それらのサイズ及び機能に従って２つのカテゴリー：可変又は定常に分類される約７０～１１０個のアミノ酸を含有する多数の構造ドメインを含む。重鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＨと略記）及び３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３と略記）を含む。それぞれの軽鎖は、１つの可変ドメイン（ＶＬと略記）及び１つの定常ドメイン（ＣＬと略記）を含む。免疫グロブリンドメインは、２つのベータシートが保存システイン残基と他の荷電アミノ酸との間の相互作用により一緒に保持される「サンドイッチ」形を作出する特徴的な免疫グロブリンフォールドを有する。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存される領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変の領域にさらに下位分類することができる。それぞれのＶＨ及びＶＬは、アミノ酸末端からカルボキシ末端に配置される３つのＣＤＲ及び４つのＦＲから構成され、以下の順序である：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する抗原結合ドメイン又は抗原結合部位を含有する。

「抗体」という用語には、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ抗体、キメラ抗体、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例として、例えば、本開示の抗体に対する抗Ｉｄ抗体）が含まれる。抗体は、任意のアイソタイプ／クラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、又はサブクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）のものであり得る。

本明細書において使用される「単一特異的分子」という用語は、標的抗原上の１つのエピトープに結合する分子を指す。一部の実施形態において、本開示の単一特異的分子は、単一特異的抗体様分子である。一部の実施形態において、本開示の単一特異的分子は、単一特異的抗体である。「二重特異的分子」という用語は、２つの異なる抗原に結合する多重特異的結合分子を指す。一部の実施形態において、本開示の二重特異的分子は、二重特異的抗体様分子である。本明細書において使用される「多重特異的結合分子」という用語は、２つ以上の異なる抗原に結合する分子を指す。それぞれの抗原の認識は、一般に、「抗原結合ドメイン」を介して達成される。一部の実施形態において、本開示の多重特異的結合分子は、多重特異的抗体様分子、例えば、二重特異的抗体様分子である。

「抗原結合部位」という用語は、抗原、又はそのエピトープに結合する界面を形成する決定基を含む抗体の部分を指す。「抗原結合部位」という用語は、「抗原結合ドメイン」という用語と互換的に使用することができる。タンパク質（又はタンパク質模倣体）に関して、抗原結合部位は、典型的には、抗原ポリペプチドに結合する界面を形成する（少なくとも４つのアミノ酸又はアミノ酸ミミックの）１つ以上のループを含む。典型的には、抗体分子の抗原結合部位は、少なくとも１若しくは２つのＣＤＲ及び／若しくは超可変ループ、又はより典型的には、少なくとも３、４、５若しくは６つのＣＤＲ及び／若しくは超可変ループを含む。

本明細書において使用される「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）は、ＶＬ及びＶＨの超可変領域を指す。ＣＤＲは、標的タンパク質に対する特異性を保有する抗体鎖の標的タンパク質結合部位である。それぞれのヒトＶＬ又はＶＨ中には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１～３、Ｎ末端から連続して番号付けされる）が存在し、可変ドメインの合計約１５～２０％を構成する。ＣＤＲは、それらの領域及び順序により称することができる。例えば、「ＶＨＣＤＲ１」又は「ＨＣＤＲ１」は、両方とも、重鎖可変領域の第１のＣＤＲを指す。ＣＤＲは、標的タンパク質のエピトープに構造的に相補的であり、したがって結合特異性を直接担う。ＶＬ又はＶＨの残りのストレッチ、いわゆるフレームワーク領域はアミノ酸配列の少ないバリエーションを示す（Ｋｕｂｙ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｃｈａｐｔｅｒ ４．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ＆ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。ＣＤＲ及びフレームワーク領域の位置は、当技術分野において種々の公知の定義、例えば、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡｂＭ、及び組み合わせ定義（例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０５－２０６；Ｃｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７－８８３；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：７９９－８１７；Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍ．Ｐ．，（２００１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２９：２０７－２０９；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７－７４８及びＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ－ＵＳ ＤＨＨＳ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎ°９１－３２４２，ｐｐ ６６２，６８０，６８９参照）を使用して決定することができる。抗原結合部位の定義は、以下：Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２８：２１９－２２１；ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６２：７３２－７４５；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：９２６８－９２７２；Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２０３：１２１－１５３；及びＲｅｅｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｉｎ Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇ Ｍ．Ｊ．Ｅ．（ｅｄ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１４１－１７２にも記載されている。Ｋａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキームの組み合わせにおいて、一部の実施形態において、ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ、又はその両方の一部であるアミノ酸残基に対応する。例えば、一部の実施形態において、ＣＤＲは、ＶＨ、例えば、哺乳類ＶＨ、例えば、ヒトＶＨ中のアミノ酸残基２６～３５（ＨＣＤＲ１）、５０～６５（ＨＣＤＲ２）、及び９５～１０２（ＨＣＤＲ３）；及びＶＬ、例えば、哺乳類ＶＬ、例えば、ヒトＶＬ中のアミノ酸残基２４～３４（ＬＣＤＲ１）、５０～５６（ＬＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＬＣＤＲ３）に対応する。ＩＭＧＴのもと、ＶＨ中のＣＤＲアミノ酸残基は、およそ２６～３５（ＣＤＲ１）、５１～５７（ＣＤＲ２）及び９３～１０２（ＣＤＲ３）と番号付けされ、ＶＬ中のＣＤＲアミノ酸残基は、およそ２７～３２（ＣＤＲ１）、５０～５２（ＣＤＲ２）、及び８９～９７（ＣＤＲ３）と番号付けされる（「Ｋａｂａｔ」に従う番号付け）。ＩＭＧＴのもと、抗体のＣＤＲ領域は、プログラムＩＭＧＴ／ＤｏｍａｉｎＧａｐ Ａｌｉｇｎを使用して決定することができる。ＩＭＧＴツールは、ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）．ｉｍｇｔ．ｏｒｇにおいて利用可能である。

一実施形態において、抗体は、抗体の「抗原結合断片」を含む。このような断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋により結合している２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）ＶＨドメインからなるダイアボディ（ｄＡｂ）断片；（ｖｉ）ラクダ又はラクダ化可変ドメイン；（ｖｉｉ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３参照）；（ｖｉｉｉ）単一ドメイン抗体；（ｉｘ）ダイアボディ（Ｄａｂ）（二価及び二重特異的）、及び（ｘ）全抗体又は組換えＤＮＡ技術を使用してデノボ合成されたものの改変により産生することができるキメラ（例えば、ヒト化）抗体が挙げられる。これらの機能的抗体断片は、それらのそれぞれの抗原又は受容体と選択的に結合する能力を保持する。これらの抗体断片は、当業者に公知の慣用の技術を使用して得られ、断片はインタクト抗体と同様に有用性についてスクリーニングされる。

哺乳類において、ラムダ（λ）及びカッパ（κ）と呼ばれる２つのタイプの免疫グロブリン軽鎖が存在する。それぞれの抗体は常に同一の２つの軽鎖を含有し；哺乳類において軽鎖、κ又はλの１つのタイプのみが抗体ごとに存在する。軽鎖のおよその長さは２１１～２１７アミノ酸であり、それぞれの軽鎖は２つのドメイン、１つの定常ドメイン及び１つの可変ドメインを有する。

α、δ、ε、γ、及びμと示される５つのタイプの哺乳類Ｉｇ重鎖が存在し、抗体中に存在する重鎖のタイプが抗体のクラス又はアイソタイプ：ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥをそれぞれ定義する。重鎖は物理化学的、構造的、及び免疫学的特性が変動するが、それぞれの重鎖は２つのドメイン、可変ドメイン及び定常ドメインを有する。可変ドメインは単一のＩｇドメイン（およそ１１０アミノ酸長さ）を含み、抗体結合特異性を決定する。定常ドメインは同じアイソタイプの全ての抗体において同一であるが、異なるアイソタイプの抗体において異なる。重鎖γ、α及びδは、３つのタンデムＩｇドメインから構成される定常領域、及びフレキシビリティの付加のためのヒンジ領域を有し；重鎖μ及びεは、４つの免疫グロブリンドメインから構成される定常領域を有する（Ｗｏｏｆ ＆ Ｂｕｒｔｏｎ、前掲）。「免疫グロブリン」（Ｉｇ）という用語は、本明細書において「抗体」という用語と互換的に使用される。

ＩｇＧは、ヒト免疫グロブリンの７０～７５％を占める血液（血漿）中の最も豊富な抗体アイソタイプである。ＩｇＧは有害物質を解毒し、白血球及びマクロファージによる抗原－抗体複合体の認識において重要である。ＩｇＧは、ヒトにおいて４つのサブクラス：ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４にさらに分類される。ＩｇＭは、通常、血液中を循環し、ヒト免疫グロブリンの約１０％を占める。ＩｇＭは、５つの基礎Ｙ型分子が一緒に結合している五量体構造を有する。Ｂ細胞は、微生物感染／抗原侵襲に応答して最初にＩｇＭを産生する。ＩｇＭはＩｇＧよりも低い抗原に対する親和性を有するが、それは、その五量体／六量体構造のために高い抗原に対するアビディティを有する。ＩｇＭは、細胞表面受容体への結合により、細胞シグナリング経路も活性化させる。ＩｇＡは、血清、鼻腔粘膜、唾液、母乳、及び腸液中で豊富であり、ヒト免疫グロブリンの２５％を占める。ＩｇＡは、二量体（すなわち、一緒に結合している２つのＩｇＡ単量体）を形成する。母乳中のＩｇＡは、新生児の胃腸管を病原体から保護する。ＩｇＡは、２つのサブクラス：ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類される。ＩｇＤは、ヒト免疫グロブリンの１％未満を占め、Ｂ細胞中の抗体産生の誘導に関与し得るが、その正確な機能は不明のままである。ＩｇＥは微量で存在し、ヒト免疫グロブリンの０．００１％以下を占める。この元の役割は、寄生虫から保護することである。寄生虫感染が希少な領域において、ＩｇＥは主にアレルギーに関与する。

免疫細胞活性は、結晶化可能断片領域又は「Ｆｃ領域」として公知の抗体の領域によりモジュレートされる。Ｆｃ領域は２つの同一ポリペプチド鎖（それぞれ本明細書では「Ｆｃドメイン」と称される）から構成され、ＩｇＧ及びＩｇＡは重鎖のＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインを含む。ＩｇＭ及びＩｇＥ Ｆｃ領域は、それぞれのポリペプチド鎖中の３つの重鎖定常ドメイン（ＣＨドメイン２～４）を含有する。ＣＨ２及びＣＨ３ドメイン中のアミノ酸残基は、ＥＵ番号付け体系（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９６９）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ，６３，７８－８５）、「Ｋａｂａｔ」番号付け（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前掲）に従って、又は代替的にＣドメインについてのＩＭＧＴ番号付けを使用して番号付けすることができる。ＩＭＧＴツールは、ワールドワイドウェブ（ｗｗｗ）．ｉｍｇｔ．ｏｒｇにおいて利用可能である。

Ｆｃ領域は、抗体の生理学的効果を媒介する細胞表面受容体、「Ｆｃ受容体」及び補体タンパク質に結合する。Ｆｃ受容体は、免疫系の多くの細胞、例として、Ｂリンパ球、濾胞樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、ヒト血小板及びマスト細胞上で見出される。Ｆｃ受容体への抗体Ｆｃ領域の結合は、食作用又は細胞毒性細胞を刺激して抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）の機序により微生物、又は感染細胞を破壊する。いくつかの異なるタイプのＦｃ受容体（ＦｃＲ）が存在し、それらはそれらが認識する抗体のタイプに基づき分類される。例えば、ＩｇＧに結合するものはＦｃ－ガンマ受容体（ＦｃγＲ）と呼ばれ、ＩｇＡに結合するものはＦｃ－アルファ受容体（ＦｃαＲＩ）と呼ばれ、ＩｇＥに結合するものはＦｃ－イプシロン受容体（ＦｃεＲ）と呼ばれる。ＦｃＲのクラスは、それらを発現する細胞（マクロファージ、顆粒球、ナチュラルキラー細胞、Ｔ及びＢ細胞）及びそれぞれの受容体のシグナリング特性によっても区別される（Ｏｗｅｎ Ｊ ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（７ｔｈ ｅｄ．）．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ．ｐ４２３）。ＦｃαＲＩはＣＤ８９としても知られ、その主要な抗体リガンドはＩｇＡである。この受容体は、ＩｇＡに対する低い親和性（Ｋｄ＞１０^－６Ｍ）を有し、単球、マクロファージ、好中球及び好酸球上に見出される。ＦｃαＲＩに対するＩｇＡの結合は、食作用及び微生物殺傷の誘導を主にもたらす。

一実施形態において、抗体は、全長抗体、又は全長免疫グロブリン鎖を含む。一実施形態において、抗体は、全長抗体、又は全長免疫グロブリン鎖の抗原結合又は機能的断片を含む。抗体の調製物は、モノクローナルでもポリクローナルでもよい。抗体は、ヒト、ヒト化、ＣＤＲグラフト化、又はインビトロ生成抗体でもあり得る。

一実施形態において、抗体又は免疫グロブリンは組換え産生することができ、例えば、ファージディスプレイにより、又はコンビナトリアル法により産生することができる。抗体を生成するためのファージディスプレイ及びコンビナトリアル法は、当技術分野において公知である（例えば、Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，２２３，４０９号明細書；Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／１８６１９号パンフレット；Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９１／１７２７１号パンフレット；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／２０７９１号パンフレット；Ｍａｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／１５６７９号パンフレット；Ｂｒｅｉｔｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９３／０１２８８号パンフレット；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／０１０４７号パンフレット；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／０９６９０号パンフレット；Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９０／０２８０９号パンフレット；Ｆｕｃｈｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７０－１３７２；Ｈａｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｈｕｍ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，３：８１－８５；Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５－１２８１；Ｇｒｉｆｆｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：７２５－７３４；Ｈａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２２６：８８９－８９６；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４－６２８；Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＰＮＡＳ，８９：３５７６－３５８０；Ｇａｒｒａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，９：１３７３－１３７７；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９：４１３３－４１３７；及びＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）ＰＮＡＳ，８８：７９７８－７９８２に記載；それらの全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。

一実施形態において、抗体又は免疫グロブリンは、完全ヒト抗体（例えば、ヒト免疫グロブリン配列から抗体を産生するように遺伝子人工操作されたマウス中で作製される抗体又はヒトから単離される抗体）、又は非ヒト抗体、例えば、齧歯類（マウス又はラット）、ヤギ、霊長類（例えば、サル）、ラクダ抗体である。ヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫グロブリン遺伝子を担持するトランスジェニックマウスを使用して生成することができる。目的の抗原で免疫されたこれらのトランスジェニックマウスからの脾細胞を使用してヒトタンパク質からのエピトープに対する特異的親和性を有するヒトモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを産生する（例えば、Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９１／００９０６号パンフレット、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９１／１０７４１号パンフレット；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／０３９１８号パンフレット；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．、国際公開第９２／０３９１７号パンフレット；Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６－８５９；Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．７：１３－２１；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｙｅａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７：３３－４０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）ＰＮＡＳ ９０：３７２０－３７２４；Ｂｒｕｇｇｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２１：１３２３－１３２６参照）。

抗体又は免疫グロブリンは、可変領域、又はその一部、例えば、ＣＤＲが非ヒト生物、例えば、ラット又はマウス中で生成されるものであり得る。キメラ、ＣＤＲグラフト化、及びヒト化抗体は、本発明の範囲内である。非ヒト生物、例えば、ラット又はマウス中で生成され、次いで、ヒトにおける抗原性を減少させるように例えば可変フレームワーク又は定常領域中で改変された抗体は、本発明の範囲内である。キメラ抗体は、当技術分野において公知の組換えＤＮＡ技術により産生することができる（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、国際公開第８７／００２６７１号パンフレット；Ａｋｉｒａ ｅｔ ａｌ．、欧州特許出願公開第１８４１８７Ａ１号明細書；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，欧州特許出願公開第１７１４９６Ａ１号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．、欧州特許出願公開第１７３４９４Ａ１号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ ｅｔ ａｌ．、国際公開第８６／０１５３３号パンフレット；Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．、欧州特許出願公開第１２５０２３Ａ１号明細書；Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１－１０４３；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：３４３９－３４４３；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，（１９８７），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１－３５２６；Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）ＰＮＡＳ ８４：２１４－２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７），Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．４７：９９９－１００５；Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６－４４９；及びＳｈａｗ ｅｔ ａｌ．，（１９８８），Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３－１５５９参照）。

ヒト化又はＣＤＲグラフト化抗体は、ドナーＣＤＲで置き換えられた少なくとも１又は２つの（重鎖及び又は軽鎖免疫グロブリン鎖の）レシピエントＣＤＲを有するが、一般に３つ全てのレシピエントＣＤＲを有する。抗体を非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置き換えることができ、又はＣＤＲの一部のみを非ヒトＣＤＲで置き換えることができる。標的抗原へのヒト化抗体の結合に要求されるＣＤＲの数を置き換えることのみ必要である。好ましくは、ドナーは齧歯類抗体、例えば、ラット又はマウス抗体であり、レシピエントはヒトフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークである。典型的には、ＣＤＲを提供する免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークを提供する免疫グロブリンは「アクセプター」と称される。一実施形態において、ドナー免疫グロブリンは、非ヒト（例えば、齧歯類）である。アクセプターフレームワークは、天然に生じる（例えば、ヒト）フレームワーク若しくはコンセンサスフレームワーク、又はそれと約８５％以上、好ましくは、９０％、９５％、９９％以上同一の配列である。

本明細書において使用されるとき、「コンセンサス配列」という用語は、関連配列のファミリーにおける最も高頻度に生じるアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成される配列を指す（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ（１９８７））参照）。タンパク質のファミリーにおいて、コンセンサス配列中のそれぞれの位置は、そのファミリーにおけるその位置において最も高頻度に生じるアミノ酸により占有される。２つのアミノ酸が等しい頻度で生じる場合、いずれもコンセンサス配列中に含まれ得る。「コンセンサスフレームワーク」は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。

抗体は、当技術分野において公知の方法によりヒト化させることができる（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，（１９８５），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２－１２０７；Ｏｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８６），ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４、並びにＱｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、米国特許第５，６９３，７６１号明細書及び米国特許第５，６９３，７６２号明細書参照、それらの全ての内容は参照により本明細書に組み込まれる）。ヒト化又はＣＤＲグラフト化抗体は、免疫グロブリン鎖の１、２、又は全てのＣＤＲを置き換えることができるＣＤＲグラフト化又はＣＤＲ置換により産生することができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号明細書；Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２－５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；Ｂｅｉｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３－４０６０及びＷｉｎｔｅｒの米国特許第５，２２５，５３９号明細書参照、それらの全ての内容は参照により本明細書に明示的に組み込まれる。規定のアミノ酸が置換、欠失又は付加されたヒト化抗体も本発明の範囲内である。ドナーからのアミノ酸を選択するための基準は、米国特許第５，５８５，０８９号明細書、例えば、米国特許第５，５８５，０８９号明細書の第１２～１６列に記載されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。抗体をヒト化するための他の技術は、Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．、欧州特許出願公開第５１９５９６Ａ１号明細書に記載されている。

抗体定常領域を変更する方法は、当技術分野において公知である。変更された機能、例えば、エフェクターリガンド、例えば、細胞上のＦｃＲ、又は補体のＣ１成分に対する変更された親和性を有する抗体は、抗体の定常部分中の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置き換えることにより産生することができる（例えば、欧州特許出願公開第３８８１５１Ａ１号明細書、米国特許第５，６２４，８２１号明細書及び米国特許第５，６４８，２６０号明細書参照）。

本明細書で使用される「位置」は、タンパク質の配列におけるアミノ酸の位置を意味する。位置は、連続的に、又は確立された形式、例えばＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックス又はＩＭＧＴ番号付け（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）に従って番号付けされ得る。例えばＩＭＧＴ番号付けを使用する場合、グルタミン９４（Ｇｌｎ９４とも称される、Ｑ９４とも称される）は、それがＣＨ２又はＣＨ３ドメインに見出されるか否かを示すために、Ｆｃ領域における位置も与える。例えば、ＱＣＨ２．９４、ＳＣＨ３．４５は、ヒト抗体ＩｇＡ１のＣＨ２ドメインにおける位置９４のグルタミン、及びＣＨ３ドメインにおける位置４５のセリンを示す。

本明細書で使用される「残基」は、タンパク質及びその関連するアミノ酸アイデンティティにおける位置を意味する。例えば、グルタミン９４（Ｇｌｎ９４とも称される、Ｑ９４とも称される）は、ヒト抗体ｌｇＡ１における残基である。

本明細書において使用されるアミノ酸残基／位置の「改変」又は「突然変異」は、出発アミノ酸配列と比較した一次アミノ酸配列の変化を指し、その変化は、前記１つ以上のアミノ酸残基／位置が関与する配列変更から生じる。例えば、典型的な改変としては、１つ以上の残基の（又は前記位置における）別のアミノ酸での置換（例えば、保存的又は非保存的置換）、前記１つ以上の残基／位置に隣接する１つ以上のアミノ酸の挿入、及び前記１つ以上の残基／位置の欠失、前記１つ以上の残基／位置の逆位、及び前記１つ以上の残基／位置の重複が挙げられる。アミノ酸「置換」又はそのバリエーションは、所定の（出発）アミノ酸配列における１つ以上の現存するアミノ酸残基の、１つ以上の異なるアミノ酸残基との置換を指す。一般に且つ好ましくは、改変は、出発又は親（又は「野生型」）アミノ酸配列を含むポリペプチドと比較したバリアントポリペプチドの少なくとも１つの物理生化学的活性の変更をもたらす。例えば、抗体又はＦｃ異性体の場合、変更される物理生化学的活性は、標的分子に対する結合親和性、結合能及び／又は結合効果であり得る。

本明細書で使用される「変異体ポリペプチド」、「ポリペプチド変異体」、又は「変異体」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親ポリペプチド配列とは異なるポリペプチド配列を意味する。親ポリペプチドは、天然に存在する若しくは野生型（ＷＴ）ポリペプチドであり得、又はＷＴポリペプチドの改変バージョンであり得る。変異体ポリペプチドは、ポリペプチド自体、ポリペプチドを含む組成物、又はポリペプチドをコードするアミノ配列を指し得る。好ましくは、変異体ポリペプチドは、親ポリペプチドと比較して少なくとも１つのアミノ酸改変、例えば、親と比較して約１～１０個のアミノ酸改変、好ましくは約１～約５個のアミノ酸改変を有する。本明細書に記載される変異体ポリペプチド配列は、親ポリペプチド配列との少なくとも約８０％の相同性、好ましくは少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有するであろう。一実施形態では、本明細書に記載される変異体ポリペプチド配列は、親ＩｇＡ ＣＨ２ポリペプチド配列との少なくとも約８５％の相同性、好ましくは少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有するであろう。一実施形態では、本明細書に記載される変異体ポリペプチド配列は、親ＩｇＡ ＣＨ３ポリペプチド配列との少なくとも約９０％の相同性、好ましくは少なくとも約９５％の相同性、より好ましくは少なくとも約９７％の相同性を有するであろう。好ましい実施形態では、本明細書に記載される変異体ポリペプチド配列は、親ＩｇＡ ＣＨ２ポリペプチド配列との少なくとも約８５％の相同性、好ましくは少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有し、親ＩｇＡ ＣＨ３ポリペプチド配列との少なくとも約９０％の相同性、好ましくは少なくとも約９５％の相同性、より好ましくは少なくとも約９７％の相同性を有するであろう。したがって、本明細書で使用される「Ｆｃ変異体」又は「変異体Ｆｃ」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親Ｆｃ配列とは異なるＦｃ配列を意味する。Ｆｃ変異体は、Ｆｃ領域を包含するのみであり、又は抗体、Ｆｃ融合物、単離されたＦｃ、Ｆｃ断片、若しくは実質的にＦｃによってコードされる他のポリペプチドの状況で存在し得る。Ｆｃ変異体は、ポリペプチド自体、Ｆｃ変異体ポリペプチドを含む組成物、又はＦｃ変異体をコードするアミノ酸配列を指し得る。本明細書で使用される「Ｆｃポリペプチド変異体」又は「変異体Ｆｃポリペプチド」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親Ｆｃポリペプチドとは異なるＦｃポリペプチドを意味する。本明細書で使用される用語「親Ｆｃポリペプチド」は、アミノ酸改変が行われる出発Ｆｃポリペプチドを意味する。親Ｆｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチド又は野生型Ｆｃポリペプチドの対立遺伝子バリエーションであるＦｃポリペプチドであり得る。親Ｆｃポリペプチドはまた、アミノ酸改変が既に行われているＦｃポリペプチドであり得る。本明細書で使用される「タンパク質変異体」又は「変異体タンパク質」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親タンパク質とは異なるタンパク質を意味する。本明細書で使用される「抗体変異体」又は「変異体抗体」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親抗体とは異なる抗体を意味する。本明細書で使用される「ｌｇＡ変異体」又は「変異体ｌｇＡ」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親ｌｇＡとは異なる抗体を意味する。親ＩｇＡは、アイソタイプＩｇＡ１又はＩｇＡ２のものであり得る。本明細書で使用される「免疫グロブリン変異体」又は「変異体免疫グロブリン」は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって親免疫グロブリン配列とは異なる免疫グロブリン配列を意味する。

本明細書で「野生型」又は「ＷＴ」は、対立遺伝子バリエーションを含む、天然に見出されるアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質、ポリペプチド、抗体、免疫グロブリン、ｌｇＡなどは、意図的に改変されていないアミノ酸配列又はヌクレオチド配列を有する。

「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられる置換である。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リジン（Ｋ）、アルギニン（Ｒ）、ヒスチジン（Ｈ））、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ））、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン（Ｇ）、アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、チロシン（Ｙ）、システイン（Ｃ））、非極性側鎖（例えば、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、ロイシン（Ｌ）、イソロイシン（Ｉ）、プロリン（Ｐ）、フェニルアラニン（Ｆ）、メチオニン（Ｍ）、トリプトファン（Ｗ））、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン（Ｔ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ））及び芳香族側鎖（例えば、チロシン（Ｙ）、フェニルアラニン（Ｆ）、トリプトファン（Ｗ）、ヒスチジン（Ｈ））を有するアミノ酸が挙げられる。

２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関する「同一パーセント」又は「同一性パーセント」という用語は、同じである２つ以上の配列又は部分配列を指す。２つの配列は、以下の配列比較アルゴリズムの１つを使用して、又は手作業のアラインメント及び目視検査により測定して比較ウィンドウ、又は指定領域上で比較し、最大対応についてアラインした場合、２つの配列が規定の割合の同じ（すなわち、規定の領域と比べて、又は規定されない場合、配列全体と比べて６０％の同一性、任意選択で６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％の同一性）であるアミノ酸残基又はヌクレオチドを有する場合、「実質的に同一」である。任意選択で、同一性は、少なくとも約５０ヌクレオチド（又は１０アミノ酸）長である領域上、又はより好ましくは、１００～５００又は１０００ヌクレオチド以上（又は２０、５０、２００アミノ酸以上）の長さである領域上に存在する。本開示の「同一性の割合」又は「配列同一性の割合」は、（ｉ）２つの最適にアラインされた配列（ヌクレオチド又はタンパク質）を比較のウィンドウ上で比較することにより、（ｉｉ）同一の核酸塩基（ヌクレオチド配列についての）又はアミノ酸残基（タンパク質についての）が両方の配列中で生じる位置の数を決定してマッチ位置の数を得ることにより、（ｉｉｉ）マッチ位置の数を、比較のウィンドウ中の位置の総数により割ることにより、及び次いで（ｉｖ）この商に１００％を掛けて同一性パーセントを得ることにより計算することができる。「同一性パーセント」が規定される特定の比較ウィンドウなしで参照配列に関して計算されている場合、同一性パーセントは、アラインメントの領域上のマッチ位置の数を参照配列の全長で割ることにより決定される。したがって、本開示の目的のため、２つの配列（クエリ及び対象）が（それらのアラインメントにおけるギャップを許容して）最適にアラインされる場合、クエリ配列についての「同一性パーセント」は、２つの配列間の同一位置の数をその長さ（又は比較ウィンドウ）にわたるクエリ配列中の位置の総数で割り、次いでそれに１００％を掛けたものに等しい。

配列比較のため、典型的には、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験及び参照配列はコンピュータに入力され、必要であれば部分配列座標が指定され、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定される。デフォルトプログラムパラメータを使用することができ、又は代替パラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づき参照配列に対する試験配列についての配列同一性パーセントを計算する。

本明細書において使用される「比較ウィンドウ」という用語には、配列を２つの配列が最適にアラインされた後に連続位置の同じ数の参照配列と比較することができる２０～６００、通常、約５０～約２００、より通常、約１００～約１５０からなる群から選択される連続位置の数のいずれか１つのセグメントへの言及が含まれる。比較のための配列のアラインメントの方法は、当技術分野において公知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９７０）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２ｃのローカル相同性アルゴリズムにより、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムにより、Ｐｅａｒｓｏｎ ＆ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ，８５：２４４４の類似性検索方法により、これらのアルゴリズムのコンピュータによる実行（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ中のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、及びＴＦＡＳＴＡ）により、又は手作業のアラインメント及び目視検査（例えば、Ｂｒｅｎｔ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ参照）により実施することができる。

配列同一性パーセント及び配列類似性の決定に好適なアルゴリズムの２つの例は、ＢＬＡＳＴ及びＢＬＡＳＴ ２．０アルゴリズムであり、それらはそれぞれＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，．２５：３３８９－３４０２；及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０に記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して公的に利用可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードとアラインした場合、マッチし、又はある正の値の閾値スコアＴを満たすクエリ配列中の長さＷの短いワードを同定することにより高スコアリング配列ペア（ＨＳＰ）を最初に同定することを伴う。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）前掲）。これらの初期隣接ワードヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始するためのシーズとして機能する。ワードヒットは、累積的アラインメントスコアが増加され得る限り、それぞれの配列に沿って両方向に伸長される。累積スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメータＭ（一対のマッチ残基に対する報酬スコア；常に＞０）及びＮ（ミスマッチ残基に対するペナルティスコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列については、累積スコアを計算するため、スコアリング行列が使用される。累積アラインメントスコアがその最大達成値から量Ｘだけ降下した場合；１つ以上の負のスコアの残基アラインメントの蓄積に起因して累積スコアが０以下になった場合；又はいずれかの配列の末端に達した場合、それぞれの方向におけるワードヒットの伸長は停止する。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータのＷ、Ｔ、及びＸは、アラインメントの感度及び速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、デフォルトとして、ワード長（Ｗ）１１、期待値（Ｅ）又は１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、ワード長３及び期待値（Ｅ）１０をデフォルトとして使用し、ＢＬＯＳＵＭ６２スコアリング行列（Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ＆ Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，（１９８９）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ，８９：１０９１５参照）は、アラインメント（Ｂ）５０、期待値（Ｅ）１０、Ｍ＝５、Ｎ＝－４、及び両鎖の比較をデフォルトとして使用する。

ＢＬＡＳＴアルゴリズムは、２つの配列間の類似性の統計的分析も実行する（例えば、Ｋａｒｌｉｎ ＆ Ａｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ，９０：５８７３－５７８７参照）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムにより提供される類似性の１つの尺度は、最小和確率（ｓｍａｌｌｅｓｔ ｓｕｍ ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ）（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列間又はアミノ酸配列間のマッチが偶然に生じる確率の指標を提供する。例えば、試験核酸と参照核酸との比較における最小合計確率が約０．２未満、より好ましくは、約０．０１未満、最も好ましくは、約０．００１未満である場合、核酸は参照配列に類似するとみなされる。

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれたＥ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して、ＰＡＭ１２０ウエイト残基表、ギャップ長さペナルティ１２及びギャップペナルティ４を使用して決定することもできる。さらに、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）中のＧＡＰプログラムに組み込まれたＮｅｅｄｌｅｍａｎ ＆ Ｗｕｎｓｃｈの前掲のアルゴリズムを使用して、Ｂｌｏｓｓｏｍ６２行列又はＰＡＭ２５０行列のいずれか、並びにギャップウエイト１６、１４、１２、１０、８、６、又は４及び長さウエイト１、２、３、４、５、又は６を使用して決定することができる。

上記の配列同一性の割合以外で、２つの核酸配列又はポリペプチドが実質的に同一である別の指標は、下記のとおり第１の核酸によりコードされるポリペプチドが、第２の核酸によりコードされるポリペプチドに対して生じる抗体と免疫学的に交差反応性であることである。したがって、ポリペプチドは、典型的には、例えば、２つのペプチドが保存的置換のみ異なる第２のポリペプチドと実質的に同一である。２つの核酸配列が実質的に同一である別の指標は、２つの分子又はそれらの相補体が下記のとおりストリンジェントな条件下で互いにハイブリダイズすることである。２つの核酸配列が実質的に同一であるさらに別の指標は、同じプライマーを使用してその配列を増幅させることができることである。

「核酸」という用語は、本明細書において「ポリヌクレオチド」という用語と互換的に使用され、一本鎖又は二本鎖形態のいずれかであるデオキシリボヌクレオチド又はリボヌクレオチド及びそれらのポリマーを指す。この用語は、合成、天然発生、及び非天然発生であり、参照核酸と類似の結合特性を有し、参照ヌクレオチドと類似の様式で代謝される公知のヌクレオチド類似体又は改変骨格残基若しくは結合を含有する核酸を包含する。そのような類似体の例としては、限定されるものではないが、ホスホロチオエート、ホスホルアミデート、メチルホスホネート、キラル－メチルホスホネート、２－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、ペプチド－核酸（ＰＮＡ）が挙げられる。

特に示されない限り、特定の核酸配列は、明示的に示される配列だけでなく、その保存的に改変されたバリアント（例えば、縮重コドン置換）、及び相補的配列も黙示的に包含する。具体的には、以下に詳述されるとおり、縮重コドン置換は、１つ以上の選択された（又は全ての）コドンの３番目の位置が混合塩基及び／又はデオキシイノシン残基で置換されている配列を生成することにより達成することができる（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．，１９：５０８１；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２６０：２６０５－２６０８；及びＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ，８：９１－９８）。本明細書において使用されるとき、「最適化ヌクレオチド配列」という用語は、産生細胞、この場合、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）中で好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコードするようにヌクレオチド配列が変更されていることを意味する。最適化ヌクレオチド配列は、「親」配列としても公知の出発ヌクレオチド配列により最初にコードされる完全にアミノ酸配列を保持するように人工操作される。特定の実施形態において、本明細書における最適化配列は、ＣＨＯ哺乳類細胞において好ましいコドンを有するように人工操作されている。

本明細書において使用されるとき、「Ｃ末端」は、フリーカルボキシル基（－ＣＯＯＨ）を有するポリペプチド鎖のカルボキシル末端アミノ酸を指す。本明細書において使用されるとき、「Ｎ末端」は、フリーアミン基（－ＮＨ_２）を有するポリペプチド鎖のアミノ末端アミノ酸を指す。

本明細書において使用される「作動可能に結合している」又は「機能的に結合している」という用語は、２つ以上のポリヌクレオチド（例えば、ＤＮＡ）セグメント間の機能的関係を指す。典型的には、これは、転写調節配列と転写される配列との機能的関係を指す。例えば、プロモーター又はエンハンサー配列は、それが適切な宿主細胞又は他の発現系中でコード配列の転写を刺激又はモジュレートする場合、コード配列に作動可能に結合している。一般に、転写される配列に作動可能に結合しているプロモーター転写調節配列は、転写される配列に物理的に連続しており、すなわち、それらはシス作用性である。しかしながら、一部の転写調節配列、例えば、エンハンサーは、それらが転写を向上させるコード配列に物理的に連続する必要も、近接して位置する必要もない。

「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために本明細書において互換的に使用される。この語句は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に生じるアミノ酸の人工化学模倣体であるアミノ酸ポリマー、並びに天然に生じるアミノ酸ポリマー及び天然に生じないアミノ酸ポリマーにも当てはまる。特に示されない限り、特定のポリペプチド配列は、その保存的に改変されたバリアントも黙示的に包含する。

本明細書で使用される「親ポリペプチド」、「親タンパク質」、「前駆体ポリペプチド」、又は「前駆体タンパク質」は、その後改変されて変異体を生成する非改変ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然に存在するポリペプチド、又は天然に存在するポリペプチドの変異体若しくは操作バージョンであり得る。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体、親ポリペプチドを含む組成物、又は親ポリペプチドをコードするアミノ酸配列を指すことができる。したがって、本明細書で使用される「親Ｆｃポリペプチド」は、変異体を生成するように改変されるＦｃポリペプチドを意味し、本明細書で使用される「親抗体」は、変異体抗体を生成するように改変される抗体を意味する。いくつかの実施形態では、「親」は、野生型タンパク質である。

本明細書において使用される「インビボ半減期」という用語は、所与の哺乳類の血液中で循環する目的の分子又はそのバリアントの半減期を指す。

「対象」という用語には、ヒト及び非ヒト動物が含まれる。非ヒト動物としては、全ての脊椎動物、例えば、哺乳類及び非哺乳類、例えば、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、及び爬虫類が挙げられる。好ましい実施形態では、対象はヒトである。注記される場合を除き、「患者」又は「対象」という用語は、本明細書において互換的に使用される。

本明細書において使用されるとき、「処置が必要とされる患者」又は「処置が必要とされる対象」などの語句には、例えば、検出、診断手順及び／又は処置に使用される本開示の分子又は医薬組成物の投与から利益を得る対象、例えば、哺乳類対象が含まれる。

本明細書において使用されるとき、「処置」又は「処置する」という用語の用語は、本明細書において、対象への、又は対象からの単離組織若しくは細胞系への本開示によるＦｃ異性体、又は前記Ｆｃ異性体を含む医薬組成物の適用又は投与と定義され、対象は、特定の疾患（例えば、関節炎）、その疾患に伴う症状、又はその疾患発生の素因（該当する場合）を有し、その目的は、その疾患の１つ以上の症状を治癒し（該当する場合）、予防し（該当する場合）、その発症を遅延させ、その重症度を低減させ、緩和し、改善し、疾患を改善し、疾患の任意の付随症状又は疾患発生の素因を低減又は改善することである。「処置」又は「処置する」という用語には、疾患を有すると疑われる患者及び疾病患者又は疾患若しくは医学的病態を罹患していると診断された患者を処置することが含まれ、臨床的再発の抑制が含まれる。「見込みを低減させること」という語句は、疾患、感染又は障害の発症又は発生又は進行を遅延させることを指す。

「治療許容量」又は「治療有効量」又は「治療有効用量」という用語は、所望の結果（すなわち、疾患活動性の低減、疾患進行の低減、疾患徴候及び／又は症状の低減など）を生じさせるために十分な量を互換的に指す。一部の態様において、治療許容量は、不所望な副作用を誘導せず惹起もしない。治療許容量は、最初に低用量を投与し、次いで所望の効果が達成されるまでその用量を徐々に増加させることにより決定することができる。本開示の分子の「予防有効投与量」及び「治療有効投与量」は、疾患症状の発症を予防し（該当する場合）、又はその重症度の減少をそれぞれもたらし得る。

本明細書において使用されるとき、患者に関して「選択すること」及び「選択される」は、特定の患者が所定の基準を有する特定の患者に起因してより大きい患者群から具体的に選択されることを意味するために使用される。同様に、「患者を選択的に処置すること」は、所定の基準を有する特定の患者に起因してより大きい患者群から具体的に選択される患者に処置を提供することを指す。同様に、「選択的に投与すること」は、所定の基準を有する特定の患者に起因してより大きい患者群から具体的に選択される患者に薬物を投与することを指す。

特に具体的に記述のない限り、又は文脈から明らかでない限り、本明細書において使用されるとき、数値に関する「約」という用語は、当技術分野において通常の許容範囲内、例えば、平均の２つの標準偏差内であることが理解される。したがって、「約」は、記述値の＋／－１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．１％、０．０５％、又は０．０１％、好ましくは、記述値の＋／－１０％の範囲内であり得る。「約」という用語は、数値又は数のリストの前で使用される場合、その系列のそれぞれの数に適用され、例えば、「約１～５」という語句は、「約１～約５」であると解釈すべきであり、又は例えば、「約１、２、３、４」という語句は、「約１、約２、約３、約４」解釈すべきなどである。

「実質的に」という語は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に有さない」組成物は、Ｙを完全に有さなくてよい。必要な場合、「実質的に」という語は、本開示の定義から除外することができる。

「同時投与する」という用語は、個体の血液中の２つの活性剤の同時存在を指す。本開示の抗体及び抗原結合断片と同時投与される活性剤（例えば、追加の治療剤）は、同時に又は連続的に送達することができる。

本開示の種々の態様は、以下のセクション及び下位セクションにさらに詳細に記載される。

本発明のＦｃ変異体
抗原に結合する抗体の能力に加え、抗体の重要な特徴は、免疫エフェクター機能を動員するその能力である。体液性免疫応答のエンゲージメントは、Ｃ１ｑとの相互作用及び補体カスケードの開始により主に支配される（Ｍｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ＭＡＢＳ，６（５）：１１３３－４４）。細胞性免疫応答は、大部分が抗体とＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）との間の相互作用に起因して生じる。活性化受容体を介する細胞内シグナリングは、エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、及びサイトカイン分泌の誘導を介する炎症をもたらす免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）のリン酸化を介してモジュレートされる。

多くの抗体ベース療法は臨床的及び商業的成功を示しているが、それらの治療法は患者の小集団においてのみ有効であることが多い。これまで、全ての市販抗体は、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）を介して免疫エフェクター機能を動員するＩｇＧクラス、主にＩｇＧ１のものである。典型的な反応は、ＡＤＣＣをトリガーするＩｇＧ抗体のＦｃ部分により細胞表面上でＦｃγＲＩＩＩをディスプレイするナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の活性化を伴う。しかしながら、ＮＫ細胞は自然免疫系の唯一の構成成分であり、他の形態の白血球の活性化を使用してＩｇＧによりトリガーされるＡＤＣＣ応答を向上させることができた。抗体のＩｇＡクラスは、好中球上で広く発現されるＦｃαＲＩをエンゲージする。好中球は循環中で見出される自然エフェクター細胞の最大の割合をなし、それらの活性化はＡＤＣＣ及びＡＤＣＰの両方をトリガーする。さらに、これらは固形腫瘍に浸潤することが示されている（Ｇｒｅｇｏｒｙ ＆ Ｈｏｕｇｈｔｏｎ（２０１１）前掲）。しかしながら、ＩｇＧ抗体はＦｃαＲＩに結合しないため、ほとんどの市販の抗体ベース療法は、好中球を活性化させ得ない。今のところ、ＩｇＡベースの治療抗体は、ＩｇＧ抗体と比較して、このクラスの抗体が有する認識された欠点に起因して、商業的に開発されていない。しかしながら、本出願人らは、Ｆｃ領域に改変を行うことによって、ＦｃαＲＩに対する改善された結合を有するＩｇＡ抗体を生成できることを示した。１０００倍までのこの改善された親和性は、細胞ベースのアッセイにおいて、効力の増加に直接変換されることが示された。したがって、治療的に使用される場合、必要な抗体はより少なく、抗体の投与頻度を減少させることができ、これは患者に有利である。

一般に、上記で概略したように、Ｆｃ変異体は、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメインにおけるアミノ酸改変を含む。Ｆｃ変異体は、親Ｆｃポリペプチドに対する１つ以上のアミノ酸改変を含み、ここでアミノ酸改変は、場合により１つ以上の最適化された特性を提供するが、いくつかの場合、変異体は、実質的に同一の生物学的特性を示す。最適化され得る特性としては、ＦｃαＲＩに対する増強され又は低下した親和性が挙げられるがこれに限定されない。一実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、ヒトＦｃαＲＩに対する増強された親和性を有するように改変される。好ましい実施形態では、Ｆｃ変異体のＦｃ領域は、親和性成熟しており、それによりアミノ酸改変は、その標的ＦｃαＲＩへのＦｃ領域の結合を増強するようにＣＨ２及び／又はＣＨ３ドメインに行われている。このようなタイプの改変は、標的抗原への結合及び／又は解離動力学を改善し得る。この最適化された特性は、ヒトにおける増強された治療特性、例えば増強されたエフェクター機能及びより高い抗癌効力を有するＦｃ変異体を提供すると予想される。

本明細書で使用される、親Ｆｃポリペプチドよりも「高い親和性」又は「改善された親和性」又は「増強された親和性」又は「より良好な親和性」は、結合アッセイで変異体と親ポリペプチドの量が本質的に同じである場合、Ｆｃ変異体が親Ｆｃポリペプチドよりも有意に高い平衡結合定数（Ｋ_Ａ）又は低い平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）でＦｃ受容体に結合することを意味する。例えば、改善されたＦｃ受容体結合親和性を有するＦｃ変異体は、表面プラズモン共鳴により測定して、親Ｆｃポリペプチドの約１０倍～約１００倍、例えば少なくとも約５０倍を示し得る。例えば、親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体は、表面プラズモン共鳴により測定して、親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約５０、約１００、約１５０、約２００、約２５０、約３００倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有し得る。

所与のＦｃ変異体のＦｃ受容体選択性又は特異性は、それが抗体、Ｆｃ融合物、又は結合した融合若しくはコンジュゲートパートナーを有するＦｃ変異体を構成するか否かに応じて、異なる特性を提供するであろう。

本発明のＦｃ変異体は、ＦｃγＲｓ及び／又はＦｃＲｎを含むがこれらに限定されない、ＦｃαＲＩ以外のＦｃ受容体との相互作用を調節する改変を含むことができる。

本発明のＦｃ変異体は、少なくとも１つのアミノ酸改変によって、その親ＩｇＡ Ｆｃ領域とはアミノ酸配列が異なる。したがって、本発明のＦｃ変異体は、親と比較して少なくとも１つのアミノ酸改変を有する。代替的に、本発明のＦｃ変異体は、親と比較して１つを超えるアミノ酸改変、例えば、親と比較して約１～１０個のアミノ酸改変、好ましくは１～５個のアミノ酸改変、１～４個のアミノ酸改変、１～３個のアミノ酸改変、１～２個のアミノ酸改変を有し得る。したがって、Ｆｃ変異体の配列と親Ｆｃポリペプチドの配列は、実質的に相同又は同一である。例えば、本明細書の変異体Ｆｃ変異体配列は、親Ｆｃ変異体配列との約８０％の相同性（同一性を含む）、好ましくは少なくとも約９０％の相同性、最も好ましくは少なくとも約９５、９６、９７、９８及び９９％の同一性を有するであろう。

一実施形態では、１つ以上のアミノ酸挿入、欠失又は置換が行われる。これらの置換の全ては、ＩｇＡ分子、例えばＩｇＡ１又はＩｇＡ２に、特にＩｇＡ２に行われ得る。好ましくは、一実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及び／又はＣＨ３．１２４のＦｃ領域内の位置において行われ得、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。これらのアミノ酸置換には（また置換、挿入及び欠失の任意の可能な組み合わせとして）：Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｑ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ及び／又はＬ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆが含まれるがこれらに限定されず、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。好ましい実施形態では、アミノ酸置換又はそれらの組み合わせには：Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｌ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ／Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ／Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗが含まれ得るがこれらに限定されず、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。

一実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５及びＣＨ３．１１８のＦｃ領域における位置に行うことができる。一実施形態では、アミノ酸置換は、位置ＣＨ２．９４におけるＧｌｕ、位置ＣＨ２．９７におけるＴｙｒ、位置ＣＨ３．４５におけるＡｓｐ、位置ＣＨ３．１０５におけるＴｙｒ又は位置ＣＨ３．１１８におけるＴｙｒの、Ｆｃ領域における位置に行うことができる。好ましい実施形態では、アミノ酸置換は、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｌ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿ＹのＦｃ領域において行うことができる。

機能的に、ＦｃαＲＩに対する増加した結合をもたらす変異体は、いくつかの実施形態において特定の用途を見出す。Ｆｃ変異体は、１つを超えるタンパク質鎖を含み得る。即ち、Ｆｃ変異体は、モノマー又はモノ－若しくはヘテロ－オリゴマーを含むオリゴマーである抗体又はＦｃ融合物において用途を見出し得る。

Ｆｃ融合物、抗体融合物及び抗体コンジュゲート
本発明のＦｃポリペプチド及び抗体は、抗体断片、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（本明細書で「抗体模倣物」と称されることがある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗体融合物（「抗体コンジュゲート」と称されることがある）、及びそれぞれの断片をそれぞれ含むがこれらに限定されない多様な構造であり得る。本発明は、異種タンパク質又はポリペプチド（又はその断片、好ましくは少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０又は少なくとも１００アミノ酸のポリペプチド）に組換え的に融合又は化学的にコンジュゲートされて（共有結合及び非共有結合コンジュゲートの両方を含む）、融合タンパク質を生成する変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体（例えば、抗体又は抗体様分子）又はその断片を含む。抗体又は抗体断片へのタンパク質、ポリペプチド、又はペプチドの融合又はコンジュゲートのための方法は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第５，３３６，６０３号明細書、米国特許第５，６２２，９２９号明細書、米国特許第５，３５９，０４６号明細書、米国特許第５，３４９，０５３号明細書、米国特許第５，４４７，８５１号明細書、及び米国特許第５，１１２，９４６号明細書；欧州特許第３０７４３４号明細書及び欧州特許第３６７１６６号明細書；国際公開第１９９６／０４３８８号パンフレット及び国際公開第１９９１／０６５７０号パンフレット；Ａｓｈｋｅｎａｚｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ ８８：１０５３５－１０５３９；Ｚｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：５５９０－５６００；及びＶｉｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ ８９：１１３３７－１１３４１を参照されたい。

追加の融合タンパク質は、遺伝子シャッフリング、モチーフシャッフリング、エキソンシャッフリング、及び／又はコドンシャッフリング（まとめて、「ＤＮＡシャッフリング」と称される）の技術を介して生成することができる。ＤＮＡシャッフリングを用いて本開示の分子又はその断片の活性を変更することができる（例えば、より高い親和性及びより低い解離速度を有する分子又はその断片）。一般に、米国特許第５，６０５，７９３号明細書、米国特許第５，８１１，２３８号明細書、米国特許第５，８３０，７２１号明細書、米国特許第５，８３４，２５２号明細書、及び米国特許第５，８３７，４５８号明細書；Ｐａｔｔｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．８：７２４－３３；Ｈａｒａｙａｍａ（１９９８）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６（２）：７６－８２；Ｈａｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８７：２６５－７６；及びＬｏｒｅｎｚｏ ＆ Ｂｌａｓｃｏ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２４（２）：３０８－３１３（これらの特許及び刊行物のそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる）参照。本明細書に記載の分子又はその断片は、組換え前にエラープローンＰＣＲ、ランダムヌクレオチド挿入又は他の方法によるランダム突然変異誘発に供することにより変更することができる。本分子の断片をコードするポリヌクレオチドは、１つ以上の異種分子の１つ以上の構成成分、モチーフ、セクション、部分、ドメイン、断片などと組み換えることができる。

さらに、本開示の変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体は、マーカー配列、例えば、ペプチドに融合させて精製を容易にすることができる。好ましい実施形態において、マーカーアミノ酸配列は、ヘキサ－ヒスチジンペプチド（配列番号８１）、例えば、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，９２５９ Ｅｔｏｎ Ａｖｅｎｕｅ，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）中に提供されるタグであり、それらの多くは市販されている。例えば、Ｇｅｎｔｚ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）ＰＮＡＳ．ＵＳＡ ８６：８２１－８２４に記載のとおり、ヘキサ－ヒスチジン（配列番号８１）は、融合タンパク質の簡便な精製を提供する。精製に有用な他のペプチドタグとしては、限定されるものではないが、インフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応するヘマグルチニン（「ＨＡ」）タグ（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｃｅｌｌ ３７：７６７）、及び「ｆｌａｇ」タグが挙げられる。

他の実施形態において、本開示の変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体は、診断又は検出剤にコンジュゲートされる。このような分子は、臨床試験手順の一部としての疾患又は障害の発症、発生、進行及び／又は重症度のモニタリング又は予後診断、例えば、特定の治療法の有効性の決定に有用であり得る。このような診断及び検出は、分子を検出可能な物質、例として、限定されるものではないが、種々の酵素、例えば、限定されるものではないが、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼ；補欠分子族、例えば、限定されるものではないが、ストレプトアビジン／ビオチン及びアビジン／ビオチン；蛍光材料、例えば、限定されるものではないが、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシネート（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙｎａｔｅ）、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシル又はフィコエリスリン；発光材料、例えば、限定されるものではないが、ルミノール；生物発光材料、例えば、限定されるものではないが、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリン；放射性材料、例えば、限定されるものではないが、ヨウ素（１３１Ｉ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、及び１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１５Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１２Ｉｎ、及び１１１Ｉｎ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｉ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７Ｇａ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、フッ素（１８Ｆ）、１５３Ｓｍ、１７７Ｌｕ、１５９Ｇｄ、１４９Ｐｍ、１４０Ｌａ、１７５Ｙｂ、１６６Ｈｏ、９０Ｙ、４７Ｓｃ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１４２Ｐｒ、１０５Ｒｈ、９７Ｒｕ、６８Ｇｅ、５７Ｃｏ、６５Ｚｎ、８５Ｓｒ、３２Ｐ、１５３Ｇｄ、１６９Ｙｂ、５１Ｃｒ、５４Ｍｎ、７５Ｓｅ、１１３Ｓｎ、及び１１７Ｔｉｎ；並びに種々の陽電子放出断層撮影を使用する陽電子放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンにカップリングすることにより達成することができる。

本出願は、治療部分にコンジュゲートしている本開示の変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体の使用をさらに包含する。例えば、治療部分は、細胞毒素、例えば、細胞増殖抑制又は殺細胞剤、治療剤又は放射性金属イオン、例えば、アルファ放射体であり得る。細胞毒素又は細胞毒性剤としては、細胞に有害な任意の薬剤が挙げられる。

さらに、変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体は、所与の生物学的応答を改変する治療部分又は薬物部分にコンジュゲートすることができる。例えば、薬物部分は、所望の生物学的活性を有するタンパク質、ペプチド、又はポリペプチドであり得る。このようなタンパク質としては、例えば、毒素、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス外毒素、コレラ毒素、又はジフテリア毒素；タンパク質、例えば、腫瘍壊死因子、α－インターフェロン、β－インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子、組織プラスミノーゲンアクチベーター、アポトーシス剤、抗血管新生剤；又は生物学的応答調節物質、例えば、リンホカインなどを挙げることができる。

細胞毒素、リンカーのタイプ及び治療剤を変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体にコンジュゲートする方法のさらなる考察については、Ｓａｉｔｏ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５５：１９９－２１５；Ｔｒａｉｌ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：３２８－３３７；Ｐａｙｎｅ（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ ３：２０７－２１２；Ａｌｌｅｎ（２００２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，２：７５０－７６３；Ｐａｓｔａｎ ＆ Ｋｒｅｉｔｍａｎ（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ，３：１０８９－１０９１；Ｓｅｎｔｅｒ ＆ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ（２００１）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３：２４７－２６４も参照。

本開示の変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体を放射性同位体にコンジュゲートして放射性免疫コンジュゲートとも称される細胞毒性放射性医薬品を生成することもできる。診断又は治療的な使用のために人工操作免疫グロブリンにコンジュゲートすることができる放射性同位体の例としては、限定されるものではないが、ヨウ素１３１、インジウム１１１、イットリウム９０、及びルテチウム１７７が挙げられる。放射性免疫コンジュゲートを調製する方法は、当技術分野において確立されている。例えば、Ｄｅｎａｒｄｏ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４（１０）：２４８３－９０；Ｐｅｔｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ．Ｃｈｅｍ．１０（４）：５５３－７；及びＺｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２６（８）：９４３－５０参照、それぞれ参照により全体として組み込まれる。

治療部分を変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体、例えば、抗体又は抗体様分子にコンジュゲートするための技術は公知であり、例えば、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｅｉｓｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．２４３－５６（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．１９８５）；Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ”，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（２ｎｄ Ｅｄ．），Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．６２３－５３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．１９８７）；Ｔｈｏｒｐｅ，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ａｇｅｎｔｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ８４：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｐｉｎｃｈｅｒａ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．４７５－５０６（１９８５）；“Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｒｅｓｕｌｔｓ，ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｕｓｅ ｏｆ Ｒａｄｉｏｌａｂｅｌｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂａｌｄｗｉｎ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），ｐｐ．３０３－１６（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ １９８５）、及びＴｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．，（１９８２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．６２：１１９－５８参照。

変異体Ｆｃポリペプチド及び抗体は、免疫アッセイ又は標的抗原の精製に特に有用である固体担体に付着させることもできる。このような固体担体としては、限定されるものではないが、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル又はポリプロピレンが挙げられる。

本発明のＦｃ変異体は、Ｆｃ変異体の低下又は増強された内部移行を提供する１つ以上の改変を含み得る。一実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、１つ以上のＦｃリガンドとの相互作用を介して起こる、Ｆｃ変異体の細胞内部移行を低下させるために、使用され又は追加の改変と組み合わされ得る。この特性は、エフェクター機能を増強し、本発明のＦｃ変異体の免疫原性を潜在的に低下させることが期待され得る。代替的に、本発明のＦｃ変異体は、１つ以上のＦｃリガンドとの相互作用を介して起こる、Ｆｃ変異体の細胞内部移行を増強するために、直接使用され又は追加の改変と組み合わされ得る。

好ましい実施形態では、改変は、安定性、可溶性、及びオリゴマー状態を含むがこれらに限定されない、本発明のＦｃ変異体の生物物理学的特性を改善するように行われる。改変には、例えば、例えばより高い安定性を提供するために、Ｆｃ変異体においてより好ましい分子内相互作用を提供する置換、又はより高い安定性のために、露出した非極性アミノ酸の極性アミノ酸による置換が含まれ得る。本発明のＦｃ変異体をさらに最適化するために、追加の改変の操作のために利用できるいくつかの最適化目標及び方法が、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第１０／３７９，３９２号に記載されている。本発明のＦｃ変異体は、腫瘍浸透を増強するように、又はインビボクリアランス速度を所望通りに増加させるように、オリゴマー状態又はサイズを低下させる追加の改変と組み合わせることもできる。本発明のＦｃ変異体に対する他の改変としては、特定の形成又はホモ二量体若しくはホモ多量体分子を可能にするものが挙げられる。そのような改変には、操作されたジスルフィド、及び共有結合ホモ二量体又はホモ多量体を生成する機構を提供し得る化学的改変又は凝集方法が含まれるがこれらに限定されない。例えば、そのような分子の操作方法及び組成物は、Ｋａｎ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．，１６６：１３２０－１３２６；Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｒｅｃｅｎｔ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１５９：１０４－１２；米国特許第５，６８１，５６６；Ｃａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９２），Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１１９１－１１９５及びＳｈａｐｅｓ（１９９２）Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．１４８（９）：２９１８－２２（全て参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明の変異体に対する追加の改変としては、特定の形成又はホモ二量体、ホモ多量体、二官能性、及び／若しくは多官能性分子を可能にするものが挙げられる。そのような改変には、ＣＨ３ドメインにおける１つ以上のアミノ酸置換が含まれるがこれに限定されず、この置換は、ホモ二量体形成を低下させ、ヘテロ二量体形成を増加させる。例えば、そのような分子の操作方法及び組成物は、Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｉ．２７０（１）：２６－３５及びＣａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．ｌｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：７－１５（両方とも参照により本明細書に組み込まれる）に記載されている。追加の改変には、ヒンジ及びＣＨ３ドメインにおける改変が含まれ、この改変は、二量体を形成する傾向を低下させる。

Ｆｃ変異体ポリペプチドの調製
本明細書に開示される変異体Ｆｃポリペプチドを含む抗体及びその断片は、従来のモノクローナル抗体方法、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ＆ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５の標準体細胞ハイブリダイゼーションを含む多様な技術によって生成することができる。

ハイブリドーマを調製するための動物系は、ネズミ系である。マウスにおけるハイブリドーマ産生は、知られている手順である。免疫化プロトコル及び融合のための免疫化脾細胞の単離のための技術は、当技術分野において公知である。融合相手（例えば、ネズミ骨髄腫細胞）及び融合手順も公知である。

キメラ又はヒト化抗体は、上記のとおり調製されるネズミモノクローナル抗体の配列に基づき調製することができる。重鎖及び軽鎖免疫グロブリンをコードするＤＮＡを目的のネズミハイブリドーマから得、標準的分子生物学技術を使用して非ネズミ（例えば、ヒト）免疫グロブリン配列を含有するように人工操作することができる。例えば、キメラ抗体を作出するため、当技術分野において公知の方法を使用してネズミ可変領域をヒト定常領域に結合させることができる（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書、Ｃａｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．参照）。ヒト化抗体を作出するため、当技術分野において公知の方法を使用してネズミＣＤＲ領域をヒトフレームワーク中に挿入することができる。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号明細書、Ｗｉｎｔｅｒ、及び米国特許第５，５３０，１０１号明細書；米国特許第５，５８５，０８９号明細書；米国特許第５，６９３，７６２号明細書及び米国特許第６，１８０，３７０号明細書、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．参照。

ある実施形態において、本開示の抗体又は本明細書に記載されるＦｃ異性体を含むその断片は、ヒトモノクローナル抗体である。このようなヒトモノクローナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の一部を担持するトランスジェニック又はトランスクロモソミックマウスを使用して生成することができる。これらのトランスジェニック及びトランスクロモソミックマウスとしては、本明細書においてそれぞれＨＵＭＡＢマウス及びＫＭマウスと称されるマウスが挙げられ、本明細書においてまとめて「ヒトＩｇマウス」と称される。

ＨＵＭＡＢマウス（Ｍｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．）は、再編成されていないヒト重鎖（μ及びγ）及びκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子ミニ遺伝子座（ｍｉｎｉｌｏｃｉ）を、内因性μ及びκ鎖遺伝子座を不活性化させる標的化突然変異（例えば、Ｌｏｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６８（６４７４）：８５６－８５９参照）と一緒に含有する。したがって、マウスはマウスＩｇＭ又はκの低減された発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖及び軽鎖導入遺伝子はクラススイッチ及び体細胞突然変異を受けて高親和性ヒトＩｇＧκモノクローナルを生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）前掲；Ｌｏｎｂｅｒｇ，（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９－１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｈｕｓｚａｒ，（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５－９３、及びＨａｒｄｉｎｇ ＆ Ｌｏｎｂｅｒｇ，（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６－５４６に概説されている）。ＨＵＭＡＢマウスの調製及び使用、並びにそのようなマウスにより担持されるゲノム改変は、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７－６２９５；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：６４７－６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９４：３７２０－３７２４；Ｃｈｏｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７－１２３；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．１２：８２１－８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２－２９２０；Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎ．，５７９－５９１；及びＦｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃ．，１４：８４５－８５１にさらに記載されており、それらの全ての内容は参照により全体として本明細書に具体的に組み込まれる。さらに、米国特許第５，５４５，８０６号明細書；米国特許第５，５６９，８２５号明細書；米国特許第５，６２５，１２６号明細書；米国特許第５，６３３，４２５号明細書；米国特許第５，７８９，６５０号明細書；米国特許第５，８７７，３９７号明細書；米国特許第５，６６１，０１６号明細書；米国特許第５，８１４，３１８号明細書；米国特許第５，８７４，２９９号明細書；及び米国特許第５，７７０，４２９号明細書；全て、Ｌｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｋａｙ；米国特許第５，５４５，８０７号明細書、Ｓｕｒａｎｉ ｅｔ ａｌ．；国際公開第９２／１０３９１８号パンフレット、国際公開第９３／１２２２７号パンフレット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９７１１３８５２号パンフレット、国際公開第９８／２４８８４号パンフレット及び国際公開第９９／４５９６２号パンフレット、全てＬｏｎｂｅｒｇ ＆ Ｋａｙ；並びに国際公開第０１／１４４２４号パンフレット、Ｋｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．参照。

別の実施形態において、ヒト抗体は、導入遺伝子及び導入染色体上のヒト免疫グロブリン配列を担持するマウス、例えば、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入染色体を担持するマウスを使用して生じさせることができる。このようなマウスは、本明細書において「ＫＭマウス」と称され、国際公開第２００２／４３４７８号パンフレット（Ｉｓｈｉｄａ ｅｔ ａｌ）に詳述されている。

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的トランスジェニック動物系が当技術分野において利用可能であり、それを使用してヒト抗体を生じさせることができる。例えば、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．）と称される代替的トランスジェニック系を使用することができる。このようなマウスは、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号明細書；米国特許第６，０７５，１８１号明細書；米国特許第６，１１４，５９８号明細書；米国特許第６，１５０，５８４号明細書及び米国特許第６，１６２，９６３号明細書（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ｅｔ ａｌ）に記載されている。

さらに、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現する代替的トランスクロモソミック動物系が当技術分野において利用可能であり、それを使用してヒト抗体を生じさせることができる。例えば、「ＴＣマウス」と称されるヒト重鎖導入染色体及びヒト軽鎖導入染色体の両方を担持するマウスを使用することができ；このようなマウスはＴｏｍｉｚｕｋａ ｅｔ ａｌ．，（２０００）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９７：７２２－７２７に記載されている。さらに、ヒト重鎖及び軽鎖導入染色体を担持するウシが当技術分野において記載されており（Ｋｕｒｏｉｗａ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：８８９－８９４）、それを使用して本出願において有益なヒト抗体を生じさせることができる。

ヒトモノクローナル抗体又はその断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子のライブラリーをスクリーニングするためのファージディスプレイ法を使用して調製することもできる。ヒト抗体を単離するこのようなファージディスプレイ法は当技術分野において確立されており、又は以下の実施例に記載される。例えば、米国特許第５，２２３，４０９号明細書；米国特許第５，４０３，４８４号明細書；及び米国特許第５，５７１，６９８号明細書（Ｌａｄｎｅｒ ｅｔ ａｌ）；米国特許第５，４２７，９０８号明細書及び米国特許第５，５８０，７１７号明細書（Ｄｏｗｅｒ ｅｔ ａｌ）；米国特許第５，９６９，１０８号明細書及び米国特許第６，１７２，１９７号明細書（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ）；及び米国特許第５，８８５，７９３号明細書；米国特許第６，５２１，４０４号明細書；米国特許第６，５４４，７３１号明細書；米国特許第６，５５５，３１３号明細書；米国特許第６，５８２，９１５号明細書及び米国特許第６，５９３，０８１号明細書（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ）参照。

本開示において有益なヒトモノクローナル抗体又はその断片は、免疫化時にヒト抗体応答を生じさせることができるようにヒト免疫細胞が再構成されたＳＣＩＤマウスを使用して調製することもできる。このようなマウスは、例えば、米国特許第５，４７６，９９６号明細書及び米国特許第５，６９８，７６７号明細書（Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ）に記載されている。

下記に記載される、本発明に従って調製されるヒトモノクローナル抗体又はその断片は、ＶＨ、ＶＬ、ＣＨ１、ＣＬ、ＣＨ２、ＣＨ３ドメイン内のアミノ酸残基を変異導入して、それにより目的の受容体に対する抗体又はその断片の１つ以上の結合特性（例えば、親和性）を改善するようにさらに改変され得る（「親和性成熟」として知られるプロセス）。部位特異的突然変異誘発又はＰＣＲ媒介突然変異誘発を行って突然変異を導入し、受容体結合、又は他の目的の機能的特性に対する効果を、本明細書に記載され、実施例に提供するようにインビトロ又はインビボアッセイで評価することができる。したがって、一実施形態では、本開示は、親和性成熟抗体又はその断片、特に親和性成熟Ｆｃ領域に関する。突然変異は、アミノ酸置換、追加又は欠失であってもよい。例えば、本開示のＦｃ変異体は、親和性成熟Ｆｃ領域であり、ここでＣＨ２ドメイン及び／又はＣＨ３ドメイン内の１つ、２つ、３つ、４つ又は５つ以上の残基が改変されている。これらの置換の全ては、ＩｇＡ分子、例えばＩｇＡ１又はＩｇＡ２において、特にＩｇＡ２において行われ得る。好ましい実施形態では、アミノ酸置換は、ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及び／又はＣＨ３．１２４のＦｃ領域における位置で行われ得、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。これらのアミノ酸置換には（また置換、挿入及び欠失の任意の可能な組み合わせとして）：Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｑ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ及び／又はＬ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆが含まれるがこれらに限定されず、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。好ましい実施形態では、本発明の親和性成熟Ｆｃ変異体におけるアミノ酸置換又はそれらの組み合わせには：Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｌ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ／Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ／Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗが含まれ得るがこれらに限定されず、アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う。

核酸及び発現系
本発明はまた、本明細書に記載のＦｃ変異体のポリペプチド鎖をコードする核酸を包含する。本開示の核酸分子としては、一本鎖及び二本鎖形態の両方のＤＮＡ及びＲＮＡ、並びに対応する相補的配列が挙げられる。本開示の核酸分子としては、全長遺伝子又はｃＤＮＡ分子並びにそれらの断片の組み合わせが挙げられる。本開示の核酸はヒト資源に由来するが、非ヒト種に由来するものも含まれ得る。

「単離核酸」は、天然に生じる資源から単離された核酸の場合、核酸が単離された生物のゲノム中に存在する隣接遺伝子配列から分離された核酸である。例えば、鋳型から酵素的に、又は化学的に合成された核酸、例えば、ＰＣＲ産物、ｃＤＮＡ分子、又はオリゴヌクレオチドの場合、そのようなプロセスから生じる核酸が単離核酸であることが理解される。単離核酸分子は、個別の断片の形態の、又はより大きい核酸構築物の構成成分としての核酸分子を指す。１つの好ましい実施形態において、核酸は、汚染内因性材料を実質的に有さない。核酸分子は、好ましくは、実質的に純粋な形態で、且つ標準的生化学的方法（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９）に概説されるもの）によるその構成成分ヌクレオチド配列の同定、操作、及び回収を可能とする量又は濃度で少なくとも１回単離されたＤＮＡ又はＲＮＡに由来している。このような配列は、好ましくは、典型的には真核生物遺伝子中に存在する内部非翻訳配列、又はイントロンにより中断されないオープンリーディングフレームの形態で提供及び／又は構築される。非翻訳ＤＮＡの配列はオープンリーディングフレームから５’又は３’に存在し得、その場合、それはコード領域の操作も発現も妨害しない。

バリアント配列、例えばバリアント配列のライブラリは、本明細書に概説されるとおり、そのバリアントをコードするＤＮＡを産生するための、カセット若しくはＰＣＲ突然変異誘発又は当技術分野において公知の他の技術を使用する、ポリペプチドをコードするＤＮＡ中のヌクレオチドの部位特異的突然変異誘発、及びその後に細胞培養物中でその組換えＤＮＡを発現させることにより調製することができる。

「最適化ヌクレオチド配列」は、産生細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）において好ましいコドンを使用してアミノ酸配列をコードするようにヌクレオチド配列が変更されたことを意味する。最適化ヌクレオチド配列は、「親」配列としても公知の出発ヌクレオチド配列により最初にコードされるアミノ酸配列を完全に保持するように人工操作される。

本開示はまた、少なくとも１つの上記のポリヌクレオチドを含むプラスミド、発現ベクター、転写又は発現カセットの形態の発現系及び構築物を提供する。さらに、本開示は、そのような発現系又は構築物を含む宿主細胞を提供する。

一実施形態では、本発明は、本明細書に記載される変異体Ｆｃ領域を含む抗体又はその断片を調製する方法を提供し、この方法は：（ａ）変異体重鎖及び軽鎖ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞を培養する工程であって、培養される宿主細胞は、変異体ポリペプチドを発現する、工程と；（ｂ）宿主細胞培養物から抗体又はその断片を回収する工程とを含む。

本開示における使用の発現ベクターは、出発ベクター、例えば、市販のベクターから構築することができる。ベクターを構築し、人工操作免疫グロブリンのポリペプチド鎖をコードする核酸分子をベクターの適切な部位中に挿入した後、完成ベクターを増幅及び／又はポリペプチド発現のために好適な宿主細胞中に挿入することができる。選択宿主細胞中への発現ベクターの形質転換は、公知の方法、例として、形質移入、感染、リン酸カルシウム共沈、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポフェクション、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介形質移入、又は他の公知の技術により達成することができる。選択される方法は、部分的には、使用すべき宿主細胞のタイプに依存する。これらの方法及び他の好適な方法は当業者に知られており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，２００１、前掲に記載されている。

典型的には、宿主細胞中で使用される発現ベクターは、プラスミド維持のための並びに外因性ヌクレオチド配列のクローニング及び発現のための配列を含有する。このような配列は、まとめて「フランキング配列」と称され、ある実施形態において、典型的には、以下のヌクレオチド配列の１つ以上：プロモーター、１つ以上のエンハンサー配列、複製起点、転写終結配列、ドナー及びアクセプタースプライス部位を含有する完全イントロン配列、ポリペプチド分泌のためのリーダー配列をコードする配列、リボソーム結合部位、ポリアデニル化配列、発現させるべきポリペプチドをコードする核酸の挿入のためのポリリンカー領域、並びに選択マーカーエレメントが挙げられる。

宿主細胞は、適切な条件下で培養される場合、それを使用してＦｃ変異体を発現させることができ、続いてそれを培養培地から（宿主細胞がそれを培地中に分泌する場合）又はそれを産生する宿主細胞から直接（それが分泌されない場合）回収することができる。適切な宿主細胞の選択は、種々の因子、例えば、所望の発現レベル、活性に望ましい又は必要なポリペプチド改変（例えば、グリコシル化又はリン酸化）及び生物学的に活性な分子へのフォールディングの容易さに依存する。宿主細胞は、真核生物でも原核生物でもよい。

発現用宿主として利用可能な哺乳類細胞系は当技術分野において知られており、それとしては、限定されるものではないが、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から利用可能な不死化細胞系及び当技術分野において公知の発現系中で使用される任意の細胞系が挙げられ、それらを使用して本開示の人工操作免疫グロブリンを含むポリペプチドを作製することができる。一般に、宿主細胞は、所望の人工操作免疫グロブリンをコードするＤＮＡを含む組換え発現ベクターで形質転換される。用いることができる宿主細胞のうち、原核生物、酵母又は高等真核生物細胞が存在する。原核生物としては、グラム陰性又はグラム陽性生物、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又は細菌が挙げられる。高等真核生物細胞としては、昆虫細胞及び哺乳類起源の樹立細胞系が挙げられる。好適な哺乳類宿主細胞系の例としては、ＣＯＳ－７細胞、Ｌ細胞、Ｃｌ２７細胞、３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は無血清培地中で成長するそれらの誘導体及び関連細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞系、ＣＶＩＩＥＢＮＡ細胞系、ヒト胚腎細胞、例えば、２９３、２９３ＥＢＮＡ又はＭＳＲ２９３、ヒト上皮Ａ４３１細胞、ヒトＣｏｌｏ２０５細胞、他の形質転換霊長類細胞系、正常二倍体細胞、初代組織のインビトロ培養物に由来する細胞株、初代外植体、ＨＬ－６０、Ｕ９３７、ＨａＫ又はＪｕｒｋａｔ細胞が挙げられる。任意選択で、種々のシグナル伝達又はレポーターアッセイにおいてポリペプチドを使用することが望ましい場合、哺乳類細胞系、例えば、ＨｅｐＧ２／３Ｂ、ＫＢ、ＮＩＨ３Ｔ３又はＳ４９などをポリペプチドの発現に使用することができる。或いは、下等真核生物、例えば、酵母中で又は原核生物、例えば、細菌中でポリペプチドを産生することが可能である。好適な酵母としては、出芽酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、***酵母（Ｓ．ｐｏｍｂｅ）、クリベロマイセス属（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ）株、カンジダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）、又は異種ポリペプチドを発現し得る任意の酵母株が挙げられる。好適な細菌株としては、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、ネズミチフス菌（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、又は異種ポリペプチドを発現し得る任意の細菌株が挙げられる。人工操作免疫グロブリンを酵母又は細菌中で作製する場合、その中で産生された産物を、例えば、適切な部位のリン酸化又はグリコシル化により改変して機能的産物を得ることが望ましいことがある。このような共有結合は、公知の化学又は酵素法を使用して達成することができる。

さらなる実施形態では、本発明のＦｃ変異体は、タンパク質分解部位を除去する改変を含む。これらは、例えば、生成物収率を低下させるプロテアーゼ部位、及び投与したタンパク質をインビボで分解するプロテアーゼ部位を含み得る。

好ましい実施形態では、Ｆｃ変異体は、発現後に精製又は単離される。タンパク質は、当技術分野で公知の多様な方法で単離又は精製され得る。標準的な精製方法は、大気圧又はＦＰＬＣ及びＨＰＬＣなどのシステムを使用して高圧で行われる、イオン交換、疎水性相互作用、親和性、サイジング又はゲル濾過、及び逆相を含むクロマトグラフィー技術を含む。精製方法は、電気泳動、免疫学的、沈殿、透析、及び等電点電気泳動技術も含む。タンパク質濃度と併せた限外濾過及び透析濾過技術も有用である。当技術分野で公知のように、多様な天然タンパク質がＦｃ及び抗体に結合し、これらのタンパク質は、Ｆｃ変異体の精製のために本発明において利用され得る。例えば、細菌タンパク質Ａ及びＧは、Ｆｃ領域に結合する。同様に、細菌タンパク質Ｌは、もちろん抗体の標的抗原と同様に、いくつかの抗体のＦａｂ領域に結合する。精製は、多くの場合、特定の融合パートナーによって可能になり得る。例えば、Ｆｃ変異体は、ＧＳＴ融合物が使用される場合、グルタチオン樹脂、Ｈｉｓタグが使用される場合、Ｎｉ^＋２親和性クロマトグラフィー、又はフラグタグが使用される場合、固定化抗フラグ抗体を使用して精製され得る。適切な精製技術における一般的なガイダンスについては、例えば、全体が参照により組み込まれるＰｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄ Ｅｄ．，Ｓｃｏｐｅｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９９４（参照により本明細書に組み込まれる）を参照されたい。

医薬組成物及び投与
本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物が本明細書に提供される。Ｆｃ変異体は、抗体形式で、例えば単一特異性、二重特異性又は多重特異性抗体として、１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて組み込まれ得る。

本開示のＦｃ変異体を含む医薬又は無菌組成物を調製するため、分子を薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と混合する。「薬学的に許容可能な」という語句は、連邦若しくは州政府の規制機関により承認されていること、又は動物、より特定すると、ヒトにおける使用について米国薬局方若しくは他の一般に認識される薬局方に列記されていることを意味する。「医薬組成物」という用語は、少なくとも１つの活性成分（例えば、本開示のＦｃ変異体）及び少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤、希釈剤又は担体の混合物を指す。「医薬品」は、医学的処置に使用される物質を指す。

治療及び診断剤の医薬組成物は、例えば、凍結乾燥粉末、スラリー、水溶液、ローション、又は懸濁液の形態で生理学的に許容可能な担体、賦形剤、又は安定剤と混合することにより調製することができる（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｏｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ＆ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．参照）。

治療薬のための投与レジメンの選択は、いくつかの因子、例として、実体の血清又は組織ターンオーバー速度、症状のレベル、実体の免疫原性、及び生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性に依存する。ある実施形態において、投与レジメンは、許容レベルの副作用と整合させて患者に送達される治療薬の量を最大化する。したがって、送達される生物薬の量は、部分的には、特定の実体及び処置されている病態の重症度に依存する。抗体、サイトカイン、及び小分子の適切な用量の選択指針が利用可能である（例えば、Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（ｅｄ．）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｂａｃｈ（ｅｄ．）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｂａｅｒｔ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ，ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈ，ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２参照）。

適切な用量の決定は、例えば、当技術分野において処置に影響を与えることが公知の若しくは疑われ、又は処置に影響を与えることが予測されるパラメータ又は因子を使用して臨床医により行われる。一般に、用量は、最適用量よりもいくらか少ない量で開始し、その後に任意の負の副作用に対して所望又は最適効果が達成されるまでそれを少しずつ増加させる。重要な診断尺度としては、例えば、炎症の症状のもの又は産生される炎症性サイトカインのレベルが挙げられる。

本開示の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、患者への毒性なしで特定の患者、組成物、及び投与方式について所望の治療応答を達成するために有効な活性成分の量を得るように変えることができる。選択投与量レベルは、種々の薬物動態因子、例として、用いられる本開示の特定の組成物、又はそのエステル、塩若しくはアミドの活性、投与経路、投与時間、用いられている特定の化合物の***速度、処置の持続期間、用いられる特定の化合物との組み合わせで使用される他の薬物、化合物及び／又は材料、処置されている患者の年齢、性別、体重、病態、全身健康状態及び既往歴、並びに医学分野において公知の同様の因子に依存する。

本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物は、連続注入により、又は例えば、１日、１週間、若しくは週１～７回の間隔の用量により提供することができる。用量は、静脈内に、皮下的に、局所的に、経口的に、経鼻的に、直腸的に、筋肉内で、脳内で、又は吸入により提供することができる。

本開示のＦｃ変異体を含む治療薬の望ましい用量は、モル／ｋｇ体重基準で抗体又はポリペプチドとほぼ同じである。対象に投与される用量は、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２以上になり得る。

本開示のＦｃ変異体を含む治療薬のため、患者に投与される投与量は、約０．０００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ患者体重であり得る。

一連の用量を投与する場合、例えば、それらをほぼ毎日、ほぼ毎週、ほぼ毎月投与することができる。用量は、例えば、疾患進行、有害事象、又は医師により決定される他の時間まで投与し続けることができる。

特定の患者についての有効量は、因子、例えば、処置されている病態、患者の全身健康状態、投与の方法、経路及び用量並びに副作用の重症度に応じて変動し得る（例えば、Ｍａｙｎａｒｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＳＯＰｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ参照）。

必要な場合、本開示のＦｃ変異体を含む治療薬は、可溶化剤及び注射部位における疼痛を軽減するための局所麻酔薬、例えば、リドカインを含む組成物中に取り込むことができる。さらに、例えば、吸入器又はネブライザー、及びエアロゾル化剤を有する配合物の使用により経肺投与を用いることもできる。例えば、米国特許第６，０１９，９６８号明細書、米国特許第５，９８５，３２０号明細書、米国特許第５，９８５，３０９号明細書、米国特許第５，９３４，２７２号明細書、米国特許第５，８７４，０６４号明細書、米国特許第５，８５５，９１３号明細書、米国特許第５，２９０，５４０号明細書、及び米国特許第４，８８０，０７８号明細書；並びに国際公開第９２／１９２４４号パンフレット、国際公開第９７／３２５７２号パンフレット、国際公開第９７／４４０１３号パンフレット、国際公開第９８／３１３４６号パンフレット、及び国際公開第９９／６６９０３号パンフレット参照、それらのそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる。

本開示のＦｃ変異体を含む治療薬は、当技術分野において公知の種々の方法の１つ以上を使用して１つ以上の投与経路を介して投与することもできる。当業者により認識されるとおり、投与経路及び方式は、所望の結果に応じて変動する。抗体の選択投与経路としては、静脈内、筋肉内、皮内、腹腔内、皮下、脊髄又は他の非経口投与経路、例えば、注射又は注入によるものが挙げられる。非経口投与は、通常、注射による腸及び局所投与以外の投与方式を表し得、それとしては、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外及び胸骨内注射及び注入が挙げられる。或いは、本開示の組成物は、非経口経路、例えば、局所、表皮又は粘膜投与経路を介して、例えば、鼻腔内で、経口的に、経膣的に、直腸的に、舌下的に又は局所的に投与することができる。

本開示のＦｃ変異体を含む治療薬は、例えば、注射デバイス、注射ペン、バイアル及びシリンジ、プレフィルドシリンジ、自動注射器、注入ポンプ、パッチポンプ、注入バッグ及び針などを使用して上記経路のいずれかを介して投与することができる。本開示のＦｃ変異体を含む治療物を制御放出又は徐放系中で投与する場合、ポンプを使用して制御放出又は徐放を達成することができる（Ｌａｎｇｅｒ、前掲；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８７，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０；Ｂｕｃｈｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４参照）。ポリマー材料を使用して本開示の治療薬の制御放出又は徐放を達成することができる（例えば、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，Ｌａｎｇｅｒ ａｎｄ Ｗｉｓｅ（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎ ＆ Ｂａｌｌ（ｅｄｓ．），Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４）；Ｒａｎｇｅｒ ＆ Ｐｅｐｐａｓ（１９８３）Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１参照；Ｌｅｖｙ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．，７（１）：１０５；米国特許第５，６７９，３７７号明細書；米国特許第５，９１６，５９７号明細書；米国特許第５，９１２，０１５号明細書；米国特許第５，９８９，４６３号明細書；米国特許第５，１２８，３２６号明細書；国際公開第９９／１５１５４号パンフレット；並びに国際公開第９９／２０２５３号パンフレットも参照。徐放配合物中で使用されるポリマーの例としては、限定されるものではないが、ポリ（２－ヒドロキシエチルメタクリレート）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（アクリル酸）、ポリ（エチレン－ｃｏ－酢酸ビニル）、ポリ（メタクリル酸）、ポリグリコリド（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（Ｎ－ビニルピロリドン）、ポリ（ビニルアルコール）、ポリアクリルアミド、ポリ（エチレングリコール）、ポリラクチド（ＰＬＡ）、ポリ（ラクチド－ｃｏ－グリコリド）（ＰＬＧＡ）、及びポリオルトエステルが挙げられる。一実施形態において、徐放配合物中で使用されるポリマーは、不活性で、浸出不純物を有さず、貯蔵安定的で、無菌で、生分解性である。制御放出又は徐放系は、予防又は治療標的に近接して配置することができ、したがって、全身用量のほんの一部が要求されるにすぎない（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、前掲、ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５－１３８（１９８４）参照）。

制御放出系は、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９０）２４９：１５２７－１５３３）による概説において考察されている。当業者に公知の任意の技術を使用して本出願の１つ以上のＦｃ変異体を含む徐放配合物を産生することができる。例えば、米国特許第４，５２６，９３８号明細書、国際公開第９１／０５５４８号パンフレット、国際公開第９６／２０６９８号パンフレット、Ｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｒａｄｉｏｔｈｅｒａｐｙ ＆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ３９：１７９－１８９；Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）ＰＤＡ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ＆ Ｔｅｃｈ．，５０：３７２－３９７；Ｃｌｅｅｋ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｐｒｏ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．２４：８５３－８５４；Ｌａｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｐｒｏｃ．Ｉｎｔ’ｌ．Ｓｙｍｐ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌ．Ｂｉｏａｃｔ．Ｍａｔｅｒ．，２４：７５９－７６０参照、それらのそれぞれは参照により全体として本明細書に組み込まれる。

本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物を局所投与する場合、それは軟膏剤、クリーム剤、経皮パッチ剤、ローション剤、ゲル剤、シャンプー剤、噴霧剤、エアロゾル剤、液剤、乳濁液剤の形態、又は当業者に公知の他の形態で配合することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ，１９ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．（１９９５）参照。非噴霧局所剤形のため、局所適用と適合性の担体又は１つ以上の賦形剤を含み、一部の例において、水よりも大きい動的粘度を有する粘性から半固体又は固体形態が典型的には用いられる。好適な配合物としては、限定されるものではないが、液剤、懸濁液剤、乳濁液剤、クリーム剤、軟膏剤、散剤、リニメント剤、膏薬などが挙げられ、それらは、所望により、滅菌され、又は種々の特性、例えば、浸透圧などに影響を与えるために補助剤（例えば、保存剤、安定剤、湿潤剤、緩衝剤、又は塩）と混合される。他の好適な局所剤形としては、活性成分が一部の例において固体又は液体不活性担体との組み合わせで加圧揮発物質（例えば、気体噴射剤、例えば、Ｆｒｅｏｎ）との混合物中で、又はスクイーズボトル中でパッケージされている噴霧エアロゾル製剤が挙げられる。所望により、保湿剤又は加湿剤を医薬組成物及び剤形に添加することもできる。このような追加の成分の例は、当技術分野において公知である。

本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物を鼻腔内投与する場合、それをエアロゾル形態、スプレー、ミストで、又は液滴の形態で配合することができる。特に、本開示による使用のための予防又は治療剤は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体）を使用する加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー提供物の形態で簡便に送達することができる。加圧エアロゾルの場合、投与量単位は、計量された量を送達するための弁を提供することにより決定することができる。化合物及び好適な粉末基剤、例えば、ラクトース又はデンプンの粉末混合物を含有する、吸入器又は散布器における使用のためのカプセル及びカートリッジ（例えば、ゼラチンから構成される）を配合することができる。

本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物は、患者に定期的に投与することもできる。

ある実施形態において、本開示のＦｃ変異体を含む医薬組成物は、適切なインビボ分布を確保するように配合することができる。例えば、血液脳関門（ＢＢＢ）は、多くの高度に親水性の化合物を排除する。本開示の治療化合物がＢＢＢを通過することを確保するため（所望により）、それらを、例えばリポソーム中で配合することができる。リポソームの製造方法については、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書；米国特許第５，３７４，５４８号明細書；及び米国特許第５，３９９，３３１号明細書参照。リポソームは規定の細胞又は器官中に選択的に輸送され、したがって標的化薬物送達を向上させる１つ以上の部分を含み得る（例えば、Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５参照）。例示的な標的化部分としては、葉酸塩又はビオチン（例えば、米国特許第５，４１６，０１６号明細書、Ｌｏｗ ｅｔ ａｌ参照）；マンノシド（Ｕｍｅｚａｗａ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８）；抗体（Ｂｌｏｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，３５７：１４０；Ｏｗａｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，３９：１８０）；サーファクタントプロテインＡ受容体（Ｂｒｉｓｃｏｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４）；ｐ１２０（Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ（１９９４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０）が挙げられ；Ｋｅｉｎａｅｎｅｎ ＆ Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，３４６：１２３－６；Ｋｉｌｌｉｏｎ ＆ Ｆｉｄｌｅｒ（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ，４：２７３も参照。

本出願はまた、本開示のＦｃ変異体を他の治療法又は治療剤との組み合わせで含む医薬組成物を使用する患者の同時投与又は処置のためのプロトコルを提供する。追加の治療剤、例えば、サイトカイン、ステロイド、化学療法剤、抗生物質、又は放射線を用いる同時投与又は処置の方法は、当技術分野において公知である（例えば、Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，（ｅｄｓ．）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．；Ｐｏｏｌｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．；Ｃｈａｂｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ（ｅｄｓ．）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ．，Ｐａ．参照）。有効量の治療薬は、症状を少なくとも１０％だけ、少なくとも２０％だけ、少なくとも約３０％だけ、少なくとも４０％、又は少なくとも５０％だけ減少させ得る。

一部の実施形態において、本開示の医薬組成物は、１つ以上の追加の治療剤をさらに含む。

上記の治療レジメンに加え、患者を手術及び他の理学療法の形態に供することができる。

治療用途
本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物は、限定されるものではないが、本明細書において「細胞増殖障害又は病態」と称される細胞の異常増殖が存在する障害又は病態の処置、予防、又は改善に有用である。一態様において、本開示は、細胞増殖障害又は病態を処置する方法を提供する。一態様において、処置の対象はヒトである。

本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物を使用して処置し、予防し、又は改善することができる細胞増殖障害又は病態の例としては、限定されるものではないが、癌が挙げられる。本明細書において使用されるとき、「癌」という用語は、組織病理学的タイプも侵襲のステージも関係なく、全てのタイプの癌性成長若しくは発癌プロセス、転移性組織又は悪性形質転換細胞、組織、若しくは器官が含まれることを意味する。

具体的な実施形態において、本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物の、本明細書に記載の方法による対象への投与は、１、２、又は３つ以上の結果を達成する：（１）腫瘍又は新生物の成長の低減；（２）腫瘍の形成の低減；（３）原発性、局所性及び／又は転移性癌の根絶、除去、又は制御；（４）転移の拡がりの低減；（５）死亡率の低減；（６）生存率の増加；（７）生存期間の増加；（８）寛解期の患者数の増加；（９）入院率の減少；（１０）入院期間の減少；並びに（１１）腫瘍のサイズが１０％超だけ、又は８％超だけ、又は６％超だけ、又は４％超だけ増加しないような維持；好ましくは、腫瘍のサイズは２％超だけ増加しない。

具体的な実施形態において、本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物の、本明細書に記載の方法による癌を有する対象（一部の実施形態において、癌の動物モデル）への投与は、当技術分野において知られているアッセイを使用して測定して陰性対照を投与された癌を有する対象（一部の実施形態において、同じ癌の動物モデル）における腫瘍の成長に対して腫瘍の成長を少なくとも約２倍、好ましくは、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約７倍、又は少なくとも約１０倍だけ阻害し、又は低減させる。別の実施形態において、本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物の、本明細書に記載の方法による癌を有する対象（一部の実施形態において、癌の動物モデル）への投与は、当技術分野において知られているアッセイを使用して測定して陰性対照を投与された癌を有する対象（一部の実施形態において、同じ癌の動物モデル）における腫瘍の成長に対して腫瘍の成長を少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約９５％だけ阻害し、又は低減させる。

癌性障害の例としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液癌、軟部組織腫瘍、及び転移性病変が挙げられる。固形腫瘍の例としては、肝臓、肺、***、リンパ系、胃腸（例えば、結腸）、泌尿生殖器（例えば、腎臓、尿路上皮細胞）、前立腺及び咽頭に影響を及ぼすものなどの様々な器官系の悪性腫瘍、例えば、肉腫、及び癌腫（腺癌及び扁平上皮癌を含む）が挙げられる。腺癌には、大部分の結腸癌、直腸癌、腎細胞癌、肝臓癌、肺の非小細胞癌、小腸の癌及び食道の癌などの悪性腫瘍が含まれる。扁平上皮癌には、例えば、肺、食道、皮膚、頭頸部領域、口腔、肛門、及び子宮頸部における悪性腫瘍が含まれる。一実施形態において、癌は黒色腫、例えば、進行期黒色腫である。前述の癌の転移性病変も、本開示の方法及び組成物を使用して治療又は予防することができる。

本開示のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物を使用して増殖を阻害することができる例示的な癌には、典型的には免疫療法に応答する癌が含まれる。治療のための好ましい癌の非限定的な例としては、黒色腫（例えば、転移性悪性黒色腫）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、前立腺癌（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌）、乳癌、結腸癌及び肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、上皮癌が挙げられる。さらに、難治性又は再発性の悪性腫瘍は、本明細書に記載の組み合わせ療法を用いて治療することができる。

治療することができる他の癌の例としては、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部又は頸部の癌、皮膚又は眼内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門癌、胃食道癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管の癌、子宮内膜の癌、子宮頸部の癌、膣の癌、外陰部の癌、メルケル細胞癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の癌、尿道の癌、陰茎の癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、腎臓又は尿管の癌、腎盂の癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、神経芽細胞腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘導されるものを含む環境的に誘導される癌（例えば、中皮腫）、及び前記癌の組み合わせが挙げられる。

具体的な実施形態において、癌は、乳癌、神経芽細胞腫、リンパ腫、結腸癌、膵管腺癌、黒色腫、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫である。

組み合わせ療法
追加の治療剤に関して「組み合わせで」投与される、は、２つ（以上）の異なる処置物が対象に障害による対象の苦痛の過程の間に送達されることを意味する。一部の実施形態において、１つの処置物の送達は第２の処置物の送達が開始する時に依然として生じており、その結果、投与に関して重複が存在する。これは、「同時」又は「同時送達」と称される。他の実施形態において、１つの処置物の送達が終了してから他の処置物の送達が開始する。これは、「連続送達」と称される。いずれかの場合の一部の実施形態において、処置は、組み合わせ投与のためにより有効である。本開示の組み合わせ療法の追加の治療剤は、定期的に投与することもできる。組み合わせサイクリング療法は、一定期間の第１の治療物の投与とそれに続く一定期間の第２の治療物の投与並びにこの連続投与の反復を伴う。

本明細書に記載の人工操作免疫グロブリンを含む治療又は医薬組成物は、１つ以上の他の治療法、例えば、抗癌剤、サイトカイン又は抗ホルモン剤と一緒に投与して癌を処置及び／又は管理することができる。本明細書に記載の人工操作免疫グロブリンを含む治療又は医薬組成物との組み合わせで使用することができる他の治療法としては、限定されるものではないが、小分子、合成薬物、ペプチド（環状ペプチドを含む）、ポリペプチド、タンパク質、核酸（例えば、ＤＮＡ及びＲＮＡヌクレオチド、例として、限定されるものではないが、アンチセンスヌクレオチド配列、三重ヘリックス、ＲＮＡｉ、及び生物学的に活性なタンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするヌクレオチド配列）、抗体、合成又は天然無機分子、模倣剤、及び合成又は天然有機分子が挙げられる。

本明細書に記載の人工操作免疫グロブリンを含む治療又は医薬組成物に加えて使用することができる１つ以上の他の治療法の非限定的な例としては、限定されるものではないが、化学療法、放射線療法、細胞毒性剤、化学療法剤、サイトカイン、キナーゼ阻害剤、低用量ゲムシタビン、５－フルオロウラシル及びサイトカインモジュレーターが挙げられる。特に、本開示の人工操作免疫グロブリンを含む治療又は医薬組成物に加えて使用することができる１つ以上の他の治療法としては、特に、腫瘍微小環境を摂動させる免疫腫瘍学的アプローチ、例えば、組換えＩＬ－２、組換えＩＬ－１５、組換えＩＬ－１２、組換えＩＬ－２１、抗ＩＬ１β、抗ＴＧＦβ、抗ＣＤ３９、抗ＣＤ７３、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ（Ｌ）１、抗ＴＩＭ３、ＨＤＡＣ阻害剤、ＨＩＦ１ａ阻害剤及び抗血管新生薬、例えば、抗ＶＥＧＦが挙げられる。

キット
本開示はまた、細胞増殖障害を有する患者を処置するためのキットを包含する。このようなキットは、本明細書に記載のＦｃ変異体を含む治療有効量の治療又は医薬組成物を含む。さらに、このようなキットは、本明細書に記載のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物を投与するための手段（例えば、自動注射器、シリンジ及びバイアル、プレフィルドシリンジ、プレフィルドペン）及び使用指示書を含み得る。これらのキットは、細胞増殖障害を治療するための追加の治療剤（下記）を含有し得る。このようなキットは、患者を処置するための、本明細書に記載のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物の投与指示書も含み得る。このような指示書は、本明細書に記載のＦｃ変異体を含む治療又は医薬組成物についての使用のための用量、投与経路、レジメン、及び総処置継続期間を提供し得る。

「投与するための手段」という語句は、薬物を患者に全身投与するための任意の利用可能な手法、例として、限定されるものではないが、プレフィルドシリンジ、バイアル及びシリンジ、注射ペン、自動注射器、ＩＶ点滴及びバッグ、注入ポンプ、パッチ、注入バッグ及び針などを示すために使用される。このような道具を用いて、患者は薬物を自己投与する（すなわち、医師の補助なしで薬物を投与する）ことができ、又は医療従事者が薬物を投与することができる。

以下の実施例は本開示をさらに説明するために提供するが、その範囲を限定するものではない。本開示の他のバリアントは当業者に容易に明らかであり、添付の特許請求の範囲により包含される。

実施例１に従って生成されたアミノ酸配列に由来する全ての構築物を哺乳類系中で発現させ、精製し（実施例４）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用してヒトＦｃαＲＩ及びラットＦｃαＲへの結合について査定した（実施例３）。最後に、人工操作免疫グロブリンの機能性は、ヒト新鮮単離ＰＭＮを使用する細胞ベースアッセイにより査定した（実施例４）。全ての実施例は、抗原ＨＥＲ２を認識するＶＨ及びＶＬドメインと、ＩｇＡ２をベースとする人工操作ヒンジ及びＦｃ領域とを含む抗体フォーマットのＦｃ変異体を使用して実施した。配列番号１は、ＨＥＲ２に結合するＶＨドメインと、ＩｇＧ１からのヒンジ及び定常ドメインとを有する抗ＨＥＲ２結合抗体の全長重鎖配列である。配列番号２は、ＨＥＲ２に結合するＶＨドメインと、ＩｇＡ２のｍ２アロタイプからのヒンジ及び定常ドメインとを有する抗ＨＥＲ２結合抗体の全長重鎖配列である（Ｌｏｍｂａｎａ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）ＭＡＢＳ，１１：１１２２－３８）。配列番号４は、ＨＥＲ２に結合するＶＬドメインとＩｇＡ２からの定常ドメイン（ＣＬ）とを有する抗ＨＥＲ２結合抗体の軽鎖配列である。

実施例１：ｈＦｃαＲＩのためのＩｇＡ２ Ｆｃ親和性成熟
１．１ ＩｇＡ２ Ｆｃライブラリー設計
ＩｇＡ１ Ｆｃ／ｈＦｃαＲＩ複合体に対して結晶構造ＰＤＢ １ＯＷ０を使用してインシリコ分析を実施した。それというのも、ＩｇＡ１はヒンジ領域のみ異なるＩｇＡ２と類似の構造を有するためである。ｈＦｃαＲＩに近接して位置する全ての残基はＩｇＡ１ Ｆｃ／ｈＦｃαＲＩ相互作用に潜在的に関与するとみなし、２つのカテゴリーに分類した：（ｉ）「コア」界面領域からの残基（ＬＣＨ２．１５、ＬＣＨ２．１５．１、ＭＣＨ３．１０５、ＥＣＨ３．１０９、ＰＣＨ３．１１３、ＬＣＨ３．１１４、ＡＣＨ３．１１５、ＦＣＨ３．１１６、ＱＣＨ３．１１８、ここで、残基はＣ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従って番号付けされる）及び（ｉｉ）コアを包囲する「シェル」領域からの残基（ＱＣＨ２．９４、ＮＣＨ２．９７、ＨＣＨ２．９８、ＲＣＨ３．１、ＥＣＨ３．３、ＲＣＨ３．４０、ＬＣＨ３．４２、ＳＣＨ３．４５、ＥＣＨ３．４５．２、ここで、残基はＣ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従って番号付けされる）。トリヌクレオチド特異的突然変異誘発（ＴＲＩＭ）ベースアプローチ（Ｖｉｒｎｅｋａｅｓ ｅｔ ａｌ，（１９９４）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２２：５６００－５６０７；Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，２９６：５７－８６）を使用して残基の両方のグループを多様化させて「シェル」領域及び「コア」領域にそれぞれ対応する２つのライブラリーＬ１及びＬ２を生成した。

ＩｇＡ２ ＦｃドメインのエラープローンＰＣＲを使用して第３のライブラリー（ＥＰライブラリー）を生成した（Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８９：３５７６－３５８０）。

１．２ 酵母ディスプレイによるライブラリースクリーニング
酵母ディスプレイ技術（Ｂｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔ．，１５：５５３－５５７）を使用して３つ全てのＩｇＡ２ Ｆｃライブラリーをスクリーニングした。簡潔に述べると、ＩｇＡ Ｆｃを酵母細胞膜上でα－アグルチニン（Ａｇａ１／Ａｇａ２）タンパク質ヘテロ二量体を介して、ＩｇＡ２ ＦｃをＡｇａ２タンパク質のＮ末端に融合させてディスプレイした。４回のソーティングラウンドを実施した：

（ｉ）第１のソーティングラウンドの間、３つ全てのライブラリーを、１％のラフィノース及び２％のガラクトースを含有する選択培地中で振盪させながら２０℃において２日間成長させて酵母細胞表面上でＩｇＡ２ Ｆｃ発現を誘導した。それぞれの培養物をペレット化し、上清を除去し、ペレットを、１％のＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）及び２ｍＭのＥＤＴＡを有するＰＢＳＭ（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）で１回洗浄した。２０ｍｌのＰＢＳＭ中でのペレットの再懸濁後、１００μｌのそれぞれのストレプトアビジン及び抗ビオチンマイクロビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を添加した。細胞を回転させながら室温において１時間インキュベートした。次いで、ＭＡＣＳ ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用してビーズを除去した。次いで、ライブラリーをペレット化し、２０ｍｌのＰＢＳＭ＋５０ｎＭのビオチン化ＦｃαＲＩ（ＣＤ８９）（配列番号５）中で再懸濁させ、回転させながら室温において１時間インキュベートした。次いで、細胞をペレット化し、上清を除去し、ＰＢＳＭ中で１回洗浄し、次いで２０ｍｌのＰＢＳＭ＋１００μｌのストレプトアビジンマイクロスフェア（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）中で再懸濁させた。ライブラリーを時折振盪させながら氷上で５分間インキュベートし、次いで細胞をペレット化し、上清を除去し、２０ｍｌのＰＢＳＭ中で再懸濁させ、次いでＭＡＣＳ ＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）上で分離した。カラムを５ｍｌのＰＢＳＭで１回洗浄し、次いで結合細胞を選択培地で溶出させ、選択培地中で最終１０ｍｌにし、振盪させながら３０℃において一晩成長させた。

（ｉｉ）第２のソーティングラウンドのため、３つのライブラリーのそれぞれからの第１のラウンドアウトプットを、１％のラフィノース及び２％のガラクトースを含有する選択培地中で２０℃において２４時間成長させてＩｇＡ発現を誘導した。ライブラリーをペレット化し、ＰＢＳＦ（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）＋０．１％のウシ血清アルブミン）中で１回洗浄し、ＰＢＳＦ中で再懸濁させた。それぞれのライブラリーを２つのサンプルに分け；第１のサンプルをＰＢＳＦ中２５ｎＭのビオチン化ＦｃαＲＩにし、第２のサンプルをＰＢＳＦ中１０ｎＭのビオチン化ＦｃαＲＩにした。それぞれに、ウサギ抗ｍｙｃ－タグＤｙｌｉｇｈｔ ４８８（Ｒｏｃｋｌａｎｄ，Ｌｉｍｅｒｉｃｋ，ＰＡ）を１：１００の最終希釈率において添加し、サンプルを回転させながら室温において１．５時間インキュベートした。サンプルをペレット化し、ＰＢＳＦで１回洗浄し、次いで回転させながらＰＢＳＦ＋１：１００最終ストレプトアビジンＤｙｌｉｇｈｔ ６３３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）と５分間インキュベートした。次いでサンプルをペレット化し、１回洗浄し、ＰＢＳＦ中で再懸濁させ、４０μｍストレーナーに通して濾過し、次いでＦＡＣＳ Ａｒｉａセルソーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）上でのフローサイトメトリーを使用して分析し、ソートした。Ｌ１及びＬ２ライブラリーについては１０ｎＭのＦｃαＲＩサンプルをソートし、ＥＰライブラリーについては２５ｎＭのＦｃαＲＩサンプルをソートした。それぞれの場合において、シグナルの上位１～２％を示す酵母をゲートにかけ、回収し、選択培地中で３０℃において一晩成長させた。

（ｉｉｉ）第３のソーティングラウンドのため、第２のソーティングラウンドからの培養物を選択培地＋１％のラフィノース＋２％のガラクトース中に接種し、２０°において一晩成長させてＩｇＡ発現を誘導した。第２のラウンドで行ったとおり３つのライブラリーのそれぞれからの細胞を調製し、ソートし、但し検出試薬としてニワトリ抗ｍｙｃタグＦＩＴＣ（Ｇｅｎｅｔｅｘ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）及びＮｅｕｔｒａｖｉｄｉｎ Ｄｙｌｉｇｈｔ ６３３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。ビオチン化ＦｃαＲＩをＥＰライブラリーについて５ｎＭにおいて、Ｌ１ライブラリーについて２ｎＭにおいて、Ｌ２ライブラリーについて１ｎＭにおいて使用した。それぞれの場合において、シグナルの上位１～２％を示す酵母をゲートにかけ、回収し、選択培地中で３０℃において一晩成長させた。

（ｉｖ）第４のソーティングラウンドをＥＰ及びＬ１ライブラリーのみに対して完了させた。第３のソーティングラウンドからの培養物を選択培地＋１％のラフィノース及び２％のガラクトース中に接種し、２０°において一晩成長させてＩｇＡ発現を誘導した。第２のラウンドで行ったとおりライブラリーのそれぞれからの細胞を調製し、ソートし、但し検出試薬としてマウス抗ｃ ｍｙｃ Ｄｙｌｉｇｈｔ ４８８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びストレプトアビジンｃｙ５（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用した。ビオチン化ＦｃαＲＩをＥＰライブラリーについて２ｎＭにおいて、Ｌ１ライブラリーについて１ｎＭにおいて使用した。それぞれの場合において、シグナルの上位１～２％を示す酵母をゲートにかけ、回収し、選択培地中で３０℃において一晩成長させた。

１．３ ホットスポット同定、全長免疫グロブリンにおける翻訳及びｈＦｃαＲＩに対するＳＰＲ検証
第３（Ｌ２ライブラリー）及び第４（ＥＰ及びＬ１ライブラリー）ラウンド培養物からプラスミドを精製し、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中で形質転換し、選択寒天プレート上にプレーティングし、３７°において一晩成長させ、Ｓａｎｇｅｒシーケンシング（Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７５）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．，９４（３）：４４１－８；Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ（１９７７）ＰＮＡＳ ＵＳＡ．，７４（１２）：５４６３－７）のためにＧｅｎｅｗｉｚ（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ，ＮＪ）に送付した。上位クローンをそれらの出現頻度に基づき選択し、それらを使用してＩｇＡ２／ｈＦｃαＲＩ相互作用を向上させる突然変異を同定した。ＩｇＡ２残基位置を表１に提示する。

同定された突然変異は、配列番号２を有する全長ＩｇＡ２免疫グロブリン中に単一点突然変異として又は組み合わせで取り込み、ＨＥＫ２９３細胞中で一過的に発現させた（実施例２に記載のとおり）。同じ突然変異を、配列番号３及び６を有し、ｈＦｃαＲＩに結合し得る人工操作ＩｇＧ１ Ｆｃを含有するＩｇＧ１アイソタイプ免疫グロブリン中にも取り込んだ。試験突然変異セットを表２（配列番号２をベースとする）、表４（配列番号３をベースとする）、及び表６（配列番号６をベースとする）に提示する。

Ｆｃ変異体を精製し、ｈＦｃαＲＩに対して測定される表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して査定してｈＦｃαＲＩに対する免疫グロブリン親和性に対する規定の突然変異の効果を評価した。興味深いことに、全ての突然変異は、それぞれの免疫グロブリンの発現収量及び凝集傾向に対して限定された効果を有し、又は実際の効果を有さなかった。ＳＰＲデータ及び捕捉後の凝集物含有率を表３、表５及び表７に示す。

最後に、リード候補物をＳＰＲ及び凝集データに基づき選択し、より広範囲のｈＦｃαＲＩ濃度を使用してＳＰＲ実験を繰り返した。適合濃度範囲の使用は、人工操作免疫グロブリンとｈＦｃαＲＩとの間の相互作用のより正確な測定を可能とした。結果を表８、表９及び表１０に示す。

１．４ インビトロアッセイにおけるアルファエフェクター機能の向上への親和性成熟の変換
ホモ二量体Ｆｃ（配列番号３２、３７及び４２）を有するリード候補物を、ｈＦｃαＲＩに対するそれらの改善された結合能について選択した。次にこれらを実施例４に記載の手順に従ってＰＭＮ殺傷アッセイにおいて試験した。効力（ＥＣ_５０；免疫グロブリンの最大効果の５０％を産生するために要求される免疫グロブリンの濃度）及び有効性（Ｅｍａｘ；免疫グロブリンに予測される最大効果）の結果を図１～図４に示す。

全ての試験候補物は活性であり、ＳＫ－ＢＲ－３ ＰＭＮ殺傷アッセイにおいて親ＩｇＡ２と比較して改善された有効性を有することが示された（図１）。

さらに、ＨＥＲ２受容体密度がＳＫ－ＢＲ－３細胞よりも低いことが公知であるＣａｌｕ－３細胞を使用するＰＭＮ殺傷アッセイにおいて最大２倍の有効性のかなりの改善が示された（図２）（実施例４に記載）。さらに、同様により低レベルのＨＥＲ２受容体を発現することが公知であるＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞に対するＰＭＮ殺傷アッセイにおいて配列番号４２を有するバリアントについて効力のかなりの改善が示された（図３）。この効力の改善は約７倍だった。

最後に、配列番号４２を有する親和性成熟バリアントを、最小ＨＥＲ２発現細胞系として公知であるＭＤＡ－ＭＢ－１７５細胞を使用するＰＭＮ殺傷アッセイにおいて試験し、それは極めて高い濃度においても殺傷を示さなかった（図４）。この観察は、試験候補物の安全なプロファイルを強調する。

突然変異セットをヘテロ二量体Ｆｃに適用して、配列番号７－８、配列番号８０－８、配列番号７－９又は配列番号８０－９を含む抗補をもたらした（図５）。試験した候補配列番号８０－８及び配列番号８０－９は、ＰＭＮ殺傷アッセイにおいて、それらの親免疫グロブリン及びＩｇＡ２（図５Ａ及び５Ｃ）と比較してＳＫ－ＢＲ－３細胞に対するより良好な殺傷特性を有することを示したが、ＰＢＭＣ殺傷アッセイにおいてγ応答を媒介する効果を示さなかった（図５Ｂ及び５Ｄ）。

実施例２：人工操作タンパク質の発現及び精製
重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列をＧｅｎｅａｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において合成し、制限酵素－ライゲーションベースのクローニング技術を使用して哺乳類発現ベクター中にクローニングした。得られたプラスミドをＨＥＫ２９３Ｔ細胞中に同時形質移入した。簡潔に述べると、免疫グロブリン（ＩｇＧ、ＩｇＡ及び人工操作免疫グロブリン）の一過的発現のため、当量の軽鎖及びそれぞれの人工操作重鎖ベクターを懸濁液適合ＨＥＫ２９３Ｔ細胞中にポリエチレンイミン（（ＰＥＩ）参照カタログ番号２４７６５ Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用して同時形質移入した。典型的には、１ｍｌ当たり１～２百万個の細胞の密度における懸濁液中の１００ｍｌの細胞を、人工操作重鎖をコードする５０μｇの発現ベクター及び軽鎖をコードする５０μｇの発現ベクターを含有するＤＮＡと形質移入した。次いで、組換え発現ベクターを宿主細胞中に導入し、７日間の期間の細胞のさらなる培養により構築物を産生して０．１％のｐｌｕｒｏｎｉｃ酸、４ｍＭのグルタミン、及び０．２５μｇ／ｍｌの抗生物質が補給された培養培地（ＨＥＫ、無血清培地）中への分泌を可能とした。

次いで、産生された構築物を無細胞上清から免疫親和性クロマトグラフィーを使用して精製した。ＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４で平衡化された抗カッパＬＣ樹脂（ＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、液体クロマトグラフィーシステム（Ａｅｋｔａ ｐｕｒｅクロマトグラフィーシステム、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して濾過条件培地とインキュベートした。樹脂をＰＢＳ ｐＨ７．４で洗浄してから、構築物を溶出緩衝液（５０ｍＭのクエン酸塩、９０ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ２．７）で溶出させた。

捕捉後、溶出タンパク質を、１ＭのＴＲＩＳ ｐＨ１０．０溶液を使用してｐＨ中和し、サイズ排除クロマトグラフィー技術（ＨｉＰｒｅｐ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １６／６０，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用してポリッシュした。最後に、精製タンパク質をＰＢＳ緩衝液ｐＨ７．４中で配合した。

凝集傾向は、捕捉及びｐＨ中和ステップ後に分析サイズ排除クロマトグラフィー技術（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ ３．２／３００ＧＬ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して測定した。

実施例３：ヒトＦｃα受容体（ｈＦｃαＲＩ）又はラットＦｃα受容体（ｒＦｃαＲ）に対するＳＰＲ測定
ヒトＦｃαＲＩ又はラットＦｃαＲに対する配列番号４の軽鎖を有するＦｃ変異体抗体形式の結合を特徴付けるために、直接結合アッセイを行った。

動的結合親和性定数（ＫＤ）をＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｇｌａｔｔｂｒｕｇｇ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で室温で測定し、タンパク質はランニングバッファ１０ｍＭ ＮａＰ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０、ｐＨ７．６で希釈した。ビオチン化抗κ軽鎖ｓｃＦｖを固定化したストレプトアビジンセンサチップ（Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＳＡ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、操作された免疫グロブリンを補足し、組換えヒトｈＦｃαＲＩ又は組換えラットＦｃαＲを分析物として使用した。

参照として機能させるため、１つのフローセルはいかなる免疫グロブリンも捕捉しなかった。結合データは、参照上の分析物希釈系列の後続のインジェクション及びフローセルの測定により収集した。ゼロ濃度サンプル（ランニング緩衝液のみ）を含めてデータ評価の間の二重参照を可能とした。データ評価のため、二重参照センサーグラムを、１：１結合モデル分析を適用することにより分析して平衡解離定数（ＫＤ）を生成した。ｒＦＣαＲに関する結果を表１１にまとめる。

この実験は、候補Ｆｃ変異体が、ヒト／ラットＦｃαＲＩと交差反応性であることを示し、これはインビボ疾患モデルにおける候補試験のための所望の特性である。

実施例４：抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）アッセイ方法
健常ドナーからの血液サンプルが、スイスヒト研究法（Ｓｗｉｓｓ ｈｕｍａｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｃｔ）（Ｂａｓｅｌ組織ドナープログラム－Ｐｒｅｖｏｍｅｄ）に従って新鮮に抜き取られた末梢血から回収された。ＡＣＫ溶解緩衝液での赤血球の溶解後、多形核細胞及び末梢血単核細胞（ＰＭＮ及びＰＢＭＣ）をｆｉｃｏｌｌ－ｐａｑｕｅ勾配により単離した。ＰＭＮを使用して人工操作免疫グロブリンのアルファエフェクター機能を特徴付けした一方、ＰＢＭＣを使用してガンマエフェクター機能を特徴付けした。

エフェクター細胞（新鮮単離されたＰＭＮ又はＰＢＭＣ細胞）を、ＨＥＲ２発現標的細胞（ＳＫ－ＢＲ－３、Ｃａｌｕ－３、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３又はＭＤＡ－ＭＢ－１７５細胞、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ ＭＤから購入）に２０：１のエフェクターと標的との比において添加した。ＳＫ－ＢＲ－３は、ＨＥＲ２を過剰発現する乳癌細胞系である。Ｃａｌｕ－３及びＭＤＡ－ＭＢ－４５３は、それぞれ、ＳＫ－ＢＲ－３と比較して低いレベルにおいてＨＥＲ２を過剰発現する肺及び乳癌細胞系である（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１９）。ＭＤＡ－ＭＤ－１７５は、最少量のＨＥＲ２を発現する乳癌細胞系である（Ｃｒｏｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００５）。ＰＭＮ細胞殺傷は候補Ｆｃ変異体のいずれでも観察されず、低ＨＥＲ２発現細胞株に対する良好な安全性プロファイルを示している。

免疫グロブリン構築物を示される濃度において添加し、組み合わせを穏やかに混合し、次いで破壊なしで２６０×ｇにおいて４分間遠心分離して標的及びエフェクター細胞の同時局在化を促した。次いで、アッセイ物を標準的組織培養インキュベーター中で５％のＣＯ_２中で３７℃において１８時間インキュベートした。１８時間後、Ｃｙｔｏｔｏｘ９６試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を製造業者の指示書に従って使用して上清をＬＤＨ放出測定に使用した。４９０ｎｍにおける吸光度をＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ ＨＴプレートリーダー上で読み取った。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ６．０を使用してデータを分析し、グラフ化した。

実施例５：ＩｇＡと比較した人工操作免疫グロブリンの薬物動態（ＰＫ）特性の改善
５．１ 人工操作免疫グロブリンの材料産生
配列番号１、２、７、８、４０、８０、８２、８３、８４の配列を有する抗ＨＥＲ２人工操作免疫グロブリン重鎖バリアントをコードする核酸をＧｅｎｅａｒｔ（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）において合成し、制限酵素－ライゲーションベースのクローニング技術を使用して哺乳類発現ベクター中にクローニングした。選択Ｎ－グリコシル化部位を、特異Ａｓｐ残基のＡｌａ残基による置換により除去した。重鎖をコードする得られたプラスミドを、軽鎖（配列番号４）をコードするプラスミドと哺乳類発現系中に同時形質移入した。ＨＥＫ２９３Ｔ発現細胞系については、発現を実施例２に記載の手順に従って実施した。ＣＨＯ－Ｓ発現細胞系（Ｔｈｅｒｍｏ）については以下の手順を使用した。簡潔に述べると、タンパク質一過的発現のため、発現ベクターを懸濁液適合ＣＨＯ－Ｓ細胞中にＥｘｐｉｆｅｃｔａｍｉｎｅＣＨＯ形質移入剤（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して形質移入した。典型的には、１ｍｌ当たり６百万個の細胞の密度における懸濁液中の４００ｍｌの細胞を、人工操作タンパク質をコードする４００μｇの発現ベクターを含有するＤＮＡと形質移入した。次いで、組換え発現ベクターを、さらなる分泌のために宿主細胞中に培養培地（ＥｘｐｉＣＨＯフィード及びエンハンサー試薬が補給されたＥｘｐｉＣＨＯ発現培地（Ｔｈｅｒｍｏ））中で７日間導入した。次いで、発現コンストラクトを、実施例２に記載の手順に従って、無細胞上清から精製した。血清中の測定免疫グロブリン濃度を時間の関数としてプロットし、図６及び図７に示した。生成された材料は、表１２及び１３に記載されている。

コンストラクト設計と一致して、配列番号７－８及び配列番号８－８０を有する操作された免疫グロブリンは、ＦｃＲｎへの結合を保持しながらＣＤ８９に結合し、図６に示すように、ＩｇＡ免疫グロブリンと比較して改善されたＰＫ特性及び改善された半減期を示した。さらに、図６に示すように、配列番号８－８０を有する親和性成熟変異体は、配列番号７－８を有する親コンストラクトと同一のＰＫを示す。これは、ＣＤ８９に対する親和性成熟が、操作された免疫グロブリンＰＫ特性を損なうことを示す。

図７に示すデータは、Ｎ－グリコシル化パターンが免疫グロブリンＰＫにどのように影響を及ぼすかを示す。操作された免疫グロブリンのＰＫ特性は、ＩｇＡと比較して改善され、個々のＮ－グリコシル化部位ＣＨ２．８４．４が除去された際に改善された（配列番号８３）。

５．１ マウス試験
Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓより雄ＣＤ１マウスを得た。到着後、全てのマウスを無病原体動物施設中で、標準的な１２時間の明／１２時間の暗サイクル下で２１℃の室温において不断給餌及び給水で飼育した。全てのマウスは、上記のとおり産生及び精製されたＩｇＧ又はＩｇＡ又は人工操作免疫グロブリン（３ｍｇ／ｋｇ）の単回静脈内（ＩＶ）注射を受けた。それぞれの化合物を３匹のマウス中に注射した。血液サンプルを血清分離チューブ中に伏在静脈を介して注射後の種々の時点において回収した。血液を周囲温度において少なくとも２０分間凝固させた。凝固サンプルを遠心分離まで室温において維持し、それを回収時間の１時間以内に開始した。それぞれのサンプルを１５００～２０００×ｇの相対遠心力において２～８℃で５分間遠心分離した。遠心分離後２０分以内に血清を血液サンプルから分離し、標識された２．０ｍＬのポリプロピレンのコニカル底微小遠心チューブ中に移した。健常であることが明らかな動物及び明らかな異常を有さない動物のみを試験に使用した。実施された全ての動物作業はＮｏｖａｒｔｉｓ’Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによりレビュー及び承認された。

５．２ 薬物動態試験のための免疫グロブリンＥＬＩＳＡ
免疫グロブリンレベルを連続サンドイッチＥＬＩＳＡにより測定した。ＩｇＡ投薬については、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｐマイクロタイタープレートのウェルをヤギ抗ヒトＩｇＡ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０５３－０１）で４℃において一晩コーティングした。ＩｇＧ及び人工操作免疫グロブリン投薬については、Ｒｏｃｈｅ ＳｔｒｅｐｔａＷｅｌｌマイクロタイタープレートのウェルをビオチン化ＳＢヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４９－０８）で室温において１時間コーティングした。ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ、０．５％のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））との１時間のインキュベーション後、同じブロッキング緩衝液中で希釈されたサンプルをブロッキングされたプレートに添加し、室温において２時間インキュベートした。インキュベーション後、セイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＡ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０５３－０５）又はセイヨウワサビペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ，カタログ番号２０４９－０５）を添加し、室温において１時間インキュベートした。次いで、プレートを基質溶液（ＢＭ Ｂｌｕｅ ＰＯＤ基質ＴＭＢ、Ｒｏｃｈｅ、カタログ番号１１４８４２８１００１）とインキュベートし、０．５Ｍの硫酸で反応を停止させた。プレートリーダーを使用して吸光度を４５０ｎｍにおいて測定し、６５０ｎｍで減算した。ステップ間で、プレートを洗浄緩衝液（ＰＢＳ中０．０５％のＴｗｅｅｎ－２０）で３回洗浄した。

配列情報
表１４は、完全抗体を生成するために使用される、実施例に記載のバリアントＦｃ領域を含む全長重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列（配列番号）を記載する。本明細書に記載のＦｃ変異体、全長重鎖、軽鎖又は完全抗体は、慣用の組換えタンパク質産生及び精製プロセスを使用して産生することができる。

本明細書において言及される全ての配列（配列番号）は、表１４に見出される。参照番号は、社内配列参照番号を指す。本出願の本文全体にわたり、本明細書の本文（例えば、表１４）と配列表との間に矛盾が存在する場合、本明細書の本文が優先される。

Claims (22)

1. 親ＦｃポリペプチドのＦｃ変異体であって、前記Ｆｃ変異体は、前記親Ｆｃポリペプチドと比較して変更されたＦｃαＲに対する結合又は変更された抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を示し、前記Ｆｃ変異体は、前記親Ｆｃポリペプチドの前記Ｆｃ領域における少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、前記アミノ酸改変は：ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及びＣＨ３．１２４からなる群から選択される位置にあり、前記アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う、Ｆｃ変異体。
2. 前記少なくとも１つのアミノ酸改変が：Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｑ、Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ及びＬ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆからなる群から選択され、前記アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う、請求項１に記載のＦｃ変異体。
3. 前記少なくとも１つのアミノ酸改変が：
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ、
   Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、
   Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、
   Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、
   Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、
   Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｓ＿ＣＨ３．４５＿Ｄ／Ｍ＿ＣＨ３．１０５＿Ｙ／Ｑ＿ＣＨ３．１１８＿Ｙ、
   Ａ＿ＣＨ２．１０＿Ｓ、
   Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ、
   Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ、
   Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｈ、
   Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ、
   Ｅ＿ＣＨ３．１０９＿Ｄ、
   Ｌ＿ＣＨ３．１２４＿Ｆ、及び
   Ｌ＿ＣＨ２．８９＿Ｉ／Ｇ＿ＣＨ２．９１＿Ｖ／Ｑ＿ＣＨ２．９４＿Ｅ／Ｎ＿ＣＨ２．９７＿Ｙ／Ｇ＿ＣＨ２．９９＿Ｗ
   からなる群から選択され、前記アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う、請求項１又は請求項２に記載のＦｃ変異体。
4. 前記親ＦｃポリペプチドがヒトＩｇＡ内に含まれる、請求項１～３のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
5. 前記親ＦｃポリペプチドがヒトＩｇＡ２内に含まれる、請求項１～４のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
6. 前記Ｆｃ変異体が、表面プラズモン共鳴により測定して、前記親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約５０倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
7. 前記親ＦｃポリペプチドがヒトＩｇＧ１を含む、請求項１～３のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
8. 前記Ｆｃ変異体が、表面プラズモン共鳴により測定して、前記親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約３００倍の、ヒトＦｃαＲＩに対する増加した親和性を有する、請求項７に記載のＦｃ変異体。
9. 前記Ｆｃ変異体が、ＭＤＡ－ＭＢ－４５３細胞殺傷アッセイにおいて測定して、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を前記親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約５倍増加させる、請求項１～８のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
10. 前記Ｆｃ変異体が、前記親Ｆｃポリペプチドの少なくとも約２倍の、Ｃａｌｕ－３細胞殺傷アッセイにおける増加した有効性を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載のＦｃ変異体。
11. Ｆｃ変異体を含むｌｇＡ抗体であって、前記抗体が、親Ｆｃポリペプチドを含むＩｇＡ抗体と比較して増加したＦｃαＲ親和性、又は増加した抗体依存性細胞媒介性細胞毒性を有する、ｌｇＡ抗体。
12. 前記抗体が：ＣＨ２．１０、ＣＨ２．８９、ＣＨ２．９１、ＣＨ２．９４、ＣＨ２．９７、ＣＨ２．９９、ＣＨ３．４５、ＣＨ３．１０５、ＣＨ３．１０９、ＣＨ３．１１８及びＣＨ３．１２４からなる群から選択される位置におけるアミノ酸改変を含み、前記アミノ酸改変の番号付けは、Ｃ－ドメインについてのＩＭＧＴ番号付けに従う、請求項１１に記載のｌｇＡ抗体。
13. 前記抗体がヒトｌｇＡ１又はｌｇＡ２抗体である、請求項１２に記載のＩｇＡ抗体。
14. 前記抗体が腫瘍抗原に結合する、請求項１１～１３のいずれか１項に記載のＩｇＡ抗体。
15. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のＦｃ変異体又は請求項１１～１４のいずれか１項に記載の抗体を、１つ以上の薬学的に許容され得る賦形剤、希釈剤又は担体と組み合わせて含む医薬組成物。
16. さらに１つ以上の追加の活性剤を含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
17. 細胞増殖性疾患又は状態の治療における使用のための、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＦｃ変異体又は請求項１１～１４のいずれか１項に記載の抗体。
18. 前記細胞増殖性疾患又は状態が：乳癌、神経芽腫、リンパ腫、膵膵管腺癌、黒色腫、腎細胞癌、膀胱癌、結腸直腸癌、非小細胞肺癌、非ホジキンリンパ腫及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項１７に記載の使用のためのＦｃ変異体又は抗体。
19. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のＦｃ変異体又は請求項１１～１４のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離された核酸分子。
20. １つ以上の請求項１９に記載の核酸配列を含むクローニング又は発現ベクターであって、請求項１～１０のいずれか１項に記載のＦｃ変異体又は請求項１１～１４のいずれか１項に記載の抗体の組換え産生に適している、ベクター。
21. １つ以上の請求項２０に記載のクローニング又は発現ベクターを含む宿主細胞。
22. 請求項１～１０のいずれか１項に記載のＦｃ変異体又は請求項１１～１３のいずれか１項に記載の抗体を調製する方法であって、請求項２１に記載の宿主細胞を培養することと、前記宿主細胞培養物から前記Ｆｃ変異体又は抗体を精製することと、前記宿主細胞培養物から前記Ｆｃ変異体又は抗体を回収することと、を含む、方法。

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