JP2023520062A - クローディン１８．２を標的とするｒｎａ組成物 - Google Patents

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ライラ フィッシャー，
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Abstract

本開示は、クローディン１８．２ポリペプチドを標的とするためのＲＮＡ技術を提供する。いくつかの実施形態では、そのようなＲＮＡ技術は、クローディン１８．２の陽性発現に関連する疾患の治療に有用であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、そのようなＲＮＡ技術は、例えば、胆管癌、卵巣癌、胃癌、胃食道癌、膵臓癌を含むがこれらに限定されないクローディン１８．２陽性癌の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、そのようなＲＮＡ技術は、併用療法（例えば、化学療法剤と組み合わせて）において使用することができる。

Description

癌は世界的に２番目に多い死因であり、２０１８年には推定９６０万人の死亡の原因となると予想されている（Ｂｒａｙ ｅｔ ａｌ．２０１８）。一般に、生殖細胞および一部のカルチノイド腫瘍などのいくつかの例外を除いて、固形腫瘍が転移すると、５年生存率が２５％を超えることはほとんどない。
化学療法、放射線療法、手術、および標的療法などの従来の治療法、ならびに免疫療法の最近の進歩により、進行性固形腫瘍を有する患者の転帰が改善されている。ここ数年で、食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁（ＥＭＡ）は、複数の癌型、主に固形腫瘍を有する患者の治療のために、８つのチェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ－４経路を標的とする１つのモノクローナル抗体、イピリムマブ、ならびにアテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、セミプリマブおよびペムブロリズマブを含む、プログラム死受容体／リガンド［ＰＤ／ＰＤ－Ｌ１］を標的とする７つの抗体）を承認した。これらの承認は、癌治療の状況を劇的に変化させた。しかしながら、膵臓腺癌または転移性胆道癌などの特定の癌は、免疫療法を含む既存の療法から依然としてまだ利益を得ていない。
Al-Batran SE, Schuler MH, Zvirbule Z, Manikhas G, Lordick F, Rusyn A, et al. FAST: An international, multicenter, randomized, phase II trial of epirubicin, oxaliplatin, and capecitabine (EOX) with or without IMAB362, a first-in-class CLDN-18.2-targeting antibody, as first-line therapy in patients with advanced CLDN-18.2+ gastric and gastroesophageal junction (GEJ) adenocarcinoma. JCO. 2016; 34(Suppl 18): LBA4001-LBA4001. doi: 10.1200/JCO.2016.34.18_suppl.LBA4001 Al-Batran SE, Zvirbule Z, Lordick F, Thuss-Patience P, Just M, Bitzer M, et al. Phase 1 study of IMAB362 with immunomodulation in patients with advanced gastric cancer. Ann Oncol. 2017a; 28(Suppl 5): 664P. doi: 10.1093/annonc/mdx369.048 Alnylam Pharmaceuticals, I. Patisaran FDA approval (2017). Bray F, Ferla JME, Soerjomataram I, Siegel RL, Jemal A, (2018): Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. 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例えば膵臓癌および胆管癌タイプなどの特定の癌の予後不良は、さらなる治療アプローチの必要性を強調する。本開示は、とりわけ、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）が、治療が標的とし得る特に有用な腫瘍関連抗原であるという洞察を提供する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、非癌組織におけるその特に限定された発現を含むＣＬＤＮ－１８．２の組織発現パターンが、本明細書に記載の標的としてのその有用性に寄与し得ることに留意する。現在までに、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする治療法は、いかなる癌適応症についても承認されていない。
本開示は、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２を標的とする治療が、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤の投与を有用に含み得るという洞察をさらに提供する。さらに、本開示は、そのような抗体剤を送達するための特に有益な戦略が、抗体剤をコードする核酸の投与によるものであり得るという特定の洞察を提供する。さらに、本開示は、肝細胞を標的とする脂質ナノ粒子を介したＲＮＡ（例えば、抗体剤をコードするｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）の送達が、そのような抗体剤を送達するための特に有益な戦略であり得るという特定の洞察を提供する。
当業者は、核酸治療薬、さらにはＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）治療薬（例えば、タンパク質および／またはサイトカインをコードするｍＲＮＡを参照）の急成長している分野を認識するであろう。本明細書で提供される技術の様々な実施形態は、開発されたＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）治療技術および／または送達システムの特定の特徴を利用し得る。例えば、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、１つ以上の修飾ヌクレオチド（例えば、限定されないが、シュードウリジン）、ヌクレオシド、および／または結合を含み得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、安定性および／または翻訳効率を高める修飾ポリＡ配列（例えば、破壊されたポリＡ配列）を含み得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、少なくとも２つの３'ＵＴＲ配列の特定の組合せ（例えば、スプリットＲＮＡのアミノ末端エンハンサの配列要素とミトコンドリアにコードされた１２Ｓ ＲＮＡに由来する配列との組合せ）を含み得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、ヒトαグロビンｍＲＮＡに由来する'５ＵＴＲ配列を含み得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、例えば共転写的にキャッピングするための５'キャップ類似体を含み得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）は、コードされた抗体剤が発現され、分泌されるように、免疫原性が低下した分泌シグナルコード領域（例えば、ヒト分泌シグナルコード配列）を含み得る。いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡは、１つ以上の送達ビヒクル（例えば、脂質ナノ粒子などのナノ粒子）中でまたはそれを用いて製剤化され得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、投与されるＲＮＡは、肝臓標的化脂質ナノ粒子（例えば、カチオン性脂質ナノ粒子）中でまたはそれを用いて製剤化され得る。
本開示は、ＲｉｂｏＭａｂ形式（例えば図１３に示すように）が、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化剤（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤）を送達するＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）に特に有用であり得るという洞察をさらに提供する。
本開示は、とりわけ、癌、特にクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）の発現に関連する癌を治療するための洞察および技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、膵臓癌、胃または胃食道癌、胆管癌、卵巣癌などからなる群より選択される癌を治療するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、局所進行腫瘍に治療を投与するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、切除不能な腫瘍を治療するための技術を提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、転移性腫瘍を治療するための技術を提供する。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、提供される療法は、癌（例えば、膵臓癌、胃もしくは胃食道癌、胆管癌、卵巣癌から選択される癌、ならびに／または１つ以上の膵臓、胃、胃食道、胆管、および／もしくは卵巣腫瘍を含む）に罹患しているかまたは罹患しやすい対象または対象の集団に投与され得、その癌は、１つ以上の局所進行腫瘍、１つ以上の切除不能腫瘍および／または１つ以上の転移であり得るかまたはそれらを含み得る。
クローディン１８のアイソフォーム２を標的とするモノクローナル抗体であるゾルベツキシマブ（開発コードＩＭＡＢ３６２）は、胃腸腺癌および膵臓腫瘍の治療のために研究中である。ＩＭＡＢ３６２（ＮＣＴ０１１９７８８５）を用いた第２ａ相ＭＯＮＯ試験では、ＩＭＡＢ３６２治療下で発現した有害事象（「ＴＥＡＥ」）は患者の８２％（ｎ＝４４／５４）で発生した；悪心（６１％）、嘔吐（５０％）および疲労（２２％）が最も頻度の高いＴＥＡＥであった。グレード３の嘔吐が１２人の患者（２２％）で報告され、グレード３の悪心が８人の患者（１５％）で報告された。これらの患者は６００ｍｇ／ｍ２の用量を投与された。そのようなＩＭＡＢ３６２試験で観察された悪心および嘔吐は、ＩＭＡＢ３６２の注入を一時停止または減速することによって管理され、ＡＥがＣｍａｘ関連であることを示した（Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１９）。
本開示は、とりわけ、ＣＬＤＮ－１８．２標的化剤、特にＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤、特にＩＭＡＢ３６２をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）などの核酸の投与が、ＣＬＤＮ－１８．２標的化療法のための特に望ましい戦略であり得るという洞察を提供する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、そのような送達様式が、対応する（例えば、コードされた）タンパク質（例えば、抗体）剤自体が投与された場合に観察されるものと比較して、ＴＥＡＥの発生率の低下（例えば、頻度および／もしくは重症度）、ならびに／または有効性レベルとＴＥＡＥレベルとの間の関係の改善（例えば、治療ウィンドウの改善）を伴う有効な投与などの１つ以上の改善を達成し得ることを提案する。特に、本開示は、そのような改善が、特に、核酸、特にそれをコードするＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、ｍＲＮＡ（１つまたは複数）などのｓｓＲＮＡ（１つまたは複数））の投与を介してＩＭＡＢ３６２を送達することによって達成され得ることを教示する。
いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、静脈内（ＩＶ）投与のために脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）であるかまたはそれを用いて製剤化される抗体剤（例えば、ＩＭＡＢ３６２）またはその機能的部分をコードするｍＲＮＡ（１つまたは複数）が、例えば、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする記載されたＲｉｂｏＭａｂについて図１４に示されるように、治療的に適切な血漿濃度でコードされた抗体剤（例えば、ＩＭＡＢ３６２）を効率的に産生するために標的細胞（例えば、肝細胞）によって取り込まれ得るという洞察を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化剤としてＲｉｂｏＭａｂを利用する。いくつかの実施形態では、そのようなＲｉｂｏＭａｂは、ｍＲＮＡによってコードされる抗体剤であり、例えば、最小限の免疫原性のために操作され、および／または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化される。
さらに、本開示は、とりわけ、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の能力が、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができ、一方で、レシピエント対象の免疫系を活用することにより、化学療法および／または他の抗癌療法の細胞傷害効果（１つまたは複数）を増強することができるという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、そのような併用療法は、例えば、単独で投与される個々の療法および／または別の適切な参照と比較して、無増悪生存期間および／または全生存期間を延長し得る。
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本開示は、例えばゲムシタビン、オキサリプラチンおよび５－フルオロウラシルなどの特定の化学療法剤が、膵臓癌細胞株における既存のＣＬＤＮ－１８．２発現レベルを上方制御することが示されたことを観察する；さらに、これらの薬剤は、ＣＬＤＮ－１８．２陰性細胞株においてデノボ発現を増加させることは観察されなかった。例えば、Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．（２０１９）''Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｚｏｌｂｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ''Ｉｎ Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８（１），ｐｐ．ｅ１５２３０９６を参照。
本開示は、とりわけ、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法が、腫瘍細胞（例えば、１つ以上の化学療法剤への曝露から生じ得るかまたは曝露から生じた可能性がある）における、（例えば、示すことが決定されている、および／または示すことが予想もしくは予測される）ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性の上昇を特徴とする腫瘍（１つまたは複数）（例えば、腫瘍細胞、そのような腫瘍（１つもしくは複数）および／または腫瘍細胞（１つもしくは複数）が疑われるおよび／または検出された対象など）に投与された場合に特に有用および／または有効であり得るという洞察を提供する。実際に、とりわけ、本開示は、本明細書に記載の提供されるＣＬＤＮ－１８．２標的化療法（例えば、ＲＮＡなどの核酸、より具体的にはＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｍＲＮＡの投与）が、１つ以上のＣＤＬＮ１８．２増強剤（例えば、１つ以上の特定の化学療法剤）と組み合わせて（例えば、それを受けたことがある、および／または受けている、または曝露されたことがある対象に）投与される場合、相乗的治療を提供し得ることを教示する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法は、腫瘍細胞におけるＣＬＤＮ－１８．２発現を上方制御すると予想されるおよび／または実証されている他の抗癌剤と組み合わせて有用であり得る。
いくつかの態様では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物は、（ａ）クローディン１８．１（ＣＬＤＮ１８．１）ポリペプチドと比較してクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤（「ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤」）をコードする１つ以上のコード領域を含む少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）；および（ｂ）脂質ナノ粒子を含み、少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡは脂質ナノ粒子の少なくとも１つの中に封入されている。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物は、ＣＬＮＤ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する抗体をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡを含むおよび／または送達することができる。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物は、ＣＬＮＤ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する抗原結合断片をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡを含むおよび／または送達することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする（およびｓｓＲＮＡなどのＲＮＡ、例えば本明細書に記載のｍＲＮＡによってコードされ得る）抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドの第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、癌細胞において曝露されるＥＣＤ１のエピトープに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび抗体剤の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のそのようなＶＨドメイン（１つまたは複数）およびＶＬドメイン（１つまたは複数）は、単一のｓｓＲＮＡ構築物によってコードされ得る；あるいは、いくつかの実施形態では、それらは少なくとも２つの個々のｓｓＲＮＡ構築物によって別々にコードされ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で利用されるｓｓＲＮＡは、抗体剤の少なくともＶＨドメインをコードする重鎖コード領域、および抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域を含む、２つ以上のコード領域を含む。代替実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）抗体剤の少なくともＶＨドメインをコードする重鎖コード領域を含む第１のｓｓＲＮＡ、および（ｉｉ）抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域を含む第２のｓｓＲＮＡを含み得る。
いくつかの実施形態では、重鎖コード領域は、定常重鎖（ＣＨ）ドメインをさらにコードすることができ、および／または軽鎖コード領域は、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインをさらにコードすることができる。例えば、いくつかの実施形態では、重鎖コード領域は、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）形態の抗体剤のＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインをコードし得、ならびに／または軽鎖コード領域は、ＩｇＧ形態の抗体剤のＶＬドメインおよびＣＬドメインをコードし得る。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ形態の抗体剤はＩｇＧ１である。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長重鎖をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長軽鎖をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、分泌シグナルコード領域を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような分泌シグナルコード領域は、１つ以上のＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、例えば治療される対象に存在する細胞による翻訳時に分泌されることを可能にし、したがって生物学的に活性なＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の血漿濃度をもたらす。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、少なくとも１つの非コード配列要素を含み得る（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）。非コード配列要素の例には、３'非翻訳領域（ＵＴＲ）、５'ＵＴＲ、ｍＲＮＡの共転写キャッピングのためのキャップ構造、ポリアデニン（ポリＡ）尾部、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、第１のｓｓＲＮＡおよび／または第２のｓｓＲＮＡ）は、それぞれ独立して、５'から３'方向に：（ａ）５'ＵＴＲコード領域；（ｂ）分泌シグナルコード領域；（ｃ）重鎖コード領域；（ｄ）３'ＵＴＲコード領域；および（ｅ）ポリＡ尾部コード領域を含む。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれるポリＡ尾部コード領域は、修飾ポリＡ配列であるか、または修飾ポリＡ配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、５'キャップを含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡは、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）のＡ、Ｕ、ＣおよびＧリボヌクレオチドのうちの少なくとも１つは、修飾リボヌクレオチドによって置き換えられ得る。いくつかの実施形態では、そのような修飾リボヌクレオチドは、シュードウリジンであり得るか、またはシュードウリジンを含み得る。
医薬組成物が、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする第１のｓｓＲＮＡと、抗体剤の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする第２のｓｓＲＮＡとを含むいくつかの実施形態では、そのような第１のｓｓＲＮＡおよび第２のｓｓＲＮＡは、約１．５：１～約１：１．５のモル比で存在し得る。いくつかの実施形態では、そのような第１のｓｓＲＮＡおよび第２のｓｓＲＮＡは、３：１～１：１の重量比で存在し得る。いくつかの実施形態では、そのような第１のｓｓＲＮＡおよび第２のｓｓＲＮＡは、約２：１の重量比で存在し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のＲＮＡ含有量（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡ）は、０．５ｍｇ／ｍＬ～１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中で提供される脂質ナノ粒子は、肝臓を標的とする脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中で提供される脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物中で提供される脂質粒子は、約５０～１５０ｎｍの平均サイズを有し得る。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を形成する脂質は、ポリマー結合脂質；カチオン性脂質；および中性脂質を含む。いくつかのそのような実施形態では、ポリマー結合脂質は総脂質の約１～２．５モル％で存在し、カチオン性脂質は総脂質の３５～６５モル％で存在し、中性脂質は総脂質の３５～６５モル％で存在する。
様々な脂質（例えば、ポリマー結合脂質、カチオン性脂質および中性脂質を含む）が当技術分野で公知であり、本明細書では、脂質ナノ粒子、例えば特定の細胞型（例えば、肝細胞）を標的とする脂質ナノ粒子を形成するために使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物に含まれるポリマー結合脂質は、ＰＥＧ結合脂質（例えば、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドまたはその誘導体）であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物に含まれるカチオン性脂質は、（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）またはその誘導体であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物に含まれる中性脂質は、リン脂質またはその誘導体（例えば、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＳＣ））および／またはコレステロールであり得るか、またはそれを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、いくつかの実施形態では、特定の条件下でそのような組成物の安定性を高め得る１つ以上の添加剤をさらに含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、いくつかの実施形態では１つ以上の塩（例えば、ナトリウム塩）を含み得る凍結保護剤（例えば、スクロース）および／または水性緩衝液をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化剤（例えば、抗体剤）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）以外の１つ以上の活性薬剤をさらに含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、そのような他の活性薬剤は、化学療法剤であり得るか、または化学療法剤を含み得る。例示的な化学療法剤は、膵臓癌の治療に適応される化学療法剤であり得るか、またはそれを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、治療的に適切な血漿濃度でコードされたＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生するために標的細胞によって取り込まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるそのような医薬組成物は、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができる。
したがって、本開示の別の態様は、本明細書に記載の医薬組成物を使用する方法に関する。例えば、本明細書で提供される一態様は、提供される医薬組成物をＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に投与することを含む方法に関する。ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍の例は、胆道腫瘍、胃腫瘍、胃食道腫瘍、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、およびある一定レベルのＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドを発現するまたは示す腫瘍であるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍は、投与される対象由来のホルマリン固定パラフィン包埋新生物組織における免疫組織化学アッセイによって評価した場合、腫瘍細胞の５０％以上が≧２＋ＣＬＤＮ－１８．２タンパク質染色強度を示すことを特徴とし得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象は、局所進行性、切除不能または転移性腫瘍を有し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象は、その固形腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍として特徴付けられるように、ＣＬＤＮ－１８．２レベルを増加させるのに十分な前処置を受けていてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、単剤療法として投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、そのような医薬組成物と化学療法剤とを含む併用療法の一部として投与され得る。したがって、いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を受けている対象は、化学療法剤を受けている。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を受けている対象は、そのような対象が併用療法として両方を受けているように、化学療法剤を投与される。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物および化学療法剤は、同時にまたは連続的に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、化学療法剤は、提供される医薬組成物の投与後（例えば、少なくとも４時間後）に投与され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性膵臓腫瘍の治療に有用である。ＣＬＤＮ－１８．２陽性膵臓腫瘍に罹患している対象への提供される医薬組成物の投与を含むいくつかの実施形態では、そのような対象は、そのような提供される医薬組成物を単剤療法として、またはそのような提供される医薬組成物と膵臓腫瘍の治療に適応される化学療法剤とを含む併用療法の一部として受けていてもよい。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、ゲムシタビンおよび／またはパクリタキセル（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、フォリン酸（ＦＯＬ）、フルオロウラシル（Ｆ）、イリノテカン（ＩＲＩＮ）およびオキサリプラチン（ＯＸ）を含む癌治療薬の組合せであるＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸであり得るか、またはそれを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性胆道腫瘍の治療に有用である。ＣＬＤＮ－１８．２陽性胆道腫瘍に罹患している対象への提供される医薬組成物の投与を含むいくつかの実施形態では、そのような対象は、そのような提供される医薬組成物を単剤療法として、またはそのような提供される医薬組成物と胆道腫瘍の治療に適応される化学療法剤とを含む併用療法の一部として受けていてもよい。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、ゲムシタビンおよび／またはシスプラチンであり得るか、またはそれを含み得る。
本明細書に記載の医薬組成物および方法は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している任意の年齢の対象に適用可能であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象は、成人対象である。
本明細書に記載の医薬組成物は、当技術分野で公知の適切な方法によって、それを必要とする対象に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、静脈内注射によってＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に投与され得る。
本明細書に記載の医薬組成物の投与量は、例えば、治療される対象の体重、癌の種類および／もしくは癌の病期、ならびに／または単剤療法もしくは併用療法を含むがこれらに限定されない多くの因子によって異なり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に、少なくとも１回以上（例えば、少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回、少なくとも６回、少なくとも７回、少なくとも８回、またはそれ以上を含む）の投与サイクルで投与される。いくつかの実施形態では、各投与サイクルは、３週間の投与サイクルであり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、投与サイクル当たり少なくとも１回の投与で投与される。いくつかの実施形態では、投与サイクルは、投与の設定された数および／またはパターンの投与を含む；いくつかの実施形態では、投与サイクルは、例えば特定の期間にわたって、ならびに任意で、設定された間隔（１つもしくは複数）でおよび／または設定されたパターンに従って投与され得る複数回投与を介して、設定された累積用量を投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物の各用量または累積用量は、投与される対象の０．１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の量で、（単一のｓｓＲＮＡによってコードされるかまたは２つ以上のｓｓＲＮＡによってコードされるにかかわらず）ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡを含み得る。
本開示の別の態様は、対象に癌治療のためのＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を送達する方法の一定の改善に関し、この方法は、提供される医薬組成物を癌対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、対応する（例えば、コードされた）タンパク質（例えば、抗原）剤自体が投与された場合に観察されるものと比較して、ＴＥＡＥの減少（例えば、頻度および／もしくは重症度）、ならびに／または有効性レベルとＴＥＡＥレベルとの間の関係の改善（例えば、治療ウィンドウの改善）を伴う有効な投与などの１つ以上の改善を達成し得る。特に、本開示は、そのような改善が、特に、核酸、特にそれをコードするＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、ｍＲＮＡ（１つまたは複数）などのｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）））の投与を介してＩＭＡＢ３６２を送達することによって達成され得ることを教示する。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生する方法も本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生する方法は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のコード領域を含む少なくとも１つのｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物を、細胞がそのようなｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を発現および分泌するように、そのような細胞に投与することを含む。いくつかの実施形態では、投与または標的化される細胞は、肝細胞であるか、または肝細胞を含む。
いくつかの実施形態では、細胞は細胞培養物中に存在する。
いくつかの実施形態では、細胞は対象に存在する。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、それを必要とする対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が治療的に適切な血漿濃度で産生されるように対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療的に適切な血漿濃度は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して癌細胞死を媒介するのに十分である。例えば、いくつかの実施形態では、治療的に適切な血漿濃度は０．３～２８μｇ／ｍＬである。
とりわけ、本開示はまた、ｓｓＲＮＡが抗体剤の一部または全部をコードするｓｓＲＮＡまたはその組成物の１つ以上の特徴を特徴付ける方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、細胞に導入された少なくとも１つのｍＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程を含み、そのような少なくとも１つのｍＲＮＡは、クローディン１８．１ポリペプチドと比較してクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤をコードするコード領域を含む少なくとも１つ以上のｓｓＲＮＡの特徴の１つ以上を含み、そのような１つ以上の特徴は、（ｉ）抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；および（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物を特徴付ける方法が本明細書で提供される。そのような方法は、（ａ）細胞を本明細書に記載の少なくとも１つの組成物または医薬組成物（ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の一部または全部をコードする）と接触させる工程；および細胞によって産生された抗体剤を検出する工程を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、肝細胞であり得るか、または肝細胞を含み得る。
いくつかの実施形態では、そのような方法は、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定することをさらに含み得、そのような１つ以上の特徴は、（ｉ）抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のそのような特徴を参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の特徴と比較することを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、閾値レベルを超える抗体剤のタンパク質発現レベルを評価することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、閾値レベルは、治療的に適切な血漿濃度に対応する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの抗体剤の結合を評価することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような結合評価は、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドへの抗体剤の結合と比較して、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの抗体剤の結合を決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような結合評価は、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の結合選択性プロファイルに少なくとも匹敵する抗体剤の結合選択性プロファイルを決定することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブである。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法は、抗体剤が以下の特徴：（ａ）閾値レベルを超える、細胞によって発現される抗体剤のタンパク質レベル；（ｂ）ＣＬＤＮ１８．１と比較したＣＬＤＮ－１８．２への抗体剤の選択的結合；ならびに（ｃ）ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣによって媒介される少なくとも５０％の標的細胞（例えば、癌細胞）の死滅を含む場合、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤をＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤として特徴付けることをさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法は、抗体の試験された特徴がゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの特徴に少なくとも匹敵する場合、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤をゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブ等価抗体として特徴付けることをさらに含み得る。
本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程を含むいくつかの実施形態では、そのような工程は、以下の特徴の１つ以上を決定することを含み得る：
・接触または投与の４８時間後に評価した場合、細胞が少なくとも１つのｓｓＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を発現するかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤がＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合するかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤が、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリ結合アッセイで観察されるようなＣＬＤＮ－１８．２に対する同等の標的特異性を示すかどうか；
・免疫エフェクタ細胞（例えば、ＰＢＭＣ細胞）およびＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を抗体剤の存在下でインキュベートした４８時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤が、同じ濃度の参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体で観察されるような標的ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞の少なくとも同等のＡＤＣＣプロファイルを示すかどうか；ならびに
・ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を抗体剤の存在下でヒト血清とインキュベートした２時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法で使用される細胞は、インビボで、例えば対象（例えば、哺乳動物対象、例えば哺乳動物非ヒト対象、例えばマウスまたはサル対象）に存在する。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、そのような対象の１つ以上の組織中の抗体レベルを決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような特徴付けの方法は、そのような組成物または医薬組成物がＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤として特徴付けられる場合、抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に本明細書に記載の組成物または医薬組成物を投与することをさらに含み得る。
また、本開示の範囲内には、以下の工程を含む製造方法が含まれる：
（Ａ）抗体剤の一部または全部をコードするｓｓＲＮＡまたはその組成物の１つ以上の特徴を決定する工程であって、１つ以上の特徴が、
（ｉ）ｓｓＲＮＡの長さおよび／または配列；
（ｉｉ）ｓｓＲＮＡの完全性；
（ｉｉｉ）ｓｓＲＮＡの１つ以上の化学部分の存在および／または位置；
（ｉｖ）ｓｓＲＮＡを細胞に導入した場合の抗体剤の発現の程度；
（ｖ）ｓｓＲＮＡまたはその組成物の安定性；
（ｖｉ）ｓｓＲＮＡが導入された生物由来の生物学的試料中の抗体剤のレベル；
（ｖｉｉ）ｓｓＲＮＡから発現された抗体剤の、任意でＣＬＤＮ－１８．２に対する、および任意でＣＬＤＮ１８．１と比較した結合特異性；
（ｖｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；
（ｉｘ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；
（ｘ）組成物内の脂質の同一性および量／濃度；
（ｘｉ）組成物内の脂質ナノ粒子のサイズ；
（ｘｉｉ）組成物内の脂質ナノ粒子の多分散性；
（ｘｉｉｉ）組成物内のｓｓＲＮＡの量／濃度；
（ｘｉｖ）脂質ナノ粒子内へのｓｓＲＮＡの封入の程度；ならびに
（ｘｖ）それらの組合せ
からなる群より選択される、工程；
（Ｂ）ｓｓＲＮＡまたはその組成物のそのような１つ以上の特徴を適切な参照基準のものと比較する工程；ならびに
（Ｃ）（ｉ）比較により、ｓｓＲＮＡまたはその組成物が参照基準を満たすかまたは超えることが実証される場合、製造および／または配給の１つ以上のさらなる工程のためにｓｓＲＮＡまたはその組成物を指定する工程；あるいは
（ｉｉ）比較により、ｓｓＲＮＡまたはその組成物が参照基準を満たさないかまたは超えないことが実証される場合、代替措置を講じる工程。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）が評価され、ｓｓＲＮＡの１つ以上の特徴が適切な参照基準を満たすかまたは超える場合、そのようなｓｓＲＮＡは、例えば本明細書に記載の脂質粒子を用いた製剤化を含むいくつかの実施形態では、製剤化のために指定される。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物が評価され、組成物の１つ以上の特徴が適切な参照基準を満たすかまたは超える場合、そのような組成物は、組成物の出荷および／または配給のために指定される。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）が製剤化に指定され、および／またはｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物が組成物の出荷および／または配給のために指定される場合、そのような方法は、抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に製剤および／または組成物を投与することをさらに含み得る。
ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の投与レジメンを決定する方法も本明細書で提供される。例えば、いくつかの実施形態では、そのような方法は、（Ａ）所定の投与レジメン下でＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）を投与する工程；（Ｂ）対象の腫瘍サイズを一定期間にわたって定期的に監視または測定する工程；（Ｃ）腫瘍サイズ測定（１回または複数回）に基づいて投与レジメンを評価する工程を含む。例えば、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切でない場合、用量および／もしくは投与頻度を増加させることができる；または、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であるが、対象において有害作用（例えば、毒性作用）が示される場合、用量および／もしくは投与頻度を減少させることができる。医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、対象において有害作用（例えば、毒性作用）が示されない場合、投与レジメンを変更しない。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の投与レジメンを決定するそのような方法は、それぞれヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象（例えば、哺乳動物非ヒト対象）の群で実施され得る。いくつかのそのような実施形態では、動物対象の３０％未満が医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後に腫瘍サイズの減少を示し、および／もしくは動物対象によって示される腫瘍サイズの減少の程度が治療的に適切でない場合、用量および／もしくは投与頻度を増加させることができる；または、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であるが、動物対象の少なくとも３０％において有意な有害作用（例えば、毒性作用）が示される場合、用量および／もしくは投与頻度を減少させることができる。医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、動物対象において有意な有害作用（例えば、毒性作用）が示されない場合、投与レジメンを変更しない。
図１は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする２つのＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体（ＲｉｂｏＭａｂ０１）が初代ヒト肝細胞およびＣＨＯ－Ｋ１細胞において発現されることを示す。（パネルＡ）初代ヒト肝細胞を、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体（ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１）の重鎖および軽鎖をそれぞれコードする２つ以上のＲＮＡを含む組成物０．２２μｇ／ｍＬ～５５．５０μｇ／ｍＬでリポフェクトした。（左）トランスフェクションの４８時間後のＲｉｂｏＭａｂ０１濃度のＥＬＩＳＡ分析。（右）示されたリポフェクションからの細胞培養上清のウェスタンブロット分析。組換え精製ＩＭＡＢ３６２をウェスタンブロット分析の基準として使用した。分析は、非還元条件下で、ＨＲＰ結合抗ヒト抗体を用いて実施した。Ｆｃγ断片特異的および抗κ軽鎖特異的抗体の混合物を、完全長ＩｇＧ、遊離重鎖（ＨＣ）および遊離軽鎖（ＬＣ）の検出に使用した。トランスフェクトされていない初代ヒト肝細胞の上清をモック対照として使用した。（パネルＢ）ＣＨＯ－Ｋ１細胞を２．００～１８２．００ｎｇ／ｍＬのＲＢ＿ＲＭＡＢ０１でリポフェクトした。トランスフェクションの４８時間後にＥＬＩＳＡによって測定したＲｉｂｏＭａｂ０１濃度を示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図２は、ＲｉｂｏＭａｂ０１がＣＬＤＮ－１８．２に特異的な標的に結合することを示す。ＲｉｂｏＭａｂ０１のＣＬＤＮ－１８．２への標的結合を、ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）のＦ（ａｂ'）２断片に対する蛍光標識抗体を使用して可視化したフローサイトメトリ結合アッセイによって決定した。ＲｉｂｏＭａｂ０１含有ＣＨＯ－Ｋ１細胞培養上清（パネルＡおよびＢ、左）またはＩＭＡＢ３６２参照タンパク質（パネルＡおよびＢ、右）の希釈列を、５×１０５個の（パネルＡ）ＣＬＤＮ－１８．２＋または（パネルＢ）ＣＬＤＮ１８．１＋ＨＥＫ２９３トランスフェクタントと共にインキュベートした。 図３は、インビトロで発現されたＲｉｂｏＭａｂ０１によって媒介される高い標的特異的細胞傷害性を示す。ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１でリポフェクトしたＣＨＯ－Ｋ１細胞からのＲｉｂｏＭａｂ０１含有細胞培養上清を（パネルＡ）ＡＤＣＣおよび（パネルＢ）ＣＤＣアッセイに供した。（パネルＡ）ＡＤＣＣアッセイのために、ＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＵＧ－Ｃ４トランスフェクタントを標的細胞として使用し、ＣＬＤＮ－１８．２陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を対照細胞として使用した。３人の異なる健常ドナーのヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として利用した（Ｅ：Ｔ比３０：１）。標的細胞または対照細胞およびエフェクタ細胞を、示されているＲｉｂｏＭａｂ０１およびＩＭＡＢ３６２参照タンパク質濃度と共に４８時間インキュベートした。ルシフェラーゼに基づくアッセイで測定された特異的細胞溶解を示している。（パネルＢ）ＣＤＣアッセイのために、ＣＬＤＮ－１８．２＋ＣＨＯ－Ｋ１トランスフェクタント（実線）を標的細胞として使用し、ＣＬＤＮ－１８．２陰性ＣＨＯ－Ｋ１（点線）を対照細胞として使用した。標的細胞および対照細胞を、示されているヒト血清およびＲｉｂｏＭａｂ０１濃度と共に２時間インキュベートした。ルシフェラーゼに基づくアッセイで測定されたＣＤＣを示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図４は、マウスにおいて生成されたＲｉｂｏＭａｂ０１によって媒介される特異的腫瘍細胞溶解を示す。１μｇ（約０．０４ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）および３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＲＢ＿ＲＭＡＢ０１または８０μｇ（約３．２０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２のいずれかの５回の反復注射を投与したマウスの血漿を、５回目の注射の２４時間後に採取し、ルシフェラーゼに基づくエクスビボＡＤＣＣアッセイに供した。ＩＭＡＢ３６２を添加した未処置マウスの血漿をアッセイ基準として使用した。ＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＵＧ－Ｃ４トランスフェクタントを標的として使用し、ヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として使用した。（パネルＡ）１％の血漿との４８時間のインキュベーション後のＮＵＧ－Ｃ４細胞のＲｉｂｏＭａｂ０１媒介ＡＤＣＣを示している。（パネルＢ）標的陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対する非特異的溶解なし。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図５は、非ヒト霊長動物によって発現されるＲｉｂｏＭａｂ０１が用量依存的ＡＤＣＣを媒介することを示す。非ヒト霊長動物（ＮＨＰ）に、０．１、０．４または１．６ｍｇ／ｋｇ ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１の３回の反復用量を週に１回投与した。１回目の注射の２４時間後（黒色のバー）および１６８時間後（白色のバー）に採取した全てのサルのＲｉｂｏＭａｂ０１含有血清を、ルシフェラーゼに基づくエクスビボＡＤＣＣアッセイに供した。ＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＵＧ－Ｃ４トランスフェクタントを標的細胞として使用した。２人の異なる健常ドナー（２４時間、ドナー１、１６８時間、ドナー２）由来のヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として使用した。（パネルＡ）４８時間のインキュベーション後のＮＵＧ－Ｃ４細胞のＲｉｂｏＭａｂ０１媒介ＡＤＣＣを示している。（パネルＢ）標的陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞での非特異的溶解を示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。（パネルＣ）３回目の投与の４８時間後に採取したＮＨＰ Ｎｏ．１４の血清（１．６ｍｇ／ｋｇ ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１、ＲｉｂｏＭａｂ０１血清濃度２３２μｇ／ｍＬ）を、ルシフェラーゼに基づくエクスビボＡＤＣＣアッセイに使用した。ＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＵＧ－Ｃ４トランスフェクタント（実線）を標的細胞として使用し、ＣＬＤＮ－１８．２陰性ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（点線）を対照細胞として使用した。健常ドナーのヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として使用した。それぞれ６６ｐＭおよび１５１ｐＭのＥＣ５０を有するＲｉｂｏＭａｂ０１含有血清（赤色の実線）または組換えＩＭＡＢ３６２参照タンパク質（黒色の実線）によって媒介されるＮＵＧ－Ｃ４細胞のＡＤＣＣを示している。赤色の点線および黒色の点線は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１対照細胞での弱い非特異的溶解を表す。インキュベーション時間は４８時間であった。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図６は、ＲｉｂｏＭａｂ０１の全身利用可能性がインビボで腫瘍成長阻害を媒介することを示す。皮下ＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＣＩ－Ｎ８７異種移植腫瘍を担持するマウスに、腫瘍細胞接種後１５、２２、２９、３６、４３および５０日目の試験日に、１μｇ（約０．０４ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）および３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＲＢ＿ＲＭＡＢ０１、８００μｇ（約３２ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２参照タンパク質、３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のルシフェラーゼｍＲＮＡまたは生理食塩水のみのＩＶ注射を行った。処置群および対照群の腫瘍成長中央値を示している。点線は注射を示す。有意性を二元配置ＡＮＯＶＡによって計算した。Ｎｓは有意でないことを示す。 図７は、単回投与後のマウス血清中のＲｉｂｏＭａｂ０１の濃度－時間プロファイルを示す。Ｂａｌｂ／ｃＪＲｊマウスに、１μｇ（約０．０４０ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）または３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＲＢ＿ＲＭＡＢ０１薬物および４０μｇ（約１．６０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２参照タンパク質の単回ＩＶ注射を行った。投与の６、２４、９６、１６８、２６４、３３６および５０４時間後に血漿を採取した。ＥＬＩＳＡによって測定した血漿中のＲｉｂｏＭａｂ０１濃度を示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図８は、単回投与後のラット血清中のＲｉｂｏＭａｂ０１の濃度－時間プロファイルを示す。ＲｊＨａｎ：Ｗｉｓｔｅｒラットに、０．０４、０．１０、０．４０または１．２０ｍｇ／ｋｇのＲＢ＿ＲＭＡＢ０１および３．６０ｍｇ／ｋｇのＩＭＡＢ３６２参照タンパク質の単回ＩＶ注射を行った。投与の２、６、８、１０、２２、２４、２７、３０、４８、７２、９６、１６８、２１６、２６４および３３６時間後に血漿を採取した。ＥＬＩＳＡによって測定した血漿中のＲｉｂｏＭａｂ０１濃度を示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図９は、毎週の注射後のマウスにおけるＲＢ＿ＲＭＡＢ０１発現の動態を示す。Ｂａｌｂ／ｃＪＲｊマウスに、１、８、１５、２１および２９日目の試験日に、１μｇ（約０．０４ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）または３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＲＢ＿ＲＭＡＢ０１および８０μｇ（約３．２０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２参照タンパク質のＩＶ注射を行った。投与の２４時間前および２４時間後に血漿を採取した。ＥＬＩＳＡによって測定した血漿中のＲｉｂｏＭａｂ０１濃度を示している。点線は注射を示す。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図１０は、ＮＨＰにおける反復投与後のＲＢ＿ＲＭＡＢ０１発現の動態を示す。ＮＨＰに、１、８および１５日目の試験日に０．１、０．４または１．６ｍｇ／ｋｇ ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１のＩＶ注射を行った。１回目および３回目の投与の６、２４、４８、７２、９６および１６８時間後ならびに２回目の投与の４８、７２および１６８時間後ならびに３回目の投与の２６４、３３６および５０４時間後に血漿を採取した。ＥＬＩＳＡによって測定した血漿中のＲｉｂｏＭａｂ０１濃度を示している。エラーバーは平均の標準誤差である（ｎ＝３）。 図１１は、インビボでのＬＮＰ製剤化ｍＲＮＡの肝臓標的化を示す。マウスに、ＬＮＰ製剤化ホタルルシフェラーゼｍＲＮＡの単回ＩＶ注射を行った。投与の６、２４、４８、７２および１４４時間後に生物発光を監視した。（パネルＡ）投与の６時間後の生物発光画像を、（左）腹臥位（ｎ＝５）の個々のマウスならびに（右）マウスＮｏ．１および２の単一器官について示している。（パネルＢ）ルシフェラーゼシグナル（光子／秒）の定量化を全ての分析時点について示している（ｎ＝５または３、平均）。ＬＮはリンパ節を示す。 図１２は、様々な抗体剤形式（「ＲｉｂｏＭａｂ」）をコードするのに有用なＲＮＡ技術およびその製剤ならびにその用途の例示的な実施形態を示す。（パネルＡ）ＲｉｂｏＭａｂ（登録商標）プラットフォームは、例えば、単一特異性抗体ＩｇＧ、二重特異性抗体ｂｉ－（ｓｃＦｖ）２および二重特異性抗体Ｆａｂ－（ｓｖＦｖ）２を含むがこれらに限定されない様々な抗体形式をコードするＲＮＡ構築物を提供するために適用可能である。（パネルＢ）いくつかの実施形態では、ＩｇＧなどの治療用抗体は、修飾リボヌクレオチド（例えば、ウリジンをシュードウリジンに置き換えたもの）ｍＲＮＡを含む精製ｍＲＮＡによってコードされ、脂質ナノ粒子に封入され得る（ｍＲＮＡ／ＬＮＰ）。そのようなｍＲＮＡ構築物は、１つ以上の非コード配列要素をさらに含み得る（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）。いくつかの実施形態では、例示的な非コード配列要素には、キャップ構造、５'ＵＴＲ、３'ＵＴＲ、ポリアデニル尾部、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、複合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、および中性ヘルパー脂質を含み得る。そのようなｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、ｍＲＮＡがインビボで翻訳されて抗体を発現するように、インビボで対象に投与することができる。（パネルＣ）本明細書に記載のｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤を投与された患者自身の体細胞は、ｍＲＮＡによってコードされる活性薬物（例えば、ＩｇＧ ＲｉｂｏＭａｂ）を産生することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＶ注射時に、抗体をコードするｍＲＮＡ／ＬＮＰが内在化され、肝細胞によって翻訳され、生物学的に活性なＲｉｂｏＭａｂの全身血漿濃度を生じる。略語：Ａ３０Ｌ７０、３０位のリンカーによって無効化された１００個のアデノシンを測定する、ポリ（Ａ）尾部；ｂｉ、二重特異性；Ｃ、Ｃ末端；ＣＤＳ、コード配列；ＣＨ、定常重鎖ドメイン；ＣＬ、定常軽鎖ドメイン；Ｆａｂ、抗原結合断片；ＩｇＧ、免疫グロブリンＧ；ＬＮＰ、脂質ナノ粒子；ｍ１Ψ、１－メチルシュードウリジン；Ｎ、Ｎ末端；ｓｃＦｖ、一本鎖可変断片；ＴＡＡ、腫瘍関連抗原；ＵＴＲ、非翻訳領域；ＶＨ、可変重鎖ドメイン；ＶＬ、可変軽鎖ドメイン。 図１２は、様々な抗体剤形式（「ＲｉｂｏＭａｂ」）をコードするのに有用なＲＮＡ技術およびその製剤ならびにその用途の例示的な実施形態を示す。（パネルＡ）ＲｉｂｏＭａｂ（登録商標）プラットフォームは、例えば、単一特異性抗体ＩｇＧ、二重特異性抗体ｂｉ－（ｓｃＦｖ）２および二重特異性抗体Ｆａｂ－（ｓｖＦｖ）２を含むがこれらに限定されない様々な抗体形式をコードするＲＮＡ構築物を提供するために適用可能である。（パネルＢ）いくつかの実施形態では、ＩｇＧなどの治療用抗体は、修飾リボヌクレオチド（例えば、ウリジンをシュードウリジンに置き換えたもの）ｍＲＮＡを含む精製ｍＲＮＡによってコードされ、脂質ナノ粒子に封入され得る（ｍＲＮＡ／ＬＮＰ）。そのようなｍＲＮＡ構築物は、１つ以上の非コード配列要素をさらに含み得る（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）。いくつかの実施形態では、例示的な非コード配列要素には、キャップ構造、５'ＵＴＲ、３'ＵＴＲ、ポリアデニル尾部、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、複合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、および中性ヘルパー脂質を含み得る。そのようなｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、ｍＲＮＡがインビボで翻訳されて抗体を発現するように、インビボで対象に投与することができる。（パネルＣ）本明細書に記載のｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤を投与された患者自身の体細胞は、ｍＲＮＡによってコードされる活性薬物（例えば、ＩｇＧ ＲｉｂｏＭａｂ）を産生することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＶ注射時に、抗体をコードするｍＲＮＡ／ＬＮＰが内在化され、肝細胞によって翻訳され、生物学的に活性なＲｉｂｏＭａｂの全身血漿濃度を生じる。略語：Ａ３０Ｌ７０、３０位のリンカーによって無効化された１００個のアデノシンを測定する、ポリ（Ａ）尾部；ｂｉ、二重特異性；Ｃ、Ｃ末端；ＣＤＳ、コード配列；ＣＨ、定常重鎖ドメイン；ＣＬ、定常軽鎖ドメイン；Ｆａｂ、抗原結合断片；ＩｇＧ、免疫グロブリンＧ；ＬＮＰ、脂質ナノ粒子；ｍ１Ψ、１－メチルシュードウリジン；Ｎ、Ｎ末端；ｓｃＦｖ、一本鎖可変断片；ＴＡＡ、腫瘍関連抗原；ＵＴＲ、非翻訳領域；ＶＨ、可変重鎖ドメイン；ＶＬ、可変軽鎖ドメイン。 図１２は、様々な抗体剤形式（「ＲｉｂｏＭａｂ」）をコードするのに有用なＲＮＡ技術およびその製剤ならびにその用途の例示的な実施形態を示す。（パネルＡ）ＲｉｂｏＭａｂ（登録商標）プラットフォームは、例えば、単一特異性抗体ＩｇＧ、二重特異性抗体ｂｉ－（ｓｃＦｖ）２および二重特異性抗体Ｆａｂ－（ｓｖＦｖ）２を含むがこれらに限定されない様々な抗体形式をコードするＲＮＡ構築物を提供するために適用可能である。（パネルＢ）いくつかの実施形態では、ＩｇＧなどの治療用抗体は、修飾リボヌクレオチド（例えば、ウリジンをシュードウリジンに置き換えたもの）ｍＲＮＡを含む精製ｍＲＮＡによってコードされ、脂質ナノ粒子に封入され得る（ｍＲＮＡ／ＬＮＰ）。そのようなｍＲＮＡ構築物は、１つ以上の非コード配列要素をさらに含み得る（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）。いくつかの実施形態では、例示的な非コード配列要素には、キャップ構造、５'ＵＴＲ、３'ＵＴＲ、ポリアデニル尾部、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、複合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、および中性ヘルパー脂質を含み得る。そのようなｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、ｍＲＮＡがインビボで翻訳されて抗体を発現するように、インビボで対象に投与することができる。（パネルＣ）本明細書に記載のｍＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤を投与された患者自身の体細胞は、ｍＲＮＡによってコードされる活性薬物（例えば、ＩｇＧ ＲｉｂｏＭａｂ）を産生することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＩＶ注射時に、抗体をコードするｍＲＮＡ／ＬＮＰが内在化され、肝細胞によって翻訳され、生物学的に活性なＲｉｂｏＭａｂの全身血漿濃度を生じる。略語：Ａ３０Ｌ７０、３０位のリンカーによって無効化された１００個のアデノシンを測定する、ポリ（Ａ）尾部；ｂｉ、二重特異性；Ｃ、Ｃ末端；ＣＤＳ、コード配列；ＣＨ、定常重鎖ドメイン；ＣＬ、定常軽鎖ドメイン；Ｆａｂ、抗原結合断片；ＩｇＧ、免疫グロブリンＧ；ＬＮＰ、脂質ナノ粒子；ｍ１Ψ、１－メチルシュードウリジン；Ｎ、Ｎ末端；ｓｃＦｖ、一本鎖可変断片；ＴＡＡ、腫瘍関連抗原；ＵＴＲ、非翻訳領域；ＶＨ、可変重鎖ドメイン；ＶＬ、可変軽鎖ドメイン。 図１３は、抗体剤の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）をそれぞれコードする例示的なＲＮＡ構築物の概略図である。図１３に示すように、そのようなＨＣおよびＬＣをコードするＲＮＡ構築物はＲＮＡ組成物（ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１）を形成し、これは、いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子に製剤化されてＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤を形成し得る。略語：ポリＡ、ポリアデニン尾部；ＣＨ、定常重鎖ドメイン；ＣＬ、定常軽鎖ドメイン；Ｓｅｃ、分泌シグナル；ＵＴＲ、非翻訳領域；ＶＨ、可変重鎖ドメイン；ＶＬ、可変軽鎖ドメイン 図１４は、カニクイザルにおけるｔｍａｘでのＲＢ＿ＲＭＡＢ０１の用量－曝露相関を示すグラフである。カニクイザル（ｎ＝３）に０．１、０．４または１．６ｍｇ／ｋｇ ＲＢ＿ＲＭＡＢ０１のＩＶ注射を行った。ＥＬＩＳＡによって測定したＣｍａｘでの血漿中の用量依存的ＲｉｂｏＭａｂ０１濃度（平均、ｎ＝３）を示している。緑色の線は、ヒト対象に投与することができる用量およびその対応する予想血清濃度を示す。 図１５は、抗体の重鎖（ＨＣ）をコードする第１のＲＮＡと抗体の軽鎖（ＬＣ）をコードする第２のＲＮＡとを含む例示的なＲＮＡ混合物の例示的な電気泳動図である。電気泳動図は、それぞれＬＣおよびＨＣの２つのピークを示す。Ａ：ピーク下面積、ｈ：ピークの高さ。
特定の定義
約またはおよそ：本明細書で使用される場合、関心対象の１つ以上の値に適用される「およそ」または「約」という用語は、記載された基準値と類似の値を指す。一般に、文脈内で精通する当業者は、その文脈において「約」または「およそ」によって包含される関連する分散度を理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、言及された値の２５％、２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、またはそれ未満内の値の範囲を包含し得る。
投与すること：本明細書で使用される場合、「投与すること」または「投与」という用語は、典型的には、組成物であるか、または組成物に含まれる薬剤の標的部位または治療される部位への送達を達成するための、対象への組成物の投与を指す。当業者は、適切な状況で、対象、例えばヒトへの投与に利用され得る様々な経路を認識するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、眼内、経口、非経口、局所などであり得る。いくつかの特定の実施形態では、投与は、気管支（例えば、気管支点滴注入によって）、頬側、皮膚（例えば、真皮への局所、皮内、皮膚間、経皮などの１つ以上であり得るかまたはそれらを含み得る）、経腸、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、髄腔内、静脈内、脳室内、特定の器官内（例えば、肝内）、粘膜、鼻、経口、直腸、皮下、舌下、局所、気管（例えば、気管内点滴注入によって）、膣、硝子体などであり得る。いくつかの実施形態では、投与は非経口であり得る。いくつかの実施形態では、投与は経口であり得る。いくつかの実施形態では、投与は単回用量のみを含み得る。いくつかの実施形態では、投与は、固定数の用量の適用を含み得る。いくつかの実施形態では、投与は、間欠的（例えば、時間的に分離された複数の用量）および／または周期的（例えば、共通の期間によって分離された個々の用量）投与である投与を含み得る。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択された期間の連続投与（例えば、灌流）を含み得る。
抗体剤：本明細書で使用される場合、「抗体剤」という用語は、特定の抗原に特異的に結合する薬剤を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、特異的結合を付与するのに十分な免疫グロブリン構造要素を含む任意のポリペプチドまたはポリペプチド複合体を包含する。例示的な抗体剤には、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、抗体剤は、マウス、ウサギ、霊長動物、またはヒト抗体に特徴的な１つ以上の定常領域配列を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体剤は、当技術分野で公知のように、ヒト化、霊長動物化、キメラなどの１つ以上の配列要素を含み得る。多くの実施形態では、「抗体剤」という用語は、代替的な提示において抗体の構造的および機能的特徴を利用するための当技術分野で公知のまたは開発された構築物または形式の１つ以上を指すために使用される。例えば、実施形態では、本開示に従って利用される抗体剤は、無傷のＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体；二重または多重特異性抗体（例えば、Ｚｙｂｏｄｙ（登録商標）など）；抗体断片、例えばＦａｂ断片、Ｆａｂ'断片、Ｆ（ａｂ'）２断片、Ｆｄ'断片、Ｆｄ断片および単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）またはそのセット；一本鎖Ｆｖ；ポリペプチド－Ｆｃ融合物；単一ドメイン抗体（例えば、ＩｇＮＡＲまたはその断片などのサメ単一ドメイン抗体）；ラクダ科抗体；マスクされた抗体（例えば、Ｐｒｏｂｏｄｙ（登録商標））；小モジュール免疫薬（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（「ＳＭＩＰ（商標）」）；一本鎖またはタンデムダイアボディ（ＴａｎｄＡｂ（登録商標））；ＶＨＨ；Ａｎｔｉｃａｌｉｎ（登録商標）；Ｎａｎｏｂｏｄｙ（登録商標）ミニボディ；ＢｉＴＥ（登録商標）；アンキリンリピートタンパク質またはＤＡＲＰＩＮ（登録商標）；Ａｖｉｍｅｒ（登録商標）；ＤＡＲＴ；ＴＣＲ様抗体；Ａｄｎｅｃｔｉｎ（登録商標）；Ａｆｆｉｌｉｎ（登録商標）；Ｔｒａｎｓ－ｂｏｄｙ（登録商標）；Ａｆｆｉｂｏｄｙ（登録商標）；ＴｒｉｍｅｒＸ（登録商標）；マイクロタンパク質；Ｆｙｎｏｍｅｒ（登録商標）、Ｃｅｎｔｙｒｉｎ（登録商標）；およびＫＡＬＢＩＴＯＲ（登録商標）から選択されるが、これらに限定されない形式である。いくつかの実施形態では、抗体は、天然に産生された場合に有するであろう共有結合修飾（例えば、グリカンの付着）を欠いていてもよい。いくつかの実施形態では、抗体は、共有結合修飾（例えば、グリカン、ペイロード［例えば、検出可能部分、治療部分、触媒部分など］、または他のペンダント基［例えば、ポリエチレングリコールなど］の結合）を含み得る。多くの実施形態では、抗体剤は、そのアミノ酸配列が相補性決定領域（ＣＤＲ）として当業者によって認識される１つ以上の構造要素を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む；いくつかの実施形態では、抗体剤は、そのアミノ酸配列が参照抗体に見出されるものと実質的に同一である少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、少なくとも１つの重鎖ＣＤＲおよび／または少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲ）を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、配列が同一であるか、または参照ＣＤＲと比較して１～５個のアミノ酸置換を含むという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、参照ＣＤＲと少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を示すという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、さもなければ参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、さもなければ参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の少なくとも１つのアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して置換されているが、含まれるＣＤＲが、さもなければ参照ＣＤＲのアミノ酸配列と同一であるという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、含まれるＣＤＲは、含まれるＣＤＲ内の１～５個のアミノ酸が参照ＣＤＲと比較して欠失、付加、または置換されているが、含まれるＣＤＲが、さもなければ参照ＣＤＲと同一であるアミノ酸配列を有するという点で、参照ＣＤＲと実質的に同一である。いくつかの実施形態では、抗体剤は、そのアミノ酸配列が免疫グロブリン可変ドメインとして当業者によって認識される構造要素を含むポリペプチドであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、抗体剤は、免疫グロブリン結合ドメインに相同であるかまたは大部分が相同である結合ドメインを有するポリペプチドタンパク質である。
抗体剤は、当技術分野で公知の方法ならびに市販のサービスおよびキットを使用して当業者によって作製され得る。例えば、モノクローナル抗体の調製方法は当技術分野で周知であり、ハイブリドーマ技術およびファージディスプレイ技術を含む。本開示での使用に適したさらなる抗体は、例えば、以下の刊行物に記載されている：Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｅｄｗａｒｄ Ａ．Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ３０，２０１３）；Ｍａｋｉｎｇ ａｎｄ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｅｄｓ．Ｇａｒｙ Ｃ．Ｈｏｗａｒｄ ａｎｄ Ｍａｔｔｈｅｗ Ｒ．Ｋａｓｅｒ．ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（Ｊｕｌｙ ２９，２０１３）；Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）．Ｐａｔｒｉｃｋ Ｃｈａｍｅｓ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ａｕｇｕｓｔ ２１，２０１２）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）．Ｅｄｓ．Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｏｓｓｉｐｏｗ ａｎｄ Ｎｉｃｏｌａｓ Ｆｉｓｃｈｅｒ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｆｅｂｒｕａｒｙ １２，２０１４）；およびＨｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）．Ｍｉｃｈａｅｌ Ｓｔｅｉｎｉｔｚ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ３０，２０１３））。
抗体は、標準的な技術によって、例えば、適切なポリペプチドもしくはその一部（１つもしくは複数）での免疫化によって、またはファージディスプレイライブラリを使用することによって作製され得る。ポリクローナル抗体を所望する場合、選択された哺乳動物（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマなど）を、所望のエピトープ（１つまたは複数）を担持する、任意で別のポリペプチドにハプテン化された免疫原性ポリペプチドで免疫化する。宿主種に応じて、様々なアジュバントを使用して免疫学的応答を増加させ得る。そのようなアジュバントには、フロイント、水酸化アルミニウムなどの鉱物ゲル、ならびにリゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニンおよびジニトロフェノールなどの界面活性物質が含まれるが、これらに限定されない。免疫化した動物からの血清を収集し、公知の手順に従って処理する。所望のエピトープに対するポリクローナル抗体を含有する血清が他の抗原に対する抗体を含有する場合、ポリクローナル抗体は、イムノアフィニティクロマトグラフィまたは当技術分野で公知の任意の他の方法によって精製することができる。ポリクローナル抗血清を生成および処理するための技術は、当技術分野で周知である。
関連する：２つの事象または実体は、その用語が本明細書で使用されるとき、一方の存在、レベルおよび／または形態が他方のものと相関する場合、互いに「関連する」。例えば、特定の生物学的現象（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２の発現）は、その存在が特定の疾患、障害、もしくは状態（例えば、癌）の発生率および／もしくは感受性と相関する（例えば、関連する集団にわたって）か、または治療に対する応答性の可能性と相関する場合、その疾患、障害、または状態と関連すると見なされる。
血液由来試料：本明細書で使用される「血液由来試料」という用語は、それを必要とする対象の血液試料（すなわち、全血試料）に由来する試料を指す。血液由来試料の例には、血漿（例えば、新鮮凍結血漿を含む）、血清、血液画分、血漿画分、血清画分、赤血球（ＲＢＣ）を含む血液画分、血小板、白血球など、およびそれらの画分を含む細胞溶解物（例えば、赤血球、白血球などの細胞を採取し、溶解して細胞溶解物を得ることができる）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の特徴付けに使用される血液由来試料は血漿試料である。
癌：「癌」という用語は、本明細書では、一般に、目的の組織の細胞が比較的異常な、制御されない、および／または自律的な成長を示し、その結果、細胞増殖の制御の有意な喪失を特徴とする異常な成長表現型を示す疾患または状態を指すために使用される。いくつかの実施形態では、癌は、前癌性（例えば、良性）、悪性、前転移性、転移性、および／または非転移性の細胞を含み得る。いくつかの実施形態では、癌は固形腫瘍を特徴とし得る。いくつかの実施形態では、癌は血液腫瘍を特徴とし得る。一般に、当技術分野で公知の様々なタイプの癌の例には、例えば、白血病、リンパ腫（ホジキンおよび非ホジキン）、骨髄腫および骨髄増殖性障害を含む造血性癌；肉腫、黒色腫、腺腫、固形組織の癌腫、口腔、咽喉、喉頭および肺の扁平上皮癌、肝臓癌、前立腺癌、子宮頸癌、膀胱癌、子宮癌および子宮内膜癌などの尿生殖器癌、ならびに腎細胞癌、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、皮膚または眼内黒色腫、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、頭頸部癌、卵巣癌、乳癌、神経膠芽腫、結腸直腸癌、胃腸癌、および神経系の癌、乳頭腫などの良性病変などが含まれる。
キャップ：本明細書で使用される場合、「キャップ」という用語は、典型的にはキャップされていないＲＮＡ（例えば、５'－二リン酸を有する非キャップＲＮＡ）の５'末端に結合しているヌクレオシド－５'－三リン酸を含むかまたは本質的にそれからなる構造を指す。いくつかの実施形態では、キャップは、グアニンヌクレオチドであるか、またはグアニンヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、キャップは、例えば、「ｍ７Ｇ」と呼ばれる構造を有する７－メチルグアノシンキャップを含むがこれに限定されない、天然に存在するＲＮＡ ５'キャップであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、キャップは、例えば、当技術分野で公知のアンチリバースキャップ類似体（ＡＲＣＡ）を含むがこれに限定されない、ＲＮＡキャップ構造に類似し、ＲＮＡに結合した場合にＲＮＡを安定化する能力を有する合成キャップ類似体であるか、またはそれを含む。当業者は、ＲＮＡの５'末端にキャップを結合するための方法が当技術分野で公知であることを理解するであろう。例えば、いくつかの実施形態では、キャップされたＲＮＡは、５'三リン酸基を有するＲＮＡまたは５'二リン酸基を有するＲＮＡを、キャッピング酵素系（例えば、ワクシニアキャッピング酵素系またはサッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）キャッピング酵素系を含むが、これらに限定されない）を用いてインビトロでキャップすることによって得られ得る。あるいは、キャップされたＲＮＡは、一本鎖ＤＮＡ鋳型のインビトロ転写（ＩＶＴ）によって得ることができ、この場合、ＧＴＰに加えて、ＩＶＴ系はまた、当技術分野で公知の方法を使用してジヌクレオチドキャップ類似体（例えば、ｍ７ＧｐｐｐＧキャップ類似体またはＮ７－メチル，２'－Ｏ－メチル－ＧｐｐｐＧ ＡＲＣＡキャップ類似体またはＮ７－メチル，３'－Ｏ－メチル－ＧｐｐｐＧ ＡＲＣＡキャップ類似体を含む）を含有する。
ＣＬＤＮ－１８．２陽性：本明細書で使用される場合、「ＣＬＤＮ－１８．２陽性」または「ＣＬＤＮ－１８．２＋」という用語は、例えば、特定の疾患、障害、もしくは状態に関連し得る、および／または１つ以上の細胞もしくは組織試料であり得るかもしくはそれを含み得る試料中もしくは試料上で検出され得る、臨床的に関連するＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性を指す。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２＋は、臨床的に関連するＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性に関連する癌を指す。特定の例示的な実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性発現および／または活性は、例えば癌細胞におけるデノボＣＬＤＮ－１８．２過剰発現であり得るかまたはそれを含み得る；あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性発現および／または活性は、１つ以上の化学療法剤（例えば、ゲムシタビンおよび／またはシスプラチンを含む）などの１つ以上の薬剤または状態への曝露に関連し得るか、または曝露に関連した可能性がある。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２「陽性」は、適切な参照（例えば、適切に比較可能な非癌細胞（１つもしくは複数）および／もしくは組織（１つもしくは複数）におけるＣＬＤＮ－１８．２レベルおよび／もしくは活性などの「陰性対照」；公知のＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞（１つもしくは複数）および／もしくは組織（１つもしくは複数）について決定された可能性があるＣＬＤＮ－１８．２レベルおよび／もしくは活性などの「陽性対照」；ならびに／または正常（例えば、健康な非癌性）対非正常（例えば、癌）状態に関連するＣＬＤＮ－１８．２レベルおよび／もしくは活性について確立された閾値に対して評価される。いくつかの実施形態では、「ＣＬＤＮ－１８．２＋」という用語は、本明細書では、適切な参照（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２発現について陰性であると決定されたかまたはさもなければ陰性であることが公知の試料において観察されるそのレベル）と比較して高い検出可能なＣＬＤＮ－１８．２タンパク質発現を示すと決定された場合の癌患者からの腫瘍試料を指すために使用される。いくつかの実施形態では、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）新生物組織における免疫組織化学アッセイによって評価されたときに、試料中の腫瘍細胞の５０％以上が≧２＋ＣＬＤＮ－１８．２タンパク質染色強度以上を有すると決定された場合、試料はＣＬＤＮ－１８．２＋であると見なされる；当業者は、病理学者が一般に、腫瘍試料（１つまたは複数）に関して得られたＩＨＣデータの解釈のためにそのようなスコアリングシステムを使用することを認識している。例えば、スコアリングシステムを含むＩＨＣ分析結果の解釈および報告のための様々なアプローチを記載する、Ｆｅｄｃｈｅｎｋｏ ａｎｄ Ｒｅｉｆｅｎｒａｔｈ，Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１４）９：２２１を参照。Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ（２０１４）４８－５８も参照のこと。したがって、病理学者は、２＋が２以上の悪性度スコアを指すことを容易に認識し、これは、そのような免疫組織化学アッセイの結果が望みのないものであることを示す。より正確には、２＋は、「陰性」（０）、「弱い」（１）、「中程度」（２）、「強い」（３）からの定性的尺度で中程度または強い染色を表す。
同時投与：本明細書で使用される場合、「同時投与」という用語は、別の治療（例えば、手術、放射線、ならびに／または本明細書に記載の化学療法剤などの別の治療薬、および／もしくは関連する疾患、障害もしくは状態の１つ以上の症状もしくは属性を軽減する薬剤および／もしくは投与される療法［例えば、化学療法］の投与）と組み合わせて、対象が両方を受けるように、本明細書に記載の医薬組成物を使用することを指す。本明細書に記載される医薬組成物とそのような他の療法との併用投与は、同時に（例えば、重複プロトコルによって）または別々に（例えば、任意の順序で連続的に）実施され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１つの薬学的に許容される担体中で組み合わされた（例えば、単一剤形で）２つ以上の活性薬剤を含み得る。あるいは、いくつかの実施形態では、同時投与は、２つ以上の物理的に異なる医薬組成物の投与を含み、そのそれぞれが異なる活性薬剤または薬剤の組合せを含み得る；いくつかのそのような実施形態では、そのような別個の医薬組成物の１つ以上の（いくつかの実施形態では、全ての）用量を実質的に同時に投与し得る。いくつかの実施形態では、そのような別個の医薬組成物の１つ以上の（いくつかの実施形態では、全ての）用量は、例えば重複レジメンまたは連続レジメンに従って別々に投与され得る。一般に、２つ以上の療法は、それらが投与される標的細胞または対象に対してそれぞれによって生成される生物学的効果（１つまたは複数）に少なくともいくらかの時間的重複がある、時間的に十分に近接して送達または投与される場合、「同時投与される」と見なされ得る。
併用療法：本明細書で使用される場合、「併用療法」という用語は、対象が２つ以上の治療レジメン（例えば、２つ以上の治療薬）に同時に曝露される状況を指す。いくつかの実施形態では、２つ以上のレジメンは同時に投与され得る；いくつかの実施形態では、そのようなレジメンは連続的に投与され得る（例えば、第１のレジメンの全ての「用量」が第２のレジメンの任意の用量の投与前に投与される）；いくつかの実施形態では、そのような薬剤は重複する投与レジメンで投与される。いくつかの実施形態では、併用療法の「投与」は、１つ以上の薬剤またはモダリティを、組み合わせて他の薬剤（１つもしくは複数）またはモダリティ（１つもしくは複数）を受ける対象に投与することを含み得る。明確にするために、併用療法は、個々の薬剤が単一組成物中で一緒に（または必然的に同時に）投与されることを必要としないが、いくつかの実施形態では、２つ以上の薬剤またはその活性部分が組合せ組成物中で一緒に投与され得る。
同等：本明細書で使用される場合、「同等」という用語は、互いに同一ではない可能性があるが、それらの間の比較を可能にするのに十分に類似している２つ以上の薬剤、実体、状況、条件のセットなどを指し、その結果、当業者は、観察された差異または類似性に基づいて結論が合理的に引き出され得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、条件、状況、個体または集団の同等のセットは、複数の実質的に同一の特徴および１つまたは少数の変化する特徴によって特徴付けられる。当業者は、文脈において、２つ以上のそのような薬剤、実体、状況、条件のセットなどが同等であると見なされるために、任意の所与の状況でどの程度の同一性が必要とされるかを理解するであろう。例えば、当業者は、状況、個体または集団のセットが、異なるセットの状況、個体もしくは集団の下で、または異なるセットの状況、個体もしくは集団に関して得られた結果または観察された現象の違いが、変化するこれらの特徴の変化によって引き起こされるかまたはそれを示す合理的な結論を保証するのに十分な数および種類の実質的に同一の特徴によって特徴付けられる場合、互いに同等であることを理解するであろう。
相補的：本明細書で使用される場合、「相補的」という用語は、塩基対合規則によって関連するオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションに関して使用される。例えば、配列「Ｃ－Ａ－Ｇ－Ｔ」は、配列「Ｇ－Ｔ－Ｃ－Ａ」に相補的である。相補性は部分的または全体的であり得る。したがって、部分的相補性がオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションを可能にする限り、任意の程度の部分的相補性が「相補的」という用語の範囲内に含まれることが意図されている。部分的相補性は、１つ以上の核酸塩基が塩基対合規則に従って一致しない場合である。核酸間の全相補性または完全な相補性は、あらゆる核酸塩基が塩基対合規則の下で別の塩基と一致する場合である。
接触：本明細書で互換的に使用される場合、「送達」、「送達すること」または「接触させること」という用語は、ｓｓＲＮＡが標的細胞（例えば、標的細胞のサイトゾル）に送達されるように、関連する標的（例えば、細胞、組織、生物など）を、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つもしくは複数）またはそれを含むもしくは送達する組成物に曝露することを指す。標的細胞は、インビトロもしくはエクスビボで培養することができ、または対象（インビボ）に存在することができる。当業者は、インビトロ、エクスビボまたはインビボ適用において標的細胞へのそのような送達を達成するために、様々な接触方法を利用し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、培養中の細胞の接触は、インビトロトランスフェクションであり得るか、またはインビトロトランスフェクションを含み得る。いくつかの実施形態では、接触は、１つ以上の送達ビヒクル（例えば、本明細書に記載の脂質ナノ粒子）を利用し得る。いくつかの実施形態では、接触は、本明細書に記載の医薬組成物を対象に投与することであり得るか、またはそれを含み得る。
検出：「検出すること」という用語は、本明細書では広く使用されて、試料中の関心対象の実体の存在もしくは非存在または関心対象の実体の任意の測定形態を決定する適切な手段を含む。したがって、「検出すること」は、関心対象の実体の存在もしくは非存在、レベル、量、および／または位置を決定、測定、評価、またはアッセイすることを含み得る。半定量的を含む定量的および定性的な決定、測定または評価が含まれる。そのような決定、測定または評価は、例えば関心対象の実体が対照参照と比較して検出されている場合は相対的であってもよく、または絶対的であってもよい。したがって、「定量化すること」という用語は、関心対象の実体を定量化する文脈で使用される場合、絶対的な定量化または相対的な定量化を指すことができる。絶対的な定量化は、関心対象の実体の検出されたレベルを公知の対照標準と相関させることによって（例えば、標準曲線の作成を介して）達成され得る。あるいは、相対的な定量化は、２つ以上の異なる関心対象の実体のそれぞれの、すなわち互いに対する相対的な定量化を提供するために、２つ以上の異なる関心対象の実体間の検出されたレベルまたは量の比較によって達成することができる。
疾患：本明細書で使用される場合、「疾患」という用語は、典型的には対象（例えば、ヒト対象）の組織または系の正常な機能を損なう障害または状態を指し、典型的には特徴的な徴候および／または症状として現れる。いくつかの実施形態では、例示的な疾患は癌である。
コードする：本明細書で使用される場合、「コードする」または「コードすること」という用語は、定義されたヌクレオチドの配列（例えば、ｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸の配列を有する第２の分子の産生を導く第１の分子の配列情報を指す。例えば、ＤＮＡ分子はＲＮＡ分子をコードすることができる（例えば、ＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ酵素を含む転写プロセスによって）。ＲＮＡ分子はポリペプチドをコードすることができる（例えば、翻訳プロセスによって）。したがって、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物学的系においてポリペプチドを産生する場合、そのポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡのコード領域は、そのヌクレオチド配列がそのようなＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のｍＲＮＡ配列と同一であるコード鎖を指す。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡのコード領域は、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のための鋳型として使用され得るそのようなＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の非コード鎖を指す。
エピトープ：本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリン（例えば、抗体または受容体）結合成分またはアプタマーによって特異的に認識される任意の部分を含む。いくつかの実施形態では、エピトープは、抗原上の複数の化学原子または化学基で構成される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子または化学基は、抗原が関連する三次元立体配座をとる場合、表面露出される。いくつかの実施形態では、そのような化学原子または化学基は、抗原がそのような立体配座をとる場合、空間において互いに物理的に近接する。いくつかの実施形態では、少なくともいくつかのそのような化学原子および化学基は、抗原が代替的な立体配座をとる（例えば、線形化されている）場合、互いに物理的に分離されている。
発現：本明細書で使用される場合、核酸配列の「発現」は、以下の事象のうちの１つ以上を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の産生（例えば、転写によって）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセシング（例えば、スプライシング、編集、５'キャップ形成、および／もしくは３'末端形成によって）；（３）ＲＮＡのポリペプチドもしくはタンパク質への翻訳；ならびに／または（４）ポリペプチドもしくはタンパク質の翻訳後修飾。
５プライム非翻訳領域：本明細書で使用される場合、「５プライム非翻訳領域」または「５'ＵＴＲ」という用語は、転写開始部位で始まり、ＲＮＡのコード領域の開始コドン（通常はＡＵＧ）の１ヌクレオチド（ｎｔ）前で終わるｍＲＮＡ分子の配列を指す。
相同性：本明細書で使用される場合、「相同性」または「相同体」という用語は、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）ならびに／またはポリペプチド分子は、それらの配列が少なくとも１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％同一である場合、互いに「相同」であると見なされる。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）ならびに／またはポリペプチド分子は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％類似する（例えば、対応する位置に関連する化学的特性を有する残基を含む）場合、互いに「相同」であると見なされる。例えば、当業者に周知のように、特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」もしくは「親水性」アミノ酸として、および／または「極性」もしくは「非極性」側鎖を有するとして、互いに類似すると分類される。同じ種類の別のアミノ酸に対する１つのアミノ酸の置換は、しばしば「相同的」置換と見なされ得る。
同一性：本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）間ならびに／またはポリペプチド分子間の全体的な関連性を指す。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチド分子（例えば、ＤＮＡ分子および／もしくはＲＮＡ分子）ならびに／またはポリペプチド分子間は、それらの配列が少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一である場合、互いに「実質的に同一」であると見なされる。２つの核酸またはポリペプチド配列の同一性パーセントの計算は、例えば、最適な比較目的のために２つの配列を整列させることによって行うことができる（例えば、最適なアラインメントのために第１の配列および第２の配列の一方または両方にギャップを導入することができ、比較目的のために非同一配列を無視することができる）。特定の実施形態では、比較目的のために整列される配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または実質的に１００％である。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が第２の配列中の対応する位置と同じ残基（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）によって占められている場合、分子はその位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数、および２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある各ギャップの長さを考慮した、配列によって共有される同一の位置の数の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。例えば、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＭｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，１９８９のアルゴリズムを使用して決定することができる。いくつかの例示的な実施形態では、ＡＬＩＧＮプログラムを用いて行われる核酸配列比較は、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティおよび４のギャップペナルティを使用する。あるいは、２つのヌクレオチド配列間の同一性パーセントは、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰマトリックスを使用するＧＣＧソフトウェアパッケージのＧＡＰプログラムを使用して決定することができる。
局所進行腫瘍：本明細書で使用される場合、「局所進行腫瘍」または「局所進行癌」という用語は、当技術分野で認識されている意味を指し、異なる種類の癌によって異なり得る。例えば、いくつかの実施形態では、局所進行腫瘍は、大きいが別の身体部分にはまだ広がっていない腫瘍を指す。いくつかの実施形態では、局所進行腫瘍は、それが始まった組織または器官の外側で成長したが、対象の体内の遠隔部位にはまだ広がっていない癌を表すために使用される。単なる例として、いくつかの実施形態では、局所進行膵臓癌は、典型的には、隣接臓器（例えば、リンパ節、肝臓、十二指腸、上腸間膜動脈、および／または腹腔動脈）への腫瘍拡大を伴うが転移性疾患の徴候がないステージＩＩＩの疾患を指す；しかし、陰性の病理学的マージンでの完全な外科的切除は不可能である。
核酸／ポリヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「核酸」という用語は、少なくとも１０ヌクレオチド以上のポリマーを指す。いくつかの実施形態では、核酸はＤＮＡであるか、またはＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸はＲＮＡであるか、またはＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、核酸はペプチド核酸（ＰＮＡ）であるか、またはペプチド核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸は一本鎖核酸であるか、または一本鎖核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸は二本鎖核酸であるか、または二本鎖核酸を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のホスホジエステル結合を含む骨格を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ホスホジエステル結合と非ホスホジエステル結合の両方を含む骨格を含む。例えば、いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のホスホロチオエート結合もしくは５'－Ｎ－ホスホルアミダイト結合および／または、例えば「ペプチド核酸」におけるように１つ以上のペプチド結合を含む骨格を含み得る。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の、または全ての天然残基（例えば、アデニン、シトシン、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、デオキシチミジン、グアニン、チミン、ウラシル）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上の、または全ての非天然残基を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、ヌクレオシド類似体（例えば、２－アミノアデノシン、２－チオチミジン、イノシン、ピロロピリミジン、３－メチルアデノシン、５－メチルシチジン、Ｃ－５プロピニルシチジン、Ｃ－５プロピニルウリジン、２－アミノアデノシン、Ｃ５－ブロモウリジン、Ｃ５－フルオロウリジン、Ｃ５－ヨードウリジン、Ｃ５－プロピニルウリジン、Ｃ５－プロピニルシチジン、Ｃ５－メチルシチジン、２－アミノアデノシン、７－デアザアデノシン、７－デアザグアノシン、８－オキソアデノシン、８－オキソグアノシン、６－Ｏ－メチルグアニン、２－チオシチジン、メチル化塩基、挿入塩基およびそれらの組合せ）を含む。いくつかの実施形態では、非天然残基は、天然残基におけるものと比較して、１つ以上の修飾糖（例えば、２'－フルオロリボース、リボース、２'－デオキシリボース、アラビノースおよびヘキソース）を含む。いくつかの実施形態では、核酸は、ＲＮＡまたはポリペプチドなどの機能的遺伝子産物をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、１つ以上のイントロンを含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、核酸は、天然源からの単離、例えばインビボもしくはインビトロでの、酵素的合成（例えば、相補的な鋳型に基づく重合によって）、組換え細胞もしくは組換え系での複製、または化学合成によって調製され得る。いくつかの実施形態では、核酸は、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２０、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４２５、４５０、４７５、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、１５００、２０００、２５００、３０００、３５００、４０００、４５００、５０００、５５００、６０００、６５００、７０００、７５００、８０００、８５００、９０００、９５００、１０，０００、１０，５００、１１，０００、１１，５００、１２，０００、１２，５００、１３，０００、１３，５００、１４，０００、１４，５００、１５，０００、１５，５００、１６，０００、１６，５００、１７，０００、１７，５００、１８，０００、１８，５００、１９，０００、１９，５００、または２０，０００またはそれ以上の残基またはヌクレオチド長である。
ヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「ヌクレオチド」という用語は、当技術分野で認識されている意味を指す。ヌクレオチドの数が、例えばポリヌクレオチドのサイズの指標として使用される場合、ヌクレオチドの特定の数は、例えばポリヌクレオチドの一本の鎖上のヌクレオチドの数を指す。
患者：本明細書で使用される場合、「患者」という用語は、疾患または障害または状態に罹患しているかまたはそのリスクがある任意の生物を指す。典型的な患者には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長動物、および／またはヒトなどの哺乳動物）が含まれる。いくつかの実施形態では、患者はヒトである。いくつかの実施形態では、患者は、１つ以上の疾患または障害または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい。いくつかの実施形態では、患者は、疾患または障害または状態の１つ以上の症状を示す。いくつかの実施形態では、患者は、１つ以上の疾患または障害または状態と診断されている。いくつかの実施形態では、提供される技術に適した疾患または障害または状態は、癌または１つ以上の腫瘍の存在であるか、またはそれらを含む。いくつかの実施形態では、患者は、疾患、障害または状態を診断および／または治療するために特定の治療を受けているか、または受けたことがある。いくつかの実施形態では、患者は癌患者である。
ポリペプチド：本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、典型的には、少なくとも３つ以上のアミノ酸のポリマーの当技術分野で認識されている意味を有する。当業者は、「ポリペプチド」という用語が、本明細書に記載される完全な配列を有するポリペプチドだけでなく、そのような完全なポリペプチドの機能的、生物学的に活性なまたは特徴的な断片、部分またはドメイン（例えば、少なくとも１つの活性を保持する断片、部分またはドメイン）であるポリペプチドも包含するように十分に一般的であることが意図されていることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、Ｌ－アミノ酸、Ｄ－アミノ酸、もしくはその両方を含んでもよく、および／または当技術分野で公知の様々なアミノ酸修飾もしくは類似体のいずれかを含んでもよい。有用な修飾には、例えば、末端アセチル化、アミド化、メチル化などが含まれる。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然アミノ酸、非天然アミノ酸、合成アミノ酸、およびそれらの組合せを含み得る（例えば、ペプチド模倣薬であり得るか、またはペプチド模倣薬を含み得る）。
参照／参照基準：本明細書で使用される場合、「参照」は、比較が行われる標準または対照を表す。例えば、いくつかの実施形態では、関心対象の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列または値を、参照または対照の薬剤、動物、個体、集団、試料、配列または値と比較する。いくつかの実施形態では、参照または対照は、関心対象の試験または決定と実質的に同時に試験および／または決定される。いくつかの実施形態では、参照または対照は、任意で有形媒体に具体化された過去の参照または対照である。いくつかの実施形態では、参照または対照は、セット仕様（例えば、関連する許容基準）であるか、またはセット仕様を含む。典型的には、当業者に理解されるように、参照または対照は、評価中のものと同等の条件または状況下で決定されるかまたは特徴付けられる。当業者は、特定の可能な参照または対照への信頼および／または比較を正当化するのに十分な類似性が存在する場合を理解するであろう。
リボヌクレオチド：本明細書で使用される場合、「リボヌクレオチド」という用語は、非修飾リボヌクレオチドおよび修飾リボヌクレオチドを包含する。例えば、非修飾リボヌクレオチドには、プリン塩基のアデニン（Ａ）およびグアニン（Ｇ）、ならびにピリミジン塩基のシトシン（Ｃ）およびウラシル（Ｕ）が含まれる。修飾リボヌクレオチドは、例えば、（ａ）末端修飾、例えば、５'末端修飾（例えば、リン酸化、脱リン酸化、コンジュゲーション、逆結合など）、３'末端修飾（例えば、コンジュゲーション、逆結合など）、（ｂ）塩基修飾、例えば、修飾塩基、安定化塩基、不安定化塩基、またはパートナーの拡張レパートリと塩基対を形成する塩基、または共役塩基による置換、（ｃ）糖修飾（例えば、２'位置もしくは４'位置で）または糖の置換、および（ｄ）ホスホジエステル結合の修飾または置換を含むヌクレオシド間結合修飾を含むがこれらに限定されない、１つ以上の修飾を含み得る。「リボヌクレオチド」という用語はまた、修飾および非修飾リボヌクレオチド三リン酸を含むリボヌクレオチド三リン酸を包含する。
リボ核酸（ＲＮＡ）：本明細書で使用される場合、「ＲＮＡ」という用語は、リボヌクレオチドのポリマーを指す。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは一本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは二本鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、一本鎖部分と二本鎖部分の両方を含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは、上記の「核酸／ポリヌクレオチド」の定義に記載されている骨格構造を含み得る。ＲＮＡは、調節ＲＮＡ（例えば、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡなど）またはメッセンジャＲＮＡ（ｍＲＮＡ）であり得る。ＲＮＡがｍＲＮＡであるいくつかの実施形態では。ＲＮＡがｍＲＮＡであるいくつかの実施形態では、ＲＮＡは、典型的には、その３'末端にポリ（Ａ）領域を含む。ＲＮＡがｍＲＮＡであるいくつかの実施形態では、ＲＮＡは、典型的には、例えば翻訳を開始するためのｍＲＮＡの認識およびリボソームへの結合のための、当技術分野で認識されているキャップ構造をその５'末端に含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡは合成ＲＮＡである。合成ＲＮＡには、インビトロで合成される（例えば、酵素合成法および／または化学合成法によって）ＲＮＡが含まれる。
選択的または特異的：「選択的」または「特異的」という用語は、活性を有する薬剤に関して本明細書で使用される場合、薬剤が潜在的な標的実体、状態または細胞を識別することを意味すると当業者によって理解される。例えば、いくつかの実施形態では、薬剤は、１つ以上の競合する代替標的の存在下でその標的と優先的に結合する場合、その標的に「特異的に」結合すると言われる。多くの実施形態では、特異的相互作用は、標的実体の特定の構造的特徴（例えば、エピトープ、クレフト、結合部位）の存在に依存する。特異性が絶対的である必要はないことが理解されるべきである。いくつかの実施形態では、特異性は、１つ以上の他の潜在的な標的実体（例えば、競合因子）に対する標的結合部分の特異性と比較して評価され得る。いくつかの実施形態では、特異性は、参照特異的結合部分の特異性と比較して評価される。いくつかの実施形態では、特異性は、参照非特異的結合部分の特異性と比較して評価される。いくつかの実施形態では、１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに結合する条件下で競合する代替標的（例えば、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチド）に検出可能に結合しない。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤は、例えばＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドを含むその競合する代替標的（１つまたは複数）と比較して、より高いオン速度、より低いオフ速度、増加した親和性、減少した解離、および／または増加した安定性でＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに結合する。
特異的結合：本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、結合が起こる環境中の可能な結合パートナーを識別する能力を指す。他の潜在的な標的が存在する場合に１つの特定の標的と相互作用する抗体剤は、それが相互作用する標的に「特異的に結合する」と言われる。いくつかの実施形態では、特異的結合は、抗体剤のＣＤＲとそれらのパートナーとの間の会合の程度を検出または決定することによって評価される；いくつかの実施形態では、特異的結合は、抗体剤－パートナー複合体の解離の程度を検出または決定することによって評価される；いくつかの実施形態では、特異的結合は、抗体剤がそのパートナーと別の実体との間の代替相互作用と競合する能力を検出または決定することによって評価される。いくつかの実施形態では、特異的結合は、一連の濃度範囲にわたってそのような検出または決定を行うことによって評価される。
対象：本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、例えば、実験、診断、予防、および／または治療目的のために本明細書に記載の組成物を投与される生物を指す。典型的な対象には、動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、非ヒト霊長動物、飼いならされたペットなどの哺乳動物）およびヒトが含まれる。いくつかの実施形態では、対象はヒト対象である。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）に罹患している。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）に罹患しやすい。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）の１つ以上の症状または特徴を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）の１つ以上の非特異的な症状を示す。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）のいかなる症状または特徴も示さない。いくつかの実施形態では、対象は、疾患、障害または状態（例えば、癌）に対する感受性またはそのリスクに特徴的な１つ以上の特徴を有する人である。いくつかの実施形態では、対象は患者である。いくつかの実施形態では、対象は、診断および／または治療が施される、および／または施されたことがある個体である。
罹患しやすい：疾患、障害または状態に「罹患しやすい」個体は、疾患、障害または状態を発症するリスクがある。いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害または状態のいかなる症状も示さない。いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害、および／または状態と診断されていない。いくつかの実施形態では、疾患、障害または状態に罹患しやすい個体は、疾患、障害または状態の発症に関連する状態に曝露された個体である。いくつかの実施形態では、疾患、障害および／または状態を発症するリスクは、集団ベースのリスク（例えば、疾患、障害または状態に罹患している個体の家族；疾患、障害または状態関連する遺伝子マーカまたは他のバイオマーカのキャリアなど）である。
罹患している：疾患、障害および／または状態に「罹患している」個体は、疾患、障害および／もしくは状態と診断されている、ならびに／または疾患、障害および／もしくは状態の１つ以上の症状を示す。
合成：本明細書で使用される場合、「合成」という用語は、人工的であるか、または人間の介入で作製されるか、または天然ではなく合成から生じる実体を指す。例えば、いくつかの実施形態では、合成核酸または合成ポリヌクレオチドは、例えば、いくつかの実施形態では固相合成によって化学的に合成される核酸分子を指す。いくつかの実施形態では、「合成」という用語は、生物学的細胞の外部で作製される実体を指す。例えば、いくつかの実施形態では、合成核酸または合成ポリヌクレオチドは、鋳型を使用したインビトロ転写によって産生される核酸分子（例えば、ＲＮＡ）を指す。
治療薬：本明細書で互換的に使用される場合、「治療薬」または「療法」という語句は、対象または患者に投与された場合、治療効果を有する、ならびに／または所望の生物学的および／もしくは薬理学的効果を誘発する薬剤または介入を指す。いくつかの実施形態では、治療薬または療法は、疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を緩和する、改善する、軽減する、阻害する、予防する、発症を遅延させる、重症度を低減する、および／または発生率を低減するために使用することができる任意の物質である。いくつかの実施形態では、治療薬または療法は、疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を緩和する、軽減する、阻害する、提示する、発症を遅延させる、重症度を低減する、および／または発生率を低減するために実施することができる医学的介入（例えば、手術、放射線、光線療法）である。
３プライム非翻訳領域：本明細書で使用される場合、「３プライム非翻訳領域」または「３'ＵＴＲ」という用語は、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの後に始まるｍＲＮＡ分子の配列を指す。いくつかの実施形態では、３'ＵＴＲは、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの直後に始まる。他の実施形態では、３'ＵＴＲは、オープンリーディングフレーム配列のコード領域の終止コドンの直後には始まらない。
閾値レベル（例えば、許容基準）：本明細書で使用される場合、「閾値レベル」という用語は、測定結果、例えば、アッセイで得られた測定結果に関する情報を得るおよび／または測定結果を分類するための参照として使用されるレベルを指す。例えば、いくつかの実施形態では、閾値レベルは、集団の２つのサブセット間の分割線（例えば、品質管理基準を満たすバッチ対品質管理基準を満たさないバッチ）を定義するアッセイで測定された値を意味する。したがって、閾値レベル以上の値は集団の一方のサブセットを定義し、閾値レベルより低い値は集団の他方のサブセットを定義する。閾値レベルは、１つ以上の対照試料に基づいて、または対照試料の集団にわたって決定することができる。閾値レベルは、関心対象の測定の前、測定と同時に、または測定後に決定することができる。いくつかの実施形態では、閾値レベルは値の範囲であり得る。
治療する：本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療」または「治療すること」という用語は、疾患、障害および／または状態の１つ以上の症状または特徴を部分的または完全に緩和する、改善する、軽減する、阻害する、予防する、発症を遅延させる、重症度を低減する、および／または発生率を低減するために使用される任意の方法を指す。治療は、疾患、障害および／または状態の徴候を示さない対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療は、例えば、疾患、障害および／または状態に関連する病態を発症するリスクを低下させる目的で、疾患、障害および／または状態の初期徴候のみを示す対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療は、疾患、障害および／または状態の後期段階で対象に投与され得る。
切除不能腫瘍：本明細書で使用される場合、「切除不能腫瘍」という用語は、典型的には、健全な医学的判断に従って、腫瘍が手術によって安全に（例えば、対象に過度の害を与えることなく）除去することができないことを示すと考えられる１つ以上の特徴によって特徴付けられる腫瘍、および／または適格な医療専門家が、腫瘍除去の対象に対するリスクがそのような除去に関連する利益を上回ると判断した腫瘍を指す。いくつかの実施形態では、切除不能腫瘍は、必須の器官もしくは組織（再建可能でない可能性がある血管を含む）に関与し、および／もしくはその中に成長した腫瘍、ならびに／または１つ以上の他の重要なもしくは必須の器官および／もしくは組織（血管を含む）に対する損傷の不当な危険性を伴わずに外科的に容易にアクセスすることができない場所にある腫瘍を指す。いくつかの実施形態では、腫瘍の「切除不能性」は、マージン陰性（Ｒ０）切除を達成する可能性を指す。膵臓癌に関連して、上腸間膜動脈（ＳＭＡ）または腹腔動脈などの腫瘍による主要血管の包み込み、門脈閉塞、および腹腔または傍大動脈リンパ節症の存在が、一般に、Ｒ０手術を不可能にする所見として認められている。当業者は、腫瘍が切除不能であるか否かを決定するパラメータを理解するであろう。
本明細書を読む当業者は、多くの実施形態では、標準的な技術が利用可能であり、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、組織培養および／または形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション、トランスフェクション）に使用され得ることを理解するであろう。酵素反応および／または精製技術は、典型的には、製造者の仕様に従って、または当技術分野で一般的に達成されるように、または本明細書に記載されるように実施され得る。多くの実施形態では、前述の技術および手順は、一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、本明細書を通して引用され、論じられる様々な一般的およびより具体的な参考文献に記載されているように実施され得る。例えば、任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照。
標準治療（ＳＯＣ）療法の転帰は、多くの癌患者、特に再発性または難治性の進行性固形腫瘍を有する患者にとって依然として不良である。治療選択肢は、典型的には、細胞傷害性化合物への以前の反復曝露後に忍容性が低い可能性があるさらなる緩和化学療法、または最良の支持療法、および実証された利益のない治験治療を含む。この集団における治療は治癒的ではなく、予想される全生存期間は数ヶ月である。免疫療法は、満たされていない医学的必要性が高い一部の癌における有効な治療選択肢として浮上している。具体的には、免疫チェックポイント阻害剤は、様々な癌適応症にわたる治療のために承認されており、既存の抗腫瘍特異的Ｔ細胞を活性化することによって作用する。様々な癌種に対する医学的必要性は依然として高い。本開示は、とりわけ、クローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）を標的とする療法で癌（例えば、膵臓癌および／または胆管癌）を治療するための洞察および技術を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、強力な抗腫瘍特徴と優れた安全性プロファイルの両方を組み合わせ、時間のかかる面倒な抗体製造プロセスのハードルを省く、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とするモノクローナル抗体を送達するためのＲＮＡ技術を提供する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、そのようなＲＮＡ送達様式が、対応する（例えば、コードされた）タンパク質（例えば、抗体）剤自体が投与された場合に観察されるものと比較して、治療下で発現した有害事象（「ＴＥＡＥ」）の発生率の低下（例えば、頻度および／もしくは重症度）、ならびに／または有効性レベルとＴＥＡＥレベルとの間の関係の改善（例えば、治療ウィンドウの改善）を伴う有効な投与などの１つ以上の改善を達成し得ることを提案する。特に、本開示は、そのような改善が、特に、核酸、特にそれをコードするＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、ｍＲＮＡ（１つまたは複数）などのｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）））の投与を介してＩＭＡＢ３６２を送達することによって達成され得ることを教示する。
いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、対象（例えば、ヒト患者、モデル生物など）への静脈内（ＩＶ）投与のために任意で脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を用いて製剤化された抗体剤（例えば、ＩＭＡＢ３６２）またはその機能的部分をコードするｍＲＮＡ（１つまたは複数）が、例えば、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤について図１４に示すように、治療的に適切な血漿濃度でコードされた抗体剤（例えば、ＩＭＡＢ３６２）を効率的に産生するために標的細胞（例えば、肝細胞）によって取り込まれ得るという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、抗体剤は、ｍＲＮＡから発現され、例えば、最小限の免疫原性のために操作され、および／または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化される。いくつかの実施形態では、抗体剤をコードするｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド（例えば、限定されないが、シュードウリジン）を含み得る。
さらに、本開示は、とりわけ、本明細書に記載されるように送達されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の能力が、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができ、一方で、レシピエント対象の免疫系を活用することにより、化学療法および／または他の抗癌療法の細胞傷害効果（１つまたは複数）を増強することができるという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、そのような併用療法は、例えば、単独で投与される個々の療法および／または別の適切な参照と比較して、無増悪生存期間および／または全生存期間を延長し得る。
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本開示は、例えばゲムシタビン、オキサリプラチンおよび５－フルオロウラシルなどの特定の化学療法剤が、膵臓癌細胞株における既存のＣＬＤＮ－１８．２発現レベルを上方制御することが示されたことを観察する；さらに、これらの薬剤は、ＣＬＤＮ－１８．２陰性細胞株においてデノボ発現を増加させることは観察されなかった。例えば、Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１９）''Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｏｌｂｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ．'' Ｉｎ Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８（１），ｐｐ．ｅ１５２３０９６を参照。
本開示は、とりわけ、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法が、腫瘍細胞（例えば、１つ以上の化学療法剤への曝露から生じ得るかまたは曝露から生じた可能性がある）における、（例えば、示すことが決定されている、および／または示すことが予想もしくは予測される）ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性の上昇を特徴とする腫瘍（１つまたは複数）（例えば、腫瘍細胞、そのような腫瘍（１つもしくは複数）および／または腫瘍細胞（１つもしくは複数）が疑われるおよび／または検出された対象など）に投与された場合に特に有用および／または有効であり得るという洞察を提供する。実際に、とりわけ、本開示は、本明細書に記載の提供されるＣＬＤＮ－１８．２標的化療法（例えば、ＲＮＡなどの核酸、より具体的にはＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｍＲＮＡの投与）が、１つ以上のＣＤＬＮ－１８．２増強剤（例えば、１つ以上の特定の化学療法剤）と組み合わせて（例えば、１つ以上のＣＤＬＮ－１８．２増強剤を受けたことがある、および／または受けている、またはさもなければ曝露されたことがある対象に）投与される場合、相乗的治療を提供し得ることを教示する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法は、腫瘍細胞におけるＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性を上方制御すると予想されるおよび／またはそれが実証されている他の抗癌剤と組み合わせて有用であり得る。
したがって、本開示は、とりわけ、癌、特にＣＬＤＮ－１８．２の発現に関連する癌を治療するための洞察および技術を提供する。いくつかの実施形態では、提供される技術は、膵臓癌の治療に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、胃または胃食道癌の治療に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、胆管癌の治療に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、卵巣癌の治療に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、局所進行腫瘍に適用される場合に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、切除不能な腫瘍に適用される場合に有効である。いくつかの実施形態では、提供される技術は、転移性腫瘍に適用される場合に有効である。
Ｉ．クローディン１８．２ポリペプチド
クローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）は、クローディン１８の癌関連スプライスバリアントである。ＣＬＤＮ－１８．２は、上皮および内皮における密着結合の形成に関与する、２０を超える構造的に関連するタンパク質であるクローディンファミリーのメンバーである。
健常組織におけるＣＬＤＮ１８発現。クローディン１８．２は、４つの膜貫通ドメインおよび２つの小さな細胞外ループを有する２７．８ｋＤａのタンパク質である（Ｎｉｉｍｉ ｅｔ ａｌ．２００１）。ＣＬＤＮ－１８．２は、胃上皮の密着結合分子である。胃密着結合は、胃内壁を損傷し得る胃酸の忌避に高度に特化している。
ＣＬＤＮ－１８．２は、高度に選択的な胃系統抗原である（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２００８）。典型的には、その発現は、胃腺の小窩および基底領域における胃上皮の短命の分化細胞に限定される。胃腺の分化した上皮細胞が連続的に補充される幹細胞帯は、ＣＬＤＮ－１８．２陰性である。理論に拘束されることを望むものではないが、一般に、ヒト身体の他の正常な細胞型は転写レベルまたはタンパク質レベルでＣＬＤＮ－１８．２を発現しないと考えられている。
癌におけるＣＬＤＮ１８発現。ＣＬＤＮ－１８．２は、胃癌、胃食道癌（ＧＥ）および膵臓癌（Ｋａｒａｎｊａｗａｌａ ｅｔ ａｌ．２００８；Ｃｏａｔｉ ｅｔ ａｌ．２０１９）（ＰＣ）ならびに前癌性病変（Ｗｏｌｌ ｅｔ ａｌ．２０１４；Ｔａｎａｋａ ｅｔ ａｌ．２０１１）を含む様々なヒト癌で発現される。ＣＬＤＮ－１８．２の腫瘍関連発現はまた、卵巣癌（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２００８）、胆管癌（Ｓｈｉｎｏｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）および肺癌（Ｍｉｃｋｅ ｅｔ ａｌ．２０１４）でも検出されている。
原発性胃腺癌（ＧＡＣ）の約７７％はＣＬＤＮ－１８．２＋である。ＧＡＣの５６％は、腫瘍細胞の少なくとも６０％において免疫組織化学的分析により染色強度≧２＋として定義される強いＣＬＤＮ－１８．２発現を示す。ＣＬＤＮ－１８．２の発現は、腸胃癌よりもびまん性胃癌でより頻度が高い。ＣＬＤＮ－１８．２タンパク質はまた、胃癌のリンパ節転移および卵巣への遠隔転移（いわゆるクルーケンベルク腫瘍）においても頻繁に検出される。さらに、食道腺癌の５０％がＣＬＤＮ－１８．２の有意な発現を示す。
膵臓癌では、ＣＬＤＮ－１８．２は膵管腺癌（ＰＤＡＣ）において６０～９０％の発生率で発現される（Ｋａｒａｎｊａｗａｌａ ｅｔ ａｌ．２００８；Ｗｏｌｌ ｅｔ ａｌ．２０１４）。全ての膵臓新生物の８０％超を占めるＰＤＡＣは、欧州では７番目に多い癌であり、欧州連合では癌関連の死因の４番目である（Ｆｅｒｌａｙ ｅｔ ａｌ．２０１０；Ｊｅｍａｌ ｅｔ ａｌ．２０１１；Ｓｅｕｆｆｅｒｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１２）。ＰＤＡＣを有する患者のほぼ６０％が膜結合ＣＬＤＮ－１８．２を発現し、膵臓神経内分泌新生物を有する患者の２０％でＣＬＤＮ－１８．２が異所性に活性化される。ＣＬＤＮ－１８．２は、原発性および転移性ＰＤＡＣ病変で発現される（Ｗｏｌｌ ｅｔ ａｌ．２０１４）。
ｓｉＲＮＡ技術によるＣＬＤＮ－１８．２の下方制御は、胃癌細胞の増殖の阻害をもたらすことが示されており（Ｎｉｉｍｉ ｅｔ ａｌ．２００１）、ＣＬＤＮ－１８．２＋腫瘍細胞の増殖への関与を示している。
ＩＩ．クローディン１８．２ポリペプチドを標的とする例示的な抗体剤
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドの第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、癌細胞において曝露されるＥＣＤ１のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチド、例えば、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドのＥＣＤ１のエピトープ）に対して、少なくとも約１０－４Ｍ、少なくとも約１０－５Ｍ、少なくとも約１０－６Ｍ、少なくとも約１０－７Ｍ、少なくとも約１０－８Ｍ、少なくとも約１０－９Ｍ、またはそれ未満の結合親和性（例えば、解離定数によって測定される場合）を有し得る。当業者は、場合によっては、結合親和性（例えば、解離定数によって測定される場合）が、２つの分子間の水素結合、静電相互作用、疎水性およびファンデルワールス力などの非共有結合性分子間相互作用によって影響され得ることを理解するであろう。あるいはまたはさらに、リガンドとその標的分子との間の結合親和性は、他の分子の存在によって影響され得る。当業者は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ゲルシフトアッセイ、プルダウンアッセイ、平衡透析、分析超遠心分離、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオレイヤー干渉法、グレーティング結合干渉法、および分光学的アッセイを含むがこれらに限定されない、本開示に従って結合親和性および／または解離定数を測定するための様々な技術に精通している。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体は、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体は、主に組織、例えば肺で発現するクローディン１８の密接に関連するスプライスバリアント１（ＣＬＤＮ１８．１）を含む他のいかなるクローディンファミリーメンバーにも結合しない。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、その各々の内容が、本明細書に記載の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２００７／０５９９９７号、国際公開第２００８／１４５３３８号および国際公開第２０１３／１７４５１０号に記載されているＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体のいずれか１つであり得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、（ａ）以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）を有する可変重鎖ドメイン：（ｉ）アミノ酸残基（ＧＹＴＦＴＳＹＷ）によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸残基（ＩＹＰＳＤＳＹＴ）によって表されるＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）アミノ酸残基（ＴＲＳＷＲＧＮＳＦＤＹ）によって表されるＣＤＲ３；ならびに／または（ｂ）以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）を有する可変軽鎖ドメイン：（ｉ）アミノ酸残基（ＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ）によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸残基（ＷＡＳ）によって表されるＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）アミノ酸残基（ＱＮＤＹＳＹＰＦＴ）によって表されるＣＤＲ３、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、米国特許第９，７５１，９３４号に記載されている関連配列（例えば可変領域配列、例えばＣＤＲおよび／またはフレームワーク（ＦＲ）配列）であるかまたはそれを含む重鎖アミノ酸配列および軽鎖アミノ酸配列を有する。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、以下に示す配列番号１（ここで、配列番号１は米国特許第９，７５１，９３４号の配列番号１１８に対応し、配列番号１の下線が引かれたアミノ酸配列は分泌シグナル配列に対応する）のアミノ酸残基２０～４６７によって表されるアミノ酸配列からなるかまたはそれを含む重鎖と、以下に示す配列番号２（ここで、配列番号２は米国特許第９，７５１，９３４号の配列番号１２５に対応し、配列番号２の下線が引かれたアミノ酸配列は分泌シグナル配列に対応する）のアミノ酸残基２１～２４０によって表されるアミノ酸からなるかまたはそれを含む軽鎖とを有する。
ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩＮＷＶＫＱＲＰ
ＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＳＷＲ
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ＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１）
ＭＥＳＱＴＱＶＬＭＳＬＬＦＷＶＳＧＴＣＧＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹＬＴ
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ＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号２）
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、（ａ）以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）を有する可変重鎖ドメイン：（ｉ）配列番号１のアミノ酸残基４５～５２によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基７０～７７によって表されるＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号１のアミノ酸残基１１６～１２６によって表されるＣＤＲ３；ならびに／または（ｂ）以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）を有する可変軽鎖ドメイン：（ｉ）配列番号２のアミノ酸残基４７～５８によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）配列番号２のアミノ酸残基７６～７８によって表されるＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）配列番号２のアミノ酸残基１１５～１２３によって表されるＣＤＲ３、を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、配列番号１のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含む重鎖と、配列番号２のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含む軽鎖とを有する。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤を、潜在的な免疫原性を低下させ、および／または分泌を改善するように操作することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤のマウス分泌シグナル配列をヒトのもので置き換えることができる。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、以下に示す配列番号３のアミノ酸残基２７～４７４によって表されるアミノ酸配列（下線が引かれたアミノ酸配列は分泌シグナル配列に対応する）からなるかまたはそれを含む重鎖と、以下に示す配列番号４のアミノ酸残基２７～２４６によって表されるアミノ酸からなるかまたはそれを含む軽鎖（下線が引かれたアミノ酸配列は分泌シグナル配列に対応する）とを有する。
ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＷＩ
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ＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３）
ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳＤＩＶＭＴＱＳＰＳＳＬＴＶＴＡＧＥＫＶＴＭＳＣＫＳＳＱＳＬＬＮＳＧＮ
ＱＫＮＹＬＴＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＹＷＡＳＴＲＥＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣ
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いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤は、配列番号３のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含む重鎖と、配列番号４のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含む軽鎖とを有する。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体は、ＩＭＡＢ３６２（ゾルベツキシマブ、クラウジキシマブとしても知られる）である。ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体であるＩＭＡＢ３６２は、進んだ臨床開発中であり（ＮＣＴ０１６３００８３、ＮＣＴ０３８１６１６３、ＮＣＴ０３６５３５０７、ＮＣＴ０３５０５３２０、ＮＣＴ０３５０４３９７）、当技術分野で公知である（例えば、Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８；Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７；Ａｌ－Ｂａｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．２０１７ａ；Ａｌ－Ｂａｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．２０１７ｂ；Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１９；Ｔｒａｒｂａｃｈ ｅｔ ａｌ．２０１４；Ｍｏｒｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１８ａ；Ｓｃｈｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｌｏｒｄｉｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｍｏｒｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１８ｂを参照）。その標的であるＣＬＤＮ－１８．２は、高度に選択的な腫瘍関連表面マーカである。
Ｇａｎｙｍｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ＧｍｂＨによって開発され、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．によって取得されたＩＭＡＢ３６２は、密着結合タンパク質ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする完全なＩｇＧ１抗体であり、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して細胞死を媒介する。ＩＭＡＢ３６２は、ＣＬＤＮ－１８．２の第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）を高い親和性および特異性で認識する（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２００８；Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）。エピトープは、抗体に対する正常な上皮バリアではアクセスできない。密着結合の破壊および細胞分極の喪失は、癌の初期の特徴である。このプロセスにおいて、ＩＭＡＢ３６２のエピトープが露出される。ＩＭＡＢ３６２は、主に組織、例えば肺で発現されるクローディン１８の密接に関連するスプライスバリアント１（ＣＬＤＮ１８．１）を含む他のいかなるクローディンファミリーメンバーにも結合しない。
ＩＭＡＢ３６２＋エピルビシン、オキサリプラチンおよびカペシタビン（ＥＯＸ）を、胃癌および胃食道癌を有する第一選択患者においてＥＯＸに対する第２相ＦＡＳＴ試験（ＮＣＴ０１６３００８３）で試験した（Ｍｏｒｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１８ａ；Ｓｃｈｕｌｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ａｌ－Ｂａｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｌｏｒｄｉｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｍｏｒｌｏｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１８ｂ）。ＦＡＳＴ患者集団には、腫瘍が中程度から強い（≧２＋）染色強度でＣＬＤＮ－１８．２を発現する腫瘍細胞を４０％以上有する患者が含まれた。腫瘍が≧２＋ＣＬＤＮ－１８．２の染色強度を有する７０％以上の腫瘍細胞を有する患者のサブセットは、８００／６００ｍｇ／ｋｇ２用量でのＩＭＡＢ３６２治療から最大の利益を得、全生存期間（ＯＳ）の中央値はほぼ倍増した（Ａｌ－Ｂａｔｒａｎ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｌｏｒｄｉｃｋ ｅｔ ａｌ．２０１６）。７０％以上のＣＬＤＮ－１８．２発現（＋３３．１週間；ｐ＜０．０００５）のＯＳにおけるＩＭＡＢ３６２の利益は、独立中央判定での疾患進行の有意な遅延（＋１４．５週間；ｐ＜０．０００５）およびより高い客観的奏効率（ＯＲＲ）（３５．１％対２７．１％）を伴った。ＩＭＡＢ３６２のＥＯＸへの添加は、患者関連転帰に悪影響を及ぼさなかった。試験全体を通して、全般的健康状態または総ＳＴＯ２２スコアに対する混合効果・反復測定モデルでは、処置群間に有意差は観察されなかったが、ＩＭＡＢ３６２＋ＥＯＸは、ＥＯＸ単独と比較して、全般的健康スコアの悪化を２．６ヶ月間有意に遅延させた（ｐ＝０．００８）。
ＩＭＡＢ３６２はまた、ＣＬＤＮ－１８．２＋胃癌／胃食道癌および膵臓癌を有する患者における第２相および第３相試験の世界的開発プログラムにおいてＡｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ Ｉｎｃ．によって試験されている。
ＩＭＡＢ３６２は、以下の表１に示すように様々な臨床試験で試験されている。
Figure 2023520062000002
Figure 2023520062000003
患者におけるＩＭＡＢ３６２の安全性プロファイルは十分に特徴付けられており、最大１０００ｍｇ／ｍ２ ｑ３ｗ（最大６０３μｇ／ｍＬのＣｍａｘ）の反復投与は、用量制限毒性なしに忍容されている（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８；Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１９）。
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、腫瘍細胞死滅を実行するためのＩＭＡＢ３６２の主要な薬理学的作用機序は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む。インビトロＡＤＣＣ試験によって得られた用量応答曲線に基づいて、９５％の応答をもたらす薬物の濃度は、血清中０．３μｇ／ｍＬ～２８μｇ／ｍＬのＩＭＡＢ３６２濃度で観察される（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８）。例えば、０．３～２８μｇ／ｍＬのＥＣ９５を有するＡＤＣＣを介したＣＬＤＮ－１８．２＋細胞の効率的な溶解が報告されている（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８）。
様々な試験にわたって、ＩＭＡＢ３６２は良好に忍容され、悪心および嘔吐が主要な有害事象（ＡＥ）であり、単剤としておよび化学療法と組み合わせて用量制限毒性（ＤＬＴ）および臨床活性は観察されなかった。
とりわけ、本開示は、ＩＭＡＢ３６２またはそのバリアント（例えば、ＩＭＡＢ３６２の１つ以上の特徴を共有するバリアント、例えば１つ以上（多くの実施形態では全て）のＣＤＲ配列、１つ以上（多くの実施形態では全て）のＦＲ配列、および／もしくは重鎖可変配列および／もしくは軽鎖可変配列などを含む、ならびに／またはＩｇＧ１、ＩｇＭ、ＩｇＡなどのクラスバリアントである、バリアントなど）が、本明細書に記載のリボ核酸の投与による送達のための特に望ましい抗体であり得るという洞察を提供する。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、そのような送達様式が、ＩＭＡＢ３６２抗体自体が投与された場合に観察されるものと比較して、ＩＭＡＢ３６２治療関連有害事象（ＴＥＡＥ）の発生率の低下（例えば、頻度および／または重症度）を伴う有効な投与を達成し得ることを提案する。ＩＭＡＢ３６２（ＮＣＴ０１１９７８８５）を用いた第２ａ相ＭＯＮＯ試験では、ＴＥＡＥが患者の８２％（ｎ＝４４／５４）で発生した；悪心（６１％）、嘔吐（５０％）および疲労（２２％）が最も頻度の高いＴＥＡＥであった。グレード３の嘔吐が１２人の患者（２２％）で報告され、グレード３の悪心が８人の患者（１５％）で報告された。これらの患者は６００ｍｇ／ｍ２の用量を投与された。この試験で観察された悪心および嘔吐は、ＩＭＡＢ３６２の注入を一時停止または減速することによって管理され、ＡＥがＣｍａｘ関連であることを示した（Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１９）。
特に、本開示は、とりわけ、本明細書に記載のリボ核酸（「ＲｉｂｏＭａｂ０１」）として送達されるＩＭＡＢ３６２の薬物動態（ＰＫ）プロファイルが、投与後４８～７２時間に抗体濃度の漸増およびＩＭＡＢ３６２よりも著しく低いＣｍａｘを示したことを実証する。ＲｉｂｏＭａｂ０１のＰＫプロファイルの変化は、ＩＭＡＢ３６２による治療後の患者に見られるＣｍａｘ関連ＡＥを減少させ得る。本開示はまた、下痢などの全身性副作用が観察されなかったことを示す非ヒト霊長動物試験データを提供する。
とりわけ、本開示は、特に医学的必要性が高い特定の適応症において、投与されたＩＭＢ３６２抗体について観察された有利なリスク／利益プロファイルを認識し、本明細書に記載の送達が有効であり得るおよび／または特に望ましい可能性があることを提案する。
ＩＩＩ．抗体ベースの治療薬を送達するためのＲＮＡ技術
組換えタンパク質抗体は、疾患または障害（例えば、癌）の治療のために広く使用されている生物学的製剤であるが、例えば、長い製造プロセス開発、および抗体誘導体の場合、短い血清半減期を含むいくつかの制限を示す。本開示は、とりわけ、新規クラスの抗体ベースの治療薬としてＲｉｂｏＭａｂと呼ばれる抗体剤を患者の細胞で直接発現させるモダリティとしてＲＮＡ技術を利用することによって、例えば、長い製造プロセス開発、および抗体誘導体の場合、短い血清半減期を含む、組換え抗体技術の特定の制限に対処する技術を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、静脈内（ＩＶ）投与のために脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を用いて製剤化されたＲｉｂｏＭａｂが、治療的に適切な血漿濃度でコードされたＲｉｂｏＭａｂ抗体を効率的に産生するために細胞（例えば、肝細胞）によって取り込まれ得るという洞察を提供する（図１４）。いくつかの実施形態では、ＲｉｂｏＭａｂは、ｍＲＮＡによってコードされる抗体剤であり、例えば、最小限の免疫原性のために操作され、および／または脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）に製剤化される。いくつかの実施形態では、抗体剤をコードするｍＲＮＡは、修飾ヌクレオチド（例えば、限定されないが、シュードウリジン）を含み得る。
ＲｉｂｏＭａｂ技術は、様々な抗体形式を送達するために利用することができる。例えば、いくつかの実施形態では、ＲｉｂｏＭａｂ技術を使用して、例えばＩｇＧを含むがこれに限定されない完全な免疫グロブリン（Ｉｇ）を発現させることができる。いくつかの実施形態では、完全な免疫グロブリン（Ｉｇ）は、抗体の重鎖をコードする第１のコード領域と、抗体の軽鎖可変ドメインをコードする第２のコード領域とを含む単一のｓｓＲＮＡによってコードされ得、この単一のｓｓＲＮＡは、内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）または別の内部プロモータまたは「自己切断」２Ａもしくは２Ａ様配列などのペプチド配列（例えば、Ｓｚｙｍｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２２：５８９，Ｍａｙ ２００４；ｅＰｕｂ Ａｐｒｉｌ ４ ２００４）のいずれかを含むかまたはコードして、それぞれの重鎖および軽鎖を生成し、次いでこれをプロセシングして完全なＩｇＧを形成することができる。いくつかの実施形態では、完全なＩｇは、２つの別個のｓｓＲＮＡ：抗体の重鎖をコードするコード領域を含む第１のｓｓＲＮＡおよび抗体の軽鎖をコードするコード領域を含む第２のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。次いで、そのような第１および第２のｓｓＲＮＡは、抗体のそれぞれの鎖に翻訳され、標的細胞において完全なＩｇ抗体を形成する。
いくつかの実施形態では、ＲｉｂｏＭａｂ技術を使用して、例えば、図１２（パネルＡ）に例示されるような、またはＳｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（３）：ｅ１０９１５５５；および／もしくはＳｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２３（７）：８１５－８１７に記載されている、二重特異性抗体バリアントを発現させることができる。例えば、いくつかの実施形態では、二価抗体剤は、第１の標的に対する一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする第１のコード領域と、第２の標的に対するｓｃＦｖをコードする第２のコード領域とを含む単一のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、二価抗体剤は、２つの別個のｓｓＲＮＡ：第１の標的に対するｓｃＦｖをコードするコード領域と第２の標的に対する重鎖抗原結合断片（Ｆａｂ）をコードするコード領域とを含む第１のｓｓＲＮＡ；および同じ第１の標的に対するｓｃＦｖをコードするコード領域と同じ第２の標的に対する軽鎖Ｆａｂをコードするコード領域とを含む第２のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。次いで、そのような第１および第２のｓｓＲＮＡは、抗体のサブユニットに翻訳され、標的細胞において二重特異性抗体を形成する。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ剤（例えば、本明細書に記載されるｓｓＲＮＡ）を担体と共に送達し得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰは、治療的に適切な血漿濃度でコードされたＲｉｂｏＭａｂ抗体を効率的に産生するために、静脈内（ＩＶ）投与され、標的細胞（例えば、肝細胞）によって取り込まれる。
Ａ．クローディン１８．２ポリペプチドに対する抗体剤をコードする、提供される一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）およびその組成物
いくつかの実施形態では、少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）は、上記の「クローディン１８．２ポリペプチドを標的とする例示的な抗体剤」と題するセクションに記載の抗体剤をコードする１つ以上のコード領域を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのｓｓＲＮＡは、上記または本明細書に例示される抗体剤ＩＭＡＢ３６２をコードする１つ以上のコード領域を含む。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、とりわけ、いくつかの実施形態では、抗体剤ＩＭＡＢ３６２が、ＣＬＤＮ－１８．２に特異的に結合し、さらにＣＬＤＮ１８．１と比較してＣＬＤＮ－１８．２に選択的に結合するので、少なくとも部分的には特に有用および／または有効であり得るという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される教示は、ＣＬＤＮ－１８．２に特異的な他の抗体剤、特にＣＬＤＮ１８．１と比較してもＣＬＤＮ－１８．２に選択的に結合するような抗体に適用可能であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）は、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤をコードする１つ以上のコード領域を含む。いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する結合親和性が、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドに対する結合親和性よりも少なくとも５０％以上、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％以上高い。いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する結合親和性が、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドに対する結合親和性よりも少なくとも１．１倍以上、例えば、少なくとも２倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２５倍、少なくとも５０倍、少なくとも７５倍、少なくとも１００倍、少なくとも５００倍、少なくとも１０００倍、少なくとも５０００倍、少なくとも１０，０００倍以上高い。いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、ＣＬＤＮ１８．１を含むいかなる他のクローディンファミリーメンバーにも検出可能に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体剤は、抗体であり得るか、または抗体を含み得る。いくつかの実施形態では、抗体剤は、抗原結合断片であり得るか、または抗原結合断片を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする（およびｓｓＲＮＡなどのＲＮＡ、例えば本明細書に記載のｍＲＮＡによってコードされ得る）抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドの第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）に特異的に結合する。例えば、いくつかの実施形態では、そのような抗体剤は、癌細胞において曝露されるＥＣＤ１のエピトープに特異的に結合する。
いくつかの実施形態では、少なくとも１つのｓｓＲＮＡは、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび抗体剤の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のそのようなＶＨドメイン（１つまたは複数）およびＶＬドメイン（１つまたは複数）は、単一のｓｓＲＮＡ構築物によってコードされ得る；あるいは、いくつかの実施形態では、それらは少なくとも２つの個々のｓｓＲＮＡ構築物によって別々にコードされ得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で利用されるｓｓＲＮＡは、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の少なくともＶＨドメインをコードする重鎖コード領域、およびＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域を含む、２つ以上のコード領域を含む。代替実施形態では、組成物は、（ｉ）ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の抗体剤の少なくともＶＨドメインをコードする重鎖コード領域を含む第１のｓｓＲＮＡ、および（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域を含む第２のｓｓＲＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、重鎖コード領域は、定常重鎖（ＣＨ）ドメインをさらにコードすることができ、および／または軽鎖コード領域は、定常軽鎖（ＣＬ）ドメインをさらにコードすることができる。例えば、いくつかの実施形態では、重鎖コード領域は、免疫グロブリン形態（例えば、ＩｇＧ）のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインをコードし得、ならびに／または軽鎖コード領域は、Ｉｇ形態（例えば、ＩｇＧ）のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のＶＬドメインおよびＣＬドメインをコードし得る。例えば、いくつかの実施形態では、完全な免疫グロブリン（Ｉｇ）は、ＣＬＤＮ－１８．２ Ｉｇ抗体（例えば、ＩｇＧ）の重鎖をコードする第１のコード領域と、ＣＬＤＮ－１８．２ Ｉｇ抗体（例えば、ＩｇＧ）の軽鎖可変ドメインをコードする第２のコード領域とを含む単一のｓｓＲＮＡによってコードされ得、この単一のｓｓＲＮＡは、抗体の重鎖および軽鎖を含む融合タンパク質を得るためのタンパク質翻訳と、適切なプロテアーゼによる融合タンパク質のそれぞれの重鎖および軽鎖への翻訳後切断とを必要とし、次いで、これをプロセシングして完全なＩｇ（例えば、ＩｇＧ）を形成することができる。いくつかの実施形態では、完全なＩｇは、２つの別個のｓｓＲＮＡ：ＣＬＤＮ－１８．２ Ｉｇ抗体（例えば、ＩｇＧ）の重鎖をコードするコード領域を含む第１のｓｓＲＮＡ、およびＣＬＤＮ－１８．２ Ｉｇ抗体（例えば、ＩｇＧ）の軽鎖をコードするコード領域を含む第２のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。次いで、そのような第１および第２のｓｓＲＮＡは、抗体のそれぞれの鎖に翻訳され、標的細胞において完全なＩｇ抗体（例えば、ＩｇＧ）を形成する。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ形態の１つ以上のｓｓＲＮＡによってコードされる抗体剤はＩｇＧ１である。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む：（ｉ）アミノ酸残基（ＧＹＴＦＴＳＹＷ）によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸残基（ＩＹＰＳＤＳＹＴ）によって表されるＣＤＲ２；および（ｉｉｉ）アミノ酸残基（ＴＲＳＷＲＧＮＳＦＤＹ）によって表されるＣＤＲ３。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、以下からなる群より選択される少なくとも１つのＣＤＲ（例えば、１つのＣＤＲ、２つのＣＤＲ、および３つのＣＤＲを含む）をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む：（ｉ）アミノ酸残基（ＱＳＬＬＮＳＧＮＱＫＮＹ）によって表されるＣＤＲ１；（ｉｉ）アミノ酸残基（ＷＡＳ）によって表されるＣＤＲ２；（ｉｉｉ）アミノ酸残基（ＱＮＤＹＳＹＰＦＴ）によって表されるＣＤＲ３。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、配列番号１のアミノ酸残基２０～４６７によって表されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、免疫原性および／または安定性を低下させるために）が、配列番号１の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号１は、１つ以上の非ＣＤＲ領域に対する少なくとも１つ以上の（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、またはそれ以上を含む）アミノ酸修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失および／または置換を含む）を含み得る。いくつかの実施形態では、５０個以下（例えば、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１０個以下、または５個以下を含む）のアミノ酸修飾が、配列番号１の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、配列番号２のアミノ酸残基２１～２４０によって表されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、免疫原性および／または安定性を低下させるために）が、配列番号２の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号２は、１つ以上の非ＣＤＲ領域に対する少なくとも１つ以上の（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、またはそれ以上を含む）アミノ酸修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失および／または置換を含む）を含み得る。いくつかの実施形態では、５０個以下（例えば、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１０個以下、または５個以下を含む）のアミノ酸修飾が、配列番号２の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、配列番号１のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、配列番号２のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、配列番号３のアミノ酸残基２７～４７４によって表されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、免疫原性および／または安定性を低下させるために）が、配列番号３の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号３は、１つ以上の非ＣＤＲ領域に対する少なくとも１つ以上の（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、またはそれ以上を含む）アミノ酸修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失および／または置換を含む）を含み得る。いくつかの実施形態では、５０個以下（例えば、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１０個以下、または５個以下を含む）のアミノ酸修飾が、配列番号３の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、配列番号４のアミノ酸残基２７～２４６によって表されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾（例えば、免疫原性および／または安定性を低下させるために）が、配列番号４の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。例えば、いくつかの実施形態では、配列番号４は、１つ以上の非ＣＤＲ領域に対する少なくとも１つ以上の（例えば、少なくとも１、少なくとも２、少なくとも３、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、少なくとも７、少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、またはそれ以上を含む）アミノ酸修飾（例えば、アミノ酸の挿入、欠失および／または置換を含む）を含み得る。いくつかの実施形態では、５０個以下（例えば、４０個以下、３０個以下、２０個以下、１０個以下、または５個以下を含む）のアミノ酸修飾が、配列番号４の１つ以上の非ＣＤＲ領域に存在し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、配列番号３のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、配列番号４のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの重鎖コード領域は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長重鎖をコードするヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載および／または例示されるような）からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡの軽鎖コード領域は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長軽鎖をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、１つ以上のｓｓＲＮＡを使用して、例えば、その１つがＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドである２つ以上の標的分子に結合する二重特異性または多重特異性抗体剤をコードすることができる。例えば、図１２Ａは、１つ以上のｓｓＲＮＡによってコードされる例示的な二重特異性抗体を示す。例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５（３）：ｅ１０９１５５５、および／またはＳｔａｄｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（２０１７）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２３（７）：８１５－８１７も参照のこと。いくつかの実施形態では、二価抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する（ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較して）一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）をコードする第１のコード領域と、第２の標的（例えば、いくつかの実施形態ではＴ細胞受容体であり得る）に対するｓｃＦｖをコードする第２のコード領域とを含む単一のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、二価抗体剤は、２つの別個のｓｓＲＮＡ：ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する（ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較して）ｓｃＦｖをコードするコード領域と、第２の標的（例えば、いくつかの実施形態ではＴ細胞受容体であり得る）に対する重鎖抗原結合断片（Ｆａｂ）をコードするコード領域とを含む第１のｓｓＲＮＡ；およびＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドを標的とするｓｃＦｖをコードするコード領域と、同じ第２の標的に対する軽鎖Ｆａｂをコードするコード領域とを含む第２のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。いくつかの実施形態では、二価抗体剤は、２つの別個のｓｓＲＮＡ：第１の標的（例えば、いくつかの実施形態ではＴ細胞受容体であり得る）に対するｓｃＦｖをコードするコード領域と、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合する（ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較して）重鎖抗原結合断片（Ｆａｂ）をコードするコード領域とを含む第１のｓｓＲＮＡ；および同じ第１の標的に対するｓｃＦｖをコードするコード領域と、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドを標的とする軽鎖Ｆａｂをコードするコード領域とを含む第２のｓｓＲＮＡによってコードされ得る。次いで、そのような第１および第２のｓｓＲＮＡは、抗体のサブユニットに翻訳され、標的細胞において二重特異性抗体を形成する。
分泌シグナルコード領域：いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤）をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、分泌シグナルコード領域を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような分泌シグナルコード領域は、１つ以上のｓｓＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、例えば、治療される対象に存在する細胞による翻訳時に分泌されることを可能にし、したがって生物学的に活性なＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の血漿濃度をもたらす。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる分泌シグナルコード領域は、非ヒト分泌シグナルをコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。例えば、いくつかの実施形態では、そのような非ヒト分泌シグナルは、いくつかの実施形態ではＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳまたはＭＥＳＱＴＱＶＬＭＳＬＬＦＷＶＳＧＴＣＧのアミノ酸配列であり得るかまたはそれを含む、マウス分泌シグナルであり得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる分泌シグナルコード領域は、いくつかの実施形態ではＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳのアミノ酸配列であり得るかまたはそれを含む、ヒト分泌シグナルをコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の重鎖ドメインをコードするｓｓＲＮＡに含まれる分泌シグナルコード領域は、（ｉ）いくつかの実施形態では、ＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳのアミノ酸配列であり得るかもしくはそれを含み得る、マウス分泌シグナルアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；または（ｉｉ）いくつかの実施形態では、ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳのアミノ酸配列であり得るかもしくはそれを含み得る、ヒト分泌シグナルアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の軽鎖ドメインをコードするｓｓＲＮＡに含まれる分泌シグナルコード領域は、（ｉ）いくつかの実施形態では、ＭＥＳＱＴＱＶＬＭＳＬＬＦＷＶＳＧＴＣＧのアミノ酸配列であり得るかもしくはそれを含み得る、マウス分泌シグナルアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列；または（ｉｉ）いくつかの実施形態では、ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳのアミノ酸配列であり得るかもしくはそれを含み得る、ヒト分泌シグナルアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、少なくとも１つの非コード配列要素を含み得る（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）。非コード配列要素の例には、３'非翻訳領域（ＵＴＲ）、５'ＵＴＲ、ｍＲＮＡの共転写キャッピングのためのキャップ構造、ポリアデニン（ポリＡ）尾部、およびそれらの任意の組合せが含まれるが、これらに限定されない。
ＵＴＲ（５'ＵＴＲおよび／または３'ＵＴＲ）：いくつかの実施形態では、提供されるｓｓＲＮＡは、関心対象の５'ＵＴＲおよび／または関心対象の３'ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列を含み得る。当業者は、ｍＲＮＡ配列の非翻訳領域（例えば、３'ＵＴＲおよび／または５'ＵＴＲ）がｍＲＮＡの安定性、ｍＲＮＡの局在化および／または翻訳効率に寄与し得ることを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、提供されるｓｓＲＮＡは、５'ＵＴＲヌクレオチド配列および／または３'ＵＴＲヌクレオチド配列を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような５'ＵＴＲ配列は、コード配列（例えば、１つ以上のコード領域を包含する）の３'に機能的に連結することができる。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、３'ＵＴＲ配列は、コード配列（例えば、１つ以上のコード領域を包含する）の５'に機能的に連結することができる。
本明細書に記載の任意の態様のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる５'および３'ＵＴＲ配列は、関心対象の遺伝子のオープンリーディングフレームに対して天然に存在するまたは内因性の５'および３'ＵＴＲ配列からなり得るか、またはそれを含み得る。あるいは、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる５'および／または３'ＵＴＲ配列は、コード配列（例えば、１つ以上のコード領域を包含する）に対して内因性ではない；いくつかのそのような実施形態では、そのような５'および／または３'ＵＴＲ配列は、転写されたＲＮＡ配列の安定性および／または翻訳効率を改変するのに有用であり得る。例えば、当業者は、３'ＵＴＲ配列中のＡＵリッチエレメントがｍＲＮＡの安定性を低下させ得ることを理解するであろう。したがって、当業者に理解されるように、当技術分野で周知のＵＴＲの特性に基づいて、転写されたＲＮＡの安定性を高めるように３'および／または５'ＵＴＲを選択または設計することができる。
例えば、当業者は、いくつかの実施形態では、関心対象の遺伝子またはヌクレオチド配列のオープンリーディングフレーム配列のコザック配列からなるかまたはコザック配列を含むヌクレオチド配列を選択し、５'ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列として使用することができることを理解するであろう。当業者に理解されるように、コザック配列は、いくつかのＲＮＡ転写物の翻訳効率を高めることが公知であるが、効率的な翻訳を可能にするために必ずしも全てのＲＮＡに必要ではない。いくつかの実施形態では、提供されるｓｓＲＮＡポリヌクレオチドは、ＲＮＡゲノムが細胞内で安定であるＲＮＡウイルスに由来する５'ＵＴＲをコードするヌクレオチド配列を含むことができる。いくつかの実施形態では、様々な修飾リボヌクレオチド（例えば、本明細書に記載されるような）が、例えば、転写されたＲＮＡ配列のエキソヌクレアーゼ分解を妨げるために、３'および／または５'ＵＴＲにおいて使用され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる５'ＵＴＲは、コザック領域と組み合わされたヒトαグロビンｍＲＮＡに由来し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、１つ以上の３'ＵＴＲを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、例えば、α２グロビン、α１グロビン、βグロビン（例えば、ヒトβグロビン）ｍＲＮＡなどのグロビンｍＲＮＡに由来する２コピーの３'－ＵＴＲを含み得る。いくつかの実施形態では、ヒトβグロビンｍＲＮＡに由来する２コピーの３'ＵＴＲを使用してもよく、例えば、いくつかの実施形態では、タンパク質発現レベルおよび／またはｍＲＮＡの長期持続性を改善するために、ｓｓＲＮＡのコード配列とポリ（Ａ）尾部との間に配置され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡに含まれる３'ＵＴＲは、その内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０６０３１４号に開示されている３'ＵＴＲ配列の１つ以上（例えば、１つ、２つ、３つ、またはそれ以上）であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、３'－ＵＴＲは、「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアにコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する少なくとも２つの配列要素（ＦＩ要素）の組合せであり得る。これらは、ＲＮＡの安定性を付与し、総タンパク質発現を増強する配列のエクスビボ選択プロセスによって同定された（参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０６０３１４号を参照）。
ポリＡ尾部：いくつかの実施形態では、提供されるｓｓＲＮＡは、ポリＡ尾部をコードするヌクレオチド配列を含み得る。ポリＡ尾部は、一連のアデノシンヌクレオチドを含むヌクレオチド配列であり、長さは様々であり得（例えば、少なくとも５個のアデニンヌクレオチド）、数百個までのアデノシンヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、少なくとも３０個以上のアデノシンヌクレオチド、例えば、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、少なくとも１００個、またはそれ以上のアデノシンヌクレオチドを含むヌクレオチド配列である。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、ポリＡホモポリマー尾部であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、カルジオリピンおよび８－アザアデノシンを含むがこれらに限定されない、１つ以上の修飾アデノシンヌクレオシドを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、１つ以上の非アデノインヌクレオチドを含み得る。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部は、その内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１６／００５３２４号に記載されているような破壊されたまたは修飾されたポリＡ尾部であり得るか、またはそれを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡに含まれるポリＡ尾部は、リンカー配列；リンカー配列の５'である、少なくとも２０個の連続するＡヌクレオチドの第１の配列；およびリンカー配列の３'である、少なくとも２０個の連続するＡヌクレオチドの第２の配列を含む修飾ポリＡ配列であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、修飾ポリＡ配列は、以下を含み得る：少なくとも１０個の非Ａヌクレオチド（例えば、Ｔ、Ｇおよび／またはＣヌクレオチド）を含むリンカー配列；リンカー配列の５'である、少なくとも３０個の連続するＡヌクレオチドの第１の配列；ならびにリンカー配列の３'である、少なくとも７０個の連続するＡヌクレオチドの第２の配列。
５'キャップ：いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡは５'キャップを含んでもよく、５'キャップは、転写中にそのようなｓｓＲＮＡに組み込まれ得るか、または転写後にそのようなｓｓＲＮＡに結合され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、ｍＲＮＡの共転写キャッピングのための５'キャップ構造を含み得る。共転写キャッピングのためのキャップ構造の例は、例えば、その内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０５３２９７号に記載されているように、当技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡに含まれる５'キャップは、ｍ７Ｇ（５'）ｐｐｐ（５'）（２'ＯＭｅＡ）ｐＧであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡに含まれる５'キャップは、ｃａｐ１構造［ｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２'－Ｏ）ＡｐＧ］であるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、例えば、いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡ（１つもしくは複数）の安定性を高めるため、および／またはそのようなｓｓＲＮＡの細胞傷害性を低下させるために、少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）のＡ、Ｕ、ＣおよびＧリボヌクレオチドのうちの少なくとも１つは、修飾リボヌクレオチドによって置き換えられ得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ中に存在するシチジン残基の一部または全部が修飾シチジンで置き換えられてもよく、修飾シチジンは、いくつかの実施形態では、例えば５－メチルシチジンであり得る。あるいはまたはさらに、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ中に存在するウリジン残基の一部または全部が修飾ウリジンで置き換えられてもよく、修飾ウリジンは、いくつかの実施形態では、例えばシュードリジン、例えば１－メチルシュードウリジンであり得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ中に存在する全てのウリジン残基が、シュードウリジン、例えば１－メチルシュードウリジンで置換される。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の重鎖をコードするｓｓＲＮＡは、５'から３'方向に：（ａ）５'ＵＴＲコード領域；（ｂ）分泌シグナルコード領域；（ｃ）重鎖コード領域；（ｄ）３'ＵＴＲコード領域；および（ｅ）ポリＡ尾部コード領域を含む。例えば、図１３を参照。いくつかの実施形態では、５'ＵＴＲコード領域は、コザック領域と組み合わされたヒトαグロビンｍＲＮＡに由来する配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、分泌シグナルコード領域は、ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、重鎖コード領域は、ＩｇＧ形態のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの、例えばＩＭＡＢ２６２、または配列番号３のアミノ酸残基２７～４７４によって表されるアミノ酸配列）のＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインをコードする。いくつかの実施形態では、３'ＵＴＲコード領域は、「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアにコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する少なくとも２つの配列要素（ＦＩ要素）の組合せであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部コード領域は、修飾ポリＡ配列（例えば、３０個の連続するアデノシンの直後に挿入されたリンカー配列によって破壊された１００個のアデノシンのポリＡ配列）であるか、または修飾ポリＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡは、ＣＡＰ１構造を含む５'キャップ構造、またはｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２'－Ｏ）ＡｐＧを含む。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジンで置換された全てのウリジンを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の軽鎖をコードするｓｓＲＮＡは、５'から３'方向に：（ａ）５'ＵＴＲコード領域；（ｂ）分泌シグナルコード領域；（ｃ）軽鎖コード領域；（ｄ）３'ＵＴＲコード領域；および（ｅ）ポリＡ尾部コード領域を含む。例えば、図１３を参照。いくつかの実施形態では、５'ＵＴＲコード領域は、コザック領域と組み合わされたヒトαグロビンｍＲＮＡに由来する配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、分泌シグナルコード領域は、ＭＲＶＭＡＰＲＴＬＩＬＬＬＳＧＡＬＡＬＴＥＴＷＡＧＳのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、軽鎖コード領域は、ＩｇＧ形態のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの、例えばＩＭＡＢ２６２、または配列番号４のアミノ酸残基２７～２４６によって表されるアミノ酸配列）のＶＬドメインおよびＣＬドメインをコードする。いくつかの実施形態では、３'ＵＴＲコード領域は、「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアにコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する少なくとも２つの配列要素（ＦＩ要素）の組合せであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、ポリＡ尾部コード領域は、修飾ポリＡ配列（例えば、３０個の連続するアデノシンの直後に挿入されたリンカー配列によって破壊された１００個のアデノシンのポリＡ配列）であるか、または修飾ポリＡ配列を含む。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡは、ＣＡＰ１構造を含む５'キャップ構造、またはｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２'－Ｏ）ＡｐＧを含む。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡは、Ｎ１－メチルシュードウリジンで置換された全てのウリジンを含む。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、１つ以上の一本鎖ｍＲＮＡであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の重鎖（例えば、オープンリーディングフレーム、ＯＲＦ）をコードする一本鎖ｍＲＮＡと、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の軽鎖（例えば、オープンリーディングフレーム、ＯＲＦ）をコードする一本鎖ｍＲＮＡとを含み、標的細胞に導入されると、それぞれのサブユニットに翻訳され、標的細胞において完全なＩｇＧ抗体を形成する。例示的な原薬を図１３に図式的に示す。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ原薬は、ＩｇＧ ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）をそれぞれコードする２つのｓｓＲＮＡの組合せであるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、そのような２つのｓｓＲＮＡのそれぞれを別々に製造することができ、ＲＮＡ原薬は、ＩｇＧ ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体のＨＣおよびＬＣをそれぞれコードするｓｓＲＮＡを、適切な重量比、例えば、適切なＩｇＧ形成のためにＨＣおよびＬＣをコードする一本鎖ＲＮＡの得られるモル比が約１．５：１～１：１．５であるような重量比で混合することによって調製することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＩｇＧ抗体のＨＣおよび／またはＬＣをコードする一本鎖ＲＮＡは、例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために、１つ以上の非コード配列要素を含むことができる。例えば、いくつかの実施形態では、そのような一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、キャップ構造、例えば、細胞外および細胞内ＲＮａｓｅによる分解に対するＲＮＡ分子の耐性を増加させることができ、より高いタンパク質発現をもたらすキャップ構造を含むことができる。いくつかの実施形態では、例示的なキャップ構造は、（ｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ１ ２'－Ｏ））ＡｐＧ（ｃａｐ１）であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、そのような一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、５'および３'非翻訳領域（ＵＴＲ）の一方または両方に１つ以上の非コード配列要素、例えば、分子の細胞内半減期および翻訳効率を有意に増加させることができる、５'および３'ＵＴＲに天然に存在する配列要素を含むことができる（例えば、Ｈｏｌｔｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．２００６；Ｏｒｌａｎｄｉｎｉ ｖｏｎ Ｎｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１９を参照）。いくつかの実施形態では、例示的な５'ＵＴＲ配列要素は、ヒトα－グロビンおよびコザックコンセンサス配列由来の特徴的な配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、例示的な３'ＵＴＲ配列要素は、「スプリットのアミノ末端エンハンサ」（ＡＥＳ）ｍＲＮＡ（Ｆと呼ばれる）およびミトコンドリアにコードされた１２ＳリボソームＲＮＡ（Ｉと呼ばれる）に由来する２つの配列要素（ＦＩ要素）の組合せであるか、またはそれを含む。例示的な３'ＵＴＲ配列要素の配列情報については、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０６０３１４号を参照。いくつかの実施形態では、そのような一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、ポリ（Ａ）尾部、例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるように設計されるものを含むことができる。いくつかの実施形態では、例示的なポリ（Ａ）尾部は、３０個のアデノシン残基のストレッチ、それに続く１０個のヌクレオチドリンカー配列および７０個のアデノシン残基の別のストレッチ（Ａ３０Ｌ７０）を含む１１０ヌクレオチド長の修飾ポリ（Ａ）配列であるか、またはそれを含む。いくつかの実施形態では、そのような一本鎖ＲＮＡオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾リボヌクレオチドを含むことができる。ほんの一例として、いくつかの実施形態では、一本鎖ＲＮＡのウリジンを修飾類似体（例えば、Ｎ１－メチルシュードウリジン）で置換して、免疫調節活性を低減および／または阻害し、したがってインビトロ転写ＲＮＡの翻訳を増強することができる。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ原薬は、以下の表２に開示されるＲＮＡ－ＨＣの構築物を有する第１の一本鎖ＲＮＡ）と、以下の表２に開示されるＲＮＡ－ＬＣの構築物を有する第２の一本鎖ＲＮＡとの組合せであるか、またはそれを含む。いくつかのそのような実施形態では、ＲＮＡ原薬は、第１および第２の一本鎖ＲＮＡを約２：１の重量比で混合することによって調製され得る。
Figure 2023520062000004
Ｂ．例示的な製造プロセス
個々の一本鎖ＲＮＡは、当技術分野で公知の方法によって作製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、一本鎖ＲＮＡは、例えばＤＮＡ鋳型を使用した、インビトロ転写によって作製することができる。本明細書に記載のｓｓＲＮＡを生成するためのインビトロ転写のための鋳型として使用されるプラスミドＤＮＡも、本開示の範囲内である。
ＤＮＡ鋳型は、リボヌクレオチド三リン酸（例えば、ＡＴＰ、ＣＴＰ、ＧＴＰ、ＵＴＰ）を有する適切なＲＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔ７ ＲＮＡポリメラーゼなどの組換えＲＮＡポリメラーゼ）の存在下でのインビトロＲＮＡ合成に使用される。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）は、修飾リボヌクレオチド三リン酸の存在下で合成することができる。ほんの一例として、いくつかの実施形態では、Ｎ１－メチルシュードウリジン三リン酸（ｍ１ΨＴＰ）を使用して、ウリジン三リン酸（ＵＴＰ）を置き換えることができる。当業者には明らかなように、インビトロ転写中、ＲＮＡポリメラーゼ（例えば、本明細書に記載されるおよび／または本明細書で利用されるような）は、典型的には、一本鎖ＤＮＡ鋳型の少なくとも一部を３'→５'方向に移動して、５'→３'方向に一本鎖相補的ＲＮＡを生成する。
ｓｓＲＮＡがポリＡ尾部を含むいくつかの実施形態では、当業者は、そのようなポリＡ尾部が、例えば適切な尾部を有するＰＣＲプライマを使用することによってＤＮＡ鋳型にコードされ得るか、またはインビトロ転写後に、例えば酵素処理（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ポリ（Ａ）ポリメラーゼなどのポリ（Ａ）ポリメラーゼを使用する）によってｓｓＲＮＡに付加され得ることを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、当業者は、ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）への５'キャップの付加が、ＲＮＡの認識およびリボソームへの付着を促進して翻訳を開始させることができ、翻訳効率を高めることを理解するであろう。当業者はまた、５'キャップがＲＮＡ産物を５'エキソヌクレアーゼ媒介分解から保護することもでき、したがって半減期を増加させることを理解するであろう。キャッピングの方法は当技術分野で公知である；当業者は、いくつかの実施形態では、キャッピング系（例えば、酵素ベースのキャッピング系、例えばワクシニアウイルスのキャッピング酵素）の存在下でインビトロ転写後にキャッピングを実施し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、キャップは、キャップが転写中にｓｓＲＮＡに組み込まれるように、複数のリボヌクレオチド三リン酸と共に、インビトロ転写中に導入され得る（共転写キャッピングとしても知られる）。いくつかの実施形態では、共転写キャッピングのための５'キャップ類似体（例えば、本明細書に記載されるもの、例えば、ｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ２'－Ｏ）ＡｐＧ）をインビトロ転写中に使用することができる。重合中に、ＲＮＡは、５'末端が５'キャップ類似体（例えば、ｍ２ ７，３'－ＯＧｐｐｐ（ｍ２'－Ｏ）ＡｐＧ）でキャップされる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡを有効にキャップするために、反応の過程で複数の添加を伴うＧＴＰフェドバッチ手順を使用して低濃度のＧＴＰを維持し得る。
ＲＮＡ転写後、ＤＮＡ鋳型を消化する。いくつかの実施形態では、消化は、適切な条件下でＤＮａｓｅ Ｉを使用して達成することができる。
いくつかの実施形態では、インビトロ転写一本鎖ＲＮＡは、緩衝液、例えば、ＨＥＰＥＳ、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、酢酸緩衝液などの緩衝液中で提供され得る；いくつかの実施形態では、そのような溶液は、例えば、約６．５～約７．５の範囲内のｐＨ、いくつかの実施形態では約７．０のｐＨに緩衝され得る。いくつかの実施形態では、一本鎖ＲＮＡの作製は、以下の工程：精製、混合、濾過、および／または充填のうちの１つ以上の工程をさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、例えば、産生の過程で利用または形成される成分、例えばタンパク質、ＤＮＡ断片および／またはヌクレオチドのような成分を除去するために精製することができる（例えば、いくつかの実施形態では、インビトロ転写反応後に）。当技術分野で公知の様々な核酸精製を本開示に従って使用することができる。特定の精製工程は、例えば、沈殿、カラムクロマトグラフィ（例えば、アニオン性、カチオン性、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）を含むがこれらに限定されない）、固体基質ベースの精製（例えば、磁気ビーズに基づく精製）の１つ以上であり得るか、またはそれらを含み得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、いくつかの実施形態では磁気ビーズベースのクロマトグラフィであり得るかまたはそれを含み得る磁気ビーズベースの精製を使用して精製され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、疎水性相互作用クロマトグラフィ（ＨＩＣ）および／または透析濾過を使用して精製され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、ＨＩＣ、続いて透析濾過を使用して精製され得る。
いくつかの実施形態では、ｄｓＲＮＡは、インビトロ転写中に副産物として得られ得る。いくつかのそのような実施形態では、ｄｓＲＮＡ汚染を除去するために第２の精製工程を実施し得る。例えば、いくつかの実施形態では、セルロース材料（例えば、微結晶セルロース）を使用して、例えばいくつかの実施形態ではクロマトグラフィ形式で、ｄｓＲＮＡ汚染を除去し得る。いくつかの実施形態では、セルロース材料（例えば、微結晶セルロース）を、例えばいくつかの実施形態ではオートクレーブ処理とそれに続く塩基性水溶液、例えばＮａＯＨとのインキュベーションによって、潜在的なＲＮａｓｅ汚染を不活性化するために前処理することができる。いくつかの実施形態では、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／１８２５２４号に記載されている方法に従って、セルロース材料を使用してｓｓＲＮＡを精製し得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡのバッチは、濾過および／または濃縮の１つ以上の工程によってさらに処理され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、例えば、ｄｓＲＮＡ汚染の除去後に、例えばｓｓＲＮＡの濃度を望ましいＲＮＡ濃度に調整するため、および／または緩衝液を原薬緩衝液に交換するために、透析濾過（例えば、いくつかの実施形態では接線流濾過による）にさらに供され得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の重鎖をコードする第１のｓｓＲＮＡおよびＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の軽鎖をコードする第２のｓｓＲＮＡによってコードされ、その結果、両方が翻訳および発現された場合、完全な抗体、第１のｓｓＲＮＡのバッチおよび第２のｓｓＲＮＡのバッチを形成し、それぞれ精製後に（例えば、本明細書に記載されるように）適切な比率で混合することができる。例えば、いくつかの実施形態では、そのような第１のｓｓＲＮＡバッチおよび第２のｓｓＲＮＡバッチは、約１：１．５～約１．５：１のモル比で、例えば、いくつかの実施形態では約１：１のモル比で混合され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡは、適切な容器に充填される前に、０．２μｍの濾過によって処理され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡおよびその組成物は、本明細書に記載のプロセス、または当技術分野で公知のプロセスに従って製造され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡおよびその組成物は大規模に製造され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡのバッチは、１ｇ超、２ｇ超、３ｇ超、４ｇ超、５ｇ超、６ｇ超、７ｇ超、８ｇ超、９ｇ超、１０ｇ超、１５ｇ超、２０ｇ超、またはそれ以上の規模で製造することができる。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡの品質管理は、ｓｓＲＮＡおよび／またはそれを含む組成物の生産プロセス中の任意の時点で実施および／または監視され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＲＮＡの同一性（例えば、配列、長さおよび／またはＲＮＡの性質）、ＲＮＡの完全性、ＲＮＡ濃度、残留ＤＮＡ鋳型、および残留ｄｓＲＮＡの１つ以上を含むＲＮＡ品質管理パラメータは、ｓｓＲＮＡ製造プロセスの各工程または特定の工程後、例えばインビトロ転写後、および／または各精製工程後に評価および／または監視され得る。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、インビトロ転写によって産生される）および／または２つ以上のＲＮＡ（例えば、抗体のＨＣをコードするものと抗体のＬＣをコードするもの）を含む組成物の安定性は、様々な試験保存条件下で、例えば、室温対冷蔵庫または氷点下の温度で一定期間（例えば、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、またはそれ以上）にわたって評価することができる。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）および／またはその組成物は、冷蔵庫温度（例えば、約４℃～約１０℃）で少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月以上を含む少なくとも１ヶ月以上、安定に保存され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）および／またはその組成物は、氷点下の温度（例えば、－２０℃以下）で少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも７ヶ月、少なくとも８ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１０ヶ月、少なくとも１１ヶ月、または少なくとも１２ヶ月以上を含む少なくとも１ヶ月以上、安定に保存され得る。いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）および／またはその組成物は、室温で（例えば、約２５℃で）少なくとも１ヶ月以上安定に保存され得る。
いくつかの実施形態では、実施例１１に記載されるような１つ以上の評価が、ｓｓＲＮＡの製造または他の調製もしくは使用の間に利用され得る（例えば、出荷試験として）。
いくつかの実施形態では、１つ以上の品質管理パラメータを、本明細書に記載のｓｓＲＮＡが許容基準を満たすかまたは超えるかどうかを決定するために評価し得る（例えば、その後の製剤化および／または配給のための出荷のために）。いくつかの実施形態では、そのような品質管理パラメータは、ＲＮＡの完全性、ＲＮＡ濃度、残留ＤＮＡ鋳型および／または残留ｄｓＲＮＡを含み得るが、これらに限定されない。ＲＮＡの品質を評価するための特定の方法は当技術分野で公知である；例えば、当業者は、いくつかの実施形態では、１つ以上の分析試験をＲＮＡ品質評価に使用できることを認識するであろう。そのような特定の分析試験の例には、ゲル電気泳動、紫外吸収、および／またはＰＣＲアッセイが含まれ得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡのバッチは、次の作業工程（１つまたは複数）を決定するために、本明細書に記載の１つ以上の特徴について評価され得る。例えば、一本鎖ＲＮＡのバッチは、ＲＮＡ品質評価が、そのような一本鎖ＲＮＡのバッチが関連する許容基準を満たすかまたは超えることを示す場合、製造および／または製剤化および／または配給の１つ以上のさらなる工程のために指定され得る。さもなければ、そのような一本鎖ＲＮＡのバッチが許容基準を満たさないかまたは超えない場合、代替措置をとることができる（例えば、バッチを廃棄する）。
いくつかの態様では、評価結果を満たすｓｓＲＮＡのバッチを、製造および／または製剤化および／または配給の１つ以上のさらなる工程に利用することができる。
ＩＶ．ＲＮＡ送達技術
提供されるｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、例えば、裸のＲＮＡとしての送達、またはウイルスベクターおよび／もしくは非ウイルスベクター、ポリマーベースのベクター、脂質ベースのベクター、ナノ粒子（例えば、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、脂質－ポリマーハイブリッドナノ粒子など）、および／もしくはペプチドベースのベクターによって媒介される送達を含む、当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して、本明細書に記載される治療適用のために送達され得る。本明細書に記載のｓｓＲＮＡの送達に有用であり得る様々なアプローチに関する情報については、例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｄｈｗａ ｅｔ ａｌ．''Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ａｎｄ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍＲＮＡ－Ｂａｓｅｄ Ｖａｃｃｉｎｅｓ''Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ（２０２０）１０２（２７ ｐａｇｅｓ）を参照。
いくつかの実施形態では、１つ以上のｓｓＲＮＡを、送達（例えば、いくつかの実施形態では静脈内注射による）のために脂質ナノ粒子を用いて製剤化することができる。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、ｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を細胞外ＲＮａｓｅから保護するように設計することができ、および／または標的細胞（例えば、肝細胞）へのＲＮＡの全身送達のために操作することができる。いくつかの実施形態では、そのような脂質ナノ粒子は、ｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を、それを必要とする対象に静脈内投与する場合、ｓｓＲＮＡを送達するのに特に有用であり得る。
Ａ．脂質ナノ粒子
いくつかの実施形態では、提供されるｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）は、脂質ナノ粒子を用いて製剤化され得る。様々な実施形態では、そのような脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約４０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍ、約６０ｎｍ～約１３０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１１０ｎｍ、約７０ｎｍ～約１００ｎｍ、約７０～約９０ｎｍ、または約７０ｎｍ～約８０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有し得る。いくつかの実施形態では、本開示に従って有用であり得る脂質ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約１００ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有し得る。いくつかの実施態様では、脂質ナノ粒子は、約５０ｎｍ～約１５０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有し得る。いくつかの実施態様では、脂質ナノ粒子は、約６０ｎｍ～約１２０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有し得る。いくつかの実施形態では、本開示に従って有用であり得る脂質ナノ粒子は、約３０ｎｍ、３５ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１０５ｎｍ、１１０ｎｍ、１１５ｎｍ、１２０ｎｍ、１２５ｎｍ、１３０ｎｍ、１３５ｎｍ、１４０ｎｍ、１４５ｎｍ、または１５０ｎｍの平均サイズ（例えば、平均直径）を有し得る。
特定の実施形態では、核酸（例えば、ｓｓＲＮＡ）は、提供される脂質ナノ粒子中に存在する場合、水溶液中でヌクレアーゼによる分解に耐性である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、肝臓標的化脂質ナノ粒子である。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、１つ以上のカチオン性脂質（例えば、本明細書に記載されるもの）を含むカチオン性脂質ナノ粒子である。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つのポリマー結合脂質、および少なくとも１つのヘルパー脂質（例えば、少なくとも１つの中性脂質）を含み得る。
１．ヘルパー脂質
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達のための脂質ナノ粒子は、中性脂質、正に帯電した脂質、または負に帯電した脂質であり得る少なくとも１つのヘルパー脂質を含む。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質は、カチオン性脂質ベースの粒子などの脂質ベースの粒子の標的細胞への送達の有効性を高めるのに有用な脂質である。いくつかの実施形態では、ヘルパー脂質は、ＬＮＰの粒径、安定性、および／または封入を最適化するように選択されたその濃度を有する構造脂質であり得るか、またはそれを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達のための脂質ナノ粒子は、中性ヘルパー脂質を含む。そのような中性ヘルパー脂質の例には、ホスファチジルコリン、例えば１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＳＰＣ）、１，２－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＰＣ）、１，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＭＰＣ）、１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＰＯＰＣ）、ｌ，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＯＰＣ）、ホスホファチジルエタノールアミン、例えば１，２－ジオレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、スフィンゴミエリン（ＳＭ）、セラミド、コレステロール、ステロイド、例えばステロールおよびそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。中性脂質は、合成または天然由来であり得る。例えば、その各々の内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０７５５３１号および国際公開第２０１８／０８１４８０号に記載されているような当技術分野で公知の他の中性ヘルパー脂質も、本明細書に記載の脂質ナノ粒子に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達のための脂質ナノ粒子は、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロールを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達のための脂質ナノ粒子は、少なくとも２つのヘルパー脂質（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む。いくつかのそのような実施形態では、脂質ナノ粒子は、ＤＳＰＣおよびコレステロールを含み得る。
２．カチオン性脂質
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達のための脂質ナノ粒子は、カチオン性脂質を含む。カチオン性脂質は、典型的には、正味の正電荷を有する脂質である。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、正電荷を有する１つ以上のアミン基を含み得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、カチオン性、すなわち正に帯電した頭部基を含み得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、カチオン性脂質が正味の正電荷を有する限り、疎水性ドメイン（例えば、中性脂質またはアニオン性脂質の１つ以上のドメイン）を有し得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は極性頭部基を含み、これは、いくつかの態様では、１つ以上のアミン誘導体、例えば第一級、第二級および／もしくは第三級アミン、第四級アンモニウム、アミンの様々な組合せ、アミジニウム塩、またはグアニジンおよび／もしくはイミダゾール基、ならびにピリジニウム、ピペリジンおよびアミノ酸頭部基、例えばリジン、アルギニン、オルニチンおよび／またはトリプトファンを含み得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質の極性頭部基は、１つ以上のアミン誘導体を含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質の極性頭部基は、第四級アンモニウムを含む。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質の頭部基は、複数のカチオン電荷を含み得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質の頭部基は、１つのカチオン電荷を含む。モノカチオン性脂質の例には、ｌ，２－ジミリストイル－ｓｎ－グリセロ－３－エチルホスホコリン（ＤＭＥＰＣ）、１，２－ジ－Ｏ－オクタデセニル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＭＡ）および／または１，２－ジオレオイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＯＴＡＰ）、ｌ，２－ジミリストイル－３－トリメチルアンモニウムプロパン（ＤＭＴＡＰ）、２，３－ジ（テトラデコキシ）プロピル－（２－ヒドロキシエチル）－ジメチルアザニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）、ジドデシル（ジメチル）アザニウムブロミド（ＤＤＡＢ）、ｌ，２－ジオレイルオキシプロピル－３－ジメチル－ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＯＲＩＥ）、３Ｐ－［Ｎ－（Ｎ＼Ｎ'－ジメチルアミノエタン）カルバモイル］コレステロール（ＤＣ－Ｃｈｏｉ）および／またはジオレイルエーテルホスファチジルコリン（ＤＯＥＰＣ）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の正に帯電した脂質構造は、典型的には小胞の形成に使用され得る（例えば安定化のために）１つ以上の他の成分も含み得る。そのような他の成分の例には、限定されないが、脂肪アルコール、脂肪酸、および／もしくはコレステロールエステル、または表面電荷、膜流動性に影響を及ぼし、脂質集合体への脂質の組み込みを補助し得る任意の他の薬学的に許容される賦形剤が含まれる。ステロールの例には、コレステロール、ヘミコハク酸コレステリル、硫酸コレステリル、またはコレステロールの任意の他の誘導体が含まれる。好ましくは、少なくとも１つのカチオン性脂質は、ＤＭＥＰＣおよび／またはＤＯＴＭＡを含む。
いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、ｐＨに依存して正に帯電した形態または中性形態で存在することができるようにイオン化可能である。そのようなカチオン性脂質のイオン化は、異なるｐＨ条件下で脂質粒子の表面電荷に影響を及ぼす可能性があり、これは、いくつかの実施形態では、血漿タンパク質吸収、血液クリアランス、および／または組織分布、ならびにエンドソーム分解性非二重層構造を形成する能力に影響を及ぼし得る。したがって、いくつかの実施形態では、カチオン性脂質は、ｐＨ応答性脂質であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、ｐＨ応答性脂質は、リオトロピック脂質相を形成することができ、ｐＨ５～ｐＨ７．５のｐＫａ値を有する脂肪酸誘導体または他の両親媒性化合物である。これは、脂質がｐＫａ値を超えるｐＨでは帯電せず、ｐＫａ値を下回ると正に帯電することを意味する。いくつかの実施形態では、ｐＨ応答性脂質は、カチオン性脂質に加えて、またはカチオン性脂質の代わりに、例えば１つ以上のｓｓＲＮＡを低ｐＨで脂質または脂質混合物に結合させることによって使用し得る。ｐＨ応答性脂質には、１，２－ジオレイルオキシ－３－ジメチルアミノプロパン（ＤＯＤＭＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、その各々の内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０７５５３１号（例えば、その中の表１および３に提示されるように）ならびに国際公開第２０１８／０８１４８０号（例えば、その中の表１～４に提示されるように）に記載されているような１つ以上のカチオン性脂質を含み得る。
いくつかの実施形態では、本開示に従って有用であり得るカチオン性脂質は、エステル結合を介して少なくとも２つの飽和アルキル鎖に連結された滴定可能な第三級アミノ頭部基を含むアミノ脂質であり、このエステル結合は、容易に加水分解されて、腎経路を介した迅速な分解および／または排出を促進することができる。いくつかの実施形態では、そのようなアミノ脂質は、約６．０～６．５の見かけのｐＫａ（例えば、一実施形態では約６．２５の見かけのｐＫａ）を有し、酸性ｐＨ（例えば、ｐＨ５）で本質的に完全に正に帯電した分子をもたらす。いくつかの実施形態では、そのようなアミノ脂質は、ＬＮＰに組み込まれた場合、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の粒子形成、細胞取り込み、融合原性および／またはエンドソーム放出を調節する異なる物理化学的特性を付与することができる。いくつかの実施形態では、ｐＨ４．０でそのようなアミノ脂質を含む脂質混合物にＲＮＡ水溶液を導入すると、負に帯電したＲＮＡ骨格と正に帯電したカチオン性脂質との間に静電相互作用をもたらすことができる。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、そのような静電相互作用は、ＲＮＡ原薬の効率的な封入と同時に粒子形成をもたらす。ＲＮＡ封入後、得られたＬＮＰを取り囲む培地のｐＨをより中性のｐＨ（例えば、ｐＨ７．４）に調整すると、ＬＮＰの表面電荷の中和をもたらす。他の全ての変数が一定に保持される場合、そのような電荷中性粒子は、細網内皮系によって急速に除去される荷電粒子と比較して、より長いインビボ循環寿命および肝細胞へのより良好な送達を示す。エンドソーム取り込み時に、エンドソームの低いｐＨは、そのようなアミノ脂質を含むＬＮＰを融合原性にし、標的細胞のサイトゾルへのＲＮＡの放出を可能にする。
いくつかの実施形態では、本開示に従って有用であり得るカチオン性脂質は、以下の表３に示される構造の１つを有する：
Figure 2023520062000005
Figure 2023520062000006
Figure 2023520062000007
Figure 2023520062000008
Figure 2023520062000009
Figure 2023520062000010
特定の実施形態では、本開示に従って有用であり得るカチオン性脂質は、実施例１４に示す化学構造を有する（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）であるか、またはそれを含む。
カチオン性脂質は、単独で、または中性脂質、例えばコレステロールおよび／もしくは中性リン脂質と組み合わせて、または他の公知の脂質集合体成分と組み合わせて使用され得る。
３．ポリマー結合脂質
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）の送達に使用するための脂質ナノ粒子は、少なくとも１つのポリマー結合脂質を含み得る。ポリマー結合脂質は、典型的には、脂質部分と、それに結合したポリマー部分とを含む分子である。
いくつかの実施形態では、ポリマー結合脂質はＰＥＧ結合脂質である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ結合脂質は、疎水性脂質層を遮蔽する保護親水性層を形成することによって脂質粒子を立体的に安定化するように設計される。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ結合脂質は、そのような脂質粒子がインビボで投与される場合、血清タンパク質との会合および／または結果として生じる細網内皮系による取り込みを減少させることができる。
様々なＰＥＧ結合脂質が当技術分野で公知であり、これらには、ペグ化ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＡＧ）、例えば、ｌ－（モノメトキシ－ポリエチレングリコール）－２，３－ジミリストイルグリセロール（ＰＥＧ－ＤＭＧ）、ペグ化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）、ＰＥＧコハク酸ジアシルグリセロール（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＡＧ）、例えば、４－Ｏ－（２'，３'－ジ（テトラデカノイルオキシ）プロピル－１－Ｏ－（ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル）ブタンジオエート（ＰＥＧ－Ｓ－ＤＭＧ）、ペグ化セラミド（ＰＥＧ－ｃｅｒ）、またはＰＥＧジアルコキシプロピルカルバメート、例えば、ω－メトキシ（ポリエトキシ）エチル－Ｎ－（２，３－ジ（テトラデカノキシ）プロピル）カルバメートまたは２，３－ジ（テトラデカノキシ）プロピル－Ｎ－（ωメトキシ（ポリエトキシ）エチル）カルバメートなどが含まれるが、これらに限定されない。
特定のＰＥＧ結合脂質（ＰＥＧ化脂質としても知られる）は、臨床試験で安全性が実証されて、臨床的に承認された。ＰＥＧ結合脂質は、エンドソーム局在化およびペイロード送達の前提条件である細胞取り込みに影響を及ぼすことが公知である。本開示は、とりわけ、封入された核酸の薬理学が、ＰＥＧ－脂質アンカーのアルキル鎖長を調節することによって予測可能な方法で制御され得るという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、とりわけ、そのようなＰＥＧ結合脂質が、肝臓へのｓｓＲＮＡの最適な送達を提供するｓｓＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤のために選択され得るという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、そのようなＰＥＧ結合脂質は、立体障壁の機能を有効に果たすために、合理的な溶解特性および／またはその分子量に基づいて設計および／または選択され得る。例えば、いくつかの実施形態では、そのようなＰＥＧ化脂質は、生体膜に対する認識可能な界面活性剤または透過性の増強または妨害作用を示さない。いくつかの実施形態では、そのようなＰＥＧ結合脂質中のＰＥＧは、生分解性アミド結合でジアシル脂質アンカーに連結することができ、それによって迅速な分解および／または排出を促進する。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ結合脂質を含むＬＮＰは、ＰＥＧ化脂質の完全な相補体を保持する。血液区画において、そのようなＰＥＧ化脂質は経時的に粒子から解離し、細胞によってより容易に取り込まれ、最終的にＲＮＡペイロードの放出をもたらす、より融合原性の粒子を明らかにする。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子は、その各々の内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１７／０７５５３１号および国際公開第２０１８／０８１４８０号に記載されているような１つ以上のＰＥＧ結合脂質またはペグ化脂質を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、本開示に従って有用であり得るＰＥＧ結合脂質は、国際公開第２０１７／０７５５３１号に記載されているような構造
Figure 2023520062000011
 またはその薬学的に許容される塩、互変異性体もしくは立体異性体を有することができ、式中、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１０～３０個の炭素原子を含む直鎖または分岐の飽和または不飽和アルキル鎖であり、アルキル鎖は、１つ以上のエステル結合によって中断されていてもよく、ｗは、３０～６０の範囲の平均値を有する。いくつかの実施形態では、Ｒ８およびＲ９は、それぞれ独立して、１２～１６個の炭素原子を含む直鎖の飽和アルキル鎖である。いくつかの実施形態では、ｗは、４３～５３の範囲の平均値を有する。他の実施形態では、平均ｗは約４５である。いくつかの実施形態では、ＰＥＧ結合脂質は、実施例１４に示す化学構造を有する２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるか、またはそれを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の脂質ナノ粒子を形成する脂質は、ポリマー結合脂質、カチオン性脂質、およびヘルパー中性脂質を含む。いくつかのそのような実施形態では、総ポリマー結合脂質は、総脂質の約０．５～５モル％、約０．７～３．５モル％、約１～２．５モル％、約１．５～２モル％、または約１．５～１．８モル％で存在し得る。いくつかの実施形態では、総ポリマー結合脂質は、総脂質の約１～２．５モル％で存在し得る。いくつかの実施形態では、総カチオン性脂質対総ポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）のモル比は、約１００：１～約２０：１、または約５０：１～約２０：１、または約４０：１～約２０：１、または約３５：１～約２５：１であり得る。いくつかの実施形態では、総カチオン性脂質対総ポリマー結合脂質のモル比は、約３５：１～約２５：１であり得る。
本明細書に記載の脂質ナノ粒子中のポリマー結合脂質、カチオン性脂質、およびヘルパー中性脂質を含むいくつかの実施形態では、総カチオン性脂質は、総脂質の約３５～６５モル％、約４０～６０モル％、約４１～４９モル％、約４１～４８モル％、約４２～４８モル％、約４３～４８モル％、約４４～４８モル％、約４５～４８モル％、約４６～４８モル％、または約４７．２～４７．８モル％で存在する。特定の実施形態では、総カチオン性脂質は、総脂質の約４７．０、４７．１、４７．２、４７．３、４７．４、４７．５、４７．６、４７．７、４７．８、４７．９または４８．０モル％で存在する。
本明細書に記載の脂質ナノ粒子中のポリマー結合脂質、カチオン性脂質、およびヘルパー中性脂質を含むいくつかの実施形態では、総中性脂質は、総脂質の約３５～６５モル％、約４０～６０モル％、約４５～５５モル％、または約４７～５２モル％で存在する。いくつかの実施形態では、総中性脂質は、総脂質の３５～６５モル％で存在する。いくつかの実施形態では、総非ステロイド中性脂質（例えば、ＤＰＳＣ）は、総脂質の約５～１５モル％、約７～１３モル％、または９～１１モル％で存在する。いくつかの実施形態では、総非ステロイド中性脂質は、総脂質の約９．５、１０または１０．５モル％で存在する。いくつかの実施形態では、総カチオン性脂質対非ステロイド中性脂質のモル比は、約４．１：１．０～約４．９：１．０、約４．５：１．０～約４．８：１．０、または約４．７：１．０～４．８：１．０の範囲である。いくつかの実施形態では、総ステロイド中性脂質（例えば、コレステロール）は、総脂質の約３５～５０モル％、約３９～４９モル％、約４０～４６モル％、約４０～４４モル％、または約４０～４２モル％で存在する。特定の実施形態では、総ステロイド中性脂質（例えば、コレステロール）は、総脂質の約３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、または４６モル％で存在する。特定の実施形態では、総カチオン性脂質対総ステロイド中性脂質のモル比は、約１．５：１～１：１．２、または約１．２：１～１：１．２である。
いくつかの実施形態では、カチオン性脂質、ポリマー結合脂質、および中性脂質を含む脂質組成物は、総脂質の特定のモルパーセント、または、その各々の内容全体が本明細書に記載の目的のために参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第２０１８／０８１４８０号に記載されているように特定のモル比（互いに対して）で存在する個々の脂質を有することができる。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を形成する脂質は、ポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、および中性脂質を含み、ポリマー結合脂質は総脂質の約１～２．５モル％で存在し、カチオン性脂質は総脂質の３５～６５モル％で存在し、中性脂質は総脂質の３５～６５モル％で存在する。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を形成する脂質は、ポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、および中性脂質を含み、ポリマー結合脂質は総脂質の約１～２モル％で存在し、カチオン性脂質は総脂質の４５～４８．５モル％で存在し、中性脂質は総脂質の４５～５５モル％で存在する。いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子を形成する脂質は、ポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質）、カチオン性脂質、ならびに非ステロイド中性脂質およびステロイド中性脂質を含む中性脂質を含み、ポリマー結合脂質は総脂質の約１～２モル％で存在し、カチオン性脂質は総脂質の４５～４８．５モル％で存在し、非ステロイド中性脂質は総脂質の９～１１モル％で存在し、ステロイド中性脂質は総脂質の約３６～４４モル％で存在する。そのような実施形態の多くでは、ＰＥＧ結合脂質は、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドまたはその誘導体であるか、またはそれを含む。そのような実施形態の多くでは、カチオン性脂質は、（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）またはその誘導体であるか、またはそれを含む。そのような実施形態の多くでは、中性脂質はＤＳＰＣおよびコレステロールを含み、ＤＳＰＣは非ステロイド中性脂質であり、コレステロールはステロイド中性脂質である。
Ｂ．脂質ナノ粒子を作製する例示的な方法
核酸を含む脂質および脂質ナノ粒子ならびにそれらの調製方法は、例えば、その全開示が本明細書に記載の目的のために参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第８，５６９，２５６号、同第５，９６５，５４２号および米国特許出願公開第２０１６／０１９９４８５号、同第２０１６／０００９６３７号、同第２０１５／０２７３０６８号、同第２０１５／０２６５７０８号、同第２０１５／０２０３４４６号、同第２０１５／０００５３６３号、同第２０１４／０３０８３０４号、同第２０１４／０２００２５７号、同第２０１３／０８６３７３号、同第２０１３／０３３８２１０号、同第２０１３／０３２３２６９号、同第２０１３／０２４５１０７号、同第２０１３／０１９５９２０号、同第２０１３／０１２３３３８号、同第２０１３／００２２６４９号、同第２０１３／００１７２２３号、同第２０１２／０２９５８３２号、同第２０１２／０１８３５８１号、同第２０１２／０１７２４１１号、同第２０１２／００２７８０３号、同第２０１２／００５８１８８号、同第２０１１／０３１１５８３号、同第２０１１／０３１１５８２号、同第２０１１／０２６２５２７号、同第２０１１／０２１６６２２号、同第２０１１／０１１７１２５号、同第２０１１／００９１５２５号、同第２０１１／００７６３３５号、同第２０１１／００６００３２号、同第２０１０／０１３０５８８号、同第２００７／００４２０３１号、同第２００６／０２４００９３号、同第２００６／００８３７８０号、同第２００６／０００８９１０号、同第２００５／０１７５６８２号、同第２００５／０１７０５４号、同第２００５／０１１８２５３号、同第２００５／００６４５９５号、同第２００４／０１４２０２５号、同第２００７／００４２０３１号、１９９９／００９０７６号ならびにＰＣＴ国際公開第９９／３９７４１号、同第２０１８／０８１４８０号、同第２０１７／００４１４３号、同第２０１７／０７５５３１号、同第２０１５／１９９９５２号、同第２０１４／００８３３４号、同第２０１３／０８６３７３号、同第２０１３／０８６３２２号、同第２０１３／０１６０５８号、同第２０１３／０８６３７３号、同第２０１１／１４１７０５号および同第２００１／０７５４８号に開示されるものを含めて、当技術分野で公知である。
例えば、いくつかの実施形態では、カチオン性脂質、中性脂質（例えば、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロール）ならびにポリマー結合脂質は、所定のモル比（例えば、本明細書に記載されるもの）でエタノールに可溶化することができる。いくつかの実施態様では、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、約１０：１～３０：１の総脂質対ｓｓＲＮＡ重量比で調製される。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡを酢酸緩衝液中で０．２ｍｇ／ｍＬに希釈することができる。
いくつかの実施形態では、エタノール注入技術を使用して、ｓｓＲＮＡを含むコロイド状脂質分散液を以下のように形成することができる：カチオン性脂質、中性脂質、およびポリマー結合脂質などの脂質を含むエタノール溶液を、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む水溶液に注入する。
いくつかの実施形態では、脂質およびｓｓＲＮＡ溶液は、例えばピストンポンプを使用して、各溶液を制御された流量で混合ユニットに送り込むことによって室温で混合することができる。いくつかの実施形態では、混合ユニットへの脂質溶液およびＲＮＡ溶液の流量は、１：３の比に維持される。混合すると、エタノール性脂質溶液が水性ｓｓＲＮＡで希釈されるにつれて核酸－脂質粒子が形成される。脂質溶解度は低下するが、正電荷を有するカチオン性脂質は負に帯電したＲＮＡと相互作用する。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ封入脂質ナノ粒子を含む溶液は、濃度調整、緩衝液交換、製剤化、および／または濾過の１つ以上によって処理することができる。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ封入脂質ナノ粒子は、濾過、例えば０．２μｍ濾過によって処理することができる。
いくつかの実施形態では、脂質ナノ粒子（ｓｓＲＮを含むまたは含む）の粒径および／または内部構造は、例えば、小角Ｘ線散乱法（ＳＡＸＳ）および／または透過型電子凍結顕微鏡法（ＣｒｙｏＴＥＭ）などの適切な技術によって監視され得る。
Ｖ．クローディン１８．２を標的とする、提供される医薬組成物
いくつかの実施形態では、組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする、提供されるｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）を含む。いくつかの実施形態では、そのようなｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は、それを必要とする対象への投与のために脂質ナノ粒子（例えば、本明細書に記載されるもの）を用いて製剤化され得る。したがって、本明細書で提供される一態様は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする提供されるｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）および脂質ナノ粒子（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む医薬組成物に関し、そのようなｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）は脂質ナノ粒子で封入されている。
医薬組成物が、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする第１のｓｓＲＮＡと、抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする第２のｓｓＲＮＡとを含むいくつかの実施形態では、そのような第１のｓｓＲＮＡおよび第２のｓｓＲＮＡは、約１．５：１～約１：１．５のモル比で、またはいくつかの実施形態では約１．２：１～約１：１．２のモル比で、またはいくつかの実施形態では約１：１のモル比で存在し得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の可変重鎖（ＶＨ）ドメインをコードする第１のｓｓＲＮＡと、抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインをコードする第２のｓｓＲＮＡは、３：１～１：１の重量比で、またはいくつかの実施形態では約２：１の重量比で存在し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のＲＮＡ含有量（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡ）は、約０．５ｍｇ／ｍＬ～約１．５ｍｇ／ｍＬ、または約０．８ｍｇ／ｍＬ～約１．２ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。
医薬製剤は、本明細書で使用される場合、所望の特定の剤形に適した、ありとあらゆる溶媒、分散媒、希釈剤、または他の液体ビヒクル、分散もしくは懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、防腐剤、固体結合剤、潤滑剤などを含む、薬学的に許容される賦形剤をさらに含み得る。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６；参照により本明細書に組み込まれる）は、医薬組成物の製剤化に使用される様々な賦形剤およびその調製のための公知の技術を開示している。任意の従来の賦形剤媒体が、望ましくない生物学的作用を生じること、またはさもなければ医薬組成物の他の成分（１つまたは複数）と有害な方法で相互作用することなどによって、物質またはその誘導体と不適合性である場合を除いて、その使用は本開示の範囲内であることが企図される。
いくつかの実施形態では、賦形剤は、ヒトにおける使用および獣医学的使用について承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国食品医薬品局によって承認されている。いくつかの実施形態では、賦形剤は医薬品グレードである。いくつかの実施形態では、賦形剤は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、および／または国際薬局方の基準を満たす。
医薬組成物の製造に使用される薬学的に許容される賦形剤には、不活性希釈剤、分散剤および／もしくは造粒剤、界面活性剤および／もしくは乳化剤、崩壊剤、結合剤、防腐剤、緩衝剤、潤滑剤、ならびに／または油が含まれるが、これらに限定されない。そのような賦形剤は、任意で医薬製剤に含まれ得る。製剤化を行う者の判断に従って、カカオバターおよび坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味料、香味料、および／または芳香剤などの賦形剤が組成物中に存在し得る。
医薬品の製剤および／または製造における一般的な考慮すべき事項は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（参照により本明細書に組み込まれる）に見出され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されているような従来の技術に従って、１つ以上の薬学的に許容される担体または希釈剤、ならびに任意の他の公知のアジュバントおよび賦形剤を用いて製剤化され得る。
本明細書に記載の医薬組成物は、当技術分野で公知の適切な方法によって投与することができる。当業者に理解されるように、投与経路および／または投与方法は、例えば、本明細書に記載の医薬組成物の安定性および／または薬物動態および／または薬力学を含むがこれらに限定されない多くの因子に依存し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、通常は注射による経腸および局所投与以外の投与方法を含み、限定されないが、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含む非経口投与用に製剤化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、静脈内投与用に製剤化される。いくつかの実施形態では、静脈内投与に有用であり得る薬学的に許容され得る担体には、滅菌水溶液または分散液、および滅菌注射液または分散液の調製のための滅菌粉末が含まれる。
医薬組成物は、典型的には、製造および保存の条件下で無菌および安定でなければならない。組成物は、溶液、分散液、粉末（例えば、凍結乾燥粉末）、マイクロエマルジョン、脂質ナノ粒子、または高薬物濃度に適した他の秩序構造として製剤化することができる。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、ならびにそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、または塩化ナトリウムを組成物に含めることが好ましい。いくつかの実施形態では、注射用組成物の長期吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを組成物中に含めることによってもたらされ得る。
滅菌注射液は、必要量の活性化合物を、必要に応じて上記に列挙した成分の１つまたは組合せと共に適切な溶媒に組み込み、続いて滅菌および／または精密濾過することによって調製することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載されるように、および／または当技術分野で公知の方法で調製することができる。
いくつかの実施形態では、分散液は、基本的な分散媒および上記に列挙したものの中から必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクルに活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、あらかじめ滅菌濾過された活性成分の溶液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を生じる、減圧乾燥および凍結乾燥（ｆｒｅｅｚｅ－ｄｒｙｉｎｇ、ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ）である。
本明細書に記載の医薬組成物に使用され得る適切な水性および非水性担体の例には、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの適切な混合物、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。
これらの組成物はまた、防腐剤、湿潤剤、乳化剤および分散剤などの補助剤を含有し得る。微生物の存在の防止は、滅菌手順によって、および様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確保し得る。糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を本明細書に記載の医薬組成物に含めることも望ましい場合がある。さらに、注射用剤形の長期吸収は、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収を遅延させる薬剤を含めることによってもたらされ得る。
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、薬理学の技術分野で公知のまたは今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、活性成分（１つまたは複数）を希釈剤または別の賦形剤および／または１つ以上の他の補助成分と組み合わせ、次いで、必要な場合および／または望ましい場合、製品を所望の単回または複数回投与単位に成形および／または包装する工程を含む。
本開示による医薬組成物は、バルクで、単一単位用量として、および／または複数の単一単位用量として調製、包装、および／または販売され得る。本明細書で使用される場合、「単位用量」は、本明細書に記載のシステムおよび／または方法を使用して生成された所定量の少なくとも１つのＲＮＡ生成物を含む医薬組成物の個別の量である。
医薬組成物中のＬＮＰに封入されたｓｓＲＮＡ、薬学的に許容される賦形剤、および／または任意のさらなる成分の相対量は、治療される対象、標的細胞、疾患または障害に依存して異なり得、組成物が投与される経路にもさらに依存し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって薬学的に許容される剤形に製剤化される。本明細書に記載の医薬組成物中の活性成分（例えば、脂質ナノ粒子に封入されたｓｓＲＮＡ）の実際の投与量レベルは、患者に対する毒性を伴わずに、特定の患者、組成物、および投与様式について所望の治療応答を達成するのに有効な活性成分の量が得られるように変化させ得る。選択される投与量レベルは、使用される本開示の特定の組成物の活性、投与経路、投与時間、使用される特定の化合物の***速度、治療期間、使用される特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬物、化合物および／または材料、治療される患者の年齢、性別、体重、状態、全般的な健康および過去の病歴、ならびに医療分野で周知の同様の因子を含む、様々な薬物動態因子に依存する。
当技術分野における通常の技術を有する医師または獣医は、必要とされる医薬組成物の有効量を容易に決定し、処方することができる。例えば、医師または獣医は、医薬組成物中で使用される活性成分（例えば、脂質ナノ粒子に封入されたｓｓＲＮＡ）の用量を、所望の治療効果を達成するために必要なレベルよりも低いレベルで開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加することができる。例えば、実施例８に記載される例示的な用量は、薬学的に許容され得る剤形を調製する際に使用され得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、その主要な作用機序であるＡＤＣＣを介して薬理活性を媒介するｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の血漿濃度を与える活性用量を送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。ＩＭＡＢ３６２については、ＡＤＣＣの用量－応答相関が臨床的に十分に特徴付けられており、０．３～２８μｇ／ｍＬのＥＣ９５でのＡＤＣＣを介したＣＬＤＮ－１８．２＋細胞の効率的な溶解が報告されている（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８）。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、その主要な作用機序であるＡＤＣＣを介して薬理活性を媒介するｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（例えば、本明細書に記載されるもの）の約０．３～２８μｇ／ｍＬの血漿濃度を与える活性用量を送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤をコードする本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を、約０．１μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では、約０．２μｇ／ｍＬ、０．３μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、０．７μｇ／ｍＬ、０．８μｇ／ｍＬ、０．９μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、１．５μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、８μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１５μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬを超える抗体のレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるレベルで送達するように、または抗体投与で観察される範囲以上の範囲を有するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約７μｇ／ｍＬのＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤に対応する０．１５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇの用量をＣｍａｘで送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。図１４は、ｔｍａｘ（４８時間）でのカニクイザルにおけるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするＲＮＡ原薬の用量－曝露相関を示す。当業者に理解されるように、ＬＮＰトランスフェクションの有効性およびｍＲＮＡ翻訳がカニクイザルとヒトとの間で同等であると仮定すると（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．２０１３）、医薬組成物は、いくつかの実施形態では、図１４に示すようにｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の望ましい血漿レベルに対応する適切な用量を送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の用量を、例えば、０．１５ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．２２５ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．３５ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．４５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．５５ｍｇ／ｋｇ、０．６ｍｇ／ｋｇ、０．６５ｍｇ／ｋｇ、０．７ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、０．８０ｍｇ／ｋｇ、０．８５ｍｇ／ｋｇ、０．９ｍｇ／ｋｇ、０．９５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．２５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、１．７５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．２５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、２．７５ｍｇ／ｋｇ、３．０ｍｇ／ｋｇ、３．２５ｍｇ／ｋｇ、３．５ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、またはそれ以上の用量を含む、実施例８に記載される用量で送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の用量を１．５ｍｇ／ｋｇの用量で送達するように製剤化される（例えば、静脈内投与の場合）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）の用量を５ｍｇ／ｋｇの用量で送達するように製剤化される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、いくつかの実施形態では、特定の条件下でそのような組成物の安定性を高め得る１つ以上の添加剤をさらに含み得る。添加剤の例には、塩、緩衝物質、防腐剤、および担体が含まれ得るが、これらに限定されない。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結保護剤（例えば、スクロース）および／または水性緩衝液をさらに含んでもよく、いくつかの実施形態では、例えば、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、および／またはカルシウム塩を含む１つ以上の塩を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化剤（例えば、抗体剤）をコードするＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡなどのｓｓＲＮＡ）以外の１つ以上の活性薬剤をさらに含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、そのような他の活性薬剤は、化学療法剤であり得るか、または化学療法剤を含み得る。いくつかの実施形態では、例示的な化学療法剤は、例えば、ゲムシタビンおよび／またはパクリタキセル（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）、フォリン酸、フルオロウラシル、イリノテカンおよび／またはオキサリプラチンなどを含むがこれらに限定されない、膵臓癌の治療に適応される化学療法剤であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、例示的な化学療法剤は、例えば、ゲムシタビンおよび／またはシスプラチンを含むがこれらに限定されない、胆道癌の治療に適応される化学療法剤であり得るか、またはそれを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物に含まれ得る活性薬剤は、本明細書に記載の併用療法で投与される治療薬であるか、またはそれを含む。本明細書に記載の医薬組成物は、併用療法で、すなわち他の薬剤と組み合わせて投与することができる。例えば、いくつかの態様では、併用療法は、提供される医薬組成物を少なくとも１つの抗炎症剤または少なくとも１つの免疫抑制剤と共に含むことができる。そのような治療薬の例には、１つ以上の抗炎症剤、例えばステロイド薬またはＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）、アスピリンおよび他のサリチレート、ロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ）およびセレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）などのＣＯＸ－２阻害剤、イブプロフェン（Ｍｏｔｒｉｎ、Ａｄｖｉｌ）、フェノプロフェン（Ｎａｌｆｏｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）、スリンダク（Ｃｌｉｎｏｒｉｌ）、ジクロフェナク（Ｖｏｌｔａｒｅｎ）、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ）、ケトプロフェン（Ｏｒｕｄｉｓ）、ジフルニサル（Ｄｏｌｏｂｉｄ）、ナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）、エトドラク（Ｌｏｄｉｎｅ）、オキサプロジン（Ｄａｙｐｒｏ）およびインドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ）などのＮＳＡＩＤが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、そのような治療薬は、制御性Ｔ細胞の枯渇または機能的不活性化をもたらす薬剤、例えば、低用量シクロホスファミド、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＩＬ２または抗ＩＬ２受容体抗体を含み得る。
いくつかの実施形態では、そのような治療薬は、タキソール誘導体、タキソテール、パクリタキセル（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）、ゲムシタビン、５－フルオロウラシル、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ）、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ、Ｎｅｏｓａｒ）、フォリン酸、イリノテカン、オキサリプラチンなどの１つ以上の化学療法剤を含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、治療される癌患者の腫瘍におけるＣＬＤＮ－１８．２発現レベルを、例えば、少なくとも１０％以上、例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％またはそれ以上増加させることができる１つ以上の化学療法剤と組み合わせて投与し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、放射線療法および／または自家末梢幹細胞移植もしくは骨髄移植と併せて投与し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、抗ＣＤ２５抗体、抗ＥＰＣＡＭ抗体、抗ＥＧＦＲ、抗ＨＥＲ２／ｎｅｕ、および抗ＣＤ４０抗体から選択される１つ以上の抗体と組み合わせて投与し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、補体活性化を増強するために抗Ｃ３ｂ（ｉ）抗体と組み合わせて投与し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、静脈内投与用の水性緩衝液中の防腐剤を含まない滅菌ＲＮＡ－ＬＮＰ分散液である。いくつかの実施形態では、医薬組成物に含まれるＲＮＡ原薬（例えば、本明細書に記載されるｓｓＲＮＡ）は、０．８～１．２ｍｇ／ｍＬで５．０ｍＬの公称充填体積まで充填される。医薬組成物を－８０～－６０℃で保存する。
本明細書で提供される医薬組成物の説明は、主にヒトへの投与に適した医薬組成物に関するものであるが、そのような組成物は、一般にあらゆる種類の動物への投与に適することが当業者に理解されるであろう。組成物を様々な動物への投与に適したものにするためのヒトへの投与に適した医薬組成物の改変は十分に理解されており、通常の熟達した獣医薬理学者は、もしあれば、単なる通常の実験でそのような改変を設計および／または実施することができる。
Ａ．有用な成分の同定および／または特徴付け
本明細書に記載の医薬組成物中の有用な成分（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｓｓＲＮＡ（１つまたは複数））の適切な品質を確保するために、１つ以上の品質評価および／または関連基準（例えば、実施例１１～１２に記載されるような）を実施および／または監視し得る。
とりわけ、本開示は、抗体剤の一部または全部をコードするｓｓＲＮＡまたはその組成物の１つ以上の特徴を特徴付ける方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、いくつかの実施形態では、それぞれがＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の重鎖または軽鎖をコードする少なくとも２つのｓｓＲＮＡを含む組成物）のＲＮＡ完全性評価は、キャピラリゲル電気泳動アッセイの適合によって実施することができる。いくつかの実施形態では、より長いＨＣコードＲＮＡの面積の割合を評価して、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の異なる鎖をコードする両方のＲＮＡの完全性を説明する。例えば、２つ以上のＲＮＡを含むＲＮＡ組成物は、キャピラリゲル電気泳動によって分析することができ、結果として電気泳動図が得られる。単なる例として、２つの異なるＲＮＡを含むＲＮＡ組成物は、例えば、それぞれが抗体の別個の鎖（例えば、重鎖または軽鎖）をコードするＲＮＡに対応する２つの分離したピークで溶出する。例えば、図１５を参照。
本開示は、とりわけ、分子比がこのパラメータに強く影響し、混合物の仕様が液滴デジタルＰＣＲによって測定される分子比に依存して設定されるという洞察を提供する。この仕様は、正確な配列および重量比によって定義される所与の混合物に依存する。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の重鎖をコードするｓｓＲＮＡ対ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の軽鎖をコードするｓｓＲＮＡのＲＮＡ比は、液滴デジタルＰＣＲによって測定することができる。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、残留ＤＮＡ鋳型および残留ｄｓＲＮＡは、原薬に混合する前に、例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の異なる鎖をコードする２つのｓｓＲＮＡを混合する前に、個々のＲＮＡ品質を確実にするために原薬中間体のレベルで許容基準を用いてインプロセス対照として測定される。いくつかの実施形態では、関連する許容基準が、個々のｓｓＲＮＡの品質のインプロセス制御のために使用される。
さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、残留宿主細胞ＤＮＡおよび／または宿主細胞タンパク質は、ｓｓＲＮＡを含む組成物中で測定され得る。
Ｂ．有効な送達の特徴付け（例えば、血漿濃度）
いくつかの実施形態では、組成物およびその成分を評価してそれらの有効性を決定することができる。いくつかの実施形態では、インビトロおよび／またはインビボでの本明細書に記載の医薬組成物の一次薬力学および／または薬物動態を決定することができる。有用な薬物動態測定値の例には、以下の１つ以上のパラメータが含まれ得る：
・Ｃｍａｘは、薬物が投与された後および第２の用量の投与の前に、薬物が身体の特定の区画または試験領域において達成する最大（またはピーク）血漿／血清濃度に対応する。関連する薬物動態パラメータｔｍａｘは、Ｃｍａｘが観察される時間である。
・Ｃｍｉｎは、投与後に薬物が達成する最小血漿／血清濃度に対応する。
・Ｃｔｒｏｕｇｈは、定常状態での投与間隔の終了時のトラフ血漿濃度に対応する（典型的には、次の投与の直前に採取される）。
・曲線下面積（ＡＵＣ）は、血漿中の薬物濃度の変動を時間の関数として表す曲線の定積分である。ＡＵＣ（０から無限大）は、経時的な総薬物曝露を表す。
いくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の機能的アセンブリを、例えば実施例６に記載されるように、用量依存的にインビトロおよびインビボで決定することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の結合特異性、ＡＤＣＣおよびＣＤＣの媒介、ならびに／または抗腫瘍活性は、例えば実施例１～４に記載されるように決定することができる。
とりわけ、本開示は、細胞に導入された少なくとも１つのｍＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程を含む方法を提供し、そのような少なくとも１つのｍＲＮＡは、クローディン１８．１ポリペプチドと比較してクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤をコードするコード領域を含む少なくとも１つ以上のｓｓＲＮＡの特徴の１つ以上を含み、そのような１つ以上の特徴は、（ｉ）抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２に対する抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；および（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物を特徴付ける方法が本明細書で提供される。そのような方法は、（ａ）細胞を本明細書に記載の少なくとも１つの組成物または医薬組成物（ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の一部または全部をコードする）と接触させる工程；および細胞によって産生された抗体剤を検出する工程を含む。いくつかの実施形態では、細胞は、肝細胞であり得るか、または肝細胞を含み得る。
いくつかの実施形態では、そのような方法は、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定することをさらに含み得、そのような１つ以上の特徴は、（ｉ）抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のそのような特徴を参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の特徴と比較することを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、閾値レベルを超える抗体剤のタンパク質発現レベルを評価することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、閾値レベルは、治療的に適切な血漿濃度に対応する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの抗体剤の結合を評価することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような結合評価は、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドへの抗体剤の結合と比較して、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの抗体剤の結合を決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような結合評価は、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の結合選択性プロファイルに少なくとも匹敵する抗体剤の結合選択性プロファイルを決定することを含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体は、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブである。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法は、抗体剤が以下の特徴：（ａ）閾値レベルを超える、細胞によって発現される抗体剤のタンパク質レベル；（ｂ）ＣＬＤＮ１８．１と比較したＣＬＤＮ－１８．２への抗体剤の選択的結合；ならびに（ｃ）ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣによって媒介される少なくとも５０％の標的細胞（例えば、癌細胞）の死滅を含む場合、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤をＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤として特徴付けることをさらに含み得る。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法は、抗体の試験された特徴がゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの特徴に少なくとも匹敵する場合、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤をゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブ等価抗体として特徴付けることをさらに含み得る。
本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程を含むいくつかの実施形態では、そのような工程は、以下の特徴の１つ以上を決定することを含み得る：
・接触または投与の４８時間後に評価した場合、細胞が少なくとも１つのｓｓＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を発現するかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤がＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合するかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤が、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリ結合アッセイで観察されるようなＣＬＤＮ－１８．２に対する同等の標的特異性を示すかどうか；
・免疫エフェクタ細胞（例えば、ＰＢＭＣ細胞）およびＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を抗体剤の存在下でインキュベートした４８時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか；
・細胞によって発現される抗体剤が、同じ濃度の参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体で観察されるような標的ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞の少なくとも同等のＡＤＣＣプロファイルを示すかどうか；ならびに
・ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を抗体剤の存在下でヒト血清とインキュベートした２時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２またはその成分を標的とする医薬組成物を特徴付ける提供される方法で使用される細胞は、インビボで、例えば対象（例えば、哺乳動物対象、例えば哺乳動物非ヒト対象、例えばマウスまたはサル対象）に存在する。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程は、そのような対象の１つ以上の組織中の抗体レベルを決定することを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような特徴付けの方法は、そのような組成物または医薬組成物がＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤として特徴付けられる場合、抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に本明細書に記載の組成物または医薬組成物を投与することをさらに含み得る。
また、本開示の範囲内には、以下の工程を含む製造方法が含まれる：
（Ａ）抗体剤の一部または全部をコードするｓｓＲＮＡまたはその組成物の１つ以上の特徴を決定する工程であって、１つ以上の特徴が、
（ｉ）ｓｓＲＮＡの長さおよび／または配列；
（ｉｉ）ｓｓＲＮＡの完全性；
（ｉｉｉ）ｓｓＲＮＡの１つ以上の化学部分の存在および／または位置；
（ｉｖ）ｓｓＲＮＡを細胞に導入した場合の抗体剤の発現の程度；
（ｖ）ｓｓＲＮＡまたはその組成物の安定性；
（ｖｉ）ｓｓＲＮＡが導入された生物由来の生物学的試料中の抗体剤のレベル；
（ｖｉｉ）ｓｓＲＮＡから発現された抗体剤の、任意でＣＬＤＮ－１８．２に対する、および任意でＣＬＤＮ１８．１と比較した結合特異性；
（ｖｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；
（ｉｘ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する抗体剤の有効性；
（ｘ）組成物内の脂質の同一性および量／濃度；
（ｘｉ）組成物内の脂質ナノ粒子のサイズ；
（ｘｉｉ）組成物内の脂質ナノ粒子の多分散性；
（ｘｉｉｉ）組成物内のｓｓＲＮＡの量／濃度；
（ｘｉｖ）脂質ナノ粒子内へのｓｓＲＮＡの封入の程度；ならびに
（ｘｖ）それらの組合せ
からなる群より選択される、工程；
（Ｂ）ｓｓＲＮＡまたはその組成物のそのような１つ以上の特徴を適切な参照基準のものと比較する工程；ならびに
（Ｃ）（ｉ）比較により、ｓｓＲＮＡまたはその組成物が参照基準を満たすかまたは超えることが実証される場合、製造および／または配給の１つ以上のさらなる工程のためにｓｓＲＮＡまたはその組成物を指定する工程；あるいは
（ｉｉ）比較により、ｓｓＲＮＡまたはその組成物が参照基準を満たさないかまたは超えないことが実証される場合、代替措置を講じる工程。
いくつかの実施形態では、参照基準は、例えば、履歴基準、セット仕様を含む任意の品質管理基準であり得る。当業者に理解されるように、いくつかの実施形態では、直接比較は必要ではない。いくつかの実施形態では、参照基準は、例えば、物理的外観、脂質の同一性および／または含有量、ＬＮＰサイズ、ＬＮＰ多分散性、ＲＮＡ封入、ＲＮＡの長さ、同一性（ＲＮＡとして）、完全性、配列および／または濃度、ｐＨ、オスモル濃度、ＲＮＡ比（例えば、ＨＣ ＲＮＡ対ＬＣ ＲＮＡの比）、効力、細菌内毒素、バイオバーデン、残留有機溶媒、オスモル濃度、ｐＨ、およびそれらの組合せに基づく許容基準である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１つ以上の効力アッセイ、すなわち、例えば、限定されないが、インビトロ翻訳、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および／またはＴ細胞活性化バイオアッセイによって決定することができる。例えば、いくつかの実施形態では、細胞におけるＲＮＡ組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の発現は、ＥＬＩＳＡによってリポフェクト産生細胞の培養上清中で測定することができる。いくつかのそのような実施形態では、リポフェクト産生細胞の上清を、ＣＬＤＮ－１８．２発現標的細胞とエフェクタ細胞としてのＦｃＲＩＩＩａ陽性ルシフェラーゼレポータ細胞との共培養物に添加し得る。ＣＬＤＮ－１８．２およびＦｃγＲＩＩＩａ受容体への抗体の同時結合は、エフェクタ細胞の活性化につながり、発光読み出しによって定量化されるルシフェラーゼ発現をもたらす。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）が評価され、ｓｓＲＮＡの１つ以上の特徴が適切な参照基準を満たすかまたは超える場合、そのようなｓｓＲＮＡは、例えば本明細書に記載の脂質粒子を用いた製剤化を含むいくつかの実施形態では、製剤化のために指定される。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物が評価され、組成物の１つ以上の特徴が適切な参照基準を満たすかまたは超える場合、そのような組成物は、組成物の出荷および／または配給のために指定される。
製造方法のいくつかの実施形態では、ｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）が製剤化に指定され、および／またはｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物が組成物の出荷および／または配給のために指定される場合、そのような方法は、抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に製剤および／または組成物を投与することをさらに含み得る。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生する方法も本開示の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生する方法は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のコード領域を含む少なくとも１つのｓｓＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む組成物を、細胞がそのようなｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を発現および分泌するように、そのような細胞に投与することを含む。いくつかの実施形態では、投与または標的化される細胞は、肝細胞であるか、または肝細胞を含む。
いくつかの実施形態では、細胞は細胞培養物中に存在する。
いくつかの実施形態では、細胞は対象に存在する。いくつかのそのような実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、それを必要とする対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、そのような医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が治療的に適切な血漿濃度で産生されるように対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、治療的に適切な血漿濃度は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して癌細胞死を媒介するのに十分である。例えば、いくつかの実施形態では、治療的に適切な血漿濃度は０．３～２８μｇ／ｍＬである。
ＶＩ．ＣＬＤＮ－１８．２の高発現に関連する例示的な癌
Ａ．固形腫瘍
癌は世界的に２番目に多い死因であり、２０１８年には推定９６０万人の死亡の原因となると予想されている（Ｂｒａｙ ｅｔ ａｌ．２０１８）。一般に、生殖細胞および一部のカルチノイド腫瘍などのいくつかの例外を除いて、固形腫瘍が転移すると、５年生存率が２５％を超えることはほとんどない。
進行性および転移性固形腫瘍の治療
化学療法、放射線療法、手術、および標的療法などの従来の治療法の改良ならびに免疫療法の最近の進歩により、進行性固形腫瘍を有する患者の転帰が改善されている。ここ数年で、食品医薬品局（ＦＤＡ）および欧州医薬品庁（ＥＭＡ）は、複数の癌型、主に固形腫瘍を有する患者の治療のために、８つのチェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ－４経路を標的とする１つのモノクローナル抗体、イピリムマブ、ならびにアテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ニボルマブ、セミプリマブおよびペムブロリズマブを含む、プログラム死受容体／リガンド［ＰＤ／ＰＤ－Ｌ１］を標的とする７つの抗体）を承認した。これらの承認は、癌治療の状況を劇的に変化させた。しかしながら、膵臓腺癌または転移性胆道癌などの特定の癌は、依然として既存の免疫療法から利益を得ていない。この現象は多因子性であり、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）の全身性かつ攻撃的な性質、その複雑な突然変異状況、その線維形成性間質、および強力な免疫抑制性腫瘍微小環境に起因する。
これらの２つの癌型の予後不良は、さらなる治療アプローチの必要性を強調する。本開示は、とりわけ、ＣＬＤＮ－１８．２が、治療が標的とし得る特に有用な腫瘍関連抗原であるという洞察を提供する。現在までに、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする治療法は、いかなる癌適応症についても承認されていない。したがって、いくつかの実施形態では、本開示は、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とするＲＮＡにコードされた抗体がＡＤＣＣおよび／もしくはＣＤＣを誘導し、ならびに／または化学療法および／もしくは他の抗癌療法の細胞傷害効果（１つまたは複数）を増強することができ、したがって、例えば単独で投与された個々の療法および／または別の適切な参照と比較して、長期の無増悪生存期間および／または全生存期間につながるという洞察を提供する。
Ｂ．膵管腺癌
膵管腺癌（ＰＤＡＣ）は、全ての膵臓悪性腫瘍の９０％超を占める、膵臓の最も一般的な腫瘍性疾患である（Ｋｌｅｅｆｆ ｅｔ ａｌ．２０１６）。現在まで、ＰＤＡＣは、世界中で癌関連死の４番目に多い原因であり、５年全生存率は８％未満である（Ｓｉｅｇｅｌ ｅｔ ａｌ．２０１８）。ＰＤＡＣの発生率は将来さらに上昇すると予想されており、予測では、米国および欧州の国々において、新規診断およびＰＤＡＣ関連の死亡の両方に関して今後１０年以内に症例数が２倍超増加することが示されている（Ｑｕａｎｔｅ ｅｔ ａｌ．２０１６；Ｒａｈｉｂ ｅｔ ａｌ．２０１４；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＵＫ）。
ＰＤＡＣ治療の有効性および転帰は、診断時の疾患の病期によって大きく決定される。外科的切除とそれに続くアジュバント化学療法は、利用可能な唯一の可能性のある治癒的療法であるが、切除可能なＰＤＡＣ病期を呈するＰＤＡＣ患者は１０～２０％に過ぎず、残りの８０～９０％は局所的に進行した切除不能な病期または－大部分の症例では－遠隔転移を示す（Ｇｉｌｌｅｎ ｅｔ ａｌ．２０１０；Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１３）。全身化学療法は、切除不能または切除可能境界の腫瘍を有する患者における第一選択治療として一般的に用いられる。これは、単剤療法の状況での、または放射線療法などの他の治療法と組み合わせたゲムシタビンおよびカペシタビンを含むヌクレオシド類似体、またはピリミジン類似体５－フルオロウラシルを包含する（Ｗｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１３；Ｍａｎｊｉ ｅｔ ａｌ．２０１７；Ｔｅａｇｕｅ ｅｔ ａｌ．２０１５）。フォリン酸、５－フルオロウラシル、イリノテカンおよびオキサリプラチンで構成されるポリ化学療法レジメンであるＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸは、ゲムシタビン単独と比較して転移ステージでの生存期間中央値がほぼ２倍になることが報告されており（Ｃｏｎｒｏｙ ｅｔ ａｌ．２０１１）、ゲムシタビンとナノ粒子アルブミン結合パクリタキセル（ｎａｂ－パクリタキセル）との組合せも全生存期間を有意に改善することが示されている（Ｖｏｎ Ｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．２０１３）。これらの治療は比較的高い毒性に関連しており、したがって、高齢患者および／または一般状態不良の患者への適用をしばしば妨げるが、使用期間中、全体的な生活の質は高まることが報告された（Ｇｏｕｒｇｏｕ－Ｂｏｕｒｇａｄｅ ｅｔ ａｌ．２０１３）。
上皮増殖因子受容体阻害剤であるエルロチニブは、局所的に進行した切除不能または転移性膵臓癌を有する患者の第一選択治療のために、ゲムシタビンと組み合わせて米国で承認された唯一の標的療法である。エルロチニブをプラセボと比較するランダム化比較試験は、０．４ヶ月のＯＳ利益中央値および０．３ヶ月のＰＦＳ利益中央値を示した。ＰＤＡＣのＣＬＤＮ－１８．２＋亜集団を標的とするＢＮＴ１４１は、満たされていない医学的必要性が有意に高い集団に対処する可能性がある。治験依頼者は、ファーストインヒューマン試験中にＳＯＣ（化学療法）と共に進めるべき安全な用量を確立することによって、この適応症におけるＢＮＴ１４１の臨床開発を加速させることを目指している。
Ｃ．胆道癌
胆道癌は、胆道系の上皮性悪性腫瘍を構成し、胆嚢癌、ファーター膨大部癌、（肝外および肝内胆管）を含む。歴史的に、この用語は、胆嚢癌およびファーター膨大部癌を除く、肝外および肝内胆管を包含する（ｄｅ Ｇｒｏｅｎ ｅｔ ａｌ．１９９９）。
胆道癌は、全胃腸悪性腫瘍の約３％を構成し（Ｃｈａｒｂｅｌ ｅｔ ａｌ．２０１１）、肝細胞癌に次いで最も一般的な肝胆管癌である（Ｈｅｎｎｅｄｉｇｅ ｅｔ ａｌ．２０１４）。残念ながら、死亡率（１０万人当たり３．５８人）は非常に高い。これは、英国での発生率（３．６４／１０万）に匹敵し（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ ２０１５）、転移状況での２％の５年生存率に等しい（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｓｅｅｒ Ｄａｔａ ２０１５；Ｓｅｅｒ Ｄａｔａ ２０１４）。ＢＴＣの世界的有病率は２２％上昇しており、２０１５年には１５万人の患者がＢＴＣと診断された（Ｖｏｓ ｅｔ ａｌ．２０１５）。全体として、高い有病率を示す特定の地域（例えば、日本および韓国）では発生率に大きなばらつきがある。これは、胆管癌がより一般的である区域（タイ北東部および中国）における肝吸虫（オピストルキス・ビベリーニ（Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ）およびクロノルキアシス・シネンシス（Ｃｌｏｎｏｒｃｈｉａｓｉｓ ｓｉｎｅｎｓｉｓ））感染によって説明することができる（Ｐａｒｋｉｎ ｅｔ ａｌ．１９９１；Ｋａｈｎ ｅｔ ａｌ．２００８）。胆石症の有病率が高い地域は、インドおよびチリなどの胆嚢癌の有病率が高い地域に対応する（Ｒａｎｄｉ ｅｔ ａｌ．２００９；Ｋｈａｎ ｅｔ ａｌ．１９９９；Ｋｉｒｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｖｏｇｅｌ．２０１６）。上記のリスク因子がまれである地理的地域では、ＢＴＣの症例がより少ない（Ｋａｈｎ ｅｔ ａｌ．１９９９）。
上記のリスク因子とは別に、原発性硬化性胆管炎、原発性胆汁性肝硬変、他の原因による肝硬変、Ｃ型肝炎、ならびに総胆管嚢胞および多発性胆管乳頭腫症などの先天性奇形もまた、ＢＴＣを発症するリスクの上昇に関連する（Ｋａｈｎ ｅｔ ａｌ．２００８；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．２００４；Ｃｈａｐｍａｎ １９９９）。さらに、リンチ症候群ならびにＢＲＣＡ１およびＢＲＣＡ２（乳癌遺伝子１および２）の遺伝子異常をもたらす生殖細胞系突然変異を有する患者もまた、ＢＴＣの素因を有する。ＢＲＣＡ２のキャリアにおいて、リンチ症候群を伴うＢＴＣを発症する生涯リスクは２％であり、胆管癌を発症する相対リスクは４．９７％である（Ｇｏｌａｎ ｅｔ ａｌ．２０１７；Ｓｈｉｇｅｙａｓｕ ｅｔ ａｌ．２０１４）。
ＢＴＣの治療は疾患の病期に従って層別化され、外科手術は依然として初期段階での治療法の中心であるが、これはごく少数の患者（１０～４０％）に相当する（Ｃｉｄｏｎ ２０１６）。進行した疾患の第一選択治療のために、第３相試験ＡＢＣ－０２では、単剤ゲムシタビンよりもゲムシタビンとシスプラチンとの組合せの優位性が確認された。報告されたＯＳ中央値は、それぞれ１１．７ヶ月対８．１ヶ月（ハザード比［ＨＲ］０．６４；９５％信頼区間［ＣＩ］０．５２～０．８０；ｐ＜０．００１）であり（Ｖａｌｌｅ ｅｔ ａｌ．２０１０）、それ以来、これが後期ＢＴＣの世界的な標準治療となっている。このレジメンから得られる中程度の生存利益は、ランダム化第３相試験では未だ超えられていないが、第３相試験におけるゲムシタビンと経口フルオロピリミジンＳ－１との組合せは、ゲムシタビン／シスプラチン群での１３．４ヶ月に対してゲムシタビンおよびＳ－１群で１５．１ヶ月のＯＳ中央値を報告した（ＨＲ ０．９５；９０％ ＣＩ ０．７８～１．１５；非劣性についてはｐ＝０．０４６）（Ｍｏｒｉｚａｎｅ ｅｔ ａｌ．２０１８）。このレジメンは、併存疾患が白金製剤の使用を制限する患者の代替治療と見なされ得る。進行したＢＴＣを有する患者における第一選択設定でゲムシタビン、シスプラチンおよびｎａｂ－パクリタキセルの組合せを評価する第２相試験は、予備結果において歴史的に標準的なゲムシタビン／シスプラチンレジメンに関連したものよりも優れたＰＦＳ中央値を報告し（８．０ヶ月対１１．４ヶ月）、ＯＳ中央値は１９．２ヶ月であった。この試験（ＮＣＴ０２３９２６３７）は２０１９年に進行中であった（Ｓｈｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．２０１７；Ｓｈｒｏｆｆ ｅｔ ａｌ．２０１８）。
ＶＩＩ．患者集団
本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性の上昇に関連する疾患または状態の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍は、熟練した病理学者の実務に従って、免疫組織化学的分析によって２以上の染色強度スコアで決定される。
本開示は、とりわけ、膵臓癌および胆管癌が、典型的にはＣＬＤＮ－１８．２の高発現を有することを認識する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、膵臓癌の治療に有用であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、膵管腺癌（ＰＤＡＣ）の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、胆管癌の治療に有用であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、例えば免疫組織化学的分析によって、ＣＬＤＮ－１８．２陽性であると判定された胃食道癌の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、例えば免疫組織化学的分析によって、ＣＬＤＮ－１８．２陽性であると判定された非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療に有用であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、転移性のＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍を有する患者（例えば、成人患者）の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、例えば、外科的切除が重度の罹患率をもたらす可能性が高いいくつかの実施形態では、切除不能なＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍を有する患者（例えば、成人患者）の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、局所的に進行したＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍を有する患者（例えば、成人患者）の治療に有用であり得る。さらにまたはあるいは、いくつかの実施形態では、そのような患者における癌は治療後に進行している可能性があるか、またはそのような癌患者は満足のいく代替療法を有していない可能性がある。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、局所進行性、切除不能または転移性のＣＬＤＮ－１８．２＋膵臓癌を有する成人患者の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、局所進行性、切除不能または転移性のＣＬＤＮ－１８．２＋胆道癌を有する成人患者の治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療を受けている患者は、他の癌治療、例えば、限定されないが、化学療法を受けていてもよい。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象は、その固形腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍（例えば、本明細書に記載されるもの）として特徴付けられるように、ＣＬＤＮ－１８．２レベル／活性を増加させるのに十分な前処置を受けていてもよい。例えば、いくつかの実施形態では、そのような癌患者は、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性を上昇させると予想もしくは予測される化学療法を受けたことがあってもよく、またはＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性を生じ得るかもしくは生じたことがあってもよい。例えば、いくつかの実施形態では、そのような化学療法は、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性を上昇させると予想もしくは予測され得るか、またはそのような化学療法の非存在下でのＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性と比較して、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくはそれ以上を含む、少なくとも５０％以上高いＣＬＤＮ－１８の発現および／もしくは活性をもたらし得るかもしくはもたらした可能性がある。いくつかの実施形態では、そのような化学療法は、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性を上昇させると予想もしくは予測され得るか、またはそのような化学療法の非存在下でのＣＬＤＮ－１８．２の発現および／もしくは活性と比較して、例えば、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍もしくはそれ以上を含む、少なくとも２倍以上高いＣＬＤＮ－１８の発現および／もしくは活性をもたらし得るかもしくはもたらした可能性がある。そのような化学療法剤の例には、ｎａｂ－パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチンおよび／またはＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸが含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、実施例１６に記載される疾患特異的選択基準のうちの１つ以上を満たす癌患者は、本明細書に記載の治療（例えば、提供される医薬組成物を単剤療法として、または併用療法の一部として受けること）に適している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療を投与されるそのような癌患者は、実施例１６に記載される他の選択基準のうちの１つ以上をさらに満たし得る。
いくつかの実施形態では、実施例１６に記載される疾患特異的選択基準のうちの１つ以上を満たす癌患者は、本明細書に記載の治療（例えば、提供される医薬組成物を単剤療法として、または併用療法の一部として受けること）に適している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療を投与されるそのような癌患者は、実施例１６に記載される他の選択基準のうちの１つ以上をさらに満たし得る。
いくつかの実施形態では、腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２を発現しないか、またはＣＬＤＮ－１８．２陽性ではないと判定された（例えば、本明細書に記載の本開示に従って）癌患者は、本明細書に記載の治療を施されない。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍を有するが、実施例１７に記載の除外基準の１つ以上を満たす癌患者は、本明細書に記載の治療を施されない。
ＶＩＩＩ．治療（例えば、投与レジメン）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、治療的に適切な血漿濃度でコードされたＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を産生するために標的細胞によって取り込まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるそのような医薬組成物は、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導するのに十分な血漿濃度で、コードされたＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を送達することができる。
したがって、本開示の別の態様は、本明細書に記載の医薬組成物を使用する方法に関する。例えば、本明細書で提供される一態様は、提供される医薬組成物をＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、静脈内注射または注入によって投与される。ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍の例には、胆道腫瘍、胃腫瘍、胃食道腫瘍、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、および閾値レベル（例えば、正常組織で観察されるＣＬＤＮ－１８．２レベル）を上回る、例えば、いくつかの実施形態では、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％もしくはそれ以上を含む、少なくとも５０％以上上回る、またはいくつかの実施形態では、例えば、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍もしくはそれ以上を含む、少なくとも２倍以上上回るレベルのＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドを発現するまたは示す腫瘍が含まれるが、これらに限定されない。
本開示の別の態様は、対象に癌治療のためのＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤を送達する方法の一定の改善に関し、この方法は、提供される医薬組成物を癌対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、対応する（例えば、コードされた）タンパク質（例えば、抗体）剤自体が投与された場合に観察されるものと比較して、ＴＥＡＥの発生率（例えば、頻度および／または重症度）が低下した、および／または有効性レベルとＴＥＡＥレベルとの間の関係が改善された（例えば、治療ウィンドウの改善）有効な投与などの１つ以上の改善を達成し得る。特に、本開示は、そのような改善が、特に、核酸、特にそれをコードするＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、ｍＲＮＡ（１つまたは複数）などのｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）））の投与を介してＩＭＡＢ３６２を送達することによって達成され得ることを教示する。
投与スケジュール：当業者は、癌治療薬がしばしば投与サイクルで投与されることを認識している。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、１回以上の投与サイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、１回の投与サイクルは、少なくとも３日間以上（例えば、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間、少なくとも１５日間、少なくとも１６日間、少なくとも１７日間、少なくとも１８日間、少なくとも１９日間、少なくとも２０日間、少なくとも２１日間、少なくとも２２日間、少なくとも２３日間、少なくとも２４日間、少なくとも２５日間、少なくとも２６日間、少なくとも２７日間、少なくとも２８日間、少なくとも２９日間、少なくとも３０日間を含む）である。いくつかの実施形態では、１回の投与サイクルは少なくとも２１日間である。
いくつかの実施形態では、１回の投与サイクルは、例えば、用量がサイクル内で毎日投与され得る、または用量がサイクル内で２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、７日ごとに投与され得るなどのパターンに従った、複数回投与を含み得る。
いくつかの実施形態では、複数サイクルが投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、少なくとも２サイクル（例えば、少なくとも３サイクル、少なくとも４サイクル、少なくとも５サイクル、少なくとも６サイクル、少なくとも７サイクル、少なくとも８サイクル、少なくとも９サイクル、少なくとも１０サイクル、またはそれ以上を含む）を投与することができる。いくつかの実施形態では、投与される投与サイクルの数は、治療の種類（例えば、単剤療法対併用療法）によって異なり得る。いくつかの実施形態では、少なくとも３～８回の投与サイクルが投与され得る。
いくつかの実施形態では、サイクル間に「休薬期間」が存在し得る；いくつかの実施形態では、サイクル間に休薬期間が存在しなくてもよい。いくつかの実施形態では、サイクル間に休薬期間が存在する場合もあり、休薬期間が存在しない場合もある。
いくつかの実施形態では、休薬期間は、数日から数ヶ月の範囲内の長さを有し得る。例えば、いくつかの実施形態では、休薬期間は、例えば、少なくとも４日間、少なくとも５日間、少なくとも６日間、少なくとも７日間、少なくとも８日間、少なくとも９日間、少なくとも１０日間、少なくとも１１日間、少なくとも１２日間、少なくとも１３日間、少なくとも１４日間またはそれ以上を含む、少なくとも３日間以上の長さを有し得る。いくつかの実施形態では、休薬期間は、例えば、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、またはそれ以上を含む、少なくとも１週間以上の長さを有し得る。
いくつかの実施形態では、例えば単剤療法で使用するための本明細書に記載の医薬組成物は、少なくとも３サイクルで投与することができ、いくつかの実施形態では、各サイクルは２１日間である。いくつかの実施形態では、例えば併用療法で使用するための本明細書に記載の医薬組成物は、少なくとも８サイクルで投与することができ、いくつかの実施形態では、各サイクルは２１日間である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、各３週間の投与サイクル（２１日間／Ｑ３Ｗ）の１日目に投与することができる。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍に罹患している癌患者は、最大３サイクルの治療を受けることができる。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍に罹患している癌患者は、最大８サイクルを受けることができる。
用量：本明細書に記載の医薬組成物の投与量は、例えば、治療される対象の体重、癌の種類および／もしくは癌の病期、ならびに／または単剤療法もしくは併用療法を含むがこれらに限定されない多くの因子によって異なり得る。いくつかの実施形態では、投与サイクルは、設定された用量数および／または用量パターンの投与を含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、例えば、少なくとも２回投与／投与サイクル、少なくとも３回投与／投与サイクル、少なくとも４回投与／投与サイクル、またはそれ以上を含む、少なくとも１回投与／投与サイクルで投与される。
いくつかの実施形態では、投与サイクルは、例えば特定の期間にわたって、および任意で複数回投与によって、例えば、設定された間隔（１つもしくは複数）でおよび／または設定されたパターンに従って投与され得る、設定された累積用量の投与を含む。いくつかの実施形態では、設定された累積用量は、標的細胞または治療されている対象に対するそのような複数回投与によって生じる生物学的および／または薬物動態学的効果に少なくともいくらかの時間的重複が存在するように、設定された間隔での複数回投与によって投与され得る。いくつかの実施形態では、設定された累積用量は、標的細胞または治療されている対象に対するそのような複数回投与によって生じる生物学的および／または薬物動態学的効果が相加的であり得るように、設定された間隔での複数回投与によって投与され得る。ほんの一例として、いくつかの実施形態では、Ｘｍｇの設定累積用量を、Ｘ／２ｍｇの各用量での２回の投与によって投与してもよく、そのような２回の投与は、標的細胞または治療されている対象に対する各Ｘ／２ｍｇの用量によって生じる生物学的および／または薬物動態学的効果が相加的であり得るように、十分に近い時間で投与される。
いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、提供される一本鎖ＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、投与サイクルを通して標的細胞（例えば、癌細胞）に対する抗体依存性細胞傷害を引き起こすのに十分高いレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるようなレベルで投与される。ＩＭＡＢ３６２については、ＡＤＣＣの用量－応答相関が臨床的に十分に特徴付けられており、０．３～２８μｇ／ｍＬのＥＣ９５でのＡＤＣＣを介したＣＬＤＮ－１８．２＋細胞の効率的な溶解が報告されている（Ｓａｈｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１８）。したがって、いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、本明細書に記載されるもの）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の約０．３～２８μｇ／ｍＬの血漿濃度を与える量で投与される。
いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、提供される一本鎖ＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、ＩＭＡＢ３６２の投与で観察される治療的に適切なレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）に匹敵するレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるようなレベルで投与される。いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、提供される一本鎖ＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、約０．０５～３μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約０．１～１０μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約０．２～１５μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約０．３～３０μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約０．３～２８μｇ／ｍＬを超えるレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるようなレベルで投与されるいくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、提供される一本鎖ＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、約５μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約１０μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では約１５μｇ／ｍＬを超えるＣｔｒｏｕｇｈレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるようなレベルで投与される。
いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする本明細書に記載の１つ以上のｓｓＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）を、約０．１μｇ／ｍＬを超える、いくつかの実施形態では、約０．２μｇ／ｍＬ、０．３μｇ／ｍＬ、０．４μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、０．６μｇ／ｍＬ、０．７μｇ／ｍＬ、０．８μｇ／ｍＬ、０．９μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、１．５μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、８μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、１５μｇ／ｍＬ、２０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬを超えるそのような抗体のレベル（例えば、血漿レベルおよび／もしくは組織レベル）を達成すると予想される、またはＩＭＡＢ３６２抗体投与で観察される範囲およびそれを超える範囲を有すると予想されるレベルで送達するために投与される。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、ＩＭＡＢ３６２のＡＵＣが、ｍＲＮＡコード抗体に適用された場合、投与サイクルにわたって（例えば、２１日間の投与サイクルにわたって）薬理学的に活性な濃度を正確に明らかにし得ないという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、ＡＵＣは、少なくとも１回監視または測定される。いくつかの実施形態では、ＡＵＣは監視も測定もされない。それにもかかわらず、多くの実施形態では、投与量および／または投与頻度は、ＩＭＡＢ３６２のＡＵＣとは無関係であり得る。
いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、とりわけ、ＩＭＡＢ３６２について報告されたＣｍａｘに達することは必要でない可能性があり、本明細書に記載の医薬組成物およびそこから発現されるそれぞれの抗体剤によって誘導される毒性のリスクを増加させ得るという洞察を提供する。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＲＮＡからの継続的な発現により、抗体の生物学的活性用量を長期間にわたって維持する改善された薬物動態プロファイルを有することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、提供される一本鎖ＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２を標的とするＲｉｂｏＭａｂが、ＩＭＡＢ３６２について報告されたＣｍａｘ未満のレベル（例えば、血漿レベルおよび／または組織レベル）を達成すると予想されるようなレベルで投与され得る。いくつかの実施形態では、投与量および／または投与頻度は、ＩＭＡＢ３６２について報告されたＣｍａｘとは無関係であり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物の各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、投与される対象の０．１ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ体重～５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ体重の範囲内の量で、（単一のｓｓＲＮＡまたは２つ以上のｓｓＲＮＡによってコードされるかどうかにかかわらず）ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のｓｓＲＮＡを含み得る。いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、本明細書に記載されるもの）を、０．１ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．１５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．２ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．２２５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．２５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．３ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．３５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．４ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．４５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．５５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．６ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．６５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．７ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．７５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．８０ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．８５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．９ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、０．９５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、１．０ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、１．２５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、１．５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、１．７５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、２．０ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、２．２５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、２．５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、２．７５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、３．０ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、３．２５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、３．５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、４ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇ、またはそれ以上の量で含み得る。いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、本明細書に記載されるもの）を１．５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇの量で含み得る。いくつかの実施形態では、各用量または累積用量は、ｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）（例えば、本明細書に記載されるもの）を５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇの量で含み得る。
いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物の各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、０．１５ｍｇ ＲＮＡ／ｋｇの用量を送達するために投与され、これは、いくつかの実施形態では、Ｃｍａｘで約７μｇ／ｍＬのＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤に対応し得る。図１４は、ｔｍａｘ（４８時間）でのカニクイザルにおけるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするＲＮＡ原薬の用量－曝露相関を示す。当業者に理解されるように、ＬＮＰトランスフェクションの有効性およびｍＲＮＡ翻訳がカニクイザルとヒトとの間で同等であると仮定すると（Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．２０１３）、いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物の各用量または累積用量は（例えば、静脈内投与の場合）、図１４に示すようにｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）によってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の望ましい血漿レベルに対応する適切な用量を送達するために投与され得る。
いくつかの実施形態では、投与は、治療を受けている対象の応答に基づいて調整され得る。例えば、いくつかの実施形態では、投与は、安全性薬理評価（例えば、実施例５に記載されているような）の１つ以上のパラメータが、以前の用量が医師による医療安全要件を満たしていない可能性があることを示す場合、より高い用量の投与と、その後のより低い用量の投与とを含み得る。いくつかの実施形態では、用量漸増は、実施例８の表１３に示すレベルのうちの１つ以上で実施され得る；いくつかの実施形態では、用量漸増は、表１３からの少なくとも１つのより低い用量の投与と、その後の表１３からの少なくとも１つのより高い用量の投与とを含み得る。いかなる特定の理論にも拘束されることを望むものではないが、本開示は、とりわけ、薬学的に誘導される用量漸増（ＰＧＤＥ）法が、本明細書に記載の医薬組成物の適切な用量を決定するために適用され得るという洞察を提供する。例示的な用量漸増試験を実施例８に提供する。
ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の投与レジメンを決定する方法も本明細書で提供される。例えば、いくつかの実施形態では、そのような方法は、（Ａ）所定の投与レジメン下でＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）を投与する工程；（Ｂ）対象の腫瘍サイズを一定期間にわたって定期的に監視または測定する工程；（Ｃ）腫瘍サイズ測定（１回または複数回）に基づいて投与レジメンを評価する工程を含む。例えば、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切でない場合、用量および／もしくは投与頻度を増加させることができる；または、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であるが、対象において有害作用（例えば、毒性作用）が示される場合、用量および／もしくは投与頻度を減少させることができる。医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、対象において有害作用（例えば、毒性作用）が示されない場合、投与レジメンを変更しない。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の投与レジメンを決定するそのような方法は、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を有する動物対象（例えば、哺乳動物非ヒト対象）の群で実施され得る。いくつかのそのような実施形態では、動物対象の３０％未満が医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後に腫瘍サイズの減少を示し、および／もしくは動物対象によって示される腫瘍サイズの減少の程度が治療的に適切でない場合、用量および／もしくは投与頻度を増加させることができる；または、医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であるが、動物対象の少なくとも３０％において有意な有害作用（例えば、毒性作用）が示される場合、用量および／もしくは投与頻度を減少させることができる。医薬組成物（例えば、本明細書に記載されるもの）の投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、動物対象において有意な有害作用（例えば、毒性作用）が示されない場合、投与レジメンを変更しない。
本明細書で提供される投与レジメン（例えば、投与スケジュールおよび／または用量）は主にヒトへの投与に適しているが、用量当量があらゆる種類の動物への投与について決定され得ることは当業者に理解されるであろう。通常の熟達した獣医薬理学者は、もしあれば、単なる通常の実験でそのような決定を設計および／または実施することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、単剤療法としてＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍を有する患者に投与することができる。
併用療法：本開示は、とりわけ、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の能力が、標的細胞（例えば、腫瘍細胞）に対する抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導することができ、一方で、レシピエント対象の免疫系を活用することにより、化学療法および／または他の抗癌療法の細胞傷害効果（１つまたは複数）を増強することができるという洞察を提供する。いくつかの実施形態では、そのような併用療法は、例えば、単独で投与される個々の療法および／または別の適切な参照と比較して、無増悪生存期間および／または全生存期間を延長し得る。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍を有する患者において他の抗癌剤と組み合わせて投与することができる。
特定の理論に拘束されることを望むものではないが、本開示は、例えばゲムシタビン、オキサリプラチンおよび５－フルオロウラシルなどの特定の化学療法剤が、膵臓癌細胞株における既存のＣＬＤＮ－１８．２発現レベルを上方制御することが示されたことを観察する；さらに、これらの薬剤は、ＣＬＤＮ－１８．２陰性細胞株においてデノボ発現を増加させることは観察されなかった。例えば、Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．（２０１９）''Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｏｌｂｅｔｕｘｉｍａｂ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｍｏｄｅｌｓ''Ｉｎ Ｏｎｃｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８（１），ｐｐ．ｅ１５２３０９６を参照。
本開示は、とりわけ、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法が、腫瘍細胞（例えば、１つ以上の化学療法剤への曝露から生じ得るかまたは曝露から生じた可能性がある）における、（例えば、示すことが決定されている、および／または示すことが予想もしくは予測される）ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性の上昇を特徴とする腫瘍（１つまたは複数）（例えば、腫瘍細胞、そのような腫瘍（１つもしくは複数）および／または腫瘍細胞（１つもしくは複数）が疑われるおよび／または検出された対象など）に投与された場合に特に有用および／または有効であり得るという洞察を提供する。実際に、とりわけ、本開示は、本明細書に記載の提供されるＣＬＤＮ－１８．２標的化療法（例えば、ＲＮＡなどの核酸、より具体的にはＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｍＲＮＡの投与）が、１つ以上のＣＤＬＮ－１８．２増強剤（例えば、１つ以上の特定の化学療法剤）と組み合わせて（例えば、１つ以上のＣＤＬＮ－１８．２増強剤を受けたことがある、および／または受けている、またはさもなければ曝露されたことがある対象に）投与される場合、相乗的治療を提供し得ることを教示する。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化療法は、腫瘍細胞におけるＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性を上方制御すると予想されるおよび／またはそれが実証されている他の抗癌剤と組み合わせて有用であり得る。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、既に効率的であるが持続性ではない細胞傷害性治療と組み合わせ得る。
いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、そのような医薬組成物と化学療法剤とを含む併用療法の一部として投与され得る。したがって、いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、化学療法剤を受けたＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍に罹患している対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、ＣＬＤＮ－１８．２＋固形腫瘍に罹患している対象に化学療法剤と同時投与され得る。いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物および化学療法剤は、同時にまたは連続的に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、化学療法剤の最初の用量は、提供される医薬組成物の投与後（例えば、少なくとも４時間後）に投与され得る。いくつかの実施形態では、化学療法剤および提供される医薬組成物は同時に投与される。
化学療法剤が癌対象におけるＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性を上昇させると予想されるいくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、提供される医薬組成物の投与前に投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤が、そのような化学療法剤の投与に応答してＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性の上昇中にその治療的に適切な血漿濃度（例えば、本明細書に記載されるような）に達するような時点で投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤がその治療的に適切な血漿濃度（例えば、本明細書に記載されるような）に達する一方で、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性が、そのような化学療法剤に応答して、そのような化学療法剤の非存在下でのＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性と比較して、例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％またはそれ以上を含む、少なくとも５０％以上上昇するような時点で投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、本明細書に記載のｓｓＲＮＡ（１つまたは複数）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤がその治療的に適切な血漿濃度（例えば、本明細書に記載されるような）に達する一方で、ＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性が、そのような化学療法剤に応答して、そのような化学療法剤の非存在下でのＣＬＤＮ－１８．２の発現および／または活性と比較して、例えば、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも３．５倍、少なくとも４倍、少なくとも４．５倍、少なくとも５倍、少なくとも５．５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍またはそれ以上を含む、少なくとも１．５倍、少なくとも２倍またはそれ以上上昇するような時点で投与することができる。そのような化学療法剤の例には、ｎａｂ－パクリタキセル、ゲムシタビン、シスプラチンおよび／またはＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸが含まれるが、これらに限定されない。
ゲムシタビンを含む抗癌療法との併用治療：いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を含む投与される療法は、ゲムシタビンを含む抗癌療法と同時投与され得るかまたは重複し得る。ゲムシタビンは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）合成を受けている細胞を死滅させ、Ｇ１／Ｓ期境界を通る細胞の進行を遮断する。ゲムシタビンは、ヌクレオシドキナーゼによって二リン酸および三リン酸（ｄＣＴＰ）ヌクレオシドに代謝される。ゲムシタビン二リン酸は、ＤＮＡ合成のためのデオキシヌクレオシド三リン酸を生成する反応を触媒することに関与する酵素であるリボヌクレオチドレダクターゼを阻害し、ｄＣＴＰを含むデオキシヌクレオチド濃度の低下をもたらす。ゲムシタビン三リン酸は、ＤＮＡへの取り込みについてｄＣＴＰと競合する。二リン酸の作用によるｄＣＴＰの細胞内濃度の低下は、ゲムシタビン三リン酸のＤＮＡへの取り込みを増強する（自己増強）。ゲムシタビンヌクレオチドがＤＮＡに取り込まれた後、１つのさらなるヌクレオチドのみが成長中のＤＮＡ鎖に付加され、最終的にアポトーシス細胞死の開始をもたらす。
ｎａｂ－パクリタキセルを含む抗癌療法との併用治療：いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を含む投与される療法は、ｎａｂ－パクリタキセルを含む抗癌療法と同時投与され得るかまたは重複し得る。ｎａｂ－パクリタキセルは、約１３０ｎｍの平均粒径を有するパクリタキセルのアルブミン結合型である。これは、チューブリン二量体からの微小管の集合を促進し、解重合を防止することによって微小管を安定化する微小管阻害剤である。この安定性は、重要な間期および有糸***細胞機能に不可欠な微小管ネットワークの正常な動的再組織化の阻害をもたらす。パクリタキセルは、細胞周期全体を通して微小管の異常なアレイまたは「束」を誘導し、有糸***中に微小管の複数の星状体を誘導する。
シスプラチンを含む抗癌療法との併用治療：いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を含む投与される療法は、シスプラチンを含む抗癌療法と同時投与され得るかまたは重複し得る。シスプラチンは、２つの塩化物原子と２つのアンモニア分子によって囲まれた白金の中心原子をシス位置に含む重金属錯体である。理論に拘束されることを望むものではないが、シスプラチンは、ＤＮＡに結合し、その修復機構を妨げることによって癌細胞を死滅させ、最終的に細胞死をもたらすと考えられている。
ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸを含む抗癌療法との併用治療：いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物を含む投与される療法は、ＦＯＬ－フォリン酸（ロイコボリン、フォリン酸カルシウム、またはＦＡとも呼ばれる）を含む抗癌薬の組合せであるＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸを含む抗癌療法と同時投与され得るかまたは重複し得る；Ｆ－フルオロウラシル（５ＦＵとも呼ばれる）；Ｉｒｉｎ－イリノテカン；Ｏｘ－オキサリプラチン。
ロイコボリンは、テトラヒドロ葉酸の５－ホルミル誘導体のジアステレオ異性体の混合物である。混合物の生物学的に活性な化合物は、シトロボラム因子または（－）－フォリン酸として知られる（－）－ｌ－異性体である。ロイコボリンは、「１炭素」部分の供給源として葉酸塩を利用する反応に関与するために酵素ジヒドロ葉酸レダクターゼによる還元を必要としない。ｌ－ロイコボリン（ｌ－５－ホルミルテトラヒドロ葉酸）は、ｌ，５－メチルテトラヒドロ葉酸に迅速に代謝される（５，１０－メテニルテトラヒドロ葉酸、次いで５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸を介して）。次に、ｌ，５－メチルテトラヒドロ葉酸は、他の経路を介して５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸に代謝されることができ、これは、補因子であるフラビンアデニンジヌクレオチドおよびニコチンアミド－アデニンジヌクレオチドリン酸を用いた不可逆的な酵素触媒還元によって５－メチルテトラヒドロ葉酸に変換される。
ロイコボリンは、５－フルオロウラシルなどの癌治療に使用されるフルオロピリミジンの治療効果および毒性作用を増強することができる。ロイコボリンの同時投与は、５－フルオロウラシルの血漿ＰＫを変化させないようである。５－フルオロウラシルは、酵素チミジル酸シンターゼ（ＤＮＡの修復および複製に重要な酵素）に結合して阻害するフルオロデオキシウリジル酸に代謝される。ロイコボリンは、別の還元型葉酸、５，１０－メチレンテトラヒドロ葉酸に容易に変換され、これは、フルオロデオキシリジル酸のチミジル酸シンターゼへの結合を安定化するように作用し、それによってこの酵素の阻害を増強する。
フルオロウラシルは、ＤＮＡの合成を妨げ、より少ない程度にＲＮＡの形成を阻害するヌクレオシド代謝阻害剤である；これらは、急速に成長する細胞に影響を及ぼし、細胞死をもたらし得る。フルオロウラシルは、３つの主要な活性代謝物：５－フルオロ－２'－デオキシウリジン－５'－一リン酸、５－フルオロウリジン－５'三リン酸および５－フルオロ－２'－デオキシウリジン－５'－三リン酸に変換される。これらの代謝物は、５－フルオロ－２'－デオキシウリジン－５'－一リン酸によるチミジル酸シンターゼの阻害、５－フルオロウリジン－５'三リン酸のＲＮＡへの組み込み、および５－フルオロ－２'－デオキシウリジン－５'－三リン酸のＤＮＡへの組み込みを含むいくつかの作用を有する。
イリノテカンはカンプトテシンの誘導体である。カンプトテシンは、可逆的一本鎖切断を誘導することによってＤＮＡのねじれ歪みを緩和する、酵素トポイソメラーゼＩと特異的に相互作用する。イリノテカンおよびその活性代謝物ＳＮ－３８は、トポイソメラーゼＩ－ＤＮＡ複合体に結合し、これらの一本鎖切断の再連結を防止する。現在の研究は、複製酵素がトポイソメラーゼＩ、ＤＮＡ、およびイリノテカンまたはＳＮ－３８のいずれかによって形成される三元複合体と相互作用する場合、イリノテカンの細胞傷害性は、ＤＮＡ合成中に生成される二本鎖ＤＮＡ損傷に起因することを示唆している。哺乳動物細胞は、これらの二本鎖切断を効率的に修復することができない。
オキサリプラチンは、不安定なシュウ酸塩配位子の置換を介して、生理学的溶液中で活性誘導体への非酵素的変換を受ける。巨大分子と共有結合するモノアクオおよびジアクオＤＡＣＨ白金を含むいくつかの一過性反応種が形成される。鎖間および鎖内の両方の血漿腫瘍ＤＮＡ架橋が形成される。架橋は、２つの隣接するグアニン、隣接するアデニン－グアニン、および介在ヌクレオチドによって分離されたグアニンのＮ７位の間に形成される。これらの架橋は、ＤＮＡ複製および転写を阻害する。細胞傷害は細胞周期非特異的である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性膵臓腫瘍に罹患している対象への投与に有用である。いくつかの実施形態では、そのような対象は、提供される医薬組成物を単剤療法として、またはそのような提供される医薬組成物と膵臓腫瘍の治療に適応される化学療法剤とを含む併用療法の一部として受けていてもよい。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、フォリン酸（ＦＯＬ）、フルオロウラシル（Ｆ）、イリノテカン（ＩＲＩＮ）およびオキサリプラチン（ＯＸ）を含む癌治療薬の組合せであるＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸであり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、ゲムシタビンおよび／またはパクリタキセル（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）であり得るか、またはそれを含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、実施例１８に記載される膵臓癌の治療のための単剤療法としてのゲムシタビン（例えば、Ｇｅｍｚａｒ）の承認された用量および治療スケジュールに従って、ゲムシタビンと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、上記のような膵臓癌の治療のための単剤療法としてのゲムシタビン（例えば、Ｇｅｍｚａｒ）の承認された用量および治療スケジュールよりも低い用量（例えば、１０％未満、２０％未満、３０％未満、もしくはそれ以上）で、および／またはより侵襲性の低い治療スケジュール（例えば、１０日ごと、もしくは隔週など）の下で、ゲムシタビンと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、実施例１８に記載されるｎａｂ－パクリタキセル／ゲムシタビン組合せ治療の承認された用量および治療スケジュールに従って、ゲムシタビンおよびｎａｂ－パクリタキセルと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される医薬組成物は、ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビンと組み合わせて投与することができ、その少なくとも１つは、実施例１８に記載されるｎａｂ－パクリタキセル／ゲムシタビン組合せ治療の承認された用量および治療スケジュールよりも低い用量（例えば、１０％未満、２０％未満、３０％未満、もしくはそれ以上）、および／またはより侵襲性の低い治療スケジュール（例えば、１０日ごと、もしくは隔週など）の下においてである。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される医薬組成物は、表１７に記載される投与スケジュールに従って、ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビンと組み合わせて投与することができる（実施例１８）。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される技術は、ＣＬＤＮ－１８．２陽性胆道腫瘍に罹患している対象への投与に有用である。いくつかの実施形態では、そのような対象は、提供される組成物を単剤療法として、またはそのような提供される医薬組成物と胆道腫瘍の治療に適応される化学療法剤とを含む併用療法の一部として受けていてもよい。いくつかの実施形態では、そのような化学療法剤は、ゲムシタビンおよび／またはシスプラチンであり得るか、またはそれを含み得る。
有効性の監視：いくつかの実施形態では、提供される治療を受けている患者を、投与された治療の有効性を評価するために投与レジメンにわたって定期的に監視し得る。例えば、いくつかの実施形態では、投与された治療の有効性を、定期的に、例えば、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、またはそれ以上ごとに、治療中イメージングによって評価し得る。いくつかの実施形態では、実施例１９に記載されるような１つ以上の有効性評価を実施し得る。
いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物（例えば、単剤療法として、または例えば標準治療との併用療法として）の活性の抗腫瘍および安全性指標としての役割を果たし得る様々な薬物動態および薬力学マーカ（例えば、実施例６に記載されているような）の１つ以上を評価することができる。
実施例１：１つ以上の例示的なｍＲＮＡから発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のインビトロでの特徴付け
本実施例は、細胞への導入時にＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする１つ以上のｍＲＮＡから発現される例示的なＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のインビトロでの特徴付けを示す。
肝細胞のＲＮＡトランスフェクション後の完全なＩｇＧの構築。この実施例は、インビトロでのそれぞれのｍＲＮＡの細胞取り込み後の１つ以上の例示的なｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）から発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤（以下、「ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ」）の翻訳、構築および分泌を示す。この実施例では、２つの異なる発現系、すなわちインビトロで肝臓標的化に類似する初代ヒト肝細胞およびチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ－Ｋ１）を利用した。本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードするｍＲＮＡを含む組成物を用いて、細胞のリポフェクションを実施した。分泌されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂを含有する細胞上清を、例えば４８時間後に回収し、例えばウェスタンブロットおよびＥＬＩＳＡによって分析した。完全に構築されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＩｇＧ抗体）を両方の発現系において作製した（図１）。
例示的なＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの結合特異性。１つ以上の例示的ｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）から発現される例示的ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤のＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する標的特異性を決定するために、ＣＨＯ－Ｋ１細胞において発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂおよびＣＬＤＮ－１８．２＋ＨＥＫ２９３トランスフェクタントを含有する細胞培養上清を標的細胞として使用して、フローサイトメトリ結合アッセイを実施した。密接に関連するスプライスバリアントＣＬＤＮ１８．１に対するＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの交差反応性を評価するために、ＣＬＤＮ１８．１トランスフェクト細胞へのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの結合を試験した。１つ以上の例示的ｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）から発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較して、密着結合ポリペプチドであるＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合した。いくつかの実施形態では、１つ以上の例示的ｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）から発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの結合は、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに限定されるかまたは特異的であり、参照タンパク質ＩＭＡＢ３６２（またはゾルベツキシマブもしくはクラウジキシマブとして知られる）に匹敵する濃度依存性を示した（図２）。
作用機序分析：インビトロでの抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂをコードする１つ以上のｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）からのインビトロ翻訳後にＣＨＯ－Ｋ１細胞によって発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの生物活性を、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を分析することによって評価した。例示的なＡＤＣＣアッセイを、例えば、ＣＬＤＮ－１８．２＋胃癌トランスフェクタント（例えば、ＮＵＧ－Ｃ４）および標的陰性乳癌細胞株（例えば、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）を使用して実施して、特異的溶解を評価した。例示的なＣＤＣアッセイのために、ＣＬＤＮ－１８．２＋トランスフェクタント（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１）およびＣＬＤＮ－１８．２陰性（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１）細胞株を利用した。インビボ条件をシミュレートするために、３人の異なる健常ドナー由来のヒトＰＢＭＣを３０：１のエフェクタ対標的（Ｅ：Ｔ）比でＡＤＣＣアッセイのエフェクタ細胞として使用し、ヒト血清（例えば、市販のヒト血清）をＣＤＣアッセイの補体源として使用した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、ＡＤＣＣアッセイ［図３、パネルＡ；ＥＣ５０ １０～１２７ｎｇ／ｍＬ（ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ）、１４～２６５ｎｇ／ｍＬ（ＩＭＡＢ３６２）］およびＣＤＣアッセイ（図３、パネルＢ）において、参照タンパク質ＩＭＡＢ３６２に匹敵する標的特異的かつ用量依存的な細胞傷害を効率的に媒介した。
実施例２：げっ歯動物における１つ以上の例示的ｍＲＮＡからインビボで発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の特徴付け
例示的ｍＲＮＡ（例えば、本明細書に記載されるもの）からインビボで発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの生物活性をエクスビボＡＤＣＣアッセイで評価した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤をコードする少なくとも１つ以上のｍＲＮＡを含む１μｇ（約０．０４ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）および３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）の医薬組成物（「ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物」）または８０μｇ（約３．２０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２の５回目のＩＶ投与の２４時間後に採取したＢａｌｂ／ｃＪＲｊマウスのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂまたはＩＭＡＢ３６２含有血漿を使用してＡＤＣＣアッセイを実施した。ＩＭＡＢ３６２を添加した未処置マウスの血漿をアッセイ基準として使用した。ＣＬＤＮ－１８．２＋胃癌トランスフェクタント（例えば、ＮＵＧ－Ｃ４）を標的として使用し、健常ドナー由来のヒトＰＢＭＣをエフェクタ細胞として使用した。標的およびエフェクタ細胞を３０：１のＥ：Ｔ（エフェクタ対標的）比で１％のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ含有血漿と共に４８時間インキュベートし、ルシフェラーゼベースのアッセイでＡＤＣＣを決定した。げっ歯動物で発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、８０μｇ（約３．２０ｍｇ／ｋｇ）の参照タンパク質ＩＭＡＢ３６２と同様の高くかつ用量依存的な標的細胞溶解を示した（図４、パネルＡ）。対照として使用した標的陰性乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１では非特異的溶解は見られず、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの標的特異性を示した（図４、パネルＢ）。結果は、げっ歯動物で発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂが標的腫瘍細胞の高いＡＤＣＣを媒介できることを示す。
実施例３：非ヒト霊長動物における１つ以上の例示的ｍＲＮＡからインビボで発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤の特徴付け
系統発生的および生理学的にヒトに密接に関連する生物におけるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの生物活性を決定するために、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇおよび１．６ｍｇ／ｋｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物のＩＶ投与の２４時間後および１６８時間後に採取した非ヒト霊長動物（ＮＨＰ）、例えばカニクイザルのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ含有血清を用いたＡＤＣＣ試験を実施した。ＡＤＣＣアッセイを、実施例２に記載されるように実施した。ＮＨＰで発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、高くかつ用量依存的な標的細胞溶解を示した（図５、パネルＡ）。標的陰性乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１では、低いエフェクタであるドナー依存的な非特異的溶解が見られた（図５、パネルＢ）。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の３回目の注射の４８時間後に収集した、測定された最も高いＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度（２３２μｇ／ｍＬ）を有する動物であるサルＮｏ．１４の血清を、１０点希釈系列でルシフェラーゼベースのＡＤＣＣアッセイに供した。精製ＩＭＡＢ３６２をアッセイ参照タンパク質として使用した。ＮＨＰによって発現されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、１０ｎｇ／ｍＬ（６６ｐＭ）のＥＣ５０でＮＵＧ－Ｃ４標的細胞（図５、パネルＣ）の高くかつ特異的な溶解を媒介した。これらの結果は、ＮＨＰによって発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂが強力かつ標的特異的ＡＤＣＣを媒介し得ることを示す。
実施例４：静脈内投与されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物はインビボで腫瘍増殖阻害を媒介する
ＣＬＤＮ－１８．２＋ヒト胃癌異種移植腫瘍モデルにおいて静脈内（ＩＶ）投与されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の抗腫瘍活性を決定するために、Ｈｓｄ：無胸腺ヌードＦｏｘｎ１ ｎｕ／ｎｕマウスに５×１０６のＣＬＤＮ－１８．２＋ＮＣＩ－Ｎ８７トランスフェクタントを皮下接種した。確立された腫瘍（平均≧３０ｍｍ３）を有するマウスに、試験の１５、２２、２９、３６、４３および５０日目に３μｇ、１０μｇおよび３０μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物、ルシフェラーゼをコードする３０μｇの対照ｍＲＮＡ、生理食塩水または８００μｇの参照タンパク質ＩＭＡＢ３６２の６種類の単回ＩＶボーラス注射を行った。対照と比較して有意な腫瘍増殖阻害が、３０μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物を用いた３回目の投与サイクル後に観察された。３０μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の抗腫瘍活性は、８００μｇの参照タンパク質ＩＭＡＢ３６２で得られた腫瘍増殖遅延に匹敵した（図６）。
実施例５：ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の安全性薬理評価
ＣＮＳおよび呼吸器の安全性のＧＬＰ準拠評価を、反復投与後のマウスにおいて実施した。反復投与後の非ヒト霊長動物（ＮＨＰ）の血圧に対するＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の潜在的な効果を非ＧＬＰ ＰＫ／忍容性試験で評価した。全ての試験は、ＩＣＨ Ｓ７Ａ準拠方式で設計された（表４）。
Figure 2023520062000012
中枢神経系および呼吸器系の安全性。雄および雌マウスにおけるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の反復静脈内ボーラス注射の効果を評価するために、ＧＬＰ準拠亜慢性毒性試験を実施した。この試験は、以下に示すように、サテライト動物の安全性薬理評価を含んだ（表５）。
Figure 2023520062000013
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の呼吸器安全性を評価するために、投与前、２回目および４回目の注射の投与の４時間後および２４時間後にプレチスモグラフィを実施した。呼吸数、１回換気量、分時拍出量、最大吸気流量、最大呼気流量、吸気時間、呼気時間および気道抵抗指数を、被験物質投与後の測定のために１０から６０分まで１０分ごと（投与前および投与後）ならびに１から４時間まで３０分ごと（投与後）に評価して、各期間の平均値を得た。
動物は、投与前ならびに１回目および４回目の注射の４８時間後に神経学的試験を受けた。意識、気分、運動活動、ＣＮＳ興奮、姿勢、筋緊張、反射および自律神経体温、後肢の広がり、握力および自発運動を試験した。
統計学的に有意な変化（ｐ≦０．０５）が１つのパラメータについて見られた：１００μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物／動物を投与された雄マウスは、初回の投与の４８時間後に握力の低下を示した（ｐ≦０．０１）；１００μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物／動物を投与された雌マウスは、初回の注射後に同様の把持力の低下を示した（ｐ≦０．０５）。
胃安全性。理論に拘束されることを望むものではないが、ＣＬＤＮ－１８．２標的は、ヒトおよびマウスの胃の健康な組織で発現される（Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）。胃の肉眼的および組織病理学的評価を、マウスにおけるＧＬＰ準拠反復投与毒性試験に含めた（実施例７を参照）。
心血管安全性。ＰＫ／忍容性試験では、動物の初回投与前および３回目の投与の２４時間後に血圧測定を実施した（設計された試験は実施例７に記載されている）。
末梢動脈収縮期および拡張期血圧ならびに結果として得られた平均血圧は、被験物質処置動物において正常な生理学的限界内であった。
実施例６：ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の薬物動態評価
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）製剤化ＲＮＡの薬物動態は、２つの段階に分けることができる：静脈内注射後、ＬＮＰは循環中に全身的に分布し、意図する標的器官である肝臓にＲＮＡを送達する。第２に、肝細胞がＬＮＰ製剤によってトランスフェクトされ、ＲＮＡを翻訳し、コードされたタンパク質を分泌する。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの薬物動態プロファイルを、３つの異なる種において単回用量投与後［マウス（図７）およびラット（図８）ならびに反復用量投与後［マウス（図９）および非ヒト霊長動物（図１０）］に特徴付けた。
Figure 2023520062000014
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物から翻訳されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂのＰＫを評価するために、Ｂａｌｂ／ｃ ＪＲｊマウスにおける単回投与ＰＫ試験を実施した。処置群は、１μｇ（約０．０４０ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）または３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物および内部対照として４０μｇ（約１．６０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２参照タンパク質のＩＶボーラス注射を受けた。投与の６、２４、９６、１６８、２６４、３３６および５０４時間後に血漿を採取し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度をＥＬＩＳＡによって評価した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度は、投与の２４時間後にピークを有し、その後徐々に減少する、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の濃度依存的発現を示した。最高用量で約４５０μｇ／ｍＬのピーク濃度に達し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度は投与後５０４時間まで検出可能であった（図７）。結果は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂが単回投与後にマウスにおいて用量依存的に発現されることを示す。
より大きなげっ歯動物におけるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物から翻訳されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂのＰＫを評価するために、ＲｊＨａｎ：Ｗｉｓｔｅｒラットで単回投与試験を実施した。処置群は、０．０４ｍｇ／ｋｇ、０．１０ｍｇ／ｋｇ、０．４０ｍｇ／ｋｇまたは１．２０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物および３．６０ｍｇ／ｋｇのＩＭＡＢ３６２参照タンパク質のＩＶボーラス用量を投与された。投与の２、６、８、１０、２２、２４、２７、３０、４８、７２、９６、１６８、２１６、２６４および３３６時間後に血漿を採取し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、投与の２４時間後にピークを有し、その後徐々に減少する、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の濃度依存的発現を明らかにした。マウス（図７）と同様に、最高用量で約４５０μｇ／ｍＬのピーク濃度に達し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度は、全ての用量群において投与の３３６時間後の試験終了まで検出可能であった（図８）。結果は、ラットにおけるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ発現レベルがマウスと同様であり得ることを示す。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度がＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毎週の投与によって維持されるかどうかを評価するために、Ｂａｌｂ／ｃＪＲｊマウスにおいて反復投与ＰＫ試験を実施した。処置群は、週１回の間隔で、１μｇ（約０．０４ｍｇ／ｋｇ）、３μｇ（約０．１０ｍｇ／ｋｇ）、１０μｇ（約０．４０ｍｇ／ｋｇ）または３０μｇ（約１．２０ｍｇ／ｋｇ）のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物および内部対照として８０μｇ（約３．２０ｍｇ／ｋｇ）のＩＭＡＢ３６２参照タンパク質の５回のＩＶボーラス投与を受けた。投与の２４時間前および２４時間後（Ｃｍａｘ）にそれぞれ血漿を採取し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの濃度をＥＬＩＳＡによって決定した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の反復投与は、翻訳の減少を伴わずに、最大約１０００μｇ／ｍＬ（３０μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物）のピーク濃度で持続的なＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂレベルをもたらした（図９）。結果は、持続的なＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ濃度が、マウスにおけるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毎週の投与によって達成され得ることを示す。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の反復投与ＰＫ試験を、ヒトと系統発生的および生理学的に密接に関連する生物としてＮＨＰにおいて実施した（例示的な試験デザインの説明については表７を参照）。
Figure 2023520062000015
処置群は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇまたは１．６ｍｇ／ｋｇのいずれかの静脈内ボーラス注射を週１回の間隔で３回受けた。対照として、生理食塩水または空のＬＮＰを同様に投与した。血清を、１回目および３回目の投与の６、２４、４８、７２、９６および１６８時間後、ならびに２回目の投与の４８、７２および１６８時間後、ならびに３回目の投与の２６４、３３６および５０４時間後に採取した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの濃度をＥＬＩＳＡによって分析した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、投与の４８～７２時間後にピークを有し、その後徐々に減少する、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の用量依存的発現を示した。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の３回目の投与の４８～７２時間に最高用量で２３１．７μｇ／ｍＬのピーク血清濃度に達し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂは、１回目の投与の８４０時間後の試験終了まで検出可能であった（図１０）。結果は、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毎週の投与が、ＮＨＰにおける持続可能なＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ発現をもたらし得ることを示す。
分布：ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の生体内分布を、単回ＩＶ注射後のマウスにおいて検討した。マウス組織中のメッセンジャＲＮＡおよび脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を、それぞれデジタル液滴ＰＣＲ（ｍＲＮＡ）または液体シンチレーション分光法（放射性標識ＬＮＰ）によって定量化した。ルシフェラーゼをコードするｍＲＮＡを封入しているＬＮＰの器官標的化および発現を、生物発光イメージングによって検討した。
ｍＲＮＡ分布：１００μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物／動物の単回用量をＢａｌｂ／ｃマウス（３匹／性別／時点）にＩＶ投与し、血液および組織（脾臓、肺、肝臓、腎臓、心臓および脳）を投与の０．０８３（５分）、０．５、６、２４、７２および１６８時間後に採取した。
Figure 2023520062000016
ＬＮＰ分布：インビボ翻訳ｍＲＮＡの肝臓標的化および動態を評価するために、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）を用いて製剤化されたホタルルシフェラーゼをコードする修飾ｍＲＮＡを用いて脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）の生体内分布を評価した。ＩＶ投与後、ルシフェラーゼタンパク質は、主に肝臓に位置する高い生物発光シグナルを有する時間依存的翻訳を示した（図１１）。結果は、ＬＮＰに封入されたｍＲＮＡが肝臓に標的化され、肝臓で発現され得ることを示す。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物のＬＮＰの組織分布プロファイルを、１ｍｇ／ｋｇの単回ＩＶボーラス注射後のＣＤ－１マウス（４匹／性別／時点）で調べた。［３Ｈ］－ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物をこの分析に使用し、粒子は、交換不可能な非代謝性ＬＮＰマーカである［３Ｈ］－コレステリルヘキサデシルエーテル（［３Ｈ］－ＣＨＥ）を含有した。例示的な試験デザインを以下の表９に示す。
Figure 2023520062000017
マウスを安楽死させ、血液および血漿を投与の０．０８３（５分）、０．２５、０．５、１、２、４、８および２４時間後に収集した。組織は、投与の０．２５、１、４および２４時間後にのみ採取した。全ての試料の放射能を標準液体シンチレーション計数（ＬＳＣ）によって決定し、得られた値を使用して総脂質濃度および相対脂質濃度を計算した。
［３Ｈ］－ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物は、マウスの血液および血漿中で、血液／血漿濃度の急速な初期低下とその後のより遅い排出期という二相性動態を示した。組織への［３Ｈ］－ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の分布は迅速であり、投与の０．５～２時間後までに全ての組織でピークレベルが観察された。［３Ｈ］－ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の分布の主要な組織／器官は肝臓および脾臓であり（注射後４時間で、注射用量の約７０～７４％および約０．８～１．２％がそれぞれ肝臓および脾臓に存在する）、他の組織への最小限の分布が観察された。様々な組織における計算された総脂質濃度（すなわち、投与された４つ全ての脂質）および計算された［３Ｈ］－ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の注射用量の％を表１０に示す。
Figure 2023520062000018
代謝および***：シュードウリジン修飾ｍＲＮＡを含むメッセンジャＲＮＡは、一般に、細胞ＲＮａｓｅによる分解に感受性であり、核酸代謝に供される。ヌクレオチド代謝は細胞内で連続的に起こり、ヌクレオシドは分解されて生成物を廃棄し、***されるかまたはヌクレオチド合成のために再利用される。
本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物のいくつかの実施形態では、そのような組成物は複数の脂質を含み、その一部は天然に存在し得る（例えば、いくつかの実施形態では、コレステロールおよびＤＳＰＣなどの中性脂質）。本開示を読む当業者は、天然に存在する脂質の代謝および***が内因性脂質の代謝および***と類似し得ることを予想し得る。本開示を読む当業者はまた、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物（例えば、複合脂質およびカチオン性脂質）内の他の脂質の代謝および***が、当技術分野で公知の方法を使用して特徴付けられ得ることを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、発現されるＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂの構造はＩｇＧ１抗体に基づく。いくつかのそのような実施形態では、その代謝は内因性ＩｇＧ１分子の代謝と同様であり得る。例示的な代謝には、小さなペプチドおよびアミノ酸への分解が含まれるが、これらに限定されない。
実施例７：ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毒性評価
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毒性評価は、ヒト血液成分を使用したインビトロ試験ならびにマウスおよびカニクイザルにおけるインビボ試験を含むことができる。ヒト血液との薬物製剤血液適合性をインビトロで評価することができるが、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物（ＲＮＡおよびＬＮＰ）ならびに翻訳されたＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ（タンパク質）によって媒介される毒性を、選択されたインビボモデルにおいて検出することができる。非臨床試験で評価された特定の特徴の概要を以下の表１１に示す。
Figure 2023520062000019
いくつかの実施形態では、抗体（ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲｉｂｏＭａｂ）媒介毒性の評価のための適切な種は、高度に保存されたタンパク質配列およびそれらの種におけるＣＬＤＮ－１８．２標的の等しい発現パターンのために、マウスおよびカニクイザルである（Ｔｕｒｅｃｉ ｅｔ ａｌ．２０１１）。
単回投与毒性学。単回投与毒性試験を雄および雌のＣＤ－１マウスで実施して、ｉ）ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の潜在的な毒性を特徴付け、ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毒性をそれぞれの対照物質（例えば、空の脂質ナノ粒子）と比較し、ならびにｉｉｉ）４週間の観察期間（２９日目に終了）後のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の可逆性、進行および／または潜在的な遅発作用を評価した。
マウスは、ＩＶ投与により１日目にＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物（１、２もしくは４ｍｇ／ｋｇの総ｍＲＮＡ用量レベル）または対照物質（例えば、空のナノ粒子もしくは生理食塩水対照）の単回ＩＶ用量を受けた。３日目（主動物）および２９日目（回復／遅延所見）に動物を安楽死させた。試験エンドポイントには、死亡率、臨床所見、体重変化、臨床化学、剖検所見、臓器重量、および組織病理学（肝臓、脾臓および胃）が含まれた。
１、２および４ｍｇ／ｋｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物または空のＬＮＰの単回ＩＶ投与は、雄および雌のＣＤ－１マウスにおいて一般に忍容性が高かった。２８日間の観察期間中に死亡はなかった。３日目に、肝臓パラメータおよび脾臓重量の増加に関して軽微な所見が認められた。肝臓および脾臓の顕微鏡評価における軽微な所見を非有害性と見なした。全ての所見は、２９日目の回復期間後に解消された。
反復投与毒性学。ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の毎週の静脈内ボーラス投与とそれに続く２週間の回復期間により、Ｂａｌｂ／ｃマウスにおいて２１日間のＧＬＰ準拠反復投与毒性試験を実施した（例示的な試験デザインについては表１２を参照）。試験の読み出しには、不耐性の臨床徴候（例えば、眼瞼下垂、立毛、運動性の低下および／または触ると冷たい）、死亡率、体重および摂餌量、局所耐性、血液学、臨床化学（例えば、グロブリン、アルブミン、コレステロール、クレアチニン、総タンパク質、血中グルコース、アルカリホスファターゼ（ａＰ）、乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）およびアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＰ）およびグルタミン酸デヒドロゲナーゼ（ＧＬＤＨ）の血中レベル）、尿分析、眼科学および聴覚系、肉眼的死後所見、臓器重量、骨髄、組織病理学、ならびにサイトカイン（例えば、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－１０、および／またはＩＬ－１２ｐ７０）が含まれるが、これらに限定されない。
Figure 2023520062000020
免疫毒性：ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の血液適合性を、それぞれ薬物製剤媒介の補体活性化およびサイトカイン放出について試験して、ヒト血清および血液においてインビトロで決定した。さらに、インビボ免疫毒性を、マウスにおける反復投与毒性試験およびカニクイザルにおける薬物動態試験の一部として評価した。全ての試験は、ＩＣＨ Ｓ８ガイドライン（ヒト医薬品の免疫毒性試験）に従って設計された。
毒性試験の予備結果は、空のＬＮＰ対照群および両用量群（３０および１００μｇのＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物／動物）においてＩＬ－６およびＴＮＦ－αが投与の６時間後に一過性に上昇し、ＩＦＮ－αおよびＩＦＮ－γは両用量群で一過性に上昇したことを示す。血漿レベルは投与後４８時間までにベースラインに戻った。ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－１０またはＩＬ－１２ｐ７０の上昇は、いずれの群においても観察されなかった。
実施例６に記載のカニクイザルにおけるＰＫ／忍容性試験では、いずれの群においてもサイトカインの上昇は観察されなかった。
ヒト血清のインビトロ補体活性化。インビトロでヒト補体を活性化するＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物の可能性を、ヒトに投与された類似の脂質ナノ粒子生成物（例えば、ｓｉＲＮＡを含有する）の毒性に関連する用量での血漿Ｃｍａｘレベルに基づいて選択された薬物製剤濃度で、正常ヒト血清中でインキュベートすることによって評価した（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ ｅｔ ａｌ．２０１４；Ｃｏｅｌｈｏ ｅｔ ａｌ．２０１３；Ｔａｂｅｒｎｅｒｏ ｅｔ ａｌ．２０１３；Ｐａｔｉｓａｒａｎ ＦＤＡ ａｐｐｒｏｖａｌ ２０１７）。補体活性化を、マルチプレックスサイトメトリビーズアレイを使用して補体分割産物、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ａのレベル、および酵素イムノアッセイを使用して末端補体複合体、ＳＣ５ｂ－９のレベルを評価することによって評価した。
ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物と正常ヒト血清補体とのインビトロインキュベーションは、陰性対照と比較した場合、補体分割産物または末端補体複合体の増加をもたらさなかったが、陽性対照によって予想された活性化が誘導された。要約すると、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物は、試験した条件下でインビトロでヒト補体を活性化しなかった。
全血サイトカイン放出。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物は、非経口的に投与され得る。そのような実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物は、血液中の循環の間に末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と接触し得る。本開示を読む当業者は、薬物製剤と血液成分との間の相互作用がサイトカイン分泌の誘導をもたらし得ることを理解するであろう。したがって、例示的なＣＬＤＮ－１８．２標的化ＲＮＡ組成物のインビトロ忍容性を、ヒト全血を使用して調べた。例えば、炎症性サイトカイン（例えば、限定されないが、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１β、ＩＬ ２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１２ｐ７０、ＩＰ－１０および／またはＴＮＦ－α）の分泌を、ヒト血液中の予想される濃度を代表する希釈範囲のインキュベーション後に評価した。このアッセイでは、サイトカイン分泌の被験物質関連の誘導は検出できず、インビトロ忍容性を示すことができた。
実施例８：例示的な投与（例えば用量漸増）
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、単剤療法として、および／または他の抗癌療法と組み合わせて、ＣＬＤＮ－１８．２陽性癌を有する患者に投与することができる。
いくつかの態様では、投与は１回以上のサイクルを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも３～８サイクルで投与することができる。
いくつかの態様では、投与レジメン、特に単剤療法投与レジメンは、２１日ごと（Ｑ３Ｗ）の投与であり得るか、それを含み得る。
いくつかの実施形態では、用量漸増を実施し得る。いくつかのそのような実施形態では、投与は、以下の表１３に示すレベルのうちの１つ以上で実施され得る；いくつかの実施形態では、用量漸増は、表１３からの少なくとも１つのより低い用量の投与と、その後の表１３からの少なくとも１つのより高い用量の投与とを含み得る。
Figure 2023520062000021
いくつかの実施形態では、例えば、０．２、０．２２５、０．２５、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６５、０．７、０．７５、０．８０、０．８５、０．９、０．９５、１．２５、１．７５、２．２５、２．７５、３．２５、３．５および４ｍｇ／ｋｇの用量レベルを含む、さらなるまたは代替の用量レベルを評価し得る。
治療の有効性は、例えば、６週目（＋７日）、２４週間にわたって６週間ごと（±７日）、およびその後１２週間ごと（±７日）の治療中イメージングによって評価することができる。
実施例９：特定の癌の治療のための承認された療法
ＣＬＤＮ－１８．２発現に関連する特定の癌について承認された治療法が利用可能である。例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤であるエルロチニブは、局所進行性、切除不能または転移性の膵臓癌を有する患者の第一選択治療のためにゲムシタビンと組み合わせて米国で承認された唯一の標的療法である。しかしながら、エルロチニブ対プラセボを比較するランダム化比較試験（ＲＣＴ）は、０．４ヶ月の全生存期間（ＯＳ）利益中央値および０．３ヶ月の無増悪生存期間（ＰＦＳ）利益中央値を示した。
いくつかの実施形態では、膵臓癌の治療のためのエルロチニブ（例えば、エルロチニブ塩酸塩）の推奨される１日用量は、ゲムシタビンと組み合わせて、食物摂取の少なくとも１時間前または２時間後に服用される約１０９ｍｇである。いくつかの実施形態では、膵臓癌の治療のためのゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ）の推奨用量は、各２８日間のサイクルの最初の７週間は週に１回、次いで１週間の休薬、３週間は週に１回で、３０分間かけて１０００ｍｇ／ｍ２である。
実施例１０：例示的な有害事象
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物が投与される対象は、潜在的な有害事象の１つ以上の指標について治療レジメンの期間にわたって監視され得る。例えば、いくつかの実施形態では、対象は、１つ以上の血液毒性（例えば、好中球減少症、血小板減少症および／もしくは貧血などの存在）、ならびに／または非血液毒性（例えば、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）および／もしくはビリルビンの上昇など）について監視され得る。
実施例１１：本明細書に記載の一本鎖ＲＮＡの例示的な評価および／または基準
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の評価が、一本鎖ＲＮＡの製造または他の調製もしくは使用の間に利用され得る（例えば、出荷試験として）。
いくつかの実施形態では、１つ以上の品質管理パラメータを、本明細書に記載の一本鎖ＲＮＡが許容基準を満たすかまたは超えるかどうかを決定するために評価し得る（例えば、その後の製剤化および／または配給のための出荷のために）。いくつかの実施形態では、そのような品質管理パラメータは、ＲＮＡの完全性、ＲＮＡ濃度、残留ＤＮＡ鋳型および／または残留ｄｓＲＮＡを含み得るが、これらに限定されない。ＲＮＡの質を評価するための方法は当技術分野で公知である；例えば、当業者は、いくつかの実施形態では、表１４に記載されるような１つ以上の分析試験をＲＮＡ品質評価のために使用できることを認識するであろう。
いくつかの実施形態では、一本鎖ＲＮＡのバッチは、次の作業工程（１つまたは複数）を決定するために、表１４に列挙される以下の特徴について評価され得る。例えば、一本鎖ＲＮＡのバッチは、ＲＮＡ品質評価が、そのような一本鎖ＲＮＡのバッチが表１４に列挙される許容基準を満たすかまたは超えることを示す場合、製造および／または製剤化および／または配給の１つ以上のさらなる工程のために指定され得る。さもなければ、そのような一本鎖ＲＮＡのバッチが許容基準を満たさないかまたは超えない場合、代替措置をとることができる（例えば、バッチを廃棄する）。
いくつかの態様では、表１４に示す例示的な評価結果を有する一本鎖ＲＮＡのバッチを、製造および／または製剤化および／または配給の１つ以上のさらなる工程に利用することができる。
Figure 2023520062000022
実施例１２：２つ以上のＲＮＡを含む組成物の例示的な評価および／または基準
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の評価が、原薬の製造または他の調製もしくは使用の間中に利用され得る（例えば、出荷試験として）。
いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の重鎖をコードする第１の一本鎖ＲＮＡのバッチおよびＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の軽鎖をコードする第２の一本鎖ＲＮＡのバッチを、実施例１１に記載されるように１つ以上の特徴について評価する。いくつかのそのような実施形態では、表１４に列挙される許容基準を両方とも満たすまたは超える第１および第２のｓｓＲＮＡのバッチを、例えば、約１．５：１～約１：１．５のモル比で一緒に混合して、ＲＮＡ原薬を形成する。いくつかの実施形態では、そのようなＲＮＡ原薬は、例えば、物理的外観、ＲＮＡの長さ、同一性（ＲＮＡとして）、完全性、配列、および／または濃度、ｐＨ、オスモル濃度、ＲＮＡ比（例えば、ＨＣ ＲＮＡ対ＬＣ ＲＮＡの比）、効力、細菌内毒素、バイオバーデン、およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない、１つ以上の品質管理パラメータについて評価され得る（例えば、出荷および／またはさらなる製造のために）。そのような品質管理パラメータは、例えば、目視検査、ゲル電気泳動（例えば、アガロースゲル電気泳動、キャピラリゲル電気泳動）、酵素分解、配列決定、紫外吸収分光法などの当技術分野で公知の特定の分析方法の１つ以上によって評価することができる。ＰＣＲ法、細菌内毒素試験（例えば、カブトガニ血球抽出物（ＬＡＬ）試験）。
実施例１３：例示的なＲＮＡ産物製剤
いくつかの実施形態では、例示的なＲＮＡ産物製剤は、例えば、静脈内投与のための水性緩衝液中の滅菌ＲＮＡ－脂質ナノ粒子（ＲＮＡ－ＬＮＰ）分散液である。例えば、いくつかの実施形態では、そのようなＲＮＡ産物製剤は、約０．８～約１．２ｍｇ／ｍＬで５．０ｍＬの公称充填体積まで充填され得る。いくつかの実施形態では、各バイアルは単回使用用であり得る。いくつかの実施形態では、ＲＮＡ産物製剤（例えば、本明細書に記載されるような）は、－８０℃～－６０℃で凍結保存され得る。
いくつかの実施形態では、そのような例示的ＲＮＡ産物製剤は、それぞれがＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の一部をコードする２つ以上の異なるＲＮＡ（例えば、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の重鎖をコードするＲＮＡおよびＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の軽鎖をコードするＲＮＡ）、少なくとも１つのカチオン性脂質、少なくとも１つの複合脂質、少なくとも１つの中性脂質、ならびに１つ以上の塩を含む水性緩衝液を含み得る。いくつかの実施形態では、ポリマー結合脂質（例えば、ＰＥＧ結合脂質、例えば、いくつかの実施形態では、ＰＥＧ結合脂質は、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドであるか、またはそれを含む）は、総脂質の約１～２．５モル％で存在し得る。いくつかの実施形態では、カチオン性脂質（例えば、いくつかの実施形態では、（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）であるか、またはそれを含むカチオン性脂質）は、総脂質の約３５～６５モル％で存在し得る。いくつかの実施形態では、中性脂質（例えば、いくつかの実施形態では、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンおよび／または合成コレステロールであるか、またはそれを含む中性脂質）は、総脂質の約３５～６５モル％で存在し得る。いくつかの実施形態では、例示的なＲＮＡ産生製剤の組成は、表１５に示すように特徴付けられ得る。
Figure 2023520062000023
実施例１４：本明細書に記載のＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤中の例示的な脂質賦形剤
薬物製剤の製造プロセスで使用される材料は、認定された販売業者から購入し、検疫し、サンプリングし、同定し、試験し、放出することができる。賦形剤の試験は、所定の仕様に従って、または欧州薬局方／米国薬局方に従って実施される。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、脂質賦形剤に関するさらなる情報を提供する表１６に示される４つの脂質賦形剤を含む。全ての賦形剤は、ＧＭＰグレードの材料として供給される。
Figure 2023520062000024
カチオン性脂質Ａ：（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）
いくつかの実施形態では、アミノ脂質（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）は、本明細書に記載のＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤の機能性カチオン性脂質成分である。これは、インビボでの生分解、代謝およびクリアランスを促進するように設計された。アミノ脂質は、エステル結合を介して２つの飽和アルキル鎖に連結された滴定可能な第三級アミノ頭部基を含み、これがＬＮＰに組み込まれると、ＲＮＡの粒子形成、細胞取り込み、融合原性および／またはエンドソーム放出を調節する異なる物理化学的特性を付与する。エステル結合は、容易に加水分解されて、腎経路を介した迅速な分解および***を促進することができる。アミノ脂質は約６．２５の見かけのｐＫａを有し、ｐＨ５で本質的に完全に正に帯電した分子をもたらす。製造プロセス中に、ｐＨ４．０のアミノ脂質を含有するエタノール脂質混合物にＲＮＡ水溶液を導入すると、負に帯電したＲＮＡ骨格と正に帯電したカチオン性脂質との間に静電相互作用が生じる。この静電相互作用は、ＲＮＡ原薬の効率的な封入と同時に粒子形成をもたらす。ＲＮＡ封入後、得られたＬＮＰを取り囲む培地のｐＨを７．４に調整すると、ＬＮＰの表面電荷の中和をもたらす。他の全ての変数が一定に保持される場合、電荷中性粒子は、細網内皮系によって急速に除去される荷電粒子と比較して、より長いインビボ循環寿命および肝細胞へのより良好な送達を示す。エンドソーム取り込み時に、エンドソームの低いｐＨは、ＬＮＰを融合原性にし、標的細胞のサイトゾルへのＲＮＡの放出を可能にする。
ＰＥＧ結合脂質Ａ：２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、機能性脂質賦形剤、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００］－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミドを含有する。このＰＥＧ化脂質は、臨床試験において安全性が実証された他の臨床的に承認されたＰＥＧ化脂質と構造的に類似する。ＰＥＧ化脂質の主な機能は、疎水性脂質層を遮蔽する保護親水性層を形成することによって粒子を立体的に安定化することである。さらに、ＰＥＧ化脂質は、粒子をインビボで投与した場合、血清タンパク質との会合および結果として生じる細網内皮系による取り込みを減少させる。ＰＥＧ脂質は、エンドソーム局在化およびペイロード送達の前提条件である細胞取り込みに影響を及ぼすことが公知である。封入された核酸の薬理学は、ＰＥＧ－脂質アンカーのアルキル鎖長を調節することによって予測可能な方法で制御され得ることが見出されている。いくつかの実施形態では、ＲＮＡの肝臓への最適な送達を提供するために、そのようなＰＥＧ化脂質をＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤のために選択した。いくつかの実施形態では、そのような選択はまた、立体障壁の機能を有効に果たすために、合理的な溶解特性およびその分子量に基づいていた。そのようなＰＥＧ化脂質は、生体膜に対する認識可能な界面活性剤または透過性の増強または妨害作用を示さない。さらに、そのようなＰＥＧ化脂質中のＰＥＧは、生分解性アミド結合でジアシル脂質アンカーに連結され、迅速な分解および***を促進する。バイアルにおいて、粒子はＰＥＧ化脂質の完全な相補体を保持する。血液区画において、そのようなＰＥＧ化脂質は経時的に粒子から解離し、細胞によってより容易に取り込まれ、最終的にＲＮＡペイロードの放出をもたらす、より融合原性の粒子を明らかにする。
中性脂質：ＤＳＰＣおよびコレステロール
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、２つ以上の中性脂質を含む。いくつかのそのような実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロールを含む２つ以上の中性脂質を含み得る。いくつかの実施形態では、そのような中性脂質（例えば、ＤＳＰＣおよび／またはコレステロール）は、ＬＮＰ粒径、安定性および封入を最適化するように選択された濃度を有する構造脂質と呼ぶことができる。例えば、ＤＳＰＣおよびコレステロールは、承認された薬物製剤に既に使用されており、例えばＤＳＰＣは、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標）、ＴＯＢＩ（登録商標）、Ｐｏｄｈａｌｅｒ（登録商標）、およびＬｉｐｏ－Ｄｏｘ（登録商標）において賦形剤として使用されている。コレステロールは、Ｍａｒｑｉｂｏ（登録商標）、Ｄｏｘｉｌ（登録商標）、およびＡｍＢｉｓｏｍｅ（登録商標）において賦形剤として使用されている。Ｏｎｐａｔｔｒｏ（登録商標）は、ＤＳＰＣおよびコレステロールの両方を含有する。
実施例１５：本明細書に記載のＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤の例示的な評価および／または基準
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような１つ以上の評価が、薬物製剤の製造または他の調製もしくは使用の間に利用され得る（例えば、出荷試験として）。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤は、例えば、物理的外観、脂質の同一性および／または含有量、ＬＮＰサイズ、ＬＮＰ多分散性、ＲＮＡ封入、ＲＮＡの長さ、同一性（ＲＮＡとして）、完全性、配列および／または濃度、ｐＨ、オスモル濃度、ＲＮＡ比（（例えば、ＨＣ ＲＮＡ対ＬＣ ＲＮＡの比）、効力、細菌内毒素、バイオバーデン、残留有機溶媒、オスモル濃度、ｐＨ、およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない、１つ以上の品質管理パラメータについて評価され得る（例えば、出荷および／またはさらなる処理のために）。そのような品質管理パラメータは、例えば、目視検査、ゲル電気泳動（例えば、アガロースゲル電気泳動、キャピラリゲル電気泳動）、酵素分解、配列決定、紫外吸収分光法などの当技術分野で公知の特定の分析方法の１つ以上によって評価することができる。ＲＮＡ標識色素、ＰＣＲ法、細菌内毒素試験（例えば、カブトガニ血球抽出物（ＬＡＬ）試験）、動的光散乱、荷電エアロゾル検出器（１つもしくは複数）を備えた液体クロマトグラフィ、ガスクロマトグラフィ、および／またはインビトロ翻訳系（例えば、ウサギ網状赤血球溶解物翻訳系および３５Ｓ－メチオニン）。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡ／ＬＮＰ薬物製剤のバッチ（例えば、本明細書に記載されるもの）を品質管理パラメータ（例えば、本明細書に記載されるもの）について評価して、次の作業工程（１つまたは複数）を決定し得る。例えば、ＲＮＡ／ＬＮＰ製剤のバッチ（例えば、本明細書に記載されるもの）は、品質評価が、そのようなバッチが列挙された関連する出荷基準を満たすかまたは超えることを示す場合、製造および／または配給の１つ以上のさらなる工程のために指定され得る。さもなければ、そのようなバッチが出荷基準を満たさないかまたは超えない場合、代替措置をとることができる（例えば、バッチを廃棄する）。
実施例１６：例示的な選択基準
いくつかの実施形態では、腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２を発現する癌患者を、本明細書に記載の組成物および／または方法による治療のために選択することができる。いくつかの実施形態では、癌患者は膵臓癌患者である。いくつかの実施形態では、癌患者は胆管癌患者である。
いくつかの実施形態では、以下の疾患特異的選択基準の１つ以上を満たす癌患者が、本明細書に記載の組成物および／または方法による治療のために選択される：
１．ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）新生物組織における検証された免疫組織化学アッセイを使用した中央試験によって評価される、≧２＋ＣＬＤＮ－１８．２タンパク質染色強度を有する５０％以上の腫瘍細胞として定義されるＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍（腫瘍組織学にかかわらず）；
２．ＣＬＤＮ－１８．２試験のためのＦＦＰＥ腫瘍組織試料の利用可能性。新しい生検および保管生体試料が許容される。いくつかの時点からの保管組織試料が利用可能である場合、最新のものが好ましい；
３．病理報告による元の原発腫瘍の組織学的文書化。
ａ．転移性または切除不能であり、臨床的利益を与える可能性が高い利用可能な標準治療がない組織学的に確認された固形腫瘍、もしくは患者がそのような利用可能な治療の候補ではない；および任意でＲＥＣＩＳＴ １．１による測定可能もしくは評価可能な疾患；または
ｂ．事前の緩和化学療法を受けていない組織学的に確認された切除不能な局所進行性もしくは転移性膵管腺癌；および任意でＲＥＣＩＳＴ １．１による測定可能もしくは評価可能な疾患；または
ｃ．ｎａｂ－パクリタキセル＋ゲムシタビンもしくはＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸのいずれかによる治療に適格な事前の緩和化学療法を受けていない組織学的に確認された切除不能な局所進行性もしくは転移性ＰＤＡＣ；および任意でＲＥＣＩＳＴ １．１による測定可能または評価可能な疾患；または
ｄ．シスプラチン＋ゲムシタビンによる治療に適格な事前の緩和化学療法を受けていない組織学的に確認された局所進行性または転移性ＢＴＣ；および任意でＲＥＣＩＳＴ １．１による測定可能または評価可能な疾患。
いくつかの実施形態では、上記で論じた疾患特異的選択基準の少なくとも１つを満たし、さらに以下の他の選択基準の少なくとも１つを満たす癌患者が、本明細書に記載の組成物および／または方法による治療のために選択される：
１．１８歳以上であること。
２．０～１の米国東海岸癌臨床試験グループ（Ｅａｓｔｅｒｎ Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ）（ＥＣＯＧ）パフォーマンスステータス。
３．以下によって決定されるスクリーニング時の適切な凝固機能：
ａ．国際標準比（ＩＮＲ）またはプロトロンビン時間≦１．５×正常上限（ＵＬＮ；治療ウィンドウ内の値で、治療用抗凝固薬を使用していない限り）。
ｂ．活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）≦１．５×ＵＬＮ（治療ウィンドウ内の値で、治療用抗凝固薬を使用していない限り）。
４．以下によって決定されるスクリーニング時の適切な血液学的機能：
ａ．白血球数（ＷＢＣ）≧３×１０９／Ｌ。
ｂ．絶対好中球数（ＡＮＣ）≧１．５×１０９／Ｌ（患者は、過去７日間にこれらのＷＢＣおよびＡＮＣレベルを達成するために顆粒球－コロニー刺激因子または顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子を使用していない可能性がある）。
ｃ．血小板数≧１００×１０９／Ｌ。
ｄ．ヘモグロビン≧９．０ｇ／ｄＬ（過去７日間にこのレベルを得るために輸血またはエリスロポエチンを使用していない可能性がある）。
５．以下によって決定されるスクリーニング時の適切な肝機能：
ａ．総ビリルビン≦１．５ｍｇ／ｄＬ（または既知のギルバート症候群または肝転移を有する患者については≦２．０ｍｇ／ｄＬ）。
ｂ．アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）およびアラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）≦２．５×ＵＬＮ；肝転移を有する患者については≦３ＵＬＮ。
６．以下によって決定されるスクリーニング時の適切な腎機能：
ａ．糸球体濾過量≧４５ｍＬ／分／１．７３ｍ２－簡略化した「腎疾患における食事の修正」（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｅｔ ｉｎ Ｒｅｎａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ）方程式に従って：
ＧＦＲ＝１８６×（Ｓクレアチニン －１．１５４）×（年齢－０．２０３）
（血清クレアチニンレベルはｍｇ／ｄＬで表される；患者が女性である場合は０．７４２を乗じる；患者がアフリカ系アメリカ人である場合は１．２１２を乗じる（Ｌｅｖｅｙ ｅｔ ａｌ．１９９９）。
７．妊娠の可能性のある女性（ＷＯＣＢＰ）は、スクリーニング時に陰性の血清（ベータ－ヒト絨毛性ゴナドトロピン）検査／値を有していなければならない。閉経後または永続的不妊処置を受けた患者は、生殖可能性を有さないと見なすことができる。
８．妊娠の可能性のある女性は、本明細書に記載の最後のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の６ヶ月後まで、治療レジメン中は生殖補助の目的で卵（卵子、卵母細胞）を提供しないことに同意しなければならない。
９．ＷＯＣＢＰと性生活があり、精管切除術を受けたことがない男性は、受胎調節のバリア法、例えば、殺***フォーム／ゲル／フィルム／クリーム／坐剤を含むコンドームまたは殺***フォーム／ゲル／フィルム／クリーム／坐剤を含む閉鎖キャップ（ペッサリーもしくは子宮頸管／膣円蓋キャップ）を有するパートナーのいずれかを、試験中および本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の最後の投与を受けた後６ヶ月間使用することに同意しなければならない。
１０．男性は、治療レジメン中および本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の最後の投与を受けた後６ヶ月間、***を提供しないことに同意しなければならない。
実施例１７：例示的な除外基準
いくつかの実施形態では、腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２を発現しない癌患者は、本明細書に記載されるおよび／または本明細書で利用される組成物および／または方法に適していない。
いくつかの実施形態では、（ｉ）最近癌治療を受けた；（ｉｉ）同時に全身ステロイド療法を受けている；（ｉｉｉ）最近大きな手術を受けた；（ｉｖ）活動性感染症に罹患しており、抗感染療法で治療されている；および／または（ｖ）成長中の脳もしくは軟膜転移と診断された、癌患者は、本明細書に記載されるおよび／または本明細書で利用される組成物および／または方法に適していない。
いくつかの実施形態では、以下の癌患者は、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療（例えば、本明細書に記載の組成物の投与および／または本明細書に記載の治療方法）に推奨されない場合がある。
事前および併用療法
１．本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の開始から２週間以内または５半減期（いずれか長い方）以内に放射線療法、化学療法、または分子標的剤もしくはチロシンキナーゼ阻害剤；本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の開始から３週間以内に免疫療法／モノクローナル抗体；本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の開始から６週間以内にニトロソ尿素、抗体－薬物コンジュゲート、または放射性同位体を受けること。
２．基礎疾患に対する＞１０ｍｇのプレドニゾンまたはその等価物の同時全身（経口またはＩＶ）ステロイド療法を毎日受ける。
３．本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の最初の投与前４週間以内の大きな手術。
４．本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の最初の投与前２週間未満に投与された抗感染療法によるＩＶ治療を必要とする進行中または活動性感染症。
５．米国国立癌研究所の有害事象共通用語規準（ＮＣＩ ＣＴＣＡＥ）ｖ．５のグレード≦１に回復していない医学的状態のための事前の療法または処置の副作用。末梢神経障害グレード≦２が許容され、任意のグレードの脱毛症が許容されることに留意すべきである。
医学的状態
６．スクリーニング中の新規または成長中の脳転移または軟膜転移の現在の証拠。既知の脳転移または軟膜転移を有する患者は、以下を有する場合に適格であり得る：
ａ．脳転移または軟膜転移のための放射線療法、外科手術または定位手術。
ｂ．神経症状なし（グレード≦２の神経障害を除く）。
ｃ．インフォームドコンセントに署名する前４週間以内のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）または磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャンでの安定した脳または軟膜疾患。
ｄ．急性コルチコステロイド療法またはステロイドテーパーを受けていない。
中枢神経系症状を有する患者は、新規または進行性の脳転移を除外するために脳のＣＴスキャンまたはＭＲＩを受けるべきであることに留意すべきである。脊髄圧迫を伴う差し迫った骨折が予想されない限り、脊椎骨転移が許容される。
７．小児期の孤立性熱性けいれん以外の発作歴；スクリーニング前６ヶ月未満に脳血管障害または一過性虚血発作の既往歴がある。
８．排液を必要とする滲出液（胸水、心内膜液、または腹水）。
９．炎症性腸疾患、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、強皮症、または多発性硬化症を含むがこれらに限定されない、活動性または過去の自己免疫疾患の病歴。
１０．孤立性白斑、回復した小児喘息またはアトピー性皮膚炎、制御された副腎機能低下症または下垂体機能低下症を有する患者、およびグレーブス病の病歴を有する甲状腺機能正常患者を除いて、ステロイドまたは他の免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、シクロスポリンＡ）による免疫抑制を必要とする活動性免疫障害。制御された甲状腺機能亢進症を有する患者は、試験治療の投与前に、サイログロブリン、甲状腺ペルオキシダーゼ抗体、および甲状腺刺激免疫グロブリンについて陰性でなければならない。
１１．＜３５０細胞／μＬのＣＤ４＋Ｔ細胞数および後天性免疫不全症候群を定義する日和見感染の病歴を伴うヒト免疫不全ウイルスについての血清陽性の既知の病歴。
１２．積極的抗ウイルス療法を必要とするＢ型肝炎の既知の病歴／陽性血清学（ワクチン接種もしくは自然感染の解消による免疫化でない限り、または免疫グロブリン療法による受動免疫化でない限り）。血清学的検査が陽性の患者は、Ｂ型肝炎ウイルス量が定量限界未満でなければならない。
１３．活動性Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染；定量限界未満のＨＣＶ量を有する、治癒的抗ウイルス治療を完了した患者は許容される。
１４．本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化治療の成分に対する既知の過敏症。
１５．転移または死亡のリスクが無視できるもの（適切に治療された子宮頸部の上皮内癌、基底細胞または扁平上皮皮膚癌、限局性前立腺癌、または上皮内乳管癌など）を除いて、少なくとも２年間寛解状態になかった別の原発性悪性腫瘍。
他の併存疾患
１６．Ｆｒｉｄｅｒｉｃｉａ補正したＱＴ延長＞４８０ミリ秒などの臨床的に有意である異常な心電図。
１７．治療医師の意見により、過度の医学的危険をもたらす可能性がある、または治療結果の解釈を妨げる可能性がある何らかの同時条件を有する；これらの条件には以下が含まれるが、これらに限定されない：
ａ．抗生物質／抗ウイルス／抗真菌療法を必要とする進行中または活動性感染。
ｂ．併存するうっ血性心不全（ニューヨーク心臓病学会機能分類（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ Ｈｅａｒｔ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ）クラスＩＩＩまたはＩＶ）。
ｃ．併存する不安定狭心症。
ｄ．併存する治療を必要とする心不整脈（無症候性心房細動を除く）。
ｅ．過去６ヶ月以内の急性冠動脈症候群。
ｆ．例えば併存する重度の閉塞性肺疾患に起因する、重大な肺疾患（安静時または軽度の運動時の呼吸困難）。
１８．プロトコルに従って治療を受ける患者の能力を損なう、またはインフォームドコンセントのプロセスおよびプロトコルが要求する来訪および処置の遵守に応じる患者の能力に悪影響を及ぼす認知的、心理学的または心理社会的障害。
１９．妊娠または授乳中。
実施例１８：ｎａｂ－パクリタキセルおよび／またはゲムシタビンと組み合わせた本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物の例示的な投与スケジュール
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、他の抗癌療法と組み合わせて、ＣＬＤＮ－１８．２陽性癌を有する患者に投与することができる。いくつかの態様では、投与は１回以上のサイクルを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、少なくとも３～８サイクルで投与することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物の投与は、上記の表１３に示すレベルの１つ以上で実施され得る（実施例８を参照）；いくつかの実施形態では、投与は、表１３からの少なくとも１つのより低い用量の投与と、その後の表１３からの少なくとも１つのより高い用量の投与とを含み得る。
ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビンと組み合わせて投与される場合、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、細胞傷害性療法の最初の注入の前に投与され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、細胞傷害性療法（例えば、ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビン）の最初の注入の少なくとも４時間前に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物はＱ３Ｗで投与され得、化学療法は地域のガイドラインに従って承認されたスケジュールに従う。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物ならびにｎａｂ－パクリタキセルおよび／またはゲムシタビンを含む併用治療は、例えば、いくつかの実施形態では表１７に示すスケジュールに従って、少なくとも８サイクル投与され得る。
Figure 2023520062000025
表１７に示すように、ＣＬＤＮ－１８．２標的化治療のサイクルの長さを２１日間（ｑ３ｗ）と定義し、ＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物を各サイクルの１日目に投与する。ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビンは、２８日ごとに１、８、および１５日目に投与する。ｎａｂ－パクリタキセル／ゲムシタビンの１日目の投与が抗ＣＬＤＮ１８．１組成物の投与と一致する場合、太字の「ｘ」で強調して示されている。
ゲムシタビン単独は、膵臓癌の治療に使用されてきた。例えば、ゲムシタビン（例えば、Ｇｅｍｚａｒ）の推奨用量は、静脈内で３０分間かけて１０００ｍｇ／ｍ２である。いくつかの実施形態では、推奨される治療スケジュールは以下の通りである：
・１～８週目：最初の７週間は週１回投与し、その後１週間休薬する。
・８週目の後：２８日間サイクルの１、８、および１５日目に週１回投与する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、上記のような膵臓癌の治療のための単剤療法としてのゲミシタビン（例えば、Ｇｅｍｚａｒ）の承認された用量および治療スケジュールに従って、ゲムシタビンと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、上記のような膵臓癌の治療のための単剤療法としてのゲムシタビン（例えば、Ｇｅｍｚａｒ）の承認された用量および治療スケジュールよりも低い用量（例えば、１０％未満、２０％未満、３０％未満、もしくはそれ以上）で、および／またはより侵襲性の低い治療スケジュール（例えば、１０日ごと、もしくは隔週など）の下で、ゲムシタビンと組み合わせて投与することができる。
ｎａｂ－パクリタキセルは、転移性膵臓腺癌の治療のためにゲムシタビンと組み合わせて使用されることが公知である。例えば、ｎａｂ－パクリタキセル（Ａｂｒａｘａｎｅ（登録商標））の推奨用量は、各２８日間サイクルの１、８および１５日目に３０～４０分間かけてＩＶ注入として投与される１２５ｍｇ／ｍ２であり、ゲムシタビンは、各２８日間サイクルの１、８および１５日目にｎａｂ－パクリタキセルの直後に投与されるべきである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、上記のｎａｂ－パクリタキセル／ゲムシタビン併用治療の承認された用量および治療スケジュールに従って、ゲムシタビンおよびｎａｂ－パクリタキセルと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物は、少なくとも上記のｎａｂ－パクリタキセル／ゲムシタビン組合せ治療の承認された用量および治療スケジュールよりも低い用量（例えば、１０％未満、２０％未満、３０％未満、もしくはそれ以上）で、および／またはより侵襲性の低い治療スケジュール（例えば、１０日ごと、もしくは隔週など）の下で、ｎａｂ－パクリタキセルおよびゲムシタビンと組み合わせて投与することができる。
いくつかの実施形態では、薬物／規制ガイドラインに従って、解熱剤（例えば、アセトアミノフェン、非ステロイド系抗炎症薬）、制吐薬、プロトンポンプ阻害剤および抗不安薬による事前および事後の投薬が許容され得る。いくつかの実施形態では、患者は、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物の投与前に適切に水分摂取すべきである。いくつかの実施形態では、コルチコステロイドは、本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物の前投薬として使用すべきではない。
実施例１９：例示的な有効性評価および／または監視
いくつかの実施形態では、単剤療法として、またはさらなる抗癌療法と組み合わせて本明細書に記載のＣＬＤＮ－１８．２標的化組成物を投与された癌患者は、治療の有効性および／または治療投与量／スケジュールの調整について定期的に監視され得る。
いくつかの実施形態では、治療の有効性は、コンピュータ断層撮影および／または磁気共鳴画像スキャンによって評価され得る。いくつかの実施形態では、ＭＲＩスキャンは、３テスラ全身用装置を使用して実施され得る。いくつかの実施形態では、有効性評価のために病変を評価する場合、以下の基準の１つ以上を使用し得る：
完全奏効：全ての標的病変の消失。いずれの病的リンパ節も（標的または非標的にかかわらず）、短軸が＜１０ｍｍに減少していなければならない。
部分奏効：ベースラインの直径和を基準として、標的病変の直径和の少なくとも３０％の減少。
進行性疾患：試験での最小の直径和（これは、ベースラインの和が試験で最小である場合、これを含む）を基準として、標的病変の直径和の少なくとも２０％の増加。２０％の相対増加に加えて、この和は少なくとも５ｍｍの絶対増加も示さなければならない。１つ以上の新しい病変の出現も進行と見なされる。
安定疾患：試験中の最小直径和を基準として、ＰＲを適格とするのに十分な収縮がなく、進行性疾患を適格とするのに十分な増加もない。
等価物
当業者は、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または日常的な実験のみを使用して確認することができるであろう。本発明は、別段の指示がない限り、または矛盾もしくは不整合が生じることが当業者に明らかでない限り、列挙された請求項の１つ以上からの１つ以上の限定、要素、条項、記述用語などが同じ基本請求項に従属する別の請求項（または、関連するものとして、任意の他の請求項）に導入される全ての変形、組合せ、および並び替えを包含することが理解されるべきである。さらに、本発明の任意の実施形態または態様は、特定の除外が本明細書に記載されているかどうかにかかわらず、特許請求の範囲から明示的に除外され得ることも理解されるべきである。本発明の範囲は、上記の説明に限定されるものではなく、以下の特許請求の範囲に記載されている通りである。

Claims (88)

  1. 医薬組成物であって、
    ａ．クローディン１８．１ポリペプチドと比較してクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤をコードする１つ以上のコード領域を含む少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡ；および
    ｂ．脂質ナノ粒子
    を含み、前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡが前記脂質ナノ粒子の少なくとも１つの中に封入されている、医薬組成物。
  2. 前記抗体剤が、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドの第１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ１）に特異的に結合する、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 前記抗体剤が、癌細胞において曝露されるＥＣＤ１のエピトープに特異的に結合する、請求項２に記載の医薬組成物。
  4. 前記抗体剤が、抗体もしくはその抗原結合断片であるか、または抗体もしくはその抗原結合断片を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. 前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡが、前記抗体剤の可変重鎖（ＶＨ）ドメインおよび前記抗体剤の可変軽鎖（ＶＬ）ドメインの両方をコードする、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  6. 前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡが、前記抗体剤の少なくともＶＨドメインをコードする重鎖コード領域を含む第１の一本鎖ＲＮＡであり、および
    ａ．前記第１の一本鎖ＲＮＡが、前記抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域をさらに含むか；または
    ｂ．前記医薬組成物が、前記抗体剤の少なくともＶＬドメインをコードする軽鎖コード領域を含む第２の一本鎖ＲＮＡをさらに含む、
    請求項５に記載の医薬組成物。
  7. 前記重鎖コード領域が定常重鎖（ＣＨ）ドメインをさらにコードし、および／または前記軽鎖コード領域が定常軽鎖（ＣＬ）ドメインをさらにコードする、請求項６に記載の医薬組成物。
  8. 前記重鎖コード領域が、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）形態の前記抗体剤のＶＨドメイン、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインをコードし、ならびに／または前記軽鎖コード領域が、ＩｇＧ形態の前記抗体剤のＶＬドメインおよびＣＬドメインをコードする、請求項６に記載の医薬組成物。
  9. 前記ＩｇＧがＩｇＧ１である、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. 前記重鎖コード領域が、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長重鎖をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む、請求項６～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  11. 前記軽鎖コード領域が、ゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの完全長軽鎖をコードするヌクレオチド配列からなるか、またはそれを含む、請求項６～９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  12. 前記第１の一本鎖ＲＮＡおよび／または前記第２の一本鎖ＲＮＡが、それぞれ独立して、分泌シグナルコード領域を含む、請求項６～１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  13. 前記第１の一本鎖ＲＮＡおよび／または前記第２の一本鎖ＲＮＡが、それぞれ独立して、少なくとも１つの非コード配列要素を含む（例えば、ＲＮＡの安定性および／または翻訳効率を高めるために）、請求項６～１２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  14. 前記少なくとも１つの非コード配列要素が、３'非翻訳領域（ＵＴＲ）、５'ＵＴＲ、ｍＲＮＡの共転写キャッピングのためのキャップ構造、および／またはポリアデニン（ポリＡ）尾部を含む、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 前記第１の一本鎖ＲＮＡが、５'から３'方向に：
    ａ．５'ＵＴＲコード領域；
    ｂ．分泌シグナルコード領域；
    ｃ．重鎖コード領域；
    ｄ．３'ＵＴＲコード領域；および
    ｅ．ポリＡ尾部コード領域
    を含む、請求項６～１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  16. 前記第２の一本鎖ＲＮＡが、５'から３'方向に：
    ａ．５'ＵＴＲコード領域；
    ｂ．分泌シグナルコード領域；
    ｃ．軽鎖コード領域；
    ｄ．３'ＵＴＲコード領域；および
    ｅ．ポリＡ尾部コード領域
    を含む、請求項６～１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  17. 前記ポリＡ尾部が、修飾ポリＡ配列であるか、または修飾ポリＡ配列を含む、請求項１４または１５に記載の医薬組成物。
  18. 前記第１の一本鎖ＲＮＡおよび／または前記第２の一本鎖ＲＮＡが５'キャップを含む、請求項６～１６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  19. 前記第１の一本鎖ＲＮＡおよび／または前記第２の一本鎖ＲＮＡが少なくとも１つの修飾リボヌクレオチドを含む、請求項６～１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  20. 前記修飾リボヌクレオチドがシュードウリジンを含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡが、前記第１の一本鎖ＲＮＡおよび前記第２の一本鎖ＲＮＡを含む、請求項６～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  22. 前記第１の一本鎖ＲＮＡと前記第２の一本鎖ＲＮＡとが３：１～１：１の重量比で存在する、請求項６～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  23. 前記脂質ナノ粒子が肝臓標的化脂質ナノ粒子である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  24. 前記脂質ナノ粒子がカチオン性脂質ナノ粒子である、請求項１～２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  25. 前記脂質ナノ粒子を形成する脂質が、
    －ポリマー結合脂質；
    －カチオン性脂質；および
    －中性脂質
    を含む、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. ａ．前記ポリマー結合脂質が総脂質の約１～２．５モル％で存在し；
    ｂ．前記カチオン性脂質が総脂質の３５～６５モル％で存在し；および
    ｃ．前記中性脂質が総脂質の３５～６５モル％で存在する、
    請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 前記ポリマー結合脂質がＰＥＧ結合脂質（例えば、２－［（ポリエチレングリコール）－２０００）－Ｎ，Ｎ－ジテトラデシルアセトアミド）である、請求項２５または２６に記載の医薬組成物。
  28. 前記カチオン性脂質が、（（３－ヒドロキシプロピル）アザンジイル）ビス（ノナン－９，１－ジイル）ビス（２－ブチルオクタノエート）である、請求項２５～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  29. 前記中性脂質が、１，２－ジステアロイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリン（ＤＰＳＣ）および／またはコレステロールを含む、請求項２５～２８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  30. 前記脂質ナノ粒子が約５０～１５０ｎｍの平均サイズを有する、請求項１～２９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  31. 凍結保護剤（例えば、スクロース）をさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  32. 水性緩衝溶液を含む、請求項１～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  33. 前記水性緩衝溶液がナトリウムイオンを含む、請求項３２に記載の医薬組成物。
  34. 化学療法剤をさらに含む、請求項１～３３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  35. 前記化学療法剤が、膵臓癌の治療に適応される化学療法剤である、請求項３４に記載の医薬組成物。
  36. 前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡが０．５ｍｇ／ｍＬ～１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  37. 請求項１～３６のいずれか一項に記載の医薬組成物を、ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍に罹患している対象に投与することを含む方法。
  38. 前記ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍が膵臓腫瘍である、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍が胃腫瘍である、請求項３７に記載の方法。
  40. 前記ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍が胆道腫瘍である、請求項３７に記載の方法。
  41. 前記ＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍が局所進行性、切除不能、または転移性である、請求項３７～４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記対象が罹患している固形腫瘍がＣＬＤＮ－１８．２陽性固形腫瘍として特徴付けられるように、前記対象がＣＬＤＮ－１８．２レベルを上昇させるのに十分な前処置を受けている、請求項３７～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記ＣＬＤＮ－１８．２陽性腫瘍が、前記対象からのホルマリン固定パラフィン包埋新生物組織における免疫組織化学アッセイによって評価した場合、腫瘍細胞の５０％以上が≧２＋ＣＬＤＮ－１８．２タンパク質染色強度を示すことを特徴とする、請求項３７～４２のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記医薬組成物が単剤療法として投与される、請求項３７～４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記医薬組成物が、前記医薬組成物と化学療法剤とを含む併用療法の一部として投与される、請求項３７～４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記対象が前記化学療法剤を受けたことがある、請求項３７～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記対象が前記併用療法を受けているように、前記化学療法剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項４５に記載の方法。
  48. 前記化学療法剤が、前記医薬組成物の前記投与の少なくとも４時間後に投与される、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記化学療法剤が、ＣＬＤＮ－１８．２陽性膵臓腫瘍に罹患している対象のためのゲムシタビンおよび／もしくはパクリタキセル（例えば、ｎａｂ－パクリタキセル）であるか、またはそれを含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記化学療法剤が、ＣＬＤＮ－１８．２陽性膵臓腫瘍に罹患している対象のためのＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸであるか、またはＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸを含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記化学療法剤が、ＣＬＤＮ－１８．２陽性胆道癌に罹患している対象のためのゲムシタビンおよび／もしくはシスプラチンであるか、またはゲムシタビンおよび／もしくはシスプラチンを含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記対象が成人対象である、請求項３７～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記投与が静脈内注射によって実施される、請求項３７～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記医薬組成物が、少なくとも１回、少なくとも２回、少なくとも３回またはそれ以上の投与サイクルで投与される、請求項３７～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記医薬組成物が、投与サイクル当たり１回以上の投与として投与される、請求項５４に記載の方法。
  56. 各投与サイクルが３週間の投与サイクルである、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記１回以上の投与が、前記対象の０．１ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内の前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡを含む、請求項５５または５６に記載の方法。
  58. 対象に癌治療のためのＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体を送達する方法において、請求項１～３６のいずれか一項に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む改善。
  59. 細胞が医薬組成物の少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡによってコードされるＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体を発現および分泌するように、請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物を細胞に投与することを含む、ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体を産生する方法。
  60. 前記細胞が肝細胞である、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記細胞が対象内にある、請求項５９または６０に記載の方法。
  62. 前記ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体が治療的に適切な血漿濃度で産生される、請求項６１に記載の方法。
  63. 前記治療的に適切な血漿濃度が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して癌細胞死を媒介するのに十分である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記治療的に適切な血漿濃度が０．３～２８μｇ／ｍＬである、請求項６３に記載の方法。
  65. 細胞に導入された少なくとも１つのｍＲＮＡから発現される抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程を含む方法であって、前記少なくとも１つのｍＲＮＡが、クローディン１８．１ポリペプチドと比較してクローディン１８．２（ＣＬＤＮ－１８．２）ポリペプチドに選択的に結合する抗体剤をコードするコード領域を含む少なくとも１つ以上の一本鎖ＲＮＡの特徴の１つ以上を含み、前記１つ以上の特徴が、（ｉ）前記抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２に対する前記抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性；および（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性を含む、方法。
  66. ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物を特徴付ける方法であって、
    細胞を請求項１～３５のいずれか一項に記載の少なくとも１つの医薬組成物と接触させる工程；および
    前記細胞によって産生された前記抗体剤を検出する工程
    を含む方法。
  67. 前記抗体剤の１つ以上の特徴を決定する工程をさらに含み、前記１つ以上の特徴が、（ｉ）前記抗体剤のタンパク質発現レベル；（ｉｉ）ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに対する前記抗体剤の結合特異性；（ｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性；および（ｉｖ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性を含む、請求項６６に記載の方法。
  68. 前記細胞が肝細胞である、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の方法。
  69. 前記決定する工程が、前記抗体剤の前記１つ以上の特徴を参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体のものと比較することを含む、請求項６５または６７に記載の方法。
  70. 前記決定する工程が、閾値レベルを超える前記抗体剤の前記タンパク質発現レベルを評価することを含む、請求項６５および６７～６９のいずれか一項に記載の方法。
  71. 前記閾値レベルが、ＡＤＣＣを誘導するのに十分なレベルである、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記決定する工程が、前記抗体剤のＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの結合を評価することを含む、請求項６５および６７～７１のいずれか一項に記載の方法。
  73. 前記評価することが、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドへの結合と比較して、ＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドへの前記抗体剤の結合を決定することを含む、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記評価することが、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体の結合選択性プロファイルに少なくとも匹敵する前記抗体剤の結合選択性プロファイルを決定することを含む、請求項７２または７３に記載の方法。
  75. 前記参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体がゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブである、請求項６９または７４に記載の方法。
  76. 前記抗体剤が、以下の特徴：
    ａ．ＡＤＣＣを誘導するのに十分な閾値レベルを超える前記細胞によって発現される前記抗体剤のタンパク質レベル；
    ｂ．ＣＬＤＮ１８．１と比較したＣＬＤＮ－１８．２への前記抗体剤の選択的結合；ならびに
    ｃ．ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣによって媒介される少なくとも５０％の標的細胞の死滅
    を含む場合、前記抗体剤をＣＬＤＮ－１８．２標的化抗体剤としてさらに特徴付ける、請求項６５～７５のいずれか一項に記載の方法。
  77. 前記抗体の特徴がゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブの特徴に少なくとも匹敵する場合、前記抗体剤をゾルベツキシマブまたはクラウジキシマブ等価抗体としてさらに特徴付ける、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記標的細胞が癌細胞である、請求項６５～７７のいずれか一項に記載の方法。
  79. 前記決定する工程が、前記接触の４８時間後に評価した場合に、前記細胞が前記少なくとも１つの一本鎖ＲＮＡによってコードされる抗ＣＬＤＮ１８－２抗体剤を発現するかどうかを決定することを含む、請求項６５および６６～７８のいずれか一項に記載の方法。
  80. 前記決定する工程が、以下の特徴：
    －前記細胞によって発現される前記抗体剤が、ＣＬＤＮ１８．１ポリペプチドと比較してＣＬＤＮ－１８．２ポリペプチドに選択的に結合するかどうか；
    －前記細胞によって発現される前記抗体剤が、参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体を用いたフローサイトメトリ結合アッセイで観察されるようなＣＬＤＮ－１８．２に対する同等の標的特異性を示すかどうか；
    －免疫エフェクタ細胞（例えば、ＰＢＭＣ細胞）およびＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を前記抗体剤の存在下でインキュベートした４８時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか；
    －前記細胞によって発現される前記抗体剤が、同じ濃度の参照ＣＬＤＮ－１８．２標的化モノクローナル抗体で観察されるような標的ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞の少なくとも同等のＡＤＣＣプロファイルを示すかどうか；ならびに
    －ＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞またはＣＬＤＮ－１８．２陰性対照細胞を前記抗体剤の存在下でヒト血清とインキュベートした２時間後に評価した場合、対照細胞ではなくＣＬＤＮ－１８．２陽性細胞が溶解したかどうか
    の１つ以上を決定することを含む、請求項６５および６６～７９のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記細胞が対象（例えば、マウスまたはサル対象）に存在する、請求項６６～８０のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記１つ以上の特徴が、前記対象の１つ以上の組織中の抗体レベルを含む、請求項８１に記載の方法。
  83. 前記医薬組成物がＣＬＤＮ－１８．２標的化として特徴付けられる場合、抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に前記医薬組成物を投与すること
    をさらに含む、請求項６６～８２のいずれか一項に記載の方法。
  84. 以下の工程：
    （Ａ）抗体剤の一部または全部をコードする一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）またはその組成物の１つ以上の特徴を決定する工程であって、前記１つ以上の特徴が、
    （ｉ）前記ｓｓＲＮＡの長さおよび／または配列；
    （ｉｉ）前記ｓｓＲＮＡの完全性；
    （ｉｉｉ）前記ｓｓＲＮＡの１つ以上の化学部分の存在および／または位置；
    （ｉｖ）前記ｓｓＲＮＡを細胞に導入した場合の前記抗体剤の発現の程度；
    （ｖ）前記ｓｓＲＮＡまたはその組成物の安定性；
    （ｖｉ）前記ｓｓＲＮＡが導入された生物由来の生物学的試料中の抗体剤のレベル；
    （ｖｉｉ）前記ｓｓＲＮＡから発現された前記抗体剤の、任意でＣＬＤＮ－１８．２に対する、および任意でＣＬＤＮ１８．１と比較した結合特異性；
    （ｖｉｉｉ）ＡＤＣＣを介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性；
    （ｉｘ）補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を介して標的細胞死を媒介する前記抗体剤の有効性；
    （ｘ）前記組成物内の脂質の同一性および量／濃度；
    （ｘｉ）前記組成物内の脂質ナノ粒子のサイズ；
    （ｘｉｉ）前記組成物内の脂質ナノ粒子の多分散性；
    （ｘｉｉｉ）前記組成物内の前記ｓｓＲＮＡの量／濃度；
    （ｘｉｖ）脂質ナノ粒子内への前記ｓｓＲＮＡの封入の程度；ならびに
    （ｘｖ）それらの組合せ
    からなる群より選択される、工程；
    （Ｂ）前記ｓｓＲＮＡまたはその組成物の前記１つ以上の特徴を適切な参照基準のものと比較する工程；ならびに
    （Ｃ）（ｉ）前記比較により、前記ｓｓＲＮＡまたはその組成物が前記参照基準を満たすかまたは超えることが実証される場合、製造および／または配給の１つ以上のさらなる工程のために前記ｓｓＲＮＡまたはその組成物を指定する工程；あるいは
    （ｉｉ）前記比較により、前記ｓｓＲＮＡまたはその組成物が前記参照基準を満たさないかまたは超えないことが実証される場合、代替措置を講じる工程
    を含む製造方法。
  85. 前記ｓｓＲＮＡが評価され、工程（Ｃ）（ｉ）の前記１つ以上のさらなる工程が、少なくとも前記ｓｓＲＮＡの製剤化であるか、またはそれを含む、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記組成物が評価され、前記組成物が脂質ナノ粒子を含み、工程（Ｃ）（ｉ）の前記１つ以上のさらなる工程が、前記組成物の出荷および配給であるか、またはそれを含む、請求項８４または８５に記載の方法。
  87. 抗腫瘍活性を決定するために、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に前記製剤を投与することをさらに含む、請求項８５に記載の方法。
  88. ＣＬＤＮ－１８．２を標的とする医薬組成物の投与レジメンを決定する方法であって、以下の工程：
    （Ａ）所定の投与レジメン下で、それぞれがヒトＣＬＤＮ－１８．２陽性異種移植腫瘍を担持する動物対象の群に請求項１～３５のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する工程；
    （Ｂ）前記動物対象の腫瘍サイズを定期的に測定する工程；
    （Ｃ）（ｉ）前記医薬組成物の前記投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切でない場合、用量および／もしくは投与頻度を増加させる工程；または
    （ｉｉ）前記医薬組成物の前記投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、毒性作用が前記動物対象の少なくとも３０％において示される場合、用量および／もしくは投与頻度を減少させる工程；または
    （ｉｉｉ）前記医薬組成物の前記投与後の腫瘍サイズの減少が治療的に適切であり、前記動物対象において毒性作用が示されない場合、投与レジメンを変更しない工程
    を含む方法。
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