JP2023519140A - Pcsk9のアンタゴニスト - Google Patents
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Abstract
Description
ヒトPCSK9ヌクレオチド配列の少なくとも一部のセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、二本鎖阻害性リボ核酸(RNA)分子を含む、第1の部分と、
一本鎖デオキシリボ核酸(DNA)分子を含む、第2の部分であって、当該一本鎖DNA分子の5’末端が、二本鎖阻害性RNA分子のセンス鎖の3’末端に共有結合しているか、または一本鎖DNA分子の5’末端が、二本鎖阻害性RNA分子のアンチセンス鎖の3’に共有結合しており、当該一本鎖DNA分子が、ヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列が、その長さの少なくとも一部にわたって、当該一本鎖DNAの一部への相補的塩基対形成によってアニーリングされて、二本鎖ステムドメインおよび一本鎖ループドメインを含む二本鎖DNA構造を形成するように適合されている、第2の部分と、を含む、核酸分子が提供される。
ヒトPCSK9ヌクレオチド配列またはその多型配列バリアントの少なくとも一部のセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、二本鎖阻害性リボ核酸(RNA)分子を含む、第1の部分と、
一本鎖デオキシリボ核酸(DNA)分子を含む、第2の部分であって、当該一本鎖DNA分子の5’末端が、二本鎖阻害性RNA分子のセンス鎖の3’末端に共有結合しているか、または一本鎖DNA分子の5’末端が、二本鎖阻害性RNA分子のアンチセンス鎖の3’に共有結合しており、当該一本鎖DNA分子が、ヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列が、その長さの少なくとも一部にわたって、当該一本鎖DNAの一部への相補的塩基対形成によってアニーリングされて、二本鎖ステムドメインおよび一本鎖ループドメインを含む二本鎖DNA構造を形成するように適合されている、第2の部分と、を含む、核酸分子が提供される。
本発明の好ましい実施形態では、当該二本鎖阻害性RNA分子は、21ヌクレオチド塩基対長である。
i)高コレステロール血症を有する疑いがあるかまたは有している対象から生物学的サンプルを取得することと、
ii)サンプルを、PSCK9ポリペプチドに特異的な抗体または抗体フラグメントと接触させることと、
iii)当該生物学的サンプルにおける当該PCSK9およびLDL-Cの濃度を決定することと、
iv)LDL-C濃度が350mg/dL超である場合に、本発明による核酸分子または医薬組成物を投与することと、を含む、診断方法および治療レジメンが提供される。
PCSK9 siRNAインビトロスクリーニングリバーストランスフェクションおよびRT-qPCRプロトコル
1.HepG2リバーストランスフェクション
■Horizon Discoveryによって合成されたカスタムデュプレックスsiRNAを、UltraPure DNaseおよびRNase不含水中に再懸濁して、10μMのストック溶液を生成した。
■ストックsiRNAを、4×384ウェルアッセイプレート(Greiner#781092)中に分注した。各アッセイプレート上に、10個のカスタムsiRNAおよび3個の対照(POS PCSK9、NEGセンス、およびNEGアンチセンス)を分注して、100nMのアッセイプレートにおける最高最終濃度からの5点4倍希釈系列を生成した。ON-TARGETplus非標的化およびPCSK9 siRNA対照を分注して、25nMの最終濃度とした。
■Lipofectamine RNAiMAX(ThermoFisher)をOptimem培地中で希釈した後、ウェル当たり10μLのLipfectamine RNAiMAX:OptiMEM溶液をアッセイプレートに添加した。ウェル当たりのRNAiMAXの最終容量は0.08μLであった。
■脂質-siRNAミックスを、室温で30分間インキュベートした。
■HepG2細胞をアッセイ培地(MEM GlutaMAX(GIBCO)10%FBS 1%Pen/Strep)中で希釈した後、4,000個のHepG2細胞を40μLの容量でアッセイプレートの各ウェル中に播種した。4連の技術的複製物をアッセイ条件ごとに播種した。
■プレートを、細胞の評価の前に、加湿雰囲気中、37℃、5%CO2で、72時間インキュベートした。
■トランスフェクションの72時間後に、細胞を、Cells-to-CT 1-step TaqMan Kit(Invitrogen 4391851C)を使用して、RT-qPCR読み出しのために処理した。簡単に説明すると、細胞を50μlの冷PBSで洗浄し、次いでDNase Iを含有する20μlの溶解溶液中で溶解した。5分後に、溶解を、2μlのSTOP溶液を2分間添加することによって停止した。
■RT-qPCR分析のために、ウェル当たり3μlの溶解物を、384ウェルPCRプレート中にテンプレートとして11μlのRT-qPCR反応容量中で分注した。
■RT-qPCRを、GAPDH(VIC #4448486)およびApoB(FAM #4351368)用のTaqManプローブとともに、ThermoFisher TaqMan Fast Virus1-Step Master Mix(#4444434)を使用して実施した。
■RT-qPCRを、QuantStudio 6サーモサイクリング装置(Applied BioSystems)を使用して実施した。
相対定量を、ΔΔCT法を使用して決定し、ここで、GAPDHを内部対照として使用し、発現の変化を参照サンプル(NEGセンスまたはNEGアンチセンスのいずれかのsiRNA処理細胞)に正規化した。
ヒトPBMCアッセイを使用して、サイトカインストームを誘発する様々なsiRNA構築物の可能性を特定する。健康なドナーからの一次PBMC(ATCC(登録商標)PCS-800-011(商標))を、96ウェルマイクロプレートに2×105細胞/ウェルの密度で播種し、10%FBS、2mMグルタミン、100U/mlのペニシリン、および100μg/mlのストレプトマイシンを含む、200μLのRPMI 1640培地中で3連で培養する。siRNAを、異なる濃度(0.39~100nMの範囲)で細胞に添加する。処理群には、1)二本鎖siRNA、2)センス上の二本鎖siRNA-crook、3)アンチセンス上の二本鎖siRNA-crook、4)二本鎖免疫刺激性siRNA、5)センス上の二本鎖免疫刺激性siRNA-crook、6)アンチセンス上の二本鎖免疫刺激性siRNA-crook、7)ビヒクル、8)未処理対照、および9)20~100ng/mLの濃度のリポ多糖(LPS)が含まれる。処理を追加した後、細胞を、加湿した37℃、5%CO2のインキュベーター内で16~24時間インキュベートする。培地を1.5mLの遠心分離管内に回収し、最高速度で5分間遠心分離する。上清を新しいチューブ内に収集し、ELISAによるサイトカイン分析のために処理するか、または-20℃で保存する。
サイトカインを、製造元の指示に従ってELISAキットを使用して定量化する。以下のELISAキット:ヒトIFN-α(Invitrogen、カタログ番号BMS216)、ヒトIFN-γ(Invitrogen、カタログ番号EHIFNG)、ヒトIFN-β(Invitrogen、カタログ番号414101)、ヒトIL-6(Invitrogen、カタログ番号BMS213HS)、およびTNF-α(Invitrogen、カタログ番号KHC3011)を使用して、細胞培地中のサイトカイン濃度を検出する。ELISAプレートリーダーを使用して、570nmの波長での吸光度を測定する。
MTTアッセイを使用して、初代PBMCおよびHepG2細胞の処理後の細胞生存率を決定する。細胞を、100μlの培地を含む96ウェルマイクロプレートに、2×105細胞/ウェルの濃度で播種する。細胞を、様々な濃度のsiRNA構築物または適切な対照で処理し、37℃および5%CO2で16~48時間培養する。処理後、マイクロプレートを、マイクロプレート適合性遠心分離機で、1,000gで5分間遠心分離し、培地を注意深く除去する。50μLの無血清培地および50μLのMTT試薬を、各ウェルに添加する。バックグラウンド対照ウェルは、50μLのMTT試薬+50μLの細胞培地(細胞なし)を含有する。プレートを37℃で3時間インキュベートする。インキュベーション後、150μLのMTT溶媒を各ウェルに添加する。プレートをホイルで包み、オービタルシェーカで15分間インキュベートする。吸光度を590nmで読み取る。吸光度の量は、細胞数に比例する。
サイトカインアレイは、siRNA構築物または適切な対照で処理されたHepG2細胞およびPBMCにおいて、選択されたヒトサイトカインおよびケモカインを同時に測定するために実施される。このアッセイは、膜ベースの抗体アレイを使用して、36のヒトサイトカイン、ケモカイン、および急性期タンパク質を同時に検出する。処理後、HepG2およびPBMCの培地を収集し、遠心分離して粒子を除去する。アッセイには、200~700μLの範囲の細胞培養上清を使用する。サイトカインを、製造元の指示に従って検出する。簡単に説明すると、異なる抗体でスポットされたニトロセルロース膜を、ブロックバッファとして使用する2.0mLのアレイバッファとともにロッキングプラットフォーム上で1時間インキュベートする。各サンプルは、0.5mLのアレイバッファおよび15μLの再構成ヒトサイトカインアレイ検出抗体カクテルを添加した後、室温で1時間インキュベートすることによって調製する。膜を、サンプル/抗体混合物とともに2~8℃で一晩インキュベートした後、洗浄する。2mLの希釈ストレプトアビジン-HRPを膜に添加し、室温で30分間インキュベートする。サイトカインを可視化するために、膜を、1mLの調製済みChemi Reagent Mixとともに1分間インキュベートし、オートラジオグラフィーフィルムカセット内に1~10分間置く。各サイトカインについてのスポット強度を、ImageJからのドットブロットアナライザで定量化し、ピクセル強度として表す。スポット強度を、MTTアッセイを使用して計算した細胞数に正規化する。異なるアレイ上のシグナルを比較して、サンプル間のサイトカインレベルにおける相対変化を決定する。
3’-DNAミニヘアピン(Crook)は、インビトロでsiRNA構築物にヌクレアーゼ耐性を付与し、その耐性には二本鎖RNA構造が必要であることが実証されている(Allison and Milner,2014)。安定性アッセイでは、PCSK9を標的とする等量のsiRNA-crookおよび未修飾siRNAを、HepG2細胞にトランスフェクトする前に、5%血清含有または血清不含培地中で、37℃で16時間プレインキュベートする(HepG2トランスフェクションを参照)。次いで、両方のsiRNAの効率を、qPCRを使用して試験し、標的遺伝子の発現レベルを定量化する(PCRプロトコルを参照されたい)。
PCSK9またはApoB Crook-siRNAの非コンジュゲートおよびGalNAcコンジュゲートバージョンを、IVおよび/またはSC経路により投与して、相対的な血漿および組織曝露を調査した。用量選択のための理論的根拠は、科学文献において公開された以下の情報に基づいた。
GalNAcコンジュゲートsiRNAを、2.0mg/kgまたは5mg/kgで皮下投与し、これは、遺伝子サイレンシングの必要とされるレベルをもたらすことが予想され、ここで、構造的に関連するsiRNAのED80は、2.5mg/kgであると報告されている(Soutschek et al.,2004)。これらの構造的に関連するsiRNAは、マウスにおいて25mg/kg(単回投与)まで許容された(Soutschek et al.,2004)。
健康な雄性動物を提供するのに十分な数のC57BL/6マウスを、承認された供給元から取得した。動物は、投薬時に20~30gの目標体重範囲にある。マウスに、尾部マーキングによって一意的に番号付けする。番号をランダムに割り当てる。ケージを、研究番号および動物番号を含む情報を与えるカードによってコード化する。研究部屋を、部屋番号および研究番号を含む情報を与えるカードによって特定する。受け取り時に、すべての動物を、不健康の外部兆候について検査した。不健康な動物は研究から除外した。動物を、最低5日の期間、気候順化させた。実行可能な場合、研究の科学的完全性を損なうことなしに、動物をできるだけ取り扱った。投薬開始前に福祉監査を実施して、研究のためのそれらの適合性を確実にした。
肝細胞を標的とするsiRNAのGalNAc成分は、C10スペーサを備えた3アンテナGalNAcクラスターであり、アミノプロパンジオールベースのリンカーを介して、siRNAのセンス鎖またはアンチセンス鎖の3’末端にコンジュゲートする(Sharma et.al Bioconjugate Chem(2018)29:2478-2488に記載)。Crook siRNA分子の場合、センス鎖のGalNAcコンジュゲートは、デオキシリボヌクレオチド末端で発生し、アンチセンスでは、リボヌクレオチド末端で発生する。
最終的なGalNAcコンジュゲートの構造:
試験物質を0.9%生理食塩水中で希釈して、それぞれ、PCSK9またはApoB Crook-siRNA GalNAc非コンジュゲートおよびコンジュゲートの静脈内および皮下用量のための25mg/mLおよび0.6mg/mLの濃度を提供した。試験物質が完全に溶解するまで、必要に応じて製剤を穏やかにボルテックスした。得られた製剤を目視検査のみによって評価し、それに従って分類した。
(1)清澄溶液
(2)濁った懸濁液、可視粒子なし
(3)可視粒子
使用後、製剤を名目上2~8℃で冷蔵保存した。
ApoB
各動物に、ApoB Crook-siRNA GalNAc非コンジュゲートの単回静脈内用量、またはApoB Crook-siRNA GalNAcコンジュゲートの単回皮下用量のいずれかを与えた。静脈内用量を、2mL/kgの容量で外側尾静脈内にボーラスとして投与した。皮下用量を、5mL/kgの容量で皮下空間内に投与した。
PCSK9について、各動物にGalNAcコンジュゲートPCSK9 crook-siRNAの単回皮下用量を与え、2つの時点(96時間および14日間)でモニタリングして、PCSK9サイレンシングを決定する。サンプルは、結論として尾部出血または心臓穿刺のいずれかを介して取得する。
10匹のマウス SC GalNAcコンジュゲートPCSK9 crook-siRNA 2mg/kg
10匹のマウス SC GalNAcコンジュゲートPCSK9 crook-siRNA 5mg/kg
10匹のマウス SC GalNAcコンジュゲート crook未修飾インクリシラン配列(配列番号135/136)
10匹のマウス SC 生理食塩水対照
最低限でも、体重を、到着の翌日および用量投与の前日に記録した。必要に応じて、追加の決定を行った。
サンプルを、必要に応じて、以下:研究番号、サンプルタイプ、用量群、動物番号/Debraコード、(名目上)サンプリング時間、保存条件を含む情報によって一意的にラベル付けした。サンプルを-50℃未満で保存した。
一連の血液サンプル(名目上100μL、体重に依存)を、以下の時点:投薬後0、48、および96時間、または14日間で、尾部切り込みによって収集した。動物を、ペントバルビタールナトリウムを使用して終末的に麻酔し、最終サンプル(名目上0.5mL)を心臓穿刺によって収集した。
動物を、終末血液サンプリングの前にペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射を介して麻酔し、灌流および放血によって屠殺した。
肝臓を、すべての動物から取り出し、事前秤量したチューブ中に入れた。組織サンプルを、UltraTurraxホモジナイゼーションプローブを使用して、1部の組織に対して5部のRNAlaterを用いてホモジナイズした。以下の組織を、PCSK9またはApoB処置群の動物から切除し、事前秤量したポット中に入れた。
・脾臓
・脳
・心臓
・肺葉
・皮膚(鼠径部、約25mm2)
血漿PCSK9またはApoBレベルは、Elabscience Biotechnology Inc.から市販のマウスPCSK9またはApoB検出キットを使用して、酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)を介して測定した。血漿サンプルは、分析前は-80℃で保存し、氷上で解凍して、13,000rpmで5分間遠心分離した後、アリコートをアッセイバッファで希釈し、ELISAプレートに適用した。PCSK9またはApoBアッセイキットは、OD450で測定される比色測定読み出しをもたらすサンドイッチELISAを使用する。特定の時点(0時間、96時間、および14日間)での各動物からのサンプルを2連でアッセイし、測定値を、キットとともに供給される標準曲線試薬に基づいて、血漿1ml当たりのPCSK9またはApoBのマイクログラムとして記録した。すべてのデータポイントを、変動係数20%未満で測定した。GalNAcコンジュゲートPCSK9またはApoB Crook siRNAの投与後の指定された時点後の血漿PCSK9またはApoBレベルを、対照治療群と比較した。統計分析を、両側の対応のあるT検定アルゴリズムを使用して適用した。
対照siRNA構築物と比較した、GalNAcコンジュゲートCrook ApoB siRNAのインビボ活性。各処置群の5匹のマウスからの血漿ApoBレベル(マイクログラム/ml)を使用して、平均ApoB値+/-標準誤差(SEM)を計算した。GalNAcコンジュゲートCrook siRNAのSC投与後96時間後の血漿ApoBレベルを、対照(i)ビヒクル生理食塩水、または(ii)Crookを有する非コンジュゲートsiRNAのいずれかを与えたマウスにおけるレベルと比較した。統計分析を、両側の対応のあるT検定アルゴリズムを使用して適用した。
図2a~cは、インビトロでの20個のPCSK9 crook-siRNAの相対的なサイレンシング活性を比較する。HepG2細胞を、アッセイ開発段階において特定した条件を使用して、siRNA対照と一緒に20個のカスタムcrook siRNA(10個のセンスsiRNAおよび10個のアンチセンスsiRNA)のライブラリーを用いてリバーストランスフェクトした。5点用量範囲(100nM、25nM、6.25nM、1.56nM、0.39nM)を使用し、siRNA濃度ごとに4回反復した。
Nair,J.K.,Willoughby,J.L.,Chan,A.,Charisse,K.,Alam,M.R.,Wang,Q.,Hoekstra,M.,Kandasamy,P.,Kel’in,A.V.,Milstein,S.and Taneja,N.,2014.Multivalent N-acetylgalactosamine-conjugated siRNA localizes in hepatocytes and elicits robust RNAi-mediated gene silencing.Journal of the American Chemical Society,136(49),pp.16958-16961.
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Claims (39)
- 核酸分子であって、
ヒトPCSK9ヌクレオチド配列またはその多型配列バリアントの少なくとも一部のセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む、二本鎖阻害性リボ核酸(RNA)分子を含む、第1の部分と、
一本鎖デオキシリボ核酸(DNA)分子を含む、第2の部分であって、前記一本鎖DNA分子の5’末端が、前記二本鎖阻害性RNA分子の前記センス鎖の3’末端に共有結合しているか、または前記一本鎖DNA分子の前記5’末端が、前記二本鎖阻害性RNA分子の前記アンチセンス鎖の3’に共有結合しており、前記一本鎖DNA分子が、ヌクレオチド配列を含み、前記ヌクレオチド配列が、その長さの少なくとも一部にわたって、前記一本鎖DNAの一部への相補的塩基対形成によってアニーリングされて、二本鎖ステムドメインおよび一本鎖ループドメインを含む二本鎖DNA構造を形成するように適合されている、第2の部分と、を含む、核酸分子。 - 前記一本鎖DNA分子の前記5’末端が、前記二本鎖阻害性RNA分子の前記センス鎖の前記3’末端に共有結合している、請求項1に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子の前記5’末端が、前記二本鎖阻害性RNA分子の前記アンチセンス鎖の前記3’末端に共有結合している、請求項1に記載の核酸分子。
- 前記ループ部分が、ヌクレオチド配列GNAまたはGNNAを含む領域を含み、各Nが、独立して、グアニン(G)、チミジン(T)、アデニン(A)、またはシトシン(C)を表す、請求項1~3のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記ループドメインが、ヌクレオチド配列GCGAAGCを含む、請求項4に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、ヌクレオチド配列TCACCTCATCCCGCGAAGC(配列番号133)を含む、請求項1~5のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、18~29ヌクレオチド塩基対長であり、より好ましくは、19~23ヌクレオチド塩基対長である、請求項1~6のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号134に示されるセンスヌクレオチド配列の18~29個の隣接するヌクレオチドを含むか、またはそれからなる、請求項1~7のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号134に示される前記センスヌクレオチド配列の21個の隣接するヌクレオチド塩基対を含むか、またはそれからなる、請求項8に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号8、1、2、3、4、5、6、7、9、または10からなる群から選択されるセンスヌクレオチド配列を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号18、11、12、13、14、15、16、17、19、または20からなる群から選択されるアンチセンスヌクレオチド配列を含む、請求項1~10のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、および76からなる群から選択されるセンスヌクレオチド配列を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、および132からなる群から選択されるアンチセンスヌクレオチド配列を含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号8を含むセンス鎖、および配列番号18を含むアンチセンス鎖を含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号8を含むセンス鎖に共有結合している、請求項14に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号18を含むアンチセンス鎖に共有結合している、請求項14に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号9を含むセンス鎖、および配列番号19を含むアンチセンス鎖を含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号9を含むセンス鎖に共有結合している、請求項17に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号19を含むアンチセンス鎖に共有結合している、請求項17に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号10を含むセンス鎖、および配列番号20を含むアンチセンス鎖を含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号10を含むセンス鎖に共有結合している、請求項20に記載の核酸分子。
- 前記一本鎖DNA分子が、配列番号20を含むアンチセンス鎖に共有結合している、請求項20に記載の核酸分子。
- 前記二本鎖阻害性RNA分子が、配列番号135を含むセンス鎖、および配列番号136を含むアンチセンス鎖を含む、請求項1~9のいずれか一項に記載の核酸分子。
- N-アセチルガラクトサミンが、前記核酸分子のDNA部分に、前記DNA部分の末端の3’末端を介して結合している、請求項1~23のいずれか一項に記載の核酸分子。
- N-アセチルガラクトサミンが、前記阻害性RNAのアンチセンス部分または前記阻害性RNAのセンス部分のいずれかに結合している、請求項1~23のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 少なくとも1つの、請求項1~26のいずれか一項に記載の核酸分子を含む、医薬組成物であって、医薬担体および/または賦形剤を含む、医薬組成物。
- 前記組成物が、少なくとも1つのさらなる異なる治療剤を含む、請求項27に記載の医薬組成物。
- 前記さらなる治療剤が、スタチンである、請求項28に記載の医薬組成物。
- 高コレステロール血症もしくは高コレステロール血症に関連する疾患を有するかまたはその素因がある対象の治療または予防における使用のための、請求項1~29のいずれか一項に記載の核酸分子または医薬組成物。
- 高コレステロール血症が、家族性高コレステロール血症である、請求項30に記載の使用による核酸分子または医薬組成物。
- 家族性高コレステロール血症が、PCSK9発現のレベルの上昇に関連している、請求項30または31に記載の使用による核酸分子または医薬組成物。
- 前記対象が、スタチン療法に耐性である、請求項30~32のいずれか一項に記載の使用による核酸分子または医薬組成物。
- 高コレステロール血症に関連する前記疾患が、卒中予防、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、脳血管疾患、末梢動脈疾患、高血圧、代謝症候群、II型糖尿病、非アルコール性脂肪酸肝疾患、および非アルコール性脂肪性肝炎からなる群から選択される、請求項30~33のいずれか一項に記載の使用による核酸分子または医薬組成物。
- 高コレステロール血症を有するかまたはその素因がある対象を治療するための方法であって、有効用量の請求項1~29のいずれか一項に記載の核酸または医薬組成物を投与し、それによって高コレステロール血症もしくは高コレステロール血症に関連する疾患を治療または予防することを含む、方法。
- 前記高コレステロール血症が、家族性高コレステロール血症である、請求項35に記載の方法。
- 家族性高コレステロール血症が、PCSK9発現のレベルの上昇に関連している、請求項36に記載の方法。
- 前記対象が、スタチン療法に耐性である、請求項35~37のいずれか一項に記載の方法。
- 高コレステロール血症に関連する前記疾患が、卒中予防、高脂血症、心血管疾患、アテローム性動脈硬化症、冠動脈心疾患、脳血管疾患、末梢動脈疾患、高血圧、代謝症候群、II型糖尿病、非アルコール性脂肪酸肝疾患、および非アルコール性脂肪性肝炎からなる群から選択される、請求項35~38のいずれか一項に記載の方法。
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