JP2022539148A - アデノ随伴ウイルスの精製方法 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)AAV含有溶液を、AAV上のエピトープを標的とするアフィニティ樹脂に、溶液中のAAVとアフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードすること、
(b)室温で、少なくとも1つの洗浄ステップを行うこと、および
(c)18℃未満の温度で、アフィニティ樹脂からAAVを溶出すること
を含む。
(a)AAV含有溶液を、AAV上のエピトープを標的とするアフィニティ樹脂に、溶液中のAAVとアフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードすること、
(b)室温で、少なくとも1つの洗浄ステップを行うこと、および
(c)18℃未満の温度で、アフィニティ樹脂からAAVを溶出すること
を含む。
本開示を説明する文脈(特に以下の請求項の文脈)における用語「a」、「an」、「the」、および同様の参照語の使用は、本明細書で別段の指示がない限り、または文脈によって明らかに矛盾しない限り、単数形と複数形の両方をカバーするように解釈されるべきである。また、「含む」、「有する」、「包含する」、および「含有する」という用語は、特に断りのない限り、オープンエンドの用語(すなわち、「~を含むが、~に限定されない」という意味)として解釈される。
一態様において、本明細書は、アデノ随伴ウイルス(AAV)を精製する方法を提供する。この方法は、(a)AAV含有溶液を、AAVを標的とするアフィニティ樹脂に、溶液中のAAVとアフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードするステップ、(b)室温で、少なくとも1つの洗浄ステップを行うステップ、および(c)18℃未満の温度で、アフィニティ樹脂からAAVを溶出するステップを含む。
いくつかの実施形態では、アフィニティ樹脂はPOROS(商標)CaptureSelect(商標)AAVxである。
本開示の方法に関して、AAVは任意のAAV血清型のものであり得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の方法によって精製されるAAVは、AAV1血清型、AAV2血清型、AAV3血清型、AAV4血清型、AAV5血清型、AAV6血清型、AAV7血清型、AAV8血清型、AAV9血清型、AAV10血清型、AAV11血清型、AAV12血清型、AAV13血清型、AAAV血清型、BAAV血清型、AAV(VR-195)血清型、およびAAV(VR-355)血清型、またはキメラAAVベクターのものである。特定の実施形態では、AAVは野生型である。
本開示の方法は、本明細書に記載されたステップの任意の組み合わせを含み、任意選択で1つまたは複数の追加のステップと組み合わせてもよい。したがって、例示的な態様では、本開示の方法は、本明細書に記載のトリプルプラスミドシステムで宿主細胞をトランスフェクションするステップをさらに含む。例示的な態様では、本開示の方法は、トリプルプラスミドシステムでトランスフェクトされた宿主細胞、例えばHEK293細胞を含む細胞培養物から上清を収穫することを含む。例示的な態様では、トランスフェクションおよび収穫(ハーベスト)ステップは、本明細書に記載の超遠心分離ステップの前に行われる。
別の態様では、本明細書に記載の任意の方法によって製造されたAAV生成物が提供される。
1.アデノ随伴ウイルス(AAV)を精製する方法であって、
(a)AAV含有溶液を、AAVを標的とするアフィニティ樹脂に、室温で、溶液中のAAVとアフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードするステップ;
(b)室温で、少なくとも1つの洗浄ステップを行うステップ;および
(c)18℃未満の温度で、アフィニティ樹脂からAAVを溶出するステップ;
を含む、方法。
第2の洗浄ステップが、約10~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約10~約200mMのTrisHClおよび約50~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2および第4の洗浄ステップが、約10~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2および第4の洗浄ステップが、約10~約200mMのTrisHClおよび約50~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約30~約200mMのTrisHClおよび約75~約500mMの塩を含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約9.2のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約30~約200mMのTrisHClおよび約30~約75%(w/w)のエチレングリコールを含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.3~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約30~約200mMのTrisHClまたはアルギニン-HCl、および約75~約500mMの塩を含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約9.2のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約20~約80mMのアルギニン-HClおよび約50~約200mMの塩を含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.3~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約30~約300mMのグリシンを含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約9.2のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約20~約150mMのタウリン、約30~約75%(w/w)のエチレングリコール、および0.05~0.2%(w/w)のオクチルグリコピラノシドを含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.3~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約5~約20mmolのクエン酸ナトリウムを含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約9.2のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約50~約200mMのアルギニン-HCl、約50~約200mMのリジン-HCl、約50~約200mMのヒスチジン-HCl、および約1mM~約4mMのN-アセチル-D,L-トリプトファン、ならびに約10%~約40%(w/w)のポリソルベート80を含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.3~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約20nM~約100mMのTrisHClおよび約50nM~約200nMの塩を含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約8.8のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約20mM~100mMのTrisHCl、約40%~約60%(w/w)のエチレングリコールを含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.5~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約20nM~約100mMのTrisHClおよび約50nM~約200nMの塩を含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約7.5~約8.8のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約20mM~100mMのTrisHCl、約40%~約60%(w/w)のエチレングリコールを含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約7.5~約8.8のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
第2の洗浄ステップが、約10~約70mMのTrisHClおよび約75~約250mMのNaClを含む第2のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第2のバッファーは約8.0~約9.0のpHを有する;および
第3の洗浄ステップが、約10~約70mMのTrisHClおよび約30~約75%(w/w)のエチレングリコールを含む第3のバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、第3のバッファーは約8.0~約9.0のpHを有する、実施形態1~66のいずれか1つに記載の方法。
(a)アフィニティ樹脂を、50~200mMの酢酸ナトリウム、0.05%~0.2%(w/w)のポリソルベート80を含み、約5.5~6.5のpHを有する第1の溶出バッファーと接触させること;
(b)アフィニティ樹脂を、30~80mMのグリシン、5~20mMのヒスチジン、50~200mMのNaCl、3~8%(w/w)のトレハロース、および0.001~0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、6.5~7.5のpHを有する第2の溶出バッファーと接触させること;および
(c)アフィニティ樹脂を、50~200mMのNaClおよび30~80mMのTrisHClを含み、8.0~9.0のpHを有する第3の溶出バッファーと接触させること;
をさらに含む、実施形態118に記載の方法。
(a)アフィニティ樹脂を、約20~約100mMのTris-HClおよび約75~約250mMのNaClを含み、約8.0~約8.8のpHを有する、第5のバッファーと接触させること;および
(b)アフィニティ樹脂を、約1Mの硫酸アンモニウム、約50mMのTris-HCl、および約50%(w/w)のエチレングリコールを含む第2の溶出バッファーと、少なくとも約6.8のpHで接触させること;
をさらに含む、実施形態122に記載の方法。
(a)アフィニティ樹脂を、約20~約100mMのヒスチジン、約80~約120mMのNaClを含み、約8.0~約8.8のpHを有する第5のバッファーと接触させること;および
(b)アフィニティ樹脂を、約20~約100mMのヒスチジン、約600~約900mMのNaCl、および約5~60%(w/w)のDMSOを含み、約6.5~約8.5のpHを有する第2の溶出バッファーと接触させること;
をさらに含む、実施形態126に記載の方法。
-冷却キャビネットUnichromat 1500内のクロマトグラフィースキッドAKTA pure 150;
-温度ジャケット付きクロマトグラフィーカラム(水冷式);
-溶出に使用される冷バッファー;または
-上記の組み合わせ;
を含む。
Claims (74)
- アデノ随伴ウイルス(AAV)を精製する方法であって、
(a)AAV含有溶液を、AAVを標的とするアフィニティ樹脂に、室温で、溶液中のAAVとアフィニティ樹脂との間の結合を可能にする条件下でロードするステップ;
(b)室温で、少なくとも1つの洗浄ステップを行うステップ;および
(c)18℃未満の温度で、アフィニティ樹脂からAAVを溶出するステップ;
を含む、方法。 - ステップ(c)における温度が1℃~12℃である、請求項1に記載の方法。
- ステップ(c)における温度が2℃~8℃である、請求項1に記載の方法。
- AAV含有溶液をアフィニティ樹脂にロードする前に、AAV含有溶液を陰イオン交換体と接触させること、および陰イオン交換体からAAV含有溶液を溶出させることをさらに含む、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 室温で少なくとも2つの洗浄ステップが行われる、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 室温で少なくとも3つの洗浄ステップが行われる、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
- 室温で少なくとも4つの洗浄ステップ行われる、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。
- 2つの洗浄ステップが行われる、請求項5に記載の方法。
- 3つの洗浄ステップが行われる、請求項6に記載の方法。
- 4つの洗浄ステップが行われる、請求項7に記載の方法。
- 前記洗浄ステップが連続して行われる、請求項5~10のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含む、請求項1~11のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約25mM~約100mMのTrisHClおよび約75mM~約250mMの塩を含む、請求項12に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約40mM~約60mMのTrisHClおよび約100mM~約150mMの塩を含む、請求項13に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約7.5~約9.2、約8.0~約9.0、または約8.0~約8.8のpHを有する、請求項12~14のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約50mMのTrisHClおよび約125 mMの塩を含み、約8.5のpHを有する、請求項15に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約50mM~約200mMの酢酸ナトリウムおよび約0.005%~約0.3%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項17に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約90mM~約110mMの酢酸ナトリウムおよび約0.05%~約0.2%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項18に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約5.0~約7.4、約5.5~約7.0、または約5.5~約6.5のpHを有する、請求項17~19のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約100mMの酢酸ナトリウムおよび約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約6.0のpHを有する、請求項20に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約10%~約75%(w/w)のエチレングリコールを含む、請求項1~21のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約25mM~約100mMのTrisHClおよび約25%~約70%(w/w)のエチレングリコールを含む、請求項22に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約40mM~約60mMのTrisHClおよび約40%~約60%(w/w)のエチレングリコールを含む、請求項23に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約7.5~約9.2、約8.0~約9.0、または約8.0~約8.8のpHを有する、請求項22~24のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約50mM TrisHClおよび約50%(w/w)のエチレングリコールを含み、約8.5のpHを有する、請求項25に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約10mM~約200mMのグリシン、約1mM~約100mMのヒスチジン、約20mM~約500mMの塩、約1%~約10%(w/w)のトレハロース、および約0.0005%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項1~26のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約30mM~約80mMのグリシン、約5mM~約20mMのヒスチジン、約50mM~約200mMの塩、約3%~約8%(w/w)のトレハロース、および約0.001%~約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項27に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約40mM~約60mMのグリシン、約5mM~約15mMのヒスチジン、約90mM~約110mMの塩、約4%~約6%(w/w)のトレハロース、および約0.001%~約0.05%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項28に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約6.0~約8.0、約6.5~約7.5、または約7.0~約7.4のpHを有する、請求項27~29のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約50mMのグリシン、約10mMのヒスチジン、約100mMの塩、約5%(w/w)のトレハロース、約0.005%(w/w)のポリソルベート80を含み、約7.0のpHを有する、請求項30に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約1mM~約200mMのTrisHCl、約50mM~約500mMの塩、および約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項1~31のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約5mM~約50mMのTrisHCl、約75mM~約250mMの塩、および約0.005%~約0.3%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項32に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約10mM~約30mMのTrisHCl、約140mM~約160mMの塩、および約0.05%~約0.2%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項33に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約6.0~約8.8、約6.5~約8.5、または約7.0~約8.0のpHを有する、請求項32~34のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの洗浄バッファーが、約20mMのTrisHCl、約150mMの塩、および約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約7.4のpHを有する、請求項35に記載の方法。
- ステップ(c)が、少なくとも1つの溶出バッファーでAAVを溶出することを含む、請求項1~36のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、洗浄バッファーの少なくとも1つと同じである、請求項37に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、ステップ(c)においてAAVを溶出する前の最終洗浄ステップで使用される最後の洗浄バッファーと同じである、請求項38に記載の方法。
- 第1の溶出バッファーが、ステップ(c)においてAAVを溶出する前の最終洗浄ステップで使用される最後の洗浄バッファーと同じである、請求項38に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約10mM~約200mMのグリシン、約1mM~約100mMのヒスチジン、約20mM~約500mMの塩、約1%~約10%(w/w)のトレハロース、および約0.0005%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項37~40のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約30mM~約80mMのグリシン、約5mM~約20mMのヒスチジン、約50mM~約200mMの塩、約3%~約8%のトレハロース、および約0.001%~約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項41に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約40mM~約60mMのグリシン、約5mM~約15mMのヒスチジン、約90mM~約110mMの塩、約4%~約6%(w/w)のトレハロース、および約0.001%~約0.05%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項42に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約6.0~約8.0、約6.5~約7.5、または約7.0~約7.4のpHを有する、請求項41~43のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約50mMのグリシン、約10mMのヒスチジン、約100mMの塩、約5%(w/w)のトレハロース、および約0.005%(w/w)のポリソルベート80を含み、約7.0のpHを有する、請求項44に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約1mM~約200mMのTrisHCl、約50mM~約500mMの塩、および約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項37~45のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約5mM~約50mMのTrisHCl、約75mM~約250mMの塩、および約0.005%~約0.3%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項46に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約10mM~約30mMのTrisHCl、約140mM~約160mMの塩、および約0.05%~約0.2%(w/w)のポリソルベート80を含む、請求項47に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約6.0~約8.8、約6.5~約8.5、または約7.0~約8.0のpHを有する、請求項46~48のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも1つの溶出バッファーが、約20mM TrisHCl、約150 mMの塩、および約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約7.4のpHを有する、請求項49に記載の方法。
- 第1および第3の洗浄ステップが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、
第2の洗浄ステップが、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項1~50のいずれか一項に記載の方法。 - 第1および第3の洗浄ステップが、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.00%1~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、
第2の洗浄ステップが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項1~50のいずれか一項に記載の方法。 - 第1および第3の洗浄ステップが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、
第2および第4の洗浄ステップが、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項1~50のいずれか一項に記載の方法。 - 第1および第3の洗浄ステップが、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含み、
第2および第4の洗浄ステップが、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項1~50のいずれか一項に記載の方法。 - 第1および第3の洗浄ステップでそれぞれ使用される第1および第3のバッファーが、それぞれ、約50mMのTrisHClおよび約125mMの塩を含み、約8.5のpHを有する、請求項51または請求項53に記載の方法。
- 第1および第3の洗浄ステップでそれぞれ使用される第1および第3のバッファーが、それぞれ、約100mMの酢酸ナトリウム、約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約6.0のpHを有する、請求項52または54に記載の方法。
- 第2の洗浄ステップで使用される第2のバッファーが、約100mMの酢酸ナトリウム、約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約6.0のpHを有する、請求項51または53に記載の方法。
- 第2の洗浄ステップで使用される第2のバッファーが、約50mMのTrisHClおよび約125mMの塩を含み、約8.5のpHを有する、請求項52または54に記載の方法。
- 第4の洗浄ステップで使用される第4のバッファーが、約100mMの酢酸ナトリウム、約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約6.0のpHを有する、請求項53に記載の方法。
- 第4の洗浄ステップで使用される第4のバッファーが、約50mMのTrisHClおよび約125mMの塩を含み、約8.5のpHを有する、請求項54に記載の方法。
- ステップ(c)が、約10mM~約200mMのTrisHClおよび約50mM~約500mMの塩を含みかつ約7.5~約9.2のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項51または54に記載の方法。
- ステップ(c)が、約10mM~約2000mMの酢酸ナトリウムおよび約0.001%~約1%(w/w)のポリソルベート80を含みかつ約5.0~約7.4のpHを有するバッファーをアフィニティ樹脂にアプライすることを含む、請求項52または53に記載の方法。
- 前記バッファーが、約50mMのTrisHClおよび約125 mMの塩を含み、約8.5のpHを有する、請求項61に記載の方法。
- 前記バッファーが、約100mMの酢酸ナトリウム、約0.1%(w/w)のポリソルベート80を含み、約6.0のpHを有する、請求項62に記載の方法。
- 前記塩が、NaCl、KCl、MgCl2、CaCl2、クエン酸ナトリウム、LiCl、CsCl、酢酸ナトリウム、ならびにNaCl、KCl、MgCl2、CaCl2、クエン酸ナトリウム、LiCl、CsCl、および酢酸ナトリウムのうちの1つまたは複数の組み合わせから選択される、請求項12~64のいずれか一項に記載の方法。
- 前記塩がNaClである、請求項65に記載の方法。
- 前記バッファーが、約50mMのTrisHClおよび約125mMのNaClを含み、約8.5のpHを有する、請求項12~16、51~55、58、60、または61のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出ステップから得られるAAVが、99.0%以上の純度レベルを有する、請求項1~67のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出ステップから得られるAAVが、99.9%以上の純度レベルを有する、請求項1~68のいずれか一項に記載の方法。
- 溶出ステップ(c)から溶出されるAAVカプシドの少なくとも60%、少なくとも65%、少なくとも70%、少なくとも75%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも86%、少なくとも87%、少なくとも88%、少なくとも89%、少なくとも90%、少なくとも91%、少なくとも92%、少なくとも93%、少なくとも94%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%が、完全AAVカプシドである、請求項1~69のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アフィニティ樹脂がAAVx樹脂である、請求項1~70のいずれか一項に記載の方法。
- AAVがAAV9である、請求項1~71のいずれか一項に記載の方法。
- AAV9が、配列番号1、配列番号2および/または配列番号3の配列を含むペプチドを含む、請求項72に記載の方法。
- 請求項1~73のいずれか一項に記載の方法により製造されたAAV生成物。
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