JP2022526985A - 改良されたコンジュゲーションリンカー - Google Patents

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Abstract

小分子、ペプチド、およびタンパク質のコンジュゲーションに適したβ脱離リンカー、および、該リンカーを含む化合物、が提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年４月５日に出願された米国仮出願第６２／８３０，２８０号の優先権を主張し、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
配列表の参照による組み込み
本出願は、電子フォーマットの配列表を伴って提出されている。その配列表は、２０２０年４月３日作成、サイズ２，１１２バイトの、670572002140SeqList.txtという名称のファイルとして提供されている。配列表の電子フォーマットの情報は、参照によりその全体が組み込まれる。
技術分野
本開示は、一般に、小分子、ペプチド、オリゴヌクレオチド、およびタンパク質とのコンジュゲーションに適したβ脱離リンカー、およびそのリンカーを含む化合物、に関する。
薬物分子は、半減期、安定性、溶解性、耐容性、および安全性などの医薬特性を増強するために、高分子担体に共有結合している。米国特許第８，６８０，３１５号、第８，７５４，１９０号、および第９，６４９，３８５号は、速度制御されたβ脱離メカニズムを介して薬物放出を可能にする、β脱離リンカーを有する薬物コンジュゲートシステムを開示している。しかしながら、放出された薬物または切断された架橋とともに、β脱離プロセスは、求核付加のために活性化され得るアルケニル基を含んだ、高分子担体に結合したリンカー残基を生成する。図１に示すように、生理学的条件下でのこの付加の潜在的な求核剤には、チオールとアミンが含まれ、例えば、タンパク質に大量に存在するものであり、またはより可能性があるのは、ヒドロゲルの架橋を切断することで放出される、アミンである。アミンはプロトン化され、生理学的ｐＨにおいて非反応性になると予想されるが、このようなアザ・マイケル（aza-Michael）付加は、少なくともインビトロ状況で発生することが、意外にも見出された。以前に開示されたリンカー（すなわち、米国特許第８，６８０，３１５号、および第８，７５４，１９０号）は、図２に示すように、脱離酸素を有する炭素上にアルキル基（米国特許第８，６８０，３１５号の式（Ｉ）のＲ５基に相当）を付加することにより、この望ましくない反応からの救済手段を提供している。望ましくないアザ・マイケル付加をより効果的に抑制できる、改良されたリンカーが必要である。
一態様において、式（Ｉ）
Figure 2022526985000002
 （Ｉ）
［式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｘ、およびＺは、本明細書に開示されている通りである。］で示されるリンカー、が提供される。いくつかの実施形態において、リンカーは、β脱離リンカーである。いくつかの実施形態において、β脱離リンカーは、小分子、ペプチド、およびタンパク質の治療薬のコンジュゲーションに適している。
別の態様において、式（ＩＩ）
Figure 2022526985000003
 （ＩＩ）
［式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｙ、Ｚ、およびＤは、本明細書に開示されている通りである。］で示されるリンカー－薬物、が提供される。いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）のリンカー－薬物は、式（Ｉ）のリンカーを、小分子、ペプチド、またはタンパク質の治療薬などの薬物と組み合わせることによって、製造される。
さらに別の態様において、式（ＩＩＩ）
Figure 2022526985000004
 （ＩＩＩ）
［式中、ｎ、ｑ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｍ、Ｙ、Ｚ＊、およびＤは、本明細書に開示されている通りである。］で示されるコンジュゲート、が提供される。いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートは、式（Ｉ）のリンカーを介して、高分子担体Ｍに放出可能に結合された、薬物Ｄのコンジュゲートである。
さらに別の態様において、式（ＩＶ）
Figure 2022526985000005
 （ＩＶ）
［式中、ｎ、ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｗ、Ｚ＊、Ｐ１、およびＰ２は、本明細書に開示されている通りである。］で示されるヒドロゲル、が提供される。いくつかの実施形態において、式（ＩＶ）の化合物は、分解性の架橋ヒドロゲルである。いくつかの実施形態において、分解性架橋ヒドロゲルは、式（Ｉ）のリンカーの残基を含む。
さらに別の態様において、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、および（ＩＶ）の化合物を製造するための方法、およびそれらを使用するための方法、が提供される。別の態様において、式（ＩＩＩ）のコンジュゲート、または式（ＩＶ）のヒドロゲルを含む、医薬組成物、が提供される。
図１は、コンジュゲートにおける、米国特許第９，６４９，３８５号に開示されたカルバメートリンカーの切断を示している。無傷（intact）のコンジュゲート１は、ｐＨ依存的にベータ脱離反応を受けて、リンカーが切断され、遊離アミン３とともに、リンカー残余物２が形成される。これらの生成物は、その後の可逆的なアザ・マイケル反応を受けて、比較的安定な再付加物４を形成する。Ｒが、アミン含有薬物またはプロドラッグである場合、リンカーは、薬物放出リンカーである。Ｒが、第２のＰＥＧプレポリマーである場合、リンカーは、ＰＥＧヒドロゲルのクロスリンカーの一部である。
図２は、コンジュゲートにおける、米国特許第９，６４９，３８５号に開示されたカルバメートリンカーの切断を示しており、ここで、Ｒ５基は、両方、アルキルである。Ｒ５のアルキル基による立体障害は、再付加プロセスを遅らせることが予想される。
図３は、コンジュゲートにおける、本明細書に開示されたγ－二置換カルバメートリンカーの切断を示している。
図４は、様々なｐＨ値でのリンカービニルスルホンへのグリシンのアザ・マイケル付加の速度を示している。Ｓｔｄ、β－Ｍｅ、およびｇｅｍ ｄｉＭｅリンカーのグリシン付加物濃度（ｍＭ）と時間（ｈ）のプリズムプロット（Prism plot）であり：Ａ）ｐＨ７．４で、１．０Ｍグリシン；Ｂ）ｐＨ８．４で、１．０Ｍグリシン；Ｃ）ｐＨ９．５で、０．１Ｍグリシン、である。ｋｆ、ｋｒ、およびＫｅｑを含む各実験の表データは、方法の欄で記載されるように、計算した。
図５は、β－Ｎ－グリシルメチルスルホンからのグリシンのレトロ・アザ・マイケル脱離の速度を示している。Ａ）各リンカーのレトロ・アザ・マイケル反応の概略図。Ｂ）時間（ｈ）に対するグリシン付加物濃度（μＭ）のプリズムプロット。Ｓｔｄリンカー、ｋｏｂｓ＝０．００３０ｈ－１；β－Ｍｅリンカー、ｋｏｂｓ＝０．００５０ｈ－１；ｇｅｍ ｄｉＭｅリンカー、ｋｏｂｓ＝０．００６０ｈ－１。各リンカーについて、計算した［Ｇｌｙ－付加物］ｅｑｕｉｌ≦１μＭ。
図６は、式（ＩＶ）の架橋を含むヒドロゲルの例示的な構造を示す。
図７は、式（ＩＶ）の架橋を含む薬物放出ヒドロゲルの例示的な構造を示す。式（ＩＩ）のリンカー－薬物（Ｌ－Ｄ）は、反応性基Ｂを介して、ヒドロゲルに結合している。
図８は、実施例１８のエキセナチド放出ヒドロゲルマイクロスフェアコンジュゲートから放出されたエキセナチド［Ｎ２８Ｑ］の血漿濃度を示している。ラット（ｎ＝３）に、０日目、９．２μｍｏｌ／ｋｇのエキセナチド［Ｎ２８Ｑ］を含むコンジュゲートの懸濁液を皮下注射した。血漿サンプルを採取し、ＬＣ／ＭＳで分析した。コンジュゲートにより、注射後少なくとも８４日間、エキセナチド［Ｎ２８Ｑ］の継続的な曝露が提供され、７５０時間（３１日）の放出ｔ１／２を示した。
図９は、実施例１７のインスリンリスプロ放出ヒドロゲルマイクロスフェアコンジュゲートで処置されたＳＴＺ誘発糖尿病マウスにおいて測定された血中グルコースを示す。マウスをストレプトゾトシンで処置して糖尿病を誘発し、次いで、０日目および７日目に、１．２μｍｏｌ／ｋｇ（低用量、正方形）または４．８μｍｏｌ／ｋｇ（高用量、三角形）のインスリンリスプロを含むコンジュゲートの懸濁液を皮下注射した。対照のビヒクル（丸）は、ペプチドを含まないマイクロスフェアで構成された。血液サンプルを採取し、血中グルコースを分析した。低用量では１日間、血中グルコースが抑制され、一方、高用量では、注射後５日間、血中グルコースが抑制された。効果は、２回目の投与で繰り返された。
図１０は、実施例１７のインスリンリスプロ放出ヒドロゲルマイクロスフェアコンジュゲートで処置されたＳＴＺ誘発糖尿病マウスにおいて測定された体重を示す。マウスをストレプトゾトシンで処置して糖尿病を誘発し、次いで、０日目および７日目に、１．２μｍｏｌ／ｋｇ（低用量、正方形）または４．８μｍｏｌ／ｋｇ（高用量、三角形）のインスリンリスプロを含むコンジュゲートの懸濁液を皮下注射した。対照のビヒクル（丸）は、ペプチドを含まないマイクロスフェアで構成された。コンジュゲートの低用量と高用量の両方で、動物の体重が維持されたが、対照のビヒクルは、６日間で１７％減少した。
従前に開示されたβ脱離リンカーと比較して、望ましくないアザ・マイケル付加は、本明細書に開示されたリンカーによってはるかに効果的に抑制され得ることが見出され、このリンカーは、図３に示すように、残留酸素を有する炭素に隣接して、すなわちガンマ炭素に、ジェミナルな置換の炭素を組み込んでいる。結果として得られる本明細書に開示された式（Ｉ）のリンカーは、リンカー残余物への求核剤の付加の速度を大きく抑制し、得られる平衡定数をそれに応じて非常に低くする、コンジュゲートを提供する。
定義
本明細書において、特に断りのない限り、「ａ」、「ａｎ」などの用語の使用は、１つまたは複数を意味する。
本明細書において、特に断りのない限り、「約」との用語は、数値に関連して使用する場合、１５％以内、１０％以内、５％以内、４％以内、３％以内、２％以内、１％以内、または０．５％以内の数値を企図する。
「アルキル」との用語は、１～２０、１～１２、１～８、１～６、または１～４個の炭素原子の、直鎖、分岐、または環状の飽和炭化水素基を含む。いくつかの実施形態において、アルキルは、直鎖または分枝である。直鎖または分岐のアルキル基としては、これに限定されるものではないが、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル、ｎ－ノニル、ｎ－デシルなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、アルキルは環状である。環状アルキル基としては、これに限定されるものではないが、例えば、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンタジエニル、シクロヘキシルなどが挙げられる。
「アルコキシ」との用語は、酸素に結合したアルキル基を含み、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、シクロプロポキシ、シクロブトキシなどが挙げられる。
「アルケニル」との用語は、炭素－炭素二重結合を有し、および２～２０、２～１２、２～８、２～６、または２～４個の炭素原子を有する、非芳香族の不飽和炭化水素を含む。
「アルキニル」との用語は、炭素－炭素三重結合を有し、および２～２０、２～１２、２～８、２～６、または２～４個の炭素原子を有する、非芳香族の不飽和炭化水素を含む。
「アリール」との用語は、６～１８個の炭素、好ましくは６～１０個の炭素の芳香族炭化水素基を含み、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルなどの基が挙げられる。「ヘテロアリール」との用語は、少なくとも１つのＮ、ＯまたはＳ原子を含んで、３～１５個の炭素を含む、好ましくは、少なくとも１つのＮ、ＯまたはＳ原子を含んで、３～７個の炭素を含む、芳香族環を含み、ピロリル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、キノリル、インドリル、インデニルなどの基が挙げられる。
いくつかの例において、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールの部分は、アルキル結合を介して分子の残りの部分に結合し得る。これらの状況下で、置換基は、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリールアルキル、またはヘテロアリールアルキルと称され、アルキレン部分が、アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールの部分と、該アルケニル、アルキニル、アリール、またはヘテロアリールが結合している分子との間にあることを示す。
「ハロゲン」または「ハロ」との用語は、ブロモ、フルオロ、クロロ、およびヨードを含む。
「ヘテロ環」または「ヘテロシクリル」との用語は、少なくとも１つのＮ、Ｏ、またはＳ原子を含む、３～１５員の芳香族または非芳香族の環を意味する。これに限定されるものではないが、例えば、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ピロリジン、およびテトラヒドロフラニル、ならびに、上記の「ヘテロアリール」の用語のために提供された例示の基が含まれる。いくつかの実施形態において、ヘテロ環またはヘテロシクリルは、非芳香族である。いくつかの実施形態において、ヘテロ環またはヘテロシクリルは、芳香族である。
「高分子」との用語は、分子量が、５，０００～１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００～５００，０００ダルトン、より好ましくは１０，０００～２５０，０００ダルトンの、分子または分子の残基を意味する。高分子としては、これに限定されるものではないが、例えば、抗体、抗体フラグメント、および酵素を含む、タンパク質；ポリ（リジン）、およびポリ（バリン）などのポリ（アミノ酸）、および混合配列ポリペプチドを含む、ポリペプチド；ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）、およびそれらのコポリマーを含む、合成ポリマー；および、デキストランなどの多糖類、が挙げられる。いくつかの実施形態において、高分子は、上記のような、アミン、カルボン酸、アルコール、チオール、アルキン、アジド、またはマレイミド基などの、天然または化学的変換後のいずれかで、コンジュゲーションに適した少なくとも１つの官能基を含む。本発明の特定の実施形態において、高分子は、ポリエチレングリコールである。ポリエチレングリコールは、直鎖または分枝であって、一端がコンジュゲーションに適した官能基で終端となり、他端（または複数の他端）がキャッピング基（例えば、メチル）で終端となっていてもよく、あるいは、各アームが、コンジュゲーションに適した官能基で終端となった、複数のアームを含んでいてもよい。本発明の好ましい実施形態において、ポリエチレングリコールは、平均分子量が、２０，０００～２００，０００ダルトン、好ましくは２０，０００～１００，０００ダルトン、最も好ましくは約４０，０００ダルトン、である、直鎖、分岐、またはマルチアームのポリマーである。そのようなポリエチレングリコールの例は、当技術分野で知られており、例えば、日油株式会社（東京、日本）から市販されている。
「タンパク質」および「ペプチド」との用語は、鎖長に関係なく交換可能に使用され、これらの用語は、ペプチド模倣物、および、ＣＨ２ＮＨ２リンケージなどのアミドリンケージ以外のリンケージを含む疑似ペプチド、をさらに含む。
「核酸」および「オリゴヌクレオチド」との用語もまた、鎖長に関係なく交換可能に使用される。核酸またはオリゴヌクレオチドは、一本鎖であっても、または二本鎖であってもよく、あるいは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、または、ホスホジエステル、ホスホロアミダートなどの変更されたリンケージを有した、それらの修飾された形態であってもよい。本発明において薬物として有用なタンパク質および核酸の両方について、これらの用語はまた、タンパク質および疑似ペプチド結合の場合において天然には見られない側鎖、および、核酸ならびにペプチド核酸などの骨格変形体の場合において天然には見られない塩基、を有するものも含む。
薬物の文脈における「小分子」との用語は、当技術分野でよく理解されている用語であり、合成されるか、または天然から単離され、一般にタンパク質または核酸に類似していない、タンパク質および核酸以外の化合物を含むことを意味する。典型的には、それらは、分子量が＜１，０００であるが、特定のカットオフは認識されない。そうであるが、この用語は薬理学および医薬の分野でよく理解されている。
特に断りのない限り、「任意に置換されていてもよい」とは、基が、非置換であるか、または、同じかまたは異なっていてもよい置換基の１つまたは複数（例えば、１、２、３、４または５つ）によって、置換され得ることを意味する。置換基としては、これに限定されるものではないが、例えば、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、－ＣＮ、－ＯＲａａ、－ＳＲａａ、－ＮＲａａＲｂｂ、－ＮＯ２、－Ｃ＝ＮＨ（ＯＲａａ）、－Ｃ（Ｏ）Ｒａａ、－ＯＣ（Ｏ）Ｒａａ、－Ｃ（Ｏ）ＯＲａａ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、－ＮＲａａＣ（Ｏ）Ｒｂｂ、－ＮＲａａＣ（Ｏ）ＯＲｂｂ、－Ｓ（Ｏ）Ｒａａ、－Ｓ（Ｏ）２Ｒａａ、－ＮＲａａＳ（Ｏ）Ｒｂｂ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＳ（Ｏ）Ｒｂｂ、－ＮＲａａＳ（Ｏ）２Ｒｂｂ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲａａＳ（Ｏ）２Ｒｂｂ、－Ｓ（Ｏ）ＮＲａａＲｂｂ、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲａａＲｂｂ、－Ｐ（Ｏ）（ＯＲａａ）（ＯＲｂｂ）、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、またはアリール、が挙げられ、ここで、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、およびアリールは、それぞれ独立して、任意に、Ｒｃｃによって置換されていてもよく、ここで、
ＲａａおよびＲｂｂは、それぞれ独立して、Ｈ、アルキル、アルケニル、アルキニル、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、またはアリールであるか、または、
ＲａａおよびＲｂｂは、それらが結合する窒素原子と一緒になってヘテロシクリルを形成し、これは、任意に、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヒドロキシル、アルコキシ、または－ＣＮで置換されていてもよく、ここで、
各Ｒｃｃは、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール、－ＣＮ、または－ＮＯ２である。
典型的には、薬物の活性形態が、本発明のコンジュゲートから直接放出されるが、いくつかの場合において、そのプロドラッグの形態で、活性な薬物を放出することが可能である。
リンカー
一態様において、本明細書において、式（Ｉ）
Figure 2022526985000006
 （Ｉ）
［式中、
ｎは、０～６の整数であり；
Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、電子求引基であり；
各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、２つのＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって３～６員環を形成し；
Ｘは、脱離基であり；および、
Ｚは、リンカーを高分子担体に接続するための官能基である。］
で示されるリンカー、が提供される。
式（Ｉ）のリンカーのいくつかの実施形態において、ｎ＝１～６であり、Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、電子求引基であり；各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、一緒になって３～６員環を形成してもよく；Ｘは、ハロゲン、Ｎ－スクシンイミジルオキシ、ニトロフェノキシ、またはペンタハロフェノキシなどの、活性エステル、または、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、または、Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌであり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、任意に置換されていてもよいアリール、または任意に置換されていてもよいヘテロアリールであり；および、Ｚは、リンカーを高分子担体に接続するための官能基である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、
－ＣＮ；
－ＮＯ２；
任意に置換されていてもよいアリール；
任意に置換されていてもよいヘテロアリール；
任意に置換されていてもよいアルケニル；
任意に置換されていてもよいアルキニル；
－ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または－ＳＯ２Ｒ３、
［ここで、Ｒ３は、Ｈ、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８、または－ＮＲ８ ２であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒にヘテロ環を形成する。］；または、
ＳＲ９、
［ここで、Ｒ９は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。］
である。
いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、－ＣＮである。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は－ＮＯ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、６～１０個の炭素を含む、任意に置換されていてもよいアリールである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、任意に置換されていてもよい、フェニル、ナフチル、またはアントラセニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、３～７個の炭素を含み、少なくとも１つのＮ、Ｏ、またはＳ原子を含む、任意に置換されていてもよいヘテロアリールである。例えば、いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、任意に置換されていてもよい、ピロリル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、キノリル、インドリル、またはインデニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、２～２０個の炭素原子を含む、任意に置換されていてもよいアルケニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、２～２０個の炭素原子を含む、任意に置換されていてもよいアルキニルである。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、－ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または－ＳＯ２Ｒ３であり、ここで、Ｒ３は、Ｈ、１～２０個の炭素原子を含む任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８または－ＮＲ８ ２、であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または１～２０個の炭素原子を含む任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒になってヘテロ環を形成する。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の電子求引基は、－ＳＲ９であり、ここで、Ｒ９は、１～２０個の炭素原子を含む任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。
式（Ｉ）のリンカーのいくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、－ＣＮ、－ＳＯＲ３、または－ＳＯ２Ｒ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２の少なくとも１つは、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３であり、ここで、Ｒ３は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、または－ＮＲ８ ２である。いくつかの実施形態において、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、－ＣＮ、－ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、－ＳＯ２ＣＨ３、－ＳＯ２Ｐｈ、－ＳＯ２ＰｈＣｌ、－ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ、－ＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２、－ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、または、－ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）２、である。
式（Ｉ）のリンカーのいくつかの実施形態において、各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルである。いくつかの実施形態において、Ｒ４は、両方、メチルである。
式（Ｉ）のリンカーのいくつかの実施形態において、ｎは、１～６の整数である。いくつかの実施形態において、ｎは、１～３の整数である。いくつかの実施形態において、ｎは、０～３の整数である。いくつかの実施形態において、ｎは、１である。いくつかの実施形態において、ｎは、２である。いくつかの実施形態において、ｎは、３である。
式（Ｉ）のリンカーのいくつかの実施形態において、Ｘは、ハロゲン、活性エステル（例えば、Ｎ－スクシンイミジルオキシ、ニトロフェノキシ、またはペンタハロフェノキシ）、任意に置換されていてもよいヘテロアリール（例えば、イミダゾリル、トリアゾリル、またはテトラゾリル）、または、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌであり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、任意に置換されていてもよいアリール、または任意に置換されていてもよいヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、Ｘは、ハロゲンである。いくつかの実施形態において、Ｘは、スクシンイミジルオキシなどの活性エステルである。いくつかの実施形態において、Ｘは、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌであり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいアリールである。
式（Ｉ）のリンカーでは、Ｚは、コンジュゲーションについて当技術分野で知られている任意の官能基であり得る。そのような官能基としては、これに限定されるものではないが、例えば、アミン、アミノオキシ、ケトン、アルデヒド、マレイミジル、チオール、アルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル（bicyclononynyl）、シクロオクチニル、およびそれらの保護された変形基が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｚは、保護されたアミン、保護されたアミノオキシ、ケトンまたは保護されたケトン、アルデヒドまたは保護されたアルデヒド、マレイミジル、保護されたチオール、保護されたアルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、またはシクロオクチニルである。いくつかの実施形態において、Ｚは、アジド、ケトン、または保護されたケトンである。
本明細書の記載において、部分についての、すべての記載、変形例、実施形態、または態様は、記載のそれぞれのおよびすべての組み合わせが具体的にかつ個別的に記載されているのと同じように、他の部分についての、すべての記載、変形例、実施形態、または態様と組み合わせることができることが理解される。例えば、式（Ｉ）のｎに関して本明細書で提供される、すべての記載、変形例、実施形態、または態様は、それぞれのおよびすべての組み合わせが具体的にかつ個別的に記載されているのと同じように、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｘ、およびＺの、すべての記載、変形例、実施形態、または態様と組み合わせることができる。また、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、または（Ｖ）などの式の、すべての記載、変形例、実施形態、または態様は、適用可能な場合、本明細書で述べられる他の式にも等しく適用され、そして、すべての記載、変形例、実施形態、または態様が、すべての式について別々に個別に記載されているのと同じように、等しく記載されるものと理解される。例えば、式（Ｉ）の、すべての記載、変形例、実施形態、または態様は、適用可能な場合、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、および（Ｖ）などの、本明細書で述べられる式の、いずれにも等しく適用され、そして、すべての記載、変形例、実施形態、または態様が、すべての式について別々に個別に記載されているのと同じように、等しく記載される。
リンカー－薬物
別の態様において、式（ＩＩ）
Figure 2022526985000007
 （ＩＩ）
［式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｘ、およびＺは、式（Ｉ）について本明細書に開示された通りであり；Ｄは、薬物でり；Ｙは、Ｄがアミンを介して接続された薬物である場合、存在せず、あるいは、Ｙは、Ｄが、フェノール、アルコール、チオール、チオフェノール、イミダゾール、または非塩基性アミンを介して接続された薬物である場合、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２－であり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、任意に置換されていてもよいアリール、または任意に置換されていてもよいヘテロアリールである。］
で示される化合物、が提供される。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）のリンカーを、小分子、ペプチド、またはタンパク質治療薬などの、薬物と組み合わせることによって調製される、リンカー－薬物である。
式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態において、Ｙは、存在しない。いくつかの実施形態において、Ｙは、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２－である。
式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態において、適切な薬物としては、これに限定されるものではないが、小分子、ペプチド、タンパク質、および核酸が挙げられる。適切な薬物としては、これに限定されるものではないが、例えば、抗糖尿病薬、成長促進剤、アミノグリコシド、ペニシリン、セファロスポリン、マクロライドおよびペプチドが含まれる、抗菌剤、トリメトプリム、ピロミジン酸、およびスルファメタジン；鎮痛薬および抗炎症薬、抗アレルギー薬および抗喘息薬、抗高コレステロール血症薬、ベータアドレナリン遮断薬および降圧薬、抗腫瘍薬、および抗ウイルス薬、が挙げられる。
そのような薬物のさらなる例としては、アルコール、例えば、パクリタキセルおよび類似体、エポチロンおよび類似体、カンプトテシンおよび類似体、例えば、イリノテカン、および、ヌクレオシド、例えば、５－フルオロウラシルおよびカペシタビン、が挙げられる。別の実施形態において、薬物は、セリン残基を含むペプチドである。別の実施形態において、薬物は、アリールオール（arylol）基を含む小分子であり；そのような薬物としては、例えば、ＳＮ－３８、エチレフリン、プレナルテロール、およびエストラジオールが挙げられる。別の実施形態において、薬物は、チロシン残基を含むペプチドである。カップリングがＳを介する場合、薬物は、チオール基を含む小分子であり得る。そのような薬物としては、例えば、ペニシラミン、カプトプリル、およびエナラプリルが挙げられる。薬物は、チオアリールまたはチオヘテロアリール基を含む小分子であってよく；そのような薬物としては、例えば、６－メルカプトプリンが挙げられる。カップリングが非塩基性Ｎを介する場合、薬物は、一級または二級のアミド（例えば、ピログルタミン酸残基、または他のアミドなど）またはスルホンアミド、またはインドール（例えば、トリプトファン）またはプリンなどのヘテロアリール基、を含む、小分子またはペプチドであり得る。例えば、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、ボンベシン、黄体形成ホルモン放出ホルモン、卵胞刺激ホルモン放出ホルモン、オクトレオチド、５－フルオロウラシル、アロプリノールが挙げられる。
核酸ベースの薬物の例には、動物の、特に哺乳動物からの遺伝子の、センス鎖およびアンチセンス鎖が含まれる。そのような遺伝子は、アンチセンスＤＮＡまたはＲＮＡの対象であるもの、または、さまざまな疾患の治療を目的として提供されている小さな干渉ＲＮＡ、例えば、プロテインキナーゼＣ－アルファ、ＢＣＬ－２、ＩＣＡＭ－１、腫瘍壊死因子アルファなど、であり得る。Ｔｏｌｌ様受容体のＣｐＧオリゴヌクレオチドアゴニストも含まれる。核酸は、リンカーに直接結合するか、または、核酸上の修飾基、例えば、５’－アミンまたは３’－アミンの修飾を含むかまたはアミン含有塩基を含むオリゴヌクレオチド、を介して結合することができる。
式（ＩＩ）の化合物のいくつかの実施形態において、Ｄはペプチドである。適切なペプチドとしては、これに限定されるものではないが、例えば、オクトレオチド（配列番号５）、［Ｎ２８Ｑ］エキセナチド（配列番号１）を含めたエキセナチドおよび変異体、インスリンリスプロ（Ａ鎖：配列番号２；Ｂ鎖：配列番号３；ジスルフィド架橋：Ａ６－Ａ１１、Ａ７－Ｂ７、Ａ２０－Ｂ１９）、またはテデュグルチド（［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２）（配列番号４）、およびそれらの配列変異体、が挙げられる。例えば、本明細書に開示される配列のいずれかについて、アミド化形態および非アミド化形態の両方が企図される。別の例として、任意のアミノ酸について、Ｌ型およびＤ型の両方が企図される。いくつかの実施形態において、オクトレオチドは、Ｄ－Ｐｈｅ－Ｃｙｓ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｔｒｐ－Ｌｙｓ－Ｔｈｒ－Ｃｙｓ－Ｔｈｒ－ｏｌ（Ｃｙｓ２－Ｃｙｓ７環状ジスルフィド）、である。
配列番号１：HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKQGGPSSGAPPPS-NH2 （［Ｎ２８Ｑ］エキセナチド）
配列番号２：GIVEQCCTSICSLYQLENYCN （インスリンリスプロのＡ鎖）
配列番号３：FVNQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTKPT （インスリンリスプロのＢ鎖）
配列番号４：HGDGSFSDEMNTILDNLAARDFINWLIQTKITD （テデュグルチド（［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２））
配列番号５：FCFWKTCT （オクトレオチド；Ｃｙｓ２－Ｃｙｓ７環状ジスルフィド）
コンジュゲート
別の態様において、式（ＩＩＩ）
Figure 2022526985000008
 （ＩＩＩ）
［式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、Ｄ、およびＹは、式（Ｉ）または式（ＩＩ）について本明細書に開示されている通りであり；Ｍは、高分子担体であり；ｑは、Ｍが可溶性高分子の場合、１～１０の整数であり、あるいは、ｑは、Ｍが不溶性マトリックスの場合、多数であり；Ｚ＊は、Ｍへの結合部を示す。］
で示されるコンジュゲート、が提供される。
いくつかの実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、式（Ｉ）のリンカーを介して高分子担体Ｍに放出可能に結合した薬物Ｄの、コンジュゲートである。Ｍが不溶性マトリックスである場合、多数のリンカー－薬物が、Ｍに結合し得ることが理解される。例えば、いくつかの実施形態において、Ｍが式（ＩＶ）のヒドロゲルであり、Ｐ１およびＰ２の両方が４－アームのポリマーである場合、１、２、３、または４つのリンカー－薬物が、各Ｐ１－Ｐ２ユニットに結合し得る。したがって、リンカー－薬物を適切な比率でＭと反応させることにより、所望する多数を得ることができる。このようにして、マトリックスの体積中に適切な薬物濃度を得ることができる。
式（ＩＩＩ）のコンジュゲートのいくつかの実施形態において、分子担体Ｍは、可溶性高分子であり、ｑは、１～１０の整数である。いくつかの実施形態において、Ｍは不溶性マトリックスであり、ｑは多数である。いくつかの実施形態において、Ｍが不溶性マトリックスである場合、ｑは、マトリックスの体積中に適切な薬物濃度を得ることができるような、多数である。可溶性高分子としては、これに限定されるものではないが、例えば、ポリエチレングリコールまたは他の合成ポリマー、デキストラン、抗体、抗体フラグメント、アルブミンまたは他のタンパク質が挙げられ、これらは当技術分野で理解されるような腎臓濾過の効率を抑制するのに十分な分子サイズのものである。ポリエチレングリコールの場合、Ｍは、平均分子量が、１，０００～１００，０００ダルトン、好ましくは１，０００～４０，０００ダルトンの、単鎖、多鎖、またはマルチアームのものであり得る。不溶性マトリックスとしては、これに限定されるものではないが、例えば、ヒドロゲル、インプラント、または外科装置が挙げられ、これらはバルクであるかまたは微粒子またはナノ粒子である。いくつかの実施形態において、Ｍは可溶性高分子である。いくつかの実施形態において、Ｍは不溶性マトリックスである。いくつかの実施形態において、Ｍは、本明細書に開示される式（ＩＶ）のヒドロゲルである。
式（ＩＩＩ）のコンジュゲートのいくつかの実施形態において、分子担体Ｍは、コンジュゲーションを可能にする、Ｚと関連する少なくとも１つの官能基Ｚ’を含む。例えば、Ｚがアミンである場合、Ｚ’は、カルボン酸、活性エステル、または活性カーボネートであり、Ｚ＊がアミドまたはカルバメートである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、Ｚがアジドである場合、Ｚ’は、アルキニル、ビシクロノニニル、またはシクロオクチニルであり、Ｚ＊が１，２，３－トリアゾールである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、ＺがＮＨ２Ｏである場合、Ｚ’はケトンまたはアルデヒドであり、Ｚ＊がオキシムである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、ＺがＳＨである場合、Ｚ’はマレイミドまたはハロカルボニルであり、Ｚ＊がチオスクシンイミジルまたはチオエーテルである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。同様に、ＺとＺ’のこれらの役割を逆にして、方向性が反対となったＺ＊を生成することができる。いくつかの実施形態において、Ｚ＊は、アミド、オキシム、１，２，３－トリアゾール、チオエーテル、チオスクシンイミド、またはエーテルを含む。
ヒドロゲル
別の態様において、式（ＩＶ）
Figure 2022526985000009
 （ＩＶ）
［式中、ｎ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＺ＊は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）について本明細書に開示されている通りであり；
Ｗは、存在しないか、あるいは、
Figure 2022526985000010
 であり、
ここで、ｘ、ｙ、およびｚのそれぞれは、独立して、０～６の整数であり、Ｂは、－ＮＨ２、－ＯＮＨ２、ケトン、アルデヒド、－ＳＨ、－ＯＨ、－ＣＯ２Ｈ、カルボキサミド基、または、シクロオクチンまたはビシクロノニンを含む基、であり、および、Ｃ＊は、カルボキサミド、チオエーテル、チオスクシンイミジル、トリアゾール、またはオキシムであり；および、
Ｐ１およびＰ２は、独立して、分子量１～４０ｋＤａのｒ－アームポリマーであり、ここで、ｒは、２～８の整数である。］
で示されるヒドロゲル、が提供される。
（ＣＨ２）ｘは、ＮＨに結合し、Ｃ＊は、Ｐ２に結合することが理解される。いくつかの実施形態において、式（ＩＶ）のヒドロゲルは、分解性である。
式（ＩＶ）のヒドロゲルのいくつかの実施形態において、Ｐ１およびＰ２は、合成ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール、デキストラン、ヒアルロン酸などである。このようなヒドロゲルの構造の例が、図６に示される。これらのヒドロゲルでは、式（Ｉ）のリンカーを使用してポリマー鎖を架橋し、不溶性の３次元マトリックスを形成している。架橋は、基Ｒ１および基Ｒ２によって支配される速度で非加水分解性ベータ脱離によって、ゆっくりと切断し、最終的に可溶性のポリマーフラグメントを生成する。これらのヒドロゲルは、いくつかの方法で、リンカー－薬物の結合を可能にする。Ｗが存在する場合、官能基Ｂが、各架橋に導入される。図６に示すように、ヒドロゲルは、多数のＢが存在するように形成され得る。そして、基Ｂは、Ｂが上記の関連の基Ｚ’と同等である場合、リンカー－薬物の結合に直接用いることができ、あるいは、基Ｂは、誘導化して、事前に形成されたヒドロゲルにリンカー－薬物を結合するための関連の基Ｚ’を導入することができる。これは、ヒドロゲルをエクスビボで調製する必要がある場合、例えば、マイクロスフェアまたは固定寸法のシートなどの所望の形態に製造するとき、有利である。あるいは、基Ｂは、ヒドロゲルを製造する際に式（ＩＩ）のリンカー－薬物を含むことができ、これは、ゲル形成の前に、成分の液体混合物を注入することによってその場でゲル化させる場合に、有利である。
医薬組成物
別の態様において、薬学的に許容される緩衝液および／または賦形剤と一緒に、高分子担体－薬物コンジュゲートまたはその薬学的に許容される塩を含む、医薬組成物、が本明細書で提供される。緩衝液は、リンカーの安定性が保存中および必要に応じた再調製時に維持されるように、選択され、典型的には、ｐＨが、２～７、好ましくは２～６、より好ましくは２～５である。許容される緩衝液としては、酢酸、クエン酸、リン酸、ヒスチジン、グルコン酸、アスパラギン酸、グルタミン酸、乳酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、α－ケトグルタル酸などが挙げられる。賦形剤としては、塩化ナトリウムなどの、張性剤および浸透圧剤；クエン酸またはクエン酸塩、およびパラベンなどの、保存剤；フェノールおよびクレゾールなどの、抗菌剤；ブチル化ヒドロキシトルエン、ビタミンＡ、Ｃ、またはＥ、システイン、メチオニンなどの、抗酸化剤；スクロース、ポリオール、ヒアルロン酸、およびカルボキシメチルセルロースなどの、密度調整剤、を挙げることができる。これらの製剤は、例えば、「Remington’s Pharmaceutical Science」 A.R. Gennaro, ed., 17th edition, 1985, Mack Publishing Company, Easton, PA, USAに記載されているように、当業者に知られている従来の方法によって、製造することができる。医薬組成物は、液体溶液または懸濁液で供給されてもよく、あるいは、例えば、液体組成物の凍結乾燥によって、固体として提供されてもよい。このような凍結乾燥物は、使用前に迅速かつ効率的な再調製を行うための増量剤をさらに含み得る。
使用方法
別の態様において、本明細書に記載の高分子担体－薬物コンジュゲートおよびそれを含む医薬組成物を用いて、個体の疾患または病気を治療または予防することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の高分子担体－薬物コンジュゲート、または本明細書に記載の高分子担体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を、それを必要とする個体に投与することを含む、疾患または病気を治療する方法、が提供される。「個体」は、ヒトであってよく、あるいは、ネコ、イヌ、ウシ、ラット、マウス、ウマ、ウサギ、または他の飼育動物などの、動物であってもよい。
また、疾患または病気の治療に使用するための、本明細書に記載の高分子担体－薬物コンジュゲートを含む組成物、が提供される。また、疾患または病気の治療のための医薬の製造における、本明細書に記載の高分子担体－薬物コンジュゲートの使用、が本明細書で提供される。
治療を必要とする適用可能な疾患または病気は、コンジュゲート薬物の性質から、当業者によって認識されるものである。例えば、エキセナチドおよびインスリンは、糖尿病の治療に使用することができ、オクトレオチドは、先端巨大症、および様々な癌の治療に使用することができ、テデュグルチドは、短腸症候群の治療に使用することができ、ＳＮ－３８およびＴＬＲ９アゴニストは、癌の治療に使用することができる。ヒトおよび動物への適切な投与経路は、本発明によって想定され、例えば、静脈内、髄腔内、眼内、皮下、関節内、腹腔内、または他の局所注入を介して、または、経口投与、が挙げられる。
リンカーの製造
式（Ｉ）のリンカーは、後記の実施例で示すような、いくつかの経路によって製造され得る。一方法では、ジェミナル－ジアルキルカルボニル化合物（Ａ）を、塩基の作用により、Ｒ１Ｒ２ＣＨ２と縮合させる。
Figure 2022526985000011
適切な塩基は、Ｒ１Ｒ２ＣＨ２を脱プロトン化することができるもの、例えば、カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドまたはｔｅｒｔ－ペントキシド、ブチルリチウム、リチウムジイソプロピルアミド、ＮａＨ、および、シラジド（silazide）塩基、例えば、ＬｉＨＭＤＳ、ＮａＨＭＤＳ、またはＫＨＭＤＳ、である。Ｒ１０は、Ｈ、Ｃ１－Ｃ６アルコキシ、または、Ｎ（Ｍｅ）ＯＭｅ、であり得る。Ｒ１０がＨの場合、アルコール（Ｃ）が直接生成される。Ｒ１０がＨ以外の場合、ケトン（Ｂ）が生成され、その後、アルコール（Ｃ）に還元される。適切な還元剤としては、ＬｉＢＨ４およびＮａＢＨ４などの水素化ホウ素（borohydride）が挙げられるが、基Ｚの性質に応じて当技術分野でよく知られている他の還元剤を使用してもよい。次いで、アルコール（Ｃ）を活性化して、式（Ｉ）のリンカーを生成する。典型的な活性化条件としては、ホスゲン、またはジホスゲンやトリホスゲンなどのホスゲン同等物の作用による、クロロホルメート（Ｘ＝Ｃｌ）への変換；Ｎ，Ｎ’－ジスクシンイミジルカーボネートおよび４－（ジメチルアミノ）ピリジンを使用するか、あるいは、クロロギ酸をＮ－ヒドロキシスクシンイミドとピリジンで処理することによる、スクシンイミジルカーボネート（Ｘ＝ＯＳｕ）への変換；および、例えば、ピリジンなどの弱塩基の存在下でのクロロギ酸ニトロフェニルとの反応による、活性カーボネートへの変換、が挙げられる
Ｘが、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌである式（Ｉ）のリンカーは、米国特許第８，７５４，１９０号に開示されているように、製造することができる。
Ｚは、コンジュゲーションについて当技術分野で知られている官能基であり得、例えば、アミン、アミノオキシ、ケトン、アルデヒド、マレイミジル、チオール、アルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、シクロオクチニル、および、それらの保護された変形基、が挙げられる。いくつかの実施形態において、Ｚは、保護されたアミン、保護されたアミノオキシ、ケトンまたは保護されたケトン、アルデヒドまたは保護されたアルデヒド、マレイミジル、保護されたチオール、保護されたアルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、またはシクロオクチニル、である。いくつかの実施形態において、Ｚは、アジド、ケトン、または保護されたケトンである。
リンカー－薬物の製造
式（Ｉ）のリンカーを薬物Ｄと反応させて、式（ＩＩ）
Figure 2022526985000012
 （ＩＩ）
で示される、リンカー－薬物を生成することができる。
本発明での使用に適した薬物としては、小分子、ペプチド、タンパク質、および核酸が挙げられる。塩基性アミン基を含む薬物の場合、Ｘがハロゲン化物または活性エステルである式（Ｉ）のリンカーを、有機溶媒中または緩衝水溶液中、塩基の存在下で薬物と反応させて、式（ＩＩ）のリンカー－薬物を生成する。このような塩基性アミンは、小分子薬物の一部であってもよいし、あるいは、ペプチドおよびタンパク質のＮ末端アミンまたはリジンｅ－アミンであってもよい。例えばペプチドやタンパク質など、複数の塩基性アミンを含む薬物の場合、複数のリンカーが結合していてもよい。合成ペプチドの場合、リンカーは、合成物中の特定の位置に結合させることができ、例えば、最終カップリング工程でリンカーを使用することによってＮ末端に結合させることができ、または、選択的に除去することができる内部アミノ酸残基に一時的なブロッキング基を使用して；次に、リンカーでアシル化させ、その後、リンカー－ペプチドの全体的な脱保護および精製を行うことができる。リンカーの薬物への結合を促進するのに適した塩基としては、トリエチルアミンまたはＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンなどの、第三級アミン、および、Ｎ，Ｎ－ジメチルグアニジンなどの、グアニジン、および、７－メチル－１，５，７－トリアザビシクロ［４．４．０］デカ－５－エン、および、その他当技術分野で知られているもの、が挙げられる。水溶液中で実施する場合、反応は、通常、ｐＨ値７～１０で実施する。
Ｘ＝Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌである式（Ｉ）のリンカーは、米国特許８，７５４，１９０号に開示された方法と同様に、アルコール、フェノール、チオール、チオフェノール、イミダゾール、および非塩基性窒素原子を介して、薬物に結合するために、使用することができる。
リンカー－薬物を製造した後、当技術分野でよく知られた手法を用いて、コンジュゲーションの前に、Ｚまたは薬物の保護基を除去することができる。
コンジュゲートの製造
式（ＩＩ）のリンカー－薬物を用いて、脱保護された官能基Ｚを、高分子担体Ｍに結合した関連（cognate）の反応性基と反応させることにより、式（ＩＩＩ）
Figure 2022526985000013
 （ＩＩＩ）
で示される、コンジュゲートを製造することができる。
Ｚは、コンジュゲーションについて当技術分野で知られている官能基であり得、例えば、アミン、アミノオキシ、ケトン、アルデヒド、マレイミジル、チオール、アルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、シクロオクチニル、が挙げられる。結合官能基の選択は、薬物Ｄにおける他の官能基の存在に依存するものであるが、それは当業者に明らかであろう。Ｍは、水溶性ポリマーであり得、例えば、ポリエチレングリコールまたは他の合成ポリマー、デキストラン、抗体、抗体フラグメント、アルブミンまたは他のタンパク質であり、これらは当技術分野で理解されているような腎臓濾過の効率を抑制するのに十分な分子サイズのものである。ポリエチレングリコールの場合、Ｍは、平均分子量が、１，０００～１００，０００ダルトン、好ましくは１，０００～４０，０００ダルトンの、単鎖、多鎖、またはマルチアームものであり得る。ポリエチレングリコールは、コンジュゲートを可能にする、Ｚと関連する少なくとも１つの官能基Ｚ’を含む。例えば、Ｚがアミンである場合、Ｚ’は、カルボン酸、活性エステル、または活性カーボネートであり、Ｚ＊がアミドまたはカルバメートである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、Ｚがアジドである場合、Ｚ’はアルキニル、ビシクロノニニル、またはシクロオクチニルであり、Ｚ＊が１，２，３－トリアゾールである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、ＺがＮＨ２Ｏである場合、Ｚ’はケトンまたはアルデヒドであり、Ｚ＊がオキシムである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。別の例として、ＺがＳＨである場合、Ｚ’はマレイミドまたはハロカルボニルであり、Ｚ＊がチオスクシンイミジルまたはチオエーテルである式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを生成する。同様に、ＺとＺ’のこれらの役割を逆にして、方向性が反対となったＺ＊を生成することができる。これらのコンジュゲーション反応は、当技術分野で知られている条件下で実施することができ、例えば、Ｚ＝アジドおよびＺ’＝シクロオクチンの場合、コンジュゲーションは、両方の成分が適切な溶解度を示す任意の溶媒中で起こるが、水溶液がより好ましい反応速度を示すことが知られている。
同様に、Ｍは、水不溶性マトリックスであり得、例えば、ヒドロゲル、インプラント、または外科装置であり、これらはバルクであるかまたは微粒子またはナノ粒子である。この場合、Ｍは、上記のように多数の基Ｚを含み、多数のリンカー－薬物の結合を可能にする。マトリックスは不溶性であるが、薬物リンカーを含む溶液との反応は、コンジュゲーションが起こるのに十分である。例えば、不溶性マトリックスが、バルク形態、またはマイクロスフェアまたは他の粒子形態として製造された、ヒドロゲルである場合、リンカー－薬物の溶液は、リンカー－薬物が多孔質ヒドロゲルマトリックスに浸透することができるのに十分な時間、ヒドロゲルの懸濁液と混合され、コンジュゲーション反応が発生する。
ヒドロゲルの製造
いくつかの実施形態において、Ｍは、式（ＩＶ）
Figure 2022526985000014
 （ＩＶ）
［式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｚ＊、ｎ、ｒ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ４、およびＷは、本明細書に開示された通りである。］
で示される、生分解性のヒドロゲルである。
式（ＩＶ）の架橋を含むそのようなヒドロゲルの構造の例が、図６に示される。これらのヒドロゲルでは、式（Ｉ）のリンカーを使用してポリマー鎖を架橋し、不溶性の３次元マトリックスを形成する。架橋は、基Ｒ１および基Ｒ２によって支配される速度で非加水分解性ベータ脱離によってゆっくりと切断し、最終的に可溶性のポリマーフラグメントを生成する。これらのヒドロゲルは、いくつかの方法で、リンカー－薬物の結合を可能にする。Ｗが存在する場合、官能基Ｂが、各架橋に導入される。図６に示すように、最初に、ヒドロゲルを形成して、多数のＢが存在するヒドロゲルポリマーを提供し、式（ＩＩ）のリンカー－薬物をさらに含まない分解性ポリマーを提供することができる。次に、基Ｂは、Ｂが上記の関連の基Ｚ’と同等である場合、リンカー－薬物の結合に直接用いることができ、あるいは、基Ｂは、誘導化して、事前に形成されたヒドロゲルにリンカー－薬物を結合するための関連の基Ｚ’を導入することができる。これは、ヒドロゲルをエクスビボで調製する必要がある場合、例えば、マイクロスフェアまたは固定寸法のシートなどの所望の形態に製造するとき、有利である。あるいは、基Ｂは、ヒドロゲルを製造する際に式（ＩＩ）のリンカー－薬物を含むことができ、これは、ゲル形成の前に、成分の液体混合物を注入することによってその場でゲル化させる場合に、有利である。
これらのヒドロゲルは、２つのマルチアームプレポリマーを混合することによって形成することができ、ここで、その１つは、反応性末端基Ｚを有する式（Ｉ）のリンカーの残基を含む基が末端となるアームを有するものであり、他の１つは、関連の反応性末端基Ｚ’を含む基が末端となるアームを有するものである。一実施形態において、１つのプレポリマーは、式（Ｖ）
Figure 2022526985000015
 （Ｖ）
［式中、基は、上記で定義された通りである。］
であり、他の１つのプレポリマーは、式Ｐ１－（Ｚ’）ｒで示されるものである。
適切な溶媒中で混合されると、典型的には、ＺおよびＺ’がアジド／シクロオクチンの場合には、ｐＨが２～７で、または、ＺおよびＺ’が活性エステルおよびアミンの場合には、ｐＨが６～９で、水溶性緩衝液で混合されると、ＺおよびＺ’基は、反応して、式（ＩＶ）の架橋を含む不溶性ヒドロゲルマトリックスを形成する。このプロセスは、バルク相で、または有機／水の混合系での乳化の条件下で、実施することができ、注入に適したマイクロスフェアなどの微粒子懸濁液を形成することができる。
特定の代表的な実施形態を以下に提供する：
実施形態１
式（Ｉ）
Figure 2022526985000016
 （Ｉ）
［式中、
ｎ＝１～６、
Ｒ１およびＲ２の両方は、独立して、電子求引基であるか、または、Ｒ１およびＲ２のうちの１つが電子求引基であり、他の１つがアルキルまたはＨであり；
各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、一緒になって３～６員環を形成してもよく；
Ｚは、リンカーをコンジュゲーションの担体に結合させるための基であり；および、
Ｘは、脱離基である。］
で示される、リンカー。
実施形態２
Ｘが、ハロゲン、Ｎ－スクシンイミジルオキシ、ニトロフェノキシ、ペンタハロフェノキシ、イミダゾリル、トリアゾリル、またはテトラゾリルである、実施形態１に記載のリンカー。
実施形態３
Ｚが、保護されたアミン、保護されたアミノオキシ、ケトンまたは保護されたケトン、アルデヒドまたは保護されたアルデヒド、マレイミジル、保護されたチオール、保護されたアルコール、アジド、１，２，４，５－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、またはシクロオクチニルである、実施形態１に記載のリンカー。
実施形態４
式（ＩＩ）
Figure 2022526985000017
 （ＩＩ）
［式中、Ｙは、Ｄがアミンを介して接続された薬物である場合、存在せず、あるいは、Ｙは、Ｄが、フェノール、アルコール、チオール、チオフェノール、イミダゾール、または非塩基性アミンを介して接続された薬物である場合、Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２であり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、または、任意に置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、である。］
で示される、リンカー－薬物。
実施形態５
式（ＩＩＩ）
Figure 2022526985000018
 （ＩＩＩ）
［式中、Ｍは、高分子担体であり、Ｚ＊は、カルボン酸アミド、オキシム、１，２，３－トリアゾール、チオエーテル、チオスクシンイミド、またはエーテルを含み、ｑ＝１～多数、である。］
で示される、コンジュゲート。
実施形態６
式（ＩＶ）
Figure 2022526985000019
 （ＩＶ）
［式中、Ｐ１およびＰ２は、独立して、ｒ－アームポリマーであり、ここで、ｒ＝２～８であり、および、Ｗは、存在しないか、あるいは、
Figure 2022526985000020
 であり、
ここで、ｘ、ｙ、およびｚは、それぞれ独立して、０～６であり、Ｂは、ＮＨ２、ＯＮＨ２、ケトン、アルデヒド、ＳＨ、ＯＨ、ＣＯ２Ｈ、またはカルボキサミド基であり、および、Ｃ＊は、カルボキサミド、チオエーテル、チオスクシンイミジル、トリアゾール、またはオキシムである。］
で示される、ヒドロゲル。
以下の実施例は、本開示を説明するために提供されるが、これらに限定されるものではない。
実施例１
Ｚ＝アジドである、式（Ｉ）のリンカーの製造
Figure 2022526985000021
（１）４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式（Ｉ）において、ｎ＝１、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）
１Ｍのカリウムｔｅｒｔ－ブトキシドのＴＨＦ溶液（３．５ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を、－３０℃で、メチル ３－アジド－２，２－ジメチルプロピオネート（Kim, Synthetic Communicationsに従って調製；３００ｍｇ、１．９ｍｍｏｌ）、およびアセトニトリル（０．３６５ｍＬ、７．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ７ｍＬの溶液に加えた。混合物を－３０℃で３０分間撹拌し、次いで、１時間で周囲温度まで昇温し、さらに３０分間撹拌した。混合物を氷で冷却し、６ＮのＨＣｌ（０．６２ｍＬ、３．７ｍｍｏｌ）を加えてクエンチし、次に、ＥｔＯＡｃと水で分液した。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機物を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、濃縮して、粗製のケトンを得た。
水素化ホウ素ナトリウム（３３ｍｇ、０．８８ｍｍｏｌ）を、粗製のケトン（３００ｍｇ、約１．７５ｍｍｏｌ）のメタノール７ｍＬの溶液に加えた。次いで、混合物を１５分間撹拌し、６ＮのＨＣｌ（０．７ｍＬ）を加えることによりクエンチし、ＥｔＯＡｃと水で分液した。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機物を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、濃縮して、粗製のアルコールを得た。ＳｉＯ２（２０～４０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製することにより、４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブタノール（１４２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) d 3.83-3.92 (m,1H), 3.43 (d, J=12.1 Hz,1H), 3.21 (d, J=12.1 Hz, 1H), 2.41-2.62 (m,3H), 0.97 (s,3H), 0.96 (s,3H).
ピリジン（１３６μＬ、１．７ｍｍｏｌ）を、氷冷した、４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブタノール（１４２ｍｇ、０．８５ｍｍｏｌ）、およびトリホスゲン（４２５ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ８ｍＬの溶液に、滴下して加えた。得られた懸濁液を周囲温度まで昇温し、１５分間撹拌し、次いで、濾過し、濃縮して、粗製のクロロホルメートを得た。これを８ｍＬのＴＨＦに溶解し、氷冷し、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（２９１ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）、およびピリジン（２０４μＬ、２．５３ｍｍｏｌ）で処理した。得られた懸濁液を周囲温度まで昇温し、１５分間撹拌し、次いで、ＥｔＯＡｃと５％ＫＨＳＯ４で分液した。水相をＥｔＯＡｃで２回抽出し、合わせた有機物を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、そして、濃縮して、粗製のスクシンイミジルカーボネートを得た。ＳｉＯ２（２０～４０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製することにより、４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート（１７４ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）を得た。
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) d 5.03 (dd,J=7.0,5.1,1H), 3.27-3.41 (m,6H), 3.43 (d, J=12.1 Hz,1H), 3.21 (d, J=12.1 Hz, 1H), 2.41-2.62 (m,3H), 0.97 (s,3H), 0.96 (s,3H).
（２）４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式（Ｉ）において、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
１．４３Ｍのｎ－ブチルリチウムのヘキサン溶液（７０ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）を、不活性雰囲気下、－５０℃に保った、Ｎ，Ｎ－ジメチルメタンスルホンアミド（１２．３３ｇ、１００ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ２００ｍＬの撹拌溶液に加えた。混合物を１時間で－２０℃に昇温し、次いで、－５０℃に再冷却した後、メチル ３－アジド－２，２－ジメチルプロピオネート（Kim, Synthetic Communicationsに従って調製；７．７０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間で＋１０℃に昇温し、次いで、２０ｍＬの６ＮのＨＣｌでクエンチした。混合物を、メチルｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、２００ｍＬ）で希釈し、水１００ｍＬで２回、および食塩水１００ｍＬで１回、洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗製のケトン生成物１４．０５ｇを得た。０、２０、３０、４０、および５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの段階グラジエントを用いたＳｉＯ２（２２０ｇ）のクロマトグラフィーにより精製して、結晶固体として、４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブタノン（１０．６５ｇ、８６％）を得た。
上記のケトンをメタノール２００ｍＬに溶解し、氷冷し、水素化ホウ素ナトリウム（０．９６ｇ、２５ｍｍｏｌ）で１５分間処理した後、４ｍＬの６ＮのＨＣｌでクエンチし、濃縮した。得られたスラリーをメチルｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ、２００ｍＬ）で希釈し、水１００ｍＬで１回、食塩水１００ｍＬで１回、洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、１０．０ｇの結晶の４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブタノールを得た。
ピリジン（１０．６ｍＬ、１３２ｍｍｏｌ）を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（６．９０ｇ、６０ｍｍｏｌ）、およびトリホスゲン（５．９３ｇ、２０ｍｍｏｌ）の、氷冷したジクロロメタン２５０ｍＬの撹拌混合物に、１０分で加えた。混合物を氷冷で１５分間撹拌し、次いで、３０分で周囲温度まで昇温した。４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブタノール（１０．０ｇ、４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン２０ｍＬの溶液を加え、混合物を周囲温度で１時間さらに撹拌した。氷冷した後、混合物を、水１００ｍＬで処理し、相を分離した。有機相を、水で２回、５％ＫＨＳＯ４で１回、および食塩水で１回、洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。粗生成物を、１００ｍＬの３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから結晶化して、白色の結晶固体として、４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート（１１．１ｇ、７１％）を得た。
（３）これらの手法に従って製造した、さらなる式（Ｉ）の化合物は、以下のものが挙げられる。
４－アジド－１－（メチルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（（４－メチルピペリジニル）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２ＣＨＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。ＬＣ／ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝４４６．１５を示す。
４－アジド－１－（フェニルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｐｈ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（４－クロロフェニルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＰｈＣｌ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（４－モルホリノスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（イソプロピルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（（Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ビス（２－メトキシエチル）アミノスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
４－アジド－１－（４－メチルフェニルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチル スクシンイミジル カーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＰｈＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
実施例２
式（Ｉ）のリンカーの製造
Figure 2022526985000022
 式（Ｉ）の化合物を製造するための別の一般的な方法は、ｎ＝２または３、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、２つのＲ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝Ｎ－スクシンイミジルオキシ、である場合について示される。
（１）５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンチルスクシンイミジルカーボネート （式Ｉにおいて、ｎ＝２、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）
（ａ）エチル ４－クロロ－２，２－ジメチルブタノエート
撹拌子、ラバーセプタム、窒素注入口、および熱電対プローブを取り付けた、ヒートガン乾燥した５００ｍＬの丸底フラスコに、ｉＰｒ２ＮＨ（５．３０ｍＬ、３７．４ｍｍｏｌ、１．１当量、最終濃度０．２７Ｍ）、およびＴＨＦ（１００ｍＬ）を入れた。反応混合物を０℃で冷却しながら、ｎＢｕＬｉの溶液（ヘキサン中１．２８Ｍ、２７．８ｍＬ、３５．７ｍｍｏｌ、１．０５当量、最終濃度０．２６Ｍ）を、内部温度が＋１０℃を超えない速度で（～１０分）、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、－７８℃に冷却し、イソ酪酸エチル（４．６ｍＬ、４．０ｇ、３４ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度０．２４Ｍ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、内部温度が－６５℃を超えない速度で（～５分）、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、－７８℃で４５分間撹拌し、次いで、１－ブロモ－２－クロロエタン（２．８ｍＬ、３４ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度０．２４Ｍ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、内部温度が－６８℃を超えない速度で、加えた。反応混合物を、－７８℃で１５分間撹拌し、０℃に昇温し、０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４（１００ｍＬ）で希釈した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、トルエン（１０ｍＬ×２）から濃縮して、４．８５ｇ（２７ｍｍｏｌ、７９％）の所望の塩化物を、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.14 (q, J=7.2 Hz, 2 H), 3.43 - 3.57 (m, 2 H), 1.94 - 2.19 (m, 2 H), 1.27 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 1.22 (s, 6 H)
（ｂ）エチル ４－アジド－２，２－ジメチルブタノエート
Figure 2022526985000023
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、１００ｍＬの丸底フラスコに、エチル ４－クロロ－２，２－ジメチルブタノエート（２－１）（４．８５ｇ、２７ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度０．５４Ｍ）、ＤＭＳＯ（５０ｍＬ）、および、アジ化ナトリウム（２．２８ｇ、３５ｍｍｏｌ、１．３当量、０．７０Ｍ）を入れた。反応混合物を、保護壁（blast shield）の後方で、７０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を、周囲温度に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、Ｈ２Ｏ（３×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：０％、５％、１０％、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、４．３３ｇ（２３．３ｍｍｏｌ、８７％）の所望のアジドを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.15 (q, J=7.1 Hz, 2 H), 3.22 - 3.35 (m, 2 H), 1.81 - 1.96 (m, 2 H), 1.27 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.15 - 1.24 (m, 6 H)
（ｃ）５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンタノン
Figure 2022526985000024
 撹拌子、ラバーセプタム、窒素注入口、および熱電対プローブを取り付けた、ヒートガン乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコに、ＴＨＦ（２０ｍＬ）およびｉＰｒ２ＮＨ（１．５９ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ、２．１当量、最終濃度０．３６Ｍ）を入れた。溶液を０℃で冷却しながら、ｎＢｕＬｉの溶液（ヘキサン中１．２８Ｍ、８．６４ｍＬ、１０．８ｍｍｏｌ、２．０当量、最終濃度０．３４Ｍ）を、内部温度が＋１０℃を超えない速度で（～５分）、滴下して加え、０℃で１０分間撹拌し、－７８℃で冷却した。アセトニトリル（０．５９ｍＬ、１１．３ｍｍｏｌ、２．１当量、最終濃度０．３６Ｍ）を、内部温度が－６５℃を超えない速度で、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、－７８℃で１５分間撹拌し、次いで、エチル ４－アジド－２，２－ジメチルブタノエート（１．０ｇ、５．４ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度０．１７Ｍ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、内部温度が－６５℃を超えないようにして（～３分）、シリンジを介して加えた。反応混合物を、－７８℃で１０分間撹拌し、０℃に昇温し、０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４（５０ｍＬ）で希釈した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：２０％、３０％、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、５３７ｍｇ（２．９８ｍｍｏｌ、５５％）の所望のケトンを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 3.66 (s, 2 H), 3.37 (t, J=6.7 Hz, 2 H), 1.86 (t, J=6.8 Hz, 2 H), 1.16 - 1.27 (m, 6 H)
（ｄ）５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンタノール
Figure 2022526985000025
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、２５ｍＬの丸底フラスコに、５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンタノン（５３７ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度０．２５Ｍ）、およびＭｅＯＨ（１２ｍＬ）を入れ、０℃に冷却した。ＮａＢＨ４（５６ｍｇ、１．４９ｍｍｏｌ、０．５当量、最終濃度０．１３Ｍ）を、固体として一度に加えた。反応混合物を、０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４水溶液（５０ｍＬ）で希釈した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：２０％、３０％、４０％、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、４８２ｍｇ（２．６４ｍｍｏｌ、８９％）の所望のアルコールを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 3.76 (ddd, J=9.1, 5.4, 3.4 Hz, 1 H), 3.34 - 3.50 (m, 2 H), 2.38 - 2.64 (m, 3 H), 1.68 - 1.82 (m, 1 H), 1.50 (ddd, J=14.1, 7.4, 6.6 Hz, 1 H), 0.96 (s, 3 H), 0.94 (s, 3 H)
（ｅ）５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンチルスクシンイミジルカーボネート
Figure 2022526985000026
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、ヒートガン乾燥した５０ｍＬの丸底フラスコに、ＮＨＳ（４５５ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ、１．５当量、最終濃度２１１ｍＭ）、ＤＣＭ（１７ｍＬ）、および、トリホスゲン（３９２ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ、０．５当量、最終濃度７０．４ｍＭ）を入れ、０℃に冷却した。反応混合物を０℃で冷却しながら、ピリジン（０．７７４ｍＬ、８．７１ｍｍｏｌ、３．３当量、最終濃度４６４ｍＭ）を、シリンジで滴下して加えた。反応混合物を、周囲温度に昇温し、周囲温度で３０分間撹拌した。５－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ペンタノール（４８２ｍｇ、２．６４ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度１５０ｍＭ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、周囲温度で１時間撹拌し、０℃で冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えることによりクエンチした。反応混合物をさらに、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、水（５０ｍＬ）、５％ＫＨＳＯ４水溶液、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：２５％、３０％、３５％、４０％アセトン／ヘキサン）による精製により、６３６ｍｇ（１．９６ｍｍｏｌ、収率７５％）の所望の活性化リンカーを、白色の固体として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.90 - 4.99 (m, 1 H), 3.32 - 3.50 (m, 2 H), 2.84 - 2.88 (m, 4 H), 2.66 - 2.82 (m, 2 H), 1.58 - 1.80 (m, 2 H), 1.08 (s, 6 H).
（２）６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキシルスクシンイミジルカーボネート （式Ｉにおいて、、ｎ＝３、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｘ＝スクシンイミジルオキシ）。
（ａ）エチル ５－クロロ－２，２－ジメチルペンタノエート
Figure 2022526985000027
 撹拌子、ラバーセプタム、窒素注入口、および熱電対プローブを取り付けた、ヒートガン乾燥した５００ｍＬの丸底フラスコに、ｉＰｒ２ＮＨ（５．３０ｍＬ、３７．４ｍｍｏｌ、１．１当量、最終濃度２６６ｍＭ）、およびＴＨＦ（１００ｍＬ）を入れた。反応混合物を０℃で冷却しながら、ｎＢｕＬｉの溶液（ヘキサン中１．２８Ｍ、２７．８ｍＬ、３５．７ｍｍｏｌ、１．０５当量、最終濃度２５４ｍＭ）を、内部温度が＋１０℃を超えない速度で（～１０分）、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、０℃で１５分間撹拌し、－７８℃に冷却し、イソ酪酸エチル（４．６０ｍＬ、４．０ｇ、３４．０ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度２４２ｍＭ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、内部温度が－６５℃を超えない速度で（～５分）、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、－７８℃で４５分間撹拌し、次いで、１－ブロモ－３－クロロプロパン（３．３７ｍＬ、３４．０ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度２４２ｍＭ）のＴＨＦ（５ｍＬ）溶液を、内部温度が－６８℃を超えない速度で、加えた。反応混合物を、－７８℃で１５分間撹拌し、０℃に昇温し、０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４（１００ｍＬ）で希釈した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、トルエン（１０ｍＬ×２）から濃縮して、６．１７ｇ（３２．０ｍｍｏｌ、９０％）の所望の塩化物を、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.13 (q, J=7.2 Hz, 2 H), 3.49 - 3.56 (m, 2 H), 1.62 - 1.83 (m, 4 H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 1.17 - 1.22 (m, 6 H)
（ｂ）エチル ５－アジド－２，２－ジメチルペンタノエート
Figure 2022526985000028
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、１００ｍＬの丸底フラスコに、エチル ５－クロロ－２，２－ジメチルペンタノエート（６．１７ｇ、３２．０ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度５３３ｍＭ）、ＤＭＳＯ（６０ｍＬ）、および、アジ化ナトリウム（２．７ｇ、４２ｍｍｏｌ、１．３当量、６９０ｍＭ）を入れた。反応混合物を、保護壁（blast shield）の後方で、７０℃で１８時間撹拌した。反応混合物を、周囲温度に冷却し、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１００ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、Ｈ２Ｏ（３×１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：０％、５％、１０％、２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、５．４０ｇ（２７．１ｍｍｏｌ、８５％）の所望のアジドを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.13 (q, J=7.0 Hz, 2 H), 3.26 (t, J=5.9 Hz, 2 H), 1.46 - 1.65 (m, 4 H), 1.26 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.19 (s, 6 H).
（ｃ）６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキサノン
Figure 2022526985000029
 撹拌子、ラバーセプタム、窒素注入口、および熱電対プローブを取り付けた、ヒートガン乾燥した１００ｍＬの丸底フラスコに、ＴＨＦ（４０ｍＬ）およびｉＰｒ２ＮＨ（３．０ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、２．１当量、最終濃度３２０ｍＭ）を入れた。溶液を０℃で冷却しながら、ｎＢｕＬｉの溶液（ヘキサン中１．２８Ｍ、１５．４ｍＬ、２０．０ｍｍｏｌ、２．０当量、最終濃度３０５ｍＭ）を、内部温度が＋１０℃を超えない速度で（～５分）、滴下して加え、０℃で１０分間撹拌し、－７８℃で冷却した。アセトニトリル（１．１０ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ、２．１当量、最終濃度３２２ｍＭ）を、内部温度が－６５℃を超えない速度で、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、－７８℃で１５分間撹拌し、次いで、エチル ５－アジド－２，２－ジメチルペンタノエート（２．０４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度１５３ｍＭ）のＴＨＦ（４ｍＬ）溶液を、内部温度が－６５℃を超えないようにして（～３分）、シリンジを介して加えた。反応混合物を、－７８℃で１０分間撹拌し、０℃に昇温し、０℃で１５分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４（５０ｍＬ）で希釈した。水層を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：１５％、２０％、３０％、４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、１．１８ｇ（６．０７ｍｍｏｌ、５９％）の所望のケトンを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 3.61 (d, J=0.4 Hz, 2 H), 3.32 (t, J=6.3 Hz, 2 H), 1.42 - 1.68 (m, 5 H), 1.17 - 1.24 (m, 6 H).
（ｄ）６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキサノール
Figure 2022526985000030
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、２５ｍＬの丸底フラスコに、６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキサノン（１．１８ｇ、６．０８ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度２４３ｍＭ）、およびＭｅＯＨ（２５ｍＬ）を入れ、０℃に冷却した。ＮａＢＨ４（１１４ｍｇ、３．０４ｍｍｏｌ、０．５当量、最終濃度１２２ｍＭ）を、固体として一度に加えた。反応混合物を、０℃で３０分間撹拌した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）および５％ＫＨＳＯ４水溶液（５０ｍＬ）で希釈した。水相を分離し、ＥｔＯＡｃ（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、食塩水（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：２０％、３０％、４０％、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）による精製により、１．１ｇ（５．６１ｍｍｏｌ、９７％）の所望のリンカーアルコールを、淡黄色の油として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 3.68 - 3.79 (m, 1 H), 3.30 (t, J=6.6 Hz, 2 H), 2.39 - 2.60 (m, 2 H), 2.23 - 2.29 (m, 1 H), 1.20 - 1.68 (m, 4 H), 0.93 (s, 3 H), 0.92 (s, 3 H)
（ｅ）６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキシルスクシンイミジルカーボネート
Figure 2022526985000031
 撹拌子、ラバーセプタム、および窒素注入口を取り付けた、ヒートガン乾燥した５０ｍＬの丸底フラスコに、ＮＨＳ（４４０ｍｇ、３．８３ｍｍｏｌ、１．５当量、最終濃度２１７ｍＭ）、ＤＣＭ（１７ｍＬ）、および、トリホスゲン（３７８ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ、０．５当量、最終濃度７２ｍＭ）を入れ、０℃に冷却した。反応混合物を０℃で冷却しながら、ピリジン（０．６８ｍＬ、８．４ｍｍｏｌ、３．３当量、最終濃度４８ｍＭ）を、シリンジで滴下して加えた。反応混合物を、周囲温度に昇温し、周囲温度で３０分間撹拌した。６－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ヘキサノール（５００ｍｇ、２．５５ｍｍｏｌ、１．０当量、最終濃度１４４ｍＭ）のＴＨＦ（１ｍＬ）溶液を、シリンジを介して滴下して加えた。反応混合物を、周囲温度で１時間撹拌し、０℃で冷却し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えることによりクエンチした。反応混合物をさらに、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５０ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、水（５０ｍＬ）、５％ＫＨＳＯ４水溶液、食塩水（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。カラムクロマトグラフィー（４０ｇシリカゲルカートリッジ；段階的勾配溶出：２５％、３０％、３５％、４０％アセトン／ヘキサン）による精製により、６３８ｍｇ（１．８９ｍｍｏｌ、収率７４％）の所望の活性化リンカーを、白色の固体として得た。
1H NMR (CDCl3, 300 MHz) δ 4.93 (dd, J=7.1, 5.3 Hz, 1 H), 3.32 (s, 2 H), 2.86 (s, 4 H), 2.71 - 2.79 (m, 2 H), 1.29 - 1.72 (m, 4 H), 1.05 (s., 3 H), 1.04 (s., 3 H).
実施例３
Ｚ＝保護ケトンである、式（Ｉ）のリンカーの製造
Figure 2022526985000032
 スクシンイミジル ２，２－ジエトキシプロパノエート
濃Ｈ２ＳＯ４（０．５ｍＬ）を、ピルビン酸（８．８ｇ、１００ｍｍｏｌ）およびオルトギ酸トリエチル（４０ｍＬ、２４０ｍｍｏｌ）の氷冷混合物に加えた。混合物を、氷冷で３０分間撹拌し、次いで、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、冷水、続いて食塩水で、２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗製の２，２－ジエトキシプロパン酸（１１．１６ｇ、６９ｍｍｏｌ）を得た。これを、２５０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（８．７ｇ、７６ｍｍｏｌ）で処理し、続いてジシクロヘキシルカルボジイミド（１５．６ｇ、７６ｍｍｏｌ）で、２時間処理した。濃い白色のスラリーを濾過して、ジシクロヘキシルウレアを取り除き、次いで、シリカゲルのパッドに通して、黄色をほぼ除去した。シリカゲルを１：１のＥｔＯＡｃ／ヘキサンですすぎ、合わせた溶出液を濃縮した。残渣を、温めた２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンから結晶化して、スクシンイミジルエステル（１１．７３ｇ、４５ｍｍｏｌ）の最初の生成物を、白色の結晶として得た。ＳｉＯ２での母液（０～６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）のクロマトグラフィー、およびそれに続く結晶化により、追加の生成物を得て、合計１３．０ｇの生成物（ピルビン酸からの全過程で５０％）を得た。
エチル ３－［（２，２－ジエトキシプロパノイル）アミノ］－２，２－ジメチルプロパノエート
エチル ３－アミノ－２，２－ジメチルプロパノエート（ＣｏｍｂｉＢｌｏｃｋｓ；１．８２ｇ、１０ｍｍｏｌ）、およびスクシンイミジル ２，２－ジエトキシプロパノエート（２．６ｇ、１０ｍｍｏｌ）の、１０ｍＬのＤＭＦの溶液を、周囲温度で１時間、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（３．５ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）で処理した。混合物を、ＥｔＯＡｃで希釈し、水、５％ＫＨＳＯ４、ＮａＨＣＯ３飽和水、および食塩水で、順次に洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。ＳｉＯ２のクロマトグラフィー（０～７０％ＭＴＢＥ／ヘキサン）により、生成物エステル（２．４８ｇ、８６％）を、無色の油として得た。
スクシンイミジルカーボネートへの変換は、上記の他のリンカーについて説明した手法に従って行った。
実施例４
Ｘ＝Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌである、式（Ｉ）のリンカーの製造
Figure 2022526985000033
 工程１． ４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブチル ４－（Ｎ，Ｎ－ジエチルカルボキサミド）フェニルカルバメート
ピリジンを、４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブタノール、およびトリホスゲンのＴＨＦ溶液に加えた。１５分後、混合物を濾過し、濃縮した。残渣を、ＣＨ２Ｃｌ２に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジエチル ４－アミノベンズアミド、およびトリエチルアミンで処理した。１時間後、混合物を、ＣＨ２Ｃｌ２で希釈し、５％ＫＨＳＯ４、水、および食塩水で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、エバポレートした。生成物を結晶化した。
工程２． Ｎ－クロロメチル ４－アジド－１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブチル ４－（Ｎ，Ｎ－ジエチルカルボキサミド）－フェニルカルバメート
工程１のカルバメート（１ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（１２０ｍｇ）、クロロトリメチルシラン（０．５ｍＬ）、および１，２－ジクロロエタン（４ｍＬ）の混合物を、スクリューキャップバイアルに密封し、５０℃で１２分間加熱した。冷却後、混合物を濃縮し、残渣を１０ｍＬのＭＴＢＥに再溶解し、濾過し、そして再濃縮して、Ｎ－クロロメチルカルバメートを、無色の油として得た。
実施例５
Ｚ＝アジドである、式（ＩＩ）の化合物の製造
Figure 2022526985000034
 ｎ＝１、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、および、Ｄが、Ｐｈｅ１のアルファ－アミノ基を介して接続されたオクトレオチドである、式（ＩＩ）の化合物の製造方法を示す。
Ｂｏｃ－オクトレオチド
ｔ－ブチルスクシンイミジルカーボネート（３８５μＬ）の５８．４ｍｇ／ｍＬの溶液を、オクトレオチドアセテート（１２８ｍｇ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）の、アミンフリーの２ｍＬのＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミドの混合物に、加えた。４時間後、ＨＰＬＣ分析により、９１．６％のモノ－Ｂｏｃ－オクトレオチド、３．０％のジ－Ｂｏｃ－オクトレオチド、および、５．４％のオクトレオチドの存在が示された。ＵＶ分光光度分析により、４３．５ｍＭの総オクトレオチド濃度が示された。この溶液を精製せずに使用した。
一般的な方法
式（Ｉ）の化合物を、４０ｍＭで、アミンフリーのＤＭＦに溶解した。上記によるＢｏｃ－オクトレオチドのアリコート（５００μＬ、総オクトレオチド２１．８μｍｏｌ）を、式（Ｉ）の化合物の溶液（５４０μＬ、２１．６μｍｏｌ）と混合し、周囲温度で１６時間保持した。反応物を、５ｍＬの氷冷０．１Ｍ酢酸で希釈し、沈殿したリンカー－ペプチドを遠心分離によって収集した。ペレット化した物質を４ｍＬのメタノールに溶解し、分取ＨＰＬＣ（Ｃ１８、２０～８０％ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡ）で精製した。乾燥後、精製物を氷冷した９５：５のトリフルオロ酢酸／水１ｍＬに溶解して、Ｂｏｃ基を除去し、１０分間保持し、次いで、冷却したエーテル１０ｍＬを加えて沈殿させ、乾燥した。
この方法に従って製造した式（ＩＩ）の化合物を、以下に挙げる。
Ｎα－［（４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。収量２３．６ｍｇ（８４％）、ＬＣ－ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９５．７５を示す（期待値１２９５．６）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（（Ｎ－エチル－Ｎ－メチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。収量２１．６ｍｇ、ＬＣ－ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３０９．７５を示す（期待値１３０９．６）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（（モルホリノスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２）２Ｏ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。収量１９．９ｍｇ（８４％）、ＬＣ－ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３３７．７を示す（期待値１３３７．６）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（（Ｎ，Ｎ－ビス（２－メトキシエチル）アミノスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。収量３５．４ｍｇ、ＬＣ－ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝１３８３．８を示す（期待値１３８３．７）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（（イソプロピルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＣＨ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。収量１６．８ｍｇ、ＬＣ－ＭＳは［Ｍ＋Ｈ］＋＝１２９４．７を示す（期待値１２９４．６）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（１－シアノ－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。
Ｎα－［（４－アジド－１－（１－（メチルスルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブトキシ）カルボニル］オクトレオチド （ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２ＣＨ３、Ｒ２＝Ｈ、Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝Ｎ３、Ｄ＝α－アミノ基を介して接続されたオクトレオチド）。
Ｎα－リンカー－［Ｇｌｎ２８］－エキセナチド
Figure 2022526985000035
 Ｎα－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－［Ｇｌｎ２８］エキセナチド
２５ｍＬのフリット付ＳＰＥカラムにおいて、Ｒｉｎｋアミド樹脂（０．６３ｍｅｑ／ｇ置換、０．１２ｍｍｏｌペプチド／ｇペプチド－樹脂、１．００ｇペプチド－樹脂、０．１２ｍｍｏｌペプチド）上の、保護された［Ｇｌｎ２８］エキセナチド（Ｆｍｏｃ α－アミン）を、１０ｍＬのＤＭＦで、周囲温度で３０分間、膨潤させた。Ｆ／Ｆルアーアダプターと１２ｍＬシリンジを用いたシリンジ濾過により、ＤＭＦを除去し、膨潤した樹脂を、５％の４－メチルピペリジンのＤＭＦ液で処理した（２×１０ｍＬを各５分、その後、２×１０ｍＬを各２０分）。次に、Ｆｍｏｃ脱保護の樹脂を、ＤＭＦ（１０×１０ｍＬ）で洗浄し、シリンジ濾過によって上清を取り除いた。洗浄した樹脂を、８．４ｍＬのＤＭＦに懸濁し、３．６ｍＬのＯ－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチル｝－Ｏ’－スクシンイミジルカーボネート（ＤＭＦ中０．１０Ｍ、０．３６ｍｍｏｌ、最終濃度３０ｍＭ）、および、４－メチルモルホリン（４０μＬ、０．３６ｍｍｏｌ、最終濃度３０ｍＭ）で処理した。オービタルシェーカーを用いて、反応混合物を撹拌した。２０時間後、シリンジ濾過により上清を取り除き、樹脂を、ＤＭＦ（５×１５ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５×１５ｍＬ）で順次に洗浄した。カイザーテストでは、中間体リンカー修飾樹脂における遊離アミンについて陰性であった。次いで、オービタルシェーカーで穏やかに撹拌しながら、樹脂を、１０ｍＬの予め冷却（０℃）した９０：５：５のＴＦＡ：ＴＩＰＳ：Ｈ２Ｏで処理した。２時間後、樹脂を真空濾過し、ＴＦＡ（２×１．５ｍＬ）で洗浄した。濾液を、ロータリーエバポレーションにより～６ｍＬに濃縮した。風袋を量った５０ｍＬファルコン（Falcon）チューブ内に入った４０ｍＬの－２０℃のＭＴＢＥに、ＴＦＡ濃縮物を滴下して加えることにより、粗リンカー－ペプチドを沈殿させた。－２０℃で１０分間、インキュベートした後、粗リンカー－ペプチド懸濁液を、遠心分離（３０００×ｇ、２分、４℃）でペレット化し、上清をデカントした。得られたペレットを、４０ｍＬの－２０℃のＭＴＢＥに懸濁し、ボルテックスして混合し、遠心分離し、上記のようにデカントした。高真空下で乾燥させた後、ペレットを、オフホワイトの固体（５７５ｍｇ）として単離し、次いで、８ｍＬの５％ＡｃＯＨ（～７０ｍｇ／ｍＬ）に溶解した。５０℃の水浴中で４５分間加熱した後、溶液を、分取Ｃ１８－ＨＰＬＣにより精製して、１３ｍＬの表題の化合物（３．３３ｍＭ、４３μｍｏｌ、Ａ２８０による）を、水溶液として得た。凍結乾燥により、２３５ｍｇの白色の固体を得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ純度（２８０ｎｍで測定）：９０．０％（ＲＶ＝１１．４７ｍＬ）
Ｍａｖ：計算値４４７６．９；実測値４４７６
実施例６
Ｚ＝ケトンである、式（ＩＩ）の化合物の製造
Figure 2022526985000036
 Ｚ＝ケトンである式（ＩＩ）の化合物の製造を、ｎ＝１、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝ＣＨ３、Ｚ＝ＮＨ－ピルボイル、および、Ｄ＝Ｎα結合オクトレオチド、である例によって、示す。
２５０ｍＭのｔ－ブチルスクシンイミジルカーボネートのＤＭＦ（４４０μＬ）溶液を、オクトレオチドアセテート（１２８ｍｇ）およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．２ｍＬ）の、２ｍＬのアミンフリーＤＭＦ混合物に加えた。１時間後、ＨＰＬＣ分析により、９０％のモノ－Ｂｏｃ－オクトレオチド、２．５％のジ－Ｂｏｃ－オクトレオチド、および７％のオクトレオチドの存在が示された。４－（２－ジエトキシプロピオンアミド）－１－（（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）スルホニル）－３，３－ジメチル－２－ブチルスクシンイミジルカーボネート（実施例３；５４ｍｇ）の１００μＬのＤＭＦ溶液を、加えた。混合物を、周囲温度で１６時間保持し、次いで、ＥｔＯＡｃで希釈し、５％ＫＨＳＯ４と次いで食塩水で洗浄した。Ｎａ２ＳＯで乾燥した後、混合物を濾過し、濃縮して、完全に保護された中間体を、泡状物として得た。これを、１ｍＬのＣＨ３ＣＮに溶解し、１ｍＬの２ＮのＨＣｌにより、５０℃で３０分間処理した。溶液を、周囲温度に冷却し、２ｍＬの水で希釈し、５ｍＬの１ＭのＮａＨＣＯ３に注意しながら加えた。沈殿した生成物を遠心分離により収集し、水およびジクロロメタンで洗浄し、５ｍＬのメタノールに溶解した。
実施例７
Ｙ＝Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２である、式（ＩＩ）のリンカー－薬物の製造
Figure 2022526985000037
 ＳＮ－３８（１００ｍｇ）を含む１０ｍＬの１：１のＤＭＦ／ＴＨＦ溶液を、氷冷し、１Ｍのカリウムｔｅｒｔ－ブトキシド（０．２６ｍＬ、１当量）で滴下して処理した。得られたオレンジ色の懸濁液を、３０分間撹拌し、次いで、Ｎ－（クロロメチル）カルバメートリンカー（実施例４；１ｍｍｏｌ）の１ｍＬのＴＨＦ溶液を加えた。オレンジ色が徐々に薄くなり、懸濁液は透明になった。混合物を、１０％クエン酸水溶液でクエンチし、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を、水および食塩水で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、エバポレートした。ヘキサン中０～１００％アセトンの勾配を使用したＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによる精製により、ｎ＝１、Ｒ１＝ＣＮ、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝Ｍｅ、Ｄ＝ＳＮ－３８、Ｙ＝Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２（ただし、Ｒ６＝４－（Ｎ，Ｎ－ジエチルカルボキサミドフェニル））、およびＺ＝アジドである、式（ＩＩ）のリンカー－薬物を得た。
Ｚ＝アミンである対応する化合物は、以下のように製造した。Ｚ＝アジドである化合物のＴＨＦ溶液を、１ＭのトリメチルホスフィンのＴＨＦ液および酢酸の混合物に加えた。ガスの発生が止まった後、水を加え、混合物を１時間撹拌した後、濃縮して乾燥させた。残渣を水と酢酸エチルに分液し、水相を収集して乾燥した。分取ＨＰＬＣによる最終精製では、０～１００％アセトニトリル／水／０．１％ＴＦＡのグラジエントを使用した。
実施例８
Ｍが、可溶性ＰＥＧであり、Ｚ＊＝１，２，３－トリアゾールである、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの形成
２０ｋＤａの４－アームＰＥＧ－テトラ（シクロオクチン）（下記の実施例１４に従って製造した、プレポリマーＢ）、および、実施例５のＺ＝アジドであるリンカー－薬物の、アセトニトリル液の混合物を、５０℃で１６分間保持した。水とそれに続くメタノールに対する透析（１２ｋＤａ ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ２）により、Ｍが、可溶性４－アームＰＥＧであり、Ｚ＊が、１，２，３－トリアゾールである、精製された、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得た。
実施例９
Ｍが、可溶性ＰＥＧであり、Ｚ＊＝オキシムである、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの形成
２０ｋＤａの４アームＰＥＧ－テトラアミン（１００ｍｇ、ＮＯＦ Ａｍｅｒｉｃａ）を、ＨＡＴＵ、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのＤＭＦ液の存在下、過剰の（Ｂｏｃ－アミノオキシ）酢酸と反応させることにより、２０ｋＤａの４アームＰＥＧ－テトラ（アミノオキシアセトアミド）を調製した。１時間後、撹拌したＭＴＢＥにゆっくりと添加することにより、ＰＥＧを沈殿させ、遠心分離によって収集し、真空下で乾燥させた。これを、２ｍＬの１：１のＣＨ２Ｃｌ２／ＣＦ３ＣＯ２Ｈに溶解し、１時間保持し、エバポレートして乾燥させた。残渣を２ｍＬのＴＨＦに溶解し、撹拌したＭＴＢＥにゆっくりと添加することにより、生成物を沈殿させ、遠心分離によって収集し、真空下で乾燥させた。
２０ｋＤａの４－アームＰＥＧ－テトラ（アミノオキシアセトアミド）、および、実施例６のＺ＝ケトンであるリンカー－薬物の、１：１のＤＭＳＯ／０．１Ｍ酢酸の混合物を、５０℃で１６時間保持した。水それに続くメタノールに対する透析（１２ｋＤａ ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ２）により、Ｍが、可溶性４－アームＰＥＧであり、Ｚ＊が、オキシムである、精製された、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得た。
実施例１０
Ｍが、可溶性ＰＥＧであり、Ｚ＊＝カルボキサミドである、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの形成
２０ｋＤａの４－アームＰＥＧ－テトラ（スクシンイミジルエステル）（ＪｅｎＫｅｍ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン、および、実施例７のＺ＝アミンであるリンカー－薬物の、ＴＨＦ混合物を、１時間撹拌した。水とそれに続くメタノールに対する透析（１２ｋＤａ ＳｐｅｃｔｒａＰｏｒ２）により、Ｍが、可溶性４－アームＰＥＧであり、Ｚ＊が、カルボキサミドである、精製された、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートを得た。
実施例１１
Ｍが、不溶性の分解性ＰＥＧマイクロスフェアである、式（ＩＩＩ）のコンジュゲートの形成
Ｐ１およびＰ２が両方とも１０ｋＤａの４－アームＰＥＧであり、Ｚ＊＝１，２，３－トリアゾール、ｎ＝１、各Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、およびＷ＝ＣＨ（（ＣＨ２）４ＮＨ２）Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（すなわち、ｘ＝０、ｙ＝４、ｚ＝０、Ｂ＝ＮＨ２、およびＣ＊＝カルボキサミド）（下記の実施例１４に従って調製）である、式（ＩＶ）のＰＥＧマイクロスフェアの懸濁液（１００ｍＬ）を、４－シクロオクチニルスクシンイミジルカーボネートおよびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミンのアセトニトリル液との反応により、活性化した。次いで、得られた、多数の反応性基Ｚ’＝シクロオクチニルを含むヒドロゲルを、５０ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ５、に懸濁し、Ｚ＝アジド、ｎ＝１、各Ｒ４＝ＣＨ３、Ｒ１＝ＳＯ２Ｎ（ＣＨ３）２、Ｒ２＝Ｈ、および、Ｄ＝-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKQGGPSSGAP-NH2（エキセナチド－［Ｎ２８Ｑ］（実施例５）、である、式（ＩＩ）のリンカー－薬物の溶液と反応させた。５０℃で４８時間後、マイクロスフェアを酢酸緩衝液で十分に洗浄して、コンジュゲートしていないペプチドを除去した。分析により、パックされたマイクロスフェアスラリーは、２．１μｍｏｌリンクペプチド／ｍＬスラリーを含むことが示された。
実施例１２
放出速度論
コンジュゲートを、０．２５～２ｍＭで、１００ｍＭ緩衝液に溶解し、サーモスタット付きＨＰＬＣオートサンプラー内で、３７℃に保持した。サンプル（５～１０μＬ）を定期的に取り出し、ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ ５ｕｍ ４．６×１５０ｍｍ Ｃ１８逆相）に注入し、１ｍＬ／ｍｉｎで、０～１００％ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ／０．１％ＴＦＡの直線グラジエントにより溶出した。ピークは、２８０ｎｍ（ペプチド）、または３５０ｎｍ（ジニトロフェニル－Ｌｙｓ）で検出され、コンジュゲートおよび放出したペプチドのピークエリアを得るために、組み合わせた。薬物放出の程度は、（放出された薬物の面積）／［（放出された薬物の面積）＋（コンジュゲートの面積）］として計算した。上記の実施例５に記載されたα－アミンで結合したオクトレオチドを、実施例８に記載の２０ｋＤａのＭｅＯ－ＰＥＧ－シクロオクチンにコンジュゲートさせた。ｐＨ７．４での放出の半減期は、次の式を使用して、与えられたｐＨで得られた結果から計算した。
ｔ１／２（ｐＨ７．４） ＝ ｌｎ（２）・１０（Ｘ－７．４）／ｋｏｂｓ
Figure 2022526985000038
 表１．さまざまなｐＨ値および温度での、ホウ酸緩衝液中の、可溶性ＰＥＧコンジュゲートからのα結合オクトレオチド放出速度論
ａ ｔ１／２,３７℃ ＝ （ｔ１／２,３８℃）＊１．１４３ （Ｓａｎｔｉ ＰＮＡＳ ２０１２、ＳＩのアレニウスの式を参照）。すべての場合において、ｎ＝１、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝Ｍｅ、Ｚ＝Ｎ３、Ｙは存在せず、および、Ｄ＝Ｎα結合オクトレオチド、である。
実施例１３
アザ・マイケル反応の速度論
正反応の速度論
３つの１．５ｍＬガラスＨＰＬＣバイアルのそれぞれにおいて、標準、β－メチルまたはｇｅｍジメチルビニルスルホン（０．１ｍＬ、０．５μｍｏｌ、最終濃度０．５ｍＭ）のいずれかの５ｍＭのＤＭＳＯ溶液を、０．９ｍＬの予熱したグリシン切断バッファーＡ、Ｂ、またはＣに加えた。バイアルを加熱（３７℃）したＨＰＬＣオートサンプラーに保持し、アザ・マイケル反応を、Ｃ１８－ＨＰＬＣで定期的にモニタリングした。
切断バッファーＡ：１．１Ｍグリシン（最終濃度１．０Ｍ）、０．１１Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、＠３７℃。
切断バッファーＢ：１．１Ｍグリシン（最終濃度１．０Ｍ）、０．１１Ｍ Ｂｉｃｉｎｅ、ｐＨ８．４、＠３７℃。
切断バッファーＣ：０．１１Ｍグリシン（最終濃度０．１０Ｍ）、ｐＨ９．５、＠３７℃。
Ｋｅｑは、次の式を用いて計算した。
Ｋｅｑ ＝ Ｋｅｑ ａｐｐ／［Ｇｌｙ］
Ｋｅｑ ａｐｐ ＝ ［ＧＡ］ｅｑ／［ＶＳ］ｅｑ ＝ 安定値／（０．５ｍＭ－安定値）
［Ｇｌｙ］＝グリシン濃度（Ｍ）
［ＧＡ］＝グリシン付加物濃度（ｍＭ）
［ＶＳ］＝ビニルスルホン濃度（ｍＭ）
安定値（ｍＭ）は、Ｐｒｉｓｍで決定。
２つの未知の値、ｋｆ（会合）およびｋｒ（解離）は、上記で定義されたＫｅｑ ａｐｐおよびＰｒｉｓｍ適合によって決定されたｋｏｂｓを用いて、以下の２つの式から計算される。
ｋｏｂｓ ＝ ｋｆ［Ｇｌｙ］ ＋ ｋｒ
ｋｆ［Ｇｌｙ］／ｋｒ ＝ Ｋｅｑ ａｐｐ
逆反応の速度論
解離性レトロ・アザ・マイケル反応（図２．３Ａ）の速度を、単離したグリシン付加物から直接測定した。精製した各グリシン付加物を、グリシンを添加せずに、３７℃でｐＨ７．４のＨＥＰＥＳバッファーに希釈した。開始からのグリシン付加物の濃度を時間に対してプロットし、各曲線を、Ｐｒｉｓｍの１次減衰に適合させた（図２．３Ｂ）。各反応について、計算された無限値は＜１μＭであり、反応完了まで進行することを示しており、したがって、ｋｒは本質的にｋｏｂｓと等価である。３つの０．３ｍＬプラスチックコニカルＨＰＬＣバイアルのそれぞれにおいて、標準、β－メチルまたはｇｅｍジメチルスルホ－ＤＩＢＯグリシン付加物（１１ｎｍｏｌ、最終濃度５０μＭ）のいずれかの０．７～３．８ｍＭのＤＭＳＯの溶液を、十分な水を含んだ予熱した０．１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０、０．２ｍＬに加え、最終容量を０．２２ｍＬに調整した。反応バイアルを、加熱（３７℃）したＨＰＬＣオートサンプラーに保持し、レトロ・アザ・マイケル反応をＣ１８－ＨＰＬＣで定期的にモニタリングした。開始からのグリシン付加物［ＧＡ］の濃度（μＭ）を、以下の式を用いて計算し、Ｐｒｉｓｍを使用して時間に対してプロットした。
［ＧＡ］ ＝ ｇａ／（ｇａ＋ｖｓ）＊５０μＭ
［ＧＡ］ ＝ グリシン付加物濃度（μＭ）
ｇａ ＝ グリシン付加物で積算されたＨＰＬＣピーク面積（２５４ｎｍ）
ｖｓ ＝ ビニルスルホンで積算されたＨＰＬＣピーク面積（２５４ｎｍ）
５０μＭ ＝ ［ＧＡ］ｉおよび可能な最大値［ＶＳ］
ｋｒ（解離）は、Ｐｒｉｓｍの１次減衰にデータを適合させることによって決定した。
実施例１４
分解性ＰＥＧヒドロゲルの製造
Figure 2022526985000039
 本発明のヒドロゲルは、反応して接続官能基Ｃ＊を形成する基Ｃおよび基Ｃ’を含む、２つのプレポリマーの重合によって製造される。ＣまたはＣ’のうちの１つへのプレポリマー接続は、ヒドロゲルの各架橋に切断可能なリンカーを導入するために、式（Ｉ）の分子との反応によって導入される、切断可能なリンカーをさらに含む。
一実施形態において、第１のプレポリマーは、４－アームのＰＥＧを含み、これは、各アームが、２つの相互に非反応性（「異種」）の官能基ＢおよびＣを有するアダプターユニットで終端となっている。ＢおよびＣは、最初、保護された形態で存在することができ、次の工程において選択的な化学反応を可能にする。特定の実施形態において、アダプターユニットは、アミノ酸、特に、リジン、システイン、アスパラギン酸、またはグルタミン酸、の誘導体であり、これには、アルファアミン基がアジドに変換された誘導体、例えば、２－アジドグルタル酸のモノエステル、が含まれる。アダプターユニットは、各プレポリマーのアーム上の官能基Ａと、アダプターユニット上の関連する官能基Ａ’との縮合によって形成される接続官能基Ａ＊を介して、各第１のプレポリマーアームに接続される。第２のプレポリマーは、各アームが、第１のプレポリマーの基Ｃと相補的な反応性を有する官能基Ｃ’が終端となった、４－アームのＰＥＧを含み、ＣとＣ’が反応してＣ＊を形成したときに、２つのプレポリマー間の架橋が起こる。
例示的な例として、第１のプレポリマーを以下のように製造した。Ｈ－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＨを、Ｚ＝アジドである式（Ｉ）のリンカーでアシル化して、Ａ＝ＣＯＯＨ、Ｂ＝Ｂｏｃ保護ＮＨ２、およびＣ＝アジドである、アダプターユニットを得た。これを２０ｋＤａの４－アームＰＥＧ－テトラアミンとカップリングさせ、Ｂｏｃ基を除去することで、Ａ＊＝アミド、Ｂ＝ＮＨ２、およびＣ＝アジドである、第１のプレポリマーであって、式（Ｉ）の切断可能なリンカーが、各アームと第１のプレポリマーの基Ｃとの間の結合に組み込まれた、第１のプレポリマーを得た。対応する第２のプレポリマーは、２０ｋＤａの４－アームのＰＥＧ－テトラアミンを５－シクロオクチニルスクシンイミジルカーボネートでアシル化することによって製造し、Ｃ’＝シクロオクチンである第２のプレポリマーを得た。第１および第２のプレポリマーを混合すると、Ｃ＝アジド基とＣ’＝シクロオクチン基の反応により、対応するトリアゾール基が形成され、それにより、２つのプレポリマーが３次元ネットワークに架橋され、ここで、各架橋は、式（Ｉ）の化合物の組み込みにより得られる切断可能なリンカーを含み、ここで、第１のプレポリマーの組み込みにより得られる各節点（node）は、さらなるリンカー、薬物、フルオロフォア、金属キレート剤などの付加のために誘導化することが可能な、残留した官能基Ｂ＝ＮＨ２を含んでいる。
Ａ＊＝アミド、Ｂ＝アミン、およびＣ＝アジドである、プレポリマーＡ
Figure 2022526985000040
 （１）Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ－ＯＨ
Ｂｏｃ－Ｌｙｓ－ＯＨ（２．９６ｇ、１２．０ｍｍｏｌ）の２８ｍＬのＨ２Ｏ溶液を、１ＭのＮａＯＨ水溶液（１２．０ｍＬ、１２．０ｍｍｏｌ）、１ＭのＮａＨＣＯ３水溶液（１０．０ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）、および、Ｏ－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチル｝－Ｏ’－スクシンイミジルカーボネート（３．９１ｇ、１０．０ｍｍｏｌ、最終濃度０．１Ｍ）の５０ｍＬのＭｅＣＮ溶液で、順次に処理した。周囲温度で２時間撹拌した後、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）により反応が完了したと判断した。反応物を、３０ｍＬの１ＭのＫＨＳＯ４（水溶液）でクエンチした。混合物を、５００ｍＬの１：１のＥｔＯＡｃ：Ｈ２Ｏで分液した。水相を１００ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を、Ｈ２Ｏおよび食塩水（各１００ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーションにより濃縮して、粗製の表題の化合物（５．２２ｇ、９．９９ｍｍｏｌ、粗収率９９．９％）を、白色の泡として得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：９９．１％（ＲＶ＝９．２９ｍＬ）。
ＬＣ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：計算値５２１．２；測定値５２１．３ ［Ｍ－Ｈ］－。

（２）Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ－ＯＳｕ
ジシクロヘキシルカルボジイミド（キシレン中６０％、２．６Ｍ、４．９０ｍＬ、１２．７ｍｍｏｌ）を、Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ－ＯＨ（５．１１ｇ、９．７９ｍｍｏｌ、最終濃度０．１Ｍ）、および、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（１．４６ｇ、１２．７ｍｍｏｌ）の、９８ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２溶液に加えた。反応懸濁液を、周囲温度で撹拌し、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）によってモニタリングした。２．５時間後、反応混合物を濾過し、濾液を、ＳｉｌｉａＳｅｐ１２０ｇカラムに載せた。生成物を、ヘキサン中のアセトンによる段階的勾配（０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、各２４０ｍＬ）で溶出した。精製された生成物を含む画分を合わせ、濃縮して、表題の化合物（４．９５ｇ、７．９９ｍｍｏｌ、収率８１．６％）を、白色の泡として得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：９９．７％（ＲＶ＝１０．２３ｍＬ）。
ＬＣ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：計算値５２０．２；測定値５２０．２ ［Ｍ＋Ｈ－Ｂｏｃ］＋。
（３）（Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ）４－ＰＥＧ２０ｋＤａ
ＰＥＧ２０ｋＤａ－（ＮＨ）４（２０．０８ｇ、０．９９９６ｍｍｏｌ、３．９９８ｍｍｏｌのＮＨ２、最終濃度０．０２ＭのＮＨ２）を、１４５ｍＬのＭｅＣＮに溶解した。Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ－ＯＳｕ（２．９７６ｇ、４．７９８ｍｍｏｌ）の５０ｍＬのＭｅＣＮ溶液を加えた。反応物を、周囲温度で撹拌し、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）によって分析した。出発物質は、３つのより遅く溶出する中間体ピークを経て、単一の生成物ピークに変換された。１時間後、Ａｃ２Ｏ（０．３７ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をさらに３０分以上撹拌し、次いで、ロータリーエバポレーションにより～５０ｍＬに濃縮した。反応濃縮物を、４００ｍＬの撹拌ＭＴＢＥに加えた。混合物を、周囲温度で３０分間撹拌し、次いで、デカントした。ＭＴＢＥ（４００ｍＬ）を湿った固体に加え、懸濁液を５分間撹拌し、デカントした。固体を真空フィルターに移し、３×１００ｍＬのＭＴＢＥで洗浄／トリチュレートした。フィルター上で１０分間乾燥させた後、固体を、風袋を量った２５０ｍＬのＨＤＰＥパッケージングボトルに移した。重量が安定するまで、残留揮発性物質を高真空下で除去して、表題の化合物（２１．２３ｇ、０．９６０２ｍｍｏｌ、収率９６．１％）を、白色の固体として得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：８９．１％（ＲＶ＝１０．３８ｍＬ）で、１０．６％の不純物（ＲＶ＝１０．０８）を伴う。
（４）（Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ）４－ＰＥＧ２０ｋＤａ
（Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ）４－ＰＥＧ２０ｋＤａ（１９．００ｇ、０．８５９４ｍｍｏｌ、３．４３８ｍｍｏｌのＢｏｃ、最終濃度０．０２ＭのＢｏｃ）を、８６ｍＬの１，４－ジオキサンに溶解した。５分間撹拌してＰＥＧを完全に溶解した後、４ＭのＨＣｌのジオキサン液（８６ｍＬ、３４４ｍｍｏｌのＨＣｌ）を加えた。反応物を、周囲温度で撹拌し、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）によって分析した。出発物質は、３つのより速く溶出する中間体ピークを経て、単一の生成物ピークに変換された。２時間後、反応混合物を～４０ｍＬに濃縮した。濃縮物にＴＨＦ（１０ｍＬ）を加え、溶液を再び～４０ｍＬに濃縮した。粘稠な油を、４００ｍＬの撹拌Ｅｔ２Ｏに注いだ。周囲温度で２０分間撹拌した後、上澄みを沈殿物からデカントした。湿った固体を、２００ｍＬのＥｔ２Ｏを用いて真空フィルターに移し、Ｅｔ２Ｏ（３×７５ｍＬ）で洗浄した。固体を、フィルター上で１０分間乾燥させた後、風袋を量った２５０ｍＬのＨＤＰＥパッケージングボトルに移した。残留揮発性物質を高真空下で一晩除去して、表題の化合物（１７．５２ｇ、０．８０１９ｍｍｏｌ、収率９３．３％、＠４ＨＣｌ）を、白色の固体として得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：９９．２％（ＲＶ＝９．３４ｍＬ）。
Ｃ’＝シクロオクチニルである、プレポリマーＢ
４ｍＬのスクリュートップバイアルに、ＰＥＧ２０ｋＤａ－［ＮＨ２］４（ＳｕｎＢｒｉｔｔ ＰＴＥ－２００ＰＡ；１５０ｍｇ、７．６μｍｏｌのＰＥＧ、３０．２μｍｏｌのＮＨ２、１．０当量、最終アミン濃度２０ｍＭ）、ＭｅＣＮ（１．５。ｍＬ）、およびｉＰｒ２ＮＥｔ（７μＬ、４０μｍｏｌ、１．３当量、最終濃度２７ｍＭ）を入れた。活性エステルのシクロオクチン（３９μｍｏｌ、１．３当量、最終濃度２７ｍＭ）の溶液を加え、反応混合物を周囲温度で撹拌した。ＥＬＳＤによるＣ１８－ＨＰＬＣ（１１分間で２０～８０％Ｂ）により、反応をモニタリングした。完了後、Ａｃ２Ｏ（３μＬ、３０μｍｏｌ、開始時ＮＨ２あたり１当量）を反応混合物に添加し、混合物を３０分間撹拌した。次いで、反応混合物を濃厚な油に濃縮し、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）に懸濁した。得られた懸濁液を１０分間激しく撹拌した。得られた固体を、激しく混合し、遠心分離機（２８００ｒｐｍ、４℃、１０分）でペレット化し、ピペットで上澄みを除去することにより、ＭＴＢＥ（２０ｍＬ）で、３回トリチュレートした。得られた固体を、真空下、周囲温度で３０分以内に、乾燥させた。ストック溶液を、２０ｍＭのターゲットアミン濃度で、２０ｍＭのＮａＯＡｃ（ｐＨ５）において、製造した。その後、シクロオクチン濃度を、ＰＥＧ７－Ｎ３（２当量）の処理、および、未反応のＰＥＧ７－Ｎ３をＤＢＣＯ－ＣＯ２Ｈで逆滴定することによって、確認した。
この手法を用いて製造したマクロモノマーとして、シクロオクチン基が、ＭＦＣＯ、５－ヒドロキシシクロオクチン、３－ヒドロキシシクロオクチン、ＢＣＮ、ＤＩＢＯ、３－（カルボキシメトキシ）シクロオクチン、および、３－（２－ヒドロキシエトキシ）シクロオクチンであるもの、が挙げられ、これらはそれぞれ、ＭＦＣＯ ペンタフルオロフェニルエステル、５－（（４－ニトロフェノキシ－カルボニル）オキシ）シクロオクチン、３－（４－ニトロフェノキシカルボニル）オキシシクロオクチン、ＢＣＮ ヒドロキシスクシンイミジルカーボネート、ＤＩＢＯ ４－ニトロフェニルカーボネート、３－（カルボキシメトキシ）シクロオクチンスクシンイミジルエステル、および、３－（ヒドロキシエトキシ）シクロオクチン４－ニトロフェニルカーボネートを使用して製造される。
ヒドロゲルマイクロスフェアの製造
ヒドロゲルマイクロスフェアは、Schneider et al. (2016) Bioconjugate Chemistry 27: 1210-15に記載に従い、製造し、活性化した。
実施例１５
Ｚ＝Ｎ３、ｎ＝１、Ｒ１＝（４－メチルフェニル）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝Ｍｅ、Ｙ＝不存在、および、Ｄ＝ＬｙｓＢ２８を介して結合したインスリンリスプロである、式（ＩＩ）の化合物
固相ペプチド合成による式（ＩＩ）の化合物の製造の代替として（実施例５を参照）、Ｄがペプチドである式（ＩＩ）の化合物は、予め形成されたペプチドと、活性化した式（Ｉ）のリンカーとの、ペプチド上の少なくとも１つのアミン基が反応のために遊離している条件下での、反応によって、形成され得る。ペプチドが、Ｎ末端アルファアミンと１つまたは複数のリジンイプシロンアミンの両方を含む場合、リジンイプシロンアミンへのリンカーの優先的な結合は、高ｐＨまたは有機溶媒中で、過剰の第三級アミンの存在下、反応を実施することにより、得ることができる。
ヒューマログ（Humalog）（１００Ｕ／ｍＬ）の１０ｍＬバイアルの１つを、０．１ＮのＨＣｌを使用してｐＨ５．４に調整し、得られた沈殿物を遠心分離によって収集し、ペレットを２×１５ｍＬのエタノール、１×１５ｍＬのメチルｔ－ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）で洗浄し、真空下で乾燥させた。乾燥したインスリンリスプロ（３５ｍｇ、６μｍｏｌ）を、３ｍＬのジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、および３０μＬ（１７０μｍｏｌ）のＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）に溶解した。１００ｍＭの４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－メチルフェニルスルホニル）－２－ブチルスクシンイミジルカーボネートのＤＭＦ溶液（８４μＬ、８．４μｍｏｌ）を加え、混合物を周囲温度で１時間撹拌した。混合物を、真空下でエバポレートして乾燥し、残渣を、１０ｍＬの３：１の水／アセトニトリル／０．１％トリフルオロ酢酸に溶解した。２１．２×１５０ｍｍ、Ｊｕｐｉｔｅｒ ５ｕｍ ３００Ａ Ｃ１８逆相カラムを使用し、１５ｍＬ／ｍｉｎで、２０分間で３０～５０％アセトニトリル／水／０．１％ＴＦＡのグラジエントを用いた、分取ＨＰＬＣによる精製により、Ｂ鎖Ｌｙｓ２８のアミンを介してリンカーが結合した、純粋なアジドリンカー－リスプロを得た（Ｚ＝Ｎ３、ｎ＝１、Ｒ１＝（４－メチルフェニル）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ３＝Ｍｅ、Ｙ＝不存在、および、Ｄ＝ＬｙｓＢ２８を介して結合したインスリンリスプロである、式（ＩＩ）の化合物）。
式（ＩＩ）の同様のリンカー－ペプチドは、ペプチドテデュグルチド、［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２を使用して、製造した。
実施例１６
インスリンリスプロ放出ＰＥＧコンジュゲート
Ｍ＝２０ｋＤａのＭｅＯ－ＰＥＧ、Ｚ＊＝トリアゾール、ｎ＝１、Ｒ１＝（４－メチルフェニル）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝Ｍｅ、Ｙ＝不存在、Ｄ＝ＬｙｓＢ２８を介して結合したインスリンリスプロ、およびｑ＝１、である、式（ＩＩＩ）の化合物
２０ｋＤａのメトキシ－ＰＥＧ－アミン（ＢｒｏａｄＰｈａｒｍ、１００ｍｇ、５μｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（３μＬ、１７μｍｏｌ）、および、（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメチルスクシンイミジルカーボネート（ＢＣＮ－ＯＳｕ、Ｓｉｇｍａ、２ｍｇ、７μｍｏｌ）の、１ｍＬのアセトニトリル溶液を、周囲温度で１時間撹拌し、次いで、エバポレートして乾燥させた。残渣を１ｍＬのＴＨＦに溶解し、溶液を１０ｍＬのＭＴＢＥに撹拌しながら加えた。沈殿したＰＥＧ－シクロオクチンを収集し、ＭＴＢＥで洗浄し、真空下で乾燥した。
実施例１５によるアジド－リンカー－インスリンリスプロ（１．１μｍｏｌ）、および、ＰＥＧ－シクロオクチン（２０ｍｇ、１μｍｏｌ）の、１ｍＬの１：１のイソプロパノール：クエン酸緩衝液（ｐＨ４）による混合物を、周囲温度で４時間保持し、次いで、１２～１４ｋＤａのカットオフのメンブレンを使用して、水に対して透析し、続いてメタノールに対して透析した。透析された生成物をエバポレートして乾燥して、Ｍ＝２０ｋＤａのＭｅＯ－ＰＥＧ、Ｚ＊＝トリアゾール、ｎ＝１、Ｒ１＝（４－メチルフェニル）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、Ｙ＝不存在、Ｄ＝ＬｙｓＢ２８を介して結合したインスリンリスプロ、およびｑ＝１である、式（ＩＩＩ）の化合物を得た。
０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９．４、３７℃）に溶解した場合、このコンジュゲートは、ｔ１／２＝２．０８時間で、遊離インスリンリスプロを放出した。これは、ｐＨ７．４、３７℃で、ｔ１／２＝２０８時間と推測される。
Ｒ１＝フェニル－ＳＯ２である関連するコンジュゲートを同様に製造し、０．１Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ９．４、３７℃）に溶解した場合、ｔ１／２＝０．８時間で、遊離インスリンリスプロを放出した。これは、ｐＨ７．４、３７℃で、ｔ１／２＝８０時間と推測される。
実施例１７
放出可能なインスリンリスプロを含む、ヒドロゲル
実施例１５のアジド－リンカー－インスリンリスプロを、実施例１４の分解性ＰＥＧヒドロゲルに結合させて、インスリンリスプロの徐放性デポ剤を得た。ＰＥＧヒドロゲルのために、プレポリマーＡは、（Ｎα－Ｂｏｃ－Ｎε－｛４－アジド－３，３－ジメチル－１－［（Ｎ，Ｎ－ジメチル）アミノスルホニル］－２－ブチルオキシカルボニル｝－Ｌｙｓ）４－ＰＥＧ１０ｋＤａであり、および、プレポリマーＢは、（（４－シクロオクチニルオキシ－カルボニル）アミノ）４－ＰＥＧ１０ｋＤａであり、これにより、Ｐ１およびＰ２が両方とも１０ｋＤａの４－アームポリ（エチレングリコール）であり、Ｚ＊＝トリアゾール、ｎ＝１、Ｒ１＝（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝ＣＨ３、および、Ｗ＝（ＣＨ２）ｘ－ＣＨ［（ＣＨ２）ｙＢ］－（ＣＨ２）ｚＣ（ここで、ｘ＝４、ｙ＝０、ｚ＝０、Ｂ＝ＮＨ２）、および、Ｃ＊＝カルボキサミド、である、式（ＩＶ）のＰＥＧヒドロゲルが得られた。このＰＥＧヒドロゲルは、ＰＣＴ公開ＷＯ２０１９／１５２６７２（参照により本明細書に組み込まれる）によって以前に記載されているようなマイクロスフェアとして形成された。
これらのヒドロゲルマイクロスフェア（Ｂ＝ＮＨ２）がアセトニトリル中で充填された懸濁液（ＴＮＢＳアッセイにより１０．８μｍｏｌのＮＨ２を含む、３．５ｇ）を、４．５時間、ＢＣＮ－ＯＳｕ（１６．２μｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４３．１μｍｏｌ）との反応により、リンカー－薬物の結合のために活性化した。無水酢酸（１０．８μｍｏｌ）を加えて、未反応のアミン基をキャップし、２時間後、スラリーを１１ｍＬのアセトニトリルで５回洗浄し、続いて、１１ｍＬの薬物ロード溶媒（１：１のｉＰｒＯＨ：Ｈ２Ｏ中、１００ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ３．０）で５回洗浄した。最終的に充填されたスラリーは、７．３μｍｏｌのシクロオクチン（Ｂ＝［（１Ｒ，８Ｓ，９ｓ）－ビシクロ［６．１．０］ノナ－４－イン－９－イルメトキシカルボニル］アミノ）を含む、～５．６ｍＬであった。
活性化ヒドロゲルマイクロスフェア、およびアジド－リンカー－インスリンリスプロの、薬物ロード溶媒の混合物を、２４時間穏やかに混合し、次いで、懸濁液を反応緩衝液で繰り返し洗浄して、未反応のアジド－リンカー－インスリンリスプロ、および反応副生成物を除去した。最終的なマイクロスフェア調製物は、１．５μｍｏｌ／ｍＬのインスリンリスプロを含み、これは、ｐＨ７．４、３７℃において、ｔ１／２＝３５０時間で放出された。
実施例１８
放出可能なエキセナチドを含む、ヒドロゲル
Ｐ１およびＰ２がともに１０ｋＤａの４－アームポリ（エチレングリコール）であり、Ｚ＊＝トリアゾール、ｎ＝１、Ｒ１＝（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）ＳＯ２、Ｒ２＝Ｈ、各Ｒ４＝ＣＨ３、および、Ｗ＝（ＣＨ２）ｘ－ＣＨ［（ＣＨ２）ｙＢ］－（ＣＨ２）ｚＣ（ここで、ｘ＝４、ｙ＝０、ｚ＝０、Ｂ＝ＮＨ２）、および、Ｃ＊＝カルボキサミドである、実施例１４の分解性ヒドロゲルを、シクロオクチニルスクシンイミジルカーボネート（５ＨＣＯ－ＯＳｕ）との反応により、活性化し、次いで、実施例５のアジド－リンカー－エキセナチド［Ｎ２８Ｑ］を結合させた。１０．３μｍｏｌのアミンを含む、ＭｅＣＮに充填されたアミノマイクロスフェアスラリー（１．２ｍＬ）を、原液のトリエチルアミン（４１．１μｍｏｌ）、および５ＨＣＯ－ＮＨＳ（１５．４μｍｏｌ）と組み合わせた。反応を１８時間転倒回転させて混合し、定性的ＴＮＢＳテストで、アミンのロードを確認した（一般的方法において説明）。無水酢酸を加え（１当量、１０．３μｍｏｌ）、残留している遊離アミンをキャップし、２時間の反応後、スラリーを、６ｍＬのアセトニトリルで５回洗浄した。最終的に充填されたスラリーは、１０．３μｍｏｌの５ＨＣＯを含む、１．４ｍＬであった。風袋を量った２つの１０ｍＬシリンジに、～９μｍｏｌの５ＨＣＯを含む、～１ｇの５ＨＣＯ－マイクロスフェアスラリーのＭｅＣＮ液を、充填した。スラリーを、６．５ｍＬの反応溶媒（１：１のＤＭＳＯ：Ｈ２Ｏ中１００ｍＭのクエン酸塩、ｐＨ３．０）で、４回洗浄した。Ｎ３－ペプチドを、５ＨＣＯ（１１μｍｏｌのＮ３）に対して１．２当量で、充填スラリーに添加し、３７℃で１８時間、撹拌しながらインキュベートした。
ロードされたマイクロスフェアを、６．５ｍＬの反応溶媒で５回洗浄し（最終洗浄のＯＤ２８０は検出未満であった）、続いて、等張酢酸緩衝液（１０ｍＭ酢酸ナトリウム、１４３ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％ポリソルベート２０（ｗ／ｖ）、ｐＨ５．０）で３回、および、０．８％カルボキシメチルセルロースナトリウムを含む等張酢酸緩衝液で２回、洗浄した。ペイロード濃度およびロードされた画分は、９容量（～４５０μＬ）の５０ｍＭのＮａＯＨに、～５０μＬの充填スラリー（～５０ｍｇ）を、周囲温度で１時間、可溶化することによって決定した。ペイロード含有量は、［Ｇｌｎ２８］エキセナチド（Ｅ＝５５００Ｍ－１ｃｍ－１）の２８０ｎｍでの吸光度によって測定した。同様のＮａＯＨ可溶化サンプルでＰＥＧアッセイを実施して、各構成物のＰＥＧ濃度を測定し、ペプチド濃度と比較して画分のロードを決定した。
ロードされたマイクロスフェアのサンプル（～５０ｍｇ）を、１．５ｍＬのスクリュートップマイクロ遠心チューブに入れ、１９容量（０．９５ｍＬ）の１００ｍＭホウ酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．４）を３７℃で加えることにより、放出速度論／脱ゲル化反応を開始した。できるだけ多くの時点を捕捉するために、各コンジュゲートに対して２つの反応を、１８時間間隔で開始した。３７℃で、反応物を、水浴中で振とうしながらインキュベートした。ｔ＝０、およびさまざまな時点で、マイクロスフェアスラリーを、２０，０００×ｇでペレット化し、マイクロスフェアペレットの視覚的な存在または不存在を記録し、２０μＬの反応上清を取り出し、４μＬの４Ｍ酢酸を添加してクエンチし、そして、サンプルを－２０℃で保存した。反応上清中のエキセナチド［Ｎ２８Ｑ］の濃度は、ＮａｎｏｄｒｏｐＵＶ－Ｖｉｓによる、２８０ｎｍでの吸光度によって決定した。マイクロスフェアの状態も、視覚的に、各時点で記録した（固体／存在または可溶化／消失）。時点の上清のＡ２８０をプロットし、単一の指数関数に適合させて、各ペプチドの放出速度を決定した。上清サンプルに対してＰＥＧアッセイを実施して、各時点での可溶ＰＥＧ濃度を測定し、可溶化／逆ゲル化曲線を作成した。マイクロスフェアのアッセイにより、５．１９μｍｏｌ／ｍＬのペプチド含有量が示され、これは、利用可能なＢ部位の９５％ロードに対応するものであった。ｐＨ９．４、３７℃で、これらのヒドロゲルマイクロスフェアは、ｔ１／２＝１７．５時間で、エキセナチド［Ｎ２８Ｑ］を放出し、３２時間の脱ゲル時間で溶解した。
同様のエキセナチド放出ヒドロゲルは、実施例１７に示されるように、活性化工程で使用するシクロオクチニルスクシンイミジルカーボネートを、ＢＣＮ－ＯＳｕに置き換えることによって、製造される。
これらのエキセナチド放出ヒドロゲルマイクロスフェアは、図７に示される一般式を有しており、ここで、Ｐ１およびＰ２は、それぞれ４－アームのポリ（エチレングリコール）であり、Ｚ＊は、トリアゾールであり、Ｃ＊は、カルボキサミドであり、Ｂ＊は、トリアゾールであり、および、Ｌ－Ｄは、式（ＩＩ）のリンカー－薬物の残基である。
実施例１９
リンカー－オリゴヌクレオチドの製造
ホスホロチオエートＣｐＧオリゴヌクレオチドＴＬＲ９受容体アゴニストのコンジュゲートを、以下のように製造した。
Figure 2022526985000041
工程１
Ｎ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－ＯＨ
グリシン（１８ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の０．５６ｍＬのＨ２Ｏ溶液を、１ＭのＮａＯＨ水溶液（０．２４ｍＬ、０．２４ｍｍｏｌ）、１ＭのＮａＨＣＯ３水溶液（０．２０ｍＬ、０．２０ｍｍｏｌ）、および、４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルスクシンイミジルカーボネート（９２ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、最終濃度０．１Ｍ）の１．０ｍＬのＭｅＣＮ溶液で、順次に処理した。周囲温度で４５分間撹拌後、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）により、反応が完了したと判断した。反応物を、５ｍＬの１ＭのＫＨＳＯ４水溶液でクエンチし、次いで、２０ｍＬの１：１のＥｔＯＡｃ：Ｈ２Ｏで分液した。水相を５ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機相を、Ｈ２Ｏおよび食塩水（各１０ｍＬ）で洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、ロータリーエバポレーションにより濃縮して、粗製の表題の化合物（８５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、定量的粗収量）を、濁ったフィルムとして得た。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：９８．６％（ＲＶ＝９．４２ｍＬ）。ｎＬＣ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：３５Ｃｌの計算値４１７．１；測定値４１７．０ ［Ｍ－Ｈ］－；３７Ｃｌの計算値４１９．１；測定値、４１９．１ ［Ｍ－Ｈ］－。
工程２
Ｎ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－ＯＳｕ
ジシクロヘキシルカルボジイミド（キシレン中６０％、２．６Ｍ、１００μＬ、０．２６ｍｍｏｌ）を、Ｎ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－ＯＨ（８５ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ、最終濃度０．１Ｍ）、および、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（３０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）の、１．９ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２溶液に、加えた。反応懸濁液を周囲温度で撹拌し、Ｃ１８－ＨＰＬＣ（ＥＬＳＤ）によってモニタリングした。１時間後、反応混合物を、綿栓を通して濾過し、濾液を、ＳｉｌｉａＳｅｐ４ｇカラムに載せた。生成物を、ヘキサン中アセトンの段階的勾配（０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％；各２５ｍＬ）で溶出した。精製された生成物を含む画分を合わせて濃縮し、表題の化合物（７４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ、収率７０％）を、濁ったフィルムとして得た。その後、生成物を１．４ｍＬのＭｅＣＮに溶解し、－２０℃で保存した。
Ｃ１８－ＨＰＬＣ、純度はＥＬＳＤによって決定した：９２．７％（ＲＶ＝１０．００ｍＬ）。主な不純物は、加水分解生成物（７．３％、＠９．４２ｍＬ ＲＶ）であり、ＨＰＬＣクロマトグラフィー中に生成した可能性がある。
工程３
３’－｛Ｎ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－アミノアルキル｝－ＣｐＧ－５’
１５ｍＬのＦａｌｃｏｎチューブにおいて、０．７８ｍＭのＣｐＧ－３’－ＮＨ２（９００μＬ、０．７０μｍｏｌ、最終濃度０．５ｍＭ）の、０．１１ＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．６５、２２℃）溶液を、３４０μＬの０．１１ＭのＨＥＰＥＳ（最終１００ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、３７℃）で希釈した。溶液を、３７℃の水浴中で３０分間温め、次いで、１００ｍＭのＮ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－ＯＳｕ（１４０μＬ、１４μｍｏｌ、最終濃度１０ｍＭ）のＤＭＦ溶液で、処理した。反応を３７℃に保ち、Ｃ１８－ＨＰＬＣで定期的にモニタリングした。出発物質は、３０分以内に、～９０％で単一の生成物ピークに変換された。反応物を、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水で１０ｍＬに希釈し、２．５ｍＬの溶液を４つのＮＡＰ－２５カラムのそれぞれに載せた。オリゴヌクレオチドを、製造元のプロトコルに従って、３．５ｍＬのＭｉｌｌｉ－Ｑ水で各カラムから溶出させ、溶出液を合わせることにより、Ａ２６０Ｈ２Ｏ［ｃｏｎｃ＝０．６５／（２９０３００）＊１００／５］で判断して、４５μＭの総オリゴヌクレオチドの溶液（１４．０ｍＬ、０．６３μｍｏｌ総オリゴ；９１％リンカー－オリゴ、Ｃ１８－ＨＰＬＣによる）を得た。次いで、２つのＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－４、１０ｋＤａスピンフィルターを使用して、オリゴ溶液を１．４ｍＬに濃縮し、Ａ２６０Ｈ２Ｏ［ｃｏｎｃ＝０．６４／（２９０３００）＊１０００／５］で判断して、０．４４ｍＭの総オリゴヌクレオチドを含む溶液（１．４ｍＬ、０．６２μｍｏｌの総オリゴ）を得た。
Ｃ１８ＨＰＬＣ純度は２６０ｎｍで決定した：９０．９％（ＲＶ＝５．９８ｍＬ）。Ｍａｖ、１０２８４（計算値）；測定値１０２８２Ｄａ（ＥＳＩ）。
Ｒ１＝メチルスルホニル、および、Ｒ１＝フェニルスルホニルである、対応するリンカー－オリゴヌクレオチドを同様に製造した。
実施例２０
コンジュゲートしたリンカー－オリゴヌクレオチドの製造
Figure 2022526985000042
 ３’－［４－分岐－ＰＥＧ４０ｋＤａ－ＢＣＮ／Ｎ３－（ＧＤＭ ４－ＣｌＰｈＳＯ２）－Ｇｌｙ－アミノアルキル］－ＣｐＧ－５’、１３４ＢＨ３２
１．５ｍＬスクリューキャップエッペンドルフチューブにおいて、３’－｛Ｎ－［４－アジド－３，３－ジメチル－１－（４－クロロフェニル）－スルホニル－２－ブチルオキシカルボニル］－Ｇｌｙ－アミノアルキル｝－ＣｐＧ－５’（０．４４ｍＭの総オリゴ、１．００ｍＬ、０．４４μｍｏｌの総オリゴ）の溶液を、１２１μＬの０．３ＭのＭＥＳバッファーｐＨ６．０（最終バッファー濃度３０ｍＭ）で、希釈した。次に、５ｍＭの４分岐ＰＥＧ４０ｋＤａ－ＢＣＮ（８８μＬ、０．４４μｍｏｌ、最終濃度０．３６ｍＭ）のＭｅＣＮ溶液を加えた。反応物を周囲温度に保ち、Ｃ１８－ＨＰＬＣでモニタリングした。出発物質は、より遅い溶出の単一の生成物ピークに変換された。１８時間後、反応混合物には～６０％の生成物が含まれていた。反応チューブを３２℃の加熱ブロックに入れ、２４時間撹拌し、その後、反応混合物は～６７％の生成物を含んでいた。混合物を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ１８分取カラム（１５０×２１．２ｍｍ）に載せ、生成物を、５０ｍＭのＥｔ３Ｎ・ＨＯＡｃ（ｐＨ７．０）中のＭｅＣＮ２０％～９５％で、２０分かけて（８ｍＬ／ｍｉｎ）、溶出した。精製した生成物を含む画分を合わせ、ロータリーエバポレーションによってＭｅＣＮを除去して、Ａ２６０Ｈ２Ｏ［ｃｏｎｃ＝０．８０／２９０３００）／０．２ｃｍ ｐａｔｈ］で判断して、１４μＭの総オリゴ（１５ｍＬ、０．２１μｍｏｌ）を含む水溶液を得た。２つのＡｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５、１０ｋＤａスピンフィルターを使用して、水溶液をさらに濃縮し、Ａ２６０Ｈ２Ｏ［ｃｏｎｃ＝０．２６／（２９０３００）＊１０００／５］で判断して、０．１８ｍＭの総オリゴヌクレオチドを含む溶液（１．４ｍＬ、０．２５μｍｏｌ、収率７１％）を得た。
Ｃ１８ＨＰＬＣ純度は２６０ｎｍで決定した：９７．２％（ＲＶ＝８．２６ｍＬ）。
実施例２１
コンジュゲートからのオリゴヌクレオチド放出の速度論
複数のセプタムでキャップした１．５ｍＬガラスＨＰＬＣバイアルにおいて、８００μＬの１２５ｍＭホウ酸緩衝液（ｐＨ９．０、＠３７℃）、および１８２μＬのＨ２Ｏを、３７℃オートサンプラーで３０分以上温めた。Ｒ１＝（４－クロロフェニル）スルホニルである、実施例１９のコンジュゲートの水溶液（１１０μＭの総オリゴ、１８μＬ、総オリゴ最終濃度２μＭ）を、それぞれに加え、切断反応をＣ１８－ＨＰＬＣによって定期的にモニタリングした。生成物の形成、２６０ｎｍ総面積の一部としてのＣｐＧ－３’－ＮＨ２ ＨＰＬＣピーク面積（２６０ｎｍ）を、時間に対してプロットして、平均ｔ１／２＝１．２時間が得られ、これは、ｐＨ７．４で、４８時間と推測された。
本明細書に開示されたすべての参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。

Claims (32)

  1. 式（Ｉ）
    Figure 2022526985000043
     （Ｉ）
    ［式中、
    ｎは、０～６の整数であり；
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、電子求引基であり；
    各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、２つのＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって３～６員環を形成し；
    Ｘは、脱離基であり；および、
    Ｚは、リンカーを高分子担体に接続するための官能基である。］
    で示される、リンカー。
  2. Ｘが、ハロゲン、活性エステル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌであり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、任意に置換されていてもよいアリール、または任意に置換されていてもよいヘテロアリールである、請求項１に記載のリンカー。
  3. Ｘが、ハロゲン、Ｎ－スクシンイミジルオキシ、ニトロフェノキシ、ペンタハロフェノキシ、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、または、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２Ｃｌである、請求項１または２に記載のリンカー。
  4. Ｚが、アミン、アミノオキシ、ケトン、アルデヒド、マレイミジル、チオール、アルコール、アジド、１，２，４，６－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、シクロオクチニル、および、それらの保護された変形基からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか１項に記載のリンカー。
  5. Ｒ１およびＲ２の電子求引基が、
    －ＣＮ；
    －ＮＯ２；
    任意に置換されていてもよいアリール；
    任意に置換されていてもよいヘテロアリール；
    任意に置換されていてもよいアルケニル；
    任意に置換されていてもよいアルキニル；
    －ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または、－ＳＯ２Ｒ３、
    ［ここで、Ｒ３は、Ｈ、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８、または－ＮＲ８ ２であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒にヘテロ環を形成する。］；または、
    ＳＲ９、
    ［ここで、Ｒ９は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。］
    である、請求項１～４のいずれか１項に記載のリンカー。
  6. Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つが、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３である、請求項１～５のいずれか１項に記載のリンカー。
  7. 各Ｒ４が、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルである、請求項１～６のいずれか１項に記載のリンカー。
  8. 式（ＩＩ）
    Figure 2022526985000044
     （ＩＩ）
    ［式中、
    ｎは、０～６の整数であり；
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、電子求引基であり；
    各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、２つのＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって３～６員環を形成し；
    Ｚは、リンカー－薬物を高分子担体に接続するための官能基であり；
    Ｄは、薬物であり；および、
    Ｙは、Ｄがアミンを介して接続された薬物である場合、存在せず、あるいは、Ｙは、Ｄが、フェノール、アルコール、チオール、チオフェノール、イミダゾール、または非塩基性アミンを介して接続された薬物である場合、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２－であり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、または、任意に置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、である。］
    で示される、リンカー－薬物。
  9. Ｚが、アミン、アミノオキシ、ケトン、アルデヒド、マレイミジル、チオール、アルコール、アジド、１，２，４，６－テトラジニル、トランス－シクロオクテニル、ビシクロノニニル、シクロオクチニル、および、それらの保護された変形基からなる群から選択される、請求項８に記載のリンカー－薬物。
  10. Ｄが、オクトレオチド（配列番号５）、［Ｎ２８Ｑ］エキセナチド（配列番号１）、インスリンリスプロ（Ａ鎖：配列番号２；Ｂ鎖：配列番号３；ジスルフィド架橋：Ａ６－Ａ１１、Ａ７－Ｂ７、Ａ２０－Ｂ１９）、および、テデュグルチド（［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２）（配列番号４）、からなる群から選択されるペプチドである、請求項８または９に記載のリンカー－薬物。
  11. Ｒ１およびＲ２の電子求引基が、
    －ＣＮ；
    －ＮＯ２；
    任意に置換されていてもよいアリール；
    任意に置換されていてもよいヘテロアリール；
    任意に置換されていてもよいアルケニル；
    任意に置換されていてもよいアルキニル；
    －ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または、－ＳＯ２Ｒ３、
    ［ここで、Ｒ３は、Ｈ、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８、または－ＮＲ８ ２であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒にヘテロ環を形成する。］；または、
    ＳＲ９、
    ［ここで、Ｒ９は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。］
    である、請求項８～１０のいずれか１項に記載のリンカー－薬物。
  12. Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つが、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３である、請求項８～１１のいずれか１項に記載のリンカー－薬物。
  13. 各Ｒ４が、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルである、請求項８～１２のいずれか１項に記載のリンカー－薬物。
  14. 式（ＩＩＩ）
    Figure 2022526985000045
     （ＩＩＩ）
    ［式中、
    ｎは、０～６の整数であり；
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、電子求引基であり；
    各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、２つのＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって３～６員環を形成し；
    Ｄは、薬物であり；および、
    Ｙは、Ｄがアミンを介して接続された薬物である場合、存在せず、あるいは、Ｙは、Ｄが、フェノール、アルコール、チオール、チオフェノール、イミダゾール、または非塩基性アミンを介して接続された薬物である場合、－Ｎ（Ｒ６）ＣＨ２－であり、ここで、Ｒ６は、任意に置換されていてもよいＣ１－Ｃ６アルキル、または、任意に置換されていてもよいアリールまたはヘテロアリール、であり；
    Ｍは、高分子担体であり、
    ｑは、Ｍが可溶性高分子の場合、１～１０の整数であり、あるいは、ｑは、Ｍが不溶性マトリックスの場合、多数であり；および、
    Ｚ＊は、Ｍへの結合部を示す。］
    で示される、コンジュゲート。
  15. Ｍが、可溶性高分子であり、ｑが、１～１０の整数である、請求項１４に記載のコンジュゲート。
  16. Ｍが、不溶性マトリックスであり、ｑが、多数である、請求項１４に記載のコンジュゲート。
  17. Ｚ＊が、カルボン酸アミド、オキシム、１，２，３－トリアゾール、チオエーテル、チオスクシンイミド、またはエーテルを含む、請求項１４～１６のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  18. Ｒ１およびＲ２の電子求引基が、
    －ＣＮ；
    －ＮＯ２；
    任意に置換されていてもよいアリール；
    任意に置換されていてもよいヘテロアリール；
    任意に置換されていてもよいアルケニル；
    任意に置換されていてもよいアルキニル；
    －ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または、－ＳＯ２Ｒ３、
    ［ここで、Ｒ３は、Ｈ、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８、または－ＮＲ８ ２であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒にヘテロ環を形成する。］；または、
    ＳＲ９、
    ［ここで、Ｒ９は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。］
    である、請求項１４～１７のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  19. Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つが、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３である、請求項１４～１８のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  20. 各Ｒ４が、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルである、請求項１４～１９のいずれか１項に記載のコンジュゲート。
  21. 式（ＩＶ）
    Figure 2022526985000046
     （ＩＶ）
    ［式中、
    ｎは、０～６の整数であり；
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、電子求引基、アルキル、またはＨであり、ここで、Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つは、電子求引基であり；
    各Ｒ４は、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルであるか、または、２つのＲ４は、それらが結合する炭素原子と一緒になって３～６員環を形成し；
    Ｗは、存在しないか、あるいは、
    Figure 2022526985000047
     であり、
    ここで、ｘ、ｙ、およびｚのそれぞれは、独立して、０～６の整数であり、Ｂは、－ＮＨ２、－ＯＮＨ２、ケトン、アルデヒド、－ＳＨ、－ＯＨ、－ＣＯ２Ｈ、カルボキサミド基、または、シクロオクチンまたはビシクロノニンを含む基、であり、および、Ｃ＊は、カルボキサミド、チオエーテル、チオスクシンイミジル、トリアゾール、またはオキシムであり；および、
    Ｐ１およびＰ２は、独立して、ｒ－アームポリマーであり、ここで、ｒは、２～８の整数である。］
    で示される、ヒドロゲル。
  22. Ｐ１およびＰ２が、両方、４－アームポリマーである、請求項２１に記載のヒドロゲル。
  23. Ｒ１およびＲ２の電子求引基が、
    －ＣＮ；
    －ＮＯ２；
    任意に置換されていてもよいアリール；
    任意に置換されていてもよいヘテロアリール；
    任意に置換されていてもよいアルケニル；
    任意に置換されていてもよいアルキニル；
    －ＣＯＲ３、－ＳＯＲ３、または－ＳＯ２Ｒ３、
    ［ここで、Ｒ３は、Ｈ、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキル、－ＯＲ８、または－ＮＲ８ ２であり、ここで、各Ｒ８は、独立して、Ｈ、または任意に置換されていてもよいアルキルであるか、または、２つのＲ８基は、それらが結合する窒素と一緒にヘテロ環を形成する。］；または、
    ＳＲ９、
    ［ここで、Ｒ９は、任意に置換されていてもよいアルキル、任意に置換されていてもよいアリール、任意に置換されていてもよいアリールアルキル、任意に置換されていてもよいヘテロアリール、または、任意に置換されていてもよいヘテロアリールアルキルである。］
    である、請求項２１または２２に記載のヒドロゲル。
  24. Ｒ１およびＲ２のうちの少なくとも１つが、－ＣＮ、または－ＳＯ２Ｒ３である、請求項２１～２３のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
  25. 各Ｒ４が、独立して、Ｃ１－Ｃ３アルキルである、請求項２１～２４のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
  26. 請求項８～１３のいずれか１項に記載のリンカー－薬物を介して、ヒドロゲルに結合した薬物をさらに含む、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のヒドロゲル。
  27. 薬物が、オクトレオチド（配列番号５）、［Ｎ２８Ｑ］エキセナチド（配列番号１）、インスリンリスプロ（Ａ鎖：配列番号２；Ｂ鎖：配列番号３；ジスルフィド架橋：Ａ６－Ａ１１、Ａ７－Ｂ７、Ａ２０－Ｂ１９）、および、テデュグルチド（［Ｇｌｙ２］ＧＬＰ－２）（配列番号４）、からなる群から選択されるペプチドである、請求項２６に記載のヒドロゲル。
  28. 下記の工程：
    リンカー－薬物が形成される条件下、請求項１～７のいずれか１項に記載のリンカーに、薬物を接触させること、および
    任意に、リンカー－薬物を単離すること、
    を含む、請求項８～１３のいずれか１項に記載のリンカー－薬物を製造する方法。
  29. 基Ｚと基Ｚ’が反応して残存結合官能基Ｚ＊を形成する条件下、請求項８～１３のいずれか１項に記載のリンカー－薬物を、関連の反応性基Ｚ’を含む高分子担体と、反応させることを含む、請求項１４～２０のいずれか１項に記載のコンジュゲートを製造する方法。
  30. 下記の工程：
    （ａ）各アームが、反応性官能基Ｚを含む請求項１～７のいずれか１項に記載のリンカーで終端となっている、マルチアームポリマーを含む、式（Ｖ）
    Figure 2022526985000048
     （Ｖ）
    で示される、第１のプレポリマーを提供すること；
    （ｂ）各アームが、Ｚと反応する関連の反応性官能基Ｚ’で終端となっている、マルチアームポリマーを含む、第２のプレポリマーを提供すること；
    （ｃ）ＺとＺ’が反応して残存結合官能基Ｚ＊を形成する条件下、前記２つのポリマーを混合すること；および、任意に、
    （ｄ）得られたヒドロゲルを単離すること、
    を含む、請求項２１～２５のいずれか１項に記載のヒドロゲルを製造する方法。
  31. 請求項２１～２５のいずれか１項のヒドロゲルを、請求項８～１３のいずれか１項に記載のリンカー－薬物と反応させることを含み、ここで、ヒドロゲル上の官能基Ｂが、リンカー－薬物上の基Ｚと反応して、コンジュゲートを形成する、薬物放出分解性ヒドロゲルコンジュゲートを製造する方法。
  32. 工程（ａ）が、さらに下記：
    リンカー－薬物のＺ基が、基Ｂとの反応を介して第１のプレポリマーに結合する条件下、式（Ｖ）の第１のプレポリマーを、請求項８～１３のいずれか１項に記載のリンカー－薬物と反応させること、
    を含む、請求項３０に記載の方法。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114615978A (zh) * 2019-08-28 2022-06-10 普罗林科斯有限责任公司 Dna损伤响应的偶联抑制剂
AU2020419444A1 (en) 2020-01-03 2022-06-09 Ascendis Pharma A/S Conjugates undergoing intramolecular rearrangements
BR112022010419A2 (pt) 2020-01-13 2022-08-23 Ascendis Pharma Bone Diseases As Tratamento de hipoparatireoidismo
AU2021269007A1 (en) 2020-05-04 2022-11-24 Ascendis Pharma A/S Hydrogel irradiation
MX2022014082A (es) 2020-06-03 2022-12-07 Ascendis Pharma Oncology Div A/S Secuencias de interleucina (il-2) y usos de las mismas.
WO2022029178A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Ascendis Pharma A/S Conjugates comprising reversible linkers and uses thereof
US20230340055A1 (en) 2020-08-28 2023-10-26 Ascendis Pharma Oncology Division A/S Glycosylated il-2 proteins and uses thereof
US20230364199A1 (en) 2020-09-28 2023-11-16 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Improvement of physical and mental well-being of patients with hypoparathyroidism
BR112023018802A2 (pt) 2021-04-01 2023-10-31 Ascendis Pharma As Uso de hormônio de crescimento de ação prolongada para o tratamento de doenças induzidas por inflamação
AU2022350937A1 (en) 2021-09-22 2024-03-21 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Long-acting pth compound treatments
WO2024094673A1 (en) 2022-11-02 2024-05-10 Ascendis Pharma Bone Diseases A/S Pth treatment regimen comprising two pth compounds

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62281867A (ja) * 1986-01-16 1987-12-07 Otsuka Chem Co Ltd イミダゾ−ルカルボン酸エステル誘導体、その製造方法及び該誘導体を有効成分とする殺菌剤
WO1999043656A1 (fr) * 1998-02-25 1999-09-02 Maruho Kabushikikaisha Derives de propylamine et utilisation
US6413507B1 (en) * 1999-12-23 2002-07-02 Shearwater Corporation Hydrolytically degradable carbamate derivatives of poly (ethylene glycol)
WO2001064650A2 (en) * 2000-03-01 2001-09-07 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Center Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
AU2003224644A1 (en) * 2002-02-27 2003-09-09 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Healtan Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
US7943593B2 (en) * 2002-12-06 2011-05-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions comprising inhibitors of IMPDH enzyme
WO2011140392A1 (en) * 2010-05-05 2011-11-10 Prolynx Llc Controlled drug release from solid supports
CN103025165B (zh) * 2010-05-05 2016-06-08 普罗林科斯有限责任公司 自大分子共轭物的控释
US9649385B2 (en) * 2011-09-07 2017-05-16 Prolynx Llc Hydrogels with biodegradable crosslinking
EP2768856A4 (en) * 2011-10-18 2015-05-27 Prolynx Llc PEG CONJUGATES OF EXENATIDE
US10016411B2 (en) * 2013-10-04 2018-07-10 Prolynx Llc Slow-release conjugates of SN-38
MA40030A (fr) * 2014-06-03 2015-12-10 Jiarui Biopharmaceuticals Ltd Conjugués peptide-médicament

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