JP2022523919A - 神経変性疾患を治療するための物質および方法 - Google Patents

Abstract

フェノフィブラートとケンフェロールの組み合わせを投与することによる神経変性疾患の治療のための物質および方法が本明細書に記載される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる２０１９年２月５日出願の米国仮特許出願第６２／８０１，２７１号の優先権の利益を主張する。

政府支援の声明
本発明は、米国陸軍医学研究取得活動（ＵＳＡＭＲＡＡ）によって授与されたＷ８１ＸＷＨ－１４－１－０１２３の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明におけるある特定の権利を有する。

本開示は、神経変性疾患の治療を必要とする対象における神経変性疾患を治療する方法に関する。

神経変性疾患は、散発性または家族性であり、加齢とともに発生が増加する可能性がある。したがって、平均寿命が人口全体で増加するにつれて、神経変性疾患の発生が増加する。４人のアメリカ人のうちの１人が、彼らの生涯で神経変性状態を発症すると予測されている。しかし、一般的に、状態を引き起こす根本的なメカニズムは十分に理解されておらず、神経変性疾患を予防または治療するために利用できる効果的な治療オプションはほとんどない。

神経変性状態は、さまざまな程度の神経炎症を特徴とする。さらに、これらの障害には、主要ミトコンドリア制御因子、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）コアクチベーター－１アルファ（ＰＧＣ－１α）の機能不全または調節不全を含む、ミトコンドリアの機能不全または調節不全が含まれることが示されている。ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体（ＰＰＡＲ）アイソフォーム（例えば、α、β／δ、γ）、特にＰＰＡＲαおよびＰＰＡＲ－γは、主に抗炎症効果、増強されたミトコンドリア機能、およびＡＤ、ＰＤ、ＨＤ、ＡＬＳの動物モデルの神経保護性抗酸化遺伝子の誘導、ならびに外傷性脳損傷（ＴＢＩ）［１～６］を通じて神経保護性であることが実証されている。ＰＧＣ－１αは、ＰＰＡＲと提携して調節する転写コアクチベーターであり、とりわけミトコンドリアの生合成と細胞呼吸に関与する遺伝子を誘導する［７］。これらのＰＧＣ－１α調節活性は、ＰＤ、ＡＤ、ＡＬＳなどの神経変性状態の対象の脳で低下する［８～１０］。

一態様では、対象における神経変性疾患を治療するための方法であって、フェノフィブラートおよびケンフェロールを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法が本明細書に記載される。フェノフィブラートとケンフェロールは、同時にまたは連続して投与することができる。

別の態様において、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への初回通過代謝を防止／低下させ、それにより、フェノフィブラートの初回通過代謝を低下させるのに十分なモル比でフェノフィブラートおよびケンフェロールの組み合わせを投与することを含む、対象におけるフェノフィブラートのレベルを増大させる方法が本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートのレベルは、対象の脳および／または内臓において増強される。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、対象に標準治療治療薬を投与することをさらに含む。神経変性疾患の治療のための例示的な標準治療治療薬には、標準治療治療薬はドーパミン前駆体、ドーパミンアゴニスト、抗コリン作動薬、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＯＭＴ阻害剤、アマンタジン、リバスチグミン、ＮＭＤＡアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、リルゾール、抗精神病剤、抗うつ剤、またはテトラベナジンおよびそれらの誘導体が含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態において、方法は、治療を受けている対象が、対照対象と比較して、ＰＧＣ－１α発現のレベルが低下していることを決定することを含む。

いくつかの実施形態において、フェノフィブラートおよびケンフェロールは、一定のモル比で投与される。例えば、いくつかの実施形態において、ケンフェロールに対するフェノフィブラートのモル比は、１．２：１、２：１、３：１または４：１である。いくつかの実施形態において、ケンフェロールに対するフェノフィブラートのモル比は３：１である。

いくつかの実施形態において、フェノフィブラートおよびケンフェロールの投与は、フェノフィブラート単独での治療と比較して、脳内のフェノフィブラートのレベルを増加させ、脳または中枢神経系の酸化ストレス剤のレベルを低下させ、および／または脳または中枢神経系の炎症のレベルを低下させる。

いくつかの実施形態において、対象は神経変性疾患と診断されている。いくつかの実施形態において、対象は神経変性疾患を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は初期段階の神経変性疾患を有する。例示的な神経変性疾患には、これらに限定されないが、神経変性疾患は、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群、家族性認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン病、多発性硬化症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、前頭側頭型認知症、網膜神経変性症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および外傷性脳損傷（ＴＢＩ）が含まれる。いくつかの実施形態において、パーキンソンプラス症候群は、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）である。

別の態様において、神経細胞または神経前駆細胞をフェノフィブラートおよびケンフェロールと接触させることを含む、神経細胞または神経前駆細胞においてＰＧＣ－１α発現を誘導する方法が本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、接触させるステップはインビボである。いくつかの実施形態において、ＰＧＣ－１αの誘導は、ＰＰＡＲαに依存しない。いくつかの実施形態において、神経細胞はニューロン（例えば、ドーパミン作動性ニューロン、または対象の皮質、線条体または脊髄からのニューロン）である。いくつかの実施形態において、神経細胞はグリア細胞または星状細胞である。

本明細書に記載の方法のいずれにおいても、フェノフィブラートおよびケンフェロールの投与は神経保護的である。いくつかの実施形態において、神経保護は、脳の黒質領域における神経細胞の活性または数を増加させること、および／または線条体における正の末端の喪失を減少させることを含む。

いくつかの実施形態において、ケンフェロールは、天然源（例えば、ケンフェロールを含む植物または植物抽出物）に由来する。いくつかの実施形態において、天然の供給源または抽出物は緑茶である。

フェノフィブラートが、ＰＧＣ－１αＷＴおよびＰＧＣ－１αヘテロ接合ＫＯマウス由来の初代星状細胞におけるＬＰＳ誘発性炎症を阻害することを示している。ＰＧＣ－１αＷＴ（ＰＧＣ－１α＋／＋）（Ａ～Ｃ）およびＰＧＣ－１αヘテロ接合ＫＯ（ＰＧＣ－１α＋／－）（Ｄ～Ｆ）マウスに由来する初代星状細胞を、５、１０、および２０μＭのフェノフィブラートで一晩、続いてＬＰＳによって１時間処理した。全ＲＮＡを単離し、ＩＬ－１β（Ａ、Ｄ）、ＴＮＦ－α（Ｂ、Ｅ）およびＰＧＣ－１α（Ｃ、Ｆ）遺伝子発現をＲＴ－ＰＣＲにより決定した。ＰＧＣ－１αＷＴ初代ミクログリアでは、ＬＰＳ処理によりＩＬ－１βおよびＴＮＦ－αレベルが増加し、２０μＭでのフェノフィブラート処理によりこのＬＰＳ誘導ＩＬ－１β発現が有意に減少した（６０％）（Ａ）が、ＴＮＦ－αの変化（Ｂ）またはＰＧＣ－１α（Ｃ）の発現には失敗した。ＰＧＣ－１αヘテロ接合ＫＯ一次ミクログリアでは、ＬＰＳ治療はＩＬ－１βおよびＴＮＦ－αレベルを増加させ、フェノフィブラート治療はこのＬＰＳ誘発ＩＬ－１β発現を有意に減少させた（５５％）（Ｄ）が、ＴＮＦ－αの発現を変化させることはできなかった（Ｅ）。１０および２０μＭでのフェノフィブラート処理は、ＰＧＣ－１α発現を有意に増強した（１．５倍）（Ｆ）。＊＊＊ｐ＜０．０１、ＬＰＳ対ＤＭＳＯ；^#Ｐ＜０．０５、^##ｐ＜０．０１、^###ｐ＜０．００１、ＬＰＳ＋ｆｅｎｏ対ＬＰＳ、スチューデント・ニューマン・クールズ事後解析を有するＡＮＯＶＡ。 マウス初代星状細胞におけるフェノフィブラートを介した抗炎症作用には、ＰＰＡＲαは必要ない。全ＲＮＡとタンパク質を収集した。ＰＰＡＲα遺伝子発現はｑＲＴ－ＰＣＲによって決定され（図２Ａ）、タンパク質発現はウエスタンブロット分析によって決定された（図２Ｂ）。その後、１０ｎＭのＰＰＡＲα ｓｉＲＮＡをその後の実験に使用した。（図２Ｃ～２Ｅ）初代星状細胞を１０ｎＭのＰＰＡＲα ｓｉＲＮＡまたはスクランブルｓｉＲＮＡで３０時間処理した後、２０μＭのフェノフィブラートでさらに１８時間処理した。次に、細胞を０．１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで１時間処理した。全ＲＮＡは、ＰＰＡＲα（図２Ｃ）、ＩＬ－１β（図２Ｄ）、ＴＮＦα（図２Ｅ）遺伝子発現のために抽出された。＊ｐ＜０．０５、＊＊、ｐ＜０．０１、一元配置ＡＮＯＶＡとその後のボンフェローニ多重比較検定。 フェノフィブラートは、Ｃ５７／ＢＬナイーブマウスに経口投与した後、急速にフェノフィブリン酸に変換される。Ｃ５７／ＢＬマウスにフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与し、２、４、６、８時間後に脳、肝臓、血漿の試料を採取した。皮質（図３Ａ）、中脳（黒質）（図３Ｂ）、線条体（図３Ｃ）、肝臓（図３Ｄ）および血漿（図３Ｅ）のフェノフィブリン酸レベルを、質量分析を使用して決定した。試験したすべての脳組織および血漿試料において、フェノフィブラート投与の２～４時間後に、フェノフィブリン酸レベルが高かった。データは平均±ＳＥＭとして表される。 ＬＰＳ傷害に応答したＩＬ－１β遺伝子発現は、ＢＶ２細胞においてフェノフィブラートによって阻害されるが、フェノフィブリン酸では阻害されない。ＢＶ２細胞をフェノフィブリン酸（ＦＡ）、陰性対照ＤＭＳＯ、陽性対照フェノフィブラート（Ｆｅｎｏ）と１８時間インキュベートした後、０．１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳによる処理を１時間行った。次に、ＩＬ－１β遺伝子のｑＲＴ－ＰＣＲ分析のために全ＲＮＡを単離した。ＬＰＳ曝露はＩＬ－１β ｍＲＮＡ発現を６倍上昇させた。５、１０、２０μＭでのフェノフィブリン酸処理は上昇したＩＬ－１βレベルを低下させることができなかったが、フェノフィブラート処理（２０μＭ）はＩＬ－１βレベルを８０％有意に低下させた。＊＊ｐ＜０．０１、ＬＰＳ＋Ｆｅｎｏ対ＬＰＳスチューデント・ニューマン・クールズ事後解析を有するＡＮＯＶＡ。 ケンフェロールは組換えｈＣＥＳ１ｂを特異的に阻害し、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解を防ぐ。異なる濃度のフェノフィブラートを、組換えｈＣＥＳ１ｂ（０．０５ｍｇ／ｍＬ）を含むアッセイ混合物に添加し、８つの濃度のケンフェロール（０～５０μＭ）の１つと１００ｍｍ Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファー（ｐＨ７．４）で３７℃で２分間プレインキュベートし、１０分間の反応を開始した。反応を停止し、上澄みを収集し、フェノフィブリン酸レベルをＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。Ｋｉ値を計算し、酵素阻害モデルにデータをフィッティングさせることによって阻害のタイプを決定した：競合（図５Ａ）、非競合（図５Ｂ）、不競合（図５Ｃ）、および混合（図５Ｄ）モデル。試料は重複して分析され、平均値として表された。 ケンフェロールは、プールされたヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）におけるフェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解を防ぐ。異なる濃度のフェノフィブラートを、ＨＬＭ（１ｍｇ／ｍＬ）を含むアッセイ混合物に添加し、８つの濃度のケンフェロール（０～５０μＭ）の１つと１００ｍｍ Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファー（ｐＨ７．４）で３７℃で２分間プレインキュベートし、１０分間の反応を開始した。反応を停止し、上澄みを収集し、フェノフィブリン酸レベルをＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。Ｋｉ値を計算し、酵素阻害モデルにデータをフィッティングさせることによって阻害のタイプを決定した：競合（図６Ａ）、非競合（図６Ｂ）、不競合（図６Ｃ）、および混合（図６Ｄ）モデル。試料は重複して分析され、平均値として表された。 フェノフィブラートとケンフェロール（化合物Ｘ）の同時送達は、ＢＶ２細胞において相乗的な抗炎症効果を発揮した。ＢＶ２細胞を、２０μＭのフェノフィブラートおよび／または１０または２０μＭのケンフェロールとともに１８時間インキュベートし、次に０．１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳに１時間曝露した。細胞溶解物を収集し、ＲＴ－ＰＣＲによってＩＬ－１β（図７Ａ）およびＰＧＣ－１α（図７Ｂ）遺伝子発現のためにＲＮＡを単離した。（Ａ）ＬＰＳ曝露はＩＬ－１β ｍＲＮＡレベルを増加させ（５倍）、２０μＭフェノフィブラート処理は、このＩＬ－１β発現のＬＰＳ誘発性の増加を７０％減少させた。フェノフィブラートとケンフェロールの同時送達は、この抗炎症効果を相乗的に増加させ、ＬＰＳ誘発性のＩＬ－１β発現の増加を完全に無効にした。ケンフェロール治療のみ（１０、２０μＭ）は、ＬＰＳ誘発性のＩＬ－１β発現の増加を６０％（１０μＭ）および８５％（２０μＭ）減少させた。（図７Ｂ）２０μＭでのフェノフィブラート処理はＰＧＣ－１α発現を２倍増加させた。しかし、フェノフィブラート（２０μＭ）とケンフェロール（１０、２０μＭ）の同時投与はＰＧＣ－１αのアップレギュレーションを抑制した。ケンフェロール処理のみ（１０、２０μＭ）は、ＢＶ２細胞におけるＰＧＣ－１α発現を増強しなかった。＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、ＤＭＳＯコントロールと比較、^###ｐ＜０．００１、ＬＰＳ治療と比較、^$$$ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定によりフェノフィブラートのみの治療と比較。 組換えｈＣＥＳ１ｂ（図８Ａ）およびＨＬＭ（図８Ｂ）による、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解の標準曲線。異なる濃度のフェノフィブラートを、１００ｍｍ Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファー（ｐＨ７．４）中の組換えｈＣＥＳ１ｂ（０．０５ｍｇ／ｍＬ）（図９Ａ）またはプールされたヒト肝ミクロソーム（１ｍｇ／ｍＬ）（図９Ｂ）を含むアッセイ混合物に３７℃で添加し、１０分間の反応を開始する。反応を停止し、上澄みを収集し、フェノフィブリン酸レベルをＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定した。標準曲線をプロットし、Ｋｍ値とＶｍａｘ値を計算した。試料は重複して分析され、平均値として表された。 ケンフェロールの同時送達は、ナイーブＣ５７／ＢＬマウスにおいてインビボで脳のフェノフィブラートレベルを増強する。フェノフィブラートとケンフェロールを同時投与した、またはフェノフィブラートのみを投与したマウスの脳フェノフィブラート（図９Ａ）およびフェノフィブリン酸（図９Ｂ）のレベル。マウスは、強制経口投与により、「ｆｅｎｏのみ」グループの場合はビヒクルで、「ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループの場合はケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）で２日間前処置された。３日目に、「ｆｅｎｏのみ」グループのマウスにフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）を投与したのに対し、「ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループのマウスには、フェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）およびケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）を同時投与した。治療後０、１、２、４、８、１２、２４時間（時点あたりｎ＝４）にマウスを屠殺し、脳を採取した。脳のフェノフィブラートおよびフェノフィブリン酸のレベルは、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって決定された。（図９Ａ）１時間の強制経口投与後の「ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループのフェノフィブラートレベルは、「ｆｅｎｏのみ」グループと比較して有意に高かった（約４倍）。「Ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループは、経口投与後８時間まで、「ｆｅｎｏのみ」グループと比較して高レベルのフェノフィブラートを維持した。（図９Ｂ）１時間の強制経口投与後の「ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループのフェノフィブリン酸レベルは、「ｆｅｎｏのみ」グループと比較して有意に高かった（約２倍）。「Ｆｅｎｏ＋Ｋ」グループは、経口投与後１２時間まで、「ｆｅｎｏのみ」グループと比較して高レベルのフェノフィブリン酸を維持した。データは平均±ＳＥＭとして表される。＊＊ｐ＜０．０１、＊ｐ＜０．０５、０時間の時点と比較したスチューデントのｔ検定。 ケンフェロールとフェノフィブラートの同時送達は、ＭＰＴＰ中毒後のマウスの黒質のドーパミン作動性ニューロンを保護する。Ｃ５７ＢＬマウスは、５日間のＭＰＴＰ腹腔内注射（３０ｍｇ／ｋｇ）または生理食塩水を受けた後、１４日間の腹腔内薬物治療を受けた。上のパネル（図１０Ａ～１０Ｈ）は、生理食塩水対照、ＭＰＴＰおよびＭＰＴＰとフェノフィブラートおよび／またはケンフェロール治療群の黒質切片の代表的なＴＨ染色画像である。下のパネル（図１０Ｉ）は、黒質のＴＨ陽性ニューロンの立体的定量化を示している。ＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ）による亜慢性治療は、生理食塩水治療マウス（図１０Ａ）と比較した場合、黒質（図１０Ｂ）のドーパミン作動性ニューロンの有意な喪失を誘発した。フェノフィブラート治療（１５０および２００ｍｇ／ｋｇ）は、ＭＰＴＰに誘導される黒質ニューロンの喪失を防いだ（図１０Ｃ、１０Ｆ）。フェノフィブラート（１５０ｍｇ／ｋｇ）とケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）の同時投与は、神経保護効果をわずかに増加させた（図１０Ｄ、１０Ｉ）。データは平均±ＳＥＭとして表される。グループＡ：生理食塩水＋生理食塩水（ｎ＝６）、グループＢ：ＭＰＴＰ＋生理食塩水（ｎ＝５）、グループＣ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＤ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＥ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ１００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＦ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）、グループＧ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＨ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ１００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊ｐ＜０．０５、対応のないスチューデントのｔ検定、グループＢと比較：ＭＰＴＰ＋生理食塩水。 ケンフェロールとフェノフィブラートの同時送達は、ＭＰＴＰ中毒後のマウスの線条体におけるドーパミン作動性神経突起を保護する。Ｃ５７ＢＬマウスは、５日間のＭＰＴＰ腹腔内注射（３０ｍｇ／ｋｇ）または生理食塩水を受けた後、１４日間の薬物治療を受けた。上のパネルは、生理食塩水対照、ＭＰＴＰおよびＭＰＴＰとフェノフィブラート／化合物Ｘ治療群の線条体切片の代表的なＴＨ染色画像である。下のパネルは、Ｉｍａｇｅ Ｊソフトウェアを使用した線条体のＴＨ光学密度の定量化を示している。ＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ）による亜慢性治療は、生理食塩水治療マウス（図１１Ａ）と比較した場合、線条体ドーパミン作動性神経突起の有意な喪失を誘導した（図１４Ｂ）。フェノフィブラート治療（１５０および２００ｍｇ／ｋｇ）は、ＭＰＴＰによって誘導される線条体神経突起の喪失を防いだ（図１１Ｃ、１１Ｆ）。フェノフィブラート（１５０ｍｇ／ｋｇ）とケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）の同時投与は、神経保護効果を増強した（図１１Ｄ、１１Ｉ）。データは平均±ＳＥＭとして表される。グループＡ：生理食塩水＋生理食塩水（ｎ＝６）、グループＢ：ＭＰＴＰ＋生理食塩水（ｎ＝５）、グループＣ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＤ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＥ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ１５０ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ１００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＦ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝５）、グループＧ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ５０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）、グループＨ：ＭＰＴＰ＋Ｆｅｎｏ２００ｍｇ／ｋｇ＋Ｋ１００ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝７）。＊＊＊＊ｐ＜０．０００１、＊ｐ、０．０５、対応のないスチューデントのｔ検定、グループＢと比較：ＭＰＴＰ＋生理食塩水。 緑茶とケーパーは、ケンフェロールとその誘導体の代替天然源である。（図１２Ａ）さまざまなブランドのケーパー抽出物と緑茶抽出物中のケンフェロールのＴＱ－ＭＳ定量化。ケーパー抽出物（１６０～５０５ｎｇ／ｍｌ／ｇ）は、緑茶抽出物（１４～５０ｎｇ／ｍｌ／ｇ）と比較して「遊離」ケンフェロールの量が多いことを示した。さまざまなブランドの（図１２Ｂ）ケーパー抽出物と（図１２Ｃ）緑茶抽出物中のケンフェロール誘導体（複雑な分子と結合）のＱＴＯＦ定性分析。緑茶抽出物（５×１０⁷～１．２×１０⁸ＡＵ）は、ケーパー抽出物（４×１０⁶～７×１０⁶ＡＵ）と比較して、ケンフェロール誘導体の量がより多いことを示し、緑茶抽出物が化合物Ｘ－誘導体の良好な供給源であることを示す。データは平均±ＳＥＭとして表される。

本開示は、神経変性疾患を治療するための方法、および神経細胞または神経前駆細胞におけるＰＧＣ－１α発現を誘導するための方法を提供し、これらの方法は、神経変性疾患およびその症状を治療するのに有効なモル比でフェノフィブラートとケンフェロールの組み合わせを投与することを含む。本発明者らは、驚くべきことに、記載されたモル比でのフェノフィブラートおよびケンフェロールの投与が、いずれかの薬剤単独での治療よりも効果的であり、効力に必要な各薬剤の量を減らし、したがって未知の相乗効果を提供できることを見出した。

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有する。以下の参考文献は、本発明で使用される多くの用語の一般的な定義を当業者に提供する：Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（２ｄ ｅｄ．１９９４）、ＴＨＥ ＣＡＭＢＲＩＤＧＥ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｗａｌｋｅｒ ｅｄ．，１９８８）、ＴＨＥ ＧＬＯＳＳＡＲＹ ＯＦ ＧＥＮＥＴＩＣＳ，５ＴＨ ＥＤ．，Ｒ．Ｒｉｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ（１９９１）、およびＨａｌｅ＆Ｍａｒｈａｍ，ＴＨＥ ＨＡＲＰＥＲ ＣＯＬＬＩＮＳ ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＢＩＯＬＯＧＹ（１９９１）。

本明細書に引用される各刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、本開示と矛盾しない範囲で、その全体が参照により組み込まれる。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されるように、ここでは、単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、文脈が明確にそうでないと示さない限り複数の指示対象が含まれることに留意されたい。

本明細書で使用される場合、以下の用語は、特に明記しない限り、それらに帰する意味を有する。

定義
本明細書で使用される「神経細胞」または「神経細胞の集団」という用語は、ニューロン（ドーパミン作動性ニューロンを含む）およびグリア細胞（星状細胞、オリゴデンドロサイト、シュワン細胞、およびミクログリア）の両方を含む。任意選択で、神経細胞または神経細胞の集団は、中枢神経系細胞を含む。

本明細書で使用される「神経前駆細胞」という用語は、神経細胞に分化する幹細胞を指す。

「対照」という用語は、神経変性疾患を欠く対象からの値、または神経変性疾患を欠く対象の集団を例示する既知の対照値、またはＰＧＣ１αタンパク質などのバイオマーカーのベースラインまたは健康な対象レベルを有することを意味する。上記のようないくつかの場合において、対照値は、神経変性疾患の発症前またはそのための治療の開始前の同じ対象からのものであり得る。

「治療する」、「治療すること」、および「治療」という用語は、神経変性疾患の１つ以上の影響または症状を軽減または遅延させる方法を指す。対象が病気であると診断することができる。治療は、症状だけでなく、根底にある病状を軽減する方法を指すこともある。対象への投与の効果は、これに限られるものではないが、神経変性疾患または障害の１つ以上の症状の軽減、神経学的疾患または傷害の重症度の低下、神経学的疾患または傷害の完全な除去、または１つ以上の症状の発症または悪化の遅延の効果を有することができる。例えば、開示された方法は、治療前の対象と比較した場合、または対照対象または対照値と比較した場合に、対象の疾患の１つ以上の症状が約１０％減少した場合に治療とみなされる。したがって、減少は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％、またはその間の任意の量の減少であり得る。

「予防する」、「予防すること」、または「予防」という用語は、神経変性疾患またはその１つ以上の症状の発症、発生率、重症度、または再発を予防、遅延、回避、除去、未然防止、停止、または妨害する方法を意味する。例えば、開示された方法は、ケンフェロールと組み合わせてフェノフィブラートを投与されなかった神経変性に感受性のある対照対象と比較した、神経変性に感受性のある対象における神経変性または神経変性の１つ以上の症状（例えば、振戦、衰弱、記憶喪失、硬直、痙縮、萎縮）の発症、発生、重症度、もしくは再発の減少または発症の遅延がある場合の予防であると考えられる。開示された方法はまた、治療を受ける前の対象の進行と比較してケンフェロールとフェノフィブラートまたはその類似体を受けた後、神経変性に感受性のある対象において神経変性または神経変性の１つ以上の症状の発症、発生率、重症度、もしくは再発の減少または遅延がある場合に予防であると考えられる。したがって、神経変性の発症、発生率、重症度、または再発の減少または遅延は、約１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００％、またはその間の任意の量の減少であり得る。

本明細書で使用される「対象」という用語は、個人を意味する。好ましくは、対象は霊長類などの哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。人間以外の霊長類も対象である。対象という用語には、ネコ、イヌなどの飼育動物、家畜（たとえば、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギなど）、および実験動物（たとえば、フェレット、チンチラ、マウス、ウサギ、ラット、アレチネズミ、モルモットなど）が含まれる。したがって、獣医用の使用および医療製剤が本明細書で企図される。

本開示は、一定モル比のフェノフィブラートまたはその類似体とケンフェロールとの組み合わせが、対象の神経変性疾患に関連する症状を治療することができるという発見に基づく。フェノフィブラートは、肝臓を最初に通過する間にインビボで急速に加水分解され、カルボキシルエステラーゼ酵素によってフェノフィブリン酸に代謝される。フェノフィブリン酸は、経口フェノフィブラートの脂質低下特性を提供する活性部分であると報告されている。フェノフィブラートの神経保護および抗炎症特性は、その代謝物であるフェノフィブリン酸ではなく、フェノフィブラート自体に起因する（実施例６を参照）。神経変性疾患を治療するためのフェノフィベートの使用は、米国特許公開第２０１６／０２２０５２３号に以前に記載されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。本開示は、フェノフィブラートまたはその類似体とケンフェロールとの組み合わせが、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への代謝を防止（またはその速度を低下）させ、それによってマウスの脳におけるフェノフィブラートのレベルを増大させるという驚くべき効果を特定する（実施例７を参照）。

一態様では、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールを、それを必要とする対象に投与することを含む、対象における神経発生性疾患を治療する方法が本明細書に記載される。フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、好ましくは、一定のモル比で投与される。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体とケンフェロールとのモル比は、１．５：１、２：１、３：１、または４：１である。

いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールの投与は、フェノフィブラート単独での治療と比較して、脳内のフェノフィブラートのレベルを増加させ、脳または中枢神経系の酸化ストレス剤のレベルを低下させ、および／または脳または中枢神経系の炎症のレベルを低下させる。

いくつかの実施形態において、対象は、神経変性疾患を発症するリスクがある。いくつかの実施形態において、対象は神経変性疾患と診断されている。当業者は、神経変性疾患を発症している、または発症するリスクのある対象を診断する方法を知っている。たとえば、次のテストの１つ以上を使用できる：遺伝子テスト（たとえば、ＴＤＰ－４３遺伝子の突然変異の識別）または家族分析（たとえば、家族歴）、中枢神経系イメージング（たとえば、磁気共鳴画像法およびポジトロン放出断層撮影）、臨床または行動検査（例えば、筋力低下、振戦、筋緊張、運動技能、または記憶の評価）、または臨床検査。

神経変性疾患は、初期段階の神経変性疾患である可能性がある。いくつかの実施形態において、神経変性疾患は、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群、家族性認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン病、多発性硬化症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、前頭側頭型認知症、網膜神経変性症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または外傷性脳損傷（ＴＢＩ）である。いくつかの実施形態において、パーキンソンプラス症候群は、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）である。

また、本明細書には、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールをフェノフィブラートの初回通過代謝を低下させるのに十分なモル比で投与することを含む、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への初回通過代謝を防止／低下させる方法が記載される。

別の態様において、細胞をフェノフィブラートまたはその類似体またはケンフェロールと接触させることを含む、神経細胞または神経前駆細胞においてＰＧＣ－１α発現を誘導する方法が本明細書に記載される。接触させるステップは、インビボまたはインビトロのいずれかで実施することができる。いくつかの実施形態において、神経細胞はニューロンである。いくつかの実施形態において、ニューロンはドーパミン作動性ニューロンである。いくつかの実施形態において、ニューロンは、対象の皮質、線条体、または脊髄内のニューロンである。いくつかの実施形態において、神経細胞はグリア細胞または星状細胞である。

神経変性疾患
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、神経変性疾患と診断された対象にフェノフィブラートおよびケンフェロールを投与することを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、神経変性疾患を発症するリスクがある対象にフェノフィブラートおよびケンフェロールを投与することを含む。いくつかの実施形態において、対象は、初期段階の神経変性疾患を有する。

例示的な神経変性疾患には、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群、家族性認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン病、多発性硬化症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、前頭側頭型認知症、網膜神経変性症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）および外傷性脳損傷（ＴＢＩ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、パーキンソンプラス症候群は、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）である。

アルツハイマー病（ＡＤ）は、慢性の進行性神経変性を特徴としている。ＡＤの神経変性には、初期のシナプト毒性、神経伝達物質の障害、細胞外β－アミロイド（Ａβ）沈着物と細胞内神経原線維の蓄積、神経膠症、そして後の段階でのニューロンの喪失と関連する脳萎縮が含まれる（Ｄａｎｙｓｚ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１６７：３２４－３５２，２０１２）。初期の研究では、Ａβペプチドがヒト大脳皮質細胞培養におけるグルタメート毒性を増強する能力を持っている可能性があることが示された（Ｍａｔｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．１２：３７６－３８９，１９９２、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３１（１８）：６６２７－３８，２０１１）。

いくつかの実施形態において、対象は、前臨床または初期のアルツハイマー病を患っている。本明細書で使用される「初期アルツハイマー病」という用語は、軽度から中等度の疾患よりも重症度が低く、および／または発症が早いアルツハイマー病の病期を指す。「初期アルツハイマー病」という用語は、前臨床疾患（無症候性および前症候性疾患を含む）だけでなく、前認知症（前駆症状としても知られ、本明細書では前駆症状と呼ばれる）を含む。特許がどのタイプのアルツハイマー病であるかを評価するために使用される診断基準は、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２００７，Ｖｏｌｕｍｅ６，Ｉｓｓｕｅ８，ｐａｇｅｓ７３４－７４６およびＴｈｅ Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，２０１０，Ｖｏｌｕｍｅ９，Ｉｓｓｕｅ１１，ｐａｇｅｓ１１１８－１１２７に公開されている基準を使用して決定でき、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書に記載のフェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールの組み合わせの投与は、神経変性疾患に関連する１つ以上の症状を軽減または治療することが本明細書で企図されている。このような症状には、１つ以上の運動技能、認知機能、ジストニア、舞踏病、うつ病などの精神症状、脳および線条体の萎縮、および神経機能障害が含まれるが、これらに限定されない。

投与は、本明細書に記載される治療を受けていない対象と比較して、総運動スコアのより遅い進行をもたらすと企図される。いくつかの実施形態において、より遅い進行は、舞踏病サブスコア、バランスおよび歩行サブスコア、手の動きサブスコア、眼球運動サブスコア、最大ジストニアサブスコアおよび動作緩慢評価からなる群から選択される１つ以上の運動スコアの改善の結果である。

一般に、ＰＤは、パーキンソン病の主要な症状（安静時振戦、動作緩慢、硬直）の神経学的病歴と臨床検査によって診断される。個人はまた、姿勢の不安定性および片側性の発症について評価され得る。場合によっては、医師は統一パーキンソン病評価尺度（ＵＰＤＲＳ）または運動障害学会の改訂版のＵＰＤＲＳ（Ｇｏｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｖ Ｄｉｓｏｒｄ．２００７ Ｊａｎ；２２（１）：４１－７）を使用することがある。修正されたＵＰＤＲＳは、次のようなサブスケールを持つ４つのスケール構造を使用する：（１）日常生活の非運動体験（１３項目）、（２）日常生活の運動体験（１３項目）、（３）運動検査（１８項目）および（４）運動合併症（６項目）。各サブスケールは０～４の評価を有し、０＝通常、１＝軽微、２＝軽度、３＝中程度、４＝重度である。臨床医は、英国パーキンソン病協会の脳バンク臨床診断基準（Ｈｕｇｈｅｓ Ａ Ｊ，Ｄａｎｉｅｌ Ｓ Ｅ，Ｋｉｌｆｏｒ Ｌ，Ｌｅｅｓ Ａ Ｊ．Ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ａ ｃｌｉｎｉｃ－ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔｕｄｙ ｏｆ １００ ｃａｓｅｓ．ＪＮＮＰ１９９２，５５：１８１－１８４）によって開発された基準を使用することもできる。

ハンチントン病は、症状の発症と運動および神経機能の低下の進行によって定義または特徴づけられることがよくある。ＨＤは５つの段階に分けることができる。初期ＨＤの患者（段階１および２）は、認知の問題についての懸念が高まっており、これらの懸念は中程度／中間のＨＤ（段階３および４）の間も一定である。後期または進行したＨＤ（ステージ５）の患者は、認知能力が不足している（Ｈｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｇｅｎｅｔ．Ｓｅｐ ２０１１；８０（３）：２３５－２３９）。

ステージの進行は次のように観察できる。初期段階（ステージ１）。ＨＤと診断され、自宅と職場の両方で完全に機能することができる。初期中間段階（段階２）では、その人は雇用可能であり続けるが、能力は低く、いくつかの困難を伴って日常業務を管理することができる。後期中間段階（段階３）では、その人はもはや仕事をしたり、家事の責任を管理したりすることができなくなる。日々の財務やその他の日常業務を処理するための支援または監督が必要である。初期の進行段階の患者（病期４）は、もはや日常生活において独立していないが、家族や専門職のキャリアに支えられて自宅で生活することができる。進行した段階（段階５）では、その人は日常の活動を完全にサポートする必要があり、通常は専門的な介護が必要である。ＨＤの患者は通常、症状が最初に現れてから約１５～２０年後に死亡する。

ハンチントン病の症状のゆっくりとした低下の兆候は、以下のパラメーターの１つ以上のベースラインからの変化を使用して測定される：（ｉ）機能評価のための標準試験の使用（例えば、ＵＨＤＲＳ全機能的能力、ＬＰＡＳ、独立スケール）；（ｉｉ）神経心理学的評価（例、ＵＨＤＲＳ認知評価、マティス認知症評価尺度、トレイルメイキングテストＡおよびＢ、フィギュアキャンセルテスト、ホプキンス言語学習テスト、アーティキュレーションスピードテスト）；（ｉｉｉ）精神医学的評価（ＵＨＤＲＳ行動評価、モンゴメリーおよびアスバーグうつ病評価尺度）ならびに（ｉｖ）認知的評価（例、認知症転帰測定スイート（ＤＯＭＳ））。

フェノフィブラート
フェノフィブラートは、内因性高脂血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症の治療に以前から使用されていたフィブラート化合物である。フェノフィブラートの調製は、米国特許第４，０５８，５５２号に開示されており、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。フェノフィブリン酸は、フェノフィブラートの活性代謝物である。フェノフィブラートは水に溶けないため、胃腸（ＧＩ）管での吸収が制限される。この問題を克服するために、代替の処方と戦略が使用されてきた。この参照によりそれらのすべてが、本明細書に組み込まれる、米国特許第４，８００，０７９号および第４，８９５，７２６号（微粉化フェノフィブラート）、米国特許第６，２７７，４０５号（錠剤またはカプセル内の顆粒の形態の微粉化フェノフィブラート）、米国特許第６，０７４，６７０号（固体状態での微粉化フェノフィブラートの即時放出、米国特許第５，８８０，１４８号（フェノフィブラートとビタミンＥの組み合わせ）、米国特許第５，８２７，５３６号（フェノフィブラートの可溶化剤としてのジエチレングリコールモノエチルエーテル（ＤＧＭＥ））、および米国特許第５，５４５，６２８号（フェノフィブラートと１つ以上のポリグリコシル化グリセリドの組み合わせ）を参照されたい。他の多くの誘導体、類似体および配合物は当業者に知られている。例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，０５８，５５２号に記載されているようなｐ－カルボニルフェノキシ－イソ酪酸の他のエステルを使用することができる。フェノフィブラート類似体には、米国特許第４，８００，０７９号で定義されているものが含まれる。例として、ゲムフィブロジルは、本明細書に開示される方法で使用することができる。

フェノフィブラートは、必要に応じて適切な溶媒または可溶化剤に溶解される。フェノフィブラートは、例えば、陰イオン性（例えばＳＤＳ）および非イオン性（例えば、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００）界面活性剤、錯化剤（Ｎ－メチルピロリドン）を含む多くの異なる可溶化剤に可溶であることが知られている。フェノフィブラートまたはフェノフィブラート誘導体の経口投与のための改善された生物学的利用能を有する液体および半固体配合物は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２００４／００２４５８号に記載されている。

ケンフェロール
ケンフェロール（３，５，７－トリヒドロキシ－２－（４－ヒドロキシフェニル）－４Ｈ－１－ベンゾピラン－４－オン）は、多くの食用植物（例えば茶、ブロッコリー、キャベツ、ケール、豆、エンダイブ、リーキ、トマト、イチゴ、ブドウ）に見られる天然に存在するフラボノイドであり、抗酸化作用、抗炎症作用、神経保護作用、抗アテローム生成作用、抗癌作用など、さまざまな薬理学的特徴を備えている［１９、２０］。

インビトロおよびインビボ調査からの証拠は、ケンフェロールがアルツハイマー病（ＡＤ）の治療候補としての可能性を提供する可能性があることを示唆している。ケンフェロールは、マウス皮質ニューロン、ＰＣ１２神経芽細胞腫、およびＴ４７Ｄヒト乳がん細胞内でのβ－アミロイド誘導毒性および凝集効果をインビトロで防止する［２１～２３］。同様に、ケルセチン、ケンフェロール、イソラムネチンを含むイチョウの葉由来のフラボノール混合物は、ＢＤＮＦシグナル伝達経路を刺激し、ダブルトランスジェニックＡＤマウスモデル（ＴｇＡＰＰｓｗｅ／ＰＳ１ｅ９）から分離されたニューロン内のβ－アミロイド蓄積を減少させた。これらのダブルトランスジェニックＡＤマウスでのインビボ研究により、フラボノール投与後のＢＤＮＦ発現の増強が確認され、認知機能の改善と相関している［２４］。ケンフェロールはまた、酸化ストレスを抑制し、海馬のスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）活性を高め、Ｄ－ガラクトース誘発性記憶障害のあるマウスの学習能力と記憶能力を改善することも注目された［２５］。ケンフェロールまたはケンフェロールを含む製品による前処理は、ＭＰＴＰ、６－ＯＨＤＡ、またはＰＤのロテノン神経毒性動物モデル内のドーパミン作動性神経毒性に対する保護を提供する［２６～２９］。

医薬組成物および投与経路
いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、適切な担体、賦形剤または希釈剤とともに１つ以上の組成物に配合される。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、同じ組成物に配合される。代替の実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、別個の組成物に配合される。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、同時に（任意選択で、同じまたは異なる組成物で）投与される。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、連続して投与される。

担体という用語は、化合物または組成物と組み合わせた場合に、使用目的または目的のためにその化合物もしくは組成物の調製、貯蔵、投与、送達、有効性、選択性、または他の任意の特徴を補助または促進する化合物、組成物、物質、もしくは構造を意味する。例えば、担体は、有効成分の分解を最小限に抑え、対象における有害な副作用を最小限に抑えるように選択することができる。そのような薬学的に許容される担体には、生理食塩水、緩衝生理食塩水、人工脳脊髄液、デキストロース、および水を含むがこれらに限定されない、無菌の生体適合性薬学的担体が含まれる。

担体は、任意の賦形剤、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、安定剤、可溶化剤、脂質、または薬学配合物で使用するための当該技術分野で周知の他の物質を包含する。組成物で使用するための担体の選択は、組成物の意図された投与経路に依存するであろう。これらの物質を含む薬学的に許容される担体および配合物の調製は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ｅｄ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｐａ．，２００５に記載されている。生理的に許容される担体は、リン酸塩、クエン酸塩、もしくは他の有機酸塩などの緩衝剤、アスコルビン酸などの抗酸化剤、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖、二糖、および他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムなどの塩形成対イオン；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（登録商標）（ＩＣＩ，Ｉｎｃ．；Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）（ＢＡＳＦ；Ｆｌｏｒｈａｍ Ｐａｒｋ，Ｎ．Ｊ．）などの非イオン性界面活性剤を含む。

意図される投与様式に応じて、医薬組成物は、例えば、錠剤、坐剤、丸薬、カプセル、粉末、液体、エアロゾル、または懸濁液などの固体、半固体、または液体剤形の形態であり得、好ましくは、正確な投薬量の単回投与に適した単位剤形であり得る。組成物は、治療有効量の本明細書に記載の化合物またはその誘導体を、薬学的に許容される担体と組み合わせて含み、さらに、他の医用剤、医薬剤、担体、または希釈剤を含むことができる。薬学的に許容されるとは、生物学的またはその他の望ましくないものではなく、許容できない生物学的効果を引き起こしたり、それが含まれる医薬組成物の他の成分と有害な方法で相互作用したりすることなく、選択された化合物とともに個体に投与できる物質を意味する。本明細書に記載のフェノフィブラートもしくはその類似体および／またはケンフェロール、または非経口注射に適したその薬学的に許容される塩もしくはプロドラッグを含む組成物は、生理学的に許容される滅菌水溶液または非水溶液、分散液、懸濁液または乳濁液、および滅菌注射可能溶液または分散液に再構成するための滅菌粉末を含み得る。好適な水性および非水性担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例には、水、エタノール、ポリオール（プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、グリセロールなど）、それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルが含まれる。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。

本明細書に記載の組成物はまた、保存剤、湿潤剤、乳化剤、および分散剤などのアジュバントを含むことができる。微生物の作用の防止は、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などによって促進され得る。等張剤、例えば、糖、塩化ナトリウムなども含めることができる。注射可能な医薬剤型の持続性吸収は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。

本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグの経口投与のための固体剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、粉末、および顆粒が含まれる。かかる固体剤形では、本明細書に記載の化合物またはその誘導体は、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの通例の不活性賦形剤（もしくは担体）、または（ａ）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、およびケイ酸、（ｂ）結合剤、例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、およびアカシア、（ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、（ｄ）崩壊剤、例えば、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモおよびタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定の複合ケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、（ｅ）溶解遅延剤、例えば、パラフィン、（ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、（ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびモノステアリン酸グリセロール、（ｈ）吸着剤、例えば、カオリンおよびベントナイト、（ｉ）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、またはそれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、剤形は緩衝剤も含んでもよい。

同様のタイプの固体組成物は、賦形剤、例えば、ラクトースまたは乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどを使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤の充填剤として使用し得る。

錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸剤、および顆粒などの固体剤形は、コーティングおよびシェル、例えば、腸溶性コーティングおよび当該技術分野で周知の他のものを用いて調製され得る。それらは不透明化剤を含むことができ、またそれらが腸管の特定の部分で遅延して活性化合物または複数の化合物を放出するような組成のものであり得る。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー物質およびワックスである。活性化合物はまた、適切な場合、上記の賦形剤の１つ以上とともにマイクロカプセル化された形態であり得る。

フェノフィブラートまたはその類似体ならびにケンフェロールまたはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグの経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容される乳濁液、溶液、懸濁液、シロップ、およびエリキシルが含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当該技術分野で一般に使用される不活性希釈剤、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステル、またはこれらの物質の混合物などを含有し得る。

そのような不活性希釈剤に加えて、組成物はまた、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、甘味剤、香味剤、または芳香剤などの追加の薬剤を含むことができる。

懸濁液は、活性化合物に加えて、追加の薬剤、例えば、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール、およびソルビタンエステル、微結晶性セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天、ならびにトラガカント、またはこれらの物質の混合物などを含有し得る。

直腸投与用の本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩またはプロドラッグの組成物は、任意選択で、坐薬であり、これは、化合物を、通常の室温では固体であるが体温で液体であり、それ故に直腸または膣腔内で溶解して活性化合物を放出する好適な非刺激性賦形剤または担体、例えば、カカオバター、ポリエチレングリコール、または坐薬ワックスなどと混合することによって調製され得る。

フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールは、例えば、エクスビボ、インビトロ、およびインビボを含む、任意の数の方法で神経細胞または神経前駆細胞に投与することができる。インビボ投与は、中枢または末梢神経系神経細胞を対象とすることができる。したがって、対象が中枢神経系でＰＧＣ－１αレベルの低下を発症している、または発症するリスクがある場合、インビボ接触は有用である可能性がある。いくつかの実施形態において、フェノフィブラートおよびケンフェロールは、脳室内（ＩＣＶ）投与によって投与される。

インビトロでの接触は、例えば、移植のために細胞を処理する際に望ましい場合がある。神経細胞は、同じまたは異なる対象の神経系からの外植片であることができ、幹細胞に由来することができ、または細胞株に由来することができる。神経細胞は、脱分化された後、神経細胞系統に分化させられる非神経細胞に由来する可能性がある。このような細胞は、人工多能性幹細胞である可能性がある。フェノフィブラートは血液脳関門を通過するため、対象にフェノフィブラートを全身投与することにより、中枢神経系の神経細胞をフェノフィブラートと接触させることができる。フェノフィブラートは、例えば、局所注射、ポンプ、または徐放性インプラントによって髄腔内に投与することができる。

通常の成人のフェノフィブラートの投与量は、１日あたり３つのゼラチンカプセルであり、それぞれに１００ｍｇのフェノフィブラートが含まれている。当業者は、有効量のフェノフィブラートを選択することにより、投薬量または投薬計画を選択することができる。そのような有効量には、神経細胞においてＰＧＣ－１αの発現を誘導する量、抗炎症特性を有する量、酸化ストレスの１つ以上の効果を低下させる量が含まれる。さらに、フェノフィブラートの有効量は、リン酸化されたＡＭＰＫのレベルを増加させ、ミトコンドリア数を増加させ、細胞の生存率を増加させる。フェノフィブラートまたはその類似体とケンフェロールを組み合わせて投与すると、フェノフィブラートまたはその類似体を単独で投与する場合と比較して、対象に必要なフェノフィブラートまたはその類似体の有効用量が減少すると企図される。

必要に応じて、フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールを毎日投与する。

本明細書で使用される「有効量」という用語は、所望の生理学的応答を生み出すのに十分な任意の量として定義される。例として、フェノフィブラートまたはその類似体およびケモプフェロールの全身投与量は、例えば、１日あたり３００～４００ｍｇを含む、１日あたり１～１０００ｍｇであり得る（例えば、１～５回の用量で投与される）。当業者は、阻害剤の特定の特性、それを投与される対象、投与様式、治療または予防される疾患の種類および重症度などに基づいて、以下に記載されるように投与量を調整するであろう。さらに、治療の期間は、数日、数週間、数ヶ月、数年、または対象の寿命の間であり得る。例えば、神経変性疾患を発症する、または発症するリスクのある対象への投与は、効果が持続し、副作用が管理可能である限り、少なくとも毎日（例えば、１日１回、２回、３回）、隔日、週２回、毎週、２週間ごと、３週間ごと、４週間ごと、６週間ごと、２か月ごと、３か月ごと、または６か月ごと、数週間、数か月、または数年ごとであり得る。

フェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールを投与するための有効な量およびスケジュールは、経験的に決定することができ、そのような決定を行うことは、当該技術分野の技術の範囲内である。投与のための投薬量範囲は、疾患または障害の１つ以上の症状が影響を受ける（例えば、減少または遅延する）所望の効果を生み出すのに十分な大きさの範囲である。投与量は、望ましくない交差反応、細胞死などの実質的な有害な副作用を引き起こすほど多くてはならない。一般に、投与量は、神経変性疾患の種類、種、年齢、体重、一般的な健康状態、対象の性別および食事、投与の方式および時間、***速度、薬物の組み合わせ、および特定状態の重症度によって異なり、当業者によって決定することができる。禁忌が発生した場合は、個々の医師が投与量を調整できる。投与量は変動する可能性があり、１日１回以上の用量で投与することができる。

併用療法
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の方法は、神経変性疾患の治療のための標準治療治療薬を投与することをさらに含む。本明細書で使用される場合、「標準治療」という用語は、あるタイプの病気と診断された特定のタイプの患者に対して臨床医によって一般的に受け入れられている治療を指す。いくつかの実施形態において、標準治療治療薬は、レボドパ、ドーパミンアゴニスト、抗コリン作動剤、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＯＭＴ阻害剤、アマンタジン、リバスチグミン、ＮＭＤＡアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、リルゾール、抗精神病剤、抗うつ剤またはテトラベナジンである。

いくつかの実施形態において、本明細書に記載のフェノフィブラートまたはその類似体およびケンフェロールを使用する併用療法は、数分から数週間から数ヶ月の範囲の間隔で、追加の標準治療治療薬の投与に先行または後続し得る。例えば、個々のモダリティは、互いに約２４時間以内、例えば、互いに約６～１２時間以内、または互いに約１～２時間以内、または互いに約１０～３０分以内に投与される。状況によっては、ただし、個々のモダリティのそれぞれの投与の間に数日間（２、３、４、５、６または７）から数週間（１、２、３、４、５、６、７または８）が経過する場合、治療期間を大幅に延長することが望ましい場合がある。併用療法の一方または両方の薬剤／療法による反復治療が特に企図されている。

治療の有効性のモニタリング
ＰＧＣ－１αの誘導および活性を測定するための方法は当該技術分野で知られており、以下の実施例１に提供されている。たとえば、Ｒｕｉｚ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ａ ｃａｒｄｉａｃ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｏｂｏｔｉｚｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｓｓａｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｉｇａｎｄｓ ａｓ ｉｎｄｕｃｅｒｓ ｏｆ ＰＧＣ－１α ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ＰＬｏＳ Ｏｎｅ：７：ｅ４６７５３を参照されたい。ＰＧＣ－１αレベルは、例えば、ＰＧＣ－１αに対する抗体または他の検出手段を使用して直接評価することができる。ＰＧＣ－１α活性は、例として、ミトコンドリア機能の調節、例えば、酸化的代謝を評価することによって検出することができ、ミトコンドリア遺伝子、例えば、ＬＤＨ－２、ＡＴＰ５ｊなどの活性または発現を検出することによって評価することができる。

開示された方法および組成物に使用できる、組み合わせて使用できる、調製に使用できる、または製品である物質、組成物、および成分が開示される。これらおよび他の物質は、本明細書に開示されており、これらの物質の組み合わせ、サブセット、相互作用、グループなどが開示されている場合、それぞれのさまざまな個別、集合的な組み合わせ、またはこれらの化合物の交換の具体的な参照は、明示的に開示されていない可能性があることが理解され、それぞれが特に本明細書で企図され、説明されている。例えば、方法が開示および議論され、その方法を含む多くの分子に対して行うことができるいくつかの変更が議論される場合、特に反対の指示がない限り、その方法のありとあらゆる組み合わせおよび交換、ならびに可能な変更が具体的に企図される。同様に、これらの任意のサブセットまたは組み合わせも具体的に企図され、開示される。この概念は、開示された組成物を使用する方法のステップを含むがこれらに限定されない、本開示のすべての態様に適用される。したがって、実行できる様々な追加のステップがある場合、これらの追加のステップのそれぞれは、開示された方法の任意の特定の方法ステップまたは方法ステップの組み合わせで実行でき、そのような各組み合わせまたはサブセットは、具体的に企図されており、開示されているとみなされるべきである。

実施例１－フェノフィブラートは、ＰＧＣ－１αＷＴ（ＰＧＣ－１α⁺／⁺）およびヘテロ接合ＰＧＣ－１αノックアウト（ＰＧＣ－１α^+/-）マウスに由来する初代星状細胞におけるリポ多糖（ＬＰＳ）誘発性炎症を阻害する
出生後のヘテロ接合性マウスからの初代星状細胞を単離して培養し、これらのヘテロ接合性ノックアウトマウスを繁殖させることによって野生型マウスを得た。星状細胞をさまざまな濃度のフェノフィブラートで一晩処理した後、０．１ｎｇ／ｍＬ ＬＰＳで１時間処理した。全ＲＮＡを単離し、炎症誘発性サイトカインであるＩＬ－１βおよびＴＮＦ－αの遺伝子発現をＲＴ－ＰＣＲで測定した。結果は、フェノフィブラートがＷＴ（ＰＧＣ－１ａ＋／＋）とヘテロ接合（ＰＧＣ－１ａ＋／－）の初代星状細胞の両方で抗炎症保護効果を発揮したことを示している（図１）。これらのデータは、フェノフィブラートが両方のタイプの星状細胞で活性である一方で、Ｐｐａｒｇｃ１ａの単一コピーを運ぶ星状細胞でより活性であることを示唆している。これは、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）など、ＰＧＣ－１αレベルが病理学的に低下する神経変性疾患にも影響を与える可能性がある。

実施例２－ＰＰＡＲαは、マウス初代星状細胞におけるフェノフィブラート媒介性抗炎症効果には必要ない。
次の例は、フェノフィブラートを介した抗炎症効果が、ｓｉＲＮＡによるＰＰＡＲα発現のサイレンシング後のマウス初代星状細胞で抑制されなかったことを示している。

異なる濃度のＰＰＡＲα ｓｉＲＮＡをマウス初代星状細胞に４８時間加えた。全ＲＮＡとタンパク質を収集した。ＰＰＡＲα遺伝子発現はｑＲＴ－ＰＣＲによって決定され（図２Ａ）、タンパク質発現はウエスタンブロット分析によって決定された（図２Ｂ）。その後、１０ｎＭ ＰＰＡＲα ｓｉＲＮＡをその後の実験に使用した。（図２Ｃ－２Ｅ）初代星状細胞を１０ｎＭ ＰＰＡＲα ｓｉＲＮＡまたはスクランブルｓｉＲＮＡで３０時間処理した後、２０μＭフェノフィブラートでさらに１８時間処理した。次に、細胞を０．１ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで１時間処理した。全ＲＮＡは、ＰＰＡＲα（図２Ｃ）、ＩＬ－１β（図２Ｄ）、ＴＮＦα（図２Ｅ）遺伝子発現のために抽出された。結果は、フェノフィブラートがｔｅｏ主要神経膠細胞集団において、ＰＰＡＲαに依存しない方法で抗炎症効果を媒介したことを示している。

実施例３－フェノフィブラートは、インビボでフェノフィブリン酸への迅速な初回通過加水分解を受ける。
経口投与後、フェノフィブラートは急速にフェノフィブリン酸に変換され、活性代謝物およびＰＰＡＲαリガンドが抗高脂血症活性の促進に関与することが報告されている［１７、１８］。フェノフィブラートの薬物動態が、１００ｍｇ／ｋｇのフェノフィブラートの経口用量を受けたマウスの脳、肝臓、および血漿で測定された。フェノフィブラートの大部分は肝臓でフェノフィブリン酸に代謝された。フェノフィブリン酸のごく一部だけが血流と脳に入る（図３）。

実施例４－抗炎症特性は、ＢＶ２細胞において、その初回通過代謝物であるフェノフィブリン酸ではなく、フェノフィブラートによって媒介される。
フェノフィブラートは、肝臓を最初に通過する間にインビボで急速に加水分解され、カルボキシルエステラーゼ酵素によってフェノフィブリン酸に代謝される。フェノフィブリン酸は、経口フェノフィブラートの脂質低下特性を提供する活性部分であると報告されている。フェノフィブラートの神経保護特性が親分子に依存するのか、その一次代謝物に依存するのかは、これまで定義されていない。これは、神経変性疾患の治療としてのフェノフィブラート療法の現在の追求における大きな欠点であった。プロドラッグのフェノフィブラートはこれまでのすべてのインビトロアッセイに使用されてきたため、フェノフィブリン酸が抗炎症効果を同等に発揮できるかどうかも評価された。これを試験するために、ＢＶ２細胞をさまざまな濃度（０、５、１０、および２０μＭ）のフェノフィブリン酸（ＦＡ）または２０μＭフェノフィブラートで１８時間処理した後、ＬＰＳに１時間曝露した。総ＢＶ２細胞ＲＮＡは、ｑＲＴ－ＰＣＲ分析を介してＩＬ－１β遺伝子発現のために抽出された。驚くべきことに、フェノフィブリン酸はどの濃度でもＩＬ－１βの発現を阻害しなかったのに対し、２０μＭのフェノフィブラートは強力な抗炎症効果を発揮することが発見された（図４）。これらの結果は、フェノフィブリン酸ではなく、フェノフィブラートが以前の実験で見られた抗炎症効果を媒介したことを明らかにした。

実施例５－ケンフェロールは、インビトロでのカルボキシルエステラーゼエステラーゼ（ｈＣＥＳ１ｂ）の阻害を介して、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解を防止する
肝臓でフェノフィブラート加水分解物をフェノフィブリン酸に還元するのに効果的な、天然に存在するエステラーゼ阻害剤としてのケンフェロールの可能性が調査された。ヒトカルボキシルエステラーゼ（ＣＥＳ）は、セリンエステラーゼスーパーファミリーに属し、５つのＣＥＳ（１～５）グループに分類される。ＣＥＳ１およびＣＥＳ２サブファミリーは、ヒトのさまざまな生体異物および薬物の加水分解における最も重要な参加者である。ヒトＣＥＳ１は肝臓内で高度に発現しており、主に内因性の加水分解酵素／エステラーゼ活性に寄与している。ヒトＣＥＳ１アイソフォームは、小腸、マクロファージ、肺上皮、心臓、精巣にも低レベルで見られる。ヒトＣＥＳ１Ａは、ｈＣＥＳ１ｂ（ＣＥＳ１Ａ１とも呼ばれる）とｈＣＥＳ１ｃの２つのアイソフォームにさらに分類される。研究は、ｈＣＥＳ１ｂはヒト肝臓内で機能する主要な（野生型）アイソフォームであり、フェノフィブラートを含むエステル／チオエステル／アミド結合を含む基質の加水分解に重要であると示唆している。したがって、一連の研究において、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への組換えヒトＣＥＳ１ｂ媒介能力加水分解を特異的に阻害するケンフェロールの効力が、酵素阻害アッセイを使用して研究された。次に、プールされたヒト肝ミクロソーム（ＨＬＭ）を使用して、他の肝エステラーゼに対するケンフェロールの全体的なエステラーゼ阻害特性を評価した。

ＫｍおよびＶｍａｘ値の決定：最初に、ミカエリスメンテン定数（Ｋｍ）、最大速度の半分が観察される基質濃度、およびＶｍａｘ（反応の最大速度）値を、以下の酵素アッセイでｈＣＥＳ１ｂまたはＨＬＭのいずれかを使用してフェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解について決定した。アッセイ手順：１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファー（ｐＨ７．４）、および組換えｈＣＥＳ１ｂ（０．０５ｍｇ／ｍＬ）またはプールされたＨＬＭ（１ｍｇ／ｍＬ）を含むインキュベーション混合物を３７℃に温めた。異なる濃度のフェノフィブラートを添加して、１０分間のアッセイを開始した。内部標準を含む停止溶液を加えることにより反応を停止させた。液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を使用してフェノフィブリン酸を測定するために上清を収集しながら、試料を遠心分離してタンパク質を沈殿させた。組換えｈＣＥＳ１ｂ（図５Ａ）またはＨＬＭ（図５Ｂ）のいずれかによるフェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解の標準曲線をプロットした。ＫｍおよびＶｍａｘ値は、データを酵素反応速度モデルにフィッティングさせることによって計算された（表１）。

ケンフェロールの阻害定数（Ｋｉ）の決定：次に、ｈＣＥＳ１ｂ（図６Ａ～６Ｄ）またはＨＬＭ（図７Ａ～７Ｄ）のいずれかによるフェノフィブラートのフェノフィブリン酸への加水分解を防ぐケンフェロールの阻害定数（Ｋｉ、最大阻害の半分を生成するために必要な濃度）が決定された。１００ｍＭ Ｔｒｉｓ－Ｃｌバッファー（ｐＨ７．４）、組換えｈＣＥＳ１ｂ（０．０５ｍｇ／ｍＬ）またはプールされたヒト肝ミクロソーム（１ｍｇ／ｍＬ）、および８つの濃度のケンフェロールまたは陽性対照阻害剤（ビス（４－ニトロフェニル）－リン酸、ＢＮＰ）を含むインキュベーション混合物を３７℃で２分間プレインキュベートした。次に、フェノフィブラートを添加して１０分間の反応を開始した（最終濃度：０．１×Ｋｍ、０．３×Ｋｍ、１×Ｋｍ、３×Ｋｍ、６×Ｋｍ、および１０×Ｋｍ）。内部標準を含む停止溶液を加えることにより反応を停止させた。試料を遠心分離してタンパク質を沈殿させ、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析のために上清を収集した。フェノフィブリン酸は標準曲線を使用して定量化された。Ｋｉ値を計算し、特定の酵素阻害モデルにデータをフィッティングさせることによって阻害のタイプを決定した（表２）。ケンフェロールは、競合阻害モデルを使用して計算した、３６．２μＭの低いＫｉ値でｈＣＥＳ１ｂ加水分解酵素活性を特異的に阻害し、１１０μＭの高いＫｉ値でプールされたＨＬＭを阻害した。

したがって、これらの上記の発見は、ケンフェロールが、ヒト肝臓におけるフェノフィブラートの加水分解に関与する重要な酵素であるｈＣＥＳ１ｂの加水分解酵素活性を特異的に阻害することを示唆している。したがって、ケンフェロールは、フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への初回通過代謝を阻害し、それによってフェノフィブラートのＣＮＳバイオアベイラビリティの可能性を高めるために、フェノフィブラートと組み合わせて使用するための潜在的な候補である。

実施例６－フェノフィブラートとケンフェロールの同時送達は、ＢＶ２細胞において相乗的な抗炎症効果を発揮する
抗炎症特性は、その活性代謝物であるフェノフィブリン酸ではなく、プロドラッグであるフェノフィブラートによって媒介されるようであるため、フェノフィブラートのバイオアベイラビリティを高めることにより、ＣＮＳ内のＰＧＣ－１α発現を増加させることが試みられた。ＣＮＳにおけるフェノフィブラートレベルの増強は、より強力なＰＧＣ－１α媒介性神経保護効果をもたらすと企図された。以下の実施例は、肝臓におけるカルボキシルエステラーゼによるフェノフィブラートのフェノフィブリン酸への初回通過加水分解を阻害することにより、ＣＮＳフェノフィブラートレベルを増加させる方法を提供する。

ＢＶ２細胞におけるフェノフィブラートとケンフェロールの同時送達の抗炎症効果を評価した。２０μＭのフェノフィブラートおよび／または１０または２０μＭのケンフェロールをＢＶ２細胞に１８時間添加した後、ＬＰＳに１時間曝露した。ｑＲＴ－ＰＣＲによるＩＬ－１βおよびＰＧＣ－１α遺伝子発現の測定のために細胞溶解物を収集した。ケンフェロール治療のみでＩＬ－１βの発現が抑制され（図７Ａ）、報告されている抗炎症性を裏付けている［２０］。フェノフィブラートとケンフェロールの同時送達は、相乗的な抗炎症効果ではないにしても、相加効果を発揮し（図７Ａ）、神経炎症の基礎レベルを特徴とする疾患では併用療法が有効である可能性があることを示唆している。しかし、ケンフェロールが高用量で送達された場合、ケンフェロールはフェノフィブラートを介したＰＧＣ－１α遺伝子のアップレギュレーションをわずかに抑制したようであった（図７Ｂ）。

実施例７－フェノフィブラートとケンフェロールの同時送達は、マウスのインビボでの脳フェノフィブラートレベルを増加させた
次に、ケンフェロールがインビボで脳のフェノフィブラートレベルを増強する能力を、ナイーブなＣ５７／ＢＬマウスで評価した。Ｃ５７／ＢＬ６マウスは、グループＡ（ｎ＝２８）とグループＢ（ｎ＝２８）の２つのグループに分けられた。グループＡのＣ５７／ＢＬ６マウスは、ケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）で２日間前処置され、３日目にケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）とフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）の組み合わせが投与された。グループＢのマウスはビヒクルを２日間投与され、３日目にフェノフィブラート（１００ｍｇ／ｋｇ）のみが投与された。すべての薬物投与は強制経口投与によって行われた。続いて、薬物投与後の７つの異なる時点、それぞれ０、１、２、４、８、１２および２４時間でマウスを屠殺した。脳組織を採取し、直ちに液体窒素で凍結し、分析まで－８０℃で保存した。凍結した脳組織をメタノール：水混合物（２０：８０）でホモジナイズし、遠心分離してタンパク質を沈殿させ、上清を収集して、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳを介してフェノフィブラートとフェノフィブリン酸の定量レベルを測定した。ケンフェロールとフェノフィブラートの同時送達は、脳のフェノフィブラート（図９Ａ）とフェノフィブリン酸（図９Ｂ）のレベルがピークに達したと思われる１時間の時点で増加した。フェノフィブラートとケンフェロールの両方を投与されたマウスでは、フェノフィブラートのみを投与されたマウスと比較して、フェノフィブラートとフェノフィブリン酸のレベルが少なくとも４～８（それぞれＦとＦＡ）時間高濃度に維持された。これらのマウスのインビボの結果は、ケンフェロール投与が脳のフェノフィブラートレベルを高めるために使用できることを示唆している。

実施例８－フェノフィブラートおよびケンフェロールの同時送達は、パーキンソン病（ＰＤ）のＭＰＴＰマウスモデルにおける神経保護を増強した。
ケンフェロールとフェノフィブラートの同時送達の神経保護効果は、ＰＤのマウスモデルで研究された。１３週齢で、Ｃ５７／ＢＬ６マウスをＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ）または生理食塩水（腹腔内）のいずれかで５日間連続して治療し、続いて１４日間の腹腔内生理食塩水または腹腔内フェノフィブラートおよび／またはケンフェロール治療を行った。Ｃ５７／ＢＬ６マウスは、１グループあたり８匹の動物からなる８つのグループに分けられた。グループＡ：生理食塩水＋生理食塩水治療、グループＢ：ＭＰＴＰ＋生理食塩水治療、グループＣ：ＭＰＴＰ＋１５０ｍｇ／ｋｇフェノフィブラート、グループＤ：ＭＰＴＰ＋１５０ｍｇ／ｋｇフェノフィブラートおよび５０ｍｇ／ｋｇケンフェロール治療、グループＥ：ＭＰＴＰ＋１５０ｍｇ／ｋｇフェノフィブラートおよび１００ｍｇ／ｋｇケンフェロール治療、グループＦ：ＭＰＴＰ＋２００ｍｇ／ｋｇフェノフィブラート、グループＧ：ＭＰＴＰ＋２００ｍｇ／ｋｇフェノフィブラートおよび５０ｍｇ／ｋｇケンフェロール治療、グループＨ：ＭＰＴＰ＋２００ｍｇ／ｋｇフェノフィブラートおよび１００ｍｇ／ｋｇケンフェロール治療。治療の終わりに、これらの動物を屠殺し、パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で灌流し、免疫組織化学的分析のために脳切片をチロシンヒドロキシラーゼ（ＴＨ）で染色した。５日間のＭＰＴＰ（３０ｍｇ／ｋｇ）亜慢性治療は、生理食塩水治療マウス（図１０Ａ、１１Ａ）と比較した場合、黒質（図１０Ｂ）のドーパミン作動性ニューロンの有意な喪失を誘発し、線条体（図１１Ｂ）の神経突起喪失を伴うことが観察された。その後のフェノフィブラート治療（１５０および２００ｍｇ／ｋｇ）は、ＭＰＴＰに誘導される黒質ニューロン（図１０Ｃ、１０Ｆ）および線条体神経突起（図１１Ｃ、１１Ｆ）の喪失を防ぎ、我々の以前の発見を確認した。フェノフィブラート（１５０ｍｇ／ｋｇ）とケンフェロール（５０ｍｇ／ｋｇ）の同時投与は、フェノフィブラート単独での治療と比較して神経保護効果を増加させ（図１０Ｄ、１１Ｄ）、ケンフェロールがＭＰＴＰ誘発神経毒性を防ぐために相加的に作用することを示している。しかし、非常に高用量のフェノフィブラートと高用量のケンフェロール（１００ｍｇ／ｋｇ）の同時投与は、神経保護の改善を示さず（図１０Ｉ、１１Ｉ）、最大の神経保護を引き出すためにはこれら２つの薬剤を一定の質量比で送達する必要があることを示している。

例９－緑茶とケーパーはケンフェロールとその誘導体の潜在的な天然源である
神経変性障害および外傷性脳損傷のリスクがあるかまたはそれらに苦しんでいる患者を治療するための神経保護療法としての、ケンフェロールとフェノフィブラートの同時投与が特に企図されている。ケンフェロールは抗炎症剤として固有の活性を持っており、栄養補助食品として個別に処方することができる。したがって、ケーパーや緑茶などの分子を含む天然資源中のケンフェロールの相対量を、トリプル四重極ＭＳ（ＴＱ－ＭＳ）分析を使用して調査した。地元の小売店で購入した５つの異なるブランドのケーパー（Ｍｅｚｚｅｔｔａ、ＩＰＳ、Ｎａｐｏｌｅｏｎ、Ｉｓｏｌａ、Ｆａｎｔｉ）と３つのブランドの緑茶（Ｂｉｇｅｌｏｗ、Ｌｉｐｔｏｎ、Ｔｅｔｌｅｙ）。ケーパーを室温でＭｅＯＨ：水（１：１）で２４時間抽出し、緑茶を沸騰水中で３分間抽出した。ＴＱ－ＭＳの結果は、緑茶抽出物（１４～５０ｎｇ／ｍｌ／ｇ）と比較してケーパー抽出物（１６０～５０５ｎｇ／ｍｌ／ｇ）に大量の「遊離」ケンフェロールが存在することを示した（図１５Ａ）。一方、２つの抽出物の四重飛行時間（ＱＴＯＦ）ＭＳ定性分析（それらのｍ／ｚあたり）が、ケーパー抽出（４×１０⁶～７×１０⁶ＡＵ）（図１２Ｂ、１２Ｃ）と比較して、緑茶抽出物中に含まれるケンフェロール誘導体は１～２桁高いレベル（５×１０⁷～１．２×１０⁸ＡＵ）を示した。ＴＱ－ＭＳは、「遊離」ケンフェロールの量のみを与え、含まれているケンフェロール誘導体（複雑な分子と結合）は与えない。後者は、ＱＴＯＦ ＭＳ定性分析によって決定される。全体として、結果は、緑茶抽出物がその分子の代替源を提供する可能性のあるケンフェロール誘導体を大量に含んでいることを示唆している。

本明細書で引用されている刊行物およびそれらが引用される資料は、参照によりその全体が具体的に本明細書に組み込まれる。いくつかの実施形態について説明されている。それにもかかわらず、様々な修正がなされ得ることが理解されるであろう。したがって、他の実施形態は以下の特許請求の範囲の範囲内にある。

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１１．Ｖｅｎｔｕｒａ－Ｃｌａｐｉｅｒ，Ｒ．，Ａ．Ｇａｒｎｉｅｒ，ａｎｄ Ｖ．Ｖｅｋｓｌｅｒ，Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ：ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｒｏｌｅ ｏｆ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｒｅｓ，２００８．７９（２）：ｐ．２０８－１７．

１２．Ｃｈａｎｄａ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ－１ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｉａ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｏｒｐｈａｎ ｎｕｃｌｅａｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｍａｌｌ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ ｐａｒｔｎｅｒ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００９．５０（３）：ｐ．８８０－９２．

１３．Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，Ｇ．Ｒ．ａｎｄ Ｂ．Ｅ．Ｋｅｍｐ，ＡＭＰＫ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ，２００９．８９（３）：ｐ．１０２５－７８．

１４．Ｊａｇｅｒ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，ＡＭＰ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ（ＡＭＰＫ）ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｖｉａ ｄｉｒｅｃｔ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，２００７．１０４（２９）：ｐ．１２０１７－２２．

１５．Ｈａｎｄｓｃｈｉｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎ ａｕｔｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｌｏｏｐ ｃｏｎｔｒｏｌｓ ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｇａｍｍａ ｃｏａｃｔｉｖａｔｏｒ １ａｌｐｈａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｍｕｓｃｌｅ．Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，２００３．１００（１２）：ｐ．７１１１－６．

１６．Ｃｈｅｎ，Ｌ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ＰＧＣ－１ａｌｐｈａ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｓｔｒｏｃｙｔｉｃ ＮＧＦ ｉｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｆｏｒ Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１２．６３（４）：ｐ．７１９－３２．

１７．Ｃａｌｄｗｅｌｌ，Ｊ．，Ｔｈｅ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ．Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，１９８９．７６ Ｓｕｐｐｌ １：ｐ．３３－４１； ｄｉｓｃｕｓｓｉｏｎ ４１－４．

１８．Ｇｏｄｆｒｅｙ，Ａ．Ｒ．，Ｊ．Ｄｉｇｉａｃｉｎｔｏ，ａｎｄ Ｍ．Ｗ．Ｄａｖｉｓ，Ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｓｅ ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ １０５－ｍｇ ｆｅｎｏｆｉｂｒｉｃ ａｃｉｄ ｔａｂｌｅｔｓ ｖｅｒｓｕｓ １４５－ｍｇ ｆｅｎｏｆｉｂｒａｔｅ ｔａｂｌｅｔｓ ｕｎｄｅｒ ｆａｓｔｉｎｇ ａｎｄ ｆｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ａ ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｗｏ ｐｈａｓｅ Ｉ，ｏｐｅｎ－ｌａｂｅｌ，ｓｉｎｇｌｅ－ｄｏｓｅ，ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ．Ｃｌｉｎ Ｔｈｅｒ，２０１１．３３（６）：ｐ．７６６－７５．

１９．Ｃａｌｄｅｒｏｎ－Ｍｏｎｔａｎｏ，Ｊ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ．Ｍｉｎｉ Ｒｅｖ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ，２０１１．１１（４）：ｐ．２９８－３４４．

２０．Ｃｈｅｎ，Ａ．Ｙ．ａｎｄ Ｙ．Ｃ．Ｃｈｅｎ，Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｅｔａｒｙ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ ｏｎ ｈｕｍａｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２０１３．１３８（４）：ｐ．２０９９－１０７．

２１．Ｒｏｔｈ，Ａ．，Ｗ．Ｓｃｈａｆｆｎｅｒ，ａｎｄ Ｃ．Ｈｅｒｔｅｌ，Ｐｈｙｔｏｅｓｔｒｏｇｅｎ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ（３，４’，５，７－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）ｐｒｏｔｅｃｔｓ ＰＣ１２ ａｎｄ Ｔ４７Ｄ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ Ｒｅｓ，１９９９．５７（３）：ｐ．３９９－４０４．

２２．Ｏｎｏ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｔｉ－ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃ ａｎｄ ｆｉｂｒｉｌ－ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｏｆ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，２００３．８７（１）：ｐ．１７２－８１．

２３．Ｃｈｏｉ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｏｎ ｂｅｔａ－ａｍｙｌｏｉｄ－ｐｅｐｔｉｄｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ Ｎｅｕｒｏｎａｌ Ｄｅａｔｈ ｉｎ Ｃｕｌｔｕｒｅｄ Ｍｏｕｓｅ Ｃｏｒｔｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｎｓ．Ｃｈｏｎｎａｍ Ｍｅｄ Ｊ，２０１４．５０（２）：ｐ．４５－５１．

２４．Ｈｏｕ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉ－ｄｅｐｒｅｓｓａｎｔ ｎａｔｕｒａｌ ｆｌａｖｏｎｏｌｓ ｍｏｄｕｌａｔｅ ＢＤＮＦ ａｎｄ ｂｅｔａ ａｍｙｌｏｉｄ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅ ＴｇＡＤ ｍｉｃｅ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１０．５８（６）：ｐ．９１１－２０．

２５．Ｌｅｉ，Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，インビボ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｇａｌａｎｇｉｎ，ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ ａｎｄ ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，２０１２．１３５（４）：ｐ．２７０２－７．

２６．Ａｂｌａｔ，Ｎ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ ａｇａｉｎｓｔ ａ Ｒｏｔｅｎｏｎｅ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｒａｔ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２０１６．２１（９）．

２７．Ｒｅｎ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ａ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ Ａｇａｉｎｓｔ Ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｎ－Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ，２０１６．６：ｐ．２２１３５．

２８．Ｌｉ，Ｓ．ａｎｄ Ｘ．Ｐ．Ｐｕ，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ ａｇａｉｎｓｔ ａ １－ｍｅｔｈｙｌ－４－ｐｈｅｎｙｌ－１，２，３，６－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐｙｒｉｄｉｎｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｂｉｏｌ Ｐｈａｒｍ Ｂｕｌｌ，２０１１．３４（８）：ｐ．１２９１－６．

２９．Ｄａｔｌａ，Ｋ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｄｒｉｎｋ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ－Ｘ（ＥＭ－Ｘ）ｐｒｅ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｔｈｅ ｌｏｓｓ ｏｆ ｎｉｇｒｏｓｔｒｉａｔａｌ ｄｏｐａｍｉｎｅｒｇｉｃ ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ ６－ｈｙｄｒｏｘｙｄｏｐａｍｉｎｅ－ｌｅｓｉｏｎ ｒａｔ ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４．５６（５）：ｐ．６４９－５４．

Claims (35)

1. 対象における神経変性疾患を治療するための方法であって、フェノフィブラートおよびケンフェロールを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。
2. 前記対象が神経変性疾患と診断されている、請求項１に記載の方法。
3. 前記対象が神経変性疾患を発症するリスクがある、請求項１に記載の方法。
4. 前記対象が初期段階の神経変性疾患を有する、請求項１に記載の方法。
5. 前記神経変性疾患が、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群、家族性認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン病、多発性硬化症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、前頭側頭型認知症、網膜神経変性症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または外傷性脳損傷（ＴＢＩ）である、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記パーキンソンプラス症候群が、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）からなる群から選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記フェノフィブラートおよびケンフェロールが同時に投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記フェノフィブラートおよびケンフェロールが連続的に投与される、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記対象に標準治療治療薬を投与することをさらに含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記標準治療治療薬が、ドーパミン前駆体、ドーパミンアゴニスト、抗コリン作動薬、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＯＭＴ阻害剤、アマンタジン、リバスチグミン、ＮＭＤＡアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、リルゾール、抗精神病剤、抗うつ剤、またはテトラベナジンおよびそれらの誘導体である、請求項９に記載の方法。
11. 前記対象が、対照対象と比較して、ＰＧＣ－１α発現のレベルが低下していることを決定することをさらに含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記フェノフィブラートおよびケンフェロールが一定のモル比で投与される、請求項１～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記フェノフィブラートとケンフェロールとのモル比が１．５：１、２：１、３：１、または４：１である、請求項１２に記載の方法。
14. 前記投与が、フェノフィブラート単独での治療と比較して脳内のフェノフィブラートのレベルを増加させる、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記レベルが少なくとも２～４時間増加する、請求項１４に記載の方法。
16. 前記投与が、脳または中枢神経系における酸化ストレス剤のレベルを低下させる、請求項１に記載の方法。
17. 前記投与が、脳または中枢神経系における炎症のレベルを低下させる、請求項１に記載の方法。
18. フェノフィブラートのフェノフィブリン酸への初回通過代謝を防止／低下させ、それにより対象におけるフェノフィブラートのレベルを増大させる方法であって、フェノフィブラートの初回通過代謝を低下させるのに十分なモル比でフェノフィブラートとケンフェロールの組み合わせを投与することを含む、方法。
19. 前記対象が神経変性疾患を有する、請求項１８に記載の方法。
20. 前記神経変性疾患が、パーキンソン病、パーキンソンプラス症候群、家族性認知症、血管性認知症、アルツハイマー病、ハンチントン病、多発性硬化症、レビー小体型認知症、軽度認知障害、前頭側頭型認知症、網膜神経変性症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または外傷性脳損傷である、請求項１８に記載の方法。
21. 前記パーキンソンプラス症候群が、多系統萎縮症（ＭＳＡ）、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）である、請求項２０に記載の方法。
22. 前記対象に標準治療治療薬を投与することをさらに含む、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記標準治療治療薬が、レボドパ、ドーパミンアゴニスト、抗コリン作動薬、モノアミンオキシダーゼ阻害剤、ＣＯＭＴ阻害剤、アマンタジン、リバスチグミン、ＮＭＤＡアンタゴニスト、コリンエステラーゼ阻害剤、リルゾール、抗精神病剤、抗うつ剤またはテトラベナジンおよびそれらの誘導体である、請求項２２に記載の方法。
24. 神経細胞または神経前駆細胞においてＰＧＣ－１α発現を誘導する方法であって、神経細胞または神経前駆細胞をフェノフィブラートおよびケンフェロールと接触させることを含む、方法。
25. 前記接触させるステップがインビボである、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ＰＧＣ－１αの誘導がＰＰＡＲαに非依存である、請求項２４または請求項２５に記載の方法。
27. 前記神経細胞がニューロンである、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記ニューロンがドーパミン作動性ニューロンである、請求項２７に記載の方法。
29. 前記ニューロンが、対象の皮質、線条体、または脊髄に由来する、請求項２７に記載の方法。
30. 前記神経細胞がグリア細胞または星状細胞である、請求項２４～２６のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記投与が神経保護的である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記神経保護が、脳の黒質領域における神経細胞の活性または数を増加させること、および／または線条体の正の末端の喪失を減少させることを含む、請求項３１に記載の方法。
33. 前記ケンフェロールが天然源由来である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の方法。
34. 前記天然源が、ケンフェロールを含む植物または植物抽出物である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記天然源または抽出物が、緑茶、ケーパー、ケール、茶、ブロッコリー、キャベツ、豆、エンダイブ、リーキ、トマト、イチゴまたはブドウである、請求項３３に記載の方法。

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