JP2022505871A - ヘテロ二量体ｆｃ融合タンパク質 - Google Patents
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Abstract
本発明は、天然／自然分子と比較して長い血清半減期を有し、よって、産生中のタンパク質の高い力価、保存中の高い安定性および治療として使用するとき有効性改善の達成に有利である、単価二量体としての、Ｆｃ融合タンパク質構築物を提供する。また提供されるのは、腫瘍増殖阻害活性が増加し、故に、癌治療として使用するとき有利である、Ｆｃ領域にエフェクター機能を低減する変異を有するＦｃ融合タンパク質構築物である。
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月２３日出願の米国仮特許出願６２／７４９,４８９、２０１８年１２月１９日出願の米国仮特許出願６２／７８１,８９８、２０１９年１月０４日出願の米国仮特許出願６２／７８８,４９９、２０１９年４月０１日出願の米国仮特許出願６２／８２７,３４７および２０１９年９月０４日出願の米国仮特許出願６２／８９５,８８９に対する利益および優先権を主張し、これらの開示は、全体としてすべての目的のために引用により本明細書に包含させる。
本出願は、２０１８年１０月２３日出願の米国仮特許出願６２／７４９,４８９、２０１８年１２月１９日出願の米国仮特許出願６２／７８１,８９８、２０１９年１月０４日出願の米国仮特許出願６２／７８８,４９９、２０１９年４月０１日出願の米国仮特許出願６２／８２７,３４７および２０１９年９月０４日出願の米国仮特許出願６２／８９５,８８９に対する利益および優先権を主張し、これらの開示は、全体としてすべての目的のために引用により本明細書に包含させる。
配列表
本出願は、ASCII形式で電子的に提供され、全体として引用により本明細書に包含させる配列表を含む。該ASCIIコピーは２０１９年１０月２２日に作成し、DFY-063WO_SL.txtなる名称であり、サイズは９４６,３５５バイトである。
本出願は、ASCII形式で電子的に提供され、全体として引用により本明細書に包含させる配列表を含む。該ASCIIコピーは２０１９年１０月２２日に作成し、DFY-063WO_SL.txtなる名称であり、サイズは９４６,３５５バイトである。
発明の分野
本発明は、一般にヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびこのようなタンパク質を含む医薬組成物およびヒト患者における疾患または障害の処置における使用方法に関する。
本発明は、一般にヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびこのようなタンパク質を含む医薬組成物およびヒト患者における疾患または障害の処置における使用方法に関する。
背景
生理学的に活性なタンパク質は、大部分はインビボ半減期が短いとの欠点を有する。この欠点を解決するために、ＰＥＧ(ポリエチレングリコール)などとコンジュゲートさせるまたは抗体Ｆｃ(結晶性フラグメント)領域と融合させることが試みられている。２以上の異なるサブユニットからなり、該２以上の異なるサブユニットが生理学的活性を発揮するためにタンパク質複合体を形成するタンパク質を、Ｆｃのホモ二量体性によりホモ二量体を形成する、Ｆｃ融合タンパク質形態を調製するために野生型Ｆｃドメインと融合させ得る。２以上の異なるサブユニットからなり、該２以上の異なるサブユニットが生理学的活性を発揮するためにタンパク質複合体を形成するタンパク質を、また、ＩｇＧ１だけでなく、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４などの他のアイソタイプ抗体にも由来するヘテロ二量体Ｆｃ領域と融合させて、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成させ得る。故に、２以上の異なるサブユニットからなり、２以上のサブユニットがタンパク質複合体を形成することにより生理学的活性を発揮するタンパク質の１以上のサブユニットを、ヘテロ二量体Ｆｃバリアント領域の末端に融合させて、改善されたＦｃ融合タンパク質形態を形成し得る。
生理学的に活性なタンパク質は、大部分はインビボ半減期が短いとの欠点を有する。この欠点を解決するために、ＰＥＧ(ポリエチレングリコール)などとコンジュゲートさせるまたは抗体Ｆｃ(結晶性フラグメント)領域と融合させることが試みられている。２以上の異なるサブユニットからなり、該２以上の異なるサブユニットが生理学的活性を発揮するためにタンパク質複合体を形成するタンパク質を、Ｆｃのホモ二量体性によりホモ二量体を形成する、Ｆｃ融合タンパク質形態を調製するために野生型Ｆｃドメインと融合させ得る。２以上の異なるサブユニットからなり、該２以上の異なるサブユニットが生理学的活性を発揮するためにタンパク質複合体を形成するタンパク質を、また、ＩｇＧ１だけでなく、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４などの他のアイソタイプ抗体にも由来するヘテロ二量体Ｆｃ領域と融合させて、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を形成させ得る。故に、２以上の異なるサブユニットからなり、２以上のサブユニットがタンパク質複合体を形成することにより生理学的活性を発揮するタンパク質の１以上のサブユニットを、ヘテロ二量体Ｆｃバリアント領域の末端に融合させて、改善されたＦｃ融合タンパク質形態を形成し得る。
Ｆｃヘテロ二量体化は、２つのＦｃフラグメントが、天然に存在する抗体と極めて類似する三次(tertiary)構造を有しながら、配列変動が最小のヘテロ二量体を形成するように、遺伝子操作により２つの異なるＣＨ３ドメインのＦｃに変異を導入する技術である(例えば、米国特許７,６９５,９３６参照)。
本明細書に記載する本発明は、種々の長さのリンカーの導入またはＦｃのＣＨ２およびＣＨ３ドメインにおける変異により、ヘテロ二量体タンパク質の２つのサブユニットが異なるヘテロ二量体化ドメインを有する２つのＦｃドメインに結合されている、Ｆｃ融合タンパク質形態を改善するための設計を提供する。
概要
本発明は、一般にヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびこのようなタンパク質を含む医薬組成物に関する。
本発明は、一般にヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびこのようなタンパク質を含む医薬組成物に関する。
ある態様において、本発明は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、ここで、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含み、そして、ここで多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは互いに結合している、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。
ある実施態様において、エフェクター機能は、Ｆｃドメインポリペプチドが抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)、抗体依存性細胞食作用(ＡＤＣＰ)および／または補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)を誘導する能力を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ヒト抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ Ｆｃドメインポリペプチド(例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ Ｆｃドメインポリペプチド)である。ある実施態様において、第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ＥＵナンバリング下、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質はフコシル化されている。
ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ＥＵナンバリング下、２３４、２３５、２３７、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｃ２２０Ｓを含む。
ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ＥＵナンバリング下、２３５および／または３２９の位置に１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＬ２３５ＥおよびＰ３２９Ａから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｌ２３５Ｅを含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々変異Ｓ２２８Ｐを含む。
他の態様において、本発明は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。
さらに他の態様において、本発明は多サブユニットサイトカインのサブユニットおよび免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドを含むポリペプチドを提供し、Ｆｃドメインポリペプチドは、異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのヘテロ二量体化を促進する変異およびＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含む。例えば、変異を含むＦｃドメインポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドであり得る。
ある実施態様において、Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される。例えば、ある実施態様において、Ｆｃのエフェクター機能を低減させる変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａである。
ある実施態様において、ヘテロ二量体化を促進する変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗである。ある他の実施態様において、ヘテロ二量体化を促進する変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔである。
ある実施態様において、Ｆｃドメインポリペプチドは、さらに異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのジスルフィド結合形成を促進する変異を含む。例えば、ヘテロ二量体化変異がＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗであるとき、ある実施態様において、ジスルフィド結合形成を促進する変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｙ３４９Ｃである。ヘテロ二量体化変異がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔであるとき、ある実施態様において、ジスルフィド結合形成を促進する変異は、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｓ３５４Ｃである。
例えば、ある実施態様において、多サブユニットサイトカインのサブユニットおよび免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドを含むポリペプチドは、配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列のアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本発明は、配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸を提供する。さらに他の態様において、本発明は、配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含む発現ベクターを提供する。ある態様において、本発明は、配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸または配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含む発現ベクターを含む細胞を提供する。
他の態様において、本発明は、免疫グロブリンＦｃの第一Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＦｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合しており、第一Ｆｃドメインポリペプチドおよび／または第二の異なるＦｃドメインポリペプチドのＮ末端またはＣ末端の１以上の末端に結合しており；ここで、第一Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二Ｆｃドメインポリペプチドがヘテロ二量体Ｆｃ形成を促進し、かつＦｃのエフェクター機能を低減するように変異されているものを提供する。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質はＩＬ－１２(例えば、ヒトＩＬ－１２)であり、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質において、ＩＬ－１２のｐ３５およびｐ４０サブユニットが互いに結合しており、第一Ｆｃドメインポリペプチドおよび／または第二ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端またはＣ末端の１以上の末端に結合しており；ここで、第一Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二Ｆｃドメインポリペプチドがヘテロ二量体Ｆｃ形成を促進し、かつＦｃのエフェクター機能を低減するように変異されている。
ある態様において、本発明は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合した第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含み、ここで、第一ポリペプチドは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合された多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており；Ｘ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドの少なくとも一方はヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
他の態様において、本発明は、免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドにアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含むリンカーにより結合された多サブユニットサイトカインのサブユニットを含み；Ｆｃドメインポリペプチドが異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのヘテロ二量体化を促進する変異およびＦｃのエフェクター機能を低減するためのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ置換を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を提供する。
ある実施態様において、本発明は、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含むまたはそれからなるリンカーにより第一ヒトＩｇＧ１(ｈＦｃドメインポリペプチドＩｇＧ１)Ｆｃドメインポリペプチドに結合したヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットおよびアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)を含むまたはそれからなるリンカーにより第二ｈＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドに結合したヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットを含み、第一および第二Ｆｃドメインポリペプチドがヘテロ二量体化を促進する変異およびｈＩｇＧ１ Ｆｃのエフェクター機能を低減するためのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ置換を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質提供する。
ある態様において、本発明は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み、ここで、タンパク質配列は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドにアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)(ここで、ＸはＬまたはＥである)を含むリンカーにより融合しており；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合され、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは互いに結合しているものを提供する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含み、ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み、ここで、タンパク質配列は第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドにリンカーにより融合しており；そして第二ポリペプチドは多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットをさらに含み、ここで、タンパク質配列は第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドにリンカーにより融合している。多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットのタンパク質配列を第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、Ｇ４Ｓ(配列番号１１０)、(Ｇ４Ｓ)２(配列番号１０９)または(Ｇ４Ｓ)３(配列番号１０８)を含み得る。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)を含む。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)を含む。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含み、各々互いにヘテロ二量体化を促進するように変異されている。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体ＦｃドメインポリペプチドはＫ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ４抗体ＦｃドメインポリペプチドはＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体ＦｃドメインポリペプチドはＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ４抗体ＦｃドメインポリペプチドはＫ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二の異なるＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なるＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む。
ここに開示するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含み、各々互いにヘテロ二量体化を促進するように変異されている。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含み、第二の異なるＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含む。
ある実施態様において、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能を低減するようにさらに変異されたＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む。ある実施態様において、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ｐ３２９Ａを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ｐ３２９Ａを含む。
ある実施態様において、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃベースの融合は、各々Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される変異を含む、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドを取り込む。ある実施態様において、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃベースの融合は、各々変異Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される変異を含む、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドを取り込む。
ある実施態様において、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃベースのタンパク質は、鎖間ジスルフィド結合を導入するようにさらに変異されたＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを組み込む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｙ３４９Ｃを含み、第二の異なるＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｓ３５４Ｃを含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｓ３５４Ｃを含み、第二の異なるＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｙ３４９Ｃを含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に天然ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、ｐ３５のＣ７４とｐ４０のＣ１７７の間に天然ジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、Ｐ３５のＶ１８５ＣとＰ４０のＹ２９２Ｃの間に人工のまたは操作されたジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に天然ジスルフィド結合および多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合およびＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、ｐ３５のＣ７４とｐ４０のＣ１７７の間に天然ジスルフィド結合およびＰ３５のＶ１８５ＣとＰ４０のＹ２９２Ｃの間に人工のまたは操作されたジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、天然ジスルフィド結合が除かれ、次いで非天然の人工のまたは操作されたジスルフィド結合で置換されるよう操作される。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、天然Ｃ７４がセリンに変異されているＩＬ－１２のｐ３５および天然Ｃ１７７がセリンに変異されているＩＬ－１２のｐ４０を含み、それにより、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間の天然ジスルフィド結合が除かれる。この変異ＩＬ－１２に、Ｐ３５のＶ１８５ＣおよびＰ４０のＹ２９２Ｃの、２つの新規変異が導入され、それにより、非天然の人工のまたは操作されたジスルフィド結合が導入される。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、第一ポリペプチドおよび第二の異なるポリペプチドは、それぞれ第一サブユニットおよび第二の異なる多サブユニットサイトカインのサブユニットを含む。本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、第一ポリペプチドおよび第二の異なるポリペプチドは、それぞれ第二の異なるサブユニットおよび第一多サブユニットサイトカインのサブユニットを含む。例示的実施態様において、サイトカインはＩＬ－１２(例えば、ヒトＩＬ－１２)である。ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の何れかを含む製剤、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を発現する１以上の核酸を含む細胞またはヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を発現するベクターおよびヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を使用して腫瘍細胞死を増強する方法も提供される。ある実施態様において、本発明は、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤を提供する。
他の態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、少なくとも１つの抗体可変ドメイン(例えば、抗体重鎖可変ドメイン)をさらに含む。ある実施態様において、少なくとも１つの抗体重鎖可変ドメインは抗体軽鎖可変領域に結合してＦａｂを形成し、Ｆａｂの重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインは第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合する。
ある実施態様において、本発明の少なくとも１つの抗体可変ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれ、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを有する。
ある実施態様において、本発明の少なくとも１つの抗体可変ドメインを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、それぞれ、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを有する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一ポリペプチドの第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに対してＣ末端に位置した抗体重鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第二ポリペプチドの第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに対してＣ末端に位置した抗体重鎖可変ドメインを含む。ある実施態様において、抗体重鎖可変領域は、ｓｃＦｖを形成するように抗体軽鎖可変領域に結合する。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、それぞれ第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に結合される。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、それぞれ第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に結合される。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、抗体可変ドメインを含まない。例えば、ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニット(例えば、ＩＬ－１２タンパク質)、所望によりスペーサーペプチドを含むリンカーおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド；および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット(例えば、ＩＬ－１２タンパク質)、所望によりスペーサーペプチドを含むリンカーおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドからなるまたはそれから本質的になる。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、プロテオグリカン結合ドメインをさらに含む。ある実施態様において、プロテオグリカン結合ドメインは、腫瘍で特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する。ある実施態様において、プロテオグリカン結合ドメインは、シンデカン、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合する。ある実施態様において、ＳＬＲＰは、デコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される。ある実施態様において、プロテオグリカン結合ドメインは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。ある実施態様において、プロテオグリカン結合ドメインは、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、コラーゲン結合ドメインをさらに含む。ある実施態様において、コラーゲン結合ドメインは、腫瘍で特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する。ある実施態様において、コラーゲン結合ドメインは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。ある実施態様において、コラーゲン結合ドメインは、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。ある実施態様において、ヒアルロン酸結合ドメインは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。ある実施態様において、ヒアルロン酸結合ドメインは、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合する。
本発明の他の態様は、患者における癌を処置する方法を提供する。方法は、患者、例えば、それを必要とする患者に有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または有効量のここに記載する多特異的結合タンパク質を含む製剤を投与することを含む。例えば、ある実施態様において、癌を処置する方法は、患者、例えば、それを必要とする患者に、有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤を投与することを含む。
ある実施態様において、本発明は、癌を処置する方法であって、患者に単回用量のみのヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、単回用量は、癌に対する完全応答の誘導に十分な量である。ある実施態様において、単回用量は、癌の再発遅延または予防に十分な量である。
ある実施態様において、本発明は、癌を処置する方法であって、患者に単回用量のみの配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、単回用量の配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤は、癌に対する完全応答の誘導に十分な量である。ある実施態様において、単回用量は、癌の再発遅延または予防に十分な量である。
本発明の他の態様は、急性放射線症候群を処置する方法であって、患者にここに開示するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または製剤を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、急性放射線症候群は造血放射線症候群、消化器放射線症候群、神経血管放射線症候群および皮膚放射線症候群から選択される１以上の症候群を含む。ある実施態様において、急性放射線症候群は造血放射線症候群、消化器放射線症候群、神経血管放射線症候群および皮膚放射線症候群からなる群から選択される症候群を含む。
要約すると、本発明は、多サブユニットタンパク質のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質構築物を提供する。これらの融合タンパク質構築物は、天然／自然多サブユニットタンパク質と比較して長い血清半減期、製造中の収率改善、保存中の安定性増強および／または治療として使用するとき有効性改善を示し得る。
図４Ａ～４Ｄは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合した第一ｓｃＦｖおよび第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合した第二ｓｃＦｖを含む例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。第一ｓｃＦｖおよび第二ｓｃＦｖは同一でも異なってもよい(例えば、異なる抗原にまたは単一抗原の異なるエピトープに結合する)。図４Ａおよび図４Ｃに記載される例示的Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体化Ｆｃバリアントの異なる対を含む。図４Ｂおよび図４Ｄに記載される例示的Ｆｃ融合タンパク質は、ヘテロ二量体化Ｆｃバリアントの異なる対を含む。例えば、ヘテロ二量体化変異が「ノブ・イントゥー・ホール(knobs-into-holes)」変異を含むとき、図４Ａおよび図４Ｄは、第一ポリペプチドが「ホール」変異を含み、第二ポリペプチドが「ノブ」変異を含む例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する；図４Ｂおよび図４Ｃは、第一ポリペプチドが「ノブ」変異を含み、第二ポリペプチドが「ホール」変異を含む例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。図４Ａおよび図４Ｂは、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットのタンパク質配列が第一ポリペプチドに結合される、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する；図４Ｃおよび図４Ｄは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第一ポリペプチドに結合される、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。他のタイプのヘテロ二量体化変異を有するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質も同様に考慮される。
図４Ｅおよび４Ｇは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合したｓｃＦｖを含む、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。
図４Ｆおよび４Ｈは、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に結合したｓｃＦｖを含む、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。
図４Ｉ～４Ｌは、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に結合した第一Ｆａｂおよび第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に結合した第二Ｆａｂを含む例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。図４Ｉおよび図４Ｋは、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットが第一ポリペプチドに結合される、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する；図４Ｊおよび図４Ｌは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第一ポリペプチドに結合される、例示的Ｆｃ融合タンパク質を記載する。図４Ｋは、図４Ｉと、抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを結合する長いアミノ酸配列(例えば、ここに開示するスペーサーペプチド)を有する点で異なる；図４Ｊは、図４Ｌと、抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを結合する長いアミノ酸配列(例えば、ここに開示するスペーサーペプチド)を有する点で異なる。
図１３Ｂは、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(ＤＦ ＩＬ－１２－Ｆｃ)およびｒｈＩＬ－１２での処理に応答した末梢血単核細胞(ＰＢＭＣ)によるＩＦＮγ産生を示すグラフである。
詳細な記載
本発明は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の改善、このようなタンパク質を含む医薬組成物および癌の処置を含むこのようなタンパク質および医薬組成物を使用する治療方法を提供する。
本発明は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の改善、このようなタンパク質を含む医薬組成物および癌の処置を含むこのようなタンパク質および医薬組成物を使用する治療方法を提供する。
本発明の理解を用意にするために、いくつかの用語および表現を下に定義する。
ここで使用する単数表現は、文脈に反しない限り、「１以上」を意味し、複数を含む。
ここで使用する用語「対象」および「患者」は、ここに記載する方法および組成物で処置される生物をいう。このような生物は、好ましくは、哺乳動物(例えば、マウス、サル、ウマ、ウシ、ブタ、イヌ、ネコなど)を含む、より好ましくはヒトを含むが、これらに限定されない。
ここで使用する用語「有効量」は、化合物(例えば、本発明の化合物)の有益なまたは所望の結果(例えば、所望の予防または治療効果)を発揮するのに十分な量をいう。有効量を１回以上の投与、適用または用量により投与でき、特定の製剤または投与経路への限定は意図されない。ここで使用する用語「処置する」は、状態、疾患、障害などの改善またはその症状の改善をもたらす、あらゆる効果、例えば、軽減、低減、調節、改善または除去を含む。
ここで使用する用語「医薬組成物」は、原薬物をインビボまたはエクスビボでの診断または治療に特に適するものとするための、活性もしくは不活性な担体との組み合わせ物をいう。
ここで使用する用語「薬学的に許容される担体」は、リン酸緩衝化食塩水溶液、水、エマルジョン(例えば、油／水または水／油エマルジョンなど)および種々のタイプの湿潤剤などの標準医薬担体の何れかをいう。組成物はまた安定化剤および防腐剤も含み得る。担体、安定化剤およびアジュバントの例について、例えば、Martin, Remington's Pharmaceutical Sciences, 15th Ed., Mack Publ. Co., Easton, PA [1975]参照。
ここで使用する用語「薬学的に許容される塩」は、対象への投与により、本発明の化合物またはその活性代謝物もしくは残基を提供できる、本発明の化合物のあらゆる薬学的に許容される塩(例えば、酸または塩基との)をいう。当業者には知られるとおり、本発明の化合物の「塩」は、無機または有機酸および塩基に由来し得る。例示的酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン－ｐ－スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン－２－スルホン酸、ベンゼンスルホン酸などを含むが、これらに限定されない。シュウ酸などの他の酸は、それ自体薬学的に許容されないが、本発明の化合物およびその薬学的に許容される酸付加塩を得る中間体として有用な塩の製造において用いられ得る。
例示的塩基は、アルカリ金属(例えば、ナトリウム)水酸化物、アルカリ土類金属(例えば、マグネシウム)水酸化物、アンモニアおよび式ＮＷ４
＋(式中、ＷはＣ１－４アルキルなどである)の化合物を含むが、これらに限定されない。
例示的塩は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、二グルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、フルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピルビン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシル酸塩、ウンデカン酸塩などを含むが、これらに限定されない。塩の他の例は、Ｎａ＋、ＮＨ４
＋およびＮＷ４
＋(式中、ＷはＣ１－４アルキル基である)などの適当なカチオンと会合する本発明の化合物のアニオンなどを含む。
治療使用のため、本発明の化合物の塩は薬学的に許容されることが意図される。しかしながら、薬学的に許容されない酸および塩基の塩も、例えば、薬学的に許容される化合物の製造または精製に有用であり得る。
明細書をとおして、組成物が特定の成分を有する、含むまたは包含すると記載されているときまたは過程および方法が特定の工程を有する、含むまたは包含すると記載されているとき、さらに、記載の成分から本質的になるまたはそれからなる本発明の組成物が存在するおよび記載する処理工程から本質的になるまたはそれからなる本発明の過程および方法があることが意図される。
一般的事項として、パーセンテージで特定する組成は、特に断らない限り重量による。さらに、可変要素に定義が付随しないならば、その可変要素の先の定義が支配する。
Ｉ. タンパク質
本発明は、多サブユニットタンパク質のアミノ酸配列を含むＦｃ融合タンパク質構築物を提供する。これらの融合タンパク質構築物は、天然／自然の多サブユニットタンパク質と比較して長い血清半減期、製造中の収率改善、保存中の安定性増強および／または治療として使用するとき有効性改善を示し得る。
本発明は、多サブユニットタンパク質のアミノ酸配列を含むＦｃ融合タンパク質構築物を提供する。これらの融合タンパク質構築物は、天然／自然の多サブユニットタンパク質と比較して長い血清半減期、製造中の収率改善、保存中の安定性増強および／または治療として使用するとき有効性改善を示し得る。
ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質
ある態様において、本発明は、第一抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第一抗体Ｆｃドメインに結合した第二抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含む、ヘテロ二量体ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合された多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており；Ｘ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドの少なくとも一方はヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含むものを提供する。
ある態様において、本発明は、第一抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第一抗体Ｆｃドメインに結合した第二抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含む、ヘテロ二量体ＩｇＧ１ Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合された多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており；Ｘ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドの少なくとも一方はヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含むものを提供する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、さらにスペーサーペプチドを含む。ある実施態様において、リンカーは、配列番号２３７または配列番号６の配列およびスペーサーペプチドを含む。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)およびスペーサーペプチドを含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーのアミノ酸配列は、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーのアミノ酸配列と同一である。
「スペーサーペプチド」の表題下に記載するあらゆるスペーサーペプチドが用いられ得る。例えば、ある実施態様において、スペーサーペプチドは、配列番号１０７～１２０の何れかに示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、スペーサーペプチドは、配列番号１０７～１２０の何れかに示すアミノ酸配列からなる。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、ここに開示するスペーサーペプチドおよび配列番号２３７または配列番号６の配列を有するペプチドからなるまたは本質的にそれからなる。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、ここに開示するスペーサーペプチドおよび配列番号２３７または配列番号６の配列を有するペプチドからなるまたは本質的にそれからなる。ある実施態様において、スペーサーペプチドは、リンカーの一方または両方のＮ末端である。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)またはＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)を含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)からなる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ＦｃドメインポリペプチドはＩｇＧ１ Ｆｃのものである。ある実施態様において、本発明のタンパク質は第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含み、両者とも互いにヘテロ二量体化を促進する変異ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドである。例えば、ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１のＦｃ由来であるならば、ＦｃドメインはヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４～３３２と少なくとも９０％同一であり、Ｑ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１およびＫ４３９からなる群から選択される１か所以上で異なるアミノ酸配列を含み得る。
ある実施態様において、抗体定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１抗体のアミノ酸２３４～３３２と少なくとも９０％同一であり、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９ＤおよびＫ４３９Ｅからなる群から選択される１以上の置換により異なるアミノ酸配列を含み得る。ここに開示するＦｃドメインまたはヒンジ領域における全アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに従い番号付けされる。
ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＩｇＧ１ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、第二抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含む。
ある実施態様において、ＩｇＧ１ Ｆｃを有する本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ、ＦｃγＲIIIＡまたはＦｃγＲIIIＢ)または補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)への結合を低減する１以上の変異を含む。このような変異は、エフェクター機能の低減に有用である。例えば、本開示のタンパク質は、ＬＡＬＡ(Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ)変異、ＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異、ＬＡＬＡＰＧ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ)変異またはＬＡＬＥＧＡＡＳＰＳ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ)変異を含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、各々変異Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ａを含む第一抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む。特定の実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、各々変異Ｐ３２９Ａを含む第一抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む。
ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、各々Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される変異を含む。ある実施態様において、第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体の安定性を改善するＩｇＧ１ Ｆｃモノマー間のさらなるジスルフィド結合が導入される。例示的実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットに融合した第一抗体ＦｃドメインポリペプチドはＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ置換を含み、これは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに融合した第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＳ３５４Ｃ置換とジスルフィド結合を形成する。あるいは、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットに融合した第一抗体ＦｃドメインポリペプチドはＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ置換を含み、これは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに融合した第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＹ３４９Ｃ置換とジスルフィド結合を形成する。
下表２に提供するＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドの何れも、下表１に提供するＩｇＧ１ヒンジ配列(これは、本発明においては、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットのタンパク質配列を第一ＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーまたはさらなるサブユニットを第二の異なるＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーの一部または全体である)の何れと組み合わせて用いてもよい。例示的ＩｇＧ１ヒンジ－Ｆｃドメインポリペプチドは下表３に提供する。ある実施態様において、Ｆｃ融合タンパク質の第一および第二ポリペプチドは、それぞれ配列番号２１２および２１２；２１３および２１４；２１５および２１６；２１７および２１８；２１４および２１３；２１６および２１５；または２１８および２１７のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、Ｆｃ融合タンパク質の第一および第二ポリペプチドは、それぞれ配列番号２２８および２２８；２２９および２３０；２３１および２３２；２３３および２３４；２３５および２３６；２３０および２２９；２３２および２３１；２３４および２３３；２３６および２３５；２２８および２５０；２５０および２２８；２５０および２５０；２２９および２５２；２５２および２２９；２５１および２３０；２３０および２５１；２５３および２３２；２３２および２５３；２３１および２５４；２５４および２３１；２５５および２３４；２３４および２５５；２３３および２５６；２５６および２３３；２５７および２３６；２３６および２５７；２５８および２３５；または２３５および２５８のアミノ酸配列を含む。
ＩｇＧ４ Ｆｃ融合タンパク質
ある態様において、本発明は、多サブユニットタンパク質を改善する。ある態様において、本発明は、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合した第二の異なる抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩｇＧ４ Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドは第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドにアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)を含むリンカーにより融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み(ここで、ＸはＬまたはＥである)；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており；第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含むものを提供する。
ある態様において、本発明は、多サブユニットタンパク質を改善する。ある態様において、本発明は、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合した第二の異なる抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩｇＧ４ Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドは第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドにアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)を含むリンカーにより融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをさらに含み(ここで、ＸはＬまたはＥである)；多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、多サブユニットタンパク質のサブユニットは互いに結合しており；第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含むものを提供する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体ＩｇＧ４ Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(ここで、ＸはＬまたはＥである)(配列番号１)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットのタンパク質配列を第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、さらにスペーサーペプチドを含む。ある実施態様において、リンカーは、配列番号１の配列およびスペーサーペプチドを含む。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(ここで、ＸはＬまたはＥである)(配列番号１)およびスペーサーペプチドを含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(ここで、ＸはＬまたはＥである)(配列番号１)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーのアミノ酸配列は、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーのアミノ酸配列と同一である。
「スペーサーペプチド」なる表題下に記載されるあらゆるスペーサーペプチドが用いられ得る。例えば、ある実施態様において、スペーサーペプチドは、配列番号１０７～１２０の何れかに示すアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、スペーサーペプチドは、配列番号１０７～１２０の何れかに示すアミノ酸配列からなる。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、ここに開示するスペーサーペプチドおよび配列番号１からなるまたは本質的にそれからなる。ある実施態様において、リンカーは、ここに開示するスペーサーペプチドおよび配列番号１からなるまたは本質的にそれからなる。ある実施態様において、スペーサーペプチドは第一リンカーおよび／または第二リンカーに対してＮ末端である。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質のサブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)を含む。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)を含む。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを融合するリンカーは、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)からなる。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)を含むリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)からなるリンカーにより、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。
ある実施態様において、ＦｃドメインポリペプチドはＩｇＧ４ Ｆｃのものである。ＩｇＧ４は、体内でＦａｂアーム交換および他のＩｇＧ４抗体との対形成を受け得る不安定二量体である。ある実施態様において、Ｓ２２８Ｐ変異はヒンジ(これは、本発明においては、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーまたはさらなるサブユニットを第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーの一部または全体である)内に導入され、これはヒンジ領域の安定性を高め、Ｆａｂアーム交換の確率を下げる。ある実施態様において、Ｆｃドメインポリペプチドモノマー間のさらなるジスルフィド結合が導入され、これはヘテロ二量体の安定性を改善する。例示的実施態様において、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットに結合した第一抗体ＦｃドメインポリペプチドはＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ置換を含み、これは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに結合した第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＳ３５４Ｃ置換とジスルフィド結合を形成する。あるいは、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットに結合した第一抗体ＦｃドメインポリペプチドはＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ置換を含み、これは、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに結合した第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＹ３４９Ｃ置換とジスルフィド結合を形成する。
ある実施態様において、本発明のタンパク質は第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含み、これは互いにヘテロ二量体化を促進する変異ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドである。
ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＫ３６０Ｅ、Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗから選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＩｇＧ４ ＦｃドメインポリペプチドはＥ３５７Ｎ、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔから選択される１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む。ある実施態様において、第一抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体ＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドは変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む。
ある実施態様において、ＩｇＧ４ Ｆｃを有する本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ、ＦｃγＲIIIＡまたはＦｃγＲIIIＢ)または補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)への結合を低減する１以上の変異を含む。このような変異は、エフェクター機能の低減に有用である。例えば、本開示のタンパク質は、ＳＰＬＥ(Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ)変異、ＳＰＬＥＰＡ(Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａ)変異またはＳＰＬＥＰＧ(Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ｇ)変異を含む。
表２に提供するＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドの何れも、表１に提供するＩｇＧ４ヒンジ配列(これは、本発明においては、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一ＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーまたは多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二の異なるＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するリンカーの一部または全体である)の何れと組み合わせて用いてもよい。例示的ＩｇＧ４ヒンジ－Ｆｃドメインポリペプチドは表３に提供される。ある実施態様において、Ｆｃ融合タンパク質の第一および第二ポリペプチドは、それぞれ配列番号２０５および２０５；２０６および２０７；２０８および２０９；２１０および２１１；２０７および２０６；２０９および２０８；または２１１および２１０のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、Ｆｃ融合タンパク質の第一および第二ポリペプチドは、それぞれ配列番号２１９および２１９；２２０および２２１；２２２および２２３；２２４および２２５；２２６および２２７；２２１および２２０；２２３および２２２；２２５および２２４；または２２７および２２６のアミノ酸配列を含む。
ジスルフィド結合
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、ｐ３５のＣ７４とｐ４０のＣ１７７の間に天然ジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、ｐ３５のＣ７４とｐ４０のＣ１７７の間に天然ジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、Ｐ３５のＶ１８５ＣとＰ４０のＹ２９２Ｃの間に人工のまたは操作されたジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合および多サブユニットタンパク質の第一サブユニットと多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。例えば、例示的実施態様において、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に天然ヘテロ二量体ジスルフィド結合を含み、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間に人工のまたは操作されたヘテロ二量体ジスルフィド結合を含む。このようなタンパク質は、ｐ３５のＣ７４とｐ４０のＣ１７７の間に天然ジスルフィド結合およびＰ３５のＶ１８５ＣとＰ４０のＹ２９２Ｃの間に人工のまたは操作されたジスルフィド結合を含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、天然ジスルフィド結合を除き、非天然の人工のまたは操作されたジスルフィド結合に置き換えるよう操作される。例えば、例示的実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は天然Ｃ７４がセリンに変異されているＩＬ－１２のｐ３５および天然Ｃ１７７がセリンに変異されているＩＬ－１２のｐ４０を含み、それにより、ＩＬ－１２のｐ３５とｐ４０サブユニットの間の天然ジスルフィド結合が除かれる。この変異ＩＬ－１２に、２つの新規変異が導入され、Ｐ３５のＶ１８５ＣおよびＰ４０のＹ２９２Ｃ、それにより、非天然の人工のまたは操作されたジスルフィド結合が導入される。
Ｆｃ融合ポリペプチドの成分の配列
本発明の例示的ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、下表１～２に記載のＩｇＧ１またはＩｇＧ４ Ｆｃバリアント配列の何れかおよび対応するリンカー配列の何れかを用いて構築される。本発明の融合タンパク質構築物は、天然／自然の多サブユニットタンパク質と比較して長い血清半減期、製造中のタンパク質収率改善、保存中の安定性増強および／または治療剤として使用したときの有効性改善を提供し得る。
本発明の例示的ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、下表１～２に記載のＩｇＧ１またはＩｇＧ４ Ｆｃバリアント配列の何れかおよび対応するリンカー配列の何れかを用いて構築される。本発明の融合タンパク質構築物は、天然／自然の多サブユニットタンパク質と比較して長い血清半減期、製造中のタンパク質収率改善、保存中の安定性増強および／または治療剤として使用したときの有効性改善を提供し得る。
表４および５は、本発明の例示的タンパク質構築物のアミノ酸配列を列記する。Ｆｃドメインポリペプチドにおける全ての変異／置換は、ＥＵナンバリングシステムに従い番号付けされる。ｐ３５およびｐ４０サブユニットにおける変異は、これらサブユニットの各Ｎ末端アミノ酸から開始して番号付けされる。
下表２に提供するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアントドメインポリペプチドの何れも、下表１に提供するＩｇＧ４ヒンジ配列の何れと組み合わせて用いてもよい。同様に、下表２に提供するＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアントドメインポリペプチドの何れも、下表１に提供するＩｇＧ１ヒンジ配列の何れと組み合わせて用いてもよい。例示的ＩｇＧ１ヒンジ－Ｆｃドメインポリペプチドは、下表３に提供される。
ＩＬ－１２サブユニット
ＩＬ－１２は、ｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットを含む多サブユニットタンパク質である。成熟野生型ＩＬ－１２ ｐ４０のアミノ酸配列は、下に示す配列番号１２７のGenBank Accession No. NP_002178.2のアミノ酸２３～３２８である。成熟野生型ＩＬ－１２ ｐ３５のアミノ酸配列は、下に示す配列番号１２８のGenBank Accession No. NP_000873.2のアミノ酸５７～２５３である。ここで使用するｐ４０およびｐ３５のアミノ酸残基のナンバリングは、成熟野生型タンパク質配列に対応する。ここで使用するＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットは、配列番号１２７と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一であるアミノ酸配列を含む。ここで使用するＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットは、配列番号１２８と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一であるアミノ酸配列を含む。
ＩＬ－１２は、ｐ４０サブユニットおよびｐ３５サブユニットを含む多サブユニットタンパク質である。成熟野生型ＩＬ－１２ ｐ４０のアミノ酸配列は、下に示す配列番号１２７のGenBank Accession No. NP_002178.2のアミノ酸２３～３２８である。成熟野生型ＩＬ－１２ ｐ３５のアミノ酸配列は、下に示す配列番号１２８のGenBank Accession No. NP_000873.2のアミノ酸５７～２５３である。ここで使用するｐ４０およびｐ３５のアミノ酸残基のナンバリングは、成熟野生型タンパク質配列に対応する。ここで使用するＩＬ－１２ ｐ４０サブユニットは、配列番号１２７と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一であるアミノ酸配列を含む。ここで使用するＩＬ－１２ ｐ３５サブユニットは、配列番号１２８と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一であるアミノ酸配列を含む。
前記態様の何れかのある実施態様において、ＩＬ－１２のｐ４０およびｐ３５サブユニットは、それぞれ配列番号１２１および１２２；１２７および１２８；２０１および２０２；２０３および２０４；１２３および１２４；または１２５および１２６のアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、第一ポリペプチドはＩＬ－１２のｐ４０サブユニットのアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチドはＩＬ－１２のｐ３５サブユニットのアミノ酸配列を含む。ある実施態様において、第一ポリペプチドはＩＬ－１２のｐ３５サブユニットのアミノ酸配列を含み、第二ポリペプチドはＩＬ－１２のｐ４０サブユニットのアミノ酸配列を含む。
ある実施態様において、本発明は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一ポリペプチドはリンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合したＩＬ－１２の第一サブユニット；および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合したＩＬ－１２の第二の異なるサブユニットをさらに含み、ここで、ＩＬ－１２の第一および第二の異なるサブユニットは互いに結合しており、ここで、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含む、ここで、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは互いに結合しており、そして、ここでＩＬ－１２の第一サブユニットはＹ２９２Ｃ置換を有するｐ４０サブユニットであり、ＩＬ－１２の第二の異なるサブユニットはＶ１８５Ｃ置換を有するｐ３５サブユニットであるものを含む。ある実施態様において、ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは、それぞれ配列番号１２５および１２６のアミノ酸配列を含む。
ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは、表４に記載の構築物１２０、１２０－１、１２０－２、１２０－３、１２０－４、１２０－５、１２０－６および１２０－７および表５に記載の構築物２０、２０－１、２０－２、２０－３、２０－４、２０－５、２０－６、２０－７、２０－８および２０－９を含むが、これらに限定されない配列を有するＦｃ融合タンパク質を形成するように、ここに開示する何れかのリンカーを介して、抗体Ｆｃドメインポリペプチドの何れかに融合され得る。
ある実施態様において、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットはＣ１７７の置換をさらに含み、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットはＣ７４の置換をさらに含む。ある実施態様において、ＩＬ－１２のｐ４０サブユニットにおけるＣ１７７はＳに置換され、ＩＬ－１２のｐ３５サブユニットにおけるＣ７４はＳに置換される。ある実施態様において、ＩＬ－１２のｐ４０およびｐ３５サブユニットは、それぞれ配列番号１２３および１２４のアミノ酸配列を含む。
ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは、表４に記載の構築物１１９、１１９－１、１１９－２、１１９－３、１１９－４、１１９－５、１１９－６、１１９－７および１１９－８および表５に記載の構築物１９、１９－１、１９－２、１９－３、１９－４、１９－５、１９－６、１９－７、１９－８、１９－９および１９－１０を含むが、これらに限定されない配列を有するＦｃ融合タンパク質を形成するように、ここに開示する何れかのリンカーを介して、抗体Ｆｃドメインポリペプチドの何れかに融合され得る。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む。ある実施態様において、配列番号２９０および配列番号２９１を含む本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ変異および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ変異を含む。ある実施態様において、配列番号２９０および配列番号２９１を含む本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメイン間のヘテロ二量体化を促進するため各Ｆｃドメインポリペプチド配列に異なる変異を含む。
ある実施態様において、第一ポリペプチド配列は、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ置換を含む第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド(ヒトＩｇＧ１)配列を含む。ある実施態様において、第二ポリペプチド配列は、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ置換を含む第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド(ヒトＩｇＧ１)配列を含む。ある実施態様において、第一ポリペプチドおよび第二ポリペプチドアミノ酸配列は、エフェクター機能を低減するための１以上の変異を含む。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異を含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の第一ポリペプチド(配列番号２９０)において、ヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットは第一アミノ酸配列を含む第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合し、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の第二ポリペプチド(配列番号２９１)において、ヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットは第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合する。
配列番号２９０は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドに融合したヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニット(下線アミノ酸)の配列である。変異は太字で示す。
配列番号２９１は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドに融合したヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニット(下線アミノ酸)の配列である。変異は太字で示す。
それぞれ配列番号２９０および配列番号２９１のアミノ酸配列により表される第一および第二ポリペプチドは、配列番号２９０における第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド配列(ヒトＩｇＧ１)のＣＨ３ドメインのＹ３４９Ｃ変異(太字および下線)および配列番号２９１における第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド配列(ヒトＩｇＧ１)のＣＨ３ドメインのＳ３５４Ｃ変異(太字および下線)によりジスルフィド結合を形成し、これは、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に安定性を付与する(ＥＵシステムによるＦｃナンバリング)。
ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の２つのＦｃドメインポリペプチド間のヘテロ二量体化を促進するために、配列番号２９０の第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド配列(ヒトＩｇＧ１)はＣＨ３ドメインにおけるＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ置換を含み、配列番号２９１の第二の異なるＦｃドメインポリペプチド配列(ヒトＩｇＧ１)はＣＨ３ドメインにおけるＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ置換を含む(ＥＵシステムによるＦｃナンバリング)。
配列番号２９０および配列番号２９１の第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド配列および第二の異なるＦｃドメインポリペプチド配列(ヒトＩｇＧ１)は、エフェクター機能を低減するためのＬ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ(ＬＡＬＡＰＡ)変異を含む。
スペーサーペプチド
スペーサーペプチド
例示的スペーサーペプチド配列を表７に提供し、例示的完全長リンカー配列を表４および５に提供する。
本発明の第一ポリペプチド内で、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットは、アミノからカルボキシル方向でリンカーを経て第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)に融合されている。そして本発明の第二ポリペプチド内で、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、アミノからカルボキシル方向でリンカーを経て第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)に融合されている。
ある実施態様において、本発明の多サブユニットタンパク質の第一サブユニットはリンカーを経て第一抗体Ｆｃドメイン配列に融合され、ここで、リンカーはスペーサーペプチドＬ１および配列番号１、２、４、６、７、９、１１、２３７、２３８、２３９または２４０のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。ある実施態様において、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットはリンカーを経て第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合され、ここで、リンカーはスペーサーペプチドＬ２および配列番号１、２、４、６、７、９、１１、２３７、２３８、２３９または２４０のアミノ酸配列を含むまたはそれからなる。
ある実施態様において、Ｌ１およびＬ２はペプチドリンカーであり、例えば、Ｌ１および／またはＬ２は４～５０アミノ酸残基含む。ある実施態様において、Ｌ１は４～５０アミノ酸残基からなる。ある実施態様において、Ｌ１は４～２０アミノ酸残基からなる。ある実施態様において、Ｌ２は４～５０アミノ酸残基からなる。ある実施態様において、Ｌ２は約４～２０アミノ酸残基からなる。ある実施態様において、Ｌ１およびＬ２は各々独立して約４～５０アミノ酸残基からなる。ある実施態様において、Ｌ１およびＬ２は各々独立して４～２０アミノ酸残基からなる。
ある実施態様において、Ｌ１およびＬ２は最適化長および／またはアミノ酸組成を有する。ある実施態様において、Ｌ１およびＬ２は同じ長さであり、同じアミノ酸組成を有する。他の実施態様において、Ｌ１およびＬ２は異なる。
ある実施態様において、Ｌ１とＬ２は同じアミノ酸数である；ある実施態様において、Ｌ１はＬ２より長い(すなわち、アミノ酸数が多い)；ある実施態様において、Ｌ１はＬ２より短い(すなわち、アミノ酸数が少ない)。
ある実施態様において、Ｌ１および／またはＬ２は、例えば、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２アミノ酸残基からなる「短」である。故に、ある場合、スペーサーペプチドは、約１２以下のアミノ酸残基からなる。０アミノ酸残基の場合、スペーサーペプチドはペプチド結合である。ある実施態様において、Ｌ１および／またはＬ２は、例えば１５、２０または２５アミノ酸残基からなる「長」である。ある実施態様において、スペーサーペプチドは、約３～約１５、例えば８、９または１０連続アミノ酸残基からなる。Ｌ１およびＬ２のアミノ酸組成に関して、ペプチドは、本発明のタンパク質の第一および第二ポリペプチドに柔軟性を付与する、第一および第二の異なるサブユニットの互いの結合を妨害しないならびにプロテアーゼからの開裂に抵抗する性質から選択される。例えば、グリシンおよびセリン残基は、一般にプロテアーゼ抵抗性を提供する。多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを配列番号１、２、４、６、７、９、１１、２３７、２３８、２３９または２４０のアミノ酸配列に結合するのに適するおよび／または多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを配列番号１、２、４、６、７、９、１１、２３７、２３８、２３９または２４０のアミノ酸配列に結合するのに適するスペーサーペプチドは、リンカーの一部として、(ＧＳ)ｎ、(ＧＧＳ)ｎ、(ＧＧＧＳ)ｎ、(ＧＧＳＧ)ｎ、(ＧＧＳＧＧ)ｎおよび(ＧＧＧＧＳ)ｎ配列を含み得て、ここで、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０である。ある実施態様において、Ｌ１および／またはＬ２は、リンカーの一部として、(ＧＧＧＧＳ)４(配列番号１０７)または(ＧＧＧＧＳ)３(配列番号１０８)配列を独立して含む。他の実施態様において、Ｌ１および／またはＬ２は、リンカーの一部として、表７に列記する配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９および配列番号１２０から選択される配列において示される、ペプチド配列を含む。ある実施態様において、Ｌ１および／またはＬ２は、独立して、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝３(配列番号１０８)、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)または(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)である。
ある実施態様において、Ｌ１は、リンカーの一部として、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝３(配列番号１０８)配列を含み、Ｌ２は、リンカーの一部として、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)または(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)配列を含む。ある実施態様において、Ｌ２は、リンカーの一部として、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝３(配列番号１０８)配列を含み、Ｌ１は、リンカーの一部として、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)または(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)配列を含む。ある実施態様において、Ｌ１は、リンカーの一部として、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９または配列番号１２０に示す配列を含まない。
ある実施態様において、Ｌ２のみ、リンカーの一部として、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９または配列番号１２０に示す配列を含む。ある実施態様において、Ｌ１もＬ２も、リンカーの一部として配列、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、配列番号１１５、配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８、配列番号１１９または配列番号１２０に示す配列を含まない。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドを含み、ここで、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含み、ここで、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含むリンカーは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドに結合するもの、および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここでさらなるサブユニットは、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含まないリンカーで第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含まないリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに結合するもの、および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチド、ここで、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットがＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ(配列番号１１８；(Ｇ４Ｓ)３)を含むリンカーで第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドを含み、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含み、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。
本開示のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカーを含み、これは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えばＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合しており、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えばＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカーは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドに結合するもの、および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここで、多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットが(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含まないリンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含まないリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに結合するもの、および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここで、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドを含み、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドを含み、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えば、ＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。
本開示のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカーを含み、これは、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを第一抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えばＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合しており、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド、例えばＩｇＧ４抗体のＦｃドメインポリペプチドまたはＩｇＧ１抗体のＦｃドメインポリペプチドに結合する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカーは多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドに結合するもの、および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここで多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含まないリンカーで第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含まないリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットに結合するもの、および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチド、ここで、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)配列を含むリンカーが多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドに結合するもの、および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここで、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカー配列で第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の一部は多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドであって、ここで、(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝２(配列番号１０９)を含むリンカー配列が多サブユニットタンパク質の第一サブユニットをＦｃドメインポリペプチドに結合するもの、および多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドであって、ここで、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが(ＧＧＧＧＳ)ｎ＝１(配列番号１１０)を含むリンカー配列で第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに結合するものを含む。
ヘテロ二量体化促進のためのＦｃドメインおよび置換
本発明のタンパク質の集合は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット配列を含む第一ポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット配列を含む第二ポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)を同じ細胞で発現させることにより達成でき、これは、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の集合に至る。集合したタンパク質は、互いに結合した第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを有するヘテロ二量体Ｆｃドメインポリペプチドを有する。Ｆｃのヘテロ二量体の優先的集合の促進は、ＵＳ１３／４９４８７０、ＵＳ１６／０２８８５０、ＵＳ１１／５３３７０９、ＵＳ１２／８７５０１５、ＵＳ１３／２８９９３４、ＵＳ１４／７７３４１８、ＵＳ１２／８１１２０７、ＵＳ１３／８６６７５６、ＵＳ１４／６４７４８０およびＵＳ１４／８３０３３６に示されるとおり、各抗体重鎖定常領域のＣＨ３ドメインに種々の変異を組み込むことにより達成され得る。例えば、変異はヒトＩｇＧ１に基づきＣＨ３ドメインになし、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド内に、これら２鎖が互いに選択的にヘテロ二量体化することを可能とする、別個の対のアミノ酸置換取り込むことによりなし得る。下記のアミノ酸置換の位置は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従い全て番号付けされる。
本発明のタンパク質の集合は、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット配列を含む第一ポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット配列を含む第二ポリペプチド(例えば、表２に開示するＩｇＧ４抗体Ｆｃバリアント配列またはＩｇＧ１抗体Ｆｃバリアント配列)を同じ細胞で発現させることにより達成でき、これは、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の集合に至る。集合したタンパク質は、互いに結合した第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを有するヘテロ二量体Ｆｃドメインポリペプチドを有する。Ｆｃのヘテロ二量体の優先的集合の促進は、ＵＳ１３／４９４８７０、ＵＳ１６／０２８８５０、ＵＳ１１／５３３７０９、ＵＳ１２／８７５０１５、ＵＳ１３／２８９９３４、ＵＳ１４／７７３４１８、ＵＳ１２／８１１２０７、ＵＳ１３／８６６７５６、ＵＳ１４／６４７４８０およびＵＳ１４／８３０３３６に示されるとおり、各抗体重鎖定常領域のＣＨ３ドメインに種々の変異を組み込むことにより達成され得る。例えば、変異はヒトＩｇＧ１に基づきＣＨ３ドメインになし、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド内に、これら２鎖が互いに選択的にヘテロ二量体化することを可能とする、別個の対のアミノ酸置換取り込むことによりなし得る。下記のアミノ酸置換の位置は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスに従い全て番号付けされる。
あるシナリオでは、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドにおけるアミノ酸置換は元のアミノ酸を、アルギニン(Ｒ)、フェニルアラニン(Ｆ)、チロシン(Ｙ)またはトリプトファン(Ｗ)から選択されるより大型のアミノ酸に置き換え、少なくとも１つの第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドにおけるアミノ酸置換は、元のアミノ酸をアラニン(Ａ)、セリン(Ｓ)、スレオニン(Ｔ)またはバリン(Ｖ)から選択されるより小型のアミノ酸で置き換え、大型アミノ酸置換(突起)が小型アミノ酸置換(洞)の表面に合うようにする。例えば、一方の抗体ＦｃドメインポリペプチドはＴ３６６Ｗ置換を取り込み得て、他方はＴ３６６Ｓ、Ｌ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖを含む３置換を取り込み得る。
本発明の多サブユニットタンパク質の第一サブユニット配列を含む第一ポリペプチドまたは多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット配列を含む第二ポリペプチドを、ＣＨ１ドメインを伴いまたは伴わずにヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含むＩｇＧ定常領域などの抗体定常領域と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一であるアミノ酸配列と所望により結合させ得る。ある実施態様において、定常領域のアミノ酸配列は、ヒトＩｇＧ１定常領域、ＩｇＧ２定常領域、ＩｇＧ３定常領域またはＩｇＧ４定常領域などのヒト抗体定常領域と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一である。ある他の実施態様において、定常領域のアミノ酸配列は、ウサギ、イヌ、ネコ、マウスまたはウマなどの他の哺乳動物からの抗体定常領域と少なくとも９０％(例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％)同一である。ヒトＩｇＧ１定常領域と比較して、１以上の変異を定常領域に、例えばＱ３４７、Ｙ３４９、Ｌ３５１、Ｓ３５４、Ｅ３５６、Ｅ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｔ３６６、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｔ３９４、Ｄ３９９、Ｓ４００、Ｄ４０１、Ｆ４０５、Ｙ４０７、Ｋ４０９、Ｔ４１１および／またはＫ４３９に取り込み得る。例示的置換は、例えば、Ｑ３４７Ｅ、Ｑ３４７Ｒ、Ｙ３４９Ｓ、Ｙ３４９Ｋ、Ｙ３４９Ｔ、Ｙ３４９Ｄ、Ｙ３４９Ｅ、Ｙ３４９Ｃ、Ｔ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｋ、Ｌ３５１Ｄ、Ｌ３５１Ｙ、Ｓ３５４Ｃ、Ｅ３５６Ｋ、Ｅ３５７Ｑ、Ｅ３５７Ｌ、Ｅ３５７Ｗ、Ｋ３６０Ｅ、Ｋ３６０Ｗ、Ｑ３６２Ｅ、Ｓ３６４Ｋ、Ｓ３６４Ｅ、Ｓ３６４Ｈ、Ｓ３６４Ｄ、Ｔ３６６Ｖ、Ｔ３６６Ｉ、Ｔ３６６Ｌ、Ｔ３６６Ｍ、Ｔ３６６Ｋ、Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ｅ、Ｌ３６８Ａ、Ｌ３６８Ｄ、Ｋ３７０Ｓ、Ｎ３９０Ｄ、Ｎ３９０Ｅ、Ｋ３９２Ｌ、Ｋ３９２Ｍ、Ｋ３９２Ｖ、Ｋ３９２Ｆ、Ｋ３９２Ｄ、Ｋ３９２Ｅ、Ｔ３９４Ｆ、Ｔ３９４Ｗ、Ｄ３９９Ｒ、Ｄ３９９Ｋ、Ｄ３９９Ｖ、Ｓ４００Ｋ、Ｓ４００Ｒ、Ｄ４０１Ｋ、Ｆ４０５Ａ、Ｆ４０５Ｔ、Ｙ４０７Ａ、Ｙ４０７Ｉ、Ｙ４０７Ｖ、Ｋ４０９Ｆ、Ｋ４０９Ｗ、Ｋ４０９Ｄ、Ｔ４１１Ｄ、Ｔ４１１Ｅ、Ｋ４３９ＤおよびＫ４３９Ｅを含む。
ある実施態様において、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣＨ１に取り込み得る変異は、アミノ酸Ｖ１２５、Ｆ１２６、Ｐ１２７、Ｔ１３５、Ｔ１３９、Ａ１４０、Ｆ１７０、Ｐ１７１および／またはＶ１７３であり得る。ある実施態様において、ヒトＩｇＧ１定常領域のＣκに取り込み得る変異は、アミノ酸Ｅ１２３、Ｆ１１６、Ｓ１７６、Ｖ１６３、Ｓ１７４および／またはＴ１６４であり得る。
アミノ酸置換は、表８に示す置換の次のセットから選択される。
あるいは、アミノ酸置換は、表９に示す次の置換のセットから選択される。
あるいは、アミノ酸置換は、表１０に示す次の置換のセットから選択される。
あるいは、各ポリペプチド鎖のポリペプチド鎖は表１１から選択される。
あるいは、少なくとも１つのアミノ酸置換を表１２における置換の次のセットから選択でき、ここで、第一ポリペプチドカラムに示す位置が、何らかの既知負荷電アミノ酸で置換され、第二ポリペプチドカラムに示す位置が、何らかの既知正荷電アミノ酸で置換される。
あるいは、少なくとも１つのアミノ酸置換を表１３の次のセットから選択でき、ここで、第一ポリペプチドカラムに示す位置が、何らかの既知正荷電アミノ酸で置換され、第二ポリペプチドカラムに示す位置が、何らかの既知負荷電アミノ酸で置換される。
あるいは、アミノ酸置換を表１４の次のセットから選択できる。
これとは別にまたはこれに加えて、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の構造的安定性を、２つのポリペプチド界面内に人工ジスルフィド結合を形成する第一または第二ポリペプチド鎖の何れかにＳ３５４Ｃおよび逆のポリペプチド鎖にＹ３４９Ｃを導入することにより高めることがでる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６位で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６、Ｌ３６８およびＹ４０７から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６、Ｌ３６８およびＹ４０７から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６位で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＥ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｔ３９４、Ｄ４０１、Ｆ４０５およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｔ３９４、Ｄ４０１、Ｆ４０５およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９、Ｅ３５７、Ｓ３６４、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｔ３９４、Ｄ４０１、Ｆ４０５およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＥ３５７、Ｋ３６０、Ｑ３６２、Ｓ３６４、Ｌ３６８、Ｋ３７０、Ｔ３９４、Ｄ４０１、Ｆ４０５およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＬ３５１、Ｄ３９９、Ｓ４００およびＹ４０７から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｋ４０９およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６、Ｎ３９０、Ｋ３９２、Ｋ４０９およびＴ４１１から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＬ３５１、Ｄ３９９、Ｓ４００およびＹ４０７から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＱ３４７、Ｙ３４９、Ｋ３６０およびＫ４０９から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＱ３４７、Ｅ３５７、Ｄ３９９およびＦ４０５から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＱ３４７、Ｅ３５７、Ｄ３９９およびＦ４０５から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９、Ｋ３６０、Ｑ３４７およびＫ４０９から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＫ３７０、Ｋ３９２、Ｋ４０９およびＫ４３９から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＤ３５６、Ｅ３５７およびＤ３９９から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＤ３５６、Ｅ３５７およびＤ３９９から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＫ３７０、Ｋ３９２、Ｋ４０９およびＫ４３９から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＬ３５１、Ｅ３５６、Ｔ３６６およびＤ３９９から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９、Ｌ３５１、Ｌ３６８、Ｋ３９２およびＫ４０９から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９、Ｌ３５１、Ｌ３６８、Ｋ３９２およびＫ４０９から選択される１か所以上で異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＬ３５１、Ｅ３５６、Ｔ３６６およびＤ３９９から選択される１か所以上で異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＳ３５４Ｃ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９Ｃ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＹ３４９Ｃ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＳ３５４Ｃ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＯ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＯ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６Ｗ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６Ｓ、Ｔ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６Ｓ、Ｔ３６８ＡおよびＹ４０７Ｖ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３６６Ｗ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ置換により異なる。
ある実施態様において、抗体定常領域の一方のポリペプチド鎖のアミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３５０Ｖ、Ｔ３６６Ｌ、Ｋ３９２ＬおよびＴ３９４Ｗ置換により異なり、抗体定常領域の他方のポリペプチド鎖アミノ酸配列はＩｇＧ１定常領域のアミノ酸配列とＴ３５０Ｖ、Ｌ３５１Ｙ、Ｆ４０５ＡおよびＹ４０７Ｖ置換により異なる。
タンパク質の製造および／または保存中、Ｎ末端グルタミン酸(Ｅ)またはグルタミン(Ｑ)が環化してラクタムを形成し得ることを、当業者は認識する(例えば、自発的にまたは製造および／または保存中存在する酵素による触媒により)。従って、ある実施態様において、ポリペプチドのアミノ酸配列のＮ末端残基がＥまたはＱであるとき、ピログルタミン酸に置換されたＥまたはＱに対応するアミノ酸配列もここで考慮される。
タンパク質の製造および／または保存中、タンパク質のＣ末端リシン(Ｋ)が除去され得ることを、当業者は認識する(例えば、自発的にまたは製造および／または保存中存在する酵素による触媒により)。このようなＫの除去は、Ｃ末端にＦｃドメインを含むタンパク質でしばしば観察される。従って、ある実施態様において、ポリペプチドのアミノ酸配列のＣ末端残基(例えば、Ｆｃドメイン配列)がＫであるとき、除去されたＫに対応するアミノ酸配列もここで考慮される。
エフェクター機能を低減するための変異
ある態様において、本発明は、(ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、ここで、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含み、そして、ここで多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは互いに結合しているものを提供する。ある実施態様において、Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含むここに開示するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能を低減するＦｃ変異がないその対応物より、腫瘍増殖阻害活性が高い。ここで意図される変異はアミノ酸残基の置換、挿入および欠失を含む。ここに開示するＦｃドメインまたはヒンジ領域における全アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに従い番号付けされる。
ある態様において、本発明は、(ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、ここで、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含み、そして、ここで多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットは互いに結合しているものを提供する。ある実施態様において、Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含むここに開示するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、エフェクター機能を低減するＦｃ変異がないその対応物より、腫瘍増殖阻害活性が高い。ここで意図される変異はアミノ酸残基の置換、挿入および欠失を含む。ここに開示するＦｃドメインまたはヒンジ領域における全アミノ酸位置は、ＥＵナンバリングに従い番号付けされる。
ある実施態様において、第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、Ｆｃドメインポリペプチドが抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)および／または抗体依存性細胞食作用(ＡＤＣＰ)を誘導する能力を低減させる、１以上の変異を含む。ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰは、一般にＦｃ受容体が介在する。例えば、ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、ヒトＩｇＧ(例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４)抗体配列である。Ｆｃガンマ受容体(ＦｃγＲ)とも称するヒトＩｇＧのＦｃ受容体は、活性化Ｆｃガンマ受容体ＦｃγＲＩ(ＣＤ６４)、ＦｃγＲIIＡ(ＣＤ３２Ａ)、ＦｃγＲIIIＡ(ＣＤ１６またはＣＤ１６Ａ)およびＦｃγＲIIIＢ(ＣＤ１６Ｂ)および阻害性Ｆｃガンマ受容体ＦｃγＲIIＢ(ＣＤ３２Ｂ)を含むが、これらに限定されない。従って、ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにおける活性化ＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIIＡまたはＦｃγＲIIIＢ)への結合を低減する１以上の変異を含む。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにおける阻害性ＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲIIＢ)への結合を増加させる１以上の変異を含む。
活性化ＦｃγＲへの結合を低減するおよび／または阻害性ＦｃγＲへの結合を増加させるＦｃ変異は当分野で知られる。例えば、ヒンジおよびＦｃ領域内で、ＣＤ１６結合はヒンジ領域およびＣＨ２ドメインが介在する。例えば、ヒトＩｇＧ１内で、ＣＤ１６との相互作用は、主にＣＨ２ドメインのアミノ酸残基Ａｓｐ２６５－Ｇｌｕ２６９、Ａｓｎ２９７－Ｔｈｒ２９９、Ａｌａ３２７－Ｉｌｅ３３２、Ｌｅｕ２３４－Ｓｅｒ２３９および炭水化物残基Ｎ－アセチル－Ｄ－グルコサミンに集約される(Sondermann et al, Nature, 406 (6793):267-273参照)。既知ドメインに基づき、変異を、ファージディスプレイライブラリーまたは酵母表面提示ｃＤＮＡライブラリーを使用するなどにより、ＣＤ１６への結合親和性を増強または低減するように選択できまたは相互作用の既知三次元構造に基づき設計し得る。
Want et al., Protein Cell (2018) 9(1):63-73にレビューされるとおり、アミノ酸位置２３２～２３９、２６５～２７０、２９６～２９９および３２５～３３２を含む領域は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃの結晶構造によると活性化ＦｃγＲ結合に関与する。Wang et al.はまたヒトＩｇＧ４のＬ２３５ＥおよびＦ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異、ヒトＩｇＧ１のＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異およびＩｇＧ抗体のＮ２９７変異(例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ｄ)が活性化ＦｃγＲ結合を低減することも開示する。米国特許８,９６９,５２６に開示されるとおり、３２９位の変異(例えば、Ｐ３２９Ａ、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒ)も活性化ＦｃγＲ結合を低減する。活性化ＦｃγＲ結合に関与するさらなるアミノ酸位置および変異(例えば、Ｅ２３３Ｐ変異)は、米国特許７,９４３,７４３およびIsaacs et al., J. Immunol. (1998) 161:3862-69に開示される。
従って、ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、２３３、２３４、２３５、２９７および３２９から選択される１か所以上に変異(例えば、野生型ヒトＩｇＧ１に比して置換)を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｅ２３３Ｐ；Ｌ２３４Ａ(ヒトＩｇＧ１)またはＦ２３４Ａ(ヒトＩｇＧ４)；Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅ；Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７ＧまたはＮ２９７Ｄ；および／またはＰ３２９Ａ、Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ｒを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｌ２３５Ｅを含むヒトＩｇＧ４抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。
ある実施態様において、第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、Ｆｃドメインポリペプチドが補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)を誘導する能力を低減させる１以上の変異を含む。ＣＤＣは、一般に補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)が介在する。従って、ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドに補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)への結合を低減する１以上の変異を含む。
Ｃ１ｑへの結合を低減するＦｃ変異は当分野で知られる。例えば、米国特許５,６４８,２６０および５,６２４,８２１に開示するとおり、Ｆｃの２３４位、２３５位、２３６位、２３７位、２９７位、３１８位、３２０位および３２２位のアミノ酸残基はＣ１ｑ結合に関与する。Tao et al., J. Exp. Med. (1993) 178:661-667およびBrekke et al., Eur. J. Immunol. (1994) 24:2542-47に開示されるとおり、３３１位の残基ＰｒｏはＣ１ｑ結合に関与する。Idusogie et al., J. Immunol. (2000) 164:4178-84に開示のとおり、Ｆｃの２７０位(例えば、Ｄ２７０Ａ)、３２２位(Ｋ３２２Ａ)、３２９位(例えば、Ｐ３２９Ａ)および３３１位(例えば、Ｐ３３１Ａ、Ｐ３３１ＳまたはＰ３３１Ｇ)の変異はＣ１ｑ結合を低減させる。
従って、ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、２３４、２３５、２３６、２３７、２７０、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９および３３１から選択される１か所以上に変異(例えば、野生型ヒトＩｇＧ１に比して置換)を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓおよび／またはＰ３２９Ａを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、変異Ｐ３２９Ａを含むヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインポリペプチドである。
ＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを低減する変異およびＣＤＣを低減する変異を組み合わせ得る。ある実施態様において、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＦｃドメインポリペプチドがＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを誘導する能力を低減させる１以上の変異を含み、さらにＦｃドメインポリペプチドがＣＤＣを誘導する能力を低減させる１以上の変異を含む。ある実施態様において、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ＦｃドメインポリペプチドがＡＤＣＣおよび／またはＡＤＣＰを誘導する能力を低減させる１以上の変異を含み、さらにＦｃドメインポリペプチドがＣＤＣを誘導する能力を低減させる１以上の変異を含む。
ある実施態様において、ＩｇＧ４ Ｆｃを有する本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ、ＦｃγＲIIIＡまたはＦｃγＲIIIＢ)または補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)への結合を低減する１以上の変異を含む。このような変異は、エフェクター機能の低減に有用である。例えば、本開示のタンパク質は、ＳＰＬＥ(Ｓ２２８ＰおよびＬ２３５Ｅ)変異、ＳＰＬＥＰＡ(Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａ)変異またはＳＰＬＥＰＧ(Ｓ２２８Ｐ、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ｇ)変異を含み得る。
ある実施態様において、ＩｇＧ１ Ｆｃを有する本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第一および／または第二ポリペプチドにＦｃγＲ(例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲIIＡ、ＦｃγＲIIＢ、ＦｃγＲIIIＡまたはＦｃγＲIIIＢ)または補体成分(例えば、Ｃ１ｑ)への結合を低減する１以上の変異を含む。このような変異は、エフェクター機能の低減に有用である。例えば、本開示のタンパク質は、ＬＡＬＡ(Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ)変異、ＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異、ＬＡＬＡＰＧ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ)変異またはＬＡＬＥＧＡＡＳＰＳ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ)変異を含み得る。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、各々変異Ｐ３２９ＧまたはＰ３２９Ａを含む第一抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドを含む。
ある実施態様において、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは、各々Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される変異を含む。
ある実施態様において、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチド各々変異Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の第一ポリペプチドにおいて、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットは、第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の第二ポリペプチドにおいて、多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットは、第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合されている。このような用途に適するリンカーのアミノ酸配列は、表題「ＩｇＧ４構築物」および「ＩｇＧ１構築物」下に記載される。第一および／または第二ポリペプチドに使用するのに適するさらなるリンカー配列は、野生型ＩｇＧ(例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３またはヒトＩｇＧ４)ヒンジ配列およびその変異体形態を含むが、これらに限定されない。例えば、ある実施態様において、第一および第二リンカーは各々アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(ここで、ＸはＬまたはＥである)(配列番号２８０)またはＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(ここで、ＸはＬまたはＥである)(配列番号２８１)を含む。ある実施態様において、第一および第二リンカーは各々アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２８２)またはＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２８３)を含む。ある実施態様において、第一および第二リンカーは各々アミノ酸配列ＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号２８４)またはＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号２８５)を含む。
血清半減期
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、治療使用に適する薬物動態性質を有する。例えば、ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は少なくとも約５０時間の血清半減期を有する。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は少なくとも約１００時間の血清半減期を有する。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、治療使用に適する薬物動態性質を有する。例えば、ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は少なくとも約５０時間の血清半減期を有する。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は少なくとも約１００時間の血清半減期を有する。
ある実施態様において、対象への静脈内投与５０時間後、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の血清濃度は、該対象に投与１時間後の本発明のタンパク質の血清濃度の少なくとも１０％である。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインポリペプチドに融合していない多サブユニットタンパク質より少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％長い血清半減期を有する。ある実施態様において、本発明の多サブユニットタンパク質のタンパク質配列を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃドメインポリペプチドに融合していない多サブユニットタンパク質より少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍または２０倍長い血清半減期を有する。
腫瘍保持
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、所望により腫瘍部位でのタンパク質保持を増強するためのさらなる特性が取り込まれ得る。例えば、本発明のある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に存在する１以上のプロテオグリカン(例えば、当分野で知られるプロテオグリカン、例えば、Lozzo et al., Matrix Bio (2015) 42:11-55；およびNikitovic et al., Frontiers in Endocrinology (2018) 9:69に開示のとおり)に結合するプロテオグリカン結合をさらに含み得る。ある実施態様において、コラーゲン結合ドメインは、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に存在する１以上のコラーゲンに結合する。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍に存在する１以上のヒアルロン酸に結合するヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。このようなヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は腫瘍での保持が増強され、低用量および／または頻度で対象に腫瘍内投与され得る。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、所望により腫瘍部位でのタンパク質保持を増強するためのさらなる特性が取り込まれ得る。例えば、本発明のある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に存在する１以上のプロテオグリカン(例えば、当分野で知られるプロテオグリカン、例えば、Lozzo et al., Matrix Bio (2015) 42:11-55；およびNikitovic et al., Frontiers in Endocrinology (2018) 9:69に開示のとおり)に結合するプロテオグリカン結合をさらに含み得る。ある実施態様において、コラーゲン結合ドメインは、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に存在する１以上のコラーゲンに結合する。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍に存在する１以上のヒアルロン酸に結合するヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。このようなヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は腫瘍での保持が増強され、低用量および／または頻度で対象に腫瘍内投与され得る。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に含まれるプロテオグリカン結合ドメインは、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に含まれるコラーゲン結合ドメインは、腫瘍(例えば、腫瘍細胞表面上、腫瘍の細胞周囲マトリクスまたは腫瘍の細胞外マトリクス)に特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する。このようなヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は投与(例えば、静脈内、皮下または肺投与)後腫瘍に濃縮され、腫瘍保持が増強され、それにより低用量および／または頻度での投与が可能となり得る。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、シンデカン、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン４(ＣＳＰＧ４)、ベータグリカン、ホスファカン、グリピカン、ペルレカン、アグリン、コラーゲン(例えば、コラーゲンIX、IXI、XVまたはXVIII)、ヒアレクタン、アグリカン、ベルシカン、ニューロカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合するプロテオグリカン結合ドメインをさらに含む。癌に関与するプロテオグリカンは、コラーゲン、シンデカン(例えば、シンデカン－１またはシンデカン－２)、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン(例えば、グリピカン－１またはグリピカン－３)、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよびＳＬＰＲ(例えば、デコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカン)を含むが、これらに限定されない。従って、ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に含まれるプロテオグリカン結合ドメインは、シンデカン(例えば、シンデカン－１またはシンデカン－２)、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン(例えば、グリピカン－１またはグリピカン－３)、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよびＳＬＰＲから選択される１以上のプロテオグリカンに結合する。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に含まれるプロテオグリカン結合ドメインは、デコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される１以上のＳＬＰＲに結合する。
ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質に含まれるプロテオグリカン結合ドメインは、タンパク質(例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント)、ペプチド(例えば、プロテオグリカン結合タンパク質の一部またはそのバリアント)、アプタマー、小分子またはそれらの組み合わせであり得る。プロテオグリカン結合ドメインは文献においても知られる。例えば、シンデカン結合ドメインは、米国特許６,５６６,４８９、８,６４７,８２８および１０,１２４,０３８；米国特許出願公開２００９／０２９７４７９；およびＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１８１９９１７６Ａ１に開示される。ＣＳＰＧ４結合ドメインは、米国特許９,８０１,９２８および１０,０９３,７４５；および米国特許出願公開２０１６／００３２００７、２０１７／０３４２１５１および２０１８／００７２８１１に開示される。β－グリカン結合ドメインは、米国特許７,４５５,８３９に開示される。グリピカン結合ドメインは、米国特許７,９１９,０８６、７,７７６,３２９、８,６８０,２４７、８,３８８,９３７、９,２６０,４９２、９,３９４,３６４、９,７９０,２６７、９,５２２,９４０および９,４０９,９９４；米国特許出願公開２００４／０２３６０８０、２０１１／０１２３９９８、２０１８／０２４４８０５、２０１８／０２３０２３０および２０１８／０３４６５９２；欧州特許２２７０５０９；およびＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２０１７０５３６１９Ａ１、ＷＯ２０１８０２６５３３Ａ１、ＷＯ２０１８１６５３４４Ａ１およびＷＯ２０１８１９９３１８Ａ１に開示される。ペルレカン結合ドメインは、米国特許１０,１６６,３０４に開示される。デコリン結合ドメインは、米国特許６,５１７,８３８およびＰＣＴ特許出願公開ＷＯ２００００２１９８９Ａ１、ＷＯ２００００７７０４１Ａ２およびＷＯ２００００７８８００Ａ２に開示される。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、コラーゲン結合ドメインをさらに含む。コラーゲンは、脊椎動物で少なくとも２８の異なるタイプが同定されている、タンパク質群である。各タイプのコラーゲンは、Fang et al., Tumor Biol. (2014) 35:2871-82およびXiong et al., J. Cancer Metasta. Treat. (2016) 2:357-64に記載のとおり、その特有の構造的特徴および分布パターンを有する。Col3A1、Col5A2、Col6、Col7A1、Col15A1 Col19A1およびCol22A1を含むが、これらに現地絵されない種々のタイプのコラーゲンが癌に関与する。コラーゲン結合ドメインはタンパク質(例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント)、ペプチド(例えば、コラーゲン結合タンパク質の一部またはそのバリアント)、アプタマー、小分子またはそれらの組み合わせであり得る。コラーゲン結合ドメインは当分野で知られ、例えば、米国特許５,７８８,９６６、５,５８７,３６０、５,８５１,７９４、５,７４１,６７０、５,８４９,７０１、６,２８８,２１４、６,３８７,６６３、６,９０８,９９４、７,１６９,９０２、７,４８８,７９２、７,８２０,４０１、８,９５６,６１２、８,６４２,７２８および８,９０６,６４９および米国特許出願公開２００７／０１６１０６２、２００９／０１４２３４５および２０１２／０１００１０６に開示される。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、ヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む。ヒアルロン酸結合ドメインは、タンパク質(例えば、抗体またはその抗原結合フラグメント)、ペプチド(例えば、ヒアルロン酸結合タンパク質の一部またはそのバリアント)、アプタマー、小分子またはそれらの組み合わせであり得る。ヒアルロン酸結合ドメインは当分野で知られ、例えば、米国特許６,８６４,２３５、８,１９２,７４４、８,０４４,０２２、８,１６３,４９８、８,０３４,６３０、９,２１７,０１６、９,７９５,６８６および９,７５１,９１９および米国特許出願公開２００２／００５５４８８および２００７／０２５９３８０に開示される。
プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインは、存在するならば、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質のどの位置にでもよい。例えば、ある実施態様において、ＩＬ－１２サブユニットが抗体Ｆｃドメインポリペプチドに対してＮ末端に位置するとき、ここに開示するプロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインは第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に融合し得る。ある実施態様において、ＩＬ－１２サブユニットが抗体Ｆｃドメインポリペプチドに対してＣ末端に位置するとき、ここに開示するプロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインは第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合し得る。
プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインおよび／またはヒアルロン酸結合ドメインは、存在するならば、リンカーを介してヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の残りに結合し得る。ある実施態様において、プロテオグリカン結合ドメインは、ペプチドリンカーを介してヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の残りに融合する。ある実施態様において、ペプチドリンカーは、ここに開示するスペーサーペプチドを含む。
II. 製造方法
本発明のタンパク質は、当業者に周知の組み換えＤＮＡテクノロジーを使用して製造し得る。例えば、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット配列を含む第一ポリペプチドをコードする第一核酸配列を第一発現ベクターにクローン化し得る；第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットの第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチドをコードする第二核酸配列を第二発現ベクターにクローン化し得る；そして第一および第二発現ベクターを、一緒に宿主細胞に安定にトランスフェクトして、多量体タンパク質を産生し得る。
本発明のタンパク質は、当業者に周知の組み換えＤＮＡテクノロジーを使用して製造し得る。例えば、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット配列を含む第一ポリペプチドをコードする第一核酸配列を第一発現ベクターにクローン化し得る；第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットの第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチドをコードする第二核酸配列を第二発現ベクターにクローン化し得る；そして第一および第二発現ベクターを、一緒に宿主細胞に安定にトランスフェクトして、多量体タンパク質を産生し得る。
最高タンパク質収率を達成するために、種々の比の第一および第二発現ベクターを探索して、宿主細胞へのトランスフェクションのための最適比を決定し得る。トランスフェクション後、単一クローンを、限界希釈、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、顕微鏡検査またはＣｌｏｎｅｐｉｘなどの当分野で知られる方法を使用する、細胞銀行作製のために単離し得る。
クローンを、本発明のタンパク質のバイオリアクター規模拡大および発現維持に適する条件下、培養し得る。タンパク質を、遠心分離、デプス濾過、細胞溶解、均質化、凍結・解凍、親和性精製、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィーおよび混合モードクロマトグラフィーを含む当分野で知られる方法を使用して、単離および精製できる。
III. 医薬組成物
本発明はまた、有効量のここに記載するタンパク質を含む医薬組成物に関する。組成物は、多様な薬物送達系で使用するために製剤化され得る。１以上の生理学的に許容される添加物または担体も適切な製剤のために組成物に包含させ得る。本発明で使用するのに適する製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985に見られ得る。薬物送達のための方法の総説として、例えば、Langer (Science 249:1527-1533, 1990)を参照のこと。
本発明はまた、有効量のここに記載するタンパク質を含む医薬組成物に関する。組成物は、多様な薬物送達系で使用するために製剤化され得る。１以上の生理学的に許容される添加物または担体も適切な製剤のために組成物に包含させ得る。本発明で使用するのに適する製剤は、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Philadelphia, Pa., 17th ed., 1985に見られ得る。薬物送達のための方法の総説として、例えば、Langer (Science 249:1527-1533, 1990)を参照のこと。
本発明の静脈内薬物送達製剤は、バッグ、ペンまたはシリンジに含まれ得る。ある実施態様において、バッグを、チューブおよび／または針を含む流路に接続し得る。ある実施態様において、製剤は凍結乾燥製剤または液体製剤であり得る。ある実施態様において、製剤は、フリーズドライ(凍結乾燥)され、約１２～６０バイアルに含まれ得る。ある実施態様において、製剤はフリーズドライされてよく、４５mgのフリーズドライ製剤が１バイアルに含まれ得る。ある実施態様において、約４０mg～約１００mgのフリーズドライ製剤が１バイアルに含まれ得る。ある実施態様において、１２、２７または４５バイアルからのフリーズドライ製剤を合わせて、静脈内薬物製剤の治療用量のタンパク質を得る。ある実施態様において、製剤は液体製剤であり、約２５０mg／バイアル～約１０００mg／バイアルで保存し得る。ある実施態様において、製剤は液体製剤であり、約６００mg／バイアルとして保存し得る。ある実施態様において、製剤は液体製剤であり、約２５０mg／バイアルとして保存し得る。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、製剤を形成する緩衝化溶液中に、有効量のタンパク質を含む液体水性医薬製剤として含まれる。
これら組成物は慣用の滅菌技術により滅菌できまたは滅菌濾過し得る。得られた水溶液は、そのまままたは凍結乾燥して包装され得て、凍結乾燥調製物は投与前滅菌水性担体と合わせられる。調製物のｐＨは、一般に３～１１、より好ましくは５～９または６～８および最も好ましくは７～８、例えば７～７.５である。得られた固形の組成物を、各固定量の上記１以上の薬剤を含む、複数単回用量単位に包装し得る。固形組成物は、量に柔軟性をもたせるための容器にも包装できる。
ある実施態様において、本発明は、マンニトール、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ポリソルベート８０、水および水酸化ナトリウムと組み合わせて本開示のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む、長い有効期間を有する製剤を提供する。
ある実施態様において、ｐＨ緩衝化溶液中に本開示のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を含む水性製剤が調製される。本発明の緩衝液は約４～約８、例えば、約４.５～約６.０または約４.８～約５.５の範囲のｐＨを有するかまた約５.０～約５.２のｐＨを有し得る。上記ｐＨの範囲の中間のｐＨも本発明の一部であることが意図される。例えば、上限および／または下限として上に記載した何らかの値の組み合わせを使用する値の範囲が包含されることが意図される。ｐＨをこの範囲内に制御する緩衝液の例は、酢酸(例えば、酢酸ナトリウム)、コハク酸(例えばコハク酸ナトリウム)、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸および他の有機酸緩衝液を含む。
ある実施態様において、製剤は、約４～約８の範囲にｐＨを維持するためのクエン酸およびリン酸を含む緩衝系を含む。ある実施態様において、ｐＨ範囲は約４.５～約６.０または約ｐＨ４.８～約５.５またはｐＨ範囲約５.０～約５.２であり得る。ある実施態様において、緩衝系は、クエン酸一水和物、クエン酸ナトリウム、リン酸二ナトリウム二水和物および／またはリン酸二水素ナトリウム二水和物を含む。ある実施態様において、緩衝系は、約１.３mg／mLのクエン酸(例えば、１.３０５mg／mL)、約０.３mg／mLのクエン酸ナトリウム(例えば、０.３０５mg／mL)、約１.５mg／mLのリン酸二ナトリウム二水和物(例えば、１.５３mg／mL)、約０.９mg／mLのリン酸二水素ナトリウム二水和物(例えば、０.８６)および約６.２mg／mLの塩化ナトリウム(例えば、６.１６５mg／mL)を含む。ある実施態様において、緩衝系は、１～１.５mg／mLのクエン酸、０.２５～０.５mg／mLのクエン酸ナトリウム、１.２５～１.７５mg／mLのリン酸二ナトリウム二水和物、０.７～１.１mg／mLのリン酸二水素ナトリウム二水和物および６.０～６.４mg／mLの塩化ナトリウムを含む。ある実施態様において、製剤のｐＨは水酸化ナトリウムで調節される。
等張化剤として作用し、抗体を安定化し得るポリオールも製剤に含有され得る。ポリオールは、製剤の所望の等張性に関連して変わり得る量で製剤に加えられる。ある実施態様において、水性製剤は等張であり得る。加えられるポリオールの量は、ポリオールの分子量によっても変わり得る。例えば、二糖(例えばトレハロース)と比較して、加えられる単糖(例えば、マンニトール)の量は少なくてよい。ある実施態様において、製剤で等張化剤として使用され得るポリオールはマンニトールである。ある実施態様において、マンニトール濃度は約５～約２０mg／mLであり得る。ある実施態様において、マンニトール濃度は約７.５～１５mg／mLであり得る。ある実施態様において、マンニトール濃度は約１０～１４mg／mLであり得る。ある実施態様において、マンニトール濃度は約１２mg／mLであり得る。ある実施態様において、ポリオールソルビトールが製剤に含まれ得る。
界面活性剤または界面活性物質も製剤に加え得る。例示的界面活性剤は、ポリソルベート(例えば、ポリソルベート２０、８０など)またはポロキサマー(例えば、ポロキサマー１８８)などの非イオン性界面活性剤を含む。加える界面活性剤の量は、製剤化された抗体の凝集を低減するおよび／または製剤における粒子形成を最小化するおよび／または吸着を低減するものである。ある実施態様において、製剤は、ポリソルベートである界面活性物質を含み得る。ある実施態様において、製剤は、界面活性剤ポリソルベート８０またはＴｗｅｅｎ ８０を含み得る。Ｔｗｅｅｎ ８０は、ポリオキシエチレン(２０)ソルビタンモノオレエートを表すために使用される名称である(Fiedler, Lexikon der Hifsstoffe, Editio Cantor Verlag Aulendorf, 4th ed., 1996参照)。ある実施態様において、製剤は、約０.１mg／mL～約１０mg／mLのポリソルベート８０または約０.５mg／mL～約５mg／mLを含み得る。ある実施態様において、約０.１％ポリソルベート８０を製剤に加え得る。
ある実施態様において、本発明のタンパク質製品は液体製剤として製剤化される。液体製剤は、ゴム栓を施し、アルミニウムクリンプシールで封したＵＳＰまたはＰｈ ＥｕｒタイプＩ ５０Ｒバイアルに１０mg／mL濃度で存在し得る。栓はＵＳＰおよびＰｈ Ｅｕｒに適合するエラストマー製である。ある実施態様において、６０mLの抽出可能体積を可能とするような、バイアルに６１.２mLのタンパク質製品溶液を入れる。ある実施態様において、液体製剤を０.９％食塩水溶液で希釈し得る。
ある実施態様において、本発明の液体製剤を、安定化レベルの糖と組み合わせて、１０mg／mL濃度溶液として調製し得る。ある実施態様において、液体製剤を水性担体中に調製し得る。ある実施態様において、安定化剤を、静脈内投与に望ましくないまたは不適切な粘性をもたらし得る量を超えない量で加え得る。ある実施態様において、糖は二糖、例えば、スクロースであり得る。ある実施態様において、液体製剤は緩衝剤、界面活性物質および防腐剤の１以上も含み得る。
ある実施態様において、液体製剤のｐＨを、薬学的に許容される酸および／または塩基の添加により調節し得る。ある実施態様において、薬学的に許容される酸は塩酸であり得る。ある実施態様において、塩基は水酸化ナトリウムであり得る。
凝集に加えて、発酵、収集／細胞浄化、精製、薬物物質／薬物製品保存中およびサンプル分析中に起こり得る脱アミド化は、ペプチドおよびタンパク質の一般的製品変性である。脱アミド化は、加水分解を受けるスクシンイミド中間体を形成する、タンパク質からのＮＨ３の喪失である。スクシンイミド中間体は、親ペプチドから１７ダルトン質量減少させる。続く加水分解は、１８ダルトン質量増加させる。スクシンイミド中間体の単離は、水性条件下での不安定性により困難である。従って、脱アミド化は、一般に１ダルトン質量増加として検出可能である。アスパラギンの脱アミド化は、アスパラギンまたはイソアスパラギン酸をもたらす。脱アミド化の速度に影響するパラメータは、ｐＨ、温度、溶媒誘電率定数、イオン強度、一次配列、局所ポリペプチド立体構造および三次元構造を含む。ペプチド鎖でＡｓｎに隣接するアミノ酸残基は脱アミド化速度に影響する。タンパク質配列でＡｓｎ後のＧｌｙおよびＳｅｒは、脱アミド化に対する高い感受性をもたらす。
ある実施態様において、本発明の液体製剤を、タンパク質製品の脱アミノ化を防止するｐＨおよび湿度条件下に保存し得る。
ここで興味ある水性担体は、薬学的に許容され(ヒトへの投与に安全かつ非毒性)、液体製剤の製造に有用なものである。例示的担体は、注射用滅菌水(ＳＷＦＩ)、注射用静菌水(ＢＷＦＩ)、ｐＨ緩衝化溶液(例えば、リン酸緩衝化食塩水)、無菌食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液を含む。
防腐剤を、細菌活動を低減するために、所望によりここでの製剤に加え得る。防腐剤の添加は、例えば、多回使用(多回用量)製剤の製造を容易にし得る。
静脈内(ＩＶ)製剤は、患者が移植後入院して、全薬物をＩＶ経路により受けるときなど、特定の場合好ましい投与経路であり得る。ある実施態様において、液体製剤を投与前０.９％塩化ナトリウム溶液で希釈する。ある実施態様において、注射用希釈済薬物製品は等張であり、静脈内点滴での投与に適する。
ある実施態様において、塩または緩衝液成分を、１０mM～２００mMの量で加え得る。塩および／または緩衝液は薬学的に許容され、種々の既知酸(無機および有機)と「塩基形成」金属またはアミンに由来する。ある実施態様において、緩衝液はリン酸緩衝液であり得る。ある実施態様において、緩衝液は、グリシン酸、炭酸、クエン酸緩衝液であってよく、この場合、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムイオンがカウンターイオンとして役立ち得る。
防腐剤を、細菌活動を抑制するために、所望によりここでの製剤に加え得る。防腐剤の添加は、例えば、多回使用(多回用量)製剤の製造を容易にし得る。
ここで興味ある水性担体は、薬学的に許容され(ヒトへの投与に安全かつ非毒性)、液体製剤の製造に有用なものである。例示的担体は、注射用滅菌水(ＳＷＦＩ)、注射用静菌水(ＢＷＦＩ)、ｐＨ緩衝化溶液(例えば、リン酸緩衝化食塩水)、無菌食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液を含む。
本開示のタンパク質は、タンパク質および凍結保護物質を含む凍結乾燥製剤で存在し得る。凍結保護物質は糖、例えば、二糖であり得る。ある実施態様において、凍結保護物質はスクロースまたはマルトースであり得る。凍結乾燥製剤はまた緩衝剤、界面活性物質、増量剤および／または防腐剤の１以上も含み得る。
凍結乾燥薬物製品の安定に有用なスクロースまたはマルトースの量は、重量比で少なくとも１：２ タンパク質：スクロースまたはマルトースであり得る。ある実施態様において、タンパク質：スクロースまたはマルトース重量比は１：２～１：５であり得る。
ある実施態様において、製剤のｐＨは、凍結乾燥前、薬学的に許容される酸および／または塩基の添加により調節され得る。ある実施態様において、薬学的に許容される酸は塩酸であり得る。ある実施態様において、薬学的に許容される塩基は水酸化ナトリウムであり得る。
凍結乾燥前、本開示のタンパク質を含む溶液のｐＨを、６～８に調節し得る。ある実施態様において、凍結乾燥薬物製品のｐＨ範囲は７～８であり得る。
ある実施態様において、塩または緩衝液成分を１０mM～２００mMの量で加え得る。塩および／または緩衝液は薬学的に許容され、種々の既知酸(無機および有機)と「塩基形成」金属またはアミンに由来する。ある実施態様において、緩衝液はリン酸緩衝液であり得る。ある実施態様において、緩衝液は、グリシン酸、炭酸、クエン酸緩衝液であってよく、この場合、ナトリウム、カリウムまたはアンモニウムイオンがカウンターイオンとして役立ち得る。
ある実施態様において、「増量剤」を加え得る。「増量剤」は、凍結乾燥混合物の量を増やし、凍結乾燥ケーキの物理的形態維持に貢献する化合物である(例えば、開孔構造を維持する本質的に均一な凍結乾燥ケーキの製造を促進)。例示的増量剤は、マンニトール、グリシン、ポリエチレングリコールおよびソルビトールを含む。本発明の凍結乾燥製剤はこのような増量剤を含み得る。
防腐剤を、細菌活動を低減するために、所望によりここでの製剤に加え得る。防腐剤の添加は、例えば、多回使用(多回用量)製剤の製造を容易にし得る。
ある実施態様において、凍結乾燥薬物製品を水性担体で構成し得る。ここで矯味ある水性担体は、薬学的に許容され(例えば、ヒトへの投与に安全かつ非毒性)、凍結乾燥後、液体製剤の製造に有用なものである。例示的希釈剤は、ＳＷＦＩ、ＢＷＦＩ、ｐＨ緩衝化溶液(例えば、リン酸緩衝化食塩水)、無菌食塩水溶液、リンゲル液またはデキストロース溶液を含む。
ある実施態様において、本発明の凍結乾燥薬物製品を、米国局方ＳＷＦＩ、または米国局方０.９％塩化ナトリウム注射で再構成される。再構成中、凍結乾燥粉末は溶液に溶解する。
ある実施態様において、本発明の凍結乾燥タンパク質製品を、約４.５mL注射用水で構成し、０.９％食塩水溶液(塩化ナトリウム溶液)で希釈する。
本発明の医薬組成物における活性成分の実際の投与量レベルは、患者に毒性とならずに、特定の患者、組成物および投与方法で所望の治療応答を達成するのに有効である活性成分の量を得るために、変わり得る。
特定の用量は、各患者に対して均一な用量、例えば、５０～５０００mgのタンパク質であり得る。あるいは、患者の用量を、患者のおおよその体重または表面積に対して適合化させ得る。適切な投与量を決定する他の因子は、処置または予防する疾患または状態、疾患重症度、投与経路および患者の年齢、性別および医学的条件を含み得る。処置のための適切な投与量の決定に必要な計算のさらなる微調整は、特にここに開示する投与量情報およびアッセイに鑑みて、当業者により容易になされる。投与量はまた適切な用量－応答データと共に使用する投与量を決定する既知アッセイの使用を介しても、決定され得る。個々の患者の投与量を、疾患進行の追跡により調節し得る。患者の標的化可能構築物または複合体の血中レベルを測定して、有効濃度に到達または維持するために投与量の調節が必要であるか確認できる。遺伝薬物学を使用して、どの標的化可能構築物および／または複合体およびその投与量が、ある個体に有効である可能性が最も高いか決定し得る(Schmitz et al., Clinica Chimica Acta 308: 43-53, 2001; Steimer et al., Clinica Chimica Acta 308: 33-41, 2001)。
一般に、体重に基づく投与量は約０.０１μg～約１００mg／kg体重、例えば約０.０１μg～約１００mg／kg体重、約０.０１μg～約５０mg／kg体重、約０.０１μg～約１０mg／kg体重、約０.０１μg～約１mg／kg体重、約０.０１μg～約１００μg／kg体重、約０.０１μg～約５０μg／kg体重、約０.０１μg～約１０μg／kg体重、約０.０１μg～約１μg／kg体重、約０.０１μg～約０.１μg／kg体重、約０.１μg～約１００mg／kg体重、約０.１μg～約５０mg／kg体重、約０.１μg～約１０mg／kg体重、約０.１μg～約１mg／kg体重、約０.１μg～約１００μg／kg体重、約０.１μg～約１０μg／kg体重、約０.１μg～約１μg／kg体重、約１μg～約１００mg／kg体重、約１μg～約５０mg／kg体重、約１μg～約１０mg／kg体重、約１μg～約１mg／kg体重、約１μg～約１００μg／kg体重、約１μg～約５０μg／kg体重、約１μg～約１０μg／kg体重、約１０μg～約１００mg／kg体重、約１０μg～約５０mg／kg体重、約１０μg～約１０mg／kg体重、約１０μg～約１mg／kg体重、約１０μg～約１００μg／kg体重、約１０μg～約５０μg／kg体重、約５０μg～約１００mg／kg体重、約５０μg～約５０mg／kg体重、約５０μg～約１０mg／kg体重、約５０μg～約１mg／kg体重、約５０μg～約１００μg／kg体重、約１００μg～約１００mg／kg体重、約１００μg～約５０mg／kg体重、約１００μg～約１０mg／kg体重、約１００μg～約１mg／kg体重、約１mg～約１００mg／kg体重、約１mg～約５０mg／kg体重、約１mg～約１０mg／kg体重、約１０mg～約１００mg／kg体重、約１０mg～約５０mg／kg体重、約５０mg～約１００mg／kg体重である。
用量を、１日１回またはそれ以上、毎週、毎月または毎年または２～２０年に１回投与し得る。当業者は、体液または組織における標的化可能構築物または複合体の測定された滞在時間および濃度に基づき、投与の反復割合を容易に推定できる。本発明の投与は、カテーテルを通すかん流または直接病巣内注射による、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、腔内であり得る。１日１回以上、週１回以上、月１回以上および年１回以上投与され得る。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)は腫瘍内投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、腫瘍内に、全身性より少ない用量または頻度で投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、局所麻酔投与後腫瘍内投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、直接腫瘍塊触診下、腫瘍内投与される。
IV. 治療適用
本発明は、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合結合タンパク質および／またはここに記載する医薬組成物を使用する、癌の処置方法を提供する。方法を、それを必要とする患者に有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を投与することにより、多様な癌の処置に使用し得る。ある実施態様において、ここに開示する方法により処置される癌は、局所進行悪性腫瘍である。ある実施態様において、局所進行悪性腫瘍は完全に切除され得る。ある実施態様において、局所進行悪性腫瘍は完全に切除されて、本発明の処置が切除に続いて提供される。
本発明は、ここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合結合タンパク質および／またはここに記載する医薬組成物を使用する、癌の処置方法を提供する。方法を、それを必要とする患者に有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を投与することにより、多様な癌の処置に使用し得る。ある実施態様において、ここに開示する方法により処置される癌は、局所進行悪性腫瘍である。ある実施態様において、局所進行悪性腫瘍は完全に切除され得る。ある実施態様において、局所進行悪性腫瘍は完全に切除されて、本発明の処置が切除に続いて提供される。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)は単剤療法として進行悪性腫処置に使用される。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、重度感染症の能動的免疫療法のアジュバントとして使用する。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、予防ワクチン接種のアジュバントとして使用する。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、放射線療法後骨髄抑制の処置に使用する。
本発明はまた造血毒性を低減する方法を提供する。造血毒性は、遺伝的、感染性または放射線および化学療法を含むが、これらに限定されない環境原因に起因し得る。例えば、ある実施態様において、本発明は、照射(例えば、イオン化照射、アルファ照射、ベータ照射、ガンマ照射、Ｘ照射または中性子照射)と関連する疾患または障害を処置する方法を提供する。例えば、ある実施態様において、本発明は、放射線療法後の骨髄抑制を抑制する方法でわって、それを必要とする患者に有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または製剤を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、放射線療法線量は少なくとも１Gy、５Gy、１０Gy、１５Gyまたは２０Gyである。ある実施態様において、照射治療は、骨髄、リンパ性系、免疫系、粘膜組織、粘膜免疫系、消化器系、心血管系、神経系、生殖臓器、前立腺、卵巣、肺、腎臓、皮膚および脳からなる群から選択される系、臓器または組織を損傷させる。ある実施態様において、本発明の方法は損傷を低減する。
ここに提供される方法は、照射に起因する骨髄抑制の処置に有用である。従って、ある実施態様において、本発明は、照射への偶発的被爆の状況下で起こる骨髄抑制を処置する方法であって、それを必要とする患者に治療有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または製剤を投与することを含む、方法を提供する。
ある実施態様において、本発明は、急性放射線症候群(ＡＲＳ)を処置する方法であって、それを必要とする患者に有効量のここに記載するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または製剤を投与することを含む、方法を提供する。ＡＲＳは、造血放射線症候群、消化器放射線症候群、神経血管放射線症候群および皮膚放射線症候群を含むが、これらに限定されない。例えば、造血放射線症候群は、少なくとも一部、造血幹細胞プールの枯渇に起因し、リンパ球減少症および顆粒球減少症の徴候を示す。消化器症候群は、少なくとも一部、陰窩に位置する幹細胞および前駆細胞が損傷し、絨毛表面の細胞が置き換われないことに起因し、水様下痢、脱水、電解質喪失、消化器出血および穿孔の徴候を示す。ある実施態様において、ここに提供される処置方法は、ＡＲＳの前駆期に実施される。前駆期は、一般に照射被爆後１～３日以内の、悪心、嘔吐、摂食障害、発熱、頭痛および／または早期皮膚紅斑の症状により特徴づけられる、急性疾病の初期相である。ある実施態様において、ここに提供される処置方法を、ＡＲＳの潜伏期に実施する。潜伏期は、症状は改善するが、リンパ球減少症および顆粒球減少症の検査値を示し、被爆線量により数時間～数週間継続し得る相である。前駆期または潜伏期の処置は、罹患系、臓器および／または組織の症候群の発症を和らげ得る。ある実施態様において、ここに提供される処置方法を、ＡＲＳの疾病顕在期に実施する。この相における処置は、なおＡＲＳからの回復を促進し得る。
本発明はまた免疫細胞の生存、増殖、分化および／または活性を増加させる方法であって、免疫細胞とここに開示するヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または製剤を接触させることを含む、方法も提供する。ある実施態様において、免疫細胞はＴ細胞(例えば、ＣＤ４＋ Ｔ細胞)である。ある実施態様において、免疫細胞はＮＫ細胞である。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)は、癌と診断された対象の処置に使用される。ある実施態様において、癌は膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、白血病、肺癌、リンパ腫、中皮腫、黒色腫、骨髄腫、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓細胞癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、脳癌、肉腫、神経芽腫または頭頸部癌細胞の扁平上皮細胞癌腫を含む。ある実施態様において、癌は結腸癌である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、単剤療法として、結腸癌と診断された対象に投与する。ある実施態様において、癌は黒色腫である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、単剤療法として、黒色腫と診断された対象に投与する。ある実施態様において、癌は乳癌である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、単剤療法として、乳癌と診断された対象に投与する。
ある実施態様において、本発明は、癌を処置する方法であって、患者に単回用量のみのヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、方法を提供する。ある実施態様において、単回用量は、癌に対する完全応答の誘導に十分な量である。ある実施態様において、単回用量は、癌の再発遅延または予防に十分な量である。
ある実施態様において、本発明は、癌を処置する方法であって、患者に単回用量のみの配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む製剤を投与することを含む、方法を提供する。
ある実施態様において、単回用量の配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含むヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質またはヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質(例えば、配列番号２９０および配列番号２９１を含む)および薬学的に許容される担体を含む製剤は、癌に対する完全応答の誘導に十分な量である。ある実施態様において、単回用量は、癌の再発遅延または予防に十分な量である。ある実施態様において、完全に処置された癌(例えば、本発明のＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質で処置後完全応答)の再発は、６カ月～７２カ月またはそれ以上(例えば、６カ月、１２カ月、２４カ月、３６カ月、４８カ月、６０カ月、７２カ月、８４カ月または９６カ月)遅延または予防される。
ある実施態様において、１回またはそれ以上のヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質(例えば、配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む)により処置される癌は転移癌である。ある実施態様において、転移癌は、局所、領域性または遠位転移癌である。ある実施態様において、単回または複数回のヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質(例えば、配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む)は、原発癌の起源臓器または組織ではないおよび／または処置レジメンの直接標的ではない遠位癌をアブスコパル効果により処置する。ある実施態様において、ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質のアブスコパル効果は、照射および／または化学療法を含む処置計画の途中および／または後増強される。ある実施態様において、単回または複数回のヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質(例えば、配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む)は、例えば、患者の血清および／または腫瘍におけるＩＦＮｙ、ＣＸＣＬ９および／またはＣＸＣＬ１０発現増加により決定される、全身抗腫瘍応答の誘導により、患者における癌を処置する。
Ｖ. 組み合わせ治療
本発明の他の態様は、組み合わせ治療を提供する。ここに記載する多特異的結合タンパク質を、癌を処置するためのさらなる治療剤と組み合わせで使用し得る。
本発明の他の態様は、組み合わせ治療を提供する。ここに記載する多特異的結合タンパク質を、癌を処置するためのさらなる治療剤と組み合わせで使用し得る。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、癌を有すると診断された対象を処置するために組み合わせ治療として投与する。ある実施態様において、癌は、膀胱癌、乳癌、子宮頸癌、結腸直腸癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、肝細胞癌、白血病、肺癌、リンパ腫、中皮腫、黒色腫、骨髄腫、卵巣癌、子宮内膜癌、前立腺癌、膵臓癌、腎臓細胞癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、脳癌、肉腫、神経芽腫または頭頸部癌細胞の扁平上皮細胞癌腫である。ある実施態様において、癌は結腸癌である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、結腸癌を有すると診断された対象に組み合わせ治療として投与する。ある実施態様において、癌は黒色腫である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、黒色腫を有すると診断された対象に組み合わせ治療として投与する。ある実施態様において、癌は乳癌である。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、乳癌を有すると診断された対象に組み合わせ治療として投与する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、細胞毒性化学療法；放射線療法；ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１またはＴＧＦ－βなど抗腫瘍免疫応答に関与する分子を標的とする抗体；腫瘍関連抗原でＡＤＣＣにより作用する抗体；所望によりＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体と組み合わせて投与される、ＮＫＧ２Ｄ、ＣＤ１６および腫瘍関連抗原に結合する多特異的抗体；個別化癌ワクチン；腫瘍溶解性癌ワクチン；およびＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体と組み合わせて投与される、個別化ワクチンから選択される他の治療剤と組み合わせで進行悪性腫瘍の処置に使用する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、ＮＫ標的化治療(例えば、ＣＡＲ－ＮＫ治療)、抗体治療、チェックポイント阻害剤治療、さらなるサイトカイン治療、自然免疫系アゴニスト治療、化学療法、標的剤治療、放射線療法、養子ＮＫ治療、幹細胞移植(ＳＣＴ)治療、アゴニスト抗体、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)Ｔ細胞治療、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)改変治療、多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)、細胞老化を誘導する薬剤およびワクチンおよび／または腫瘍溶解性ウイルス治療を含むが、これらに限定されない他の治療と組み合わせて、悪性腫瘍(例えば、進行悪性腫瘍)処置に使用する。ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、ＮＫ標的化治療(例えば、ＣＡＲ－ＮＫ治療)、抗体治療、チェックポイント阻害剤治療、さらなるサイトカイン治療、自然免疫系アゴニスト治療、化学療法、標的剤治療、放射線療法、養子ＮＫ治療、幹細胞移植(ＳＣＴ)治療、アゴニスト抗体、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)Ｔ細胞治療、Ｔ細胞受容体(ＴＣＲ)改変治療、多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)、細胞老化を誘導する薬剤およびワクチンおよび／または腫瘍溶解性ウイルス治療から選択される２以上のさらなる治療と組み合わせて、悪性腫瘍(例えば、進行悪性腫瘍)の処置に使用する。
ある実施態様において、本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)を、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を標的とする癌ワクチンまたは抗体と組み合わせて、完全に切除され得る局所進行悪性腫瘍の処置に使用する。
本発明のタンパク質を、原発病変の外科的除去の補助剤としても使用し得る。
本発明のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)およびさらなる治療剤の量および投与の相対的タイミングは、所望の組み合わせ治療効果を達成するように選択され得る。例えば、組み合わせ治療をこのような投与を必要とする患者に投与するとき、組み合わせ中の治療剤または治療剤を含む１以上の医薬組成物を、例えば、逐次的に、同時に、共に、一緒になど、どの順番で投与してもよい。さらに、例えば、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、さらなる治療剤が予防または治療効果を発揮しているときに投与してよくまたは逆も可能である。
ここに開示するとおり、本発明の方法は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)およびさらなる治療剤の組み合わせの共投与を含む。ここに開示するとおり、本発明の方法は、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤の組み合わせの共投与を含む。
共投与は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)およびさらなる治療剤が同時に投与される、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤が逐次的に投与されるおよびヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤の一方または両方が間欠的にまたは連続的に投与されるまたは同時、逐次的、間欠的および／または連続的の何らかの組み合わせでの方法を包含する。当業者は、間欠的投与は、間欠的がある薬剤の最初の投与、次いでまさにその薬剤のその後の投与も含むため、必ずしも連続的と同じではないことを認識する。さらに、当業者は、間欠的投与がある薬剤の最初の投与の、該第一剤が再投与される前の他剤の投与での中断を含まないため、ある実施態様において、間欠的投与は逐次的投与も含むことを理解する。さらに、当業者は、連続的投与が静脈内滴下(ＩＶ点滴)または栄養管などを含む多数の経路により達成され得ることも知っている。
さらにおよびより一般的な意味で、用語「共投与」は、対象へのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の個々の投与とさらなる治療剤の個々の投与が何らかのタイフムレーム中に重複する任意かつ全ての方法を包含する。
対象へのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質またはさらなる治療剤の投与頻度は、当分野でＱｎｄまたはｑｎｄ(ここで、ｎはその薬剤の連続的投与について日数での頻度である)として知られる。例えば、Ｑ３ｄは、薬剤の３日に１回の投与である。ある実施態様において、方法は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の何れか一方または両方またはそれらの組み合わせの対象へのＱｌｄ、Ｑ２ｄ、Ｑ３ｄ、Ｑ４ｄ、Ｑ５ｄ、Ｑ６ｄ、Ｑ７ｄ、Ｑ８ｄ、Ｑ９ｄ、Ｑｌ０ｄ、Ｑ１４ｄ、Ｑ２１ｄ、Ｑ２８ｄ、Ｑ３０ｄ、Ｑ９０ｄ、Ｑ１２０ｄ、Ｑ２４０ｄまたはＱ３６５ｄでの投与を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または両方は間欠的に投与される。ある実施態様において、方法は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質またはさらなる治療剤の一方または両方の、対象への投与間に 少なくとも１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、６０分、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１８時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、３週間または４週間の遅延がある投与を含む。ある実施態様において、遅延がある投与は、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または両方またはそれらの何らかの組み合わせを、１０分～約３６５日の一定期間連続的に投与し、その後約１０分～約３０日の一定期間投与しないパターンに従う。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または何らかの組み合わせを間欠的に投与し、他方を連続的に投与する。ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の組み合わせを、第二有効量のさらなる治療剤と逐次的に投与する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤は同時に投与される。ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質の組み合わせが第二有効量のさらなる治療剤と逐次的に投与される。このような実施態様において、組み合わせは「共投与」ということもでき、なぜなら本用語は対象が組み合わせの両成分に曝される任意かつ全ての方法を含むからである。しかしながら、このような実施態様は、一製剤または組成物でのみ投与される組み合わせに限定されない。ある濃度のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤が、ある間隔でより有利に送達されることがあり、従って、第一有効量および第二有効量は、投与される製剤により異なり得る。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤は同時にまたは逐次的に投与される。ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は第二有効量のさらなる治療剤の後逐次的に投与される。ある実施態様において、第二有効量のさらなる治療剤は第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質後逐次的に投与される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質(例えば、ＩＬ－１２サブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質)およびさらなる治療剤の組み合わせは１製剤で投与される。ある実施態様において、組み合わせは、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が第二有効量のさらなる治療剤の製剤と別の製剤で投与される、二(２)組成物で投与される。ある実施態様において、組み合わせは、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質が第二有効量のさらなる治療剤の製剤と別の製剤で投与される二(２)組成物で投与される。ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第二有効量のさらなる治療剤後逐次的に投与される。ある実施態様において、第二有効量のさらなる治療剤は、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質後逐次的に投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤が投与され、その後ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤両方が、少なくとも二十四(２４)時間間欠的に投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤は、重ならない隔日スケジュールで投与される。
ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第二有効量のさらなる治療剤後４時間以降投与される。ある実施態様において、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質は、第二有効量のさらなる治療剤投与後、１０分以降、１５分以降、２０分以降、３０分以降、４０分以降、６０分以降、１時間以降、２時間以降、４時間以降、６時間以降、８時間以降、１０時間以降、１２時間以降、２４時間以降、２日以降、４日以降、６日以降、８日以降、１０日以降、１２日以降、１４日以降、２１日以降または３０日以降投与される。ある実施態様において、第二有効量のさらなる治療剤は、第一有効量のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質投与後、１０分以降、１５分以降、２０分以降、３０分以降、４０分以降、６０分以降、１時間以降、２時間以降、４時間以降、６時間以降、８時間以降、１０時間以降、１２時間以降、２４時間以降、２日以降、４日以降、６日以降、８日以降、１０日以降、１２日以降、１４日以降、２１日以降または３０日以降投与される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または両方は、静脈内、皮下、皮膚、経口、筋肉内および腹腔内からなる群から選択される経路により投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または両方は静脈内投与される。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および／またはさらなる治療剤の一方または両方またはそれらの何らかの組み合わせは経口投与される。
本発明の単位剤形を同一または異なる物理形態、すなわちカプセル剤または錠剤により経口および／またはＩＶ点滴による液体などで投与できることは当業者に理解される。さらに、各投与のための単位剤形は特定の投与経路で異なり得る。いくつかの種々の剤形が、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤の組み合わせの一方または両方に存在し得る。医学的条件が違えば、異なる投与経路が必要となり得るため、ここに記載する組み合わせの同じ成分は組成および物理形態が寸分違わないものであり得るが、状態を軽減するために、なお、異なる方法でおそらく異なる時点で投与する必要があり得る。例えば、特に嘔吐を伴う持続的悪心などの状態は、経口剤形の使用を困難とし得て、そのような場合、他の単位剤形で投与する必要があり、おそらく、代わりにまたは同様に吸入、頬側、舌下または坐薬経路で、前にまたは後に使用される他の剤形と同一のものである。特定の剤形は、化学的安定性または薬物動態などの種々の因子の問題が存在し得るため、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質およびさらなる治療剤の特定の組み合わせについて必要であり得る。
ＮＫ標的化治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ＮＫ標的化治療と組み合わせる。例えば、ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、ＮＫｐ４６を標的とする治療剤と共投与する。ある実施態様において、ＮＫｐ４６を標的とする治療剤はＣＤ１６、１以上の腫瘍関連抗原またはそれらの組み合わせにも結合する。ＮＫｐ４６を標的とする例示的治療剤は、引用により全ての目的のために本明細書に包含させる、米国出願ＵＳ２０１７０１９８０３８Ａ１により詳細に記載される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ＮＫ標的化治療と組み合わせる。例えば、ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、ＮＫｐ４６を標的とする治療剤と共投与する。ある実施態様において、ＮＫｐ４６を標的とする治療剤はＣＤ１６、１以上の腫瘍関連抗原またはそれらの組み合わせにも結合する。ＮＫｐ４６を標的とする例示的治療剤は、引用により全ての目的のために本明細書に包含させる、米国出願ＵＳ２０１７０１９８０３８Ａ１により詳細に記載される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療標的化ＮＫ細胞を含む二および三特異的キラーエンゲージャー(ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ)治療と組み合わせる。ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥは、各目的の抗体の可変領域の単一重(ＶＨ)および軽(ＶＬ)鎖から構築される。ＶＨおよびＶＬドメインを、短い柔軟性のあるポリペプチドリンカーにより結合させて、解離を阻止する。ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥは、引用により全ての目的のために本明細書に包含させる、米国出願ＵＳ２０１８０２８２３８６Ａ１およびＵＳ２０１８０２５８３９６Ａ１により詳細に記載される。ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥはＮＫ細胞に特異的な結合ドメインを含み得る。
ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、ハイリスク骨髄異形成症候群、急性骨髄性白血病、全身性肥満細胞症または肥満細胞白血病を有することが知られるまたは疑われる対象を処置するために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、３週処置ブロックの単コースとして投与される。ある実施態様において、処置ブロックは、４連続２４時間連続的点滴(約９６時間)、続く７２時間休薬を含む。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、５μg／kg／日、１０μg／kg／日、２５μg／kg／日、５０μg／kg／日、１００μg／kg／日または２００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも５μg／kg／日、少なくとも１０μg／kg／日、少なくとも２５μg／kg／日、少なくとも５０μg／kg／日、少なくとも１００μg／kg／日または少なくとも２００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも１μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも５μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも２００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも５００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、少なくとも１０００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、２００μg／kg／日またはそれ以下の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、５００μg／kg／日またはそれ以下の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、１０００μg／kg／日またはそれ以下の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、１～２００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、５～２００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、１～５００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、１～１０００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、５～５００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、５～１０００μg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、最大耐容量で投与される。ある実施態様において、ＢｉＫＥおよびＴｒｉＫＥ治療は、最大耐容量未満で投与される。
多特異的結合タンパク質(「ＴｒｉＮＫＥＴ」)治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質国際公開例示的腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３３、Ｂ細胞成熟抗原(ＢＣＭＡ)、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＬＬ１／ＣＬＥＣ１２Ａ、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３、ＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４、ＭＵＣ１、ｃＭＥＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＣＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、Ｂ７.１、Ｂ７.２、ＣＴＬＡ４、ＨＬＡ－ＥおよびＰＤ－Ｌ１を含むが、これらに限定されない。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質国際公開例示的腫瘍関連抗原は、ＨＥＲ２、ＣＤ２０、ＣＤ３３、Ｂ細胞成熟抗原(ＢＣＭＡ)、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＣＬＬ１／ＣＬＥＣ１２Ａ、ＦＬＴ３、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３、ＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４、ＭＵＣ１、ｃＭＥＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＣＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、Ｂ７.１、Ｂ７.２、ＣＴＬＡ４、ＨＬＡ－ＥおよびＰＤ－Ｌ１を含むが、これらに限定されない。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、体重に基づく多特異的結合タンパク質の用量を含む治療と組み合わせる。例えば、体重に基づく多特異的結合タンパク質の用量は、約０.０１μg～約１００mg／kg体重、例えば約０.０１μg～約１００mg／kg体重、約０.０１μg～約５０mg／kg体重、約０.０１μg～約１０mg／kg体重、約０.０１μg～約１mg／kg体重、約０.０１μg～約１００μg／kg体重、約０.０１μg～約５０μg／kg体重、約０.０１μg～約１０μg／kg体重、約０.０１μg～約１μg／kg体重、約０.０１μg～約０.１μg／kg体重、約０.１μg～約１００mg／kg体重、約０.１μg～約５０mg／kg体重、約０.１μg～約１０mg／kg体重、約０.１μg～約１mg／kg体重、約０.１μg～約１００μg／kg体重、約０.１μg～約１０μg／kg体重、約０.１μg～約１μg／kg体重、約１μg～約１００mg／kg体重、約１μg～約５０mg／kg体重、約１μg～約１０mg／kg体重、約１μg～約１mg／kg体重、約１μg～約１００μg／kg体重、約１μg～約５０μg／kg体重、約１μg～約１０μg／kg体重、約１０μg～約１００mg／kg体重、約１０μg～約５０mg／kg体重、約１０μg～約１０mg／kg体重、約１０μg～約１mg／kg体重、約１０μg～約１００μg／kg体重、約１０μg～約５０μg／kg体重、約５０μg～約１００mg／kg体重、約５０μg～約５０mg／kg体重、約５０μg～約１０mg／kg体重、約５０μg～約１mg／kg体重、約５０μg～約１００μg／kg体重、約１００μg～約１００mg／kg体重、約１００μg～約５０mg／kg体重、約１００μg～約１０mg／kg体重、約１００μg～約１mg／kg体重、約１mg～約１００mg／kg体重、約１mg～約５０mg／kg体重、約１mg～約１０mg／kg体重、約１０mg～約１００mg／kg体重、約１０mg～約５０mg／kg体重、約５０mg～約１００mg／kg体重である。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１日１回以上、毎週、毎月または毎年または２～２０年に１回投与する多特異的結合タンパク質の用量を含む治療と組み合わせる。当業者は、体液または組織中の標的化可能構築物または複合体の滞在時間および濃度の測定に基づき、投与の反復割合を容易に推定できる。多特異的結合タンパク質の投与は、カテーテルによるかん流または直接病巣内注射による、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、腔内であり得る。１日１回以上、週１回以上、月１回以上または年１回以上投与し得る。
キメラ抗原受容体(ＣＡＲｓ)治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ＣＡＲ治療と組み合わせる。用語「キメラ抗原受容体」、あるいは「ＣＡＲ」は、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン(ここでは「一次シグナル伝達ドメイン」とも称する)を含む、組み換えポリペプチド構築物をいう。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ＣＡＲ治療と組み合わせる。用語「キメラ抗原受容体」、あるいは「ＣＡＲ」は、少なくとも細胞外抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメイン(ここでは「一次シグナル伝達ドメイン」とも称する)を含む、組み換えポリペプチド構築物をいう。
従って、ある実施態様において、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原に結合する細胞外抗原結合部位、膜貫通ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、１以上の少なくとも１つの共刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメイン(「共刺激シグナル伝達ドメイン」とも称する)をさらに含む。
ある実施態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む腫瘍関連抗原結合ドメイン(例えば、腫瘍関連抗原結合ｓｃＦｖドメイン)、膜貫通ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む腫瘍関連抗原結合ドメイン(例えば、腫瘍関連抗原結合ｓｃＦｖドメイン)、膜貫通ドメインおよび共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む腫瘍関連抗原結合ドメイン(例えば、腫瘍関連抗原結合ｓｃＦｖドメイン)、膜貫通ドメインおよび２つの共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。ある実施態様において、ＣＡＲは、細胞外抗原結合ドメインとして重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを含む腫瘍関連抗原結合ドメイン、膜貫通ドメインおよび少なくとも２つの共刺激シグナル伝達ドメインおよび一次シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含むキメラ融合タンパク質を含む。
膜貫通ドメインについて、種々の実施態様において、ＣＡＲは、ＣＡＲの細胞外ドメインに融合する膜貫通ドメインを含むよう、設計される。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲのドメインの一つと天然に結合するものである。いくつかの場合、膜貫通ドメインは、受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するため、同一または異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのこのようなドメインの結合を回避するよう選択されるかアミノ酸置換により修飾される。他の実施態様において、膜貫通ドメインは、ＣＡＲ Ｔ細胞表面の他のＣＡＲとホモ二量体化できる。他の実施態様において、膜貫通ドメインのアミノ酸配列を、同じＣＡＲ Ｔ細胞に存在する天然結合パートナーの結合ドメインとの相互作用を最小化するため、修飾または置換され得る。
膜貫通ドメインはあらゆる天然に存在する膜結合または膜貫通タンパク質に由来し得る。ある実施態様において、膜貫通領域は、ＣＡＲが標的に結合したときは常に細胞内ドメインにシグナル伝達できる。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＴＣＲ α鎖、ＴＣＲ β鎖、ＴＣＲ ζ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７およびＣＤ１５４からなる群から選択される１以上のタンパク質の膜貫通領域を含む。ある実施態様において、膜貫通ドメインは、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１(ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８)、ＩＣＯＳ(ＣＤ２７８)、４－１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ２Ｒβ、ＩＬ２Ｒγ、ＩＬ７Ｒα、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫＧ２ＤおよびＮＫＧ２Ｃからなる群から選択される１以上のタンパク質の膜貫通領域を含む。
細胞外腫瘍関連抗原結合ドメイン(例えば、腫瘍関連抗原結合ｓｃＦｖドメイン)は、ヒンジ領域により膜貫通ドメインに結合され得る。ヒトＩｇヒンジ(例えば、ＩｇＧ４ヒンジ、ＩｇＤヒンジ)、Ｇｌｙ－Ｓｅｒリンカー、(Ｇ４Ｓ)４リンカー、ＫＩＲ２ＤＳ２ヒンジおよびＣＤ８αヒンジを含むが、これらに限定されない多様なヒンジが用いられ得る。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲが配置されている免疫細胞の専門化機能(例えば、Ｔ細胞の、サイトカイン分泌を含む、細胞溶解活性またはヘルパー活性)の少なくとも１つの活性化を担う。故に、ここで使用する用語「細胞内シグナル伝達ドメイン」は、エフェクター機能シグナルを伝達し、細胞に専門化機能の実施を指示するタンパク質の部分をいう。通常細胞内シグナル伝達ドメイン全体が用いられ得るが、多くの場合、鎖全体を使用する必要はない。細胞内シグナル伝達ドメインの切断部分が使用される限り、このような切断部分を、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、インタクト鎖の代わりに使用し得る。故に、用語細胞内シグナル伝達ドメインは、エフェクター機能シグナルの伝達に十分な、細胞内シグナル伝達ドメインのあらゆる切断部分を含むことが意図される。
ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次シグナル伝達ドメイン(すなわち刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメイン)および１以上の共刺激シグナル伝達ドメイン(すなわち少なくとも１つの共刺激分子由来の機能的シグナル伝達ドメイン)を含む。
ここで使用する用語「刺激分子」は、免疫細胞シグナル伝達経路の少なくとも一部態様について刺激方向に免疫細胞の活性化を制御する、細胞質シグナル伝達配列を提供する、免疫細胞、例えば、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはＢ細胞により発現される分子をいう。ある実施態様において、シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体とペプチドを負荷されたＭＨＣ分子の結合により開始され、増殖、活性化、分化などを含むが、これらに限定されないＴ細胞応答の介在に至る、一次シグナルである。
刺激方法で作用する一次シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明で特に有用なＩＴＡＭ含有細胞質シグナル伝達配列の例は、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ(ＦＣＥＲ１Ｇ)、ＦｃガンマＲIIａ、ＦｃＲベータ(ＦｃイプシロンＲ１ｂ)、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２を含む。ある実施態様において、１以上のＣＡＲの何れかにおける一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３－ゼータ由来の細胞質シグナル伝達配列を含む。
ある実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲゼータ、ＦｃＲガンマ、ＦｃＲベータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ６６ｄ、４－１ＢＢおよび／またはＣＤ３－ゼータの機能的シグナル伝達ドメインである。ある実施態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、共通ＦｃＲガンマ(ＦＣＥＲ１Ｇ)、ＦｃガンマＲIIａ、ＦｃＲベータ(ＦｃイプシロンＲ１ｂ)、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＤＡＰ１０および／またはＤＡＰ１２の機能的シグナル伝達ドメインを含む。特定の実施態様において、一次シグナル伝達ドメインは、Ｔ細胞受容体複合体と結合したゼータ鎖の機能的シグナル伝達ドメインである。
ここで使用する用語「共刺激分子」は、共刺激リガンドと特異的に結合し、それにより、増殖を含むが、これに限定されないＴ細胞による共刺激応答に介在する、Ｔ細胞の同族結合パートナーをいう。共刺激分子は、リンパ球の抗原に対する効率的応答に必要な、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。このような分子の例は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ(ＣＤ１３７)、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原－１(ＬＦＡ－１、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８(ＬＩＧＨＴ)、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３およびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドなどを含む。このような共刺激分子のさらなる例は、ＣＤ５、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ(ＬＩＧＨＴＲ)、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０(ＫＬＲＦ１)、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ２Ｒベータ、ＩＬ２Ｒガンマ、ＩＬ７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１(ＣＤ２２６)、ＳＬＡＭＦ４(ＣＤ２４４、２Ｂ４)、ＣＤ８４、ＣＤ９６(Ｔａｃｔｉｌｅ)、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９(ＣＤ２２９)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５)、ＰＳＧＬ１、ＣＤ１００(ＳＥＭＡ４Ｄ)、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６(ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙ１０８)、ＳＬＡＭ(ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３)、ＢＬＡＭＥ(ＳＬＡＭＦ８)、ＳＥＬＰＬＧ(ＣＤ１６２)、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／ＣｂｐおよびＣＤ８３と特異的に結合するリガンドを含む。ある実施態様において、ＣＡＲの共刺激シグナル伝達ドメインは、ここに記載する共刺激分子の機能的シグナル伝達ドメイン、例えば、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＣＤ２５８、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３に結合するリガンド、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１(ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８)、ＩＣＯＳおよび４－１ＢＢ(ＣＤ１３７)またはそれらの何らかの組み合わせである。
ここで使用する用語「シグナル伝達ドメイン」は、二次メッセンジャーの産生によりまたはこのようなメッセンジャーに応答してエフェクターとして機能することにより、規定されたシグナル伝達経路を経て細胞活性を制御するために、細胞内で情報伝達に作用する、タンパク質の機能的部分をいう。
ＣＡＲの細胞質シグナル伝達部分内の細胞質シグナル伝達配列は、互いに無作為にまたは特定の順番で結合され得る。所望により、短オリゴまたはポリペプチドリンカー、例えば、２～１０アミノ酸長が結合を形成し得る。
抗体治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、癌を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のための抗体療法と組み合わせる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、癌を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のための抗体療法と組み合わせる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＨＥＲ２抗体プラットフォーム(例えば、抗ＨＥＲ２結合ドメイン、抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲートまたは抗ＨＥＲ２ ＣＡＲを含む二特異的または三特異的抗体)などの抗ＨＥＲ２結合ドメインを含む治療と組み合わせる。抗ＨＥＲ２抗体は、トラスツズマブ(ハーセプチン(登録商標) - Roche/Genentech；Kanjinti - Amgen)、ペルツズマブ(PERJETA(登録商標) - Roche/Genentech)およびＭＧＡＨ２２(引用により、全ての目的のために本明細書に包含させる米国特許８,８０２,０９３に詳述)を含むが、これらに限定されない。抗ＨＥＲ２抗体プラットフォームは、エリツマキソマブ(REXOMUN(登録商標) - Creative Biolabs)およびトラスツズマブエムタンシン(アド－トラスツズマブエムタンシン／Ｔ－ＤＭ１；KADCYLA(登録商標) - Roche/Genentech)を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療を、癌を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療はＩＶ点滴により投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、１mg／kg／日、２mg／kg／日、３mg／kg／日、４mg／kg／日、５mg／kg／日、６mg／kg／日、７mg／kg／日、８mg／kg／日、９mg／kg／日、１０mg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、少なくとも１mg／kg／日、少なくとも２mg／kg／日、少なくとも３mg／kg／日、少なくとも４mg／kg／日、少なくとも５mg／kg／日、少なくとも６mg／kg／日、少なくとも７mg／kg／日、少なくとも８mg／kg／日、少なくとも９mg／kg／日、少なくとも１０mg／kg／日の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、１mg／kg／日未満の用量で投与される。
ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療を、乳癌を有することが知られるまたは疑われる対象、例えば、転移ＨＥＲ２過発現乳癌を有すると診断された対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、４mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、４mg／kg／日を９０分間のＩＶ点滴で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、２mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、２mg／kg／日を３０分間のＩＶ点滴で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、４mg／kg／日の初期用量で投与され、その後毎週２mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、４mg／kg／日の初期用量で投与され、その後毎週２mg／kg／日を５２週間投与される。
ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療を、胃癌を有することが知られるまたは疑われる対象、例えば、転移ＨＥＲ２過発現胃癌を有すると診断された対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、８mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、８mg／kg／日を９０分間のＩＶ点滴で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、６mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、６mg／kg／日を３０～９０分間のＩＶ点滴で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、８mg／kg／日の初期用量で投与され、その後毎週６mg／kg／日で投与される。ある実施態様において、抗ＨＥＲ２結合ドメイン治療は、８mg／kg／日の初期用量で投与され、その後毎週６mg／kg／日で５２週間投与される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、抗ＣＤ２０結合ドメインを含む治療、例えば、抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２０抗体プラットフォーム(例えば、抗ＣＤ２０結合ドメイン、抗ＣＤ２０抗体－薬物コンジュゲートまたは抗ＣＤ２０ ＣＡＲを含む二特異的または三特異的抗体)と組み合わせる。抗ＣＤ２０抗体は、リツキシマブ(リツキサン(登録商標) - Roche/Genentech)、オクレリズマブ(OCREVUS(登録商標) - Roche/Genentech)、オビヌツズマブ(GAZYVA(登録商標) - Roche/Genentech)、オファツムマブ(ARZERRA(登録商標) - Novartis)およびベルツズマブを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、癌を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療はＩＶ点滴により投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、１００mg／ｍ２、２００mg／ｍ２、３００mg／ｍ２、４００mg／ｍ２、５００mg／ｍ２、６００mg／ｍ２、７００mg／ｍ２、８００mg／ｍ２、９００mg／ｍ２または１０００mg／ｍ２の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、３７５mg／ｍ２の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、少なくとも１００mg／ｍ２、少なくとも２００mg／ｍ２、少なくとも３００mg／ｍ２、少なくとも４００mg／ｍ２、少なくとも５００mg／ｍ２、少なくとも６００mg／ｍ２、少なくとも７００mg／ｍ２、少なくとも８００mg／ｍ２、少なくとも９００mg／ｍ２または少なくとも１０００mg／ｍ２の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、４００mg／ｍ２未満の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、３７５mg／ｍ２未満の用量で投与される。
ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、非ホジキンリンパ腫(ＮＨＬ)を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、ＩＶ点滴で３７５mg／ｍ２の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、ＩＶ点滴で３７５mg／ｍ２未満の用量で投与される。
ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、慢性リンパ球性白血病(ＣＬＬ)を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、第一サイクルで３７５mg／ｍ２をＩＶ点滴の用量およびさらなる２～６サイクルでサイクルあたり５００mg／ｍ２をＩＶ点滴の用量で投与される。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療は、ＩＶ点滴で３７５mg／ｍ２未満の用量を投与される。組み合わせた抗ＣＤ２０結合ドメインおよびヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、フルダラビンおよびシクロホスファミド(ＦＣ)と組み合わせて使用し得る。
ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、関節リウマチ(ＲＡ)を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、１０００mg２回で、ＩＶ点滴により、２週間離して投与する。ある実施態様において、抗ＣＤ２０結合ドメイン治療を、２４週間まで、１０００mg２回で、ＩＶ点滴により、２週間離して投与する。ある実施態様において、組み合わせた抗ＣＤ２０結合ドメインおよびヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、メトトレキサートと共投与する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、アゴニスト抗体を含む抗体治療を含む治療と組み合わせる。ある実施態様において、アゴニスト抗体は、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＦＡＰ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体または抗ＣＤ２７抗体である。ある実施態様において、アゴニスト抗体は、二特異的抗体である。ある実施態様において、アゴニスト抗体は、抗４－１ＢＢ抗体、抗ＣＤ１３７抗体、抗ＦＡＰ抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＧＩＴＲ抗体または抗ＣＤ２７抗体から選択される２以上の抗原結合ドメインを含む、多特異的抗体、例えば、二特異的抗体である。その例は、ウトミルマブ(Pfizer)などの４－１ＢＢおよびＣＤ１３７を標的とする二特異的アゴニスト抗体である。
チェックポイント阻害剤治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、チェックポイント阻害剤治療と組み合わせ得る。遮断または阻害の標的とし得る例示的免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４、４－１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４－１ＢＢＬ(ＣＤ１３７Ｌ)、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４(ＣＤ２ファミリーの分子に属し、全ＮＫ、γδおよび記憶ＣＤ８＋(αβ)Ｔ細胞)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５とも称する)およびＣＧＥＮ－１５０４９を含むが、これらに限定されない。免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９の１以上と結合し、活性を遮断または阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントまたは他の結合タンパク質を含む。例示的免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ(抗ＰＤ－１；オプジーボ(登録商標) - BMS)、ＡＭＰ２２４(抗ＰＤ－１；NCI)、ペムブロリズマブ(抗ＰＤ－１；MK-3475／キイトルーダ(登録商標) - Merck)、ピディリズマブ(抗ＰＤ－１抗体；CT-011 - Teva/CureTech)、アテゾリズマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；テセントリク(登録商標) - Roche/Genentech)、デュルバルマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；MEDI4736／イミフィンジ(登録商標) - Medimmune/AstraZeneca)、アベルマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；バベンチオ(登録商標)－Pfizer)、BMS-936559(抗ＰＤ－Ｌ１-BMS)、イピリムマブ(抗ＣＴＬＡ－４；ヤーボイ(登録商標) - BMS)、トレメリムマブ(抗ＣＴＬＡ－４；Medimmune/AstraZeneca)、リリルマブ(抗ＫＩＲ；BMS)、モナリズマブ(抗ＮＫＧ２Ａ；Innate Pharma/AstraZeneca)、ＢＹ５５(抗ＣＤ１６０)、抗ＯＸ４０、抗ＴＩＭ３および抗ＬＡＧ３を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、チェックポイント阻害剤治療と組み合わせ得る。遮断または阻害の標的とし得る例示的免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４、４－１ＢＢ(ＣＤ１３７)、４－１ＢＢＬ(ＣＤ１３７Ｌ)、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４(ＣＤ２ファミリーの分子に属し、全ＮＫ、γδおよび記憶ＣＤ８＋(αβ)Ｔ細胞)、ＣＤ１６０(ＢＹ５５とも称する)およびＣＧＥＮ－１５０４９を含むが、これらに限定されない。免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０およびＣＧＥＮ－１５０４９の１以上と結合し、活性を遮断または阻害する抗体またはその抗原結合フラグメントまたは他の結合タンパク質を含む。例示的免疫チェックポイント阻害剤は、ニボルマブ(抗ＰＤ－１；オプジーボ(登録商標) - BMS)、ＡＭＰ２２４(抗ＰＤ－１；NCI)、ペムブロリズマブ(抗ＰＤ－１；MK-3475／キイトルーダ(登録商標) - Merck)、ピディリズマブ(抗ＰＤ－１抗体；CT-011 - Teva/CureTech)、アテゾリズマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；テセントリク(登録商標) - Roche/Genentech)、デュルバルマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；MEDI4736／イミフィンジ(登録商標) - Medimmune/AstraZeneca)、アベルマブ(抗ＰＤ－Ｌ１；バベンチオ(登録商標)－Pfizer)、BMS-936559(抗ＰＤ－Ｌ１-BMS)、イピリムマブ(抗ＣＴＬＡ－４；ヤーボイ(登録商標) - BMS)、トレメリムマブ(抗ＣＴＬＡ－４；Medimmune/AstraZeneca)、リリルマブ(抗ＫＩＲ；BMS)、モナリズマブ(抗ＮＫＧ２Ａ；Innate Pharma/AstraZeneca)、ＢＹ５５(抗ＣＤ１６０)、抗ＯＸ４０、抗ＴＩＭ３および抗ＬＡＧ３を含む。
ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療を、癌を有することが知られるまたは疑われる対象の処置のために、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療はＩＶ点滴により投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は、３０分間のＩＶにより投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は３週間毎に投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は、１００mg、２００mg、３００mg、４００mg、５００mg、６００mg、７００mg、８００mg、９００mgまたは１０００mgの用量で投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は、２００mgの用量で投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は、少なくとも１００mg、少なくとも２００mg、少なくとも３００mg、少なくとも４００mg、少なくとも５００mg、少なくとも６００mg、少なくとも７００mg、少なくとも８００mg、少なくとも９００mgまたは少なくとも１０００mgの用量で投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療は、２００mg未満の用量で投与される。ある実施態様において、チェックポイント阻害剤治療を、黒色腫、非小細胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)、頭頚部扁平上皮細胞癌(ＨＮＳＣＣ)、古典的ホジキンリンパ腫(ｃＨＬ)、一次縦隔大Ｂ細胞リンパ腫(ＰＭＢＣＬ)、尿路上皮癌腫、マイクロサテライト不安定高癌、胃癌、子宮頸癌、肝細胞癌腫(ＨＣＣ)、メルケル細胞癌腫(ＭＣＣ)、腎臓細胞癌腫(ＲＣＣ)を有することが知られるまたは疑われる対象の処置に、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療と組み合わせて使用する。
さらなるサイトカイン治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のさらなるサイトカイン治療、１以上のケモカイン治療またはそれらの組み合わせと組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のさらなるサイトカイン治療と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のケモカイン治療と組み合わせる。ある実施態様において、サイトカイン治療は、炎症促進性サイトカイン、Ｔｈ１サイトカインまたはＴｈ２サイトカインを含む。ある実施態様において、サイトカイン治療は、組み換えヒトサイトカインまたはケモカインを含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のさらなるサイトカイン治療、１以上のケモカイン治療またはそれらの組み合わせと組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のさらなるサイトカイン治療と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上のケモカイン治療と組み合わせる。ある実施態様において、サイトカイン治療は、炎症促進性サイトカイン、Ｔｈ１サイトカインまたはＴｈ２サイトカインを含む。ある実施態様において、サイトカイン治療は、組み換えヒトサイトカインまたはケモカインを含む。
ある実施態様において、サイトカイン治療は、インターロイキン(例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－８、ＩＬ－１２、ＩＬ－１３、ＩＬ－１５、ＩＬ－１６、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１およびＩＬ－２２)であるサイトカインを含む。ある実施態様において、サイトカイン治療は、増殖因子(例えば、腫瘍壊死因子(ＴＮＦ)、ＬＴ、ＥＭＡＰ－II、ＧＭ－ＣＳＦ、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ)であるサイトカインを含む。ある実施態様において、サイトカイン治療は、抗炎症性サイトカイン(例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１０、ＩＬ－１１、ＩＬ－１３およびＴＧＦ)を含む。
ある実施態様において、ケモカイン治療は、炎症促進性ケモカイン(例えば、ＧＲＯ－α、ＧＲＯ－ｂ、ＬＩＸ、ＧＣＰ－２、ＭＩＧ、ＩＰ１０、Ｉ－ＴＡＣおよびＭＣＰ－１、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン、ＳＤＦ－１およびＭＩＰ３ａ)を含む。ある実施態様において、ケモカイン治療は、ケモカイン受容体を含む。ある実施態様において、ケモカイン治療は、ＣＸＣケモカイン受容体(例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６およびＣＸＣＲ７)、ＣＣケモカイン受容体(例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０およびＣＣＲ１１)、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体(例えば、ＣＸ３Ｃ１１)またはＸＣケモカイン受容体(例えば、ＸＣＲ１)を含む。ある実施態様において、ケモカイン治療は、Ｇタンパク質架橋膜貫通受容体を含む。
ある実施態様において、サイトカイン治療は、ＩＬ－１２シグナル伝達と相乗作用するサイトカイン治療を含む。ある実施態様において、サイトカイン治療は、ＩＬ－２サイトカインまたはその誘導体を含む。ある実施態様において、ＩＬ－２治療は、アルデスロイキン(Proleukin - Prometheus Therapeutics)である。ある実施態様において、ＩＬ－２治療および／またはアルデスロイキンを静脈内投与する。ある実施態様において、サイトカイン治療は、ＩＬ－１５サイトカインまたはその誘導体を含む。ある実施態様において、ＩＬ－１５治療は、ＡＬＴ－８０３(Altor Bioscience)またはNKTR-255(Nektar)である。ある実施態様において、ＩＬ－１５治療、ＮＫＴＲ－２５５および／またはＡＬＴ－８０３を皮下投与する。ある実施態様において、ケモカイン治療は、ＣＸＣＬ９ケモカイン、ＣＸＣＬ１０ケモカインまたはその誘導体を含む。
ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、対象へのサイトカインまたはケモカインの投与を含む。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、対象への組み換えサイトカインまたはケモカインの投与を含む。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、サイトカインまたはケモカインを産生させるための細胞の操作を含む。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、サイトカインまたはケモカインを産生させるためのエクスビボ、インビトロまたはインビボでの細胞の操作を含む。
ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、特異的細胞型または受容体を標的とするよう設計された、ウイルスベクターベースの送達プラットフォーム、例えば、ワクシニア、鶏痘、自己複製アルファウイルス、マラバウイルス、アデノウイルス(例えば、Tatsis et al., Adenoviruses, Molecular Therapy (2004) 10, 616-629)、第二、第三またはハイブリッド第二／第三世代レンチウイルスおよびあらゆる世代の組み換えレンチウイルスを含むが、これらに限定されないレンチウイルスを使用する、サイトカインまたはケモカインを産生させるための細胞の操作を含む(例えば、Hu et al., Immunization Delivered by Lentiviral Vectors for Cancer and Infectious Diseases, Immunol Rev. (2011) 239(1): 45-61, Sakuma et al., Lentiviral vectors: basic to translational, Biochem J. (2012) 443(3):603-18, Cooper et al., Rescue of splicing-mediated intron loss maximizes expression in lentiviral vectors containing the human ubiquitin C promoter, Nucl. Acids Res. (2015) 43 (1): 682-690, Zufferey et al., Self-Inactivating Lentivirus Vector for Safe and Efficient In Vivo Gene Delivery, J. Virol. (1998) 72 (12): 9873-9880)または米国特許５,１７３,４１４; Tratschin et al, Mol. Cell. Biol. 5:3251-3260 (1985); Tratschin, et al, Mol. Cell, Biol. 4:2072-2081 (1984); Hermonat & Muzyczka, PNAS 81:64666470 (1984); およびSamuiski et al, J. Virol. 63:03822-3828 (1989)に詳述のアデノ随伴ウイルス(「ＡＡＶ」)参照)。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、ＬＮＰ、リポソームまたはエクソソームを使用するサイトカインまたはケモカインを産生させるための細胞の操作を含む。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、ヌクレアーゼベースのゲノム編集系(例えば、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート(ＣＲＩＳＰＲ)ファミリー、転写アクティベーター様エフェクターヌクレアーゼ(ＴＡＬＥＮ)、ジンクフィンガーヌクレアーゼ(ＺＦＮ)およびホーミングエンドヌクレアーゼ(ＨＥ)ベースのゲノム編集系またはその誘導体)を使用するなどの、ゲノム編集を使用するサイトカインまたはケモカインを産生させるための細胞の操作を含む。ある実施態様において、サイトカインまたはケモカイン治療は、エレクトロポレーションを使用するサイトカインまたはケモカインを産生させるための細胞の操作を含む。
自然免疫系アゴニスト治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の自然免疫系アゴニストと組み合わせる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の自然免疫系アゴニストと組み合わせる。
ある実施態様において、自然免疫系アゴニストは、トール様受容体(ＴＬＲ)アゴニストを含む。ある実施態様において、ＴＬＲアゴニストは、ＴＬＲ１／２、ＴＬＲ２／６、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／８またはＴＬＲ９アゴニストを含む。ある実施態様において、ＴＬＲ２／６アゴニストは、リポタンパク質、例えば細菌リポタンパク質または誘導体、例えばＰａｍ２ＣＳＫ４を含む。ある実施態様において、ＴＬＲ１／２アゴニストは、リポタンパク質を含む。ある実施態様において、ＴＬＲ３アゴニストは、ｄｓＲＮＡアナログ、例えばリンタトリモド(AMPLIGEN(登録商標) - Hemispherx Biopharma)またはポリＩＣ－ＬＣ(例えば、ヒルトノール(登録商標))を含む。ある実施態様において、ＴＬＲ４アゴニストは、リポ多糖(ＬＰＳ、エンドトキシンとも称する)または誘導体、例えば、リピドＡを含む。ある実施態様において、ＴＬＲ７アゴニストは、レシキモド(Ｒ８４８とも称する)、イミキモド(ZYCLARA(登録商標)、Aldara-Medicis)およびガーディキモッドを含むが、これらに限定されない、ｓｓＲＮＡまたは誘導体またはイミダゾキノリン誘導体を含む。ある実施態様において、ＴＬＲ７アゴニストはＴＬＲ８アゴニスト、例えば、イミキモドまたはMedi-9197(AstraZeneca/Medimmune)でもある。ある実施態様において、ＴＬＲ９アゴニストは、ＣｐＧ含有オリゴデオキシヌクレオチド(CpG-ODN)またはＳＤ－１０１(Dynavax)を含む。
ある実施態様において、自然免疫系アゴニストは、インターフェロン遺伝子刺激因子(ＳＴＩＮＧ)アゴニストを含む。ある実施態様において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、環状ジヌクレオチド(ＣＤＮ)を含む。ある実施態様において、ＣＤＮは環状ジＡＭＰ、環状ジＧＭＰまたは環状－ＧＭＰ－ＡＭＰ(ｃＧＡＭＰ)を含む。ある実施態様において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ｃＧＡＳを刺激する核酸(例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡ)を含む。ある実施態様において、ＳＴＩＮＧアゴニストは、ＡＤＵ－Ｓ１００(MIW815とも称する - Aduro/Novartis)である。
化学療法
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の化学療法と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、癌と診断された対象を処置するための１以上の化学療法と組み合わせる。化学療法剤の例は、アルデスロイキン、アルボシジブ、アンチネオプラストンＡＳ２－１、アンチネオプラストンA10、抗胸腺細胞グロブリン、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、三酸化ヒ素、ベータアレチン、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質阻害剤ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＢＭＳ－３４５５４１、ボルテゾミブ(ベルケイド(登録商標))、ブリオスタチン１、ブスルファン、カルボプラチン、キャンパス－１Ｈ、ＣＣ－５１０３、カルムスチン、酢酸カスポフンギン、クロファラビン、シスプラチン、クラドリビン(ロイスタチン(登録商標))、クロラムブシル(リューケラン(登録商標))、クルクミン、シクロスポリン、シクロホスファミド(Cyloxan、エンドキサン、Endoxana、Cyclostin)、シタラビン、デニロイキンジフチトクス、デキサメサゾン、ＤＴ ＰＡＣＥ、ドセタキセル、ドラスタチン１０、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)、ADRIBLASTINE(登録商標))、塩酸ドキソルビシン、エンザスタウリン、エポエチンアルファ、エトポシド、エベロリムス(RAD001)、フェンレチニド、フィルグラスチム、メルファラン、メスナ、フラボピリドール、フルダラビン(フルダラ(登録商標))、ゲルダナマイシン(17-AAG)、イホスファミド、塩酸イリノテカン、イクサベピロン、レナリドマイド(レブラミド(登録商標)、CC-5013)、リンホカイン活性化キラー細胞、メルファラン、メトトレキサート、塩酸ミトキサントロン、モテキサフィンガドリニウム、ミコフェノール酸モフェチル、ネララビン、オブリメルセン(GENASENSE(登録商標)) オバトクラックス(GX15-070)、オブリメルセン、酢酸オクトレオチド、オメガ－３脂肪酸、オキサリプラチン、パクリタキセル、ＰＤ０３３２９９１、ペグ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン(NIPENT(登録商標))、ペリホシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、Ｒ－ロスコビチン(SELICILIB(登録商標)、CYC202)、組み換えインターフェロンアルファ、組み換えインターロイキン－１２、組み換えインターロイキン－１１、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リツキシマブ、サルグラモスチム、シクエン酸ルデナフィル、シンバスタチン、シロリムス、スチリルスルホン、タクロリムス、タネスピマイシン、テムシロリムス(CC1-779)、サリドマイド、治療同種リンパ球、チオテパ、ティピファルニブ、ベルケイド(登録商標)(ボルテゾミブ(登録商標)またはPS-341)、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))、ビンクリスチン硫酸、二酒石酸ビノレルビン、ボリノスタット(SAHA)およびＦＲ(フルダラビン、リツキシマブ)、ＣＨＯＰ(シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン)、ＣＶＰ(シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン)、ＦＣＭ(フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン)、ＦＣＲ(フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ)、ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ(多分割シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメサゾン、メトトレキサート、シタラビン)、ICE(イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド)、ＭＣＰ(ミトキサントロン、クロラムブシルおよびプレドニゾロン)、Ｒ－ＣＨＯＰ(リツキシマブ＋ＣＨＯＰ)、Ｒ－ＣＶＰ(リツキシマブ＋ＣＶＰ)、Ｒ－ＦＣＭ(リツキシマブ＋ＦＣＭ)、Ｒ－ＩＣＥ(リツキシマブ－ＩＣＥ)およびＲ－ＭＣＰ(R-MCP)を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の化学療法と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、癌と診断された対象を処置するための１以上の化学療法と組み合わせる。化学療法剤の例は、アルデスロイキン、アルボシジブ、アンチネオプラストンＡＳ２－１、アンチネオプラストンA10、抗胸腺細胞グロブリン、アミホスチン三水和物、アミノカンプトテシン、三酸化ヒ素、ベータアレチン、Ｂｃｌ－２ファミリータンパク質阻害剤ＡＢＴ－２６３、ＡＢＴ－１９９、ＢＭＳ－３４５５４１、ボルテゾミブ(ベルケイド(登録商標))、ブリオスタチン１、ブスルファン、カルボプラチン、キャンパス－１Ｈ、ＣＣ－５１０３、カルムスチン、酢酸カスポフンギン、クロファラビン、シスプラチン、クラドリビン(ロイスタチン(登録商標))、クロラムブシル(リューケラン(登録商標))、クルクミン、シクロスポリン、シクロホスファミド(Cyloxan、エンドキサン、Endoxana、Cyclostin)、シタラビン、デニロイキンジフチトクス、デキサメサゾン、ＤＴ ＰＡＣＥ、ドセタキセル、ドラスタチン１０、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標)、ADRIBLASTINE(登録商標))、塩酸ドキソルビシン、エンザスタウリン、エポエチンアルファ、エトポシド、エベロリムス(RAD001)、フェンレチニド、フィルグラスチム、メルファラン、メスナ、フラボピリドール、フルダラビン(フルダラ(登録商標))、ゲルダナマイシン(17-AAG)、イホスファミド、塩酸イリノテカン、イクサベピロン、レナリドマイド(レブラミド(登録商標)、CC-5013)、リンホカイン活性化キラー細胞、メルファラン、メトトレキサート、塩酸ミトキサントロン、モテキサフィンガドリニウム、ミコフェノール酸モフェチル、ネララビン、オブリメルセン(GENASENSE(登録商標)) オバトクラックス(GX15-070)、オブリメルセン、酢酸オクトレオチド、オメガ－３脂肪酸、オキサリプラチン、パクリタキセル、ＰＤ０３３２９９１、ペグ化リポソーム塩酸ドキソルビシン、ペグフィルグラスチム、ペントスタチン(NIPENT(登録商標))、ペリホシン、プレドニゾロン、プレドニゾン、Ｒ－ロスコビチン(SELICILIB(登録商標)、CYC202)、組み換えインターフェロンアルファ、組み換えインターロイキン－１２、組み換えインターロイキン－１１、組み換えｆｌｔ３リガンド、組み換えヒトトロンボポエチン、リツキシマブ、サルグラモスチム、シクエン酸ルデナフィル、シンバスタチン、シロリムス、スチリルスルホン、タクロリムス、タネスピマイシン、テムシロリムス(CC1-779)、サリドマイド、治療同種リンパ球、チオテパ、ティピファルニブ、ベルケイド(登録商標)(ボルテゾミブ(登録商標)またはPS-341)、ビンクリスチン(オンコビン(登録商標))、ビンクリスチン硫酸、二酒石酸ビノレルビン、ボリノスタット(SAHA)およびＦＲ(フルダラビン、リツキシマブ)、ＣＨＯＰ(シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン)、ＣＶＰ(シクロホスファミド、ビンクリスチンおよびプレドニゾン)、ＦＣＭ(フルダラビン、シクロホスファミド、ミトキサントロン)、ＦＣＲ(フルダラビン、シクロホスファミド、リツキシマブ)、ｈｙｐｅｒＣＶＡＤ(多分割シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン、デキサメサゾン、メトトレキサート、シタラビン)、ICE(イホスファミド、カルボプラチンおよびエトポシド)、ＭＣＰ(ミトキサントロン、クロラムブシルおよびプレドニゾロン)、Ｒ－ＣＨＯＰ(リツキシマブ＋ＣＨＯＰ)、Ｒ－ＣＶＰ(リツキシマブ＋ＣＶＰ)、Ｒ－ＦＣＭ(リツキシマブ＋ＦＣＭ)、Ｒ－ＩＣＥ(リツキシマブ－ＩＣＥ)およびＲ－ＭＣＰ(R-MCP)を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、結腸癌、直腸癌または結腸直腸癌(ＣＲＣ)を有すると診断された対象を処置するための１以上の化学療法と組み合わせる。ある実施態様において、化学療法は、ＦＯＬＦＯＸ(５－ＦＵ、ロイコボリンおよびオキサリプラチン／Eloxatin)、FOLFIRI(ロイコボリン、５－ＦＵおよびイリノテカン／Camptosar)、FOLFOXIRI(ロイコボリン、５－ＦＵ、オキサリプラチンおよびイリノテカン)、CapeOx(カペシタビンおよびオキサリプラチン)、５－ＦＵとロイコボリン共投与、カペシタビン(ゼローダ(登録商標))単独またはトリフルリジンおよびチピラシル(ロンサーフ(登録商標))を含む。ある実施態様において、化学療法は、ＶＥＧＦ標的化剤、例えばベバシズマブ(アバスチン(登録商標))、ｚｉｖ-アフリベルセプト(ザルトラップ(登録商標))、ラムシルマブ(CYRAMZA(登録商標))またはレゴラフェニブ(スチバーガ(登録商標))またはＥＧＦＲ標的化剤、例えばセツキシマブ(アービタックス)またはパニツムマブ(ベクティビックス(登録商標))を含む。ある実施態様において、化学療法は、ＦＯＬＦＯＸ、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸＩＲＩ、ＣａｐｅＯｘ、５－ＦＵとロイコボリン共投与、カペシタビン単独およびＶＥＧＦ標的化剤またはＥＧＦＲ標的化剤と一緒のトリフルリジン／チピラシルから選択される化学療法と共投与される。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、乳癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の化学療法と組み合わせる。ある実施態様において、化学療法は、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標))、ペグ化リポソームドキソルビシン、エピルビシン(ELLENCE(登録商標))、パクリタキセル(タキソール)、ドセタキセル(タキソテール(登録商標))、アルブミン結合パクリタキセル(アブラキサン(登録商標))、５－フルオロウラシル(５－ＦＵ)、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標))、カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))、シスプラチン、ビノレルビン(ナベルビン(登録商標))、カペシタビン(ゼローダ)、ゲムシタビン(ジェムザール(登録商標))、イクサベピロン(イグゼンプラ(登録商標))またはエリブリン(ハラヴェン)を含む。ある実施態様において、化学療法は、ドキソルビシン(アドリアマイシン(登録商標))、ペグ化リポソームドキソルビシン、エピルビシン(ELLENCE(登録商標))、パクリタキセル(タキソール)、ドセタキセル(タキソテール(登録商標))、アルブミン結合パクリタキセル(アブラキサン(登録商標))、５－フルオロウラシル(５－ＦＵ)、シクロホスファミド(シトキサン(登録商標))、カルボプラチン(パラプラチン(登録商標))、シスプラチン、ビノレルビン(ナベルビン(登録商標))、カペシタビン(ゼローダ(登録商標))、ゲムシタビン(ジェムザール(登録商標))、イクサベピロン(イグゼンプラ(登録商標))およびエリブリン(ハラヴェン(登録商標))から選択される２以上の化学療法の組み合わせを含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、黒色腫／皮膚癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の化学療法と組み合わせる。ある実施態様において、化学療法は、ダカルバジン(別名ＤＴＩＣ)、テモゾロミド、ｎａｂ－パクリタキセル、パクリタキセル、シスプラチン、カルボプラチンまたはビンブラスチンを含む。
標的化剤治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の標的化剤と組み合わせる。一般に、標的化剤は、癌と関連する標的などの特定の分子標的に作用する。標的化剤は、標準化学療法が全ての急速に***している正常および癌性細胞に作用する点で、標準化学療法と区別される。標的化剤は、ホルモン治療、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシスインデューサー、血管形成阻害剤、免疫療法、毒素送達分子(例えば、抗体薬物－コンジュゲート)およびキナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、標的化剤は受容体アゴニストまたはリガンドを含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、１以上の標的化剤と組み合わせる。一般に、標的化剤は、癌と関連する標的などの特定の分子標的に作用する。標的化剤は、標準化学療法が全ての急速に***している正常および癌性細胞に作用する点で、標準化学療法と区別される。標的化剤は、ホルモン治療、シグナル伝達阻害剤、遺伝子発現モジュレーター、アポトーシスインデューサー、血管形成阻害剤、免疫療法、毒素送達分子(例えば、抗体薬物－コンジュゲート)およびキナーゼ阻害剤を含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、標的化剤は受容体アゴニストまたはリガンドを含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、結腸癌、直腸癌または結腸直腸癌(ＣＲＣ)を有すると診断された対象を処置するための１以上の標的化剤と組み合わせる。ある実施態様において、標的化剤は、セツキシマブ(アービタックス(登録商標))、パニツムマブ(ベクティビックス(登録商標))、ベバシズマブ(アバスチン(登録商標))、ｚｉｖ－アフリベルセプト(ザルトラップ(登録商標))、レゴラフェニブ(スチバーガ(登録商標))、ラムシルマブ(CYRAMZA(登録商標))、ニボルマブ(オプジーボ(登録商標))またはイピリムマブ(ヤーボイ(登録商標))を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、乳癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の標的化剤と組み合わせる。ある実施態様において、標的化剤は、エベロリムス(アフィニトール(登録商標))、タモキシフェン(ノルバデックス(登録商標))、トレミフェン(フェアストン(登録商標))、トラスツズマブ(ハーセプチン(登録商標))、フルベストラント(フェソロデックス(登録商標))、アナストロゾール(アリミデックス(登録商標))、エキセメスタン(アロマシン(登録商標))、ラパチニブ(タイケルブ(登録商標))、レトロゾール(フェマーラ(登録商標))、ペルツズマブ(PERJETA(登録商標))、ａｄｏ－トラスツズマブエムタンシン(カドサイラ(登録商標))、パルボシクリブ(イブランス(登録商標))、リボシクリブ(KISQALI(登録商標))、マレイン酸ネラチニブ(NERLYNXTM)、アベマシクリブ(ベージニオTM)、オラパリブ(LYNPARZATM)、アテゾリズマブ(テセントリク(登録商標))またはアルペリシブ(PIQRAY(登録商標))を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、黒色腫／皮膚癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の標的化剤と組み合わせる。ある実施態様において、標的化剤は、ビスモデギブ(エリベッジ(登録商標))、ソニデジブ(オドムゾ(登録商標))、イピリムマブ(ヤーボイ(登録商標))、ベムラフェニブ(ゼルボラフ(登録商標))、トラメチニブ(MEKINIST(登録商標))、ダブラフェニブ(タフィンラー(登録商標))、ペムブロリズマブ(キイトルーダ(登録商標))、ニボルマブ(オプジーボ(登録商標))、コビメチニブ(COTELLICTM)、アリトレチノイン(PANRETIN(登録商標))、アベルマブ(バベンチオ(登録商標))、エンコラフェニブ(ビラフトビTM)、ビニメチニブ(メクトビ(登録商標))またはセミプリマブ－ｒｗｌｃ(LIBTAYO(登録商標))を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、受容体アゴニストまたはリガンド治療と組み合わせる。ある実施態様において、受容体アゴニストまたはリガンド治療は、アゴニスト抗体を含む。ある実施態様において、受容体アゴニストまたはリガンド治療は、受容体リガンド、例えば４－１ＢＢＬまたはＣＤ４０Ｌを含む。
放射線療法
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、放射線療法と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、放射性同位体粒子、例えばインジウムＩｎ－１１１、イットリウムＹ－９０またはヨウ素Ｉ－１３１と組み合わせる。組み合わせ治療の例は、ヨウ素－１３１トシツモマブ(ベキサール(登録商標))、イットリウム－９０イブリツモマブチウキセタン(ゼヴァリン(登録商標))およびベキサール(登録商標)とＣＨＯＰを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、放射線療法は、外照射放射線療法(ＥＢＲＴ)、組織内放射線療法(密封小線源治療)、空洞内放射線療法、間質性密封小線源治療、放射線塞栓療法、少分割放射線療法、術中放射線療法(ＩＯＲＴ)、３Ｄ－原体放射線療法、定位放射線手術(ＳＲＳ)または体幹部定位放射線療法(ＳＢＲＴ)を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、放射線療法と組み合わせる。ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、放射性同位体粒子、例えばインジウムＩｎ－１１１、イットリウムＹ－９０またはヨウ素Ｉ－１３１と組み合わせる。組み合わせ治療の例は、ヨウ素－１３１トシツモマブ(ベキサール(登録商標))、イットリウム－９０イブリツモマブチウキセタン(ゼヴァリン(登録商標))およびベキサール(登録商標)とＣＨＯＰを含むが、これらに限定されない。ある実施態様において、放射線療法は、外照射放射線療法(ＥＢＲＴ)、組織内放射線療法(密封小線源治療)、空洞内放射線療法、間質性密封小線源治療、放射線塞栓療法、少分割放射線療法、術中放射線療法(ＩＯＲＴ)、３Ｄ－原体放射線療法、定位放射線手術(ＳＲＳ)または体幹部定位放射線療法(ＳＢＲＴ)を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、結腸癌、直腸癌または結腸直腸癌(ＣＲＣ)を有すると診断された対象を処置するための１以上の放射線療法と組み合わせる。ある実施態様において、放射線療法は、外照射放射線療法(ＥＢＲＴ)、組織内放射線療法(密封小線源治療)、空洞内放射線療法、間質性密封小線源治療または放射線塞栓療法を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、乳癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の放射線療法と組み合わせる。ある実施態様において、放射線療法は、外照射放射線療法、少分割放射線療法、術中放射線療法(ＩＯＲＴ)または３Ｄ－原体放射線療法を含む。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、黒色腫／皮膚癌を有すると診断された対象を処置するための１以上の放射線療法と組み合わせる。ある実施態様において、放射線療法は、定位放射線手術(ＳＲＳ；例えば、ガンマナイフまたは線形加速器を使用)または体幹部定位放射線療法(ＳＢＲＴ)を含む。
ワクチンおよび腫瘍溶解性ウイルス治療
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、特定の免疫応答、例えば、腫瘍特異的免疫応答を誘発できる、１以上の免疫原性組成物、例えば、ワクチン組成物または腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、特定の免疫応答、例えば、腫瘍特異的免疫応答を誘発できる、１以上の免疫原性組成物、例えば、ワクチン組成物または腫瘍溶解性ウイルスと組み合わせる。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、ワクチン組成物と組み合わせる。ワクチン組成物は、一般に標的とすべき腫瘍に特異的な複数の抗原およびまたはネオ抗原を含む。ワクチン組成物はワクチンとも称され得る。
ある実施態様において、ワクチン組成物は、さらにアジュバントおよび／または担体を含む。ある実施態様において、ワクチン組成物は、Ｔ細胞にペプチドを提示できる、タンパク質または樹状細胞(ＤＣ)などの抗原提示細胞などの担体を伴う。ある実施態様において、担体は、抗原またはネオ抗原が結合できる、足場構造、例えばポリペプチドまたは多糖である。
一般に、アジュバントは、ワクチン組成物に混ぜることにより、抗原またはネオ抗原に対する免疫応答を増強するかまたは他の点で修飾するあらゆる物質である。所望により、アジュバントは、共有結合性または非共有結合性にコンジュゲートされる。アジュバントが抗原に対する免疫応答を増加する能力は、一般に免疫介在反応の顕著なまたは実質的な増加または疾患症状軽減により顕在化される。例えば、液性免疫の増加は、一般に抗原に対して誘発される抗体の力価増加により顕在化され、Ｔ細胞活性は、一般に細胞増殖または細胞毒性増加またはサイトカイン分泌により顕在化される。アジュバントは、例えば、を、一次液性またはＴｈ応答を一次細胞またはＴｈ応答に変えることにより、免疫応答も変え得る。適当なアジュバントは、1018 ISS、アルム、アルミニウム塩、Ａｍｐｌｉｖａｘ、ＡＳ１５、ＢＣＧ、ＣＰ－８７０，８９３、ＣｐＧ７９０９、ＣｙａＡ、ｄＳＬＩＭ、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＣ３０、ＩＣ３１、イミキモド、ＩｍｕＦａｃｔ ＩＭＰ３２１、ＩＳパッチ、ＩＳＳ、ＩＳＣＯマトリクス、ＪｕｖＩｍｍｕｎｅ、ＬｉｐｏＶａｃ、ＭＦ５９、モノホスホリルリピドＡ、モンタナイドＩＭＳ １３１２、モンタナイドＩＳＡ ２０６、モンタナイドＩＳＡ ５０Ｖ、モンタナイドＩＳＡ－５１、ＯＫ－４３２、ＯＭ－１７４、ＯＭ－１９７－ＭＰ－ＥＣ、ＯＮＴＡＫ、ＰｅｐＴｅｌベクター系、ＰＬＧ微粒子、レシキモド、ＳＲＬ１７２、ビロソームおよび他のウイルス様粒子、ＹＦ－１７Ｄ、ＶＥＧＦ ｔｒａｐ、Ｒ８４８、ベータ－グルカン、Ｐａｍ３Ｃｙｓ、サポニン由来のＡｑｕｉｌａ'ｓ ＱＳ２１スティミュロン(Aquila Biotech, Worcester, Mass., USA)、マイコバクテリア抽出物および合成細菌細胞壁模倣物および他の専売アジュバント、例えばＲｉｂｉ'ｓ Ｄｅｔｏｘ、ＱｕｉｌまたはＳｕｐｅｒｆｏｓを含むが、これらに限定されない。不完全フロインドまたはＧＭ－ＣＳＦなどのアジュバントは有用である。樹状細胞およびその調製に特異的ないくつかの免疫学的アジュバント(例えば、ＭＦ５９)は先に記載されている(Dupuis M, et al., Cell Immunol. 1998; 186(1):18-27; Allison A C; Dev Biol Stand. 1998; 92:3-11)。サイトカインもまた使用され得る。いくつかのサイトカインは、樹状細胞のリンパ系組織への遊走(例えば、ＴＮＦ－アルファ)、樹状細胞のＴリンパ球のための効率的抗原提示細胞への成熟加速(例えば、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－１およびＩＬ－４)(米国特許５,８４９,５８９、特に引用により全体として本明細書に包含させる)および免疫アジュバントとしての作用(例えば、ＩＬ－１２)に直接関連している(Gabrilovich D I, et al., J Immunother Emphasis Tumor Immunol. 1996 (6):414-418)。ある実施態様において、アジュバントはＣｐＧ免疫刺激性オリゴヌクレオチドを含む。ある実施態様において、アジュバントはＴＬＲアゴニストを含む。
有用なアジュバントの他の例は、化学的に修飾されたＣｐＧｓ(例えばＣｐＲ、Idera)、ポリ(Ｉ：Ｃ)(例えばポリｉ：ＣＩ２Ｕ)、非ＣｐＧ細菌ＤＮＡまたはＲＮＡならびに治療剤および／またはアジュバントとして作用し得る免疫活性小分子および抗体、例えばシクロホスファミド、スニチニブ、ベバシズマブ、セレブレックス、NCX-4016、シルデナフィル、タダラフィル、バルデナフィル、ソラフェニブ、ＸＬ－９９９、ＣＰ－５４７６３２、パゾパニブ、ＺＤ２１７１、ＡＺＤ２１７１、イピリムマブ、トレメリムマブおよびＳＣ５８１７５を含むが、これらに限定されない。アジュバントおよび添加物の量および濃度は、当業者により過度の実験なく容易に決定され得る。さらなるアジュバントは、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(ＧＭ－ＣＳＦ、サルグラモスチム)などのコロニー刺激因子を含む。
ある実施態様において、ワクチン組成物は１を超える異なるアジュバントを含む。ある実施態様において、ワクチン組成物は、上記の何れかを含む何らかのアジュバント物質またはそれらの組み合わせを含む。ワクチンおよびアジュバントを一緒にまたは別々に何らかの適切な順番で投与できることも考慮される。
ある実施態様において、担体(または添加物)は、アジュバントと関係なく存在する。ある実施態様において、担体の機能は、分子量増加、活性または免疫原性増加、安定性付与、生物学的活性増加または血清半減期延長である。ある実施態様において、担体は、Ｔ細胞へのペプチド提示を助ける。ある実施態様において、担体は、当業者に知られるあらゆる適当な担体、例えばタンパク質または抗原提示細胞を含む。担体タンパク質の例は、キーホールリンペットヘモシアニン、トランスフェリン、ウシ血清アルブミン、ヒト血清アルブミン、サイログロブリンまたは卵白アルブミンなどの血清タンパク質、免疫グロブリンまたはインスリンまたはパルミチン酸などのホルモンを含むが、これらに限定されない。ヒトの免疫化のために、担体は、一般にヒトに許容されかつ安全である生理学的に許容される担体である。しかしながら、破傷風トキソイドおよび／またはジフテリアトキソイドは適当な担体である。あるいは、担体はデキストラン、例えばセファロースである。
ある実施態様において、ワクチンは、特異的細胞型または受容体を標的とするよう設計された、ウイルスベクターベースのワクチンプラットフォーム、例えばワクシニア、鶏痘、自己複製アルファウイルス、マラバウイルス、アデノウイルス(例えば、Tatsis et al., Adenoviruses, Molecular Therapy (2004) 10, 616-629参照)または第二、第三またはハイブリッド第二／第三世代レンチウイルスおよびあらゆる世代の組み換えレンチウイルスを含むが、これらに限定されないレンチウイルス(例えば、Hu et al., Immunization Delivered by Lentiviral Vectors for Cancer and Infectious Diseases, Immunol Rev. (2011) 239(1): 45-61, Sakuma et al., Lentiviral vectors: basic to translational, Biochem J. (2012) 443(3):603-18, Cooper et al., Rescue of splicing-mediated intron loss maximizes expression in lentiviral vectors containing the human ubiquitin C promoter, Nucl. Acids Res. (2015) 43 (1): 682-690, Zufferey et al., Self-Inactivating Lentivirus Vector for Safe and Efficient In Vivo Gene Delivery, J. Virol. (1998) 72 (12): 9873-9880参照)を含む。一般に、宿主への導入により、感染細胞は抗原またはネオ抗原を発現し、それによりペプチドに対する宿主免疫(例えば、ＣＴＬ)応答が誘発される。
上記ウイルスベクターベースのワクチンプラットフォームのパッケージング能により、ある実施態様において、ワクチン組成物は、１以上のウイルス－ベクターを含む。ある実施態様において、ウイルス－ベクターは、リンカーにより離されたまたは細胞内区画をターゲティングする１以上の配列が前にある非変異配列が隣接する配列を含む(例えば、Gros et al., Prospective identification of neoantigen-specific lymphocytes in the peripheral blood of melanoma patients, Nat Med. (2016) 22 (4):433-8, Stronen et al., Targeting of cancer neoantigens with donor-derived T cell receptor repertoires, Science. (2016) 352 (6291):1337-41, Lu et al., Efficient identification of mutated cancer antigens recognized by T cells associated with durable tumor regressions, Clin Cancer Res. (2014) 20( 13):3401-10参照)。免疫化プロトコールに有用なワクシニアベクターおよび方法は、例えば、米国特許４,７２２,８４８に記載される。他のベクターはＢＣＧ(カルメット・ゲラン桿菌)である。ＢＣＧベクターは、Stover et al. (Nature 351:456-460 (1991))に記載される。ネオ抗原の治療的投与または免疫化に有用な広範な他のワクチンベクター、例えば、チフス菌ベクターなどは、本明細書の記載から当業者に明らかである。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を腫瘍溶解性ウイルス治療と組み合わせる。一般に、腫瘍溶解性ウイルスは、主に癌細胞に感染し、殺すよう操作されたウイルスである。ある実施態様において、癌細胞を殺す腫瘍溶解性ウイルスに加えて、腫瘍溶解性ウイルスは、癌細胞に対する免疫応答を誘導する。
ある実施態様において、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質治療を、黒色腫／皮膚癌を有すると診断された対象を処置するための腫瘍溶解性ウイルス治療と組み合わせる。ある実施態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、Ｔ－ＶＥＣとも称するタリモジーン・ラハーパレプベック(IMLYGIC(登録商標))を含む。ある実施態様において、ＩＬ－１２のサブユニットを含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を、腫瘍溶解性ウイルス(例えば、タリモジーン・ラハーパレプベック(IMLYGIC(登録商標))またはＴ－ＶＥＣ)と組み合わせて癌(例えば、進行悪性腫瘍)の処置に使用する。
上の記載は、本発明の複数の態様および実施態様を説明する。本特許出願は、これら態様および実施態様の全ての組み合わせおよび順列を特に意図する。
一般的に記載していた本発明は、ここで、単に本発明のある態様および実施態様を説明する目的で包含させ、本発明を限定する意図はない次の実施例を参照してより容易に理解される。
実施例１ － 製造方法
本発明のタンパク質は、一般に組み換えＤＮＡテクノロジーを使用して製造される。ある例示的実施態様において、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット(ヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニット)を含む第一ポリペプチドをコードする第一核酸配列を、第一発現ベクター(ｐＥＴ－ｐＳＵＲＥ－Ｐｕｒｏ)にクローン化した；第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット(ヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニット)を含む第二ポリペプチドをコードする第二核酸配列を第二発現ベクター(ｐＥＴ－ｐＳＵＲＥ－Ｐｕｒｏ)にクローン化した；そして第一および第二発現ベクターを、一緒に宿主細胞に安定にトランスフェクトして、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を産生した。
本発明のタンパク質は、一般に組み換えＤＮＡテクノロジーを使用して製造される。ある例示的実施態様において、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第一サブユニット(ヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニット)を含む第一ポリペプチドをコードする第一核酸配列を、第一発現ベクター(ｐＥＴ－ｐＳＵＲＥ－Ｐｕｒｏ)にクローン化した；第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合した多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニット(ヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニット)を含む第二ポリペプチドをコードする第二核酸配列を第二発現ベクター(ｐＥＴ－ｐＳＵＲＥ－Ｐｕｒｏ)にクローン化した；そして第一および第二発現ベクターを、一緒に宿主細胞に安定にトランスフェクトして、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質を産生した。
第一発現ベクターによりコードされる例示的アミノ酸配列を配列番号２９２に示す。第一発現ベクターは、Ｙ３４９Ｃ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列に融合したヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットを含む第一ポリペプチドをコードした。第一ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を促進するＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗ変異およびエフェクター機能を低減するＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異も含んだ。配列番号２９２において、リーダー配列は斜体で示し、ヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニット配列は下線を引き、変異は太字で示す。
第二発現ベクターからコードされる例示的アミノ酸配列を配列番号２９３に示す。第二発現ベクターは、Ｓ３５４Ｃ変異を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ配列に融合したヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットを含む第二ポリペプチドをコードした。第二ポリペプチドは、ヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔ変異およびエフェクター機能を低減するＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異も含んだ。配列番号２９３で、リーダー配列は斜体で示し、ヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニット配列は下線を引き、変異は太字で示す。
最高タンパク質収率を達成するために、種々の比の第一および第二発現ベクターを探索して、宿主細胞へのトランスフェクションのための最適比を決定する。トランスフェクション後、単一クローンを、限界希釈、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ、顕微鏡検査またはＣｌｏｎｅｐｉｘなどの当分野で知られる方法を使用する、細胞銀行作製のために単離する。
クローンを、タンパク質のバイオリアクター規模拡大および発現維持に適する条件下、培養。タンパク質を、遠心分離、デプス濾過、細胞溶解、均質化、凍結・解凍、親和性精製、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用交換クロマトグラフィーおよび混合モードクロマトグラフィーを含む当分野で知られる方法を使用して、単離および精製する。
実施例２ － ＣＴ２６腫瘍モデルにおけるサイレントＦｃドメインポリペプチドと融合したＩＬ－１２による腫瘍抑制
この実施例は、組み換えマウスＩＬ－１２(ｒｍＩＬ－１２)の２つのＩＬ－１２－Ｆｃ融合構築物がマウス結腸癌モデルにおける腫瘍進行を制御する相対的能力を記載する。この実施例で使用した２つのＩＬ－１２－Ｆｃ融合バリアントは、野生型マウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むｍＩＬ－１２－Ｆｃ野生型(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ)および変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを有するマウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むｍＩＬ－１２－Ｆｃサイレント(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ)であった。タンパク質のアミノ酸配列を以下に示す。
ｍＩＬ－１２－ｐ４０－ｍＩｇＧ2Ａ－ＥＷ(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔの第一鎖)
ｍＩＬ－１２－ｐ３５－ｍＩｇＧ2Ａ－ＲＶＴ(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔの第二鎖)
ｍＩＬ－１２－ｐ４０－ｍＩｇＧ2Ａ－ＥＷ－ＬＡＬＡＰＧ(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの第一鎖)
ｍＩＬ－１２－ｐ３５－ｍＩｇＧ2Ａ－ＲＶＴ－ＬＡＬＡＰＧ(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの第二鎖)
この実施例は、組み換えマウスＩＬ－１２(ｒｍＩＬ－１２)の２つのＩＬ－１２－Ｆｃ融合構築物がマウス結腸癌モデルにおける腫瘍進行を制御する相対的能力を記載する。この実施例で使用した２つのＩＬ－１２－Ｆｃ融合バリアントは、野生型マウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むｍＩＬ－１２－Ｆｃ野生型(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ)および変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを有するマウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むｍＩＬ－１２－Ｆｃサイレント(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ)であった。タンパク質のアミノ酸配列を以下に示す。
ｍＩＬ－１２－ｐ４０－ｍＩｇＧ2Ａ－ＥＷ(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔの第一鎖)
簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が２７０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、１μgのｒｍＩＬ－１２、１μg ｒｍＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ、１μg ｒｍＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で週１回腹腔内処置した。腫瘍増殖を６０日間評価した。
図５Ａ～５Ｃに示すとおり、ＩＬ－１２(図５Ａ)およびＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ(図５Ｂ)は一部マウスで腫瘍進行を効率的に制御したが、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉのみが頑強な腫瘍退縮を誘導し、１００％完全腫瘍退縮をもたらした(図５Ｃ)。さらに、全生存はＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ治療での処置により有意に延長され － 処置マウスの１００％が６０日目になお生存し、一方アイソタイプ対照、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＩＬ－１２で処置されたマウスの中央生存期間はそれぞれ２７日、３３日および４６日であった(図６)。
次に、種々の用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腫瘍進行制御を比較した。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が３００mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、１μgに相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔまたは０.１μg ｒｍＩＬ－１２または１μgに相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは０.１μg ＩＬ－１２で週１回腹腔内処置した。腫瘍増殖を５５日間評価した。
図７Ａ～７Ｄに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔでの処置は、１μg ｒｍＩＬ－１２モル当量用量で一部マウスで腫瘍進行を低減させ、２マウスで完全退縮させたが(図７Ａ)、０.１μg ＩＬ－１２モル当量用量で腫瘍抑制は観察されなかった(図７Ｃ)。対照的に、１μg ＩＬ－１２モル当量用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置は１００％完全腫瘍退縮をもたらし(図７Ｂ)、低用量の０.１μg ＩＬ－１２モル等量で腫瘍増殖の頑強な遅延を誘導した(図７Ｄ)。１μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔで処置したマウスの中央生存は３２日であり、０.１μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置したマウスの３４日の中央生存に類似し、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉがその野生型バリアントより１０倍強力であったことを示唆する(図８)。ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔは０.１μg ＩＬ－１２モル等量用量で効率的ではなく、アイソタイプ処置群と同じ２４日の中央生存を示した。
次に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの種々の投与経路のインビボ有効性を比較した。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が２７０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはモル当量のｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で週１回腹腔内または皮下処置した。腫瘍増殖を６０日間にわたり評価した。
図２２Ａ－２２Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腹腔内(図２２Ａ)および皮下(図２２Ｂ)投与何れも頑強な腫瘍退縮を誘導し、１００％完全腫瘍退縮をもたらした。故に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置は、種々の投与経路を使用して有効性が示された。
実施例３ － Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおけるサイレントＦｃドメインポリペプチドに融合したＩＬ－１２による腫瘍抑制
この実施例は、マウス黒色腫モデルにおけるＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが腫瘍進行を制御する相対的能力を記載する。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後８日目、腫瘍体積が２５０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０)に無作為化し、週１回０.５μgのＩＬ－１２、０.５μg ＩＬ－１２に対応するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ、０.５μg ＩＬ－１２に対応するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは０.５μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で処置した。腫瘍増殖を３２日間評価した。
この実施例は、マウス黒色腫モデルにおけるＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが腫瘍進行を制御する相対的能力を記載する。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後８日目、腫瘍体積が２５０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０)に無作為化し、週１回０.５μgのＩＬ－１２、０.５μg ＩＬ－１２に対応するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔ、０.５μg ＩＬ－１２に対応するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは０.５μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で処置した。腫瘍増殖を３２日間評価した。
図９Ａ～９Ｃに示すとおり、試験したＩＬ－１２－Ｆｃ構築物の各々は腫瘍進行を遅延させたが、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは腫瘍増殖制御に最も効率的であった。ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置したマウスの中央生存期間は２９日であり、それぞれ１６日、２６日および２２日であったアイソタイプ対照、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＩＬ－１２で処置されたマウスの中央生存期間より長かった(図１０)。
次に、種々の用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腫瘍進行制御を比較した。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脇腹に１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後８日目、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、０.５μgまたは０.１μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔまたは０.５μgまたは０.１μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで週１回腹腔内処置した。腫瘍増殖を３０日間評価した。
図１１Ａ～１１Ｄに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、何れの用量でも、腫瘍増殖抑制がＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔより優れた。さらに、各用量で、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔで処置したマウスの中央生存は２０日であった。対照的に、０.１μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置したマウスの中央生存は２１日であり、０.５μg ＩＬ－１２モル当量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置したマウスの中央生存は２８日であった(図１２)。これらの結果は、高用量(０.５μg ＩＬ－１２モル等量)のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、その野生型対応物またはアイソタイプ対照と比較して、マウスの生存を有意に延長させたことを示した。
次に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置の単回投与を、先に記載した毎週処置と比較した。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後８日目、腫瘍体積が２００mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０)に無作為化し、週１回０.５μg ＩＬ－１２に対応するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはモル当量のｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で処置した。腫瘍増殖を３９日間評価した。
図２３に示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与は１００％のマウスで腫瘍増殖を低減させたが、腫瘍増殖は、毎週投与と比較して早く起こった(図９Ｃ)。さらに、マウスは一過性体重減少を示したが、初回投与後のみであった(データは示していない)。従って、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与は治療困難腫瘍モデルで初期有効性を示したが、続く毎週投与がこのモデルでは良好に腫瘍増殖を遅延させる。
次に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの種々の投与経路のインビボ有効性を比較した。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目、腫瘍体積が２６０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０)に無作為化し、１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはモル当量のｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で週１回腹腔内または皮下処置した。腫瘍増殖を４０日間評価した。
図２４Ａ～２４Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腹腔内(図２４Ａ)および皮下(図２４Ｂ)投与は、何れも１００％のマウスで腫瘍退縮を誘導した。故に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置は、種々の投与経路を使用して有効性が示された。
実施例４ － ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｗｔおよびｒｈＩＬ－１２のインビトロ有効性
インビトロバイオアッセイを使用して、ｒｈＩＬ－１２と比較したＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの有効性を評価した。
インビトロバイオアッセイを使用して、ｒｈＩＬ－１２と比較したＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの有効性を評価した。
ＩＬ－１２の有効性をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ ＩＬ－１２レポーターアッセイを使用してアッセイした。ＩＬ－１２Ｒ＋ ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーター細胞(InvivoGen)を培養培地から集め、培養培地で１×１０６細胞／mLに調節した。ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(ＤＦ ＩＬ－１２－Ｆｃ)および組み換えヒトＩＬ－１２(ｒｈＩＬ－１２； ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ)を培地で希釈した。１００μLのＰＢＭＣ懸濁液を１００μLの希釈試験品と混合し、４８時間インキュベートした。上清を集め、ＩＬ－１２受容体とレポーター細胞により安定に発現されるシグナル伝達成分の結合を、製造業者の指示に従い細胞から分泌される胚アルカリホスファターゼの測定により検出した。簡潔には、２５μLのサンプル上清を２００μLのＱＵ抗Ｂｌｕｅ試薬と混合し、暗所でＲＴで１０分間インキュベートした。次いでプレートをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘプレートリーダーで６２０nMで読み、光学密度を相対的ＩＬ－１２活性を表すものとして報告した。
図１３Ａに示すとおり、ＩＬ－１２Ｒ＋ ＨＥＫレポーター細胞によるＳＥＡＰ産生は、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｒｈＩＬ－１２の濃度の増加と共に増えた。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅレポーターアッセイにおいて測定されたＩＬ－１２応は、試験した濃度でＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２で同等であった。
次に、ＩＬ－１２有効性を、ヒトＰＢＭＣからのＩＦＮγ産生の定量により評価した。ＰＢＭＣを、ヒト末梢血バフィーコートから密度勾配遠心分離を使用して単離し、培養培地で１×１０６細胞／mLに調節した。ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよび組み換えヒトＩＬ－１２(ｒｈＩＬ－１２)を培地で希釈した。１００μLのＰＢＭＣ懸濁液を１００μLの希釈試験品と混合し、４８時間インキュベートした。上清を集め、ＩＦＮγを、ヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ ＭＡＸキット(BioLegend)を使用して定量した。ＩＦＮγ ＥＬＩＳＡプレート展開後、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉ３ｘ装置で４５０nmで読み、５４０nmでバックグラウンド減算した。サンプルウェルのＩＦＮγ含量を、アッセイ標準曲線からサンプル読取り値を内挿することにより近似させた。
図１３Ｂに示すとおり、ＩＦＮγ産生は、ＩＦＮγ応答強度を増幅させるための５μg／mlのＰＨＡとの同時処置で、ヒトＰＢＭＣをＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｒｈＩＬ－１２と培養したとき増加した。ＩＬ－１２刺激後ＩＦＮ－γ産生は、試験した濃度でＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２で同等であった。
従って、２つの細胞型および刺激条件でのＥＣ５０値は１桁以上違うが、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２の同等な活性が両アッセイで示され、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ構築物が天然組み換えヒトＩＬ－１２に類似する有効性を示すことが示唆される。
実施例５ － ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｒｈＩＬ－１２ＩＶ点滴後のサル血漿におけるＩＬ－１２、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＩＦＮγ濃度
薬力学(ＰＤ)および薬物動態(ＰＫ)を、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｒｈＩＬ－１２のＩＶ点滴後カニクイザルで評価した。
薬力学(ＰＤ)および薬物動態(ＰＫ)を、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｒｈＩＬ－１２のＩＶ点滴後カニクイザルで評価した。
カニクイザルに、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよび組み換えヒトＩＬ－１２を１０μg／kgでＩＶ点滴で投与した。
免疫アッセイを、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡヒトＩＬ－１２ ｐ７０免疫アッセイキットに基づくＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびヒトＩＬ－１２の検出に使用した：このアッセイは定量的サンドイッチ酵素免疫アッセイ技術を用いた。ヒトＩＬ－１２ ｐ７０に特異的なモノクローナル抗体を固相キャプチャーとして使用し、検出を抗体ＨＲＰタグ付レポーターを使用して達成した。標準およびＲｈＩＬ－１２またはＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ対照標準添加ＱＣを、試験サンプルと共にマイクロタイタープレートのウェルにピペットで加え、サンプルに存在するすべてのＩＬ－１２ ｐ７０を、固相の固定化抗体に結合させた。非結合物質を洗い流し、ヒトＩＬ－１２ ｐ７０に特異的な酵素架橋ポリクローナル抗体をウェルに加えた。非結合抗体－酵素試薬を洗い流し、ＴＭＢ基質を各ウェルに加えた。得られた酵素反応は青色生成物を生じ、酸停止溶液を加えたとき黄色になった。各ウェルで測定された色の強度は、初期段階で結合したｒｈＩＬ－１２またはＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの量に直接比例する。プレートを、データ収集ソフトウェア、SoftMax Pro Enterprise version 4.6と共に、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘマイクロプレートリーダーで５４０nmを対照として４５０nmで読んだ。データをテキストファイルに変換し、Watson LIMS v.7.2.0.02にインポート／処理した。Logistic(Auto Estimate)曲線フィッティングを重み係数１で使用して、回帰を実施した。
未処置ＭＳＤマイクロタイタープレートのサル吸着ヤギ抗ヒトＩｇＧでのコーティングと室温でのインキュベートを含む、免疫アッセイ(メソスケールディスカバリー(ＭＳＤ) － ＥＬＩＳＡ様免疫アッセイ)もＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの検出に使用した。プレートを洗浄し、遮断し、洗浄し、試験サンプルと共にＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ対照標準を添加した標準曲線および品質管理サンプルとインキュベートした。このインキュベーション後、プレートを洗浄し、ビオチン抗ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０を一次検出抗体としてプレートに加えた。さらなる洗浄工程後、ストレプトアビジンコンジュゲートSULFO-TAGを二次検出抗体として加えた。プレートを最後に洗浄し、ＭＳＤ Ｒｅａｄ緩衝液Ｔをプレートに加え、プレートをMSD Sector Imager S600を使用して読んだ。生ＭＳＤデータをテキストファイルにエクスポートし、次いでEnvigoでカスタム設計したＥｘｃｅｌスプレッドシートプログラムを使用してWatson LIMS互換性ファイルに変換した。データをインポートし、Watson LIMS Software v.7.2.0.02で回帰させた。
メソスケールディスカバリー方法を、カニクイザル血漿におけるＮＨＰ炎症促進性バイオマーカーの相対的定量的測定のために使用した。方法は、カニクイザルＫ２ ＥＤＴＡ血漿(サル血漿と称する)のPro-inflammatory Panel 1 BiomarkerＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６ ＩＬ－８およびＩＬ－１０の相対的定量的測定のサンドイッチ免疫アッセイ方法を使用した。方法は、Ｖ－ＰＬＥＸおよびＶ－ＰＬＥＸ Ｐｌｕｓ、Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ. Ｋ１５０５６Ｄ－１、Ｋ１５０５６Ｄ－２、Ｋ１５０５６Ｄ－４、Ｋ１５０５６Ｄ－６、Ｋ１５０５６Ｇ－１、Ｋ１５０５６Ｇ－２、Ｋ１５０５６Ｇ－４、Ｋ１５０５６Ｇ－６のＭＳＤ非ヒト霊長類(ＮＨＰ)キットに基づく。方法は、ヒトキャプチャーおよびカニクイザルと反応する検出抗体を使用する。キットは、９６ウェル多スポットプレートの各ウェルに独立した十分定義されたスポットのキャプチャー抗体でプレコートされたプレートを提供する。プレートをサル血漿サンプルとインキュベートし、洗浄し、次いで電気化学発光(ＥＣＬ)ラベル(ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ)とコンジュゲートした検出抗体(各検体特異的)とインキュベートした。サンプル中の検体は作動中の電極表面に固定化したキャプチャー抗体に結合させ、結合検体による検出抗体の動員がサンドイッチを完成させる。プレートを洗浄し、MSD Read緩衝液を、電気化学発光(ＥＣＬ)に適切な化学環境を作るため加えた。プレートを、MSD Sector Imager 600(ＳＩ６００)装置に充填し、そこで、電圧をプレート電極に適用し、捕捉ラベルを発光させた。装置は、相対的光単位(ＲＬＵ)の観点で発光強度を測定し、サンプル中の検体の相対的定量的測定を提供する。生ＲＬＵデータをテキストファイルにエクスポートし、次いでEnvigoでカスタム設計したＥｘｃｅｌスプレッドシートプログラムを使用してWatson LIMS互換性ファイルに変換した。データをその後インポートし、Watson LIMS Software v.7.2.0.02で回帰させた。
図１４は、ＩＶ投与後経時的なＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよび組み換えヒトＩＬ－１２の相対的血漿濃度を示す。データは、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２の濃度が、予想どおり経時的に減少することを示した。しかしながら、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは長い半減期を示し、全体的に時間経過に伴う曝露量がｒｈＩＬ－１２と比較して全体的に多かった。
図１４はまたＩＶ投与後のサル血漿のＩＦＮγの相対的濃度(ＰＤ)を示す。データは、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２の薬力学は、ＩＦＮγ産生により評価して、何れもＩＶ投与後活性を示したことを示す。しかしながら、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、ｒｈＩＬ－１２と比較して高いピーク活性および長い持続を示した。
実施例６ － マウスサロゲートＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの薬理学的特徴づけ
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉと名付けた半減期が長いマウスＩＬ－１２バリアントの血清半減期およびインビボ薬力学を試験した。
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉと名付けた半減期が長いマウスＩＬ－１２バリアントの血清半減期およびインビボ薬力学を試験した。
１μg ＩＬ－１２に対応する当モル量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを非腫瘍担持Ｂａｌｂ／ｃマウスに静脈内注射し、ＰＫ／ＰＤ特徴をＩＬ－１２と比較した。ナイーブＢａｌｂ／ｃ(ｎ＝６)に、１μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＩＬ－１２(１μg ＩＬ－１２に相当するモル)を静脈内注射した。注射０.０１７時間、０.５時間、３時間、６時間、２４時間、４８時間、７２時間、９６時間、１４４時間および２１９時間後、採血した。血清のＩＬ－１２およびＩＦＮγレベルを、先に記載のとおりＥＬＩＳＡにより分析した。
図１５Ａおよび１５Ｂに示し、表１５に定量化するとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは約３０時間の長期化血清半減期を示し(図１５Ｂ、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ Ｔ１／２＝２９.８５時間)、これはＩＬ－１２の５倍長かった(図１５Ａ；ＩＬ－１２ Ｔ１／２＝６.０５時間)。半減期延長に加えて、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ介在ＩＦＮγ産生(ＡＵＣ＝９１６６５４)もＩＬ－１２(ＡＵＣ＝２０３０４と比較して長かった)。
次に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの種々の投与経路のＰＫ／ＰＤ性質を比較した。１μg ＩＬ－１２に対応する当モル量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを、静脈内、腹腔内または皮下投与により非腫瘍担持Ｂａｌｂ／ｃマウスに単回用量として注射し、ＰＫ／ＰＤ特徴を記載のとおり評価した。
図１５Ｃ～１５Ｅに示し、表１６に定量化するとおり、静脈内(図１５Ｃ)、腹腔内(図１５Ｄ)または皮下(図１５Ｅ)投与は、種々の投与経路にわたり同等なＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ介在ＩＦＮγ産生をもたらした。顕著なことに、皮下投与は低いＩＬ－１２ Ｃｍａｘをもたらした。従って、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与の薬物動態(例えば、ＩＬ－１２濃度)は投与経路により変わったが、薬力学的性質(ＩＦＮγ産生)は長期化されたままであり、異なる経路にわたり比較的同等であった。
実施例７ － Ｂ１６Ｆ１０マウスモデルにおけるＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＰＤ－１遮断の組み合わせ
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＰＤ－１遮断の組み合わせ治療を確立されたＢ１６Ｆ１０腫瘍で抗腫瘍免疫応答が増幅され得るか分析するために、実施した。
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＰＤ－１遮断の組み合わせ治療を確立されたＢ１６Ｆ１０腫瘍で抗腫瘍免疫応答が増幅され得るか分析するために、実施した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞をマウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍接種後８日目、マウスを無作為化した(ｎ＝１０／群)。平均腫瘍体積が約２４５mm３に達したら、マウスを０.５μgアイソタイプ対照、０.５μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ、２００μg抗ＰＤ－１クローンＲＭＰ１－１４または組み合わせＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ／抗ＰＤ－１で腹腔内処置した。動物にＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを週１回および抗ＰＤ－１を週２回注射した。腫瘍増殖を６０日間評価し、生存および体重をモニターした。
図１６Ａ～１６Ｃに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単独投与は腫瘍退縮を遅らせ(図１６Ａ)、ＰＤ－１単独は腫瘍増殖に最小効果を有するが(図１６Ｂ)、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉとＰＤ－１遮断の組み合わせは腫瘍増殖をさらに遅延させ(図１６Ｃ)、抗ＰＤ－１処置がＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置への抗腫瘍応答をさらに増幅したことが示唆された。
図１７Ａおよび１７Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ治療およびＰＤ－１遮断との組み合わせでの全生存は延長され、アイソタイプの１５日および２００μg抗ＰＤ－１処置マウスの１７.５日(図１７Ａ)と比較して、２９日(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単剤療法)および３６日(組み合わせ)の中央生存を示した。顕著なことに、高い応答率にかかわらず、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよび組み合わせ治療のレジメンは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍担持マウスにより忍容性が良好であると考えられた(図１７Ｂ)。
従って、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＰＤ－１遮断の組み合わせ治療は、何れか処置単独と比較して有効性の改善を示した。
実施例８ － Ｂ１６Ｆ１０マウスモデルにおけるＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉとｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９ ＴｒｉＮＫＥＴの組み合わせ
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉとｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９ ＴｒｉＮＫＥＴの組み合わせ治療を確立されたＢ１６Ｆ１０腫瘍で抗腫瘍免疫応答が増幅され得るか分析するために、実施した。
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉとｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９ ＴｒｉＮＫＥＴの組み合わせ治療を確立されたＢ１６Ｆ１０腫瘍で抗腫瘍免疫応答が増幅され得るか分析するために、実施した。
Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、マウスの脇腹に１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目マウスを無作為化した(ｎ＝１０／群)。腫瘍平均が２００mm３に達したら、マウスを１５０μgアイソタイプ対照または０.５μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ、１５０μg ＴｒｉＮＫＥＴまたは組み合わせＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ／ＴｒｉＮＫＥＴで腹腔内処置した。腫瘍増殖を６０日間評価し、生存および体重をモニターした。
図１８Ａに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単剤療法は、腫瘍増殖を低減させた。２００mm３の腫瘍体積で開始するｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９ ＴｒｉＮＫＥＴの単剤としての処置は、腫瘍進行を遅延させなかった(図１８Ｂ)。対照的に、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉとｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９の組み合わせは、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単独(図１８Ｃ)と比較してさらに抗腫瘍応答を増強し、３０％の完全応答体(ＣＲ)(ｎ＝３)をもたらし、ＴｒｉＮＫＥＴ処置がＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置への抗腫瘍応答をさらに増幅したことが示唆された。
図１９Ａに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ治療およびｍｃＦＡＥ－Ｃ２６.９９ ＴｒｉＮＫＥＴとの組み合わせでの全生存は延長され、アイソタイプの１６日およびＴｒｉＮＫＥＴ処置マウスの１７日と比較して、２９日(ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単剤療法)および６０日(ＴｒｉＮＫＥＴ組み合わせ)の中央生存を示した。顕著なことに、高い応答率にかかわらず、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよび組み合わせ治療のレジメンは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍担持マウスにより忍容性が良好であると考えられた(図１９Ｂ)。
３完全応答体(上記実験からのＣＲおよびデータは図１８Ｃに示す)を、最初の腫瘍接種７２日後、２×１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞で再負荷した。齢適合ナイーブＣ５７ＢＬ／６マウスを対照群として使用した。初期ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ／ＴｒｉＮＫＥＴコンボ処置群からの３マウス中１は無腫瘍のままであり、他のマウスは、９５日目に腫瘍形成の開示が示され、第三のマウスの腫瘍進行は年齢適合対照群に類似し(図２０)、組み合わせ治療での免疫学的記憶の形成が示唆された。
従って、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびＴｒｉＮＫＥＴの組み合わせ治療は、マウス集団における、完全、持続性応答を示したことを含み、何れかの処置単独と比較して、有効性の改善を示した。
実施例９ － ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉでの処置は、ＣＴ２６腫瘍における完全回復を促進する
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉでの処置がＣＴ２６腫瘍担持マウスにおける回復を促進することを示す。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉでの処置がＣＴ２６腫瘍担持マウスにおける回復を促進することを示す。
Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に、１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が２７０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群に無作為化し、週１回１μgの１μg ｒｍＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を腹腔内注射した。腫瘍増殖を６０日間評価した。完全応答体を、最初の腫瘍接種７２日後、１０６ ＣＴ２６細胞で再負荷した。年齢適合ナイーブＢａｌｂ／Ｃマウスを対照群として使用した。
図２１Ａは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを単回投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図２１Ｂは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを毎週投与されたマウスの体重を示すグラフである。図２１Ｃは、ＣＴ２６腫瘍細胞の接種で再負荷された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図２１Ａ～Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与は、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプと比較して強固な腫瘍退縮をもたらし、処置動物の体重に影響する毒性は観察されなかった。図２１Ｃに示すとおり、初期ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置マウスは無腫瘍のままであり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置による免疫学的記憶の形成が示唆された。
実施例１０ － 腹腔内または皮下送達したＤＦ ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、ＣＴ２６腫瘍モデルにおける腫瘍体積の低減に有効である
この実施例は、腹腔内または皮下ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与がＣＴ２６腫瘍担持マウスにおける１００％完全回復を確実にすることを示す。
この実施例は、腹腔内または皮下ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与がＣＴ２６腫瘍担持マウスにおける１００％完全回復を確実にすることを示す。
簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が２７０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群に無作為化し、週１回１μgの１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を腹腔内注射するかまたは週１回１μgの１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を皮下注射した。腫瘍増殖を６０日を超えて評価した。
図２２Ａは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを腹腔内送達により毎週投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図２２Ｂは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを皮下送達により毎週投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図２２Ａ～Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腹腔内または皮下送達は、ＣＴ２６腫瘍体積低減に有効であった。
実施例１１ － ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回投与はＢ１６Ｆ１０マウスモデルにおける腫瘍体積低減に有効である
この実施例は、ＤＦ－ｍＩ１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与がＢ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍担持マウスの腫瘍体積低減に有効であることを示す。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩ１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与がＢ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍担持マウスの腫瘍体積低減に有効であることを示す。
簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、マウスの脇腹に１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目マウスを無作為化した。腫瘍平均が２００mm３に達したら、マウスを単回用量アイソタイプ対照または１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで腹腔内処置した。腫瘍増殖を５０日間評価した。
図２３に示すとおり、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与は、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍担持マウスの腫瘍体積低減に有効である。
実施例１２ － 腹腔内または皮下送達されたＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉはＢ１６Ｆ１０マウスモデルにおける腫瘍体積低減に有効である
この実施例は、腹腔内または皮下ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与が、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍担持マウスにおける１００％完全回復をもたらすことを示す。
この実施例は、腹腔内または皮下ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与が、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍担持マウスにおける１００％完全回復をもたらすことを示す。
簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの脇腹に１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目、マウスを無作為化した。腫瘍平均が２００mm３に達したら、マウスに週１回１μgの１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を腹腔内注射するかまたは週１回１μgの１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を皮下注射した。腫瘍増殖を４０日間評価した。
図２４Ａ～Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの腹腔内または皮下送達は、アイソタイプ対照と比較してＢ１６Ｆ１０腫瘍体積低減に有効であった。
実施例１３ － ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは単回投与として効果的である
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが単回投与したときＣＴ２６腫瘍体積低減に有効であるおよび反復投与したとき、さらにより有効であることを示す。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが単回投与したときＣＴ２６腫瘍体積低減に有効であるおよび反復投与したとき、さらにより有効であることを示す。
簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスの脇腹に１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１４日目、腫瘍体積が２７０mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、０.１μg ＩＬ－１２に相当するモル等量の１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを単回または１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を週１回腹腔内注射した。あるいは、マウスに週１回１μgの１μg ＩＬ－１２に相当するモル用量のＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたは１μgのｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照を腹腔内注射した。腫瘍増殖を６０日を超えて評価した。
図２５Ａは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを単回投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図２５Ｂは、ＣＴ２６腫瘍細胞を接種され、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプを毎週投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図２１Ａおよび図２５Ａに示すとおり、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与は、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプと比較して、腫瘍担持マウスの強力な７０％完全回復をもたらした。しかしながら、図５Ｃおよび図２５Ｂに示すとおり、１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの反復毎週投与は、ｍＩｇＧ２ａアイソタイプと比較して、腫瘍担持マウスの１００％完全回復を確実にした。図２１Ｂに示すとおり、全反復ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与は、体重により評価して、観察される毒性はなく、忍容性が良好であった。
さらに、完全応答体(ＣＲ)の逆の脇腹に５×１０５ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を再負荷し、腫瘍進行を、同じ腫瘍用量を負荷されたナイーブマウスと比較した。図２１Ｃに示すとおり、再負荷後、ナイーブマウスで腫瘍は増殖したが、１００％の完全応答体は無腫瘍のままであった。従って、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの単回投与は、マウス集団で完全、持続性応答を示した。
実施例１４ － ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回皮下投与で処置したカニクイザルにおける薬物動態
カニクイザルにおいて１μg／kg(図２８Ａ)、２μg／kg(図２８Ｂ)または４μg／kg(図２８Ｃ)のＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを皮下注射後、ＥＬＩＳＡ様免疫アッセイ－メソスケールディスカバリー(ＭＳＤ)免疫アッセイ方法を使用して薬物動態を決定した。簡潔には、未処置ＭＳＤマイクロタイタープレートをサル吸着ヤギ抗ヒトＩｇＧで被覆し、室温でインキュベートした。コーティングおよびインキュベーション後、プレートを洗浄し、遮断し、洗浄し、試験サンプルと共に、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ対照標準を添加した標準曲線および品質管理サンプルとインキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄し、ビオチン抗ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０を一次検出抗体としてプレートに加えた。さらなる洗浄工程後、ストレプトアビジンコンジュゲートSULFO-TAGを二次検出抗体として加えた。プレートを最後の洗浄をして、その後MSD read buffer Tをプレートに加えた。プレートをMSD Sector Imager S6000を使用して読んだ。
カニクイザルにおいて１μg／kg(図２８Ａ)、２μg／kg(図２８Ｂ)または４μg／kg(図２８Ｃ)のＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを皮下注射後、ＥＬＩＳＡ様免疫アッセイ－メソスケールディスカバリー(ＭＳＤ)免疫アッセイ方法を使用して薬物動態を決定した。簡潔には、未処置ＭＳＤマイクロタイタープレートをサル吸着ヤギ抗ヒトＩｇＧで被覆し、室温でインキュベートした。コーティングおよびインキュベーション後、プレートを洗浄し、遮断し、洗浄し、試験サンプルと共に、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ対照標準を添加した標準曲線および品質管理サンプルとインキュベートした。インキュベーション後、プレートを洗浄し、ビオチン抗ヒトＩＬ－１２／ＩＬ－２３ ｐ４０を一次検出抗体としてプレートに加えた。さらなる洗浄工程後、ストレプトアビジンコンジュゲートSULFO-TAGを二次検出抗体として加えた。プレートを最後の洗浄をして、その後MSD read buffer Tをプレートに加えた。プレートをMSD Sector Imager S6000を使用して読んだ。
図２８Ａ～２８Ｃは、１μg／kg(図２８Ａ)、２μg／kg(図２８Ｂ)または４μg／kg(図２８Ｃ)のＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回皮下投与で処置されたカニクイザルにおける薬物動態を示す線グラフである。
データは、全試験用量で類似する薬物動態プロファイルで、ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉおよびｒｈＩＬ－１２の濃度が、予想どおり経時的に減少することを示す。
実施例１５ － ＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回皮下投与で処置されたカニクイザルにおけるサイトカイン放出
カニクイザルにおける１μg／kg(図２９Ａおよび２９Ｂ)、２μg／kg(図２９Ｃおよび２９Ｄ)または４μg／kg(図２９Ｅおよび２９Ｆ)でのＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ皮下注射後のサイトカインの定量的測定を、ＭＳＤ免疫アッセイキットを使用して決定した。方法は、カニクイザルＫ２ ＥＤＴＡ血漿(サル血漿と称する)におけるPro-inflammatory Panel 1 BiomarkerであるＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６ ＩＬ－８およびＩＬ－１０の相対的定量的測定のために、サンドイッチ免疫アッセイキット(Pro-inflammatory Panel 1 BiomarkerおよびV-PLEX Plus Chemokine Panel 1 NHP Kit)を使用した。方法は、Ｖ－ＰＬＥＸおよびＶ－ＰＬＥＸ Ｐｌｕｓ、Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ. Ｋ１５０５６Ｄ－１、Ｋ１５０５６Ｄ－２、Ｋ１５０５６Ｄ－４、Ｋ１５０５６Ｄ－６、Ｋ１５０５６Ｇ－１、Ｋ１５０５６Ｇ－２、Ｋ１５０５６Ｇ－４、Ｋ１５０５６Ｇ－６のＭＳＤ非ヒト霊長類(ＮＨＰ)キットに基づく。方法は、カニクイザルと反応するヒトキャプチャーおよび検出抗体を使用する。キットは、９６ウェル多スポットプレートの各ウェル内の、独立した、十分定義されたスポット上にキャプチャー抗体でプレコートされたプレートを提供する。プレートをサル血漿サンプルとインキュベートし、洗浄し、次いで電気化学発光(ＥＣＬ)ラベル(ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ)とコンジュゲートした検出抗体(各検体特異的)とインキュベートした。サンプル中の検体は作動電極表面に固定化したキャプチャー抗体に結合する；結合検体による検出抗体の動員がサンドイッチを完成させる。プレートを洗浄し、ＭＳＤ Ｒｅａｄ緩衝液を、電気化学発光(ＥＣＬ)に適切な化学環境を作るため加えた。プレートを、MSD Sector Imager 600(ＳＩ６００)装置に装着し、そこで、電圧をプレート電極に適用し、捕捉ラベルを発光させた。装置は、相対的光単位(ＲＬＵ)の観点で発光強度を測定し、サンプル中の検体の相対的定量的測定を提供する。生ＲＬＵデータをテキストファイルにエクスポートし、次いでEnvigoでカスタム設計したＥｘｃｅｌスプレッドシートプログラムを使用してWatson LIMS互換性ファイルに変換した。データをその後インポートし、Watson LIMS Software v.7.2.0.02で回帰させた。
カニクイザルにおける１μg／kg(図２９Ａおよび２９Ｂ)、２μg／kg(図２９Ｃおよび２９Ｄ)または４μg／kg(図２９Ｅおよび２９Ｆ)でのＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ皮下注射後のサイトカインの定量的測定を、ＭＳＤ免疫アッセイキットを使用して決定した。方法は、カニクイザルＫ２ ＥＤＴＡ血漿(サル血漿と称する)におけるPro-inflammatory Panel 1 BiomarkerであるＩＦＮγ、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６ ＩＬ－８およびＩＬ－１０の相対的定量的測定のために、サンドイッチ免疫アッセイキット(Pro-inflammatory Panel 1 BiomarkerおよびV-PLEX Plus Chemokine Panel 1 NHP Kit)を使用した。方法は、Ｖ－ＰＬＥＸおよびＶ－ＰＬＥＸ Ｐｌｕｓ、Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ. Ｋ１５０５６Ｄ－１、Ｋ１５０５６Ｄ－２、Ｋ１５０５６Ｄ－４、Ｋ１５０５６Ｄ－６、Ｋ１５０５６Ｇ－１、Ｋ１５０５６Ｇ－２、Ｋ１５０５６Ｇ－４、Ｋ１５０５６Ｇ－６のＭＳＤ非ヒト霊長類(ＮＨＰ)キットに基づく。方法は、カニクイザルと反応するヒトキャプチャーおよび検出抗体を使用する。キットは、９６ウェル多スポットプレートの各ウェル内の、独立した、十分定義されたスポット上にキャプチャー抗体でプレコートされたプレートを提供する。プレートをサル血漿サンプルとインキュベートし、洗浄し、次いで電気化学発光(ＥＣＬ)ラベル(ＭＳＤ ＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ)とコンジュゲートした検出抗体(各検体特異的)とインキュベートした。サンプル中の検体は作動電極表面に固定化したキャプチャー抗体に結合する；結合検体による検出抗体の動員がサンドイッチを完成させる。プレートを洗浄し、ＭＳＤ Ｒｅａｄ緩衝液を、電気化学発光(ＥＣＬ)に適切な化学環境を作るため加えた。プレートを、MSD Sector Imager 600(ＳＩ６００)装置に装着し、そこで、電圧をプレート電極に適用し、捕捉ラベルを発光させた。装置は、相対的光単位(ＲＬＵ)の観点で発光強度を測定し、サンプル中の検体の相対的定量的測定を提供する。生ＲＬＵデータをテキストファイルにエクスポートし、次いでEnvigoでカスタム設計したＥｘｃｅｌスプレッドシートプログラムを使用してWatson LIMS互換性ファイルに変換した。データをその後インポートし、Watson LIMS Software v.7.2.0.02で回帰させた。
図２９Ａ～２９Ｆは、１μg／kg(図２９Ａおよび２９Ｂ)、２μg／kg(図２９Ｃおよび２９Ｄ)または４μg／kg(図２９Ｅおよび２９Ｆ)のＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回皮下投与で処置したカニクイザルにおけるＩＦＮγ(図２９Ａ、２９Ｃおよび２９Ｅ)およびＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０(図２９Ｂ、２９Ｄおよび２９Ｆ)の濃度を示す線グラフである。
図２９Ａに示すとおり、１μg／kgでのＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回皮下投与は、検出可能レベルのＩＦＮγをもたらさなかった。２μg／kgおよび４μg／kgのＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの皮下投与は、投与後４日目にピークとなるＩＦＮγレベル増加を一部動物でもたらした(図２９Ｃおよび２９Ｅ)。１μg／kg、２μg／kgおよび４μg／kgでのＤＦ－ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ皮下投与は、全て投与後４日目ピークとなるＩＰ１０／ＣＸＣＬ１０レベル上昇をもたらした(図２９Ｂ、２９Ｄおよび２９Ｆ)。
実施例１６ － ４Ｔ１同所性マウスモデルにおける照射または化学療法を使用したＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ組み合わせ治療
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与により誘発される抗腫瘍活性が増幅され得るかを示すために、照射または化学療法を使用した組み合わせ試験を実施した。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスに***脂肪パッドに５×１０５ ４Ｔ１－ｌｕｃ腫瘍細胞を同所性に注射した。腫瘍接種後１４日目、マウスを無作為化した(ｎ＝１０／群)。マウスを、アイソタイプ、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(何れも１μg ＩＬ－１２と等モル)皮下、５mg／kg ドキシル(登録商標)(化学療法)静脈内または１０Gy照射を単剤療法またはドキシル(登録商標)もしくは照射と組み合わせたＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置した。腫瘍増殖を経時的に評価した。図３０は、乳癌細胞を接種され、アイソタイプ対照、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ、ドキシル(化学療法)または１０Gy照射を単剤療法またはドキシル(登録商標)もしくは照射と組み合わせたＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを毎週投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。グラフは腫瘍増殖±標準誤差平均の群平均を示す。
ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ投与により誘発される抗腫瘍活性が増幅され得るかを示すために、照射または化学療法を使用した組み合わせ試験を実施した。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスに***脂肪パッドに５×１０５ ４Ｔ１－ｌｕｃ腫瘍細胞を同所性に注射した。腫瘍接種後１４日目、マウスを無作為化した(ｎ＝１０／群)。マウスを、アイソタイプ、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(何れも１μg ＩＬ－１２と等モル)皮下、５mg／kg ドキシル(登録商標)(化学療法)静脈内または１０Gy照射を単剤療法またはドキシル(登録商標)もしくは照射と組み合わせたＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで処置した。腫瘍増殖を経時的に評価した。図３０は、乳癌細胞を接種され、アイソタイプ対照、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ、ドキシル(化学療法)または１０Gy照射を単剤療法またはドキシル(登録商標)もしくは照射と組み合わせたＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを毎週投与された個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。グラフは腫瘍増殖±標準誤差平均の群平均を示す。
図３０に見られるとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単剤療法はそれ自体４Ｔ１腫瘍担持マウスで有効であったが、組み合わせ治療は抗腫瘍免疫応答を増強し、１０～３０％のマウスで完全腫瘍退縮に至った。
実施例１７ － ＰＤ－１遮断耐性大ＣＴ２６結腸癌腫腫瘍に対するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ介在抗腫瘍有効性
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが、ＰＤ－１遮断耐性ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍に対する強力な、抗腫瘍応答を誘発するか否かを分析する。Ｂａｌｂ／ｃマウスに０.５×１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を注射した。平均腫瘍体積が約１２０mm３に達したとき接種した後、マウスを９日目に無作為化した。マウスを２００μgアイソタイプまたは抗ＰＤ－１抗体(週２回)で処置した。図３１Ａは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、アイソタイプ対照または抗ＰＤ－１抗体で処置(週２回)されたＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。１７日目、抗ＰＤ－１(平均腫瘍体積約８００mm３)で先に処置した群を２処置群に細分した。群１はＰＤ－１遮断処置週２回を継続して受け続け、群２はＰＤ－１遮断(週２回)とＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(１μg毎週)を受けた。図３１Ｂは、抗ＰＤ－１抗体(週２回)と１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ毎週処置で処置した、先に抗ＰＤ－１抗体処置したＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが、ＰＤ－１遮断耐性ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍に対する強力な、抗腫瘍応答を誘発するか否かを分析する。Ｂａｌｂ／ｃマウスに０.５×１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を注射した。平均腫瘍体積が約１２０mm３に達したとき接種した後、マウスを９日目に無作為化した。マウスを２００μgアイソタイプまたは抗ＰＤ－１抗体(週２回)で処置した。図３１Ａは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、アイソタイプ対照または抗ＰＤ－１抗体で処置(週２回)されたＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。１７日目、抗ＰＤ－１(平均腫瘍体積約８００mm３)で先に処置した群を２処置群に細分した。群１はＰＤ－１遮断処置週２回を継続して受け続け、群２はＰＤ－１遮断(週２回)とＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(１μg毎週)を受けた。図３１Ｂは、抗ＰＤ－１抗体(週２回)と１μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ毎週処置で処置した、先に抗ＰＤ－１抗体処置したＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図３１Ａに示すとおり、抗ＰＤ－１単剤療法は腫瘍進行を制御できなかった。しかしながら、図３１Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの追加は、有効な腫瘍退縮をもたらした。
実施例１８ － 大ＣＴ２６結腸癌腫腫瘍に対するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの局所処置は、アブスコパル抗腫瘍応答を誘導する
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置がアブスコパル治療効果を誘導できるか否かを示す。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃに、左(０.８×１０６腫瘍細胞)および右(０.４×１０６腫瘍細胞)脇腹療法にＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下移植した。腫瘍接種後１３日目、左腫瘍に、０.１μgアイソタイプ対照または０.１μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを、２～３週間、週１回注射した。図３２Ａは、Ｂａｌｂ／ｃマウス ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、アイソタイプ対照またはＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで１回(毎週)処置された処置(Ｔｒ)腫瘍の腫瘍増殖曲線を示すグラフである。右腫瘍は未処置(ＮＴ)のままであった。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置がアブスコパル治療効果を誘導できるか否かを示す。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃに、左(０.８×１０６腫瘍細胞)および右(０.４×１０６腫瘍細胞)脇腹療法にＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下移植した。腫瘍接種後１３日目、左腫瘍に、０.１μgアイソタイプ対照または０.１μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉを、２～３週間、週１回注射した。図３２Ａは、Ｂａｌｂ／ｃマウス ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、アイソタイプ対照またはＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで１回(毎週)処置された処置(Ｔｒ)腫瘍の腫瘍増殖曲線を示すグラフである。右腫瘍は未処置(ＮＴ)のままであった。
図３２Ｂは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種されたＢａｌｂ／ｃマウスにおける未処置(ＮＴ)腫瘍の腫瘍増殖曲線を示すグラフである。
図３２Ａ～３２Ｂに示すとおり、対照アイソタイプ処置腫瘍は、右部分および左部分両方で増殖し続けた。図３２Ａ～３２Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、局所注射部位(図３２Ａ)および遠位非処置腫瘍(図３２Ｂ)で有効な抗腫瘍応答をもたらし、アブスコパル治療効果を示した。
実施例１９ － 大ＣＴ２６結腸癌腫腫瘍に対するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ介在抗腫瘍有効性
この実施例は、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを有するマウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(実施例２に記載)が、大きな腫瘍容積に対して効果的であることを示す。
この実施例は、変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇを有するマウスＩｇＧ２ａ ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合した野生型マウスＩＬ－１２ ｐ４０およびｐ３５サブユニットを含むＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(実施例２に記載)が、大きな腫瘍容積に対して効果的であることを示す。
ＣＴ２６大結腸癌腫腫瘍に対するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ介在抗腫瘍有効性を試験した。簡潔には、Ｂａｌｂ／ｃマウスに１０６ ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１結腸癌腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後１８日目、腫瘍体積が８００mm３に達したとき、マウスを種々の処置群(ｎ＝１０／群)に無作為化し、１μgまたは２μg ＩＬ－１２に相当するモル用量に相当するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉまたはモル用量のｍＩｇＧ２ａアイソタイプで単回または週１回腹腔内処置した。
腫瘍増殖を６５日間評価した。図２６Ａは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、２μg ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照または１μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで１回(毎週)処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図２６Ｂは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、２μg ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照または２μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで１回(毎週)処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図３３Ａは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、２μg ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照または２μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉで１回処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図３３Ｂは、ＣＴ２６－Ｔｙｒｐ１腫瘍細胞を接種され、２μg ｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照、１μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(毎週投与)、２μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(毎週投与)または２μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ(１回)で処置されたＢａｌｂ／ｃマウスの平均腫瘍増殖曲線を示すグラフである。図２６Ａ、２６Ｂおよび３３Ａは、個々のマウスの腫瘍増殖曲線を示す。図３３Ｂは、腫瘍平均±標準誤差平均を示す。
図２６Ａ、２６Ｂおよび３３Ｂに示すとおり、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉの毎週投与(１μgまたは２μg)は、腫瘍進行の制御に効率的であり、１００％のマウスがＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置に応答した。さらに、図３３Ａに示すとおり、２μg ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉでの単回処置は腫瘍退縮を示し、１００％応答率をもたらした。この実施例に記載するデータおよび図は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉが単回投与したとき、大ＣＴ２６腫瘍体積の減少に有効であるだけでなく、ＣＴ２６腫瘍体積低減に有効であることも示す。
実施例２０ － Ｂ１６Ｆ１０黒色腫に対するＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置は、血清および腫瘍におけるサイトカインおよびケモカイン産生を誘導する
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置がＢ１６Ｆ１０腫瘍担持Ｃ５７ＢＬ／６マウスの血中および腫瘍でＩＦＮγ、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０のレベルを上昇させることを示す。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目(平均腫瘍体積が１５０mm３に達したとき)、マウスを無作為化した(ｎ＝８／群)。マウスにアイソタイプ対照、ＩＬ－１２または１μg ＩＬ－１２と等モルのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃで腹腔内処置した。
この実施例は、ＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ処置がＢ１６Ｆ１０腫瘍担持Ｃ５７ＢＬ／６マウスの血中および腫瘍でＩＦＮγ、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０のレベルを上昇させることを示す。簡潔には、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１０６ Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を皮下注射した。腫瘍接種後７日目(平均腫瘍体積が１５０mm３に達したとき)、マウスを無作為化した(ｎ＝８／群)。マウスにアイソタイプ対照、ＩＬ－１２または１μg ＩＬ－１２と等モルのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃで腹腔内処置した。
処置７２時間後、血清および腫瘍溶解物を調製し、マルチプレックステクノロジーを使用してＩＦＮγ(図２７Ａ)、ＣＸＣＬ９(図２７Ｂ)およびＣＸＣＬ１０(図２７Ｃ)発現を分析した。図３４Ａ～Ｃは、マウスにおける平均サイトカイン／ケモカインレベルを示す。
図２７Ａ～２７Ｃに示すとおり、０.５μgのＤＦ－ｍＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉ単回投与は、血清(左パネル)および腫瘍内(右パネル)でのＩＦＮγ(図２７Ａ)、ＣＸＣＬ９(図２７Ｂ)およびＣＸＣＬ１０(図２７Ｃ)の発現増加をもたらし、一方ＩＬ－１２処置はほとんどまたは全く効果がなかった。
実施例２１ － ＬＡＬＡＰＡおよびＬＡＬＡＰＧ変異を有するＤＦ ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉは、類似するＩＦＮγ刺激活性およびＦｃγＲ結合消失を示す
この実施例は、ＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異またはＬＡＬＡＰＧ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ)変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃを有するＤＦ ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉのＩＦＮγ刺激およびＦｃγＲ結合活性を示す。完結には、ヒトＰＢＭＣを、２日間、５μg／mlフィトヘマグルチニン(ＰＨＡ)およびＬＡＬＡＰＡまたはＬＡＬＡＰＧ変異を有するＤＦ ｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ｓｉの漸増用量両方と培養した。２日間刺激後、上清を収集し、ＩＦＮγ含量をＥＬＩＳＡにより測定した。ＦｃγＲ結合活性を決定するために、高親和性ＦｃγＲ ＣＤ３２およびＣＤ６４を発現するＴＨＰ－１細胞に結合したフルオロフォアコンジュゲートｈＩｇＧ１アイソタイプ抗体(８３nM)をフローサイトメトリーにより決定した。
この実施例は、ＬＡＬＡＰＡ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａ)変異またはＬＡＬＡＰＧ(Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ｇ)変異を有するＩｇＧ１ Ｆｃを有するＤＦ ｈＩＬ－１２－Ｆｃ ｓｉのＩＦＮγ刺激およびＦｃγＲ結合活性を示す。完結には、ヒトＰＢＭＣを、２日間、５μg／mlフィトヘマグルチニン(ＰＨＡ)およびＬＡＬＡＰＡまたはＬＡＬＡＰＧ変異を有するＤＦ ｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ｓｉの漸増用量両方と培養した。２日間刺激後、上清を収集し、ＩＦＮγ含量をＥＬＩＳＡにより測定した。ＦｃγＲ結合活性を決定するために、高親和性ＦｃγＲ ＣＤ３２およびＣＤ６４を発現するＴＨＰ－１細胞に結合したフルオロフォアコンジュゲートｈＩｇＧ１アイソタイプ抗体(８３nM)をフローサイトメトリーにより決定した。
図３４Ａに示すとおり、ｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ＬＡＬＡＰＡおよびｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ＬＡＬＡＰＧは、ＰＨＡと同時で、ＰＨＡ単独で生じる量より相当多くＰＢＭＣからのＩＦＮγ産生を刺激する能力を有する。
図３４Ｂに示すとおり、標識ｈＩｇＧ１アイソタイプ抗体との混合物中の１６倍モル過剰のｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ｗｔ(１.３μM)の同時の包含は、おそらくＣＤ３２およびＣＤ６４へのＩｇＧ１結合の競合により、結合シグナルを相当低減させた。対照的に、同じ濃度で、ｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ＬＡＬＡＰＡまたはｈＩＬ－１２－Ｆｃ－ＬＡＬＡＰＧ何れとのインキュベーションも、検出可能なＩｇＧ１アイソタイプ結合をもたらさず、ＬＡＬＡＰＡおよびＬＡＬＡＰＧ変異に起因する両タンパク質のＦｃγＲ結合消失が示唆された。
番号付けした実施態様
ここに開示する実施態様は、番号付けした実施態様の開示に提供する実施態様Ｐ１～Ｐ１２１を提供する。
ここに開示する実施態様は、番号付けした実施態様の開示に提供する実施態様Ｐ１～Ｐ１２１を提供する。
実施態様Ｐ１：
第一抗体Ｆｃ配列を含む第一ポリペプチドおよび第二の異なる抗体Ｆｃ配列を含む第二ポリペプチド
を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質のサブユニットのタンパク質配列をさらに含み、
ここで、タンパク質配列は、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃ配列(ここで、ＸはＬまたはＥである)に融合しており；そして
多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットが第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合しており、そして多サブユニットタンパク質のサブユニットが互いに結合しており、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
第一抗体Ｆｃ配列を含む第一ポリペプチドおよび第二の異なる抗体Ｆｃ配列を含む第二ポリペプチド
を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質のサブユニットのタンパク質配列をさらに含み、
ここで、タンパク質配列は、アミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃ配列(ここで、ＸはＬまたはＥである)に融合しており；そして
多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットが第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合しており、そして多サブユニットタンパク質のサブユニットが互いに結合しており、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２：リンカーがアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)を含む、実施態様Ｐ１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ９：タンパク質配列と第一抗体Ｆｃ配列を融合するリンカーがアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)からなる、実施態様Ｐ２～Ｐ８の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１０：リンカーがアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)を含む、実施態様Ｐ１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１１：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１２：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１３：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１４：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１５：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１６：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１７：タンパク質配列と第一抗体Ｆｃ配列を融合するリンカーがアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)からなる、実施態様Ｐ１０～Ｐ１６の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１８：
第一抗体Ｆｃ配列を含む第一ポリペプチドおよび第二の異なる抗体Ｆｃ配列を含む第二ポリペプチド
を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質のサブユニットのタンパク質配列をさらに含み、
ここで、タンパク質配列がアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃ配列(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)に融合しており；そして
多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットが第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合しており、そして多サブユニットタンパク質のサブユニットが互いに結合しており、そして
ここでＸ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列の少なくとも１つはヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含み、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
第一抗体Ｆｃ配列を含む第一ポリペプチドおよび第二の異なる抗体Ｆｃ配列を含む第二ポリペプチド
を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一ポリペプチドは多サブユニットタンパク質のサブユニットのタンパク質配列をさらに含み、
ここで、タンパク質配列がアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号６)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)を含むリンカーにより第一抗体Ｆｃ配列(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)に融合しており；そして
多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットが第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合しており、そして多サブユニットタンパク質のサブユニットが互いに結合しており、そして
ここでＸ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列の少なくとも１つはヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含み、
ここで、第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列は互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ１９：リンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)を含む、実施態様Ｐ１８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２０：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２１：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４１)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２２：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列
ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２３：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４２)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２４：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ１９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２５：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２４３)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２４のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２６：タンパク質配列と第一抗体Ｆｃ配列を融合するリンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号７)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)からなる、実施態様Ｐ１９～Ｐ２５の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２７：リンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含む、実施態様Ｐ１８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２８：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ２９：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４４)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３０：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３１：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４５)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３２：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ２７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３３：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２４６)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３４：タンパク質配列と第一抗体Ｆｃ配列を融合するリンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号９)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)からなる、実施態様Ｐ２７～Ｐ３３の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３５：リンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)を含む、実施態様Ｐ１８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３６：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３７：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４７)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３６のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３８：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ３９：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)またはＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４８)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４０：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)を含むリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ３５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４１：多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットがアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)またはＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４９)からなるリンカーにより、第二の異なる抗体Ｆｃ配列に融合される、実施態様Ｐ４０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４２：タンパク質配列と第一抗体Ｆｃ配列を融合するリンカーがアミノ酸配列ＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１１)またはＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)からなる、実施態様Ｐ３５～Ｐ４１の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４３：第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列が互いにヘテロ二量体化を促進するために変異されたＩｇＧ４ Ｆｃ配列である、実施態様Ｐ１～Ｐ１７の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４４：第一抗体Ｆｃ配列がＫ３７０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４５：第一抗体Ｆｃ配列がＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＫ３７０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４６：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４７：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４８：第一抗体Ｆｃ配列がＫ３６０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ４９：第一抗体Ｆｃ配列がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＫ３６０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５０：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５１：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む、実施態様Ｐ４３のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５２：第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列が互いにヘテロ二量体化を促進するように変異されたＩｇＧ１ Ｆｃ配列である、実施態様Ｐ１８～Ｐ４２の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５３：第一抗体Ｆｃ配列がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ５２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５４：第一抗体Ｆｃ配列がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列がＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ５２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５５：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、実施態様Ｐ５２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５６：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含む、実施態様Ｐ５２のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５７：ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃ配列がエフェクター機能を低減するようさらに変異されている、実施態様Ｐ４３～Ｐ５６の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５８：第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列が各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅおよび／またはＰ３２９Ａを含む、実施態様Ｐ５７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ５９：第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列が各々Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓおよびその何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、実施態様Ｐ５７または実施態様Ｐ５８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６０：第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列が各々変異Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む、実施態様Ｐ５７または実施態様Ｐ５８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６１：ＩｇＧ４またはＩｇＧ１ Ｆｃ配列が鎖間ジスルフィド架橋を導入するようさらに変異されている、実施態様Ｐ４３～Ｐ６０の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６２：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｙ３４９Ｃを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｓ３５４Ｃを含む、実施態様Ｐ６１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６３：第一抗体Ｆｃ配列が変異Ｓ３５４Ｃを含み、第二の異なる抗体Ｆｃ配列が変異Ｙ３４９Ｃを含む、実施態様Ｐ６１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６４：多サブユニットタンパク質のサブユニットが多サブユニットサイトカインのサブユニットである、実施態様Ｐ１～Ｐ６３の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６５：サイトカインがＩＬ－１２である、実施態様Ｐ６４のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６６：少なくとも１つの抗体可変ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ１～Ｐ６５の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６７：少なくとも１つの抗体重鎖可変領域がＦａｂを形成するように抗体軽鎖可変領域に結合しており、ここで、Ｆａｂが第一抗体Ｆｃ配列および／または第二の異なる抗体Ｆｃ配列のＮ末端に結合する、実施態様Ｐ６６のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６８：多サブユニットタンパク質のサブユニットおよび多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットのタンパク質配列がそれぞれ第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列のＣ末端に結合する、実施態様Ｐ６７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ６９：多サブユニットタンパク質のサブユニットおよび多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットのタンパク質配列がそれぞれ第二の異なる抗体Ｆｃ配列および第一抗体Ｆｃ配列のＣ末端に結合する、実施態様Ｐ６７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７０：第一ポリペプチドが第一抗体Ｆｃ配列に対してＣ末端に位置する抗体重鎖可変ドメインを含む、実施態様Ｐ６６のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７１：第二ポリペプチドが第二の異なる抗体Ｆｃ配列に対してＣ末端に位置する抗体重鎖可変ドメインを含む、実施態様Ｐ６６または実施態様Ｐ７０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７２：抗体重鎖可変領域がｓｃＦｖを形成するように抗体軽鎖可変領域に結合する、実施態様Ｐ７０または実施態様Ｐ７１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７３：多サブユニットタンパク質のサブユニットおよび多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットのタンパク質配列がそれぞれ第一抗体Ｆｃ配列および第二の異なる抗体Ｆｃ配列のＮ末端に結合する、実施態様Ｐ７０～７２の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７４：多サブユニットタンパク質のサブユニットおよび多サブユニットタンパク質のさらなるサブユニットのタンパク質配列がそれぞれ第二の異なる抗体Ｆｃ配列および第一抗体Ｆｃ配列のＮ末端に結合する、実施態様Ｐ７０～Ｐ７２の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７５：抗体可変ドメインを含まない、実施態様Ｐ１～Ｐ６５の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７６：プロテオグリカン結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ１～Ｐ６５または実施態様Ｐ７５のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７７：プロテオグリカン結合ドメインが腫瘍で特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する、実施態様Ｐ７６のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７８：プロテオグリカン結合ドメインがシンデカン、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合する、実施態様Ｐ７７のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ７９：ＳＬＲＰがデコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される、実施態様Ｐ７８のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８０：コラーゲン結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ１～Ｐ６５または実施態様Ｐ７５～Ｐ７９のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８１：コラーゲン結合ドメインが腫瘍で特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する、実施態様Ｐ８０のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８２：ヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ１～Ｐ６５または実施態様Ｐ７５～Ｐ８１のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８３：プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインまたはヒアルロン酸結合ドメインが第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドまたは第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に融合する、実施態様Ｐ７６～Ｐ８２の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ８４：先の実施態様の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、製剤。
実施態様Ｐ８５：実施態様Ｐ１～Ｐ８３の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質をコードする１以上の核酸を含む、細胞。
実施態様Ｐ８６：癌を処置する方法であって、患者に実施態様Ｐ１～Ｐ８３の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または実施態様Ｐ８４の製剤を投与することを含む、方法。
実施態様Ｐ８７：急性放射線症候群を処置する方法であって、患者に実施態様Ｐ１～Ｐ８３の何れかのヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または実施態様Ｐ８４の製剤を投与することを含む、方法。
実施態様Ｐ８８：急性放射線症候群が造血放射線症候群、消化器放射線症候群、神経血管放射線症候群、皮膚放射線症候群およびその何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の症候群を含む、実施態様Ｐ８７の方法。
実施態様Ｐ８９：配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
実施態様Ｐ９０：多サブユニットサイトカインのサブユニットおよび免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドを含むポリペプチドであって、ここで、Ｆｃドメインポリペプチドが異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのヘテロ二量体化を促進する変異およびＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含む、ポリペプチド。
実施態様Ｐ９１：ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインである、実施態様Ｐ９０のポリペプチド。
実施態様Ｐ９２：Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される、実施態様Ｐ９１のポリペプチド。
実施態様Ｐ９３：Ｆｃのエフェクター機能を低減させる変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａである、実施態様Ｐ９１または実施態様Ｐ９２のポリペプチド。
実施態様Ｐ９４：ヘテロ二量体化を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗである、実施態様Ｐ９１～Ｐ９３の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ９５：ヘテロ二量体化を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔである、実施態様Ｐ９１～Ｐ９３の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ９６：Ｆｃドメインが異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのジスルフィド結合形成を促進する変異をさらに含む、実施態様Ｐ９４またはＰ９５のポリペプチド。
実施態様Ｐ９７：ヘテロ二量体化変異がＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗであるとき、ジスルフィド結合形成を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｙ３４９Ｃである、実施態様Ｐ９６のポリペプチド。
実施態様Ｐ９８：ヘテロ二量体化変異がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔであるとき、ジスルフィド結合形成を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｓ３５４Ｃである、実施態様Ｐ９６のポリペプチド。
実施態様Ｐ９９：配列番号２９０のアミノ酸配列を含む、実施態様Ｐ９７のポリペプチド。
実施態様Ｐ１００：配列番号２９１のアミノ酸配列を含む、実施態様Ｐ９８のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０１：抗体可変ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ９０～Ｐ１００の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１０２：抗体可変ドメインが抗体重鎖可変ドメインを含む、実施態様Ｐ１０１のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０３：抗体重鎖可変ドメインがポリペプチドのＮ末端に融合する、実施態様Ｐ１０２のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０４：抗体重鎖可変ドメインがＦａｂを形成するように抗体軽鎖可変ドメインに結合する、実施態様Ｐ１０３のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０５：抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、実施態様Ｐ１０３のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０６：多サブユニットサイトカインのサブユニットが免疫グロブリンＦｃドメインのＣ末端に融合する、実施態様Ｐ１０１～Ｐ１０５の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１０７：抗体重鎖可変ドメインがポリペプチドのＣ末端に融合する、実施態様Ｐ１０１のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０８：抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、実施態様Ｐ１０７のポリペプチド。
実施態様Ｐ１０９：多サブユニットサイトカインのサブユニットが免疫グロブリンＦｃドメインのＮ末端に融合する、実施態様Ｐ１０７またはＰ１０８のポリペプチド。
実施態様Ｐ１１０：抗体可変ドメインを含まない、実施態様Ｐ９０～Ｐ１００の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１１１：プロテオグリカン結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ９０～Ｐ１００またはＰ１１０の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１１２：プロテオグリカン結合ドメインが腫瘍に特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する、実施態様Ｐ１１１のポリペプチド。
実施態様Ｐ１１３：プロテオグリカン結合ドメインがシンデカン、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合する、実施態様Ｐ１１２のポリペプチド。
実施態様Ｐ１１４：ＳＬＲＰがデコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される、実施態様Ｐ１１３のポリペプチド。
実施態様Ｐ１１５：コラーゲン結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ９０～Ｐ１００または１１０～１１４の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１１６：コラーゲン結合ドメインが腫瘍に特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する、実施態様Ｐ１１５のポリペプチド。
実施態様Ｐ１１７：ａヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む、実施態様Ｐ９０～Ｐ１００または１１０～１１６の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１１８：プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインまたはヒアルロン酸結合ドメインがポリペプチドのＣ末端に融合する、実施態様Ｐ１１１～Ｐ１１７の何れかのポリペプチド。
実施態様Ｐ１１９：実施態様Ｐ８９～Ｐ１１８の何れかの配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸。
実施態様Ｐ１２０：実施態様Ｐ８９～Ｐ１１８の何れかの配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含む、発現ベクター。
実施態様Ｐ１２１：実施態様Ｐ１１９の核酸または実施態様Ｐ１２０の発現ベクターを含む、細胞。
引用による取り込み
ここに引用した特許文献および科学論文の各々の開示全体を、引用により全ての目的のために本明細書に包含させる。
ここに引用した特許文献および科学論文の各々の開示全体を、引用により全ての目的のために本明細書に包含させる。
均等
本発明は、その精神または必須の特徴から逸脱することなく、他の特異的形態で具体化され得る。したがって、前記実施態様はその記載に本発明を限定するのではなく、全ての点で例示的と解釈されるべきである。故に、本発明の範囲は、前記ではなく、添付する特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の意味および範囲に入る全ての変更はそれに包含されることが意図される。
本発明は、その精神または必須の特徴から逸脱することなく、他の特異的形態で具体化され得る。したがって、前記実施態様はその記載に本発明を限定するのではなく、全ての点で例示的と解釈されるべきである。故に、本発明の範囲は、前記ではなく、添付する特許請求の範囲により示され、特許請求の範囲の意味および範囲に入る全ての変更はそれに包含されることが意図される。
Claims (244)
- (ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチド
を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドは各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドはＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含み、そして
多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。 - エフェクター機能が抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)、抗体依存性細胞食作用(ＡＤＣＰ)および／または補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)を誘導するＦｃの能力を含む、請求項１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質がフコシル化されている、請求項１または２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドがヒト抗体Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項１～３の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項１～４の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む、請求項１～５の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項１～６の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより、２３４、２３５、２３７、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む、請求項７に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上の変異を含む、請求項８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａを含む、請求項９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む、請求項９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む、請求項９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｃ２２０Ｓを含む、請求項７～１２の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項１～６の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、２３５位および／または３２９位に１以上の変異を含む、請求項１４に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＬ２３５ＥおよびＰ３２９Ａから選択される１以上の変異を含む、請求項１５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５Ｅを含む、請求項１６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａを含む、請求項１６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｓ２２８Ｐを含む、請求項１４～１８の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二ポリペプチドを含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットサイトカインのサブユニットおよび免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドを含むポリペプチドであって、ここで、Ｆｃドメインポリペプチドが異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのヘテロ二量体化を促進する変異およびＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含む、ポリペプチド。
- ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１抗体Ｆｃドメインである、請求項２１に記載のポリペプチド。
- Ｆｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される、請求項２２に記載のポリペプチド。
- Ｆｃのエフェクター機能を低減させる変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａである、請求項２２または２３に記載のポリペプチド。
- ヘテロ二量体化を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗである、請求項２２～２４の何れかに記載のポリペプチド。
- ヘテロ二量体化を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔである、請求項２２～２４の何れかに記載のポリペプチド。
- Ｆｃドメインが異なる免疫グロブリンＦｃドメインポリペプチドとのジスルフィド結合形成を促進する変異をさらに含む、請求項２５または２６に記載のポリペプチド。
- ヘテロ二量体化変異がＫ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗであるとき、ジスルフィド結合形成を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｙ３４９Ｃである、請求項２７に記載のポリペプチド。
- ヘテロ二量体化変異がＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔであるとき、ジスルフィド結合形成を促進する変異が、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｓ３５４Ｃである、請求項２７に記載のポリペプチド。
- 配列番号２９０のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載のポリペプチド。
- 配列番号２９１のアミノ酸配列を含む、請求項２９に記載のポリペプチド。
- 配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、核酸。
- 配列番号２９０または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする配列を含む核酸を含む、発現ベクター。
- 請求項３２に記載の核酸または請求項３３に記載の発現ベクターを含む、細胞。
- (ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチド
を含むヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットが第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、ここで、第一リンカーは第一アミノ酸配列を含み、ここで、第一アミノ酸配列はアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)を含み、
ここで、Ｘ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドの少なくとも一方はヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含み
ここで、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。 - 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含む、請求項３５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)からなる、請求項３６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)を含む、請求項３６または３７に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)からなる、請求項３８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)を含む、請求項３５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)からなる、請求項４０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)を含む、請求項４０または４１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)からなる、請求項４２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)を含む、請求項４０または４１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)からなる、請求項４４に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)を含む、請求項４０または４１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)からなる、請求項４６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)を含む、請求項４０または４１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)からなり、請求項４８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)を含む、請求項４０または４１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)からなる、請求項５０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)を含む、請求項３５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)からなる、請求項５２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)を含む、請求項５２または５３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)からなる、請求項５４に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)を含む、請求項５２または５３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)からなる、請求項５６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)を含む、請求項５２または５３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)からなる、請求項５８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- (ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第一サブユニットを含む第一ポリペプチド；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットを含む第二ポリペプチド
を含む、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質であって、
ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、多サブユニットタンパク質の第一サブユニットが第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、ここで、第一リンカーが第一アミノ酸配列を含み、ここで、第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)(ここで、ＸはＬまたはＥである)を含み、そして
多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合しているものである、ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。 - 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)を含む、請求項６０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)からなる、請求項６１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)を含む、請求項６１または６２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)からなる、請求項６３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)を含む、請求項６１または６２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)からなる、請求項６５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)を含む、請求項６１または６２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)からなる、請求項６７に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)を含む、請求項６０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)からなる、請求項６９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)を含む、請求項６９または７０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)からなる、請求項７１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)を含む、請求項６９または７０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)からなる、請求項７３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)を含む、請求項６９または７０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)からなる、請求項７５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および／または第二ポリペプチドがＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含む、請求項３５～７６の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- エフェクター機能が抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)、抗体依存性細胞食作用(ＡＤＣＰ)および／または補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)を誘導するＦｃの能力を含む、請求項７７に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項７７または７８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、各々、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡまたはＬ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上の変異を含む、請求項７９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａを含む、請求項８０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む、請求項８０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む、請求項８０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｃ２２０Ｓを含む、請求項７９～８３の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項７７または７８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａから選択される１以上の変異を含む、請求項８５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５Ｅを含む、請求項８６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａを含む、請求項８６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｓ２２８Ｐを含む、請求項８５～８８の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何らかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項７～１３、３５～５９および７９～８４の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、請求項９０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何らかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３６０Ｅ、Ｋ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項７～１３、３５～５９および７９～８４の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３６０ＥおよびＫ４０９Ｗを含む、請求項９２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３７０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項１４～１９、６０～７６および８５～８９の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、請求項９４に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＥ３５７Ｎ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３７０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項１４～１９、６０～７６および８５～８９の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｅ３５７Ｎ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３７０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む、請求項９６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３６０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項１４～１９、６０～７６および８５～８９の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含む、請求項９８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体ＦｃドメインポリペプチドがＱ３４７Ｒ、Ｄ３９９Ｖ、Ｆ４０５Ｔおよびそれらの何れかの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含み、第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＫ３６０Ｅ、Ｒ４０９Ｗおよびそれらの組み合わせからなる群から選択される１以上の変異を含む、請求項１４～１９、６０～７６および８５～８９の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｑ３４７Ｒ、Ｄ３９９ＶおよびＦ４０５Ｔを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｋ３６０ＥおよびＲ４０９Ｗを含む、請求項１００に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが鎖間ジスルフィド結合を導入するためにさらに変異される、請求項１～１９または３５～１０１の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｙ３４９Ｃを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｓ３５４Ｃを含む、請求項１０２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｓ３５４Ｃを含み、第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが変異Ｙ３４９Ｃを含む、請求項１０２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質が多サブユニットサイトカインである、請求項１～１９または３５～１０４の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットサイトカインがＩＬ－１２である、請求項１０５に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットサイトカインの第一サブユニットがヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットであり、多サブユニットサイトカインの第二の異なるサブユニットがヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットである、請求項１０６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットサイトカインの第一サブユニットがヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットであり、多サブユニットサイトカインの第二の異なるサブユニットがヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットである、請求項１０６に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 野生型ｐ３５配列に対応するＣ７４がセリンによって置換され、野生型ｐ４０に対応するＣ１７７がセリンによって置換され、これらの置換がヒトＩＬ－１２の野生型ｐ３５および野生型ｐ４０サブユニット間で形成される天然ジスルフィド結合を除去する、請求項１０７または１０８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- ヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットがＶ１８５Ｃ置換を含み、ヒトＩＬ－１２のｐ４０サブユニットがＹ２９２Ｃ置換を含み、これがヒトＩＬ－１２のｐ３５サブユニットおよびｐ４０サブユニット間に非天然ジスルフィド結合を形成する、請求項１０９に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体可変ドメインをさらに含む、請求項１～１９または３５～１１０の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体可変ドメインが抗体重鎖可変ドメインを含む、請求項１１１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体重鎖可変ドメインが第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドまたは第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合する、請求項１１２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体重鎖可変ドメインがＦａｂを形成するように抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項１１３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、請求項１１３に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットがそれぞれ第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に融合する、請求項１１３～１１５の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体重鎖可変ドメインが第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドまたは第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に融合する、請求項１１２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、請求項１１７に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 多サブユニットタンパク質の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットがそれぞれ第一抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＮ末端に融合する、請求項１１７または１１８に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体可変ドメインをさらに含む、請求項２１～３１の何れかに記載に記載のポリペプチド。
- 抗体可変ドメインが抗体重鎖可変ドメインを含む、請求項１２０に記載に記載のポリペプチド。
- 抗体重鎖可変ドメインがポリペプチドのＮ末端に融合する、請求項１２１に記載に記載のポリペプチド。
- 抗体重鎖可変ドメインがＦａｂを形成するように抗体軽鎖可変ドメインに結合する、請求項１２２に記載に記載のポリペプチド。
- 抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、請求項１２２に記載に記載のポリペプチド。
- 多サブユニットサイトカインのサブユニットが免疫グロブリンＦｃドメインのＣ末端に融合する、請求項１２２～１２４に記載の何れかに記載のポリペプチド。
- 抗体重鎖可変ドメインがポリペプチドのＣ末端に融合する、請求項１２１に記載に記載のポリペプチド。
- 抗体重鎖可変ドメインがｓｃＦｖを形成するようにさらに抗体軽鎖可変ドメインに融合する、請求項１２６に記載に記載のポリペプチド。
- 多サブユニットサイトカインのサブユニットが免疫グロブリンＦｃドメインのＮ末端に融合する、請求項１２６または１２７に記載に記載のポリペプチド。
- 抗体可変ドメインを含まない、請求項１～１９または３５～１１０の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- プロテオグリカン結合ドメインをさらに含む、請求項１～１９、３５～１１０または１２９の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- プロテオグリカン結合ドメインが腫瘍に特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する、請求項１３０に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- プロテオグリカン結合ドメインがシンデカン、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合する、請求項１３１に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- ＳＬＲＰがデコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される、請求項１３２に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- コラーゲン結合ドメインをさらに含む、請求項１～１９、３５～１１０または１２９～１３３の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- コラーゲン結合ドメインが腫瘍に特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する、請求項１３４に記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- ヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む、請求項１～１９、３５～１１０または１２９～１３５の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインまたはヒアルロン酸結合ドメインが第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドまたは第二抗体ＦｃドメインポリペプチドのＣ末端に融合する、請求項１３０～１３６の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質。
- 抗体可変ドメインを含まない、請求項２１～３１の何れかに記載に記載のポリペプチド。
- プロテオグリカン結合ドメインをさらに含む、請求項２１～３１の何れかに記載に記載のポリペプチド。
- プロテオグリカン結合ドメインが腫瘍に特異的に発現される１以上のプロテオグリカンに結合する、請求項１３９に記載に記載のポリペプチド。
- プロテオグリカン結合ドメインがシンデカン、セルグリシン、ＣＳＰＧ４、ベータグリカン、グリピカン、ペルレカン、ベルシカン、ブレビカンおよび小ロイシンリッチプロテオグリカン(ＳＬＲＰ)から選択される１以上のプロテオグリカンに結合する、請求項１４０に記載に記載のポリペプチド。
- ＳＬＲＰがデコリン、ビグリカン、アスポリン、フィブロモジュリンおよびルミカンから選択される、請求項１４１に記載に記載のポリペプチド。
- コラーゲン結合ドメインをさらに含む、請求項２１～３１または１３８～１４２の何れかに記載に記載のポリペプチド。
- コラーゲン結合ドメインが腫瘍において特異的に発現される１以上のコラーゲンに結合する、請求項１４３に記載に記載のポリペプチド。
- ヒアルロン酸結合ドメインをさらに含む、請求項２１～３１または１３８～１４４の何れかに記載に記載のポリペプチド。
- プロテオグリカン結合ドメイン、コラーゲン結合ドメインまたはヒアルロン酸結合ドメインがポリペプチドのＣ末端に融合する、請求項１３９～１４５に記載の何れかに記載のポリペプチド。
- 請求項１～２０、３５～１１９または１２９～１３７の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質および薬学的に許容される担体を含む、製剤。
- 請求項１～２０、３５～１１９または１２９～１３７の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または請求項１２０～１２８または１３８～１４６の何れかに記載のポリペプチドをコードする１以上の核酸を含む、細胞。
- 癌を処置する方法であって、患者に請求項１～２０、３５～１１９または１２９～１３７の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または請求項１４７に記載の製剤を投与することを含む、方法。
- 急性放射線症候群を処置する方法であって、患者に請求項１～２０、３５～１１９または１２９～１３７の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または請求項１４７に記載の製剤を投与することを含む、方法。
- 急性放射線症候群が造血放射線症候群、消化器放射線症候群、神経血管放射線症候群、皮膚放射線症候群およびその何れかの組み合わせから選択される１以上の症候群を含む、請求項１５０に記載の方法。
- 患者にチェックポイント阻害剤、サイトカイン、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、化学療法剤、癌標的剤、腫瘍溶解性ウイルス、ワクチン、照射、養子ＮＫ治療、幹細胞移植(ＳＣＴ)治療、アゴニスト抗体、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)Ｔ細胞治療、多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)および細胞老化を誘導する薬剤から選択される第二治療剤を投与することをさらに含む、請求項１４９に記載の方法。
- チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＬＡＧ３抗体および抗ＴＩＭ３抗体から選択される、請求項１５２に記載の方法。
- ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニストおよびＴＬＲ３アゴニストから選択される、請求項１５２に記載の方法。
- ＳＴＩＮＧアゴニストがＡＤＵ－Ｓ１００である、請求項１５２に記載の方法。
- 化学療法剤がパクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル、ドキソルビシン、ゲムシタビンまたはシクロホスファミドである、請求項１５２に記載の方法。
- チェックポイント阻害剤がニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、リリルマブおよびモナリズマブから選択される、請求項１５２に記載の方法。
- ＴＬＲアゴニストがＲ８４８／レシキモド、ＶＴＸ－２３３７、イミキモドおよびＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドから選択される、請求項１５２に記載の方法。
- アゴニスト抗体が抗４－ＩＢＢ／ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＧＩＴＲ抗体および抗ＣＤ２７抗体から選択される、請求項１５２に記載の方法。
- サイトカインがＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０から選択される、請求項１５２に記載の方法。
- 多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)が
(ａ)ＮＫＧ２Ｄに結合する第一抗原結合部位；
(ｂ)腫瘍関連抗原に結合する第二抗原結合部位；および
(ｃ)ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部またはＣＤ１６に結合する第三抗原結合部位
を含み；
ここで、腫瘍関連抗原がＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３、ＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４、ＭＵＣ１、ｃＭＥＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＣＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、Ｂ７.１、Ｂ７.２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される、請求項１５２に記載の方法。 - 請求項１～２０、３５～１１９または１２９～１３７の何れかに記載のヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質または請求項１４７に記載の製剤が患者に静脈内、皮下、腹腔内または腫瘍内投与される、請求項１４９または１５２～１６１の何れかに記載の方法。
- 癌が急性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、消化器癌、消化器間質腫瘍、神経膠芽腫、頭頸部癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、腎臓細胞癌腫、神経芽腫、非小細胞肺癌、神経内分泌腫瘍、卵巣癌および膵臓癌、前立腺癌、肉腫、小細胞肺癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺癌腫、甲状腺癌、尿路上皮癌、骨髄由来サプレッサー細胞により浸潤された癌、細胞外マトリクス沈着を伴う癌、高レベルの反応性間質を伴う癌および新血管形成を伴う癌からなる群から選択される、請求項１４９または１５２～１６２の何れかに記載の方法。
- 患者に単回用量のみのヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質を投与することを含む、癌を処置する方法。
- 単回用量が癌に対する完全応答の誘導に十分な量である、請求項１６４に記載の方法。
- 単回用量が癌の再発遅延または予防に十分な量である、請求項１６５に記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が
(ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第一サブユニット；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第二の異なるサブユニットを含み、ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、ＩＬ－１２の第一サブユニットが第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、ここで、第一リンカーが第一アミノ酸配列を含み、ここで、第一アミノ酸配列がＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＸ１Ｘ２ＧＸ３(配列番号２３７)(ここで、Ｘ１はＬまたはＡであり、Ｘ２はＬ、ＥまたはＡであり、そしてＸ３はＡまたはＧである)を含み、
ここで、Ｘ１がＬであるおよび／またはＸ２がＬであるとき、第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドおよび第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドの少なくとも一方はヘテロ二量体化を促進するＱ３４７Ｒ変異を含み、
ここで、ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合している、請求項１６４～１６６の何れかに記載の方法。 - 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)を含む、請求項１６７に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号２３９)からなる、請求項１６８に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)を含む、請求項１６８または１６９に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号１０)からなる、請求項１７０に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)を含む、請求項１６７または１６８に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６５)からなる、請求項１７２に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)を含む、請求項１６７または１６８に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧ(配列番号６６)からなる、請求項１７４に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)を含む、請求項１６７に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号２３８)からなる、請求項１７６に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)を含む、請求項１７６または１７７に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号８)からなる、請求項１７８に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)を含む、請求項１７６または１７７に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１５)からなる、請求項１８０に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)を含む、請求項１７６または１７７に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧ(配列番号１６)からなる、請求項１８２に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)を含む、請求項１６７に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号２４０)からなる、請求項１８４に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)を含む、請求項１８４または１８５に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号１２)からなる、請求項１８６に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)を含む、請求項１８４または１８５に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６７)からなる、請求項１８８に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)を含む、請求項１８４または１８５に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＥＰＫＳＳＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＥＧＡ(配列番号６８)からなる、請求項１９０に記載の方法。
- ＩＬ－２のヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が
(ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第一サブユニット；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第二の異なるサブユニット
を含み、
ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、ＩＬ－１２の第一サブユニットが第一アミノ酸配列を含む第一リンカーにより第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、ここで、第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＸＧＧ(配列番号１)(ここで、ＸはＬまたはＥである)を含み、そして
ここで、ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合している、請求項１６４～１６６の何れかに記載の方法。 - 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)を含む、請求項１９２に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号２)からなる、請求項１９３に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)を含む、請求項１９３または１９４に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号３)からなる、請求項１９５に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)を含む、請求項１９３または１９４に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１３)からなる、請求項１９７に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)を含む、請求項１９３または１９４に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧ(配列番号１４)からなる、請求項１９９に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)を含む、請求項１９２に記載の方法。
- 第一アミノ酸配列がアミノ酸配列ＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号４)からなる、請求項２０１に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)を含む、請求項２０１または２０２に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号５)からなる、請求項２０３に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)を含む、請求項２０１または２０２に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６３)からなる、請求項２０５に記載の方法。
- ＩＬ－２の第二の異なるサブユニットが第二アミノ酸配列を含む第二リンカーにより第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドに融合しており、そして、ここで第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)を含む、請求項２０１または２０２に記載の方法。
- 第二アミノ酸配列がアミノ酸配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧ(配列番号６４)からなる、請求項２０７に記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が
(ａ)第一抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第一ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第一サブユニット；および
(ｂ)第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドを含む第二ポリペプチドおよびＩＬ－１２の第二の異なるサブユニット
を含み、
ここで、第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々ヘテロ二量体化を促進する異なる変異を含み、
ここで、第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＦｃのエフェクター機能を低減させる１以上の変異を含み、そして
ここで、ＩＬ－１２の第一サブユニットおよび第二の異なるサブユニットが互いに結合している、請求項１６４～１６６の何れかに記載の方法。 - エフェクター機能が抗体依存性細胞傷害(ＡＤＣＣ)、抗体依存性細胞食作用(ＡＤＣＰ)および／または補体依存性細胞傷害(ＣＤＣ)を誘導するＦｃの能力を含む、請求項２０９に記載の方法。
- ヘテロ二量体Ｆｃ融合タンパク質がフコシル化されている、請求項２０９または２１０に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドがヒト抗体Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項２０９～２１１の何れかに記載の方法。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤまたはＩｇＥ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項２０９～２１２の何れかに記載の方法。
- 第一および／または第二ポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、２３３、２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、３２２、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む、請求項２１３に記載の方法。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項２０９～２１４の何れかに記載の方法。
- 第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより、２３４、２３５、２３７、３２９、３３０および／または３３１の位置に１以上の変異を含む、請求項２１５に記載の方法。
- 第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ３２９Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓから選択される１以上の変異を含む、請求項２１６に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＡおよびＰ３２９Ａを含む、請求項２１７に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａを含む、請求項２１７に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓを含む、請求項２１７に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｃ２２０Ｓを含む、請求項２１５～２２０の何れかに記載の方法。
- 第一および第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインポリペプチドである、請求項２０９～２１４の何れかに記載の方法。
- 第一および／または第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが、ＥＵナンバリングシステムにより番号付けして、２３５および／または３２９の位置に１以上の変異を含む、請求項２２２に記載の方法。
- 第一および／または第二抗体ＦｃドメインポリペプチドがＬ２３５ＥおよびＰ３２９Ａから選択される１以上の変異を含む、請求項２２３に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５Ｅを含む、請求項２２３に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｌ２３５ＥおよびＰ３２９Ａを含む、請求項２２３に記載の方法。
- 第一および第二抗体Ｆｃドメインポリペプチドが各々変異Ｓ２２８Ｐを含む、請求項２２２～２２６の何れかに記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第二の異なるポリペプチドを含む、請求項１６４～１６６または２０９～２１９の何れかに記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が配列番号２９１のアミノ酸配列を含む第一ポリペプチドおよび配列番号２９０のアミノ酸配列を含む第二の異なるポリペプチドを含む、請求項１６４～１６６または２０９～２１９の何れかに記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が患者に腫瘍内、皮下、腹腔内または静脈内投与される、請求項１６４～２２９の何れかに記載の方法。
- ヘテロ二量体ＩＬ－１２－Ｆｃ融合タンパク質が患者に腫瘍内投与される、請求項２３０に記載の方法。
- 患者にチェックポイント阻害剤、サイトカイン、ＴＬＲアゴニスト、ＳＴＩＮＧアゴニスト、化学療法剤、癌標的剤、腫瘍溶解性ウイルス、ワクチン、照射、養子ＮＫ治療、幹細胞移植(ＳＣＴ)治療、アゴニスト抗体、キメラ抗原受容体(ＣＡＲ)Ｔ細胞治療、多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)および細胞老化を誘導する薬剤から選択される第二治療剤を投与することをさらに含む、請求項１６４～２３１の何れかに記載の方法。
- チェックポイント阻害剤が抗ＰＤ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗ＮＫＧ２Ａ抗体、抗ＬＡＧ３抗体および抗ＴＩＭ３抗体から選択される、請求項２３２に記載の方法。
- ＴＬＲアゴニストがＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、ＴＬＲ７／８アゴニスト、ＴＬＲ９アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニストおよびＴＬＲ３アゴニストから選択される、請求項２３２に記載の方法。
- ＳＴＩＮＧアゴニストがＡＤＵ－Ｓ１００である、請求項２３２に記載の方法。
- 化学療法剤がパクリタキセル、ｎａｂ－パクリタキセル、ドキソルビシン、ゲムシタビンまたはシクロホスファミドである、請求項２３２に記載の方法。
- チェックポイント阻害剤がニボルマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、アベルマブ、イピリムマブ、トレメリムマブ、リリルマブおよびモナリズマブから選択される、請求項２３２に記載の方法。
- ＴＬＲアゴニストがＲ８４８／レシキモド、ＶＴＸ－２３３７、イミキモドおよびＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドから選択される、請求項２３２に記載の方法。
- アゴニスト抗体が抗４－ＩＢＢ／ＣＤ１３７抗体、抗ＯＸ４０抗体、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＤ４０Ｌ抗体、抗ＧＩＴＲ抗体および抗ＣＤ２７抗体から選択される、請求項２３２に記載の方法。
- サイトカインがＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＣＸＣＬ９およびＣＸＣＬ１０から選択される、請求項２３２に記載の方法。
- 多特異的結合タンパク質(ＴｒｉＮＫＥＴ)が
(ａ)ＮＫＧ２Ｄに結合する第一抗原結合部位；
(ｂ)腫瘍関連抗原に結合する第二抗原結合部位；および
(ｃ)ＣＤ１６に結合するのに十分な抗体Ｆｃドメインもしくはその一部またはＣＤ１６に結合する第三抗原結合部位
を含み；
ここで、腫瘍関連抗原がＥｐＣＡＭ、ＣＤ２、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ５２、ＣＤ７０、ＥＧＦＲ／ＥＲＢＢ１、ＩＧＦ１Ｒ、ＨＥＲ３／ＥＲＢＢ３、ＨＥＲ４／ＥＲＢＢ４、ＭＵＣ１、ｃＭＥＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＰＳＣＡ、ＭＩＣＡ、ＭＩＣＢ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、Ｂ７.１、Ｂ７.２、ＣＴＬＡ４およびＰＤ－Ｌ１からなる群から選択される、請求項２３２に記載の方法。 - 癌が急性骨髄性白血病、急性骨髄単球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、膀胱癌、乳癌、結腸直腸癌、汎発性大Ｂ細胞リンパ腫食道癌、ユーイング肉腫、濾胞性リンパ腫、胃癌、消化器癌、消化器間質腫瘍、神経膠芽腫、頭頸部癌、黒色腫、中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、腎臓細胞癌腫、神経芽腫、非小細胞肺癌、神経内分泌腫瘍、卵巣癌および膵臓癌、前立腺癌、肉腫、小細胞肺癌、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、胸腺癌腫、甲状腺癌、尿路上皮癌、骨髄由来サプレッサー細胞により浸潤された癌、細胞外マトリクス沈着を伴う癌、高レベルの反応性間質を伴う癌および新血管形成を伴う癌からなる群から選択される、請求項１６４～２４１の何れかに記載の方法。
- 癌が転移癌である、請求項１４９または１５２～２４２の何れかに記載の方法。
- 転移癌が局所、領域性または遠位転移癌である、請求項２４３に記載の方法。
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