JP2021504482A - Ｉｌ‐６関連疾患を治療するためのヒト化抗体の液体製剤 - Google Patents

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Abstract

本願はＩＬ‐６関連疾患を治療するためのヒト化抗体の液体製剤に関する。前記液体製剤には、２〜１００ｍｇ／ｍｌ組換えヒト化抗ヒトインターロイキン‐６受容体モノクローナル抗体と、５〜２０ｍＭヒスチジン塩緩衝液（または５〜２０ｍＭヒスチジン塩と５〜２０ｍＭ酢酸ナトリウムとの組合せによる緩衝液）と、０．０２５‐０．０７５％（体積比）界面活性剤と、３‐５％（質量体積比）安定剤と、注射用水と、が含まれる。該抗体製剤は、組換え抗ヒトインターロイキン‐６受容体モノクローナル抗体の安定性を強化し、モノクローナル抗体の凝集と分解、及び酸異性体の増加を防止することができるとともに、ヒト化抗体の構造及び機能を安定させることができる。【選択図】図７Ｃ

Description

本願はインターロイキン‐６（ＩＬ‐６）関連疾患を治療するためのヒト化抗体の液体製剤に関する。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体は関節リウマチ（ＲＡ）を治療するための医薬品［１］であり、そのメカニズムは、可溶型及び膜結合型ＩＬ‐６受容体（ｓＩＬ‐６Ｒ及びｍＩＬ‐６Ｒ）に特異的に結合するとともに、ｓＩＬ‐６Ｒ及びｍＩＬ‐６Ｒが仲介するシグナル伝達を抑制することである。
ＩＬ‐６はＲＡ発症の過程において中枢神経系作用を担う［２］。ＩＬ‐６は、内皮細胞増殖及び血管新生を活性化させるとともに、血管内皮細胞で内皮細胞接着分子‐１（ＩＣＡＭ‐１）及び血管細胞接着分子‐１（ＶＣＡＭ‐１）を表現して、血液から関節へのリンパ球、好中球などの遊走をさらに促進すること、破骨細胞を活性化させて軟骨及び骨を壊すこと、並びに、ナイーブＴ細胞からＴｈ１７への分化を促進して、Ｔｈ１７によってＴ細胞からＲＡ炎症反応を悪化させるＴｈ１タイプへの分化を促進し、Ｔｒｅｇの分化を抑制すること、が可能である。Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇのインバランスによって免疫系の炎症悪化に対する抑制及び免疫寛容が弱まることは、自己免疫疾患及び慢性炎症などの複数の疾患の重要な病態形成メカニズムである。また、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体は、ＩＬ‐６刺激によるヘプシジンの生成を抑制して鉄の利用率を上昇させることで、血色素を上昇させ、ＲＡに伴う貧血を改善するとともに、ＩＬ‐６のＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達を抑制することで、肝細胞により分泌される急性期反応性蛋白質ＣＲＰ及び血清アミロイドＡを急速に低下させ、赤血球沈降速度を低下させて、全身性炎症反応を抑制する。抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体は、ＩＬ‐６とＩＬ‐６受容体との結合を特異的に遮断し、局所の炎症性細胞浸潤及び炎症性サイトカインの生成を低減させ、関節炎症による関節痛、関節腫脹、軟骨及び骨関節の破壊を緩和させて、炎症による脱力、食欲不振、貧血などの全身症状を軽減させることができるとともに、これまでの抗リウマチ薬で治療できない中等度または重度の関節リウマチ患者に対して優れた治療効果を有する。
ＲＡが世界中に広く分布している。近年、ＲＡの発病率が約１％で、女性患者が多く、男性患者の約３倍であると、多くの研究者に思われている。関節リウマチは各年齢層で発病するが、成人の中年女性によく見られ、更年期に入ると発病ピークになる。アメリカの統計データによれば、罹患率は、３５〜４４歳では０．９％であり、その後加齢に伴って増加し、５５〜６４歳では２．９％であり、６５歳以上になると４．９０％［３］までのぼる。統計データによれば、中国のＲＡ罹患率は約０．２４％〜０．４％［４］であり、高齢化に伴って更に増加する。ＲＡが中国の労働力喪失や身体障害に至る主な疾患である。ＲＡ患者の大半が進行性や破壊性のある病態を示す。症状が現れて２年間以内に、患者の５０％〜９０％には関節損傷のある放射線学による変化が現れ、未治療患者は２年間身体障害率が約５０％で、３年間身体障害率が７０％で、更に骨破壊が現れたら回復できない［５］。関節リウマチ患者の８０％以上は、的確な治療を積極的に受けることで、症状が緩和される。
本願によって開発された抗体製剤には、ＩＬ‐６による関連疾患を治療するために、活性成分である抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体が含まれる。安定的な活性を持つ抗体製品を提供するために、抗体の機能及び構造を長時間維持できるように抗体の安定保存に繋がる製剤を開発する必要がある。
本願は、モノクローナル抗体が含まれる安定的な液体製剤を提供すること、を目的とする。
本願の目的は下記の技術手段によって実現される。
本願は、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体、緩衝液系、安定剤及び界面活性剤が含まれる抗体製剤を提供する。本願の抗体製剤には、具体的に、
（１）２〜１００ｍｇ／ｍＬ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）５〜２０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、または５〜２０ｍＭヒスチジン塩と５‐２０ｍＭ酢酸ナトリウムとの組合せによる緩衝液である、緩衝剤によって前記製剤に形成されている緩衝系と、
（３）０．１〜１ｇ／Ｌ界面活性剤と、
（４）３０〜４００ｍＭ安定剤と、
（５）注射用水と、が含まれる。
前記抗体製剤のｐＨ値が５．０‐７．０である。
前記抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体は、遺伝子工学の手段によってＣＨＯ細胞で表現されたものであるとともに、一連の標準的なクロマトグラフィーステップによって精製して得られたものである。抗体が調製された後、医薬品製剤を調製する。
好適な実施形態として、製剤における前記抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度は１０‐９０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、製剤における前記抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度は１５‐５０ｍｇ／ｍＬである。特に好適な実施形態として、製剤における前記抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度は１８‐２５ｍｇ／ｍＬである。最も好適な実施形態として、製剤における前記抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。
好適な実施形態として、前記抗体にはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１に示される重鎖及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示される軽鎖が含まれている。より好適な実施形態として、前記抗体はＢＡＴ１８０６であり、さらに、前記ＢＡＴ１８０６にはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．１に示される２本の重鎖及びＳＥＱ ＩＤ ＮＯ．２に示される２本の軽鎖が含まれている。
このうち、前記安定剤が、アルギニン塩酸塩とショ糖との組合せ、マンニトール、塩化ナトリウムから選ばれ、さらに、５０〜２００ｍＭ（１０．５３３〜４２．１３２ｇ／Ｌ）アルギニン塩酸塩と５８〜２０５ｍＭ（２０〜７０ｇ／Ｌ）ショ糖との組合せから選ばれ、または１６７〜３８８ｍＭ（３０〜７０ｇ／Ｌ）マンニトールから選ばれ、さらにまたは１００〜３００ｍＭ（５．８５〜１７．５５ｇ／Ｌ）塩化ナトリウムから選ばれる。
このうち、前記界面活性剤がポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８の１種または複数種から選ばれる。好適な実施形態として、前記界面活性剤がポリソルベート８０から選ばれる。さらに、前記界面活性剤が０．１‐０．７ｇ／Ｌポリソルベート８０から選ばれる。
好適な実施形態として、前記抗体製剤のｐＨ値は５．５〜６．５である。より好適な実施形態として、前記抗体製剤のｐＨ値は６．０〜６．４である。更に好適な実施形態として、前記抗体製剤のｐＨ値は６．２である。
好適な実施形態として、本願の抗体製剤には、
（１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．４５ｇ／Ｌ〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）４０〜６０ｍＭアルギニン塩酸塩と、
（５）１５〜２５ｇ／Ｌショ糖と、
（６）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４であり、
または好ましくは、本願の抗体製剤には、
（１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．４５〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）３０〜４５ｇ／Ｌマンニトールと、
（５）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４であり、
または好ましくは、本願の抗体製剤には、
（１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩と、
（３）０．４５〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）９０〜１１０ｍＭ塩化ナトリウムと、
（５）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４である。
より好適な実施形態として、本願の抗体製剤には、
（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）５０ｍＭアルギニン塩酸塩と、
（５）２０ｇ／Ｌショ糖と、
（６）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、
またはより好ましくは、本願の抗体製剤には、
（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）３０ｇ／Ｌマンニトールと、
（５）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、
またはより好ましくは、本願の抗体製剤には、
（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）４２ｇ／Ｌマンニトールと、
（５）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、
またはより好ましくは、本願の抗体製剤には、
（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、
（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、
（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、
（４）１００ｍＭ塩化ナトリウムと、
（５）注射用水と、
が含まれており、ｐＨ値が６．２である。
本願の抗体製剤にはｐＨ値を調整するための塩基が更に含まれている。本願のモデル的な実施例において、前記塩基がＮａＯＨである。
本願の抗体製剤は含水製剤であり、その剤形が注射剤である。該製剤が皮下注射または静脈注射に適用される。
一方、本願は、更に
（１）緩衝剤、安定剤、界面活性剤を正確に量って、注射用水に溶解させるステップと、
（２）ステップ（１）で調製された液体を、ｐＨ値が５‐７になるように、水酸化ナトリウム水溶液で、好ましくは１Ｍ濃度の水酸化ナトリウム水溶液で調整するステップと、
（３）ステップ（２）で調製された液体を、細菌及び真菌がなくなるように、好ましくは０．２２ｕｍウェル径のろ過膜で滅菌容器にろ過するステップと、
（４）ステップ（３）で調製された液体を抗体液に入れるステップと、を備える前記抗体製剤の調製方法を更に提供する。
本願の抗体製剤はＩＬ‐６関連疾患を治療するための医薬品製剤である。前記ＩＬ‐６関連疾患は、具体的に、成人関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、巨細胞性動脈炎、巨大リンパ節過形成、免疫療法によるサイトカインストーム、成人スティル病、再発性多発軟骨炎、２型糖尿病、強直性脊椎炎、甲状腺眼症、関節リウマチによる心血管疾患、リウマチ性多発筋痛症、急性移植片対宿主病、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、全身性エリテマトーデス、統合失調症、ぶどう膜炎、卵巣がん、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、視神経脊髄炎、慢性糸球体腎炎、結腸直腸がんなどである。好適な実施形態として、前記ＩＬ‐６関連疾患は、成人関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、巨細胞性動脈炎、巨大リンパ節過形成である。
本願の好適な実施例において、前記抗体はＢＡＴ１８０６であり、組換えＤＮＡ技術を利用してＣＨＯ‐Ｋ１で生産して澄み切りによって培養用上澄みを取得した後に精製することにより得られたヒト用モノクローナル抗体である。そのメカニズムは、可溶型及び膜結合型ＩＬ‐６受容体（ｓＩＬ‐６Ｒ及びｍＩＬ‐６Ｒ）に特異的に結合するとともに、ｓＩＬ‐６Ｒ及びｍＩＬ‐６Ｒが仲介するシグナル伝達を抑制することである。前記抗体は、成人関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、巨細胞性動脈炎、巨大リンパ節過形成、免疫療法によるサイトカインストームなどのＩＬ‐６関連疾患に対して優れた治療効果を有する。
本願により提供された抗体製剤において、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の安定性を維持するために、適切な緩衝系の選定、安定剤の最適化、界面活性剤の添加など研究を重ねて得られた抗体製剤は、冷凍／解凍サイクル期間、長時間保存及び温度変化の過程で酸ピーク、二量体、多量体、分解生成物及び不溶性粒子の形成を効果的に抑制することができる。具体的に、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体は前記製剤において、少なくとも５回凍結融解サイクル後に安定性を維持することができ、室温で少なくとも６ヶ月安定保存でき、４℃で３６ヶ月安定保存できる。そのため、本願の抗体製剤は、臨床治験用抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の安定保存に適用され、ＩＬ‐６による関連疾患の治療に対して大きな意味を示している。
図１Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方のｐＨ値選定（４０℃高温）のＩＥＣ‐ＨＰＬＣ主ピーク解析を示すものである。 図１Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方のｐＨ値選定（４０℃高温）のＳＥＣ‐ＨＰＬＣ主ピーク解析を示すものである。 図２Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（５０℃高温）のＳＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；４ｄ：４日目；８ｄ：８日目；１２ｄ：１２日目。 図２Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（５０℃高温）のＳＥＣ多量体解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；４ｄ：４日目；８ｄ：８日目；１２ｄ：１２日目。 図２Ｃは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（５０℃高温）のＳＥＣ断片解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；４ｄ：４日目；８ｄ：８日目；１２ｄ：１２日目。 図２Ｄは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（５０℃高温）のＩＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；４ｄ：４日目；８ｄ：８日目；１２ｄ：１２日目。 図２Ｅは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（５０℃高温）のＩＥＣ酸ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；４ｄ：４日目；８ｄ：８日目；１２ｄ：１２日目。 図３Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（４０℃高温）のＳＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目；２５ｄ：２５日目。 図３Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（４０℃高温）のＳＥＣ多量体解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目；２５ｄ：２５日目。 図３Ｃは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（４０℃高温）のＳＥＣ断片解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目；２５ｄ：２５日目。 図３Ｄは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（４０℃高温）のＩＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目；２５ｄ：２５日目。 図３Ｅは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（４０℃高温）のＩＥＣ酸ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目；２５ｄ：２５日目。 図４Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（照射４０００Ｌｘ）のＳＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目。 図４Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６製剤処方の安定剤選定（照射４０００Ｌｘ）のＩＥＣ主ピーク解析を示すものである。（記号の説明）ＺＴ（ＰＢ）：１５ｍＭ ＰＢＳ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．５；ＺＴ（Ｈｉｓ）：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣＬ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ｐｒｏ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭプロリン、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＮａＣｌ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウム、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；ＧＬＣ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、４．２％マンニトール、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ：１０ｍＭ Ｈｉｓ緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、５％ショ糖、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；Ａｒｇ‐ＨＣｌ（ＮａＡＣ）：１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、１００ｍＭアルギニン塩酸塩、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ＝６．２；０ｄ：０日目；７ｄ：７日目；１４ｄ：１４日目。 図５Ａは、製剤ＥとＦの加速条件におけるＳＥＣトレンド図である。 図５Ｂは、製剤ＥとＦの加速条件におけるＩＥＣトレンド図である。 図５Ｃは、製剤ＥとＦの加速条件におけるＣＥ（非還元）トレンド図である。 図６Ａは、製剤Ｅの高温及び照射ＳＥＣトレンド図である。 図６Ｂは、製剤Ｅの高温及び照射ＩＥＣトレンド図である。 図６Ｃは、製剤Ｅの高温及び照射ＣＥ（非還元）トレンド図である。 図７Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６のＣＩＡモデルに対する治療効果の評価を示すものである。ＥＳＲ：赤血球沈降速度；＊Ｐ＜０．０５。（記号の説明）０ｄ：モデリング前；２８ｄ：モデリング後／投与前；４０ｄ：投与後７日目。 図７Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６のＣＩＡモデルに対する治療効果の評価を示すものである。ＩＬ‐６：インターロイキン‐６；＊Ｐ＜０．０５。（記号の説明）０ｄ：モデリング前；２８ｄ：モデリング後／投与前；４０ｄ：投与後７日目。 図７Ｃは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６のＣＩＡモデルに対する治療効果の評価を示すものである。ＩＬ‐６Ｒ：インターロイキン‐６受容体；＊Ｐ＜０．０５。（記号の説明）０ｄ：モデリング前；２８ｄ：モデリング後／投与前；４０ｄ：投与後７日目。 図８Ａは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６の静脈注射薬物動態学の研究を示すものである。 図８Ｂは、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６の皮下注射薬物動態学の研究を示すものである。
本願によれば、緩衝液及び安定剤の選定によって抗体製剤の配合を開発することで、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体製剤の安定性を強化し、モノクローナル抗体の凝集と分解、及び酸異性体の増加を防止することができる。
本願における「安定性」「安定」とは、抗体（抗体断片を含む）を含む液体製剤において、所定の生産、調製、輸送および／または保存条件で、抗体（抗体断片を含む）の凝集、分解または断片化が発生しない、或いは僅かに発生することである。「安定」する製剤が、所定の生産、調製、輸送および／または保存条件で生物活性を持つ。例えば、ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ、ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ、ＣＥ‐ＳＤＳなどの技術を利用して前記製剤の凝集、分解または断片化の程度などを測定することで、前記抗体（抗体断片を含む）の安定性を評価する。
本願において、例えば「製剤に緩衝液または緩衝系が含まれる」ことに関しては、「製剤に緩衝剤が含まれ、緩衝剤によって前記製剤に緩衝系が形成される」ことを意味するので、了承されたい。
本願にかかる一実施態様において、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は約２〜１００ｍｇ／ｍＬである。好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１０‐９０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１５‐５０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１８‐２５ｍｇ／ｍＬである。特に好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１８‐２２ｍｇ／ｍＬである。最も好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。該実施態様において、リン酸塩（ＰＢ）緩衝液、ヒスチジン塩（Ｈｉｓ）緩衝液、クエン酸塩ＣＢ（ＮＭＳ）緩衝液、リン酸塩＋酢酸（ＨＡＣ）緩衝液、クエン酸塩＋酢酸緩衝液、ヒスチジン塩＋酢酸ナトリウム（ＮａＡＣ）緩衝液の計６種類緩衝液系の抗体安定性に対する影響について評価した。前記緩衝液のうち、ヒスチジン塩緩衝液及びヒスチジン塩＋酢酸ナトリウム緩衝液の効果が最も優れ、クエン酸塩緩衝液及びリン酸塩＋酢酸緩衝液の効果が次に優れ、単独のＰＢ緩衝液の効果が最も劣る。
本願にかかる他方の一実施態様において、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は約２〜１００ｍｇ／ｍＬである。好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１０‐９０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１５‐５０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１８‐２５ｍｇ／ｍＬである。特に好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度が１８‐２２ｍｇ／ｍＬである。最も好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は２０ｍｇ／ｍｌ。該実施態様において、緩衝液にショ糖（ＺＴ）、マンニトール（ＧＬＣ）、アルギニン塩酸塩（Ａｒｇ‐ＨＣｌ）、プロリン（Ｐｒｏ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）などの適量の安定剤を入れて、抗体安定性に対する影響について評価した。安定剤の添加によって製剤の安定性が更に増強されたが、各種安定剤の抗体安定性に対する効果の差はそれほど大きくはない。
本願にかかる他方の一実施態様において、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は約２〜１００ｍｇ／ｍｌである。好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１０‐９０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１５‐５０ｍｇ／ｍＬである。より好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度が１８‐２５ｍｇ／ｍＬである。特に好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は１８‐２２ｍｇ／ｍＬである。最も好適な実施形態として、前記抗体製剤における前記モノクローナル抗体の濃度は２０ｍｇ／ｍｌである。該実施態様において、適量の緩衝液及び安定剤が含まれる処方にポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８などの適量の界面活性剤（洗剤）を入れて、繰返し凍結融解後の製剤処方における不溶性粒子に対する影響について評価した。前記界面活性剤の何れも凍結融解後の製剤処方における不溶性粒子の発生を減少させることができるが、各種界面活性剤同士の差異はそれほど大きくはない。
緩衝液、安定剤及び界面活性剤の選定によって好適な処方を選定する。このうち、一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ有効量の抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２０ｇ／Ｌショ糖、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４である。他方の一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ有効量の抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、３０ｇ／Ｌマンニトール、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４である。他方の一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ有効量の抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、４２ｇ／Ｌマンニトール、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４である。他方の一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ有効量の抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体、１０ｍＭヒスチジン塩酸塩、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、１００ｍＭ塩化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４である。他方の一処方は、５０ｍｇ／ｍｌ有効量の抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２０ｇ／Ｌショ糖、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４である。
本願の抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体製剤における各種構成のうち、緩衝系が最も重要な管理の一環であるとともに、より優れた安定性を得るために、好ましくは緩衝系がヒスチジン塩緩衝系である。緩衝液が該抗体のｐＨ値範囲を最適に調整するだけでなく、安定剤の機能をある程度持っているので、緩衝液の種類の選定は必要である。抗体安定性は抗体タイプによって各要因から受ける影響の程度及び結果が異なる。本願の製剤系は出願者の豊富な経験を基に設計された技術提案の候補である。しかしながら、その最終的な実験結果は予想できないものであり、または長時間保全試験による検証が必要である。外因性緩衝系は全種抗体の製剤安定性に対して重要な影響を有するわけではない。例えば、ａｄａｌｉｍｕｍａｂのようなその他の抗体について、安定性の選定結果や経験によれば、その最も重要な影響要因は緩衝系の選定ではなく、安定剤の選定である。これは、高濃度蛋白質自身の緩和効果によってｐＨ値が保存期間にわたって最適な範囲内に維持されるためである。
前記好適な製剤処方の安定性、体内体外における薬効、薬物動態学について評価した結果、本願の前記抗体製剤は、室温で少なくとも６ヶ月安定保存、４℃で３６ヶ月安定保存することができ、少なくとも５サイクル凍結融解後も安定性が維持される。前記好適な製剤処方は、似たような体内体外における薬効及び薬物動態学特徴を有する。
本願のモノクローナル抗体が含まれる液体製剤は、活性成分が安定保存できる製剤組合せを提供した。好適な処方の製剤配合は下記の通りであり、それぞれＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ製剤で表す。
このように、本願は、２〜１００ｍｇ／ｍｌ抗体と、５〜２０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、０．２５‐１ｇ／Ｌポリソルベート８０と、安定剤（５０〜１２０ｍＭアルギニン塩酸塩と１０‐５０ｇ／Ｌショ糖との組合せ、１０‐５０ｇ／Ｌマンニトール、または５０〜１２０ｍＭ塩化ナトリウムから選ばれる）と、が含まれ、ｐＨ値５．０〜７．０である、モノクローナル抗体を保護するための抗体製剤処方、を提供する。好適な一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２０ｇ／Ｌショ糖、ｐＨ値を調整するための水酸化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値５．０〜７．０（製剤Ａと略す）である。他方の好適な一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、３０ｇ／Ｌマンニトール、ｐＨ値を調整するための水酸化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値５．０〜７．０（製剤Ｂと略す）である。他方の好適な一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、４２ｇ／Ｌマンニトール、ｐＨ値を調整するための水酸化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値５．０〜７．０（製剤Ｃと略す）である。他方の好適な一処方は、２０ｍｇ／ｍｌ抗体、１０ｍＭヒスチジン塩、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、１００ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ値を調整するための水酸化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値５．０〜７．０（製剤Ｄと略す）である。他方の一処方は、５０ｍｇ／ｍｌ抗体、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２０ｇ／Ｌショ糖、ｐＨ値を調整するための水酸化ナトリウム、注射用水、ｐＨ値６．０〜６．４（製剤Ｆと略す）である。このように、本願により提供された抗体製剤において、適切な緩衝系の選定、安定剤の最適化、界面活性剤の添加などによって、冷凍／解凍サイクル、長時間保存、温度や照射変化の過程による酸ピーク、多量体、分解生成物及び不溶性粒子の増加を効果的に抑制することで、活性成分を長時間にわたって安定保存することができる。このうち、緩衝系の選定が製剤の安定に対して最も重要な効果を持っているが、リン酸塩緩衝液よりもヒスチジン塩緩衝液を選定することで、長時間保存及び温度変化の過程で酸異性体、多量体、分解生成物の形成を効果的に抑制することができる。
次から、具体的な実施例によって本願の技術提案についてさらに説明するが、具体的な実施例は本願の保護範囲を限定するものではない。第三者が本願の趣旨を基に行われる本質的でない補正や調整は本願の保護範囲にある。
本願において、「質量体積比」とは構成の質量と製剤の体積との比であるので、了承されたい。
「ヒスチジン塩緩衝系」はヒスチジンとヒスチジン塩酸塩との組合せである。好適な実施例として、好ましくは０．８１ｇ／Ｌヒスチジンと、１．０１ｇ／Ｌヒスチジン塩酸塩とが含まれる緩衝液である。
抗体サンプル
ＢＡＴ１８０６抗体は抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体であり、抗体調製技術を利用してＢＡＴ１８０６を安定的に表現できるＣＨＯ細胞株を構築し、上澄みを得て表現した後にＰＲＯＴＥＩＮ Ａカラムで精製して得られたものである。
製剤調製
本願のモノクローナル抗体が含まれる液体製剤は、活性成分が安定保存できる製剤組合せを提供した。好適な製剤配合は、表１Ａ、表１Ｂ、表１Ｃ、表１Ｄ、表１Ｅ、表１Ｆに示される。
本願の抗体製剤の調製方法は、
（１）緩衝剤、安定剤、界面活性剤を正確に量って、注射用水に溶解させるステップと、
（２）ステップ（１）で調製された液体を、ｐＨ値が５‐７になるように、水酸化ナトリウム水溶液で、好ましくは１Ｍ濃度の水酸化ナトリウム水溶液で調整するステップと、
（３）ステップ（２）で調製された液体を、好ましくは０．２２ｕｍウェル径のろ過膜で滅菌容器にろ過するステップと、
（４）ステップ（３）で調製された液体を抗体液に入れるステップと、を備える。
代表的な的一例として、本願の１０Ｌ製剤Ａの製剤緩衝液（抗体ＢＡＴ１８１０６を含まない）の調整方法は下記の通りである。
１０．０８ｇヒスチジン、７．３４ｇヒスチジン塩酸塩、１０５．３３ｇアルギニン塩酸塩、２００ｇショ糖、５ｍｌポリソルベート８０を、正確に量る。１Ｍ濃度の溶液になるように、注射用水に水酸化ナトリウムを溶解させる。
前記正確に量った成分を約９Ｌ注射用水に溶解させる。製剤成分の添加順番は製剤の品質に影響を与えないので、自由に選択しても良い。
前記製剤成分を添加した後、ｐＨ値を調節するために１Ｍ水酸化ナトリウムを添加する。最後に、容積が１０Ｌになるように注射用水を入れる。その後、前記１０Ｌ製剤を、０．２２ｕｍウェル径の親水性ポリフッ化ビニリデンのろ過膜によって滅菌容器にろ過する。
１０Ｌ製剤Ａ（抗体ＢＡＴ１８００６を含む）の調製方法は下記の通りである。
前記滅菌ろ過済みの製剤Ａの製剤緩衝液（抗体ＢＡＴ１８０６を含まない）が調製された後、前記製剤Ａの緩衝液を抗体濃縮物に入れる。抗体が含まれる液体製剤を調製する前に、水浴（常温）で前記抗体濃縮物を解凍する。無菌操作において、前記製剤Ａの緩衝液を攪拌しながら２００ｇ総抗体量の抗体濃縮物に添加し、本願にかかる抗体が含まれる液体製剤Ａを得る。
抗体が含まれる液体製剤を調製した後、バイアル用または事前充填式注射器用のために前記試薬を包装する。
本願にかかる重量、重量と体積との比、体積と体積との比を、前記成分の周知の分子量でモルおよび／またはモル濃度に換算することは、当業者にとって容易に理解できる。本願に挙げられる重量は前記体積に使用されるものである。その他の製剤体積が必要とする場合、前記重量を比例して調整することは、当業者にとって容易に理解できる。例えば、１６Ｌ、１４Ｌ、１２Ｌ、１０Ｌ、５Ｌ製剤には、挙げられる重量のそれぞれ１．６、１．４、１．２、１．０、０．５倍が含まれる。
その他の５種類製剤（製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄ、製剤Ｅ、製剤Ｆ）の調製方法は製剤Ａの調製方法と類似するが、量る試薬及び重量を適切に調整するだけで良い。
緩衝液の選定
複数の緩衝液系を使って抗体安定性を検討する。
出願者は経験に基づき、抗体の性質に応じて最初に下記の複数の緩衝液系を選定する。
ＰＢ、Ｌ‐Ｈｉｓ、ＣＢ（ＮＭＳ）、ＰＢ＋ＨＡＣ、ＣＢ＋ＨＡＣ、Ｌ‐Ｈｉｓ＋ＮａＡＣ
前記各英語略の意味が下記の通りである。
ＰＢ：１５ｍＭリン酸塩緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．５
Ｌ‐Ｈｉｓ：１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．４
ＣＢ：１０ｍＭクエン酸塩緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．４
ＰＢ＋ＨＡＣ：５ｍＭリン酸塩＋５ｍＭ酢酸ナトリウムの混合緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．４
ＣＢ＋ＨＡＣ：５ｍＭクエン酸塩＋５ｍＭ酢酸ナトリウムの混合緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．４
Ｌ‐Ｈｉｓ＋ＮａＡＣ：５ｍＭヒスチジン塩＋５ｍＭ酢酸ナトリウムの混合緩衝液、ｐＨ値６．０〜６．４
安定性試験を行う抗体‐緩衝液系において、２０ｍｇ／ｍｌ抗体（ＢＡＴ１８０６）と、１０〜１５ｍＭ緩衝液（表２を参照）が含まれ、ｐＨ値が６．０〜６．４である。
高温４０℃で２１日間放置された各配合について検討した結果、単体純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ、略称ＳＥＣ）及び電荷異性体（ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ、略称ＩＥＣ）のトレンドを表２に示す。
ＳＥＣ‐ＨＰＬＣの解析方法：
供試品を水で５ｍｇ／ｍｌ供試品溶液に希釈させる。クロマトカラムがＴＳＫ‐ＧＥＬ Ｇ３０００ＳＷＸＬ ７．８×３００ｍｍ、５μｍ（ＴＯＳＯＨ）であり、移動相が２００ｍＭ Ｋ３ＰＯ４、２５０ｍＭ ＫＣｌ（ｐＨ７．０）である。紫外線検出波長を２８０ｎｍとし、カラム温度を３０℃とする。サンプルロード量４０μｌ（２００μｇ蛋白質）、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで３５ｍｉｎアイソクラティック運転して、クロマトグラムを記録し、積分を行った後、相対面積比較法で供試品溶液における単体、多量体の含有量パーセントを算出する。
ＩＥＣ‐ＨＰＬＣの解析方法：
供試品を水で５ｍｇ／ｍｌ供試品溶液に希釈させる。クロマトグラフィー条件：クロマトカラムがＴＳＫ‐ＧＥＬ ＣＭ‐ＳＴＡＴ（登録商標） ４．６×１００ｍｍ、７μｍ（ＴＯＳＯＨ）であり、移動相が移動相Ａ（２０ｍＭ ＡＣＥＳ，ｐＨ８．０）及び移動相Ｂ（２０ｍＭ ＡＣＥＳ＋２００ｍＭ ＮａＣｌ，ｐＨ８．０）であり、サンプルロード量が５０μｇであり、検出波長が２８０ｎｍであり、下記の溶出勾配で勾配溶出を行い、運転時間が４５ｍｉｎである。クロマトグラムを記録する。積分を行った後、相対ピーク面積比較法で主ピーク、酸エリア、塩基エリアの含有量パーセントをそれぞれ算出する。（クロマトグラムに対して手動で積分を行う。ベースラインが平坦になるような箇所でベースラインを作成する。積分の開始時間と終了時間は主ピークの保持時間前後約８分間である。主ピークの左右にある２つのバレーで垂線を引き、主ピークより前は酸エリアであり、主ピークより後は塩基エリアである（主ピークより後は塩基ピーク１、塩基ピーク２、塩基ピーク３の順で続く）。塩基エリアにおいて、各バレーで垂線を引く。）
上記の試験結果によれば、ヒスチジン塩緩衝液、ヒスチジン塩＋酢酸ナトリウム緩衝液という最適な処方を選定する。ヒスチジンがｐＨ値６．０‐６．４の範囲で主に機能するが、酢酸ナトリウムの緩衝能力がｐＨ値４．５‐５．８程度で発揮する。組合せの結果が良い主な理由は、ヒスチジン塩による影響のためである。ヒスチジン塩とヒスチジン塩＋酢酸ナトリウムとを比較すれば、試験結果には大きな差異がない。単体緩衝液と組合せ緩衝液との結果には大きな差異がなければ、なるべく簡単な処方を選定する。そのため、ヒスチジン塩緩衝液を最適な緩衝液に選定する。高温実験後のＳＥＣ凝集とＩＥＣ酸ピークに関して、ヒスチジン塩緩衝液はその他の緩衝液または組合せ緩衝液よりも明らかに低い。
ヒスチジン塩の濃度を選定した結果、濃度範囲５〜２０ｍＭ、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ値６．０〜６．４のヒスチジン塩緩衝液を調製する。４０℃高温で２１日間放置された場合について検討した結果、ＳＥＣ及びＩＥＣのトレンドが表３に示す。これにより、ヒスチジン塩緩衝液が５〜２０ｍＭ範囲内で良好な緩衝保護効果を有することが分かる。
製剤緩衝液の最適なｐＨ値を選定した結果、濃度１０ｍＭ、蛋白質濃度２０ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ値範囲５．４‐６．９のヒスチジン塩緩衝液を調製する。４０℃高温で２１日間放置された場合について検討した結果、ＳＥＣ及びＩＥＣのトレンドが図１に示す。ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ及びＩＥＣ検出の主ピークデータを基に作成した図によれば、時間経過に伴って、ｐＨ値５．７〜６．２の範囲で良好な緩衝保護効果を有することが分かる。ｐＨ値６．２はｐＨ値６．０よりも良く、その他のｐＨ値よりも良い。ｐＨ値６．２におけるサンプル安定性が高いことが分かる。
安定剤の選定
安定剤を選定する系において、含まれる抗体、緩衝液及び安定剤を表４に示す。
２５℃、４０℃、５０℃及び照射の条件で３ヶ月放置された各配合について検討した結果、単体純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ、略称ＳＥＣ）及び電荷異性体（ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ、略称ＩＥＣ）のトレンドを表４に示す。検出方法は実施例２を参照する。
抗体製剤でよく使用される安定剤は糖アルコール類、アミノ酸、塩類などが挙げられる。安定剤は、抗体の構造を安定させるとともに、外力による蛋白質分子の凝集と分解、酸性電荷異性体の形成を減少させることができる。該抗体は、ＰＢ、Ｈｉｓ、ＮａＡＣなどの異なる緩衝系と、ショ糖（ＺＴ）、マンニトール（ＧＬＣ）、アルギニン塩酸塩（Ａｒｇ‐ＨＣｌ）、プロリン（Ｐｒｏ）、塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）などの異なる安定剤と、の組合せ処方において比較的に安定である。４０℃高温、５０℃高温、照射試験の結果はそれぞれ図面２‐４を参照する。高温条件では、安定剤性能の高いものから順に並べると、ＧＬＣ＝Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ、Ａｒｇ‐ＨＣＬ、ＺＴ、ＮａＣｌ、Ｐｒｏになる。照射条件でＳＥＣ主ピークを解析した結果、安定剤性能の高いものから順に並べると、Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ≧Ｐｒｏ≧Ａｒｇ‐ＨＣＬ≧ＺＴ≧ＧＬＣ≧ＮａＣｌになる。照射条件でＩＥＣ主ピークを解析した結果、安定剤性能の高いものから順に並べると、Ａｒｇ‐ＨＣＬ≧Ａｒｇ‐ＨＣｌ＋ＺＴ≧Ｐｒｏ≧ＺＴ≧ＧＬＣ≧ＮａＣｌになる。２５℃で３ヶ月加速安定性試験を行った結果、ヒスチジン塩（Ｈｉｓ）緩衝液において、蛋白質の凝集と分解に対する安定能力に関して、各安定剤が類似するが、酸異性体の形成を減少させることに関して、安定剤性能の高いものから順に並べると、Ａｒｇ‐ＨＣＬ、ＮａＣｌ、ＧＬＣ、ＺＴ、Ｐｒｏになる。温度、照射の抗体安定性に対する影響の試験に基づいて選定された緩衝液と安定剤との最適な組合せは下記の通りである。一組合せは、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、５０ｍＭアルギニン塩酸塩、２％ショ糖である。他方の一組合せは、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、３％マンニトールである。他方の一組合せは、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、４．２％マンニトールである。他方の一組合せは、１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、１００ｍＭ塩化ナトリウムである。
また、２５℃で３ヶ月加速安定性試験を行った結果、安定剤を添加しないヒスチジン塩（Ｈｉｓ）組と安定剤を添加したＺＴ（Ｈｉｓ）組とを比較すると、３ヶ月後のＳＥＣ主ピークはそれぞれ９７．０６％と９７．７６％であり、ＩＥＣ主ピークはそれぞれ６１．９４％と６３．１７％である。これにより、安定剤を添加した（ヒスチジン塩）Ｈｉｓ組は安定剤を添加しない（ヒスチジン塩）Ｈｉｓ組よりも、ＳＥＣ主ピークが約０．７％多く、ＩＥＣ主ピークが約２％多くなる。安定剤を添加しないＰＢ組と安定剤を添加したＺＴ（ＰＢ）組とを比較すると、３ヶ月後のＳＥＣ主ピークはそれぞれ９５．５１％と９６．１１％であり、ＩＥＣ主ピークはそれぞれ５０．２６％と５５．１０％である。安定剤を添加したＰＢは安定剤を添加しないＰＢよりも、ＳＥＣ主ピークが約０．６％多く、ＩＥＣ主ピークが約５％多くなる。安定剤を添加せず異なる緩衝系を使用する場合、３ヶ月後のＰＢ組と（ヒスチジン塩）Ｈｉｓ組のＳＥＣ主ピークはそれぞれ９５．５１％と９７．０６％であり、ＩＥＣ主ピークはそれぞれ５０．２６％と６１．９４％である。ヒスチジン塩（Ｈｉｓ）緩衝液はＰＢ緩衝液よりも、ＳＥＣ主ピークが約１．５％多く、ＩＥＣ主ピークが約１１％多くなる。これにより、適切な緩衝液を選定することは、該抗体の安定性維持に対して非常に重要であり、緩衝液は該抗体の構造変化の減少や主ピークの純度の増加に対しても重要である。表４を参照する。
界面活性剤の選定
界面活性剤を選定する系において、含まれる抗体、緩衝液、安定剤、界面活性剤を表５に示す。
‐２０℃〜４℃で３回凍結融解した後の各配合における不溶性粒子数について検討した。
不溶性粒子数の測定方法は、「中華人民共和国薬典２０１５年版第４部」の「通則０９０３：不溶性粒子検査法」に準拠する。器具を合格まで洗浄した後、供試品４瓶をスーパークリーンベンチに取る。容器の外壁を水で洗浄し、容器を２０回上下反転して十分に混ぜた後に、２分間静置して脱気する。サンプルを解析器に置き、１瓶につき器具で１回測定し、１回あたりのサンプリングサイズが３．０ｍｌである。サンプル４瓶を測定した後、後の３瓶のデータ平均値を取り、１瓶あたりの総粒子数を算出する。
冷凍／解凍サイクルを行う場合、抗体製剤に不溶性粒子が発生しやすいため、一定量の界面活性剤を添加することで不溶性粒子の発生を防止できる。よく使用される界面活性剤は、例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８などの非イオン界面活性剤が挙げられる。本実施例において、緩衝液と安定剤が含まれる配合に０．１％ポリソルベート２０、０．０５％ポリソルベート８０または０．１％ポロクサマー１８８をそれぞれ添加して、‐２０℃〜４℃で３回凍結融解した後に、不溶性粒子数を確認する。その結果、３種の界面活性剤の何れも凍結融解による不溶性粒子を抑制することができるが、その効果も同様である。表５を参照する。
凍結融解の検討
実施例１に記載される方法で、抗体濃度２０ｍｇ／ｍｌのＢＡＴ１８０６抗体製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄ及び濃度５０ｍｇ／ｍｌのＢＡＴ１８０６抗体製剤Ｆを調製する。製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄに対して‐２０℃〜４℃で凍結融解を５回繰返し、製剤Ｆに対して‐２０℃〜室温で凍結融解を５回繰り返す。抗体濃度をＥＬＩＳＡ検出して、５回凍結融解後の製剤溶液における抗体含有量の安定性を確認する。また、製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄに対して急速と遅速の凍結融解を、‐２０℃〜４℃、‐２０℃〜３７℃、‐８０℃〜４℃、‐８０℃〜３７℃でそれぞれ５サイクル行い、製剤Ｆに対して‐２０℃〜室温で凍結融解を５回繰り返す。透明性、色、ｐＨ値、不溶性粒子、ＳＥＣ、ＩＥＣ、細胞活性変化を確認する。
ＥＬＩＳＡ検出方法は下記のように簡単に説明する。被覆抗原組換えヒトインターロイキン‐６受容体（ｒｈＩＬ‐６Ｒ）、１ｕｇ／ｍｌ、１００ｕｌ／ウェルである。５％ＢＳＡが含まれるＰＢＳで封鎖する。ＢＡＴ１８０６抗体製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄをそれぞれ１×１０５倍希釈させて、１ウェルあたり１００ｕｌ、各希釈度の抗体につき５ウェルという条件で、サンプルをロードする。標準品の開始濃度を１ｕｇ／ｍｌとし、２％ＢＳＡが含まれるＰＢＳにて８勾配で２倍希釈して検量線とし、マウス抗ヒトＩｇＧ ｋａｐｐａ‐ＨＲＰを二次抗体とし、Ｅｌｉｓａ検出を行う。
細胞活性検出方法は下記のように簡単に説明する。抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６の抗体標準品を標準品とし、開始終濃度を２０ｕｇ／ｍｌとし、勾配希釈を行い、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。検出待ちサンプルも検量線サンプルの希釈方法で希釈して、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。ｈＩＬ‐６を４ｎｇ／ｍｌまで希釈させ、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。対数増殖期のＴＦ‐１細胞をとり、１０００００ ｃｅｌｌｓ／ウェル／１００ｕｌで９６ウェルプレートに接種する。３７℃ ５％ ＣＯ２インキュベーターで７２時間培養する。５０ｕｌ／ウェルでＣｅｌｌｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬を入れる。室温で日陰に２時間放置した後、ＥＬＩＡＳＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ）でＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏ法によりマイクロウェルプレートのデータを取得し、４つのパラメータで曲線のＣ値を当て嵌め（ＩＣ５０）、計算式：相対比活性＝［標準品ＩＣ５０／検出待ちサンプルＩＣ５０］×１００％により算出した結果が８０％‐１２５％である場合、検出待ちサンプルの活性が正常であると考えられる。
結果から、ＢＡＴ１８０６抗体製剤の５回凍結融解後、その回収率範囲は９７．５‐１０２．４％である。抗体製剤を冷凍保存の条件で５回凍結融解した後、抗体の含有量がほとんど変わらない。表６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅを参照する。抗体製剤を‐２０℃または‐８０℃から急速または遅速で解凍し、５回凍結融解した後、透明性、色、ｐＨ値、不溶性粒子、ＳＥＣ、ＩＥＣ、細胞活性の何れも明らかな変化を示していないことから、繰返し凍結融解試験においてサンプルの性質が安定であり、溶出物がなく、蛋白質にほとんど付着せず、サンプル性状への影響がない。また、サンプルのＳＥＣ‐ＨＰＬＣ純度、ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量などの検出項目も明らかな変化がなく、５回凍結融解した後の活性が合格範囲内である。
表７Ａ、７Ｂ、７Ｃ、７Ｄ、７Ｅを参照する。
微生物の検討
前記製剤が微生物の増殖をサポートできるかについて明確にするために、医薬品製剤（製剤Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）の微生物について検討する。微生物（例えば、黄色ブドウ球菌、ＡＴＤＤ‐ＮＯ．：６５３８ｐ、Ｔｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ Ａｌｂｕｍ、ＡＴＤＤ‐ＮＯ．：１０２３１、アスペルギルスニガー、ＡＴＤＤ‐ＮＯ．：１６４０４、環境分離物）を低レベル（ＮＭＴ１００ ｃｆｕ／ｍｌ）で前記無菌製剤に接種して、接種済み製剤の全体微生物増殖を検出する。評価の指標は主に顕微鏡で確認する微生物数及び濁度変化である。このうち、濁度無しは、全体増殖の指標がなく、１４日間後接種済み容器で検出することを意味する。なお、これらの容器から微生物を再度分離できない。表８によれば、室温２０‐２５℃で１４日間保存する場合、前記製剤が微生物増殖をサポートしないことが分かる。
加速安定性の検討
実施例１に記載される方法で、医薬品製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄ、製剤Ｅ、製剤Ｆを調製する。前記６種類の製剤を生化学インキュベーターに（２５±２）℃で６ヶ月放置し、０、１、２、３、６ヶ月目の月末でそれぞれサンプリングする。安定性の重点考察項目で検出を行い、サンプルの単体純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）、電荷異性体（ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ）、非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ‐ＳＤＳ‐ＮＲ）、不溶性粒子、細胞活性を考察する（表９を参照）。また、製剤Ｆに対して、加速条件における溶液性状、ｐＨ値、抗体含有量を更に考察した。
単体純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）、電荷異性体（ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ）の検出方法は実施例２を参照する。（ＣＥ‐ＳＤＳ‐ＮＲ）の解析方法は下記の通りである。組換え供試品を４ｍｇ／ｍｌまで希釈させる。希釈された供試品溶液を２５μｌ取り、更に７０μｌ ＣＥ‐ＳＤＳ Ｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒ及び５μｌ ０．２５Ｍ ヨードアセトアミド水溶液を入れ、十分に混ぜた後に、６５℃水浴で４ｍｉｎ加熱し、サンプル瓶に移動させて、対照品液を得る。‐５．０ｋＶ電圧でサンプルを１０ｓロードした後、‐１５ｋＶ電圧で分離解析し、ハップマップを記録して、１４〜３５ｍｉｎで自動で積分を行う。主ピークが完全抗体蛋白質のクロマトグラフィーピークであり、主ピークの前にある雑物ピークがＦｒａｃｔｉｏｎのクロマトグラフィーピーク（Ｌピーク、Ｈピーク、ＨＬ、ＨＨ、ＨＨＬピーク）であり、相対面積比較法で単体ピークの含有量パーセントを算出する。不溶性粒子の解析方法は実施例４を参照する。細胞活性検出の方法は実施例５を参照する。
結果は表９を参照する。表９によれば、加速安定性の検討条件では、６ヶ月内に単体純度が時間の経過とともに低減していくことから、加速条件でポリマーが発生することが分かるが、抗体のＳＥＣ主ピークの低減が２．２８％以内である。ＩＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、２５℃条件では抗体のＩＥＣ主ピーク含有量も低減し、分解傾向も基本的に一致するが、ＩＥＣの主ピーク低減が１６．５４％以内である。ＣＥ‐ＳＤＳ‐ＮＲ主ピークの低減が２．１％以内であり、不溶性粒子が合格標準よりも大幅低いが、細胞活性物が明らかな変化がない。上記のことから、本願の抗体製剤は室温で６ヶ月以内に安定性を維持することができる。
製剤Ｅの溶液性状、ｐＨ値及び抗体濃度の結果が表１０を参照する。表のデータによれば、２５℃で６ヶ月放置した後の方は０日目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、サンプルのｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、加速試験において、サンプルは比較的に安定である。
上記表のデータによれば、製剤Ｅを２５℃で６ヶ月放置した後の方は０日目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、サンプルのｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、加速試験において、サンプルは比較的に安定である。
製剤ＥとＦの２５℃加速条件におけるＳＥＣ、ＩＥＣ、ＣＥ（非還元）トレンド図はそれぞれ図５Ａ‐５Ｃを参照する。製剤Ｅと製剤Ｆ（同じ処方で異なる濃度の抗体）を比較すれば、２５℃で加速実験を行った６ヶ月後のＳＥＣ、ＩＥＣ、ＣＥ（非還元）主ピークの分解傾向が一致するが、ＳＥＣ主ピークの単体純度が９６．５％以上であり、ＣＥ（非還元）主ピークが９４％以上であり、ｐＨ値、粒子、生物活性も品質標準と合致する。上記のことから、該処方が異なる濃度の抗体に対して安定性を有する。
長時間安定性の検討
実施例１に記載される方法で医薬品製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄを調製する。前記４種類の製剤を４℃で３６ヶ月放置し、０、３、６、９、１２、２４、３０、３６ヶ月目の月末でそれぞれサンプリングする。サンプルの純度（ＳＥＣ‐ＨＰＬＣ）、電荷異性体（ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ）、非還元キャピラリーゲル電気泳動（ＣＥ‐ＳＤＳ‐ＮＲ）、不溶性粒子、細胞活性を考察する。結果は表１１を参照する。表１１によれば、本願の抗体製剤が４℃で安定を長時間維持でき、３６ヶ月の場合依然として安定性を維持できる。
高温及び照射安定性の検討
高温及び照射の条件における処方の安定性を考察するために、実施例１に記載される製剤Ｅ及び製剤Ｆに対して高温及び照射の検討をする。検出方法はその他の実施例を参照する。
上記表のデータによれば、４０℃で２８日間放置した後の方は０日目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、サンプルのｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、強制分解試験において、サンプルが比較的に安定である。ＳＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、４０℃で２８日間放置した後、単体純度が時間の経過とともに低減していくことから、高温条件でポリマーが発生することが分かる。ＩＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、４０℃条件では、抗体のＩＥＣ主ピーク含有量も低減し、分解傾向も基本的に一致する。不溶性粒子のデータによれば、異なる日の検出結果には一定のばらつきがあるが、データには次第に増加する傾向がなく、活性が全て合格の範囲内にある。
上記表のデータによれば、４０００ｘｌ照射条件で１４日間放置した後の方は０日目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、サンプルのｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、照射条件でサンプルが比較的に安定である。ＳＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、単体純度は明らかな変化がない。ＩＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、４０００ｘｌ照射条件では、抗体のＩＥＣ主ピーク含有量も低減し、分解傾向も基本的に一致する。不溶性粒子のデータによれば、異なる日の検出結果には一定のばらつきがあるが、データには次第に増加する傾向がなく、活性が全て合格の範囲内にあり、標準よりも大幅低い。
製剤Ｅの高温及び照射ＳＥＣトレンドは図６Ａを、ＳＥＣトレンドは図６Ｂを、ＣＥ（非還元）トレンドは図６Ｃを参照する。ＳＥＣ、ＩＥＣ、ＣＥ（非還元）の結果を総合的に考えれば、高温及び照射の条件で１４日間後、主ピークの低減傾向が一致するが、高温及び照射条件では凝集が形成されるため、サンプルを低温で日陰に保存すべきである。
上記表のデータによれば、製剤を４０℃または４０００ｌｘ条件で１４日間放置した後の方は０日目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、原液のｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、強制分解試験において、サンプルが比較的に安定であり、溶出物がなく、ほとんど蛋白質に付着せず、サンプルの性状に影響を与えない。ＳＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、サンプルを４０℃で１４日間放置した後、単体純度がほとんど変化がなく、照射条件で単体純度が時間の経過とともに低減していくことから、抗体は高温条件よりも照射条件の方が重合しやすい。ＩＥＣ‐ＨＰＬＣに関して、４０℃条件または照射条件では、抗体のＩＥＣ主ピーク含有量も低減し、分解傾向も基本的に位置する。不溶性粒子のデータによれば、異なる日の検出結果には一定のばらつきがあるが、データには次第に増加する傾向がなく、粒子急増もなく、合格標準よりも大幅に低い。
該実験によれば、異なる濃度の抗体製剤が高温及び照射の条件で一定の安定性を有する。
振とう安定性の検討
実験条件：製剤Ｆを取り、２００ｒｐｍで水平に置き、常温で４８ｈ振とうさせ、一定の時間ごとに溶液性状、抗体含有量、ＳＥＣ、ＩＥＣ、生物活性、ＣＥ‐ＳＤＳ（還元と非還元）、不溶性粒子を検出する。検出方法はその他の実施例を参照する。
上記表のデータによれば、サンプルが４８時間振とうした後の方は０回目に比べて、サンプルが依然として透き通る透明液体であり、異物がなく、サンプルのｐＨ値、抗体濃度も明らかな変化がない。上記のことから、振とう試験でサンプルの安定性が良好である。また、サンプルのＳＥＣ‐ＨＰＬＣ純度、ＩＥＣ‐ＨＰＬＣ主ピーク含有量などの検出項目も明らかな変化がなく、活性も合格範囲内である。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６蛋白質配列
ＩＬ‐６関連疾病を治療するための抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６が、遺伝子工学の手段によってＣＨＯ細胞で表現されたものであるとともに、一連の標準的なクロマトグラフィーステップによって精製して得られたものである。ＢＡＴ１８０６はＩｇＧ抗体であり、分子量が１４５ ｋＤａである。１重鎖あたりに４４９個のアミノ酸が含まれ、分子量が５３ ｋＤａであり、重鎖アミノ酸配列は表１６を参照する。１軽鎖あたりに２１４個のアミノ酸が含まれ、分子量が２４ ｋＤａであり、軽鎖アミノ酸配列は表１７を参照する。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６の表現及び精製
Ｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １４５：３０１１ （１９９０）などの方法を参考にして、ＩＬ‐６Ｒに特異的に結合する抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６がＣＨＯ細胞で表現する。抗体が含まれる遺伝子の表現担体は慣例的な分子生物学方法で構築され（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）、ＣＨＯ‐ｋ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＣＬ６１）の由来細胞系を宿主細胞として表現する、高生産量安定細胞系の構築過程は下記のように簡単に説明する。宿主細胞を懸濁状態でＣＤ‐ＣＨＯ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＣＡ）で増殖させ、対数増殖期にある宿主細胞を取り遠心分離してから、新たなＣＤ‐ＣＨＯ培地に再懸濁させ、細胞密度が１．４３×１０７個／ｍＬとなるようにカウントしながら調整し、６００ｕｌ前記細胞懸濁液をカップに入れた後、線形化されたプラスミド４０ｕｇを入れる（ピペットで細胞とプラスミドを均一に混合させる）。Ｂｉｏ‐ｒａｄエレクトロポレーターでエレクトロポレーションを行い、器具パラメータを電気容量９６０ｕＦＤ、電圧３００Ｖに設定する。一般的に、電撃時間が１５‐２０ｍｓ範囲にある。電撃を受けた細胞を３７℃まで予熱されたＣＤ‐ＣＨＯ培地に直ちに再懸濁させ、１ウェルあたり１００ｕｌで９６ウェルプレートに接種し、２‐３日間後同じ量の選定培地を入れる（ＣＤ‐ＣＨＯ ｍｅｄｉａ ＋５０ｕＭ ＭＳＸ）。９６ウェルプレートの細胞培養上澄みを測定することで抗体の表現レベルを測定する。表現レベルの高いクローンを９６ウェルプレートから２４ウェルプレートまで移動させ、細胞が一定量まで増殖した後、１ウェルで３ｍｌ培地に２×１０５個細胞が含まれるように細胞を６ウェルプレートに移動させ、細胞の抗体生産量及び生産率を測定する。一般的に、２０‐３０個クローナルを振とうフラスコに移動させて更に評価する。表現量が最も高い最後の５‐８個クローンに対してサブクローン及び更なる表現検出を行う。液体を得て、低速遠心分離で細胞と培地を分離し、遠心分離された上澄みを高速遠心分離して更に沈殿させる。蛋白質Ａでアフィニティ精製とイオン交換精製を行う。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の生物活性の検討
実施例１に記載される方法で、抗体濃度２０ｍｇ／ｍｌのＢＡＴ１８０６抗体製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄを調製し、細胞活性を検出する。検出方法は下記のように簡単に説明する。抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体ＢＡＴ１８０６標準品を標準品とし、開始終濃度を２０ｕｇ／ｍｌとし、勾配希釈を行い、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。検出待ちサンプルも検量線サンプルの希釈方法で希釈して、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。ｈＩＬ‐６を４ｎｇ／ｍｌまで希釈させ、５０ｕｌ／ウェルで９６ウェルプレートに入れる。対数増殖期のＴＦ‐１細胞をとり、１０００００ ｃｅｌｌｓ／ウェル／１００ｕｌで９６ウェルプレートに接種する。３７℃ ５％ ＣＯ２インキュベーターで７２時間培養する。５０ｕｌ／ウェルでＣｅｌｌｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ試薬を入れる。室温で日陰に２時間放置した後、ＥＬＩＡＳＡ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ）でＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏ法によりマイクロウェルプレートのデータを取得し、４つのパラメータで曲線のＣ値を当て嵌め（ＩＣ５０）、計算式：相対比活性＝［標準品ＩＣ５０／検出待ちサンプルＩＣ５０］×１００％により算出した結果が８０％‐１２５％である場合、検出待ちサンプルの活性が正常であると考えられる。検出結果は表１８を参照する。
実施例１に記載される方法で、抗体濃度２０ｍｇ／ｍｌのＢＡＴ１８０６抗体製剤Ａ、製剤Ｂ、製剤Ｃ、製剤Ｄを調製し、競合ＥＬＩＳＡ検出を行う。検出方法は下記のように簡単に説明する。ｈＩＬ‐６をＰＢＳで１０ｕｇ／ｍｌまで希釈させ、十分に混ぜた後、１００ｕｌ／ウェル、即ち１ｕｇ／ウェルで４℃で１晩放置する。５％脱脂乳が含まれるＰＢＳで封鎖し、２００μｌ／ウェルで３７℃で２時間インキュベーションを行い、ＰＢＳＴでプレートを３回洗浄する。ｈＩＬ‐６Ｒを希釈液で１μｇ／ｍｌまで希釈させ、５０μｌ／ウェル即ち５０ｎｇ／ウェルで室温で３０ｍｉｎ静置する。ＢＡＴ１８０６を開始濃度８０μｇ／ｍｌまで希釈させた後、希釈液で４０、２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５、０．３１２５、０．１５６、０．０８、０．０４μｇ／ｍｌまで倍加希釈させて、ラボダンサーで混ぜる。ウサギ抗ｈｉｓ血清を希釈液で１００００倍希釈させた後、１００μｌ／ウェルで入れて、３７℃で１時間インキュベーションを行い、ＰＢＳＴでプレートを５回洗浄する。ヒツジ抗ウサギＨＲＰを希釈液で１００００倍希釈させ、１００μｌ／ウェルで入れて、３７℃で０．５時間インキュベーションを行い、ＰＢＳＴでプレートを８回洗浄する。１００μｌ／ウェルでＴＭＢ顕色液を入れ、室温で日陰に１０分間放置した後、５０μｌ／ウェルで１Ｍ Ｈ２ＳＯ４を入れて終了させる。ＥＬＩＡＳＡ解析ソフトＳｏｆｔＭａｘ ＰｒｏでＯＤ４５０ｎｍ読み値を測定し、４つパラメータで解析する。４つのパラメータで曲線のＣ値を当て嵌め（ＩＣ５０）、計算式：相対比活性＝［標準品ＩＣ５０／検出待ちサンプルＩＣ５０］×１００％により算出した結果が８０％‐１２５％である場合、検出待ちサンプルの活性が正常であると考えられる。検出結果は表１９を参照する。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の体内薬力学
動物体内薬力学評価は主に、抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の、カニクイザルのコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）モデルに対する治療効果について検討する。具体的な実験ステップは下記の通りである。子牛II型コラーゲン免疫メスサルを使って、２回分けてＣＩＡモデルを構築する。モデリングされた動物を、陰性対照ＮＳ組であるＢＡＴ１８０６製剤Ａ組、ＢＡＴ１８０６製剤Ｂ組、ＢＡＴ１８０６製剤Ｃ組、ＢＡＴ１８０６製剤Ｄ組の４組に均等に分け、１組あたりサル９匹、１回静脈投与で３０ｍｇ／ｋｇである。その後、４週間連続で観察し、組換え抗ヒトインターロイキン‐６受容体モノクローナル抗体のカニクイザルＣＩＡモデルに対する治療効果について評価する。
３０ｍｇ／ｋｇ／ＩＶで１回静脈投与した後、ＢＡＴ１８０６と陰性対照組とを比較した結果、受検動物のＥＳＲ、ＩＬ‐６、ＩＬ‐６Ｒなどの血液生化学指標が効果的に改善され、統計学的に有意差がある。図７を参照する。
抗インターロイキン‐６受容体ヒト化抗体の薬物動態学
Ｗｉｓｔｅｒｉａマウス体内で薬物動態学について検討する。静脈注射で１２ｍｇ／ｋｇ１回投与する場合、ＢＡＴ１８０６製剤Ａ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｂ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｃ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｄの４組を分け、１組あたり１０匹で、オスとメスがそれぞれ半分で、投与前、投与直後、１ｈ、２ｈ、５ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、７日間、１０日間、１４日間で採血して、血中薬物濃度を検出する。皮下注射で１２ｍｇ／ｋｇ１回投与する場合、ＢＡＴ１８０６製剤Ａ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｂ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｃ、ＢＡＴ１８０６製剤Ｄの４組を分け、１組あたり１０匹で、オスとメスがそれぞれ半分で、投与前、投与直後、５ｈ、８ｈ、２４ｈ、４８ｈ、９６ｈ、７日間、１０日間、１４日間でそれぞれ静脈採血する。これにより、各組の静脈または皮下投与は似たような薬物動態学の特徴を持つ。図８を参照する。
参考文献
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［３］ ＶｅａｌｅＤＪ， Ｆｅａｒｏｎ Ｕ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｆｏｒｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ［Ｊ］． Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏ， ２００６， （２０）： ｐｐ． ９４１−９４７．
［４］ Ｘｕ ＳＤ，ＴａｎｇＦＩ， Ｓｈｉ Ｌ， ｅｔａｌ． Ａｎｔｉ−Ｓａａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ［Ｊ］． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄ Ｊ， １９９８， １１１（３）： ２０４−２０７．
［５］ Ｒｉｔｃｈｉｅ ＤＭ， Ｂｏｙｌｅ ＪＡ， Ｍｃｌｎｎｅｓ ＪＭ，ｅｔａｌ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｗｉｔｈ ａｎ ａｒｔｉｃｕｌａｒ ｉｎｄｅｘ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ｊｏｉｎｔ ｔｅｎｄｅｒｎｅｓｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］． Ｑ Ｊ Ｍｅｄ， １９８６， ３７： ３９３−４０６．

Claims (10)

  1. （１）２〜１００ｍｇ／ｍＬ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）緩衝剤と、（３）０．１〜１．０ｇ／Ｌ界面活性剤と、（４）３０〜４００ｍＭ安定剤と、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が５．０〜７．０である抗体製剤であって、前記製剤には緩衝剤によって緩衝系が形成されており、前記緩衝系は、５〜２０ｍＭヒスチジン塩緩衝液、または５〜２０ｍＭヒスチジン塩と５〜２０ｍＭ酢酸ナトリウムとの組合せによる緩衝液であり、好ましくは、前記抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度が１０‐９０ｍｇ／ｍＬであり、より好ましくは、前記ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度が１５‐５０ｍｇ／ｍＬであり、特に好ましくは、ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体の濃度が１８‐２５ｍｇ／ｍＬであり、好ましくは、前記抗体製剤的ｐＨ値が５．５〜６．５であり、より好ましくは、前記抗体製剤のｐＨ値が６．０〜６．４であり、更に好ましくは、前記抗体製剤のｐＨ値が６．２である、ことを特徴とする抗体製剤。
  2. 前記抗体が組換えヒト化抗ヒトインターロイキン‐６受容体モノクローナル抗体であり、好ましくは、前記抗体にはＳＥＱＩＤＮＯ．１に示される重鎖及びＳＥＱＩＤＮＯ．２に示される軽鎖が含まれており、より好ましくは、前記抗体にはＳＥＱＩＤＮＯ．１に示される２本の重鎖及びＳＥＱＩＤＮｏ．２に示される２本の軽鎖が含まれている、ことを特徴とする請求項１に記載の抗体製剤。
  3. 前記安定剤がアルギニン塩酸塩とショ糖との組合せ、マンニトール、塩化ナトリウムから選ばれ、好ましくは、前記安定剤が４０〜２００ｍＭアルギニン塩酸塩と１５〜７０ｇ／Ｌショ糖との組合せから選ばれ、または好ましくは、前記安定剤が３０〜７０ｇ／Ｌマンニトールから選ばれ、または好ましくは、前記安定剤が１００〜３００ｍＭ塩化ナトリウムから選ばれ、好ましくは、前記界面活性剤がポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポロクサマー１８８の１種または複数種から選ばれ、より好ましくは、前記界面活性剤がポリソルベート８０から選ばれ、より好ましくは、前記界面活性剤が０．１‐０．７ｇ／Ｌポリソルベート８０から選ばれる、ことを特徴とする請求項１又は２に記載の抗体製剤。
  4. （１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．４５ｇ／Ｌ〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）４０〜６０ｍＭアルギニン塩酸塩と、（５）１５〜２５ｇ／Ｌショ糖と、（６）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４であり、または好ましくは、（１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．４５〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）３０〜４５ｇ／Ｌマンニトールと、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４であり、または好ましくは、（１）１８〜２２ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）８〜１５ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．４５〜０．６５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）９０〜１１０ｍＭ塩化ナトリウムと、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．０〜６．４である、ことを特徴とする請求項１‐３の何れか１項に記載の抗体製剤。
  5. （１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）５０ｍＭアルギニン塩酸塩と、（５）２０ｇ／Ｌショ糖と、（６）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、または好ましくは、（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）３０ｇ／Ｌマンニトールと、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、または好ましくは、（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）４２ｇ／Ｌマンニトールと、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．２であり、または好ましくは、（１）２０ｍｇ／ｍｌ抗ＩＬ‐６受容体ヒト化抗体と、（２）１０ｍＭヒスチジン塩緩衝液と、（３）０．５ｇ／Ｌポリソルベート８０と、（４）１００ｍＭ塩化ナトリウムと、（５）注射用水と、が含まれており、ｐＨ値が６．２である、ことを特徴とする請求項１‐４の何れか１項に記載の抗体製剤。
  6. 前記製剤には更に塩基が含まれており、好ましくは、前記塩基がＮａＯＨである、ことを特徴とする請求項１‐５の何れか１項に記載の抗体製剤。
  7. 前記抗体製剤の剤形が注射剤であり、好ましくは、前記製剤が皮下注射剤または静脈注射剤である、ことを特徴とする請求項１‐６の何れか１項に記載の抗体製剤。
  8. 前記製剤が室温で少なくとも１ヶ月安定性維持されており、好ましくは、前記製剤が２‐８℃で少なくとも３６ヶ月安定性維持されており、好ましくは、該製剤が少なくとも５サイクル凍結融解された後に安定性維持されている、ことを特徴とする請求項１‐７の何れか１項に記載の抗体製剤。
  9. 前記抗体製剤がＩＬ‐６関連疾患を治療するための医薬品製剤であり、好ましくは、前記ＩＬ‐６関連疾患が成人関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、巨細胞性動脈炎、巨大リンパ節過形成、免疫療法によるサイトカインストーム、成人スティル病、再発性多発軟骨炎、２型糖尿病、強直性脊椎炎、甲状腺眼症、関節リウマチによる心血管疾患、リウマチ性多発筋痛症、急性移植片対宿主病、非ＳＴ上昇型心筋梗塞、全身性エリテマトーデス、統合失調症、ぶどう膜炎、卵巣がん、抗好中球細胞質抗体関連血管炎、視神経脊髄炎、慢性糸球体腎炎、結腸直腸がんであり、より好ましくは、成人関節リウマチ、全身型若年性特発性関節炎、多関節型若年性特発性関節炎、巨細胞性動脈炎、巨大リンパ節過形成である、ことを特徴とする請求項１‐８の何れか１項に記載の抗体製剤。
  10. （１）緩衝剤、安定剤、界面活性剤を正確に量って、注射用水に溶解させるステップと、（２）ステップ（１）で調製された液体を、ｐＨ値が５‐７になるように、ＮａＯＨ水溶液で、好ましくは１Ｍ濃度のＮａＯＨ水溶液で調整するステップと、（３）ステップ（２）で調製された液体を、好ましくは０．２２ｕｍウェル径のろ過膜で滅菌容器にろ過するステップと、（４）ステップ（３）で調製された液体を抗体液に入れるステップと、を備える、ことを特徴とする請求項１‐９の何れか１項に記載の抗体製剤の調製方法。
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