JP2020526196A5

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Publication number: JP2020526196A5
Application number: JP2019572719A
Authority: JP
Filing date: 2018-07-03
Publication date: 2021-08-12
Anticipated expiration: 2038-07-03

Claims

ダイズ加水分解産物を含む細胞培養培地中で組換え異種糖タンパク質を発現する細胞の集団を培養して、前記組換え異種糖タンパク質を生成することを含む方法であって、前記ダイズ加水分解産物が、≦０．０６７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを含む、前記方法。
前記細胞の集団が、組換え異種糖タンパク質を発現する細胞のクローン性増殖によって得られる、請求項１に記載の方法。
前記ダイズ加水分解産物が０．００３％〜０．０２７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項１〜２のいずれか１項に記載の方法。
前記培養培地が≦５ｍｇ／Ｌのオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
前記培養培地が０．６〜３ｍｇ／Ｌのオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
前記糖タンパク質がトラップ分子である、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
前記トラップ分子がエタネルセプト、リロナセプト及びアフリベルセプトからなる群から選択される、請求項６に記載の方法。
前記糖タンパク質がＡ１Ｎ−グリカン及び少なくとも１つの他のＮ−グリカン種を含み、Ａ１Ｎ−グリカンの相対量が前記糖タンパク質の全Ｎ−グリカン種の総量の≧１０％（ｗ／ｗ）である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
ａ．グリコシル化タンパク質を発現する細胞を細胞培養培地中で培養して、前記糖タンパク質を生成すること、
ｂ．前記グリコシル化タンパク質を精製すること、
ｃ．前記精製したグリコシル化タンパク質をオリゴ糖フィンガープリント解析にかけること、
ｄ．前記糖タンパク質のＮ−グリカン種の総量と比較して、Ａ１Ｎ−グリカンの相対量を決定すること、及び
ｅ．前記糖タンパク質のＮ−グリカン種の総量と比較して、少なくとも１０％（ｗ／ｗ）のＡ１Ｎ−グリカンを提供するダイズ加水分解産物を選択すること
を含む方法。
前記選択されたダイズ加水分解産物が≦０．０６７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項９に記載の方法。
前記選択されたダイズ加水分解産物が０．００３％〜０．０２７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項９または１０に記載の方法。
前記培養培地が０．６〜３ｍｇ／Ｌのオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の方法。
前記糖タンパク質がトラップ分子である、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の方法。
前記トラップ分子がエタネルセプト、リロナセプト及びアフリベルセプトからなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
前記糖タンパク質が、糖タンパク質１モルあたり８〜１２モルのシアル酸、または糖タンパク質１モルあたり３５〜６５モルのシアル酸を含む、請求項９〜１４のいずれか１項に記載の方法。
糖タンパク質の製造で使用するためのダイズ加水分解産物を選択する方法であって、
ａ．ダイズ加水分解産物中のオルニチンまたはプトレシンの量を測定すること、
ｂ．≦０．０６７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを有するダイズ加水分解産物を選択すること、及び
ｃ．前記選択されたダイズ加水分解産物をさらなる成分と組み合わせて、≦５ｍｇ／Ｌのオルニチンまたはプトレシンを有する細胞培養培地を形成すること
を含む、前記方法。
前記選択されたダイズ加水分解産物が０．００３％〜０．０２７％（ｗ／ｗ）のオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項１６に記載の方法。
前記培養培地が０．６〜３ｍｇ／Ｌのオルニチンまたはプトレシンを含む、請求項１６または１７に記載の方法。
前記糖タンパク質がトラップ分子である、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載の方法。
前記トラップ分子がエタネルセプト、リロナセプト及びアフリベルセプトからなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
前記糖タンパク質がＡ１Ｎ−グリカン及び少なくとも１つの他のＮ−グリカン種を含み、Ａ１Ｎ−グリカンの相対量が前記糖タンパク質の全Ｎ−グリカン種の総量の≧１０％（ｗ／ｗ）である、請求項１６〜２０のいずれか１項に記載の方法。
Ａ１Ｎ−グリカン及び少なくとも１つの他のＮ−グリカン種を含む糖タンパク質であって、前記Ａ１Ｎ−グリカンの相対量が前記糖タンパク質のＮ−グリカンの総量の少なくとも１０％（ｗ／ｗ）である、前記糖タンパク質。
前記糖タンパク質がトラップ分子である、請求項２２に記載の糖タンパク質。
前記トラップ分子がエタネルセプト、リロナセプト及びアフリベルセプトからなる群から選択される、請求項２３に記載の糖タンパク質。
前記糖タンパク質がＡ２Ｎ−グリカン、Ａ２ＦＮ−グリカン、Ａ１ＦＮ−グリカン、ＮＧＡ２ＦＮ−グリカン、ＮＡ２Ｇ１ＦＮ−グリカン、ＮＡ２Ｎ−グリカン及びＮＡ２ＦＮ−グリカンをさらに含む、請求項２２に記載の糖タンパク質。
前記Ａ１Ｎ−グリカンの相対量が、キャピラリー電気泳動によって得られるオリゴ糖フィンガープリントの前記Ａ１Ｎ−グリカンのピーク下の面積を全Ｎ−グリカンに対するピーク下の全面積と比較することによって決定される、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の糖タンパク質。
前記Ａ１Ｎ−グリカンの相対量が１０％〜１７％（ｗ／ｗ）である、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の糖タンパク質。
前記糖タンパク質が、糖タンパク質１モルあたり３５〜６５モルのシアル酸を有するリロナセプトである、請求項２４に記載の糖タンパク質。
前記リロナセプトが配列番号１の残基Ｎ３７、Ｎ９８、Ｎ４１８及びＮ５１１のいずれか１つまたは複数にＡ１Ｎ−グリカンを含む、請求項２８に記載の糖タンパク質。
前記糖タンパク質が、糖タンパク質１モルあたり８〜１２モルのシアル酸を有するアフリベルセプトである、請求項２４に記載の糖タンパク質。
前記アフリベルセプトが配列番号２の残基Ｎ１２３及びＮ１９６のいずれか１つまたは複数にＡ１Ｎ−グリカンを含む、請求項３０に記載の糖タンパク質。