JP2020100622A5 - - Google Patents
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Claims (14)
- 下記の（Ａ）または（Ｂ）をコードする遺伝子を組み込んだウイルスを昆虫細胞に感染させて発現させることにより得られ、前記ウイルスが除去されており、且つ、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない、ファクターＣ：
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。 - 下記の（Ａ）または（Ｂ）をコードする遺伝子を組み込んだベクターを昆虫細胞に導入し、昆虫細胞の染色体上に当該遺伝子を組み込んで発現させることにより得られ、且つ、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない、ファクターＣ：
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。 - Ｃ末端にペプチドが付加されていない、請求項１または２に記載のファクターＣ。
- 前記昆虫細胞が、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、ＳＦ＋、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載のファクターＣ。
- 下記の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、ファクターＣの製造方法：
（ａ）下記の（Ａ）または（Ｂ）であってＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣをコードするＤＮＡが組み込まれたウイルスを、昆虫細胞に感染させる工程；
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質；
（ｂ）前記ウイルスに感染した昆虫細胞に、前記ＤＮＡにコードされるタンパク質を発現させる工程；
（ｃ）前記ウイルスを除去する工程。 - 下記の工程（ａ’）及び（ｂ’）を含む、ファクターＣの製造方法：
（ａ’）下記の（Ａ）または（Ｂ）であってＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣをコードするＤＮＡが組み込まれたベクターを昆虫細胞に導入し、昆虫細胞の染色体に前記ＤＮＡを組み込む工程；
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質；
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質；
（ｂ’）前記ＤＮＡが組み込まれた昆虫細胞に、前記ＤＮＡにコードされるタンパク質を発現させる工程。 - 前記ＤＮＡが、下記ＤＮＡ（Ａ’）または（Ｂ’）である、請求項５または６に記載の製造方法；
（Ａ’）配列番号１に示す塩基配列を含むＤＮＡ；
（Ｂ’）配列番号１に示す塩基配列の全体または一部に対する相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。 - 前記ＤＮＡが、Ｃ末端にペプチドが付加されていないファクターＣをコードする、請求項５〜７のいずれか１項に記載の製造方法。
- 前記昆虫細胞が、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、ＳＦ＋、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅからなる群から選択される、請求項５〜８のいずれか１項に記載の製造方法。
- ファクターＣ、カブトガニのファクターＢ、カブトガニのプロクロッティングエンザイム、及び検出用基質を含む、エンドトキシン測定剤であって、
前記ファクターＣが、請求項１〜４のいずれか１項に記載のファクターＣまたは請求項５〜９のいずれか１項に記載の製造方法により製造されたファクターＣである、エンドトキシン測定剤。 - 前記検出用基質が、一般式Ｘ−Ｙ−Ｚで表される合成基質である、請求項１０に記載のエンドトキシン測定剤；
（式中、Ｘは、ｔ−ブトキシカルボニル基及びベンゾイル基からなる群から選択される保護基であり；Ｙは、Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、及びＶａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇからなる群から選択されるペプチドであり；Ｚは、可視光下で検出される色素及び蛍光色素からなる群から選択される、Ｙとアミド結合した色素である）。 - ３０分以内で０．００１ＥＵ／ｍＬのエンドトキシンの定量が可能である、請求項１０または１１に記載のエンドトキシン測定剤。
- 請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の測定剤と被験試料とを混合する工程、およびカスケード反応の進行を測定する工程を含む、被験試料中のエンドトキシン測定法。
- 前記被験試料が、医療用水、医薬品、輸液、血液製剤、医療機器、医療器具、化粧品、飲食品、環境試料、生体成分、天然のタンパク質、組み換えタンパク質、核酸、及び糖質からなる群から選択される、請求項１３に記載の測定法。
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